CN118574811A

CN118574811A - 5-氯-4-（3-氯-4-甲基苯基）-1h-咪唑-2-甲腈的水合物晶体

Info

Publication number: CN118574811A
Application number: CN202280081321.1A
Authority: CN
Inventors: 四釜洋; 樋口浩司; 渥美省吾; 盐田博人; 井村贵之
Original assignee: Ishihara Sangyo Kaisha Ltd
Current assignee: Ishihara Sangyo Kaisha Ltd
Priority date: 2021-12-08
Filing date: 2022-12-07
Publication date: 2024-08-30
Also published as: KR20240132022A; TW202330476A; AU2022407817A1; MX2024006752A; EP4446313A4; ZA202404462B; CA3240211A1; EP4446313A1; JPWO2023106320A1; WO2023106320A1; US20250026725A1

Abstract

本发明涉及5‑氯‑4‑(3‑氯‑4‑甲基苯基)‑1H‑咪唑‑2‑甲腈的水合物晶体。

Description

5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体

相关申请的参考

本专利申请主张基于于2021年12月8日提出申请的日本专利申请2021-199461号的优先权，该在先专利申请的全部公开内容通过引用而成为本说明书的一部分。

技术领域

本发明涉及5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体。

背景技术

专利文献1中公开了5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈。该文献为涉及咪唑系化合物及含有它们的有害生物防除剂的技术。作为用于合成目标咪唑系化合物的中间体的例子，第1表的中间体No.89记载了5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈。

此外，马拉色菌属菌为常驻于人、动物的皮肤的担子菌系酵母。已知马拉色菌属菌由于以脂质为营养源进行增殖，因此定居于皮脂多的部分，成为花斑癣、脂溢性皮炎、毛囊炎、特应性皮炎、寻常性银屑病等皮肤疾病的原因。

作为现有的针对起源于马拉色菌属菌的皮肤疾病的治疗剂，可举出二硫化硒、2-巯基吡啶-N-氧化锌、吡罗克酮乙醇胺盐、咪康唑硝酸盐或酮康唑等咪唑系化合物、伊曲康唑或氟康唑等三唑系化合物。

通常，皮肤常驻菌拥有防止皮肤的杂菌的繁殖所伴随的头皮异味的效果、通过适度分解皮脂而保持弱酸性状态的效果等所谓的屏障效果。现有的治疗剂不仅会杀死病原菌，甚至还会杀死皮肤常驻菌，因而会有破坏皮肤的屏障效果的担忧。另外，二硫化硒已被指出有经口毒性、脱毛、皮疹、衰弱、倦怠感、毛发变色等副作用，2-巯基吡啶-N-氧化锌已被指出有硫磺异味、环境激素的担忧。此外，咪康唑硝酸盐等咪唑系化合物、伊曲康唑等三唑系化合物具有抑制菌类的脂质合成的作用。然而，这些化合物在通过抑制菌的细胞膜的生物合成而表达抗菌活性的性质方面，直至表达充分的效果为止需要时间，需要长期施予。已知如果长期地连续施予相同的药剂，则耐药菌的产生风险会明显地上升。

如上所述，脂质合成抑制剂即使施予药剂也不会速效地表达抗菌活性。因而不适合于在抗菌活性表达上要求速效性的施予方法，例如利用医疗用洗发水预防或治疗皮肤疾病。因此，要求开发安全性高、具有与现有的治疗剂不同的作用机制、并且速效地发挥抗菌活性的化合物、治疗剂。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平1-131163号公报

发明内容

本申请的发明人发现5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈可作为新型非人动物用抗菌剂、人用抗真菌剂使用。

然而，本申请的发明人进一步研究，结果还判明了5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈在常温下有时容易吸湿。通常，对吸湿性物质的处理要细心关注以免吸湿。吸湿性物质为医药品原药时，在处理中例如保存容器、保存场所、有效期限、试验用标准品的小分包装等受到限制。因此，要求对温度、湿度变化的稳定性高。

进而，本申请的发明人研究结果还判明了，5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的带电性强，有时强烈附着于配管等生产设备、实验装置、包装材料等。因此，由于附着在配管等生产设备、包装材料上等而导致收率降低，混合均匀性变差，成为称量误差的原因等，在工艺、品质等方面存在担忧。

本申请的发明人此次进一步研究，结果发现，通过将5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈制成水合物晶体，从而在针对以马拉色菌属菌为代表的真菌速效地发挥优异的抗菌活性的方面能够有利地利用。另外，本申请的发明人发现，上述水合物晶体在针对以葡萄球菌属菌为代表的细菌也速效地发挥优异的抗菌活性的方面也能够有利地利用。另外，本申请的发明人发现，上述水合物晶体不易受到环境中的温度、湿度的影响，稳定性优异。此外，本申请的发明人还发现，通过将5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈制成水合物晶体，能够降低摩擦带电性，能够缓和由附着于设备等等的带电引起的、工艺、品质等方面的担忧。本公开文本基于上述见解而成。

因此，根据本公开文本的一个实施方式，提供5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体。

本公开文本的5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体(以下，也简称为“水合物晶体”)与无水物晶体同样地能够发挥对马拉色菌属菌等真菌、葡萄球菌属菌等细菌进行杀菌或抑制增殖的效果。即，本公开文本的水合物晶体能够期待用于预防、改善或治疗起源于真菌、细菌的皮肤疾病、例如花斑癣、毛囊炎、脂溢性皮炎、特应性皮炎、寻常性银屑病等。另外，本公开文本的水合物晶体在高湿度环境或干燥环境下也稳定，水分量基本不变化，因此在稳定地制造制剂方面是有利的。此外，本公开文本的水合物晶体由于摩擦带电性低，带电量的衰减速度也快，因此能够缓和由附着于设备等的带电引起的、工艺、品质等方面的担忧，因此在高效地制造制剂方面能够有利地利用。

附图说明

[图1]示出制造例1中得到的5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体的粉末X线衍射(XRD)图案。

[图2]示出制造例2中得到的5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体的粉末X射线衍射图案。

[图3]示出作为原料使用的5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的无水物晶体的粉末X射线衍射图案。

[图4]为添加了水的无水合物晶体、与无水合物晶体、水合物晶体(制造例1、制造例2)有关的XRD图谱的比较图。

[图5A]为无水合物晶体的热重差示热分析(TG-DTA)图谱。

[图5B]为添加了水的无水合物晶体的热重差示热分析(TG-DTA)图谱。

[图5C]为水合物晶体(制造例1)的TG-DTA图谱。

[图5D]为水合物晶体(制造例2)的TG-DTA图谱。

[图6A]为基于扫描电子显微镜的无水合物晶体、水合物晶体(制造例1)及水合物晶体(制造例2)的倍率500倍的照片。

[图6B]为基于扫描电子显微镜的无水合物晶体、水合物晶体(制造例1)及水合物晶体(制造例2)的倍率100倍的照片。

[图7A]为无水合物晶体的红外吸收光谱。

[图7B]为水合物晶体(制造例2)的红外吸收光谱。

[图8]为无水合物晶体-1、无水合物晶体-2、水合物晶体(制造例1)、水合物晶体(制造例2)的拉曼光谱的比较图。

具体实施方式

以下，对实施本发明的优选方式的例子进行说明。但是，下述的实施方式为用于说明本发明的示例，本发明不受下述的实施方式任何限定。

本公开文本的水合物晶体实质上由5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体构成。本公开文本的水合物晶体优选为一水合物晶体。5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈为专利文献1的第1表的中间体No.89所记载的化合物。

本公开文本中，“水合物晶体”也包括水合物晶体的多晶型。另外，“实质上由水合物晶体构成”是指水合物晶体中的除了水合物晶体以外的残留物的含量小于20％(质量基准)。水合物晶体中的上述残留物的含量优选为10％(质量基准)以下，更优选为5％(质量基准)以下，进一步优选为1％(质量基准)以下，更进一步优选为0.5％(质量基准)以下。

作为残留物，可举出制造原料、水合物晶体以外的多晶型、附着水或它们的混合物等。作为残留物的一个具体例，可举出5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的无水物晶体。

(粉末X射线衍射图案)

根据本公开文本的优选方式，水合物晶体能够通过粉末X射线衍射图案来表征。根据一个方式，在水合物晶体的粉末X射线衍射图案中，至少一个峰存在于衍射角度(2θ±0.2°)＝9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、24.2、25.3、25.7、26.7、27.7、28.5、28.8、29.5、30.3、32.3、33.1、34.1、35.7、36.4、37.4、39.5、40.1、43.3、44.3中的任一衍射角度处。另外，根据优选方式，在水合物晶体的粉末X射线衍射图案中，至少一个峰存在于衍射角度(2θ±0.2°)＝9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、25.3、25.7、26.7、29.5中的任一衍射角度处。另外，上述至少一个峰优选为5个以上，更优选为7个以上，更进一步优选为9个以上。另外，根据本公开文本的一实施方式，存在于上述的任一衍射角度处的峰是从强度高的上位峰开始选择、即峰强度由高到低的顺序选择的。

根据本公开文本的另一方式，就水合物晶体的粉末X射线衍射图案而言，强度高的前5个峰分别存在于衍射角度(2θ±0.2°)＝9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、24.2、25.3、25.7、26.7、27.7、28.5、28.8、29.5、30.3、32.3、33.1、34.1、35.7、36.4、37.4、39.5、40.1、43.3、44.3中的任一衍射角度处。另外，根据本公开文本的另一优选方式，就水合物晶体的粉末X射线衍射图案而言，强度高的前5个峰分别存在于衍射角度(2θ±0.2°)＝9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、25.3、25.7、26.7、29.5中的任一衍射角度处。优选强度高的前7个峰分别存在于上述的任一衍射角度处。

根据本公开文本的又一方式，水合物晶体可通过与图1实质上相同的粉末X射线衍射图案来表征。此处，“实质上相同”是指排除测定误差的范围，峰位置相同。

根据本公开文本的又一方式，水合物晶体可通过与图2实质上相同的粉末X射线衍射图案来表征。此处，“实质上相同”是指排除测定误差的范围，峰位置相同。

此处，就无水物晶体的粉末X射线衍射图案而言，在衍射角度(2θ±0.2°)＝10.0、10.7、11.3、15.6、16.1、20.1、21.2、22.3、23.8、26.8、27.3、28.6、29.1、30.6的位置存在主要的峰。就无水物晶体的粉末X射线衍射图案而言，强度高的前5个峰大多分别存在于衍射角度(2θ±0.2°)＝10.7、11.3、16.1、22.3、23.8、26.8的任一衍射角度处。因此，通过对强度高的前5个峰进行比较，能够明确地区分无水物晶体与水合物晶体。

粉末X射线衍射图案可以使用Cu-Kα射线源来测定，更具体而言，可以通过在管电压为40kV、管电流为40mA的条件下以Cu-Kα为射线源进行测定而得到。需要说明的是，粉末X射线衍射图案可以使用已知的装置来测定。但是，测定值根据装置而不同的情况下，可以设为使用高速X射线衍射装置(例如，D8 DISCOVER，Bruker Axs株式会社制)进行测定而得的值。粉末X射线衍射图案的测定的进一步详细内容遵照后述的试验例。

(红外吸收光谱)

根据本公开文本的一方式，水合物晶体在利用溴化钾压片法(参见日本药典第十八次修订版2.25“红外吸收光谱测定法”)测定的红外线吸收光谱中，在选自835±2、860±2、1014±2、1053±2、1157±2、1315±2、1427±2、1454±2、1500±2、1581±2、1654±2及2245±2中的位置(cm^-1)具有至少一个峰。上述至少一个峰优选为5个以上，更优选为7个以上，更进一步优选为9个以上。另外，根据本公开文本的一实施方式，存在于上述的任一衍射角度处的峰是按峰强度从高到低的顺序选择的。红外线吸收光谱的测定方法的详细内容遵照后述的试验例。

(拉曼光谱)

根据本公开文本的一方式，水合物晶体在拉曼光谱(参见日本药典第十八次修订版2.26“拉曼光谱测定法”)中，在选自1021±2、1152±2、1240±2、1281±2、1379±2、1409±2、1424±2、1451±2、1507±2、1573±2、1607±2及2241±2中的位置(cm^-1)具有至少一个峰。上述至少一个峰优选为5个以上，更优选为7个以上，更进一步优选为9个以上。另外，根据本公开文本的一实施方式，上述的任一衍射角度处存在的峰是按照峰强度从高到低的顺序选择的。拉曼光谱的测定方法的详细内容遵照后述的试验例。

(卡尔费歇尔水分量)

根据本公开文本的优选方式，水合物晶体可通过卡尔费歇尔水分量来表征。根据一个方式，水合物晶体的利用卡尔-费歇尔法(容量滴定法)测定的水分量为6.5～6.8质量％，优选为6.6～6.7质量％。此处，5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的分子量为252.10，水的分子量为18.00。因此，可根据水分量(例.6.6质量％)≒100×(18.00×n)/(252.10+18.00×n)的计算式算出n≒1。因此，考虑到后述的试验例的结果时，本公开文本的水合物晶体根据水分量的值可认为是一水合物。

本公开文本中的卡尔费歇尔水分量可遵照日本药典第十八次修订版的“2.48水分测定法(卡尔-费歇尔法)”的容量滴定法中记载的方法，在25℃的气氛下测定。卡尔费歇尔水分量的测定的进一步详细内容遵照后述的试验例。

(第一方式的水合物晶体及其制造方法)

本公开文本的水合物晶体的制备方法没有特别限定。作为制备方法的一例，可举出将无水物晶体放入调节了温度及湿度的稳定性试验器中，静置至重量不再变化而达到饱和状态为止的方法。以下，由本方法制造的水合物晶体也称为第一方式的水合物晶体，也对应于后述的实施例中的制造例1。在该方法中，稳定性试验器的温度及相对湿度的条件例如可举出40～80℃、60～100％的条件，优选为50～70℃、70～90％的条件。静置时间例如可举出10～30天，优选为15～25天。

(第二方式的水合物晶体及其制造方法)

作为制备方法的其它例，可举出下述方法：将无水物晶体溶解于醇，向该溶液加入水，进行搅拌、减压过滤后，干燥。以下，由本方法制造的水合物晶体也称为第二方式的水合物晶体，也对应于后述的实施例中的制造例2。减压过滤后，也可以对滤出的晶体用醇水溶液进行冲淋清洗。在该方法中，醇没有限定，例如，可举出甲醇、乙醇、异丙醇等低级醇。水可以一次添加全部量，也可以通过经1小时左右的时间的滴加而添加。搅拌时间例如可举出6～24小时，优选举出10～20小时。作为干燥方法，例如，可举出10～60℃、相对湿度1～60％、6～48小时的通气干燥方法，优选举出20～40℃、相对湿度20～60％、10～20小时的通气干燥方法。

需要说明的是，无水物晶体可由日本特开平1-131163号公报、日本特开平8-283243号公报及日本特开平8-225539号公报中记载的方法制备、或者遵照它们制备。

(热分析)

根据一方式，本公开文本的水合物晶体在热重差示热分析(TG-DTA)或差示扫描量热分析(DSC)中，在选自93～100℃及135～145℃中的范围内显示至少一个、优选2个吸热峰。根据后述的实施例的结果认为，上述吸热峰是水合水从水合物晶体脱离而引起的。热重差示热分析(TG-DTA)或差示扫描量热分析(DSC)的测定方法可按照日本药典第十八次修订版的记载实施，进一步的详细内容遵照后述的试验例。

另外，如后述的试验例所示，由本申请的发明人的研究表明，上述热分析中的吸热峰的图案根据水合物晶体是第一方式还是第二方式而有所不同。虽不拘泥于理论，但认为由于两者的制造方法的不同而产生晶体面的生长度、取向性的差异等，对吸热峰的图案造成影响。

上述水合物晶体为第一方式的水合物晶体的情况下，在热重差示热分析(TG-DTA)或差示扫描量热分析(DSC)中，第一方式的水合物晶体在上述温度范围内显示一个吸热峰。第一方式的水合物晶体的上述一个吸热峰优选显示于93～100℃、更优选显示于94～97℃的范围内。

上述水合物晶体为第二方式的水合物晶体的情况下，在热重差示热分析(TG-DTA)或差示扫描量热分析(DSC)中，第二方式的水合物晶体在上述温度范围内显示两个吸热峰。第二方式的水合物晶体的上述两个吸热峰分别优选显示在95～99℃和137～142℃的范围内，更优选显示在96～98℃和138～141℃的范围内。

需要说明的是，根据一方式，水合物晶体为第一方式及第二方式中的任意的情况下，在热重差示热分析(TG-DTA)或差示扫描量热分析(DSC)中，均在165～170℃的范围内显示一个吸热峰。本峰在无水合物晶体中也产生，因此认为是由5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈晶体的溶解引起。

如后述的实施例所示，本公开文本的水合物晶体与无水合物晶体相比，带电性显著较低，能够减少带电量，保持在低水平。该水合物晶体与无水合物晶体相比，附着性较低，容易操作，能够特别有利地在制剂的工业生产上利用。

在25℃、50％RH的环境下将水合物晶体保持20分钟的情况下，水合物晶体的带电压例如为-4.5～-1V，优选为-4.5～-1V，更优选为-4～-1.5V，更进一步优选为-3.5～-1.5V。

另外，在25℃、50％RH的环境下将水合物晶体保持20分钟的情况下，水合物晶体的带电量的降低率例如为5～40％，优选为5～30％，更优选为5～20％，更进一步优选为5～15％。

需要说明的是，上述水合物晶体的带电压及带电量的降低率的测定方法可遵照后述的试验例5：摩擦带电性试验的记载而实施。

另外，水合物晶体的形态可以为柱状、块状或大致长方体状等，优选为柱状。根据本公开文本的一实施方式，水合物晶体为第二方式的水合物晶体的情况下，水合物晶体的形态为柱状。虽不拘泥于理论，但在第二方式的制造工序中，体系为较均匀的状态，因此认为稳定地生成晶体，成为规则的柱状结构。

本公开文本的水合物晶体可以直接作为药剂或制剂使用。另外，本公开文本的水合物晶体也可以根据需要组合载体、有效成分、药理成分、化妆成分等其它药理学上可容许的追加成分而成为组合物，并利用常规方法制成制剂而使用。因此，根据本公开文本的一个方式，提供包含水合物晶体、和所期望的药理学上可容许的追加成分而成的组合物或制剂(以下，也简称为“制剂”)。

根据一个方式，本公开文本的制剂能够作为抗菌剂使用。如上所述，本公开文本的抗菌剂包含水合物晶体即可，也可以根据需要还包含载体、有效成分、药理成分、化妆成分等其它追加成分。

根据一个方式，本公开文本的制剂中，水合物晶体的含量为0.00001～30质量％，优选为0.0001～10质量％，更优选为0.001～0.05质量％。

根据一个方式，制剂中使用的载体优选为药学上或化妆上可容许的载体，例如，可举出赋形剂、皮膜剂、粘结剂、增量剂、崩解剂、润滑剂、稀释剂、渗透压调节剂、pH调节剂、分散剂、乳化剂、防腐剂、稳定剂、抗氧化剂、着色剂、紫外线吸收剂、保湿剂、增稠剂、活性增强剂、香料、矫味剂、矫臭剂等药学上或化妆上通常可使用的载体。

另外，作为其它追加成分，例如，可举出保湿剂、抗炎症剂、杀菌剂、抗菌剂、紫外线保护剂、细胞活化剂、美妆成分等。

含有本公开文本的水合物晶体的制剂能够作为医药品、准医药品、动物药或化妆品提供。其中，优选作为医药品、动物药使用。

制剂可经口施予，也可非经口施予。作为用于经口施予的剂型，例如，可举出粉剂、粒剂、颗粒可湿性粉剂、可湿性粉剂、片剂、包衣片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、胶囊剂(包括以水溶性膜包装的形态)这样的固态施予形态、以及酏剂、糖浆剂、水性悬浮剂、油性悬浮剂、微乳液制剂、悬乳液制剂、水溶剂、乳剂、液剂、糊剂这样的液体施予形态。作为用于非经口施予的剂型，可举出注射、输液、局部施予、外用剂、经皮、经粘膜、经鼻、经肠、吸入、栓剂、大丸剂、贴剂等。本公开文本的水合物晶体为固体，因此必然会经历固体过程，本公开文本的水合物晶体的摩擦带电性低，带电量的衰减速度也快，因此对于所有制剂剂型，均能够缓和由混合均匀性的变差、附着于设备等的带电引起的工艺、品质等方面的担忧。这些之中，制剂的剂型为在其工艺中常以固体的形式处理的粉剂、片剂时，可获得显著的效果，是优选的。

根据一个方式，作为本公开文本的制剂的形态，例如，可举出霜、乳液、洗剂、悬浮液、凝胶、粉末、面膜、片材、贴剂、棒状物、饼状物等化妆品中可使用的任意的形态。作为制剂的更具体的形态，从皮炎等的治疗的观点考虑，可举出洗剂、洗发水、乳霜、乳液、软膏、贴剂等外用药、以及洗发水、沐浴露等头部或身体用的清洗剂、护发膏、护发素、护发乳、发膜、滋养液、发霜、及头部或身体用的洗剂、乳霜、乳液等头部或身体用的化妆品等。

根据一个方式，本公开文本的制剂优选为外用散剂、搽剂、洗剂、软膏剂、霜剂、凝胶剂、气溶胶喷雾剂、泵喷雾剂、贴剂(tapes)、巴布剂这样的皮肤外用剂。

本公开文本的水合物晶体能够即时地发挥出对真菌的优异的抗菌活性。因此，根据一个方式，制剂用于改善由真菌引起的症状或疾病。此处，本公开文本中的“改善”不仅包括治疗已确立的病情，也包括防止或延迟将来可能确立的病情的预防。另外，本公开文本中的改善也包括：使皮肤疾病的症状或状态好转；防止或延迟皮肤疾病的症状或状态的恶化；逆转、防止或延迟皮肤疾病的症状或状态的进展。

作为本公开文本中的真菌，例如，可举出念珠菌属菌、马拉色菌属菌、发癣菌属菌、小孢子癣菌属菌、节皮菌属菌、曲霉属菌、或隐球菌属菌等。

本公开文本中，念珠菌属菌(Candida)是指属于酵母科(Saccharomycetaceae)的真菌，例如，可举出Candida albicans、Candida glabrata等。

本公开文本中，马拉色菌属菌(Malassezia)是指属于马拉色菌科(Malasseziaceae)的真菌，例如，可举出Malassezia furfur、Malassezia pachydermatis、Malassezia globosa、Malassezia obtusa、Malassezia restricta、Malassezia sympodialis、Malassezia slooffiae、Malassezia dermatis、Malassezia yamatoensis、Malassezia japonica、Malassezia nana等。

本公开文本中，作为发癣菌属菌(Trichophyton)，为属于裸囊癣菌科(Arthrodermataceae)的真菌，例如，可举出Trichophyton rubrum、Trichophyton interdigitale等。

本公开文本中，小孢子癣菌属菌(Microsporum)是指属于裸囊癣菌科(Arthrodermataceae)的真菌，例如，可举出Microsporum canis等。

本公开文本中，作为节皮菌属菌(Arthroderma)，为属于裸囊癣菌科(Arthrodermataceae)的真菌，例如，可举出Arthroderma vanbreuseghemii等。

本公开文本中，作为曲霉属菌(Aspergillus)，为属于发菌科(Trichocomaceae)的真菌，例如，可举出Aspergillus fumigatus、Aspergillus niger等。

本公开文本中，作为隐球菌属菌(Cryptococcus)，为属于银耳科(Tremellaceae)的真菌，例如，可举出Cryptococcus neoformans等。

根据一个优选方式，由真菌引起的症状或疾病为皮肤疾病。作为皮肤疾病，例如，可举出花斑癣、毛囊炎、脂溢性皮炎、寻常性银屑病、过敏性皮炎、特应性皮炎、皮肤癣菌病、念珠菌病、皮肤马拉色菌病、曲霉病、隐球菌病、或外耳炎等，更具体而言，可举出花斑癣、毛囊炎、脂溢性皮炎、寻常性银屑病、过敏性皮炎、狗的马拉色菌皮炎、特应性皮炎、马拉色菌性外耳炎、猫的马拉色菌皮炎、马拉色菌性外耳炎、马的马拉色菌皮炎、皮肤癣菌病、念珠菌病、曲霉病、或隐球菌病等。

本公开文本的水合物晶体对于细菌也能够即时地发挥优异的抗菌活性。因此，根据一个方式，制剂用于改善由细菌引起的症状或疾病。

作为本公开文本中的细菌，例如，可举出葡萄球菌属菌、链球菌属菌、巴斯德菌属菌、埃希菌属菌、假单胞菌属菌、变形杆菌属菌、克雷伯菌属菌等。

本公开文本中，葡萄球菌属菌(Staphylococcus)是指属于葡萄球菌科(Staphylococcaceae)的细菌，例如，可举出Staphylococcus pseudintermedius、Staphylococcus intermedius、Staphylococcus schleiferi、Staphylococcus delfini、Staphylococcus epidermidis、Staphylococcus xylosus、Staphylococcus aureus等。

本公开文本中，链球菌属菌(Streptococcus)是指属于链球菌科(Streptococcaceae)的细菌，例如，可举出Streptococcus canis、Streptococcus pyrogenes、Streptococcus suis、Streptococcus disgalactiae等。

本公开文本中，巴斯德菌属菌(Pasteurella)是指属于巴斯德菌科(Pasteurellaceae)的细菌，例如，可举出Pasteurella multocida等。

本公开文本中，埃希菌属菌(Escherichia)是指属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的细菌，例如，可举出Escherichia coli等。

本公开文本中，假单胞菌属菌(Pseudomonadaceae)是指属于假单胞杆菌科(Pseudomonas)的细菌，例如，可举出Pseudomonas aeruginosa等。

本公开文本中，变形杆菌属菌(Proteus)是指属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的细菌，例如，可举出Proteus mirabilis等。

本公开文本中，克雷伯菌属菌(Klebsiella)是指属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的细菌，例如，可举出Klebsiella pneumoniae等。

根据一个优选方式，由细菌引起的症状或疾病为皮肤疾病。作为皮肤疾病，例如，可举出脓皮病、或外耳炎。

若考虑到真菌、细菌的杀菌的必要性等，本公开文本的水合物晶体的施予对象优选为动物。作为更具体的施予对象，可举出需要抑制真菌、细菌的增殖、改善起源于真菌、细菌的皮肤疾病的动物。更具体而言，可举出人、及狗、猫、马等非人动物。本公开文本的水合物晶体的施予部位没有特别限定，可以是作为对象的真菌、细菌所存在的皮肤等组织、器官、细胞。

如上所述，本公开文本的水合物晶体能够有效地应用于由真菌或细菌引起的症状或疾病的改善。因此，根据另一方式，提供由真菌或细菌引起的症状或疾病的改善方法，其包括将有效量的水合物晶体施予至需要其的对象。

另外，根据本公开文本的更具体的另一方式，水合物晶体能够通过以用于产生抗真菌活性的有效量施予至需要其的对象，从而实施真菌的增殖抑制或杀菌。因此，根据本公开文本的另一方式，提供对象中的真菌的增殖抑制或杀菌方法，其包括将有效量的水合物晶体施予至需要其的对象。

另外，根据本公开文本的更具体的另一方式，水合物晶体能够通过以用于产生抗细菌活性的有效量施予至需要其的对象从而实施细菌的增殖抑制或杀菌。因此，根据本公开文本的另一方式，提供对象中的细菌的增殖抑制或杀菌方法，其包括将有效量的水合物晶体施予至需要其的对象。

本公开文本的方法可以为治疗性方法，也可以为非治疗性方法。作为非治疗性方法，具体而言，可举出基于美容目的的用途、基于增进健康的目的的非治疗性用途。因此，根据一个优选方式，本公开文本的方法不包括医疗行为、即通过治疗而进行的对个体的处置行为。

本公开文本的水合物晶体的有效量根据施予对象的动物种类、性别、年龄、体重、状态、其它因素而变动，是使作为对象的菌的增殖成为对照的50％以下、优选40％以下、更优选30％以下、进一步优选20％以下、进一步更优选10％以下的量。

上述施予中的、本公开文本的水合物晶体的用量、施予途径、施予间隔根据施予对象的动物种类、性别、年龄、体重、状态、其它因素而变动，因此不能一概而论。例如，在局部施予至人的患处的情况下，针对每1位体重60kg的成人，本公开文本的水合物晶体的施予量以每一天的用量计，通常为0.005～350mg/天，以每一周的优选用量计，为0.01～175mg/周。另外，在局部施予至狗的患处的情况下，针对每一只体重10kg的成犬，本公开文本的水合物晶体的施予量以每一天的用量计通常为0.005～350mg/天，以每一周的优选用量计，为0.01～175mg/周。此外，在局部施予至猫的患处的情况下，针对每一只体重4kg的成猫，本公开文本的水合物晶体的施予量以每一天的用量计，通常为0.002～140mg/天，以每一周的优选用量计，为0.004～70mg/周。

另外，根据本公开文本的另一方式，提供水合物晶体在医药品、准医药品、动物药或化妆品的制造中的用途。另外，根据本公开文本的另一方式，提供水合物晶体在抗菌剂的制造中的用途。

另外，根据本公开文本的另一方式，提供水合物晶体在抗真菌剂的制造中的用途。另外，根据本公开文本的另一优选方式，提供水合物晶体在用于改善由真菌引起的症状或疾病的制剂的制造中的用途。另外，根据本公开文本的另一优选方式，上述症状或疾病为皮肤疾病。另外，根据本公开文本的另一优选方式，上述症状或疾病为花斑癣、毛囊炎、脂溢性皮炎、寻常性银屑病、过敏性皮炎、特应性皮炎、皮肤癣菌病、念珠菌病、皮肤马拉色菌病、曲霉病、隐球菌病、或外耳炎。另外，根据本公开文本的另一优选方式，上述用途为化妆用途或非治疗用途。

另外，根据本公开文本的另一方式，提供水合物晶体在抗细菌剂的制造中的用途。另外，根据本公开文本的另一优选方式，提供水合物晶体在改善由细菌引起的症状或疾病的制剂的制造中的用途。另外，根据本公开文本的另一优选方式，上述症状或疾病为皮肤疾病。另外，根据本公开文本的另一优选方式，上述症状或疾病为脓皮病或外耳炎。另外，根据本公开文本的另一优选方式，上述用途为化妆用途或非治疗用途。

另外，根据本公开文本的另一方式，提供作为抗真菌剂使用的水合物晶体。另外，根据本公开文本的另一优选方式，提供用于改善由真菌引起的症状或疾病的水合物晶体。另外，根据本公开文本的另一优选方式，上述症状或疾病为皮肤疾病。另外，根据本公开文本的另一优选方式，上述症状或疾病为花斑癣、毛囊炎、脂溢性皮炎、寻常性银屑病、过敏性皮炎、过敏性皮炎、特应性皮炎、皮肤癣菌病、念珠菌病、皮肤马拉色菌病、曲霉病、隐球菌病、或外耳炎。另外，根据本公开文本的另一优选方式，上述抗真菌剂为医药品或动物药。

另外，根据本公开文本的另一方式，提供作为抗细菌剂使用的水合物晶体。另外，根据本公开文本的另一优选方式，提供用于改善由细菌引起的症状或疾病的水合物晶体。另外，根据本公开文本的另一优选方式，上述症状或疾病为皮肤疾病。另外，根据本公开文本的另一优选方式，上述症状或疾病为脓皮病或外耳炎。另外，根据本公开文本的另一优选方式，上述抗细菌剂为医药品或动物药。

另外，根据本公开文本的一个方式，提供以下的方案。

[1]5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体。

[2]如[1]所述的水合物晶体，其为一水合物。

[3]如[1]或[2]所述的水合物晶体，其在管电压40kV、管电流40mA的条件下使用Cu-Kα作为射线源的粉末X射线衍射图案中，在衍射角度(2θ±0.2°)为9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、24.2、25.3、25.7、26.7、27.7、28.5、28.8、29.5、30.3、32.3、33.1、34.1、35.7、36.4、37.4、39.5、40.1、43.3、或44.3的位置具有强度高的至少前5个峰。

[4]如[3]所述的水合物晶体，其在管电压40kV、管电流40mA的条件下使用Cu-Kα作为射线源的粉末X射线衍射图案中，在衍射角度(2θ±0.2°)为9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、24.2、25.3、25.7、26.7、27.7、28.5、28.8、29.5、30.3、32.3、33.1、34.1、35.7、36.4、37.4、39.5、40.1、43.3、或44.3的位置具有强度高的至少前7个峰。

[5]如[4]所述的水合物晶体，其在管电压40kV、管电流40mA的条件下使用Cu-Kα作为射线源的粉末X射线衍射图案中，在衍射角度(2θ±0.2°)为9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、24.2、25.3、25.7、26.7、27.7、28.5、28.8、29.5、30.3、32.3、33.1、34.1、35.7、36.4、37.4、39.5、40.1、43.3、或44.3的位置具有强度高的至少前9个峰。

[6]如[1]或[2]所述的水合物晶体，其在管电压40kV、管电流40mA的条件下使用Cu-Kα作为射线源的粉末X射线衍射图案中，在衍射角度(2θ±0.2°)为9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、25.3、25.7、26.7、或29.5的位置具有强度高的至少前5个峰。

[7]如[6]所述的水合物晶体，其在管电压40kV、管电流40mA的条件下使用Cu-Kα作为射线源的粉末X射线衍射图案中，在衍射角度(2θ±0.2°)为9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、25.3、25.7、26.7、或29.5的位置具有强度高的至少前7个峰。

[8]如[1]～[7]中任一项所述的水合物晶体，其利用卡尔-费歇尔法(容量滴定法)测定的水分量为6.5～6.8质量％。

[9]抗菌剂，其包含[1]～[8]中任一项所述的水合物晶体而成。

[10]如[9]所述的抗菌剂，其中，上述菌为真菌。

[11]如[10]所述的抗菌剂，其中，上述真菌为选自念珠菌属菌、马拉色菌属菌、发癣菌属菌、小孢子癣菌属菌、节皮菌属菌、曲霉属菌、及隐球菌属菌中的至少一者。

[12]如[11]所述的抗菌剂，其中，上述真菌为选自念珠菌属菌、发癣菌属菌、小孢子癣菌属菌、节皮菌属菌、曲霉属菌、及隐球菌属菌中的至少一者。

[13]如[11]所述的抗菌剂，其中，上述真菌为选自马拉色菌属菌、小孢子癣菌属菌、及节皮菌属菌中的至少一者。

[14]如[10]～[13]中任一项所述的抗菌剂，其用于改善由上述真菌引起的症状或疾病。

[15]如[14]所述的抗菌剂，其中，上述症状或疾病为皮肤疾病。

[16]如[14]或[15]所述的抗菌剂，其中，上述症状或疾病为花斑癣、毛囊炎、脂溢性皮炎、寻常性银屑病、过敏性皮炎、特应性皮炎、皮肤癣菌病、念珠菌病、皮肤马拉色菌病、曲霉病、隐球菌病、或外耳炎。

[17]如[14]～[16]中任一项所述的抗菌剂，其中，上述症状或疾病为皮肤马拉色菌病、皮肤癣菌病、念珠菌病、曲霉病、或隐球菌病。

[18]如[9]所述的抗菌剂，其中，上述菌为细菌。

[19]如[18]所述的抗菌剂，其中，上述细菌为选自葡萄球菌属菌、链球菌属菌、巴斯德菌属菌、埃希菌属菌、假单胞菌属菌、变形杆菌属菌、及克雷伯菌属菌中的至少一者。

[20]如[18]或[19]所述的抗菌剂，其用于改善由上述细菌引起的症状或疾病。

[21]如[20]所述的抗菌剂，其中，上述症状或疾病为皮肤疾病。

[22]如[20]或[21]所述的抗菌剂，其中，上述症状或疾病为脓皮病或外耳炎。

另外，根据本公开文本的另一方式，提供以下的方案。

[23]5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体。

[24]如权利要求1所述的水合物晶体，其为一水合物晶体。

[25]如[23]所述的水合物晶体，其在使用Cu-Kα射线源所测定的粉末X射线衍射图案中，在衍射角度(2θ±0.2°)为9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、24.2、25.3、25.7、26.7、27.7、28.5、28.8、29.5、30.3、32.3、33.1、34.1、35.7、36.4、37.4、39.5、40.1、43.3、或44.3的位置具有至少一个峰。

[26]如[23]所述的水合物晶体，其在使用Cu-Kα射线源所测定的粉末X射线衍射图案中，在衍射角度(2θ±0.2°)为9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、25.3、25.7、26.7、或29.5的位置具有至少一个峰。

[27]如[25]或[26]所述的水合物晶体，其中，上述至少一个峰为强度高的至少前5个峰。

[28]如[23]所述的水合物晶体，其在热重差示热分析(TG-DTA)或差示扫描量热分析(DSC)中，在选自93～100℃及135～145℃中的范围具有至少一个吸热峰。

[29]如[23]所述的水合物晶体，其在利用溴化钾压片法测定的红外线吸收光谱中，在选自835±2、860±2、1014±2、1053±2、1157±2、1315±2、1427±2、1454±2、1500±2、1581±2、1654±2及2245±2中的位置(cm^-1)具有至少一个峰。

[30]如[23]所述的水合物晶体，其在拉曼光谱中，在选自1021±2、1152±2、1240±2、1281±2、1379±2、1409±2、1424±2、1451±2、1507±2、1573±2、1607±2及2241±2中的位置(cm^-1)具有至少一个峰。

[31]如[23]所述的水合物晶体，其利用卡尔-费歇尔法(容量滴定法)测定的水分量为6.5～6.8质量％。

[32]制剂，其包含：[23]所述的水合物晶体；和药理学上可容许的追加成分。

[33]如[32]所述的制剂，其为医药品、准医药品、动物药或化妆品。

[34]如[32]所述的制剂，其为抗菌剂。

[35]如[32]所述的制剂，其为抗真菌剂或抗细菌剂。

[36]如[32]所述的制剂，其用于改善由真菌或细菌引起的症状或疾病。

[37]如[36]所述的制剂，其中，上述症状或疾病为皮肤疾病。

[38]如[34]或[35]所述的制剂，其用于选自念珠菌属菌、马拉色菌属菌、发癣菌属菌、小孢子癣菌属菌、节皮菌属菌、曲霉属菌及隐球菌属菌中的至少一种真菌。

[39]如[34]或[35]所述的制剂，其用于选自葡萄球菌属菌、链球菌属菌、巴斯德菌属菌、埃希菌属菌、假单胞菌属菌、变形杆菌属菌及克雷伯菌属菌中的至少一种细菌。

[40]5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体在医药品、准医药品、动物药或化妆品的制造中的用途。

[41]5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体在抗菌剂的制造中的用途。

[42]改善由真菌或细菌引起的症状或疾病的方法，其包括将有效量的5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体施予至需要其的对象。

实施例

接着，记载本公开文本涉及的试验例，但这些不限定本公开文本。

制造例1：5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体的合成

除了使用与制造目标物对应的原料化合物以外，遵照与日本特开平8-225539号的记载同样的方法，制造无水物晶体(CAS号：120118-82-3，MS：252.1[M+H]⁺)。

将得到的无水物晶体250g放入纸制袋中，在设定为60℃、相对湿度80％的稳定性试验器内，静置至重量不再变化而达到饱和状态为止。在静置20天后重量不再变化，因此回收晶体，得到267g的水合物晶体。

制造例2：5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体的合成

与制造例1同样地制造无水物晶体。将得到的无水物晶体100g放入500mL四颈瓶中，溶解于甲醇238g中。经1小时滴加300g的H₂O后，搅拌15小时。于20～25℃进行减压过滤，利用反应器的清洗液(甲醇：H₂O＝40g：50g)进行冲淋清洗，将晶体回收。将回收的晶体在25℃、相对湿度40％的条件下通气干燥15小时，得到98g的水合物晶体。

试验例1

1-1：粉末X线衍射(XRD)

在以下的条件下，测定制造例1及2中得到的水合物晶体、和制造例1中作为原料使用的无水物晶体的粉末X射线衍射图案。测定中使用高速X射线衍射装置(D8 DISCOVER，Bruker Axs株式会社制)。

X射线源：Cu-Kα

管电压：40kV

管电流：40mA

测定温度：室温

2θ：5°～60°

步进宽度：0.02°

扫描速度：0.2s/点

将制造例1及2中得到的水合物晶体的粉末X射线衍射图案分别示于图1及图2。

图1的粉末X射线衍射图案中，在2θ＝9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、24.2、25.3、25.7、26.7、27.7、28.5、28.8、29.5、30.3、32.3、33.1、34.1、35.7、36.4、37.4、39.5、40.1、43.3、44.3的位置观察到主要的峰。高强度的5个峰按从强到弱的顺序为2θ＝25.7、9.8、12.8、26.7、25.3。另外，高强度的7个峰按从强到弱的顺序为2θ＝25.7、9.8、12.8、26.7、25.3、19.5、16.0。进一步地，高强度的9个峰按从强到弱的顺序为2θ＝25.7、9.8、12.8、26.7、25.3、19.5、16.0、14.6、27.7。

图2的粉末X射线衍射图案中，也与制造例1同样地，在2θ＝9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、24.2、25.3、25.7、26.7、27.7、28.5、28.8、29.5、30.3、32.3、33.1、34.1、35.7、36.4、37.4、39.5、40.1、43.3、44.3的位置观察到主要的峰。其中，高强度的5个峰按从强到弱的顺序为2θ＝9.8、12.8、16.0、19.5、25.7。另外，高强度的7个峰按从强到弱的顺序为2θ＝9.8、12.8、16.0、19.5、25.7、26.7、14.6。进一步地，高强度的9个峰按从强到弱的顺序为2θ＝9.8、12.8、16.0、19.5、25.7、26.7、14.6、29.5、25.3。

制造例1中作为原料使用的无水物晶体的粉末X射线衍射图示于图3。图3的粉末X射线衍射图案中，在2θ＝10.0、10.7、11.3、15.6、16.1、20.1、21.2、22.3、23.8、26.8、27.3、28.6、29.1、30.6的位置观察到主要的峰，确认了具有与图1及图2的水合物晶体明显不同的晶体结构。高强度的5个峰按从强到弱的顺序为2θ＝11.3、10.7、26.8、23.8、22.3。另外，高强度的7个峰按从强到弱的顺序为2θ＝11.3、10.7、26.8、23.8、22.3、27.3、16.1。进一步地，高强度的9个峰按从强到弱的顺序为2θ＝11.3、10.7、26.8、23.8、22.3、27.3、16.1、15.6、30.6。

1-2：添加了水的无水合物晶体、无水合物晶体及水合物晶体的粉末X射线衍射图案的比较

取得添加了水的无水合物晶体(附着水存在下的无水合物晶体)的XRD图谱，将添加了水的试样的粉末X射线衍射图案与无水合物晶体及水合物晶体的粉末X射线衍射图案进行比较。

具体而言，向无水合物晶体试样中，以重量比成为6.7％(与一水合物相当的水分)的方式，在即将测定之前添加水并混合以使其均匀，利用与试验例1-1同样的方法，实施基于粉末X线衍射法的测定。

图4为添加了水的无水合物晶体、无水合物晶体、水合物晶体(制造例1、制造例2)的XRD图谱的比较图。

添加了水的无水合物晶体的粉末X线衍射角度2θ±0.2显示由10.0、10.7、11.3、15.6、16.1、20.1、21.2、22.3、23.8、26.8、27.3、28.6、29.1、30.6构成的图案，与无水合物晶体的图案一致。即，添加了与一水合物相当的水分的无水合物晶体为与经干燥的无水合物晶体同等的图案。由此可知，添加了水的无水合物晶体中的水为附着水，水合物晶体所含有的水分为结晶水而非附着水。

1-3：热重差示热分析

将粉末的受试物质供于热重差示热分析(TG-DTA)或差示扫描量热分析(DSC)这样的热分析，以有无源自水合水的吸热峰作为指标，能够区分无水合物和水合物。另外，热重差示热分析可同时测定重量变化，因此能够查明结晶水的含量。为了利用这样的上述热分析的特征来评价5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的晶体，实施以下的测定。

向测定用的铝盘中放入约10mg左右的受试物质，设置于装置中，实施热重差示热分析。升温速度等测定条件如下所述，数据的读取设为从测定开始时的温度起直至300℃。

测定容器：铝制盘

测定气氛：大气

通气速度：100mL/min

升温速度：20℃/min

试样观察示差热-热重量同时测定装置：Thermo plusEVO2 TG-DTA8122/C(Rigaku)

图5A为无水合物晶体的TG-DTA图谱。

图5B为添加了水的无水合物晶体的TG-DTA图谱。

图5C为水合物晶体(制造例1)的TG-DTA图谱。

图5D为水合物晶体(制造例2)的TG-DTA图谱。

TG-DTA图谱中，无水合物晶体和水合物晶体均在168℃附近具有显示化合物本身的分解的吸热峰。另外，水合物晶体中，有结晶水的脱离所伴随的吸热峰，在制造例1中，存在95℃附近的吸热峰，在制造例2中，存在98℃附近和140℃附近这2个吸热峰。这些水合水脱离所伴随的吸热峰与TG-DTA中的重量减少相关联，合计伴有约6.7％的重量减少。制造例1及制造例2的约6.7％的重量减少与一水合物的水分量的理论值一致，因此判明制造例1及制造例2为一水合物晶体。

制造例1和制造例2尽管为一水合物晶体，但TG-DTA图谱的图案不同。认为制造例1是无水合物晶体中吸湿了水分而得到晶体，与此相对，制造例2是作为水合物进行晶体化而得到晶体，因此产生晶体面的生长度、取向性的差异等，产生TG-DTA图谱的图案的差异。

需要说明的是，添加了水的无水合物晶体的吸热峰在80℃附近，低于制造例1和制造例2的吸热峰。通常已知附着水的脱离在低于结晶水的脱离的温度下发生，该见解与添加了水的无水合物晶体(附着水存在下的无水合物晶体)的吸热峰低于制造例1和制造例2(具有结晶水的一水合物晶体)的吸热峰这一点一致。

1-4：基于扫描电子显微镜法的无水合物晶体及水合物晶体的观察

利用扫描电子显微镜(S-3200N，日立制)，对取得晶体后1个月以内的5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的无水合物晶体及水合物晶体(制造例1、制造例2)进行观察，比较晶体结构。

结果如图6A及图6B所示。

图6A为基于扫描电子显微镜的无水合物晶体、水合物晶体(制造例1)及水合物晶体(制造例2)的倍率500倍的照片。

图6B为基于扫描电子显微镜的无水合物晶体、水合物晶体(制造例1)及水合物晶体(制造例2)的倍率100倍的照片。

观察到无水合物晶体不均匀，为包含柱状晶体的凝集体这样的结构。另一方面，就水合物晶体(制造例2)而言，一个个柱状晶体生长得较大，观察不到无水合物晶体中看到的凝集体。水合物晶体(制造例1)中，观察到不均匀的尺寸的块状(包含大致长方体状)晶体粒子。认为就水合物晶体(制造例1)而言，在水合化的工序中，因原本的无水合物的结构崩解的影响，未能观察到均匀的晶体结构。

1-5：基于红外吸收光谱的无水合物晶体及水合物晶体的比较

使用红外分光光度计，利用以下的方法，对5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的无水合物晶体及水合物晶体(制造例2)进行测定，比较红外吸收光谱。

利用玛瑙制研钵将约1mg的受试物质制成粉末，添加0.20g溴化钾，量取约10mg所得到的混合物，利用片剂成型器以直径3mm进行加压制片。在以下条件下，在波长4000～400cm^-1的范围内，对制作的试样的红外吸收光谱进行测定。

测定法：溴化钾压片法

积分次数：32次

分辨率：4cm^-1

傅里叶变换红外分光光度计：IRAffinity-1S(岛津制作所)

结果如图7A、图7B及表1所示。

图7A为无水合物晶体的红外吸收光谱。

图7B为水合物晶体(制造例2)的红外吸收光谱。

表1表示无水合物晶体及水合物晶体(制造例2))的红外吸收光谱中的峰强度由高到低的前12个峰(2400～600cm^-1的范围)。

[表1]

无水合物晶体(cm^-1)	水合物晶体(cm^-1)
		2235	2245
1577	1654
		1500	1581
1458	1500
		1431	1454
1307	1427
		1271	1315
1155	1157
		1051	1053
1018	1014
		877	860
833	835

根据以上的结果表明，利用红外吸收光谱也能够区分无水合物晶体和水合物晶体，因水合化，晶型发生了变化。

1-6：基于拉曼光谱的无水合物晶体及水合物晶体的比较

使用拉曼分光系统，利用以下的方法对5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的无水合物晶体及水合物晶体进行测定，比较拉曼光谱。

将受试物质(无水合物晶体1、无水合物晶体2、水合物晶体(制造例1)、水合物晶体(制造例2)薄涂于玻璃制的样品架，设置于拉曼分光系统中，利用显微镜指定任意的位置后，照射激光，取得拉曼光谱。需要说明的是，无水合物晶体1及无水合物晶体2是在其他时间点制造的无水合物晶体。

激光波长：532nm

衍射光栅：600gr/mm

空间分辨率：350nm

波数分辨率：0.5cm^-1

拉曼分光系统：RAMANtouch VIS-ICS-S(Nanophoton)

结果如图8及表2所示。

图8为无水合物晶体1、无水合物晶体2、水合物晶体(制造例1)及水合物晶体(制造例2)的拉曼光谱的比较图。

表2表示无水合物晶体1、无水合物晶体2、水合物晶体(制造例1)及水合物晶体(制造例2)的拉曼光谱中的峰强度从高到低的前12个峰(2400～600cm^-1的范围)。

[表2]

即使是来自相同官能团的峰，在无水合物晶体与水合物晶体之间仍可观察到拉曼位移。以上的结果表明，利用拉曼光谱也能够区分无水合物晶体和水合物晶体，因水合化，晶型发生了变化。

试验例2：卡尔费歇尔水分测定(容量滴定法)

对于制造例1及2中得到的水合物晶体、和制造例1中作为原料使用的无水物晶体，利用卡尔费歇尔水分测定装置(CA-310，Nittoseiko Analytech制)，测定水分含有率。试验遵照日本药典第十八次修订版“2.48水分测定法(卡尔-费歇尔法)”的容量滴定法来实施。测定在25℃的气氛下实施，将施予样品后的强制延缓时间设定为2分钟，将最小滴定量设定为2μL，将终点电压设定为140mV，进行实施。更具体而言，如下所述。

首先，在测定烧瓶内填充水分测定甲醇(Aquamicron脱水溶剂GEX，三菱化学制)，将30mg水投入测定烧瓶内，以卡尔费歇尔试剂(Aquamicron SS-Z，三菱化学制)进行滴定。滴定后，根据滴定量求出本试剂的效价(mg/mL)。接着，准确地称量约0.1g的测定试样，投入测定烧瓶内，以卡尔费歇尔试剂进行滴定。根据滴定量和先前求出的效价，算出样品中的水分含量(w/w％)。

制造例1的水合物晶体、制造例2的水合物晶体、无水物晶体的卡尔费歇尔水分量分别为6.6wt％、6.7wt％、0.1wt％。5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的分子量为252.10，水的分子量为18.00，因此认为制造例1及2的水合物晶体为一水合物。

试验例3：吸湿试验

将无水物晶体试样以直接接触湿气的状态放入容器(玻璃制称量瓶或纸袋)内。在表1所示的各温度及湿度条件下(25℃/80％RH、40℃/80％RH)进行保管，通过重量变化或卡尔费歇尔水分测定来观察水分的变化。另外，对于水合物晶体(制造例1)，也在60℃/80％RH的条件下保管，通过重量变化或卡尔费歇尔水分测定来观察水分的变化。结果一并示于表3。

[表3]

根据表1，在25℃/80％RH的条件下观察到被认为是吸湿的重量增加。在作为其加速条件的40℃/75％RH及60℃/80％RH下，观察到被认为是更快速地吸湿的重量增加。由此可知，5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的无水物晶体具有较高的吸湿性。

以60℃/80％RH保存20天后的试样相当于前述的制造例1的水合物。该试样即使继续保管至61天后(生成水合物后经过41天)，之后也观察不到重量变化，水分值也为6.6～6.7％，未观察到上升。由此确认了，5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈最多吸湿成一水合物，通过形成一水合物，即使在高温高湿环境下，也能够稳定地存在。另一方面，如上所述，关于无水物晶体，在25℃/80％RH的条件下，保存49天后重量增加4.7％，在40℃/75％RH的条件下，保存28天后重量增加6.7％，卡尔费歇尔水分量为6.1％。可预测若它们继续保存，则重量会进一步增加，不能说是稳定的。

卡尔费歇尔试验例4：干燥试验

将制造例1的水合物晶体在25℃、干燥条件下(硅胶的存在下)保管表2所示的时间。对保管后的卡尔费歇尔水分量进行测定，观察水分的变化。结果一并示于表4。

[表4]

由表4确认了，制造例1的水合物晶体即使在干燥环境下长期保存，也未观察到水分量的变化，能够稳定地存在。

5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的无水物晶体具有吸湿性，因此在使用中保存容器、保存场所、有效期限、试验用标准品的分装等受到限制。根据试验例3及4的结果可知，通过形成5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体，从而即使在高湿环境下、干燥环境下的任意情况下，均能够稳定地存在，因此容易作为医药品原药进行处理。

试验例5：摩擦带电性试验

针对制造例1及制造例2中得到的水合物晶体和制造例1中作为原料使用的无水物晶体，评价摩擦带电性。

首先，将试样磨切并填满至×高度15mm的不锈钢培养皿后，利用除电机(STABLO AP，岛津制作所制)进行静电去除。利用事先进行了调零的表面电位计(SV-77A，NIPPON STATIC制)来测定试样的表面电位，确认静电被去除(处于-1～+1kV以内)。

接着，利用不锈钢制金属板在填充有试样的培养皿的试样表面以10秒往返20次，由此使试样表面带电。然后，将填充有带电试样的培养皿置于连接了地线的金属板(30cm×30cm)上。

利用上述表面电位计，对试样的表面电位经时地测定20分钟。根据初始表面电位来评价摩擦带电性。另外，根据20分钟后的表面电位和初始表面电位算出保持率，评价带电衰减性。需要说明的是，试验在设定为25℃、50％RH的静电测定室(Tabai espec)内实施，表面电位测定是距离试样的表面隔开1cm的间隔而进行的。结果示于表5。

[表5]

根据表5可知，通过将无水物晶体制成水合物晶体，带电压显著降低。另外，关于电位保持率，在20分钟后的时间点，无水物晶体基本不变化，与此相对，制造例1的水合物晶体降低7％，制造例2的水合物晶体降低14％。因此可知，水合物晶体即使在带电的情况下，也容易降低带电量。

5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的无水物晶体具有强的带电性，因此在原药的制造、制剂化等工艺中，有时由于粉体的运输或转移、制剂化、称量时的摩擦而强烈带电。

一旦发生带电，则产生由附着于配管、包装材料导致的收率的降低、混合均匀性的恶化、称量误差的原因等工艺上的担忧。

根据试验例5的结果可知，通过将5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈制成水合物晶体，能够降低绝对的带电量，另外，即使在带电的情况下，衰减速度也快，因此带电量立刻下降。因此，能够缓和与带电性相伴的工艺、品质等方面的担忧。

试验例6：抗菌活性试验

受试化合物：无水物晶体、水合物晶体(制造例1)

受试菌株：Staphylococcus pseudintermedius(JCM 17571)

使在Luria Broth(LB)琼脂培养基平板(蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、琼脂、Invitrogen)上培养了24小时的葡萄球菌(Staphylococcus pseudintermedius)悬浮于生理食盐水中，以600nm处的吸光度成为0.025的方式进行制备。向其中，以最终浓度成为200、100、50、25ppm的方式加入已溶解于DMSO的受试化合物，1分钟后，向注射器(日文：シリンジ)中加入悬浮液10μL和生理食盐水10mL，进行搅拌。然后，连接至37mm品质监测仪(Pall公司制)，进行过滤，用10mL的生理食盐水清洗2次。直接使LB培养基渗透至膜过滤器，于30℃培养72小时，调查有无菌落生长，求出最低杀菌浓度(MBC100)。将其结果示于表6。

[表6]

试验例7：抗真菌活性试验

受试化合物：无水物晶体、水合物晶体(制造例1)

受试菌株：Microsporum canis(IFM63627)

利用1/10沙保氏培养基将Microsporum canis于32℃培养168小时，形成孢子。然后，将生理食盐液(大冢生食注；相当于1000mL中含有9g的氯化钠)10mL直接添加至培养基上，使用一次性接种环(1型(1μL))擦过表面，将包含菌丝的孢子悬浮液回收。利用细胞筛网(φ40μm)对包含菌丝的孢子悬浮液进行过滤。利用离心分离(3500rpm，5分钟)从滤液中回收孢子，用生理食盐水清洗2次后，制备了孢子悬浮液(1×10⁷个/mL)。将10μL上述孢子悬浮液接种于沙保氏培养基中，所述沙保氏培养基中以成为规定浓度的方式加入有溶解于DMSO的受试化合物。Microsporum canis于32℃培养72小时后，调查有无菌落生长，求出最低抑菌浓度(MIC100)。将其结果示于表7。

[表7]

试验例8：抗真菌活性试验

受试化合物：无水物晶体、水合物晶体(制造例1)

受试菌株：Microsporum canis(IFM63627)

用1/10沙保氏培养基将Microsporum canis于32℃培养168小时，形成孢子。然后，将生理食盐液(大冢生食注；相当于1000mL中含有9g的氯化钠)10mL直接添加于培养基上，使用一次性接种环(1型(1μL))擦过表面，将包含菌丝的孢子悬浮液回收。利用细胞筛网(φ40μm)对包含菌丝的孢子悬浮液进行过滤。利用离心分离(3500rpm，5分钟)从滤液中回收孢子，用生理食盐水清洗2次后，制备了孢子悬浮液(1×10⁷个/mL)。将10μL上述孢子悬浮液接种于90μL生理食盐液中，所述生理食盐液中以成为规定浓度的方式加入有溶解于DMSO的受试化合物。每经过规定的时间，采集10μL的包含孢子的被检液。对采集的被检液进行离心分离(3500rpm，5分钟)，回收孢子，用生理食盐水清洗2次后，制备了10μL的孢子悬浮液。将10μL的孢子悬浮液点种在沙保氏培养基上，于32℃培养72小时后，调查有无菌落生长，求出最低杀真菌浓度(MFC100)。将其结果示于表8。

[表8]

试验例9：抗真菌活性试验

受试化合物：无水物晶体、水合物晶体(制造例1)

受试菌株：Malassezia pachydermatis(IFM56528)

使经沙保氏培养基(蛋白胨1％、糊精4％、琼脂1.5％)培养5～7天而得的马拉色菌(Malassezia pachydermatis)悬浮于生理食盐水中，以600nm的吸光度成为0.025的方式进行调节。向其中，以最终浓度成为200、100、50、25ppm的方式加入已溶解于DMSO的受试化合物。1分钟后，向注射器中加入悬浮液10μL和生理食盐水10mL，进行搅拌，连接至37mm品质监测仪(Pall公司制)，进行过滤清洗。直接使沙保氏培养基渗透至膜过滤器，于32℃培养72小时，调查有无菌落生长，求出最低杀真菌浓度(MFC100)。将其结果示于表9。

[表9]

试验例10：抗真菌活性试验

受试化合物：无水物晶体、水合物晶体(制造例1)

受试菌株：Malassezia furfur(IFM 55951)、Malassezia sympodialis(IFM48588)、Malassezia globosa(IFM 51946)

使经CHROMagar TM马拉色菌/念珠菌生培养基(蛋白胨、特殊酶底物混合物、氯霉素、橄榄油、琼脂，关东化学株式会社制)培养5～7天而得的马拉色菌(Malassezia furfur、Malassezia sympodialis、Malassezia globosa)悬浮于生理食盐水中，以600nm处的吸光度成为0.025的方式进行调节。向其中，以最终浓度成为200、100、50、25ppm的方式加入已溶解于DMSO的受试化合物。1分钟后，向注射器中加入悬浮液10μL、生理食盐水10mL，进行搅拌，连接至37mm品质监测仪(Pall公司制)，进行过滤，用生理食盐水10mL清洗2次。从品质监测仪中取下膜过滤器，将过滤器置于CHROMagar TM马拉色菌/念珠菌生培养基之上，于32℃培养72小时，调查有无菌落生长，求出最低杀真菌浓度(MFC100)。将其结果示于表10。

[表10]

试验例11：抗真菌活性试验

受试化合物：无水物晶体、水合物晶体(制造例1)

受试菌株：Malassezia restricta(IFM55992)

使经CHROMagar TM马拉色菌/念珠菌生培养基(蛋白胨、特殊酶底物混合物、氯霉素、橄榄油、琼脂，关东化学株式会社制)培养5～7天而得的马拉色菌(Malassezia restricta)悬浮于生理食盐水中，以600nm处的吸光度成为0.025的方式进行调节。向其中，以最终浓度成为200、100、50、25ppm的方式加入已溶解于DMSO的受试化合物。1分钟后，向注射器中加入悬浮液10μL和生理食盐水10mL，进行搅拌，连接至37mm品质监测仪(Pall公司制)，进行过滤，用生理食盐水10mL清洗2次。从品质监测仪中取下膜过滤器，将过滤器置于Leeming&Notman agar Modified培养基(MLNA培养基)(蛋白胨、葡萄糖、酵母提取物、干燥牛胆汁、甘油、甘油硬脂酸酯、Tween60、橄榄油、琼脂)之上，于32℃培养72小时，调查有无菌落生长，求出最低杀真菌浓度(MFC100)。将其结果示于表11。

[表11]

试验例12：抗真菌活性试验

受试化合物：无水物晶体、水合物晶体(制造例1)

受试菌株：Trichophyton rubrum(ATCCMYA4607)

就Trichophyton rubrum而言，使用沙保氏培养基，于32℃培养168小时，形成孢子。将菌丝从培养基表面剥离，回收至管中，添加生理食盐液(大冢生食注；相当于1000mL中含有9g的氯化钠)，使用一次性接种环(1型(1μL))将整体混合并分散，将包含菌丝的孢子悬浮液回收。利用细胞筛网(φ40μm)对包含菌丝的孢子悬浮液进行过滤。利用离心分离(3500rpm，5分钟)从滤液中回收孢子，用生理食盐水清洗2次后，制备了孢子悬浮液(1×10⁶个/mL)。将10μL的上述孢子悬浮液接种于沙保氏培养基，所述沙保氏培养基中以成为规定的浓度的方式加入有溶解于DMSO的试验化合物。Trichophyton rubrum在32℃培养72小时后，调查有无菌落生长，求出最低抑菌浓度(MIC100)。将其结果示于表12。

[表12]

试验例13：抗真菌活性试验

受试化合物：无水物晶体、水合物晶体(制造例1)

受试菌株：Trichophyton rubrum(ATCCMYA4607)

就Trichophyton rubrum而言，使用沙保氏培养基于32℃培养168小时，形成孢子。将菌丝从培养基表面剥离，回收至管中，添加生理食盐液(大冢生食注；相当于1000mL中含有9g的氯化钠)，使用一次性接种环(1型(1μL))将整体混合并分散，将包含菌丝的孢子悬浮液回收。利用细胞筛网(φ40μm)对包含菌丝的孢子悬浮液进行过滤。利用离心分离(3500rpm，5分钟)从滤液中回收孢子，用生理食盐水清洗2次后，制备了孢子悬浮液(1×10⁷个/mL)。将10μL的上述孢子悬浮液接种于90μL生理食盐液中，所述生理食盐液中以成为规定浓度的方式加入有溶解于DMSO的试验化合物。每经过规定的时间，采集10μL的包含孢子的被检液。利用离心分离(3500rpm，5分钟)，从采集的被检液中回收孢子，用生理食盐水清洗2次后，制备了10μL的孢子悬浮液。将10μL孢子悬浮液点种在沙保氏培养基上，于32℃培养72小时后，调查有无菌落生长，求出最低杀真菌浓度(MFC100)。将其结果示于表13。

[表13]

试验例14：抗菌活性试验

除了作为受试化合物使用水合物晶体(制造例2)以外，利用与上述试验例6同样的方法，求出对Staphylococcus pseudintermedius(JCM 17571)的最低杀菌浓度(MBC100)。将其结果示于表14。

[表14]

试验例15：抗真菌活性试验

除了作为受试化合物使用水合物晶体(制造例2)以外，利用与上述试验例7同样的方法，求出对Microsporum c anis(IFM63627)的最低抑菌浓度(MIC100)。将其结果示于表15。

[表15]

试验例16：抗真菌活性试验

除了作为受试化合物使用水合物晶体(制造例2)以外，利用与上述试验例8同样的方法，求出对Microsporum canis(IMF63627)的最低杀真菌浓度(MFC100)。将其结果示于表16。

[表16]

试验例17：抗真菌活性试验

除了作为受试化合物使用水合物晶体(制造例2)以外，利用与上述试验例9同样的方法，求出对Malassezia pachydermatis(IFM56528)的最低杀真菌浓度(MFC100)。将其结果示于表17。

[表17]

试验例18：抗真菌活性试验

除了作为受试化合物使用水合物晶体(制造例2)以外，利用与上述试验例10同样的方法，求出对Malassezia furfur(IFM 55951)、Malassezia sympodialis(IFM 48588)及Malassezia globosa(IFM 51946)的最低杀真菌浓度(MFC100)。将其结果示于表18。

[表18]

试验例19：抗真菌活性试验

除了作为受试化合物使用水合物晶体(制造例2)以外，利用与上述试验例11同样的方法，求出对Malassezia restricta(IFM55992)的最低杀真菌浓度(MFC100)。将其结果示于表19。

[表19]

试验例20：抗真菌活性试验

除了作为受试化合物使用水合物晶体(制造例2)以外，利用与上述试验例13同样的方法，求出对Trichophyton rubrum(ATCCMYA4607)的最低抑菌浓度(MIC100)。将其结果示于表20。

[表20]

试验例21：抗真菌活性试验

除了作为受试化合物使用水合物晶体(制造例2)以外，利用与上述试验例12同样的方法，求出对Trichophyton rubrum(ATCCMYA4607)的最低抑菌浓度(MIC100)。将其结果示于表21。

[表21]

Claims

1.5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体。

2.如权利要求1所述的水合物晶体，其为一水合物晶体。

3.如权利要求1所述的水合物晶体，其中，在使用Cu-Kα射线源所测定的粉末X射线衍射图案中，在衍射角度(2θ±0.2°)为9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、24.2、25.3、25.7、26.7、27.7、28.5、28.8、29.5、30.3、32.3、33.1、34.1、35.7、36.4、37.4、39.5、40.1、43.3或44.3的位置具有至少一个峰。

4.如权利要求1所述的水合物晶体，其中，在使用Cu-Kα射线源所测定的粉末X射线衍射图案中，在衍射角度(2θ±0.2°)为9.8、12.8、14.6、16.0、19.5、25.3、25.7、26.7或29.5的位置具有至少一个峰。

5.如权利要求3或4所述的水合物晶体，其中，前述至少一个峰为强度高的至少前5个峰。

6.如权利要求1所述的水合物晶体，其中，在热重差示热分析(TG-DTA)或差示扫描量热分析(DSC)中，在选自93～100℃及135～145℃中的范围显示至少一个吸热峰。

7.如权利要求1所述的水合物晶体，其中，在利用溴化钾压片法测定的红外线吸收光谱中，在选自835±2、860±2、1014±2、1053±2、1157±2、1315±2、1427±2、1454±2、1500±2、1581±2、1654±2及2245±2中的位置(cm^-1)具有至少一个峰。

8.如权利要求1所述的水合物晶体，其中，在拉曼光谱中，在选自1021±2、1152±2、1240±2、1281±2、1379±2、1409±2、1424±2、1451±2、1507±2、1573±2、1607±2及2241±2中的位置(cm^-1)具有至少一个峰。

9.如权利要求1所述的水合物晶体，其中，利用卡尔-费歇尔法(容量滴定法)测定的水分量为6.5～6.8质量％。

10.制剂，其是包含权利要求1或2所述的水合物晶体、和药理学上可容许的追加成分而成的。

11.如权利要求10所述的制剂，其为医药品、准医药品、动物药或化妆品。

12.如权利要求10所述的制剂，其为抗菌剂。

13.如权利要求10所述的制剂，其为抗真菌剂或抗细菌剂。

14.如权利要求10所述的制剂，其用于改善由前述真菌或细菌引起的症状或疾病。

15.如权利要求14所述的制剂，其中，前述症状或疾病为皮肤疾病。

16.如权利要求12或13所述的制剂，其用于选自念珠菌属菌、马拉色菌属菌、发癣菌属菌、小孢子癣菌属菌、节皮菌属菌、曲霉属菌及隐球菌属菌中的至少一种真菌。

17.如权利要求12或13所述的制剂，其用于选自葡萄球菌属菌、链球菌属菌、巴斯德菌属菌、埃希菌属菌、假单胞菌属菌、变形杆菌属菌及克雷伯菌属菌中的至少一种细菌。

18.5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体在医药品、准医药品、动物药或化妆品的制造中的用途。

19.5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体在抗菌剂的制造中的用途。

20.由真菌或细菌引起的症状或疾病的改善方法，其包括将有效量的5-氯-4-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-咪唑-2-甲腈的水合物晶体施予至需要其的对象。