CN118813620A

CN118813620A - 用于宫颈鳞癌靶向治疗的ccz1抑制剂及其应用

Info

Publication number: CN118813620A
Application number: CN202410867435.XA
Authority: CN
Inventors: 余竟; 袁振龙; 刘静; 安菊生
Original assignee: Cancer Hospital and Institute of CAMS and PUMC
Current assignee: Cancer Hospital and Institute of CAMS and PUMC
Priority date: 2024-06-28
Filing date: 2024-06-28
Publication date: 2024-10-22

Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及用于宫颈鳞癌靶向治疗的CCZ1抑制剂及其应用；本发明的CCZ1抑制剂实现了对宫颈鳞癌细胞的CCZ1表达的干扰或阻断，抑制了肿瘤细胞恶性表型，为宫颈鳞癌的个体化治疗提供了新的思路和方法。

Description

用于宫颈鳞癌靶向治疗的CCZ1抑制剂及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及用于宫颈鳞癌靶向治疗的CCZ1抑制剂及其应用。

背景技术

目前，宫颈鳞癌的治疗主要包括早期手术切除、中晚期放疗和化疗等传统治疗方法。早期手术切除通常是对早期诊断的宫颈鳞癌患者的首选治疗方案，通过手术切除肿瘤组织以达到治疗目的。然而，对于中晚期的宫颈鳞癌患者，放疗和化疗往往是主要的治疗手段，放疗通过高能量射线照射破坏肿瘤组织，而化疗则通过药物干扰癌细胞的生长和扩散。尽管这些传统治疗方法在一定程度上能够缓解患者的症状和控制肿瘤的生长，但其疗效和生存率仍然不尽理想。尤其是对于晚期宫颈鳞癌患者，预后通常较差，临床治疗挑战较大。

此外，传统治疗方法存在一些客观缺点，限制了其在宫颈鳞癌治疗中的应用。首先，手术切除可能导致患者功能损伤，例如，全子宫切除术可能影响患者的生育能力和性功能。而放疗和化疗在杀灭肿瘤细胞的同时也会对周围正常组织造成损伤，导致一系列的毒副作用，如恶心、呕吐、脱发等，严重影响患者的生活质量。其次，传统治疗方法往往无法对肿瘤细胞进行有效的靶向治疗，因此治疗效果有限。此外，对于晚期宫颈鳞癌患者，传统治疗方法的生存率仍然较低，临床疗效有限，患者的预后不容乐观。

综上所述，虽然现有的治疗方法在一定程度上能够缓解宫颈鳞癌患者的症状，但其客观缺点仍然显著。传统治疗方法的局限性使得寻找新的治疗策略变得尤为重要，尤其是针对宫颈鳞癌的靶向治疗方法，以提高患者的生存率和生活质量。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明旨在提供使用CCZ1抑制剂的宫颈鳞癌的靶向治疗策略，与现有技术相比，本发明的靶向治疗策略主要差异在于利用CCZ1基因作为治疗靶点，并通过靶向敲降CCZ1基因来实现对宫颈鳞癌的治疗效果。

因此，在第一方面，本发明提供了一种CCZ1抑制剂，所述抑制剂通过序列互补的方式干扰或阻断CCZ1的表达。

在第二方面，本发明提供了一种CCZ1稳定敲低的细胞系，其通过使用本发明第一方面的CCZ1抑制剂构建而成。

在第三方面，本发明提供了CCZ1抑制剂在制备用于宫颈鳞癌的靶向治疗药物中的用途。

在第四方面，本发明提供了一种治疗宫颈鳞癌的方法，所述方法包括抑制CCZ1的表达。

相较于传统的治疗方法，如手术切除、放射治疗和化学治疗，本发明的使用CCZ1抑制剂的靶向治疗策略具有以下优势：

1.靶向性：本发明通过设计和合成靶向CCZ1基因的siRNA和shRNA，实现对宫颈鳞癌细胞CCZ1敲降，抑制肿瘤细胞恶性表型。

2.生物标志物导向治疗：本发明发现了宫颈鳞癌组织中CCZ1 mRNA和蛋白水平的显著升高，将CCZ1作为宫颈鳞癌的生物标志物，并针对这一标志物设计了治疗策略，为个体化治疗提供了新的思路和方法。

3.实验证据支持：通过对癌症基因组图谱(The Cancer GenomeAtlas，TCGA)数据库数据分析和患者组织样本的实验验证，以及细胞水平和动物模型中的实验结果，充分证明了本方案的治疗效果和可行性。

附图说明

图1为宫颈鳞癌中CCZ1表达及功能研究结果汇总图，其中：

图1A为TCGA数据库中的239例宫颈鳞癌样本和3例正常宫颈组织的临床信息和RNA测序(RNA Sequencung,RNA-Seq)数据，显示了正常宫颈组织样本与宫颈鳞癌组织样本中的CCZ1 mRNA水平对比。

图1B为正常宫颈组织样本与宫颈鳞癌组织样本中的CCZ1 mRNA水平对比图。

图1C为宫颈鳞癌组织样本的CCZ1蛋白表达情况。

图1D显示了本发明的小干扰RNA对宫颈鳞癌细胞系ME180和SiHa细胞CCZ1表达的影响。

图1E和图1F显示了本发明的小干扰RNA的体外功能实验的结果。

图1G显示了体内实验的结果，其通过使用CCZ1稳定敲降的细胞系SiHa-shCCZ1和对照细胞系SiHa-shscramble构建皮下移植瘤模型获得。

图2为pLKO.1GFP载体图谱。

具体实施方式

在下文中，将对本发明进行详细的描述。需理解，以下描述仅以示例方式来对本发明进行说明，而无意于对本发明的范围进行限制，本发明的保护范围以随附权利要求为准。并且，本领域技术人员理解，在不背离本发明的精神和主旨的情况下，可以对本发明的技术方案进行修改。若并未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所述主题所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。在对本发明进行详细描述之前，提供以下定义以更好地理解本发明。

在本发明的上下文中，很多实施方案使用表述“包含”、“包括”或者“基本/主要由……组成”。表述“包含”、“包括”或“基本/主要由……组成”通常情况下可以理解为开放式表述，表示不仅包括该表述后面具体列出的各元素、组分、组件、方法步骤等外，还包括其他的元素、组分、组件、方法步骤。另外，在本文中，表述“包含”、“包括”或者“基本/主要由……组成”在某些情况下也可以理解为封闭式表述，表示仅包括该表述后面具体列出的各元素、组分、组件、方法步骤，而不包括任何其他的元素、组分、组件、方法步骤。此外，在本发明的上下文中，很多实施方案使用表述“由……组成”，该表述应理解为封闭式表述，表示仅包括该表述后面具体列出的各元素、组分、组件、方法步骤，而不包括任何其他的元素、组分、组件、方法步骤。

CCZ1是一个蛋白质编码基因。目前报道的与CCZ1相关的疾病包括垂直距骨、先天性Hermansky-Pudlak综合征。本发明首次提出将CCZ1作为宫颈鳞癌的生物标志物，通过设计靶向CCZ1的siRNA，实现了对宫颈鳞癌细胞的靶向干扰，并进一步设计shRNA，成功构建了稳定敲降CCZ1的宫颈鳞癌细胞系SiHa-shCCZ1；通过靶向抑制CCZ1表达，从而抑制肿瘤细胞的增殖和迁移，达到治疗目的。

RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是指内源性或外源性双链RNA(dsRNA)介导的细胞内mRNA发生特异性降解，从而导致靶基因的表达沉默，产生相应的功能表型缺失的现象。RNA干扰可以通过siRNA、shRNA和miRNA来实现。

小干扰RNA(Small interfering RNA，siRNA)有时称为短干扰RNA(shortinterfering RNA)或沉默RNA(silencing RNA)，是一种长度一般为20至25个核苷酸的双链RNA，可用作研究体内和体外单基因功能的工具，是一类有吸引力的新型疗法，特别是针对治疗癌症和其他疾病的不可成药靶点。

短发夹RNA(shorthairpin RNA，shRNA)是一种依赖茎环序列产生的短双链RNA结构(19-25nt)，可利用载体导入细胞当中，在细胞中经酶切形成siRNA，通过RNA干扰途径调控目标基因。

因此，在第一方面，本发明提供了一种CCZ1抑制剂，其通过序列互补的方式干扰或阻断CCZ1的表达。

在一个实施方案中，所述CCZ1抑制剂是siRNA或shRNA。

在一个实施方案中，所述siRNA的核心序列包括如SEQ ID NO:12(UGAAGAUGAGGAGAUCAUU)或SEQ ID NO:14(AGGACAUUUAGCCCAUCAA)所示的正义链核苷酸序列和/或如SEQ ID NO:13(AAUGAUCUCCUCAUCUUCA)或SEQ ID NO:15(UUGAUGGGCUAAAUGUCCU)所示的反义链核苷酸序列；所述shRNA的核心序列包括如SEQ ID NO:16(ATGAAGATGAGGAGATCATTG)所示的正义链核苷酸序列或如SEQ ID NO:17(CAATGATCTCCTCATCTTCAT)所示的反义链序列。

如本文所用，术语“核心序列”是指实现本发明的siRNA或shRNA的沉默目的基因功能所必不可少的一段核苷酸序列。在本发明中，除核心序列以外，本发明的siRNA或shRNA还可以在末端包括1至6个任意碱基。优选地，可以在末端包括2个任意碱基。

在一个实施方案中，所述siRNA包括具有如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示的正义链核苷酸序列和/或具有如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示的反义链核苷酸序列；所述shRNA具有如SEQ ID NO:5所示的正义链核苷酸序列和/或具有如SEQ ID NO:6所示的反义链核苷酸序列。

但由于RNA的稳定性较差，在体内容易被核酸酶降解，不易被组织吸收，因而在体内的应用受到了限制。

通常，可以通过多种RNA递送系统来实现RNA的有效递送，例如基于脂质的递送系统(如胶束(micelles)、脂质体(liposome)和脂质纳米颗粒(lipidnanoparticle,LNP)等)、基于聚合物的RNA递送系统、基于纳米颗粒的RNA递送系统等。

在另一方面，也可以通过修饰来改善siRNA或shRNA的相关特性，从而增加siRNA或shRNA的稳定性，提高细胞的摄取率，同时有效抑制目的基因的表达。

因此，在一个实施方案中，本发明的siRNA或shRNA包含至少一个经修饰的核苷酸。通常，对于siRNA或shRNA的修饰可包括磷酸骨架修饰、核糖修饰和碱基修饰，例如5′末端胆固醇修饰、5′末端磷酸化修饰、脱氧核糖的2′甲氧基修饰、碱基的5-甲基胞嘧啶修饰和5′末端的荧光基团修饰等。修饰可以通过多种技术进行，例如化学合成。

在另一方面，还可以通过与合适配体连接形成配体-RNA偶联物来进一步改善siRNA或shRNA的相关特性，以降低循环中的清除率，增强靶向积累和细胞摄取，从而调节其药代动力学和药效学。这些配体包括小分子、脂质、多肽、抗体、蛋白质、糖类和非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)。

因此，在一个实施方案中，本发明的CCZ1抑制剂还包括配体。

在一个优选实施方案中，所述配体是GalNAc等其他递送载体。

在第二方面，本发明提供了一种CCZ1稳定敲低的细胞系，其通过使用本发明第一方面的CCZ1抑制剂构建而成。其中CCZ1被稳定敲低。

在一个实施方案中，本发明的CCZ1稳定敲低的细胞系是宫颈鳞癌细胞系。

在一个优选实施方案中，所述细胞系是SiHa细胞系。

在一个更优选实施方案中，本发明的CCZ1稳定敲低的细胞系使用pLKO.1-GFP载体构建而成。

通过本发明获得的CCZ1稳定敲低的SiHa细胞系在下文中也被称为SiHa-shCCZ1，其是一种稳定敲低CCZ1的宫颈鳞癌细胞系。

在一个实施方案中，本发明的CCZ1抑制剂还包括药学上可接受的载体或赋形剂。

在一个实施方案中，通过施用本发明的CCZ1抑制剂对宫颈鳞癌进行靶向治疗。

实施例

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。本领域技术人员将会理解，以下实施例仅是说明性的，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

材料和方法

1、TCGA数据库中数据的获取与分析

通过加州大学圣克鲁斯分校(University of California,Santa Cruz,UCSC)Xena浏览器(http://xena.ucsc.edu/)从TCGA数据库获取239个宫颈鳞癌样本和3个正常宫颈组织样本的临床信息和RNA-Seq数据。将基因表达水平标准化为每百万映射读取中每千碱基转录本的片段数(Fragments perKilobase Million,FPKM)，然后进行log₂转换。

2、细胞培养和转染

人宫颈鳞癌细胞系ME180和SiHa均来自北京协和医学院细胞资源中心。ME180细胞在McCoy's 5A培养基(Gibco,GrandIsland,NY,USA)中培养，SiHa细胞在MEMα培养基(Gibco,GrandIsland,NY,USA)中培养，上述培养基中均添加有10％胎牛血清(Invitrogen,San Diego,CA,USA)，培养温度为37℃，CO₂含量为5％。

小干扰RNA(siRNA)和阴性对照非沉默siRNA由上海吉玛制药技术有限公司合成，并按照制造商的说明使用Lipofectamine 2000(Invitrogen,San Diego,CA,USA)进行转染，siRNA最终工作浓度为50nM。

用于敲降CCZ1的慢病毒载体pLKO.1-shCCZ1-GFP由上海吉玛制药技术有限公司构建(pLKO.1GFP载体序列参见SEQ ID NO:7所示，图谱参见图2所示)。将慢病毒与聚凝胺(Polybrene)(Sigma,St.Louis,MO,USA)一起孵育，然后转染到宫颈鳞癌细胞系SiHa中，然后使用嘌呤霉素(0.8mg/ml，Invitrogen,San Diego,CA,USA)处理72小时以筛选CCZ1敲降的SiHa细胞：SiHa-shCCZ1。

3、细胞活力实验

将细胞以每孔2000个细胞的密度接种到96孔板中，并进行3次生物学重复。使用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8，CCK-8，Dojindo，Japan)评估细胞活力。连续7天，每天使用ELX808微孔板分光光度计(BioTek Instruments,Winooski,VT,USA)测量450nm处的吸光度以量化细胞生长活力。

4、迁移和侵袭实验

使用了Transwell小室(Corning,NY,USA)检测细胞迁移和侵袭能力。将Matrigel(Corning,NY,USA)滴加于Transwell小室的上室底部中央，并在37℃下孵育5小时以进行侵袭能力测定；迁移能力测定中不使用Matrigel。在上室中，将4×10⁵个细胞接种在100μLOpti-MEM(Gibco,Grand Island,NY,USA)的无血清培养基中。下室中装有500μL含有10％胎牛血清的培养基。孵育24小时后，用4％多聚甲醛(普利莱，北京，中国)在室温下固定上室15分钟。用结晶紫染色液(普利莱，北京，中国)对上室进行染色20分钟，干燥，并在显微镜下成像。以10倍放大率拍摄5个随机选择的视野。使用ImageJ软件对细胞数量进行量化。每个检测重复进行三次。

5、RNA提取、反转录和实时定量PCR

按照产品说明书，我们使用RNApure Tissue&Cell Kit(康为世纪，北京，中国)提取组织总RNA。随后，使用HiFiScript cDNA Synthesis Kit(康为世纪，北京，中国)将分离的RNA作为模板进行逆转录反应获得cDNA。使用Fast qPCR Mix(TaKaRa,Shiga,Japan)和CFX96Real-Time System(Bio-Rad,Berkeley,California,USA)进行实时定量PCR分析。每个样本独立分析三次。

所用引物序列如下所示：

GAPDH：5′-GTCTCCTCTGACTTCAACAGCG-3′(正向，SEQ ID NO:8)和5′-ACCACCCTGTTGCTGTAGCCAA-3′(反向，SEQ ID NO:9)；

CCZ1：5′-TTGCCGAAGACTGGACAGCATC-3′(正向，SEQ ID NO:10)和5′-TGTGCTCTTCTCGGCGAGATTC-3′(反向，SEQ ID NO:11)。

6、蛋白免疫印记实验

将蛋白裂解物在SDS-PAGE凝胶上分离，并转印到PVDF膜(Millipore,Bedford,MA,USA)。之后将膜封闭并与抗CCZ1抗体(Proteintech，武汉，湖北，中国)孵育。之后使用相应的二抗与膜孵育。其中，GAPDH(Proteintech，武汉，湖北，中国)作为上样对照。最终使用超增强化学发光检测试剂(普利莱，中国北京)实现蛋白信号可视化。

7、细胞系来源的异种移植瘤模型

所有动物实验均严格遵守《实验动物护理和使用指南》，并获得国家癌症中心/国家肿瘤临床研究中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院伦理委员会批准。

实验小鼠为6周龄雌性BALB/c-nu小鼠(斯贝福，北京，中国)，将SiHa-shScramble和SiHa-shCCZ1细胞(2×10⁶)分别皮下注射对照组和实验组小鼠(n＝4)。每周两次对小鼠称重并测量肿瘤大小。肿瘤体积(V)使用公式V＝0.524×L×W²计算，其中L代表长度，W表示异种移植肿瘤的宽度。实验结束后，对小鼠实施安乐死，并确定肿瘤组织的重量和小鼠体重。

8、免疫组织化学

对于免疫组织化学，将4毫米厚的石蜡包埋组织阵列切片在二甲苯中脱蜡，在梯度乙醇中水化，使用微波炉将切片在1mM EDTA缓冲液(pH 8.0)中热处理20分钟进行抗原修复，并使用过氧化物酶体孵育以阻断内源性过氧化物酶。用PBS洗涤切片三次，并在4℃下与抗人CCZ1抗体(1:200稀释，Proteintech，武汉，湖北，中国)孵育过夜。用PBS清洗后，滴加酶标羊抗兔IgG聚合物，37℃孵育20分钟。PBS缓冲液洗涤3次后，进行DAB显色，并用苏木精复染，在分级乙醇中脱水，并用中性树脂密封。两名研究人员独立评估了载玻片上CCZ1的免疫组织化学(IHC)染色。使用Aperio ScanScope XT软件(LeicaBiosystems,Illinois,USA)扫描载玻片，并将图像放大40倍进行组织学评分。使用IHC Profiler(ImageJ插件)对免疫组织化学(IHC)图像进行盲法评估。特定标本区域的免疫染色分为阴性(-)、弱阳性(+)、中度阳性(++)或强阳性(+++)。CCZ1 H-score采用线性方程确定：H-score＝1×(％弱阳性细胞)+2×(％中度阳性细胞)+3×(％强阳性细胞)。

9、统计分析

所有统计分析均采用SPSS29.0.0软件(SPSS Inc.,Chicago,IL,USA)进行。统计学具有显著性差异定义为P<0.05。采用Student’s t检验确定两组间差异的显著性，采用单因素方差分析比较两组以上的差异。

实施例1

发明人通过UCSC Xena浏览器(http://xena.ucsc.edu/)下载了癌TCGA数据库中的239例宫颈鳞癌样本和3例正常宫颈组织的临床信息和RNA-Seq数据。结果如图1A所示，与正常宫颈组织(n＝3)相比，宫颈鳞癌组织样本(n＝239)中的CCZ1 mRNA水平显著升高(P<0.05)。

为了进一步验证上述结果，收集了7对配对的宫颈鳞癌与癌旁组织样本进行qRT-PCR实验。结果如图1B所示，与配对的癌旁组织(n＝7)相比较，宫颈鳞癌组织(n＝7)CCZ1mRNA水平显著高表达(P<0.05)。

此外，还利用手术后常规剩余的组织样本进行切片，进行免疫组化检测CCZ1蛋白表达情况。结果如图1C所示，与癌旁组织(n＝5)相比较，宫颈鳞癌组织(n＝13)中CCZ1蛋白显著高表达(P<0.05)。

以上结果说明，CCZ1在宫颈鳞癌中显著高表达，提示其可能作为宫颈鳞癌诊断的生物标志物和治疗靶点。

实施例2

为了探索CCZ1在宫颈鳞癌中功能，发明人首先根据人CCZ1基因序列(NC_000007.14:5898733-5926550Homo sapiens chromosome 7,GRCh38.p14PrimaryAssembly；Gene ID:51622)设计了2种靶向人CCZ1基因的小干扰RNA，其序列如表1所示。根据上述方法将本发明的小干扰RNA转染至宫颈鳞癌细胞系ME180和SiHa细胞中以研究其对CCZ1表达的影响。

表1：靶向人CCZ1基因的siRNA序列

结果如图1D所示，可以明显看出，本发明的小干扰RNA能够有效的降低CCZ1蛋白的表达。

实施例3

进一步地，研究了小干扰RNA下调CCZ1表达后对宫颈鳞癌细胞系ME180和SiHa细胞的影响。结果如图1E和图1F所示，发明人发现使用小干扰RNA下调CCZ1表达能够显著降低宫颈鳞癌细胞系ME180和SiHa的增殖能力(P<0.05，图1E)和迁移侵袭能力(P<0.05，图1F)。

实施例4

进一步通过实施例2的siRNA设计shRNA，其序列如表2所示。根据上述方法，将合成的CCZ1-shRNA构建在pLKO.1-GFP载体上，构建出稳定敲降CCZ1基因的宫颈鳞癌细胞系SiHa-shCCZ1。

表2：靶向人CCZ1基因的shRNA序列

实施例5

为了进一步在体内研究CCZ1敲低对宫颈鳞癌的影响，根据上述方法，使用实施例4所得的CCZ1稳定敲降的细胞系SiHa-shCCZ1和对照细胞系SiHa-shscramble构建皮下移植瘤模型。

结果如图1G所示，发明人发现敲降CCZ1后，移植瘤生长能力显著下降(P<0.05，图1G)。

以上体内外实验结果说明，CCZ1能够增强宫颈鳞癌的增殖、迁移和侵袭能力，而靶向CCZ1降低其表达后，宫颈鳞癌生长、迁移和侵袭能力均显著下降，因此CCZ1具有作为一个新的治疗靶点的潜力。

Claims

1.一种CCZ1抑制剂，其通过序列互补的方式干扰或阻断CCZ1的表达。

2.根据权利要求1所述的CCZ1抑制剂，其是siRNA或shRNA。

3.根据权利要求2所述的CCZ1抑制剂，其中所述siRNA的核心序列包括如SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:14所示的正义链核苷酸序列和/或如SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15所示的反义链核苷酸序列；所述shRNA的核心序列包括如SEQ ID NO:16所示的正义链核苷酸序列或如SEQ ID NO:17所示的反义链序列。

4.根据权利要求2所述的CCZ1抑制剂，其中所述siRNA包括具有如SEQ ID NO:1或SEQID NO:3所示的正义链核苷酸序列和/或具有如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示的反义链核苷酸序列；所述shRNA具有如SEQ ID NO:5所示的正义链核苷酸序列和/或具有如SEQ IDNO:6所示的反义链核苷酸序列。

5.根据权利要求2-4中任一项所述的CCZ1抑制剂，其中所述siRNA或所述shRNA包含至少一个经修饰的核苷酸，优选地，所述修饰包括磷酸骨架修饰、核糖修饰和碱基修饰；更优选地，所述修饰是5′末端胆固醇修饰、5′末端磷酸化修饰、脱氧核糖的2′甲氧基修饰、碱基的5-甲基胞嘧啶修饰和5′末端的荧光基团修饰。

6.根据权利要求2-5中任一项所述的CCZ1抑制剂，其还包括配体；

优选地，所述配体是GalNAc。

7.一种CCZ1稳定敲低的细胞系，其通过使用根据权利要求1-6中任一项所述CCZ1抑制剂构建而成；优选地，使用根据权利要求2-6中任一项所述的shRNA构建而成。

8.根据权利要求7所述的细胞系，其中所述细胞系是宫颈鳞癌细胞系；优选地，所述细胞系是SiHa细胞系；更优选地，其使用pLKO.1-GFP载体构建而成。

9.CCZ1抑制剂在制备用于宫颈鳞癌的靶向治疗药物中的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，所述CCZ1抑制剂是根据权利要求1-6中任一项所述的CCZ1抑制剂，任选地，所述CCZ1抑制剂还包括药学上可接受的载体或赋形剂。