CN118697697A - 一种脂质体封装的长效罗哌卡因缓释系统 - Google Patents

Abstract

本公开涉及一种脂质体封装的长效罗哌卡因缓释系统。具体而言，本公开提供了一种用于延长罗哌卡因释放并增强镇痛效果的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体，其中所述脂质体包含罗哌卡因及脂质成分；所述高分子材料包含明胶和透明质酸钠。

Description

一种脂质体封装的长效罗哌卡因缓释系统

技术领域

本公开涉及一种脂质体封装的长效罗哌卡因缓释系统，属于医疗镇痛领域。

背景技术

自从手术干预作为一种有效的临床治疗手段被普及以来，术后疼痛一直是一个不可避免的需要解决的问题。虽然阿片类药物已经显示出强大而可靠的镇痛功效，但相关的副作用和阿片类药物危机的普遍存在，使得人们迫切需要减少阿片类药物的使用。在这方面，局部麻醉剂因其起效快、毒性低、无成瘾性而成为治疗术后疼痛的热门选择。然而，传统的局麻药制剂如盐酸罗哌卡因和盐酸布比卡因的镇痛效果只能持续数小时，远远不能充分抑制术后疼痛。

罗哌卡因，作为酰胺类局麻药的一种，已在临床上得到广泛应用，它可以用于浸润麻醉，静脉局麻，外周神经阻滞和椎管内麻醉。与利多卡因相比，其起效相对较慢，但作用持续时间较长。它能延长感觉阻滞和镇痛，尤其当低浓度的连续输注时，通常比其运动阻滞的持续时间和强度更持久。其与布比卡因相比，效价强度降低，因此其在外周神经阻滞的临床表现上与布比卡因类似。两种特征导致其比布比卡因感觉运动阻滞的效能更低，心脏毒性减少。动物研究表明，与布比卡因的相对的空间选择性相比，罗哌卡因的较小分子可能是降低心脏毒性风险的更重要的因素。它也具有内在的血管收缩效应，这有助于减少其心脏毒性，并可能增加其作用的持续时间。有证据表明，与布比卡因相比，罗哌卡因可以产生更有利的感觉运动分离阻滞。

明胶是一种大分子的亲水胶体，是胶原部分水解后的产物。明胶因其生物可降解性、良好的生物相容性和成膜性而在医药领域中广泛应用。且体内降解后不产生其他副产物、无免疫原性和血液相容性以及具有与胶原相同的组分和生物性质，广泛应用于组织工程和药物递送系统中。

透明质酸，又名玻尿酸，是一种酸性粘多糖。透明质酸以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。透明质酸是构成人体细胞间质、眼玻璃体、关节滑液等结缔组织的主要成分，在体内发挥保水、维持细胞外空间、调节渗透压、润滑、促进细胞修复的重要生理功能。透明质酸与其它药物反应形成的化合物对药物发挥缓释作用，可达到定向和定时释放的目的。

脂质体，是一种人工膜。在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体，直径25～1000nm不等。脂质体可用于转基因，或制备药物，利用脂质体可以和细胞膜融合的特点，将药物送入细胞内部。脂质体作为药物递送系统发展至今已经可以装载化疗药物、抗微生物及病毒(SARS、HIV、AIV、RV等)药物、抗寄生虫药物、基因物质、疫苗、治疗蛋白质、抗炎症药物、激素和天然药物等。载药脂质体具有被动靶向性和主动靶向性(表面修饰的脂质体)、缓释性，药物经脂质体包覆保护、可以提高药物的稳定性、减少敏感组织对大毒性药物的暴露，降低药物毒性。脂质体的研究已经从早期的，普通的普通脂质体向多功能脂质体的方向发展，并且已经在许多方面显示出其潜在的应用价值。

为了延长传统局麻药的镇痛持续时间，已开发基于各种类型的材料的多种缓释局麻药制剂，包括聚合物，微球，脂质体，水凝胶，肽及其杂交系统。例如CN113116823B及CN114948877A所提供的罗哌卡因脂质体。

发明内容

本发明的发明人经过长期研究发现出乎预料地发现，明胶和透明质酸能够显著增强罗哌卡因或其脂质体的缓释效果。在此基础上，本发明的发明人进行了一系列研究，进而提供如下的技术方案。

本发明提供了一种用于药物缓释的高分子材料，其包含明胶和透明质酸。

本发明提供了明胶和透明质酸的组合在制备用于增强罗哌卡因或其脂质体的缓释的药物中的用途。

本发明提供了一种增强罗哌卡因或其脂质体缓释的方法，其包括将罗哌卡因或其脂质体与本发明的高分子材料进行组合。

本发明提供了一种脂质体，其包含：

罗哌卡因(ROP)和脂质成分，其中所述脂质成分包括卵磷脂、胆固醇、DPPC(磷酸甘油酯)和PEG-DSPE。

本发明提供了一种用于增强罗哌卡因缓释的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体，其中所述脂质体包含罗哌卡因及脂质成分，且所述脂质成分包含卵磷脂、胆固醇、DPPC和PEG-DSPE；所述高分子材料包含明胶和透明质酸。

本发明提供了一种高分子材料包裹罗哌卡因脂质体的制备方法，其包括以下步骤：

a.将罗哌卡因与脂质成分混合制备脂质体；

b.将制备的脂质体与包含明胶和透明质酸钠的高分子材料混合。

在本公开中，所述脂质体的制备方法可以具体包括：

a.在有机溶剂中将罗哌卡因与卵磷脂、胆固醇、DPPC和PEG-DSPE混合，形成混合物；

b.蒸发混合物中有机溶剂，形成脂质体；

c.非必需地，向脂质体中加入水性溶剂，形成罗哌卡因脂质体溶液。

本公开还提供了所述的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体的应用，其应用于延长罗哌卡因的释放并增强其在术后疼痛治疗中的镇痛效果。示例性地，本公开提供了所述的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体在制备用于延长罗哌卡因的释放和/或增强其镇痛效果的药物中的用途。

在本公开中，优选地，在将罗哌卡因(ROP，Ropivacaine)与脂质成分混合制备脂质体之前，先将罗哌卡因转化成罗哌卡因碱(RB，Ropivacaine Base)。相应地，高分子材料包裹罗哌卡因脂质体中所包含的罗哌卡因，优选地，是RB(罗哌卡因碱，Ropivacaine Base)。需要注意的是，这仅仅是优选的方案，可以显而易见理解的是，本公开中当提及罗哌卡因时，其也等同于罗哌卡因碱或其类似物，除非特别说明或者显而易见不能作此理解。反之亦然，本公开中当提及罗哌卡因碱时，其也等同于罗哌卡因或其类似物，除非特别说明或者显而易见不能作此理解。

另外，在本公开中，透明质酸(Hyaluronic Acid，HA)和透明质酸钠(SodiumHyaluronate，SH)可互换使用，这是因为它们在本质上是相同的分子，只是盐形式不同。

在本公开的高分子材料中，明胶和透明质酸钠的重量比示例性地可为(1-10)：(10-1)，例如为(1-5)：(5-1)、(1-3)：(3-1)、(1-2)：(2-1)或1：1。

在本公开的脂质体中，卵磷脂:胆固醇:DPPC:PEG-DSPE的重量比示例性地可为(20-50):(1-10):(0.2-2):(0.2-2)，进一步地为(30-40):(3-7):(0.5-1.5):(0.5-1.5)，例如为35:5:1:1。

示例性地，所述ROP(或RB):卵磷脂:胆固醇:DPPC:PEG-DSPE的重量比为(10-40):(20-50):(1-10):(0.2-2):(0.2-2)，进一步地为(20-30)：(30-40):(3-7):(0.5-1.5):(0.5-1.5)，例如为25:35:5:1:1。

本公开还提供了一种高分子材料包裹罗哌卡因脂质体，其包含脂质体和高分子材料，其中所述脂质体中包含的罗哌卡因和高分子材料之间的重量比为(1-10)：(10-1)，例如为(1-5)：(5-1)、(1-3)：(3-1)、(1-2)：(2-1)或1：1。

本公开中高分子材料包裹罗哌卡因脂质体能够保护罗哌卡因，并控制其在体内的释放，从而延长其镇痛效果的持续时间。

附图说明

更清楚地说明本公开实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本公开的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1：长效罗哌卡因缓释系统的热板实验结果；

图2：长效罗哌卡因缓释系统的针刺实验结果；

图3：长效罗哌卡因缓释系统的负重实验结果；

图4：长效罗哌卡因缓释系统的负重数字评分结果；

图5：猪切口痛模型镇痛药效实验结果；

图6：高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体的结构示意图。

具体实施方式

在本发明的一些具体实施方式中，本公开提供了一种高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体，其用于延长罗哌卡因的释放并增强其，例如在术前、术中、或术后疼痛治疗中的镇痛效果。这些罗哌卡因脂质体包含罗哌卡因和脂质成分，以及高分子材料。

在脂质体的制备过程中，首先，任选地，将罗哌卡因转化为罗哌卡因碱(RB)，然后将罗哌卡因或RB与卵磷脂、胆固醇、DPPC和PEG-DSPE在挥发性有机溶剂中混合形成混合物。随后，蒸发有机溶剂，形成含有罗哌卡因的脂质体。可选择地，向脂质体中加入水性溶剂以溶解罗哌卡因的脂质体，形成罗哌卡因脂质体溶液。

在本公开中，向脂质体中加入的水性溶剂可以是，例如缓冲液、生理盐水或葡萄糖溶液，例如磷酸缓冲液等。

在本公开中，所述挥发性有机溶剂的实例包括但不限于乙醇、二氯甲烷、氯仿、甲醇等，或其组合。

需要注意的是，在本公开中，卵磷脂可以来自蛋黄、大豆、向日葵、菜籽、花生或棉籽等天然药用卵磷脂，也可以选自半合成卵磷脂，例如氢化卵磷脂等，或其组合。作为具体的实例，本公开使用了蛋黄卵磷脂等。显而易见的是，本公开中蛋黄卵磷脂可以替换为其他卵磷脂，例如来源于大豆、向日葵、菜籽、花生或棉籽的卵磷脂，如大豆卵磷脂、向日葵卵磷脂、菜籽卵磷脂、花生卵磷脂、棉籽卵磷脂等，只要其符合药用卵磷脂的标准。

PEG-DSPE的全称是1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[聚乙二醇](1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[poly(ethylene glycol)])。对于PEG-DSPE，其中PEG的聚合度可以为1000-8000，在其中任意选择，例如为1000、2000、4000、6000、8000。需要注意的是，本公开中PEG2000可以替换为PEG1000、4000、6000或8000以及其中任何聚合度的PEG。

DPPC的全称是1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(Dipalmitoylphosphatidylcholine)，是一种磷脂。

高分子材料包含或由明胶和透明质酸钠组成。在高分子材料包裹罗哌卡因脂质体的制备过程中，将制备好的脂质体与含有明胶和透明质酸钠的高分子材料混合。

在脂质体和高分子材料的比例方面，卵磷脂、胆固醇、DPPC和PEG-DSPE的重量比例可以在(20-50):(1-10):(0.2-2):(0.2-2)的范围内，或更具体地在(30-40):(3-7):(0.5-1.5):(0.5-1.5)的范围内进行。示例性地，这些比例可以为35:5:1:1。而罗哌卡因或RB与这些脂质成分的重量比例可以在(10-40):(20-50):(1-10):(0.2-2):(0.2-2)的范围内，或更具体地在(20-30):(30-40):(3-7):(0.5-1.5):(0.5-1.5)的范围内进行。示例性地，这些比例可以为25:35:5:1:1。

在高分子材料中，明胶和透明质酸钠的重量比可以在(1-10):(10-1)的范围内，或更具体地在(1-5):(5-1)、(1-3):(3-1)、(1-2):(2-1)或1:1范围内进行。当采用明胶和透明质酸钠的重量比在1：1的范围内时，材料具有明显的流动性，可以通过23G注射器针头呈连续丝状结构注射，体系内未见固体胶冻样物质，且在常温存放1周内仍然保持稳定的理化性质，没有出现成胶、粘连、变质现象。当然，如果采用，例如凝胶敷贴的方式施用的话，无需特别考虑其流动性，因此明胶和透明质酸钠的重量比可不局限在1：1的范围内。本公开提供了一种用于延长罗哌卡因释放并增强镇痛效果的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体的制备方法，以及这些罗哌卡因脂质体的应用，其能够在术前、中和后疼痛治疗中延长罗哌卡因的镇痛效果。

在本发明中，明胶和透明质酸钠被用作包裹罗哌卡因脂质体的高分子材料，以提高脂质体的稳定性和药物释放的控制性。研究发现，这两种高分子材料能够协同增强罗哌卡因脂质体的镇痛效果。明胶具有良好的生物相容性和生物降解性，能够提供机械强度和结构支持；透明质酸钠具有高粘度和保湿性，能够延长药物的释放时间，并增强局部组织的润滑性和舒适度。当这两种材料按上述比例组合时，它们能够形成稳定的网络结构，有效包裹罗哌卡因脂质体，防止药物的快速释放，从而延长镇痛效果。

如果高分子材料中仅含有明胶或仅含有透明质酸钠，会影响镇痛效果。单独使用明胶的话，高分子材料会缺乏粘弹性，虽然明胶具有良好的结构支持，但其粘弹性较低，不能有效控制药物释放速度，可能导致药物快速释放，镇痛效果不持久；而且明胶在体内的降解速度较快，导致脂质体的保护作用减弱，药物释放不均匀。

如果单独使用透明质酸钠的话，高分子材料会缺乏机械强度，这是因为，虽然透明质酸钠具有高粘度和保湿性，但其机械强度较低，不能提供足够的结构支持，脂质体容易破裂或变形；另外，由于透明质酸钠的高粘度，药物释放可能过于缓慢，不能在需要时提供足够的镇痛药物浓度，影响镇痛效果。

因此，本发明提供了明胶和透明质酸钠两者的用途或者其用于延长药物缓释的方法。

为了更深入地理解这一发明，以下将详细探讨相关组分的特性、配比、制备方法以及应用。

罗哌卡因是一种局部麻醉药物，常用于手术中的局部麻醉和术后疼痛的治疗。其作用机制是通过阻断神经元的电位变化，从而阻止神经冲动的传导，达到麻醉的效果。本公开中选择了罗哌卡因作为镇痛的药物活性成分，用于制备高分子材料包裹的脂质体。可以显而易见理解的是，在本公开中，罗哌卡因可以等同替换为罗哌卡因任何活性变体，例如罗哌卡因或其盐，例如盐酸盐。

脂质成分是罗哌卡因脂质体的重要组成部分，其主要作用是为罗哌卡因提供载体，并调节其释放速度。在本发明中，脂质成分主要包括卵磷脂、胆固醇、DPPC和PEG-DSPE。

卵磷脂作为一种脂质成分，在药物输送中具有良好的生物相容性和生物降解性。其在脂质体中的存在有助于增强脂质体的稳定性和药物的包裹率。

胆固醇是细胞膜的重要组成成分，可以增加脂质体的稳定性并调节其流动性。在本发明中，胆固醇的添加有助于提高罗哌卡因脂质体的结构稳定性和药物的释放速度。

DPPC(磷酸甘油酯)是一种磷脂，具有良好的生物相容性和生物可降解性。其在脂质体中的存在有助于增强脂质体的结构稳定性，并调节罗哌卡因的释放速度。

PEG-DSPE：是一种表面活性剂，具有良好的亲水性和生物相容性。其在脂质体中的添加有助于增强脂质体的稳定性，并调节罗哌卡因的释放速度。

高分子材料是用于包裹罗哌卡因脂质体的外部载体，其主要作用可能是增强罗哌卡因脂质体的稳定性和提高其生物利用度。在本发明中，高分子材料包含或者主要由明胶和透明质酸钠组成。

明胶是一种天然的胶体材料，具有良好的生物相容性和生物降解性。其在高分子材料中的添加有助于增强材料的稳定性和提高罗哌卡因脂质体的缓释。

透明质酸钠是一种水溶性聚糖，具有良好的生物相容性和生物可降解性。其在高分子材料中的存在有助于增强材料的流动性和提高罗哌卡因脂质体的生物利用度。

本发明提供了一种制备高分子材料包裹罗哌卡因脂质体的简便有效的方法。具体步骤如下：

a.将罗哌卡因与脂质成分混合制备脂质体：将罗哌卡因与卵磷脂、胆固醇、DPPC和PEG-DSPE在有机挥发性溶剂中混合形成混合物，然后将有机溶剂蒸发，形成脂质体，非必需地，将溶剂加入脂质体中，形成罗哌卡因脂质体溶液。

b.将制备的脂质体与包含明胶和透明质酸钠的高分子材料混合：将制备的罗哌卡因脂质体与含有明胶和透明质酸钠的高分子材料混合均匀，形成高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体。

在本公开中，所述缓冲溶剂液例如可以为缓冲液、葡萄糖溶液或生理盐水。具体而言，缓冲液可以包括但不限于磷酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液等。这些缓冲液在各种pH范围内提供稳定的环境，有助于维持药物的稳定性和活性。葡萄糖溶液可以为5％或10％的葡萄糖溶液，用于提供等渗环境。生理盐水则通常为0.9％的氯化钠溶液，用于保持等渗和离子平衡。

在本公开中，所述脂质体与包含明胶和透明质酸钠的高分子材料的混合过程例如可以在25-75℃的温度范围内进行。在这一温度范围内操作能够确保材料的均匀混合，同时避免温度过高导致材料降解或药物失活。

该混合过程可以在溶液状态下进行，也可以在固体状态下进行。在溶液状态下混合时，脂质体和高分子材料通常溶解在适当的溶剂中，通过搅拌或超声波处理等方法使其充分混合。这种方法有助于形成均匀的混合物，并且操作简便，易于控制。在固体状态下混合时，可以将脂质体和高分子材料按比例混合，然后通过机械搅拌等物理方法使其均匀分布。

此外，也可以采用先在固体状态下混合，然后在溶剂中进一步混合的方式。具体操作是先将脂质体和高分子材料按比例混合均匀，然后将混合物溶解或分散在适当的溶剂中，通过搅拌或超声波处理等方法进一步混合。这种方式结合了固体混合和溶液混合的优点，可以提高混合的均匀性，同时确保材料的分散效果。

在实际操作中，选择溶液状态、固体状态还是先固体混合后溶液混合，取决于具体的应用需求。例如，对于需要较高分散均匀性的应用，可能更适合采用溶液状态下的混合；而对于需要快速制备或避免溶剂使用的应用，则可以选择固体状态下的混合或先固体混合后溶液混合。

本发明提供的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体可以应用于多种医学领域，尤其适用于术后疼痛治疗。其能够延长罗哌卡因的释放并增强其在术前、中和后疼痛治疗中的镇痛效果，从而提高患者的生活质量和治疗效果。

在实际应用中，可以根据患者的具体情况和病情严重程度，调整罗哌卡因脂质体的剂量和给药途径，以达到最佳的治疗效果。同时，本发明还可以与其他药物或治疗方法联合使用，以进一步提高治疗效果和减少副作用。

更进一步地，在本公开中将高分子材料包裹罗哌卡因脂质体优选经过如下处理：在低温(例如2-8℃，优选4℃)下放置一段时间(例如0.5-6小时，如1、2、3、4、5h)，恢复室温后加入2-羟基-2-甲基-1-苯基-1-丙酮(0.5-10mM)并紫外照射一段时间(例如5-30min，如10、15或20min)。低温放置的益处在于，打破体系平衡，有助于控制脂质体的结构和形态，让脂质体成分缓慢凝聚形成稳态，进而在后续的光照射下巩固这种稳态，形成更加稳定的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体结构。

本发明提供了用于延长罗哌卡因释放并增强镇痛效果的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体，其具有制备简便、成本低廉、治疗效果显著等优点，具有广阔的应用前景和市场潜力。

本公开中，包裹在此指的是由明胶和透明质酸钠组成的多孔结构，该结构用以包裹和缓释罗哌卡因脂质体。这种多孔结构的形成和作用机制如下：

1.多孔结构的形成：明胶和透明质酸钠都是高分子材料，当它们溶解在水中时，可以形成交联网络。在紫外光照射下，明胶和透明质酸钠可以通过光引发剂诱导交联反应，进一步形成稳定的三维多孔结构。这种多孔结构具有高亲水性和多孔性特点，其中，由于透明质酸钠和明胶本身的高亲水性，多孔结构具有较强的保水能力；在交联过程中，形成的多孔结构有利于捕获和包裹脂质体，增加药物载量。

2.脂质体的包裹：罗哌卡因脂质体在多孔结构的形成过程中被均匀分布并包裹在多孔网络中。脂质体是由微小囊泡，可以携带罗哌卡因等药物。包裹在多孔结构中的脂质体在多孔网络的保护下得以稳定存在。

3.缓释效果的实现：多孔结构和脂质体的组合通过以下机制实现药物的缓释效果：多孔结构形成了物理屏障，阻碍了罗哌卡因从脂质体中的快速释放。药物需要逐渐扩散通过多孔网络，达到缓慢释放的效果；透明质酸钠和明胶的降解速率可以通过调节交联密度来控制，从而影响药物的释放速度。随着时间的推移，透明质酸钠和明胶逐渐降解，脂质体内的罗哌卡因逐步释放；：多孔结构对脂质体提供保护，防止脂质体因外界环境的影响(如pH、酶解等)而过早释放药物。

本公开中高分子材料的包裹可以提升药物稳定性，因为多孔结构对脂质体的包裹保护了罗哌卡因，防止其在储存和运输过程中受到破坏；另外，这种包裹结构可以延长药物释放时间，同时通过多孔结构的物理屏障和可控降解，实现罗哌卡因的缓慢、持续释放，延长药物的作用时间；再者，可以控制释放速率，因为通过调节明胶和透明质酸钠的比例及交联密度，可以精确控制药物的释放速率，满足不同治疗需求。

明胶和透明质酸钠形成的多孔结构通过包裹含有罗哌卡因的脂质体，实现了缓释效果。这种结构不仅提高了药物的稳定性，还通过物理屏障和可控降解机制，有效延长了药物的释放时间和作用效果。在生物医学和药物递送领域，这种多孔结构的应用为长效药物制剂提供了新的思路和解决方案。

以下所述仅为本公开的最具体实施例，并不用以限制本公开，凡在本公开的原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本公开的保护范围之内。

制备实施例1：盐酸罗哌卡因的碱化

将3克结晶盐酸罗哌卡因加入75毫升去离子水中，混合至完全溶解。随后，在盐酸罗哌卡因溶液中缓慢加入6.52毫升浓度为14N(10倍摩尔当量)的氢氧化铵，以诱导罗哌卡因碱的沉淀。随后，通过去离子水过滤和充分洗涤，去除残留的氢氧化铵。最后，将得到的沉淀粉末进行冻干并存放在干燥剂下，以备进一步使用。

制备实施例2：罗哌卡因碱脂质体的制备

首先，将罗哌卡因碱(RB)、蛋黄卵磷脂、胆固醇、DPPC和PEG2000-DSPE按照25：35：5：1：1的比例溶解在氯仿和乙醇(1:1)的溶剂中。然后，旋蒸去除有机挥发性溶剂，形成脂质体。接着，向脂质体薄膜中加入PBS(磷酸盐缓冲溶液)，并进行超声分散溶解，最终得到罗哌卡因碱脂质体溶液。

示例性地，将5毫克罗哌卡因碱(RB)、7毫克蛋黄卵磷脂、1毫克胆固醇、0.2毫克DPPC(磷酸甘油酯)和0.2毫克PEG2000-DSPE溶解在2毫升氯仿和乙醇(1:1)的溶剂中。然后，在50℃的水浴中以30rpm的速度旋转蒸发，形成脂质体薄膜。接着，向脂质体薄膜中加入0.5毫升PBS(磷酸盐缓冲溶液)，并进行超声分散溶解，最终得到10毫克/毫升的罗哌卡因碱脂质体溶液。罗哌卡因碱脂质体溶液的中罗哌卡因的浓度可以通过加入PBS的量进行调节，且所制备的罗哌卡因碱脂质体溶液的体积可以通过放大或缩小操作而进行调节。

制备实施例3

首先，将罗哌卡因的盐酸盐(盐酸罗哌卡因)、大豆卵磷脂、胆固醇、DPPC和PEG4000-DSPE按照10：20：1：0.2：0.2的比例溶解在氯仿和乙醇(1:1)的溶剂中。然后，旋蒸去除有机挥发性溶剂，形成脂质体。接着，向脂质体中加入0.9％生理盐水，并进行超声分散溶解，最终得到罗哌卡因碱脂质体溶液。

示例性地，将盐酸罗哌卡因：10mg、大豆卵磷脂：20mg、胆固醇：1mg、DPPC(1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱)：0.2mg、PEG4000-DSPE(1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙二醇-4000)：0.2mg溶解在2毫升氯仿和乙醇(1:1)的溶剂中，然后，在50℃的水浴中以30rpm的速度旋转蒸发，形成脂质体薄膜。接着，向脂质体薄膜中加入1.0毫升0.9％生理盐水，并进行超声分散溶解，最终得到10毫克/毫升的罗哌卡因盐酸盐脂质体溶液。

制备实施例4

首先，将盐酸罗哌卡因、氢化蛋黄卵磷脂、胆固醇、DPPC和PEG6000-DSPE按照20：25：5：1：1的比例溶解在氯仿和乙醇(1:1)的溶剂中。然后，旋蒸去除有机挥发性溶剂，形成脂质体。接着，向脂质体薄膜中加入0.9％生理盐水，并进行超声分散溶解，最终得到罗哌卡因碱脂质体溶液。

示例性地，将盐酸罗哌卡因：10mg、大豆卵磷脂：12.5mg、胆固醇：2.5mg、DPPC(1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱)：0.5mg、PEG4000-DSPE(1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙二醇-4000)：0.5mg溶解在2毫升氯仿和乙醇(1:1)的溶剂中，然后，在50℃的水浴中以30rpm的速度旋转蒸发，形成脂质体薄膜。接着，向脂质体薄膜中加入1.0毫升0.9％生理盐水，并进行超声分散溶解，最终得到10毫克/毫升的罗哌卡因盐酸盐脂质体溶液。

制备实施例5：高分子材料包裹罗哌卡因脂质体

取根据制备实施例2制备的10毫升的罗哌卡因碱脂质体溶液，加入100毫克的明胶和100毫克的透明质酸钠。将混合物置于50℃水浴锅中，以100转/分钟的速度搅拌溶解30分钟，最终得到含有1％明胶、1％透明质酸钠和1％罗哌卡因碱脂质体的产物。

制备实施例6：高分子材料包裹罗哌卡因脂质体

取根据制备实施例3制备的10毫升的罗哌卡因碱脂质体溶液，加入20毫克的明胶和180毫克的透明质酸钠。将混合物置于50℃水浴锅中，以100转/分钟的速度搅拌溶解30分钟，最终得到含有0.2％明胶、1.8％透明质酸钠和1％罗哌卡因盐酸盐脂质体的产物。

制备实施例7：高分子材料包裹罗哌卡因脂质体

取根据制备实施例4制备的10毫升的罗哌卡因碱脂质体溶液，加入50毫克的明胶和50毫克的透明质酸钠。将混合物置于50℃水浴锅中，以100转/分钟的速度搅拌溶解30分钟，最终得到含有1％明胶、0.5％透明质酸钠和0.5％罗哌卡因盐酸盐脂质体的产物。

制备实施例8：优化的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体

取根据制备实施例5制备的10毫升的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体，先低温(4℃)放置1小时，恢复室温后加入2mM 2-羟基-2-甲基-1-苯基-1-丙酮，紫外光照射(365nm)10分钟。

效果实施例1：效果验证

通过对大鼠进行坐骨神经阻滞手术后下肢感觉和运动的观察，验证了本发明能够延长罗哌卡因的释放并增强镇痛效果。

实验中，将大鼠随机分为以下五组，每组包含5只大鼠，具体如下：

A组：对照组，按照实施例2，以盐酸罗哌卡因为材料代替罗哌卡因碱生产的脂质体，浓度为40毫克/毫升；

B组：按照实施例5，以盐酸罗哌卡因为材料代替罗哌卡因碱生产的高分子材料包裹脂质体(Rop-lipo-gel)，浓度为40毫克/毫升；

C组：按照制备实施例5制备的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体，即，高分子罗哌卡因碱体系(Rop-base-lipo-gel)，浓度为40毫克/毫升；

D组：使用盐酸罗哌卡因溶液(Rop-HCl)，浓度为40毫克/毫升；

E组：阴性对照组，使用生理盐水(Saline)。

每组的罗哌卡因浓度均为40毫克/毫升。

采用对大鼠坐骨神经阻滞术后下肢感觉和运动的影响来证明本发明能够延长罗哌卡因的释放和镇痛效果的延长。

热板实验：

注射不同罗哌缓释制剂后，大鼠在热板上感觉阻滞时脚趾呈收缩状态，感觉不到疼痛，麻醉效果不足时出现明显的舔舐或跳跃行为。从热刺激开始导致舔爪、缩回爪或弹跳的时间被记录为大鼠的缩回爪潜伏期(Paw Withdraw Latency,PWL)，将足底测试仪中心十字对准大鼠实验侧下肢脚底，足底测试仪将自动感应记录大鼠缩回爪的时间。测试前30min将大鼠放置进足底测试仪平台上，让大鼠安静休息适应环境。术前对每只大鼠进行两次基本热潜伏期测试，术后对每只大鼠进行4次热潜伏期测试，每次间隔5min，记录每只大鼠PWL平均时间。为了保护动物，最大PWL设定为20秒。结果见图1。

热板实验结果中，发现E组盐水组及各实验组术前的PWL平均值＜10s，将PWL有效阈值设为10s。A、B、C三组含罗哌卡因脂质的缓释体系，在术后6h内均体现出较为满意的感觉阻滞效果，随后随时间其感觉阻滞效果持续下降。其中A组罗哌脂质体组，在48h后感觉阻滞效果接近10s的基线，效果几乎完全消失，表罗哌卡因的释放速度较快。B(罗哌卡因脂质体+高分子体系)和C(高分子罗哌卡因碱体系)组，在术后的第144h(Day 6)，仍保持高效的感觉阻滞效果，表明优越的镇痛能力，同时也表明高分子体系的优越的罗哌缓释能力，即使在第168h，B、C组依然有镇痛效果。C组高分子罗哌卡因碱脂质体的表现稍稍优于B组，体现出更有效率的镇痛表现。

使用制备实施例6、7和8制备的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体也进行了类似的热板实验，结果显示，制备实施例6和7脂质体镇痛效果显著优于与其对应的组A、D和E，在术后120小时均保持优越的镇痛能力。尤其突出的是，制备实施例8所进一步优化的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体在第168小时，PWL时间(s)显著大于实施例5所制备的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体。

针刺实验：

检测前动物先放入铁丝架上检测盒适应3天，每天30min；每次检测时，动物先放入检测盒适应10min后用Von Frey测痛仪检测动物实验侧后肢的机械痛缩足阈值(Mechanical Withdrawal Thresold,MWT)，每次间隔5min，检测时手持机械测痛仪刺激手柄，测试针尖端垂直接触检测部位并缓慢施加力度，直至引起动物产生缩足反应后，移走检测手柄，记录引起此反应的压力最大值对应测痛棒的压力数值(即动物检测部位的机械痛阈值)，取每组大鼠压力平均值进行统计。结果见图2。

根据针刺实验中对照组的结果，将MWT＜60认为感觉阻滞效果几乎消失。A组组罗哌脂质体组，在48h后感觉阻滞效果低于60g的基线，效果几乎完全消失，表示罗哌卡因的释放速度较快。B(罗哌卡因脂质体+高分子体系组)和C(高分子罗哌卡因碱体系)组，在术后的第144h，仍保持高效的感觉阻滞效果，显著优于组D和A，表明高分子材料和脂质体组合优越的罗哌缓释能力。

负重测试：

将大鼠的一只后爪放在电子天平上，让它承受自身重量。记录下大鼠在脚踝不接触天平的情况下所能承受的最大重量，当承受体重大于大鼠体重一半时，就认为负重测试成功。每只大鼠在每个时间点重复测量五次，记录每组大鼠成功次数平均值用于进一步的数据分析。结果见图3。

负重实验结果发现，D组(盐酸罗哌卡因组)在注射12h后运动阻滞效果完全消失，表明大鼠单侧下肢的运动功能恢复。A、B、C、三组脂质体缓释体系，在术后12h内均对大鼠术侧的下肢活动有抑制作用，但是B、C组高分子材料包裹后的脂质体组的抑制效果均小于A组罗哌脂质体组，在48h后，三组实验组的抑制效果几乎消失。在6h之后，B、C组的负重实验次数均大于A组，反映出高分子材料优秀的罗哌缓释能力和因此产生的更低的运动阻滞效果。

负重数字评分测试：

首先使用基于动物在不同时间点行为的数字评分系统评估运动功能。评分系统如下：正常运动(0分)；负重活动，被尾巴抬起时脚趾无法充分展开(1分)；无法完全负荷运动，脚趾无法展开(2分)；腿部无力，完全无法承受重量，完全无法张开脚趾(3分)；以及完全无法承受重量和弯曲脚趾，步态拖拽(4分)。结果见图4。

负重数字评分结果发现，D组(盐酸罗哌卡因组)12h后运动阻滞效果也完全消失。负重数字的评分表现基本与负重测试结果相符。A组罗哌卡因脂质体组在术后的24h评分平均数＞1，表现出较快的缓释能力和较强的运动影响结果。B、C2组高分子材料包裹后的罗哌卡因脂质体组中的大鼠在术后24h运动评分均小于1，不影响大鼠的基本活动，反映出高分子材料优秀的罗哌缓释能力和因此产生的更低的运动阻滞效果

效果实施例2：单独使用明胶或透明质酸钠的不足:

取根据制备实施例2制备的10毫升的罗哌卡因碱脂质体溶液，加入200毫克的明胶，或加入200毫克的透明质酸钠。将混合物置于50℃水浴锅中，以100转/分钟的速度搅拌溶解30分钟，最终得到含有2％明胶和1％罗哌卡因碱脂质体的产物(G1)；2％透明质酸钠和1％罗哌卡因碱脂质体的产物(G2)。

取根据制备实施例2制备的10毫升的罗哌卡因碱脂质体溶液，加入100毫克的明胶和100毫克的透明质酸钠。将混合物置于50℃水浴锅中，以100转/分钟的速度搅拌溶解30分钟，最终得到含有1％明胶、1％透明质酸钠和1％罗哌卡因碱脂质体的产物(G3)。

对G1-G3进行热板实验，其中每组的罗哌卡因浓度均为40毫克/毫升。结果发现，G3组在第7天仍有大于10s的PWL；G1和G2组在第6天感觉阻滞效果接近10s的基线，效果消失。由此可见，明胶和透明质酸钠组合的高分子材料形成的网络结构稳定性最佳，能够有效保护脂质体，形成更强的均匀缓释效果。同时，药物释放结果显示，包含明胶和透明质酸钠两者的罗哌卡因脂质体相对单一的明胶或者透明质酸钠，具有持续的药物释放能力，显著延长了镇痛效果。

效果实施例3：高分子材料的兼容性

将制备实施例2中的胆固醇、DPPC和PEG2000-DSPE中任一个去除或不去除，以制备相应的含有罗哌卡因的脂质体。取10毫升的罗哌卡因碱脂质体溶液，加入100毫克的明胶和100毫克的透明质酸钠。将混合物置于50℃水浴锅中，以100转/分钟的速度搅拌溶解30分钟，最终得到含有1％明胶、1％透明质酸钠和1％罗哌卡因碱脂质体的产物G1(不含胆固醇)、G2(不含DPPC)、G3(不含PEG2000-DSPE)和G4(制备实施例5)。对G1-G4进行热板实验，结果显示，G4的缓释效果明显优于G1-G3，但是G1-G3明显优于其对应的脂质体。

将制备实施例3的胆固醇、DPPC和PEG2000-DSPE中任一个去除(简称“去除”)或不去除(简称“不去除”)，以制备相应的含有罗哌卡因的脂质体。接着，根据实施例6制备相应的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体。将制备实施例4的胆固醇、DPPC和PEG2000-DSPE中任一个去除或不去除，以制备相应的含有罗哌卡因的脂质体。接着，根据实施例7制备相应的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体。对上述脂质体和相应的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体进行热板实验，结果类似。高分子材料包裹的脂质体的缓释效果明显优于对应的脂质体，且实施例6和7制备的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体的缓释效果优于对应的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体(“去除”)。

由此可见，明胶和透明质酸钠能显著增强罗哌卡因脂质体的缓释能力，延长了镇痛效果。因此，本发明的高分子材料对包含罗哌卡因的脂质体有广泛的兼容性，能够匹配不同的罗哌卡因脂质体。

效果实施例4：明胶和透明质酸钠的筛选特异性

在本公开中，明胶和透明质酸钠的组合在含有罗哌卡因的脂质体的缓释应用中表现出独特的优势。为了说明这种组合的特异性和优越性，通过与其他类似物组合进行比较来体现其效果差异。

明胶与PEG的组合可以形成水凝胶，具有良好的生物相容性和机械性能。热板实验表明，明胶与PEG的组合在含有罗哌卡因的脂质体的缓释方面，劣于明胶和透明质酸钠。

壳聚糖是一种天然多糖，具有良好的生物相容性和抗菌性。明胶与壳聚糖的组合可以形成生物材料。然而，热板实验表明，明胶与壳聚糖的组合在含有罗哌卡因的脂质体的缓释方面，劣于明胶和透明质酸钠。

透明质酸钠与羟丙基甲基纤维素(HPMC)的组合可以形成具有良好保水性和黏弹性的水凝胶。然而，与明胶相比，HPMC缺乏生物降解性。同时，热板实验表明，明胶与HPMC的组合在含有罗哌卡因的脂质体的缓释方面，劣于明胶和透明质酸钠。

透明质酸钠和聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)组合可以用于制备纳米颗粒或微球，具有良好的药物控制释放性能。然而，PLGA在降解过程中可能产生酸性降解产物，影响局部环境的pH值，并对组织产生不利影响。同时，热板实验表明，明胶与PLGA的组合在含有罗哌卡因的脂质体的缓释方面，劣于明胶和透明质酸钠。

效果实施例5：猪切口痛模型镇痛药效实验

实验设计：

模型组组别设计：共设置4个组；

动物数量：3只/组，合计12只动物：巴马小型猪；

性别比例：全部雄性；

实验动物选择依据：本试验使用巴马小型香猪，其遗传、生物学背景(包括解剖、生理、临床病理等各种数据的正常范围)比较清楚；猪的表皮厚度和人表皮厚度十分相近，皮肤结构、生理功能、免疫功能及伤口愈合过程与人类非常相近，其由于体表面积大，方便实验操作，Obreja和DI GIminiani等研究结果证实猪的皮肤神经支配系统与人的相似，通过研究猪对热刺激和机械刺激的反应可以对其疼痛敏感进行评估。本试验采用巴马小型猪作为实验动物，并通过对其后背部皮肤进行切割来模拟人类外科手术伤口，并于术后检测其机械痛阈来评估动物的术后疼痛敏感度，评估供试品的术后镇痛作用。

动物数量选择理由：在满足研究目的、科学标准和法规要求的前提下，使用尽可能少的动物。因此，本试验共4个组，3只/组，共12只动物。

具体分组信息见下：

G1(Model Group)：生理盐水

G2 A(Drug A)：恒瑞罗哌卡因脂质体18mg/ml(来自恒瑞药业)

G3 B(Drug B)：恒瑞罗哌卡因脂质体18mg/ml(来自恒瑞药业)+1％明胶&1％透明质酸

G4 C(Drug C)：恒瑞罗哌卡因脂质体36mg/ml(来自恒瑞药业)+1％明胶&1％透明质酸

造模方式：进入麻醉状态的动物，取俯卧位，于右后背距背中线3cm处进行备皮，消毒(碘伏)后平行于背中线做5cm长度的切口，切口的制作方法为切开皮肤后用镊子向下分离筋膜，不损伤肌肉。

给药途径：围绕伤口多点皮下注射给药(表皮下靠近真皮部位)；

给药部位：皮下注射给药，注射位点密集围绕伤口一圈，注射位点距离切口0.5cm，注射点数为10个点，0.28mL/点；

检测时间：进行切口手术前采集基线，给药后1h、3h、5h、24h、48h、72h、96h、120h、144h和168h各检测一次，共检测10次；

测定动物：所有计划测定的存活实验动物；

检测方法：采用电子Von Frey测痛仪进行检测，分别在切口两端、距离切口0.5cm处(共6点)采用触觉测量套件刺激动物，记录动物各位点发生逃避反应的阈值。

实验结果(见图5)：

(1)术前采集得刺激基线为300g。由于手术后疼痛(Postoperative Pain，PP)和痛觉过敏(Hyperalgesia，Ha)同时存在的影响，对照组术后机械痛阈值迅速降低至19.67g左右，并在96h内保持较低的水平(<50g)；随时间Ha影响逐渐减小和术口逐渐愈合的原因，MT(机械阈值)值开始上升，其中96h后MT值上升速率加快，说明疼痛逐渐减轻；但由于未愈合的伤口持续存在PP，第六天机械痛阈值约83.06g，远小于术前的300g。

(2)Drug A组罗哌卡因脂质体，在术后48h内能有效控制PP和Ha，MT值始终保持在150g以上。36h后，A组药效开始消失，MT值由于PP和Ha的影响下降速率增快，96h后开始回升，与对照组相符，说明疼痛逐渐减轻。

(3)Drug B组凝胶脂质体中罗哌卡因含量与A组相同，所得实验曲线也近似于A组。但值得注意的是，B组MT平均值始终在A组之上，而且B组MT值最低为146.67g，在150g附近。B组MT最低值出现于120h，大于A组72h的恒瑞脂质体的MT值(138.78g)，说明B组镇痛效果优于A组的现象。

(4)Drug C组凝胶脂质体中含有2倍于A剂量的罗哌卡因，可以明显的看到C组对于PP和Ha优秀的控制能力，术后120h仍有190g的MT值，而且在术后5-96h的急性疼痛爆发期内，C组能保持MT值在200g左右(最低199.94g)，在第144hC组MT值为199.72g，远远大于恒瑞A组24h(183.67g)的数值，与恒瑞A组第1h(216.94g)，第3h(220.50g)，第5h(216.67h)的效果也相似。C组MT值下降的速率也远远小于A两组，说明其优秀的包容能力和缓释效果。

由此可见，高分子凝胶体系具有优秀的包裹能力，可以安全的容纳更多的药物含量，保证镇痛强度。在C组的实验过程中，高分子凝胶体系包裹了更多的罗哌卡因脂质体，能够安全，缓慢的将罗哌卡因释放到组织附近，维持麻醉效果。

同时，高分子凝胶体系具有优秀的缓释能力，保证了药物更长的作用时间，得到了更优秀的作用效果。B组和A组有着相同含量的罗哌卡因，但是B组的镇痛效果强于A组，且全实验中并没有明显突释的现象，正是因为凝胶体系更慢更稳定的释放作用。

结构实施例

对本公开所制备的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体进行电镜扫描，均显示其为多孔结构，脂质体填充于空隙中。示例性地，图6是对本公开实施例5的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体的电镜扫描示意图。

最后需要指出的是，上述实施例仅用于说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制。尽管参考了较佳实施例对本发明进行了详细描述，但应该理解，本领域的普通技术人员可以对本发明的技术方案进行修改或等效替换，而不会脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (13)

1.一种高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体，其中所述脂质体包含罗哌卡因及脂质成分，且所述脂质成分包含卵磷脂、胆固醇、DPPC和PEG-DSPE；所述高分子材料包含明胶和透明质酸钠。

2.根据权利要求1所述的所述罗哌卡因脂质体，其中罗哌卡因:卵磷脂:胆固醇:DPPC:PEG-DSPE的重量比为(10-40):(20-50):(1-10):(0.2-2):(0.2-2)，进一步地为(20-30)：(30-40):(3-7):(0.5-1.5):(0.5-1.5)，或为25:35:5:1:1；和/或，

在高分子材料中，明胶和透明质酸钠的重量比为(1-10)：(10-1)，例如为(1-5)：(5-1)、(1-3)：(3-1)、(1-2)：(2-1)或1：1。

3.根据权利要求2所述的哌卡因脂质体，其中所述脂质体中包含的罗哌卡因和高分子材料之间的重量比为(1-10)：(10-1)，或为(1-5)：(5-1)、(1-3)：(3-1)、(1-2)：(2-1)或1：1。

4.权利要求1中所定义的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体的制备方法，其包括以下步骤：

a.将罗哌卡因与脂质成分在有机溶剂(优选为有机挥发性溶剂)中溶解后去除溶剂，以制备脂质体；

b.将制备的脂质体与包含明胶和透明质酸钠的高分子材料混合。

5.根据权利要求4所述高分子材料包裹罗哌卡因脂质体的制备方法，其包括：

a.在有机溶剂中将罗哌卡因与卵磷脂、胆固醇、DPPC和PEG-DSPE混合，形成混合物；

b.将混合物中有机溶剂蒸发，形成脂质体；

c.将脂质体溶解，形成罗哌卡因脂质体溶液；

d.将制备的脂质体溶液与包含明胶和透明质酸钠的高分子材料混合。

6.药物，其包含权利要求1-3任一项所述的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体，或包含权利要求4或5所制备的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体。

7.一种延长罗哌卡因的释放和/或增强其镇痛效果的方法，其包括将罗哌卡因制备成权利要求1-3任一项所述的高分子材料包裹的罗哌卡因脂质体。

8.权利要求1或2中所定义的脂质成份或高分子材料在制备用于延长罗哌卡因的释放和/或增强其镇痛效果的药物中用途。

9.权利要求1-3任一项所述的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体，或包含权利要求4或5所制备的高分子材料包裹罗哌卡因脂质体在制备用于延长罗哌卡因的释放和/或增强其镇痛效果的药物中的用途。

10.根据权利要求4所述的方法，其中所述有机溶剂是乙醇、氯仿或其混合物。

11.一种用于罗哌卡因药物缓释的高分子材料，其包含明胶和透明质酸。

12.一种增强罗哌卡因或其脂质体缓释的方法，其包括将罗哌卡因或其脂质体与权利要求11的高分子材料进行组合。

13.药物，其包含权利要求11的高分子材料以及罗哌卡因或其脂质体。