CN118370728B - 一种glp-1ra载药纳米颗粒和制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种GLP‑1RA载药纳米颗粒和制剂及其制备方法，涉及医药技术领域。本发明先制备GLP‑1RA载药纳米颗粒，然后联合使用无机纳米材料载体介导技术和渗透促进技术，制备得到具有高口服生物利用度的GLP‑1RA制剂。本发明采用胃黏附的无机纳米颗粒作为GLP‑1RA载体，保护口服多肽药物免受胃肠道的降解；采用特定的表面改性剂增加纳米颗粒的载药量和药物回收率；使用特定种类的渗透促进剂改变胃壁屏障的物理和生化性质，增加口服多肽药物的胃壁渗透性，增加药物的溶解度和生物利用度。本发明所制备的GLP‑1RA制剂，可以显著提高主药和渗透促进剂的溶出速率，生物利用度显著提高。

Description

一种GLP-1RA载药纳米颗粒和制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种GLP-1RA载药纳米颗粒和制剂及其制备方法，具体涉及一种增强口服生物利用度的GLP-1RA载药纳米颗粒和制剂及其制备方法。

背景技术

胰高血糖素样肽-1受体激动剂（GLP-1RA）是一类模拟人体内胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的多肽药物，GLP-1RA可以刺激胰岛素分泌，抑制胃排空，增加饱腹感，从而降低血糖和体重，主要用于治疗2型糖尿病和肥胖症，具有良好的降糖疗效和心血管安全性；另外，GLP-1RA不仅具有降糖作用，还具有保护心血管、肾脏、神经等器官的作用。

多肽药物的一个主要问题是其口服给药方式受到多种限制，比如：多肽药物在胃道中容易被消化酶降解，而且难以通过肠壁吸收。因此，多肽药物通常需要通过注射给药，这不仅给患者带来了不便和痛苦，也影响了药物的依从性。为了解决上述问题，研究者致力于开发口服多肽制剂技术，保护多肽药物免受胃肠道的降解，增加多肽药物的肠壁吸收，从而实现口服给药。

其中，公开号为MX2017004592A的发明专利公开了一种具有特定分子量的肽或蛋白质药物与铜盐/络合物和/或锌盐/络合物以及还原剂联合口服药，用于治疗和预防疾病或病症；该药物中包括组分吸收促进剂，吸收促进剂包含8-20碳烷酰基肉碱、水杨酸、水杨酸衍生物、3-甲氧基水杨酸、5-甲氧基水杨酸、高香草酸、8-20碳烷酸、柠檬酸、脂肪酸酰化氨基酸、8-20碳烷酰基肌氨酸盐、烷基糖、8-10碳烷基多糖、N-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷、N-十二烷基β-D-麦芽糖苷、环糊精、α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、甲基-β-环糊精、羟丙基β-环糊精、磺丁基醚β-环糊精、N-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸钠、硫聚物、钙螯合物、乙二胺四乙酸、乙二醇四乙酸、苯扎氯铵、倍他汀、氯化十六烷基吡啶、溴化十六烷基三甲基铵、2-20碳链烷醇、8-20碳链烯醇、8-20碳链烯酸、硫酸葡聚糖、二乙二醇单乙基醚、1-十二烷基氮杂环庚-2-酮、辛酸乙酯、单月桂酸甘油酯、溶血磷脂酰胆碱、薄荷醇、8-20碳烷基胺、8-20碳链烯基胺、磷脂酰胆碱、泊洛沙姆、聚乙二醇单月桂酸酯、聚氧乙烯、聚丙二醇单月桂酸酯、聚山梨醇酯、脱氧胆酸盐、甘氨胆酸钠、甘氨脱氧胆酸钠、月桂基硫酸钠、牛磺胆酸盐、牛磺脱氧胆酸盐，或它们的盐。

另外，公开号为EP3359181A1的发明专利公开了一种改进的药物制剂，该口服给药的肽类药物具有较高的生物利用度，安全性。该发明提供的药物组合物，其包含:肽药物具有等于或小于5kDa分子量；药学上可接受的铜盐配合物和/或其药学上可接受的锌盐/复合物和/或其药学上可接受的铁盐/复合物；和药学上可接受的络合剂。该药物组合物还含有吸收促进剂，吸收促进剂选自8-20碳烷酰基肉碱、水杨酸、水杨酸衍生物的化合物、3-甲氧基水杨酸、5-甲氧基水杨酸、高香草酸、8-20碳链烷酸、柠檬酸、酒石酸和脂肪酸酰化氨基酸，和/或它们的盐。

目前，已有多种口服多肽制剂的制备方法被提出，主要包括以下几类：

化学修饰方法：通过改变多肽药物的化学结构，增加其稳定性和亲脂性，从而提高其抗降解和吸收能力。该技术可以有效地提高多肽药物的生物利用度；但是也存在一些缺点，如可能影响多肽药物的生物活性、增加合成成本和复杂度、需要进行额外的安全性评价等。

载体介导方法：通过将多肽药物包裹在各种载体中，保护其免受胃肠道的降解，同时利用载体的特殊性质，促进其通过肠壁的吸收。该技术可以有效地保护多肽药物，同时提供多种吸收途径，如跨细胞、旁细胞、M细胞等；但是其可能影响多肽药物的释放和分布、增加制剂的复杂性和不稳定性，且在使用中还需考虑载体的生物相容性和毒性等。

渗透促进剂方法：通过添加一些能够改变肠壁屏障的物质，增加多肽药物的肠壁渗透性，从而提高其吸收能力。该技术可以有效地增加多肽药物的吸收；但是也存在一些缺点，如可能造成肠壁的损伤和刺激、影响肠道的正常功能，在应用时还需考虑渗透促进剂的剂量和安全性等。

针对上述技术问题，本发明联合使用无机纳米材料载体介导技术和渗透促进技术进行GLP-1RA制剂的制备，从而制备获得安全、稳定且口服生物利用度高的胰高血糖素样肽-1药物制剂。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种GLP-1RA载药纳米颗粒和制剂及其制备方法，联合使用无机纳米材料载体介导技术和渗透促进技术，采用胃黏附的无机纳米颗粒作为GLP-1RA载体，有效地保护口服多肽药物免受胃肠道的降解，同时提供多种吸收途径，提高其胃壁吸收能力；采用特定的表面改性剂增加纳米颗粒的载药量和药物回收率，增加纳米颗粒的亲脂性，促进其通过胃壁的渗透；联用渗透压促进剂，使用特定种类的渗透促进剂改变胃壁屏障的物理和生化性质，增加口服多肽药物的胃壁渗透性，从而提高其吸收能力，增加药物的溶解度和生物利用度。本发明所制备的GLP-1RA制剂药物，具有高主药和渗透促进剂的溶出速率，生物利用度显著提高。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

首先，本发明提供一种GLP-1RA载药纳米颗粒的制备方法，包括步骤：

（1）将GLP-1RA、表面改性剂1和金属盐溶解混合，得到A液；

（2）将表面改性剂2、含酸根或含氢氧根离子的药用成分溶解混合，得到B液；

（3）将A液和B液混合，调节pH，形成沉淀，得到GLP-1RA载药纳米颗粒；

所述表面改性剂1选自吐温、司班、泊洛沙姆、十二烷基硫酸钠、聚氧乙烯蓖麻油、胆汁酸及其盐、聚乙二醇（PEG）及其衍生物、磷脂、嵌段共聚物Pluronic系列、嵌段共聚物P123、两亲性多肽、聚氧化乙烯（PEO）、聚氧化丙烯（PPO）、壳聚糖、透明质酸、阿拉伯树胶、白蛋白、明胶、聚乳酸（PLA）、聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）、聚己内酯（PCL）、海藻酸钠、葡聚糖、右旋糖酐中的至少一种；

所述表面改性剂2选自胆汁酸及其衍生物、胆固醇及其衍生物、磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127、壳聚糖及其衍生物、聚谷氨酸（PGA）、聚赖氨酸（PLL）、聚乳酸（PLA）、聚己内酯（PCL）。

优选地，所述溶解混合过程发生在缓冲盐溶液中，所述缓冲盐溶液为生物相容的缓冲盐溶液；缓冲盐溶液选自磷酸缓冲盐溶液(PBS)、Hank's平衡盐溶液(包括组分：氯化钠、氯化钾、磷酸盐、碳酸氢钠和葡萄糖)、Tris（三羟甲基氨基甲烷盐酸盐）缓冲液、TAE缓冲液（包括组分：三羟甲基氨基甲烷、乙酸和乙二胺四乙酸）、TBE缓冲液（包括组分：三羟甲基氨基甲烷、硼酸和乙二胺四乙酸）、MOPS（3-(N-吗啡啉)丙磺酸）缓冲液、甘氨酸缓冲液和HEPES（4-羟乙基哌嗪乙磺酸）缓冲液中的至少一种。

优选地，所述两亲性多肽是由多个氨基酸组成的肽段，包括两亲性氨基酸组成的多肽，或由亲水性氨基酸和疏水性氨基酸组成的多肽；所述两亲性氨基酸选自天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)中的至少一种；所述亲水性氨基酸选自天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)中的至少一种；所述疏水性氨基酸选自丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、蛋氨酸(Met)、脯氨酸(Pro)中的至少一种。

优选地，所述嵌段共聚物Pluronic系列，选自Pluronic124、188、237、338、407中的至少一种。

优选地，所述含酸根或含氢氧根离子的药用成分，选自磷酸氢钙、磷酸氢二钠、磷酸三钙、碳酸氢钠、碳酸钙、硅酸钠、氢氧化铝、硫酸钙、硫酸钡中的至少一种。

优选地，所述表面改性剂1选自胆汁酸及其盐、PEG及其衍生物、磷脂中的至少一种。

进一步优选地，所述表面改性剂1为PEG及其衍生物。

更进一步优选地，所述表面改性剂1为PEG；更进一步优选地，所述PEG选自PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG1000、PEG1450、PEG3350、PEG4000、PEG6000、PEG8000中的至少一种。

优选地，步骤（1）-步骤（2）中，所述溶解混合过程发生在缓冲盐溶液中，缓冲盐溶液为HEPES缓冲液，浓度为10-30mM，pH=7.0-8.5；进一步优选地，HEPES缓冲液的浓度为20mM，pH=8.0。

优选地，步骤（1）中，所述金属盐为氯化钙。

优选地，步骤（2）中，所述表面改性剂2选自甘氨胆酸及其盐、脱氧胆酸及其盐、龙胆酸及其盐、鹅脱氧胆酸及其盐、牛磺胆酸及其盐、甘胆酸及其盐、牛磺脱氧胆酸及其盐、熊脱氧胆酸及其盐、牛磺熊去氧胆酸(Tauroursodeoxycholic Acid)及其盐、磷脂酰胆碱、聚赖氨酸、聚乳酸、壳聚糖、聚谷氨酸、聚己内酯中的至少一种。

进一步优选地，所述表面改性剂2选自熊脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸钠、甘氨胆酸、脱氧胆酸钠、龙胆酸、牛磺胆酸钠中的至少一种。

优选地，步骤（2）中，所述含酸根或含氢氧根离子的药用成分选自磷酸氢二钠、磷酸氢钙、磷酸三钙、碳酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化镁、氢氧化钙中的至少一种。

优选地，步骤（2）具体为：将表面改性剂2、含酸根或含氢氧根离子的药用成分溶解混合，调节pH，得到B液。

进一步优选地，步骤（2）中，所述调节pH为调节至6.0-8.5；更进一步优选地，所述的调节pH为调节至7.0-8.5；更进一步优选地，所述的调节pH为调节至8.0。

进一步优选地，在步骤（3）形成沉淀后，还包括离心、沉淀物干燥的步骤，最终得到GLP-1RA载药纳米颗粒；更进一步优选地，离心具体为7000-10000rpm离心8-15min；更进一步优选地，离心具体为8000rpm离心10min。

更进一步优选地，步骤（3）中的干燥为冷冻干燥。

进一步优选地，步骤（3）所述的将A液和B液混合，需要在混合时振摇20-50min；更进一步优选地，振摇30min。

优选地，步骤（3）中，所述的调节pH为调节至6.0-8.5；进一步优选地，所述的pH调节为调节至7.0-8.5；更进一步优选地，所述的调节pH为调节至8.0。

再者，本发明提供一种由上述制备方法所制备得到的GLP-1RA载药纳米颗粒，按照重量份计，包括组分：2-4份GLP-1RA、15-27份HEPES、30-48份金属盐、0.3-0.8份pH调节剂、42-79份表面改性剂1、7.5-18.2份表面改性剂2和13.5-20.7份含酸根或含氢氧根离子的药用成分。

优选地，所述GLP-1RA载药纳米颗粒，按照重量份计，包括组分：2.5-3.5份GLP-1RA、20-23份HEPES、36-44份金属盐、0.5-0.7份pH调节剂、50-70份表面改性剂1、9-16份表面改性剂2和15.5-18.7份含酸根或含氢氧根离子的药用成分。

进一步优选地，所述GLP-1RA载药纳米颗粒，按照重量份计，包括组分：3份GLP-1RA、21.45份HEPES、39.45份金属盐、0.6份pH调节剂、60份表面改性剂1、12份表面改性剂2、和17.05份含酸根或含氢氧根离子的药用成分。

优选地，所述pH调节剂选自NaOH、KOH中的至少一种；pH调节剂在使用时，使用水进行配制，最终浓度为0.1-0.3M。

进一步优选地，pH调节剂为NaOH，在使用时配制为浓度是0.2M的NaOH溶液。

然后，本发明提供一种提高口服生物利用度的GLP-1RA制剂的制备方法，包括步骤：将GLP-1RA载药纳米颗粒与渗透促进剂一起进行制剂的制备，得到GLP-1RA制剂；

所述渗透促进剂选自中链脂肪酸及其衍生物、非离子表面活性剂、胆汁酸及其衍生物、C8（辛酸）、C10（癸酸）、葵酸钠、EDTA（乙二胺四乙酸）、酰基肉碱、烷基麦芽糖苷的至少一种。

优选地，所述中链脂肪酸包括但不限于癸酸钠、月桂酸钠、月桂酸乙酯中的至少一种。

优选地，所述非离子表面活性剂包括但不限于SNAC（8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠）、5-CNAC（5-氯水杨酰胺己酸钠）、4-CNAB（4-氯水杨酰胺丁酸钠）中的至少一种。

优选地，所述胆汁酸及其衍生物选自初级胆酸汁、次级胆酸汁中的至少一种；进一步优选地，所述胆酸汁选自胆酸、鹅去氧胆酸、熊脱氧胆酸、甘氨胆酸、牛磺胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、去氧胆酸、石胆酸、甘氨去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨石胆酸、牛磺石胆酸或其盐中的至少一种。

优选地，所述渗透促进剂选自SNAC、5-CNAC、4-CNAB、熊脱氧胆酸、鹅去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸中的至少一种。

优选地，所述制剂的制备，为常规的制剂制备方法，包括但不限于混粉、制粒、压片、包衣、混悬、喷雾干燥、热熔挤出步骤。

最后，本发明提供一种由上述制备方法所制备得到的GLP-1RA制剂，按照重量份计，包括组分：9-11.6份GLP-1RA载药纳米颗粒和56-80份渗透促进剂。

优选地，所述GLP-1RA制剂，按照重量份计，包括组分：10.51份GLP-1RA载药纳米颗粒和67.50份渗透促进剂。

优选地，GLP-1RA制剂中还包括填充剂、粘合剂和润滑剂。

进一步优选地，GLP-1RA制剂中还包括微晶纤维素、聚维酮和硬脂酸镁。

更进一步优选地，所述GLP-1RA制剂，按照重量份计，包括组分：9-11.6份GLP-1RA载药纳米颗粒、56-80份渗透促进剂、15-22份填充剂、1.2-2.5份粘合剂和1.8-2.6份润滑剂。

更进一步优选地，所述GLP-1RA制剂，按照重量份计，包括组分：10.51份GLP-1RA载药纳米颗粒、67.50份渗透促进剂、18份填充剂、1.8份粘合剂和2.18份润滑剂。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

1、本发明采用无机纳米颗粒作为载体，具有高载药量、良好的生物相容性和稳定性，能够有效地保护GLP-1RA免受胃肠道的降解，同时提供多种吸收途径：跨细胞、旁细胞和M细胞，提高GLP-1RA在胃壁中的吸收能力；且生产工艺过程简单，有利于产业化生产。

2、本发明采用了渗透促进剂作为表面改性成分，能够增加纳米颗粒的载药率，提高药物的回收率，同时也能增加GLP-1RA载药纳米颗粒的亲脂性，促进其通过胃壁被吸收。

3、本发明所制备得到的GLP-1RA载药纳米颗粒具有胃道粘膜黏附能力，可实现消化道特定部位靶向；纳米颗粒的制备过程简单，所用材料均为药用材料，安全性高，产品组成简单，稳定性好。

4、本发明的GLP-1RA载药纳米颗粒易于在胃肠道内溶解和吸收，具有快速释放药物的特性，这种释放特性能够被制剂技术方法所修饰，从而实现靶向、改性释放。

具体实施方式

以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述内容仅仅是对本发明要求保护的范围的示例性说明，本领域技术人员可以根据所公开的内容对本发明做出多种改变和修饰，而其也应当属于本发明要求保护的范围之中。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。

下面以具体实施例的方式对本发明作进一步的说明。

本发明实施例中所使用的各种化学试剂如无特殊说明均通过常规商业途径获得。下述实施例和对比例中，所使用的GLP-1RA为司美格鲁肽，购自湖北健翔生物制药，批号为COO5AD230601；聚乙二醇6000，购自江西阿尔法高科药业，批号为20230102；SNAC（8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠）购自苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司，批号为0920220901；微晶纤维素购自FMC，批号为2174359392，型号为PH102；聚维酮K90购自BASF，批号为78081424U0，型号为Kollidon 90 F；硬脂酸镁购自安徽山河药用辅料有限公司，批号为230824，型号为SH-YM-M；熊脱氧胆酸购自湖南九典宏阳制药有限公司，批号为T202306LED1。

以上组分，不同厂家的产品对效果不具有显著性影响。

表格中的“/”代表未使用、或不存在相应数据、或不存在相应内容。

实施例1

一种GLP-1RA载药纳米颗粒，如表1所示，按照重量份计，包括组分：

表1

GLP-1RA载药纳米颗粒（司美格鲁肽磷酸钙颗粒）的制备方法，包括步骤：

（1）A液：取3.0g司美格鲁肽，边搅拌边加入至1500mL的20mM HEPES缓冲液中，持续搅拌至溶解，再边搅拌边向其中加入39.42g氯化钙，搅拌至溶解；之后加入30g PEG6000持续搅拌至溶解完全；向溶液中加入纯化水到3000mL后置于冷水浴。

（2）B液：称取30g的PEG 6000，加入600mL的20mM HEPES缓冲液中，加入16.8g磷酸氢二钠，搅拌至溶解完全后，测量pH，用氢氧化钠调节pH至8，使用20mM HEPES缓冲液加至3000mL。

（3）将B溶液边搅拌边缓慢加入至A溶液中，调节pH至8，加入完毕后将反应溶液置于摇床，持续震摇30min，形成沉淀。

（4）离心：然后在8000rpm的条件下离心10min，得到沉淀物和上清液。

（5）干燥：将收集到的沉淀物冷冻干燥，得到目标司美格鲁肽磷酸钙颗粒。

一种GLP-1RA制剂（片剂），如表2所示，按照重量份计，包括组分：

表2

司美格鲁肽磷酸钙颗粒以司美格鲁肽计，单位用量10.51份。

GLP-1RA制剂的制备方法，包括步骤：

S1、80%硬脂酸镁、SNAC、70%微晶纤维素于混合机内混合均匀；

S2、磷酸钙纳米颗粒、30%微晶纤维素、聚维酮K90于混合机内混合均匀；

S3、总混：将步骤S1、步骤S2所得到的混合物，与剩余20%硬脂酸镁于混合机内混合均匀，压片（压片压力15-25KN），得到司美格鲁肽片剂。

司美格鲁肽磷酸钙颗粒中，司美格鲁肽的回收量和回收率计算如下：

司美格鲁肽回收量（g）=司美格鲁肽载量（mg/g）×司美格鲁肽磷酸钙颗粒总量；

司美格鲁肽回收率（%）=[司美格鲁肽回收量（mg）/司美格鲁肽加样量（mg)]×100%=80.4%。

对所制备的司美格鲁肽片剂进行溶出行为检测，检测结果如表3所示：

RSD指相对标准偏差（relative standard deviation）。

表3

NJG6248样品为已上市司美格鲁肽片剂，产自NOVO Nordisk，经销商为MSD株式会社，规格：3mg。

实施例2

一种GLP-1RA载药纳米颗粒，如表4所示，按照重量份计，包括组分：

表4

GLP-1RA载药纳米颗粒（司美格鲁肽磷酸钙颗粒）的制备方法，包括步骤：

（1）A液：取3.0g司美格鲁肽，边搅拌边加入至1500mL的20mM HEPES缓冲液中，持续搅拌至溶解，再边搅拌边向其中加入39.42g氯化钙，搅拌至溶解；之后加入60g PEG6000持续搅拌至溶解完全；向溶液中加入纯化水到3000mL后置于冷水浴。

（2）B液：称取12.0g的熊脱氧胆酸于225mL的无水乙醇中溶解，用氢氧化钠调至中性，后加入1200mL的20mM HEPES缓冲液中，加入17.05g磷酸氢二钠，搅拌至溶解完全后，测量pH，用氢氧化钠调节pH至8，使用20mM HEPES缓冲液加至3000mL。

（3）将B溶液边搅拌边缓慢加入至A溶液中，调节pH至8，加入完毕后将反应溶液置于摇床，持续震摇30min，形成沉淀。

（4）离心：然后在8000rpm的条件下离心10min，得到沉淀物和上清液。

（5）干燥：将收集到的沉淀物冷冻干燥，得到目标司美格鲁肽磷酸钙颗粒。

一种GLP-1RA制剂（片剂），如表5所示，按照重量份计，包括组分：

表5

司美格鲁肽磷酸钙颗粒以司美格鲁肽计，单位用量10.51份。

GLP-1RA制剂的制备方法，包括步骤：

S1、80%硬脂酸镁、SNAC、70%微晶纤维素于混合机内混合均匀；

S2、磷酸钙纳米颗粒、30%微晶纤维素、聚维酮K90于混合机内混合均匀；

S3、总混：将步骤S1、步骤S2所得到的混合物，与剩余20%硬脂酸镁于混合机内混合均匀，压片（压片压力15-25KN），得到司美格鲁肽片剂。

司美格鲁肽片剂中，司美格鲁肽的回收量和回收率计算如下：

司美格鲁肽回收量（g）=司美格鲁肽载量（mg/g）×司美格鲁肽磷酸钙颗粒总量；

司美格鲁肽回收率（%）=[司美格鲁肽回收量（mg）/司美格鲁肽加样量（mg)]×100%=94.7%。

对所制备的司美格鲁肽片剂（实施例2）进行溶出行为检测。

pH 1.2介质中的司美格鲁肽和SNAC的溶出检测结果如表6所示。

表6

NJG6248样品为已上市司美格鲁肽片剂，产自NOVO Nordisk，经销商为MSD株式会社，规格：3mg。

pH 2.5介质中的司美格鲁肽和SNAC的溶出检测结果如表7所示。

表7

NJG6248样品为已上市司美格鲁肽片剂，产自NOVO Nordisk，经销商为MSD株式会社，规格：3mg。

pH 6.8介质中的司美格鲁肽和SNAC的溶出检测结果如表8所示。

表8

NJG6248样品为已上市司美格鲁肽片剂，产自NOVO Nordisk，经销商为MSD株式会社，规格：3mg。

由表2-表4溶出结果可见，本发明的司美格鲁肽制剂在各各溶出介质中，API和SNAC的溶出均较对照制剂NJG6248更快，溶出量更高。

实施例3

与实施例2不同的是，GLP-1RA制剂的制备不同，包括步骤：

S1、预处理：8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠整粒，用0.61mm的筛网，1300rpm对SNAC进行整粒。

S2、称量：按配方量称量各成分。

S3、混合：

将步骤S1的样品混合：将80%过筛后的硬脂酸镁与2%SNAC混合，20rpm混合2min，再加入4%SNAC继续混合，20rpm混合2min，之后加入剩余的SNAC并以20rpm混合20min；将30%微晶纤维素加入混合机中，20rpm混合10min，得到混合物S1；

将步骤S2的样品混合：先将配方量的司美格鲁肽载药颗粒同等量的微晶纤维素20rpm混合2min；最后加入剩余的微晶纤维素及聚维酮，20rpm混合10min，得到混合物S2。

S4、干法制粒：

混合物S1制粒：饲料螺杆转速35.0rpm、辊转速6.0rpm、压力100bar、辊轴间隙0.60mm，得到S1颗粒；

混合物S2制粒：饲料螺杆转速30.0rpm、辊转速4.0rpm、压力110bar、辊轴间隙0.60mm；得到S2颗粒。

S5、整粒：

将S1颗粒使用0.61mm筛网，于1300rpm下整粒，收集所得颗粒，称重，计算收率。

将S2颗粒使用0.61mm筛网，于1300rpm下整粒，收集所得颗粒，称重，计算收率。

S6、称量：

基于S1颗粒和S2颗粒的重量和收率，计算实际需加入的外加硬脂酸镁用量；称量获得目标量的硬脂酸镁。

S7、总混：

S1颗粒和S2颗粒于混合机内，20rpm混合25min，之后加入硬脂酸镁，20rpm混合3min，得到中间产品粉末。

S8、压片：

将上述中间产品粉末使用旋转式压片机压制成规格14mg，硬度50-100N的药片（司美格鲁肽片剂）。

对所制备的司美格鲁肽片剂（实施例3）进行溶出行为检测。

pH 1.2介质中的司美格鲁肽和SNAC的溶出检测结果如表9所示。

表9

NJG6248样品为已上市司美格鲁肽片剂，产自NOVO Nordisk，经销商为MSD株式会社，规格：3mg。

实施例4

与实施例2不同的是，熊脱氧胆酸替换为鹅脱氧胆酸钠。其余皆与实施例1相同。

制备得到的GLP-1RA制剂进行溶出行为的检测，检测结果见表10。

表10

实施例5

与实施例2不同的是，熊脱氧胆酸替换为牛黄胆酸钠。其余皆与实施例1相同。

制备得到的GLP-1RA制剂进行溶出行为的检测，检测结果见表11。

表11

对比例1

与实施例2不同的是，表面改性剂2的种类不同，具体种类见表12。所制备得到的GLP-1RA制剂（司美格鲁肽片剂）中，司美格鲁肽回收率的检测结果见表12。

表12

司美格鲁肽回收量（g）=司美格鲁肽载量（mg/g）×司美格鲁肽磷酸钙颗粒总量；

司美格鲁肽回收率（%）=[司美格鲁肽回收量（mg）/司美格鲁肽加样量（mg)]×100%。

对比例2

与实施例2不同的是，GLP-1RA载药纳米颗粒中的组分的重量份不同。具体如表13所示：

表13

制备得到的GLP-1RA制剂进行溶出行为的检测，检测结果见表14。

司美格鲁肽回收率为65%。

表14

对比例3

与实施例2不同的是，渗透促进剂不同，SNAC替换为月桂酰丙氨酸钠。

制备得到的GLP-1RA制剂进行溶出行为的检测，检测结果见表15。

司美格鲁肽回收率为62%。

表15

对比例4

与实施例2不同的是，GLP-1RA载药纳米颗粒的制备方法不同，具体如表16所示：

将司美格鲁肽、PEG6000和熊脱氧胆酸乙醇溶液一并加入到20mM HEPES缓冲液中，加入磷酸氢二钠，搅拌至溶解完全后，测量pH，用氢氧化钠调节pH至8；之后边搅拌边加入至氯化钙溶液中，振荡沉淀，离心，干燥即得。

制备得到的GLP-1RA制剂进行溶出行为的检测，检测结果见表16。

司美格鲁肽回收率为47%。

表16

对比例5

与实施例2不同的是，GLP-1RA制剂中各组分的重量份不同，具体如表17所示：

表17

制备得到的GLP-1RA制剂进行溶出行为的检测，检测结果见表18。

司美格鲁肽回收率为70%。

表18

生物利用度和安全性检测

（1）研究目的

以NOVO NORDISK INC持证的司美格鲁肽片（商品名：Rybelsus）为对照制剂；

以上述实施例2所制备的司美格鲁肽片剂为受试制剂，通过单中心、随机、开放、单次给药、平行设计临床研究来评价两种制剂的人体相对生物利用度。

同时观察受试制剂和对照制剂在中国健康受试者中的安全性。

（2）研究药物

受试制剂（T）：实施例2的司美格鲁肽片，规格：14mg。

对照制剂（R）：司美格鲁肽片（商品名：Rybelsus），规格：14mg，NOVO NORDISK INC持证。

（3）试验设计

采用单中心、随机、开放、单次给药、平行试验设计。受试者按随机原则分为T、R两组，在空腹状态下接受受试制剂或对照制剂。单词空腹试验健康受试者6例，给药剂量14mg。试验采血时间点：给药前0h（60min内）及给药后15min、30min、45min、1h、75min、1.5h、105min、2h、2.5h、3h、4h、5h、6h、8h、10h、12h、24h、48h、72h，共20个时间点采集静脉血。

（4）给药方式

受试者第一周期禁食过夜至少10h，次日晨空腹以120mL温水送服受试制剂或对照制剂。给药时，研究者指导受试者不要咀嚼药品，而是整片或整粒吞服。服药后要检查口腔、盛药容器、水杯及双手，以确保药物和水已被服用。

受试者在服药前1h至服药后1h内禁止饮水（除给药时给予的120mL水），服药后5h内禁食。

（5）采血

给药前0h及给药后15min、30min、45min、1h、75min、1.5h、105min、2h、2.5h、3h、4h、5h、6h、8h、10h、12h、24h、48h、72h采集血样。

样品采集按照采样方案和临床医院的SOP进行，在指定的理论时间点采集每份血样，每份血样的实际采集时间记录完整。详见采血时间表。采集血样前准备充足的肝素钠抗凝采血管，由研究人员根据方案对其进行统一编号并贴上样本标签，同时对冻存管进行统一编号并粘贴专用标签。静脉采血约4mL，轻柔上下颠倒混匀5-6次。分装全血样品前，需轻柔颠倒采血管使血细胞分布均匀后，立即移取1mL全血至检测管中，将剩余全血转移至备份管中。全程冰浴。

所有受试者血样在采集后2h内均将全血样本放置到超低温冰箱中。

所有血样在两周期试验全部结束后，进行检测。

（6）药动学参数计算

采用非参数统计模型法计算药代动力学参数。

（7）试验结果

司美格鲁肽药代动力学参数结果见表19。

表19

因此，本发明所制备的GLP-1RA制剂在人体药代动力学研究中，表现出超出市售制剂的生物利用度，表明本发明的处方工艺显著改善了司美格鲁肽的口服吸收。

综上，本发明的制备方法以及所制备的GLP-1RA制剂，具有以下技术效果：

1、提高了GLP-1RA的溶解速率和溶出量，由于所得无机纳米颗粒粒径小、反应迅速，因此相较于普通口服GLP-1RA制剂，溶解速率和药物溶出量更高。

2、提高了载药量和药物回收率（超过85%），通过使用渗透促进剂作为表面改性剂，提高了药物回收率，降低了制备过程损耗。

3、联用了黏膜黏附的无机纳米载体和渗透促进的技术方案，促进药物在胃肠道内吸收；粘膜黏附的无机纳米颗粒能够靶向胃或肠道粘膜，有效地保护口服多肽药物免受胃肠道的降解，同时提供多种吸收途径，提高其胃壁吸收能力；渗透促进剂能够改变肠壁屏障的物理和生化性质，增加口服多肽药物的肠壁渗透性，提高吸收能力，增加药物的溶解度，提高其生物利用度。

4、本发明的制备方法能够实现口服多肽药物的有效递送，克服了传统注射给药的不便和痛苦，提高了患者的依从性和生活质量。

5、本发明的制备方法能够保护口服多肽药物免受胃肠道的降解和肝脏的首过效应，提高了口服多肽药物的生物利用度和药效，降低了药物的剂量和毒副作用。

6、本发明的制备方法能够实现口服多肽药物的控制释放和靶向治疗，提高了口服多肽药物的药代动力学和药效学特性，增强了口服多肽药物的治疗效果和安全性。

7、本发明的制备方法采用了简单、经济、可行的制备方法和原料，提高了口服多肽药物的制造和储存的便利性和经济性，具有较强的工业化应用前景。

最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (3)

1.一种提高口服生物利用度的GLP-1RA制剂的制备方法，其特征在于，包括步骤：将GLP-1RA载药纳米颗粒，与渗透促进剂8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠一起进行制剂的制备，得到GLP-1RA制剂；GLP-1RA制剂还包括填充剂、粘合剂和润滑剂；GLP-1RA制剂按照重量份计，包括组分：9-11.6份GLP-1RA载药纳米颗粒、56-80份8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠、15-22份填充剂、1.2-2.5份粘合剂和1.8-2.6份润滑剂；所述填充剂为微晶纤维素，粘合剂为聚维酮，润滑剂为硬脂酸镁；

所述GLP-1RA载药纳米颗粒的制备方法，包括步骤：

（1）将GLP-1RA、表面改性剂1聚乙二醇 6000和氯化钙溶解混合，得到A液；（2）将表面改性剂2、含酸根或含氢氧根离子的药用成分溶解混合，得到B液；所述表面改性剂2选自熊脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、脱氧胆酸钠、龙胆酸、甘氨胆酸中的至少一种；所述含酸根或含氢氧根离子的药用成分为磷酸氢二钠；（3）将A液和B液混合，调节pH，形成沉淀，得到GLP-1RA载药纳米颗粒；

GLP-1RA载药纳米颗粒的制备方法中，各组分的重量份配比为：2-4份GLP-1RA、15-27份HEPES、30-48份氯化钙、0.3-0.8份pH调节剂、42-79份表面改性剂1、7.5-18.2份表面改性剂2和13.5-20.7份含酸根或含氢氧根离子的药用成分；所述GLP-1RA为司美格鲁肽；所述溶解混合过程发生在缓冲盐溶液中，所述缓冲盐溶液为HEPES缓冲液，浓度为10-30mM，pH=7.0-8.5。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述的调节pH为调节至6.0-8.5；在步骤（3）形成沉淀后，还包括离心、沉淀物干燥的步骤，最终得到GLP-1RA载药纳米颗粒。

3.权利要求1-2任一项所述的制备方法所制备得到的GLP-1RA制剂。