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CN118243936A - 一种n末端脑钠肽前体检测试剂盒 - Google Patents

一种n末端脑钠肽前体检测试剂盒 Download PDF

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CN118243936A CN202410659250.XA CN202410659250A CN118243936A CN 118243936 A CN118243936 A CN 118243936A CN 202410659250 A CN202410659250 A CN 202410659250A CN 118243936 A CN118243936 A CN 118243936A
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Abstract

本发明公开了一种N末端脑钠肽前体检测试剂盒及制备方法，属于生物检测技术领域。所述试剂盒包括生物素标记的NT‑proBNP抗体、碱性磷酸酶标记的NT‑proBNP抗体、偶联链霉亲和素的磁微粒、校准品、底物液、清洗液，该试剂盒生物素标记的NT‑proBNP抗体与碱性磷酸酶（AP）标记的配对NT‑proBNP抗体和样本、校准品或质控品中的NT‑proBNP结合形成“三明治”复合物。随后加入连有链霉亲和素的磁微粒，通过链霉亲和素与生物素的特异性结合使抗原抗体免疫复合物结合在磁微粒上，检测灵敏度高，线性范围宽，并且准确度高、稳定性好，有利于N末端脑钠肽前体检测的发展。

Description

一种N末端脑钠肽前体检测试剂盒
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种N末端脑钠肽前体检测试剂盒。
背景技术
N-末端脑钠肽前体（NT-proBNP）主要来源心室肌细胞，是由B型脑钠肽（BNP）酶切后产生，其可在心肌细胞负荷提高时分泌增加，因此，血液中NT-proBNP的浓度与心力衰竭（Heart failure，HF）的严重程度密切相关，对充血性心衰危险分期、心源性猝死的预测以及监测心力衰竭的治疗和预估评价，具有至关重要的临床意义；同时对心源性和非心源性急性呼吸困难的鉴别诊断具有重要的临床指导意义。
目前，国内关于NT-proBNP检测产品技术的研究还处于起步阶段，检测NT-proBNP的方法主要有酶联免疫法(ELISA)、电化学发光法、放射免疫分析法、胶体金法等，其中电化学发光法虽然特异性强，灵敏度高，但检测时需要昂贵的仪器设备，并对操作人员有要求；放射免疫分析法存在放射性污染，试剂有效期短；胶体金法虽然检测简单，但也只能定性测试，灵敏度较低。为此，如果能开发一种准确、快速定量检测NT-proBNP的产品，则有利于NT-proBNP检测技术的发展。
发明内容
针对现有技术的缺陷，本发明设计了一种准确且能定量检测N末端脑钠肽前体的试剂盒。
为了实现上述目的，本发明解决技术问题采用如下技术方案：
一方面，本发明提供了一种N末端脑钠肽前体检测试剂盒，所述试剂盒包括生物素标记的NT-proBNP抗体、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体、偶联链霉亲和素的磁微粒、校准品、底物液、清洗液；
其中，所述磁微粒为氧化锌铁，粒径为0.5-3μm。
优选地，所述试剂盒的制备包括：先制备稀释液1，再用稀释液1分别制备偶联链霉亲和素的磁微粒、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体溶液，再制备生物素标记的NT-proBNP抗体。
优选地，所述稀释液1包括1-4%牛血清白蛋白、0.01-0.1% ProClin300、120-170mmol/L NaCl、0.2-0.7%吐温-20、0.5-2% 海藻糖、2-7%蔗糖、0.5-2%柠檬酸钠、0.5-2%苏氨酸、0.5-2%乙醇、5-15mmol/L 三羟甲基氨基甲烷，pH为7.0-7.8。
优选地，所述稀释液1包括3%牛血清白蛋白、0.05% ProClin300、150 mmol/LNaCl、0.5%吐温-20、1% 海藻糖、5%蔗糖、1%柠檬酸钠、1%苏氨酸、1%乙醇、10 mmol/L 三羟甲基氨基甲烷，pH为7.5。
优选地，所述偶联链霉亲和素的磁微粒的制备包括：将磁微粒用pH5.0缓冲液重悬，然后加入5-15mg/mL活化剂活化0.5-2h，加入链霉亲和素室温反应1-3h，磁分离上清后洗涤，再加入封闭剂封闭0.5-2h后加入稀释液1吸磁制得偶联链霉亲和素的磁微粒；
所述封闭剂为pH为7.0-7.8含有2-8％BSA、0.1% ProClin300的磷酸盐缓冲液。
优选地，所述活化剂为碳化二亚胺盐酸盐、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基丁二酰亚胺、辛二酸亚胺、N-羟基肌醇、琥珀酸酐及N, N'-二氰基-N, N-(二甲基甲酰胺)胍中的一种或者几种。
优选地，所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体溶液：用0.02-0.1 M缓冲液配制10-15mg/mL碱性磷酸酶溶液，再加入100-150μL K2Cr2O7溶液反应1-3h，加入100-150μL N-甲基吡咯烷酮溶液反应1-3h，然后加入抗体混匀后透析20-28h，再加入8-15μL NaBH4溶液反应1-3h后纯化，最后用稀释液1稀释1000倍得到碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体溶液。
优选地，所述生物素标记的NT-proBNP抗体包括：先将抗体加入到p H为7.0-7.50.02-0.1 M缓冲液，然后加入15-25mg/mL生物素溶液于室温中放置4-8h，再纯化并收集纯化后溶液加入0.05-0.2M p H为4.0-5.0的柠檬酸缓冲液稀释至0.2-1mg/mL。
另一方面，本发明还提供了所述的N末端脑钠肽前体检测试剂盒在检测N末端脑钠肽前体中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
本发明制备了一种N末端脑钠肽前体检测试剂盒，所述试剂盒包括生物素标记的NT-proBNP抗体、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体、偶联链霉亲和素的磁微粒、校准品、底物液、清洗液。本发明的试剂盒利用链霉亲和素和生物素的特异性结合，检测灵敏度高，线性范围宽，并且准确度高、稳定性好，有利于N末端脑钠肽前体检测的发展。并且使用时样本无需稀释，可自动化检测，在临床检验和用药指导等方面有广阔的应用前景，填补了链霉亲和素和生物素结合化学免疫荧光技术在N末端脑钠肽前体检测领域的空白。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是实施例1的N末端脑钠肽前体检测试剂盒的标准曲线图。
图2是实施例2的N末端脑钠肽前体检测试剂盒的标准曲线图。
图3是实施例3的N末端脑钠肽前体检测试剂盒的标准曲线图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明中，涉及到数值区间，如无特别说明，上述数值区间内视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。
下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
本试剂盒直接夹心法原理，以磁微粒子作为免疫反应的固相，利用化学发光酶联免疫分析方法与化学发光类测定仪器配合，用于检测人血清、血浆血样本中的NT-proBNP含量。
技术原理为：生物素标记的NT-proBNP抗体与碱性磷酸酶（AP）标记的配对NT-proBNP抗体和样本、校准品或质控品中的NT-proBNP结合形成“三明治”复合物。随后加入连有链霉亲和素的磁微粒，通过链霉亲和素与生物素的特异性结合使抗原抗体免疫复合物结合在磁微粒上。在外加磁场的作用下，将免疫反应形成的复合物与未结合的其他物质分离，清洗复合物后，加入酶促化学发光底物。底物在酶作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时发出光子，形成发光反应，即可使用化学发光仪检测反应的发光强度。在测定波长（230-700nm）范围内，发光强度与样本中的NT-proBNP的含量成正比，使用拟合方程拟合可计算出样本中NT-proBNP浓度。
实施例1
一种N末端脑钠肽前体检测试剂盒，所述试剂盒包括生物素标记的NT-proBNP抗体、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体、偶联链霉亲和素的磁微粒、校准品、底物液（ 3-（2-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-4-（3-磷氧酰）-苯基-1，2-二氧环乙烷二钠盐）、清洗液（Tris缓冲液，pH为8.0）。具体配制如下所示：
1、稀释液1：3%牛血清白蛋白（BSA）、0.05% ProClin300、150 mmol/L NaCl、0.5%吐温-20、1% 海藻糖、5%蔗糖、1%柠檬酸钠、1%苏氨酸、1%乙醇、10 mmol/L 三羟甲基氨基甲烷（Tris），调节pH稳定在7.5。
2、偶联链霉亲和素的磁微粒：
取10mg磁微粒（1.0μm，氧化锌铁）磁分离1min去上清，再用1mL 0.1M MES缓冲液（pH为5.0）重悬，然后加入120μL浓度为10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺活化1h，然后加入1mg链霉亲和素室温反应2h，磁分离1min去上清后用清洗液洗涤3次，再加入1mL pH为7 .5含有5％BSA、0.1% ProClin300的磷酸盐缓冲液室温封闭1h，在磁力架吸磁10min，将上清液移除，使用稀释液1进行重复吸磁，定容至500 mL于4℃保存，得到偶联链霉亲和素的磁微粒。
3、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体溶液：
（1）用120μL 0.05 M碳酸盐缓冲液（p H=9.0）溶解2 mg碱性磷酸酶，使其浓度为12mg/mL，然后加入120μL K2Cr2O7溶液涡旋混匀后于4℃下避光反应2 h，再加入120μL N-甲基吡咯烷酮溶液于4℃下避光反应2 h，然后加入2mg NT-proBNP抗体涡旋混匀后转移至3.5 KSlide-A-Lyzer™微量透析装置中，对0.05 M碳酸盐缓冲液（p H=9.5）于 4℃下避光透析24h。
（2）透析完成后加入10 μL Na BH4溶液于 4℃下避光反应2h，最后纯化未结合的碱性磷酸酶和兔抗猪 Ig GNT-proBNP抗体。
（3）用配制好的稀释液1将碱性磷酸酶标记的NT-proBNP 抗体进行1000倍稀释处理。
4、生物素标记的NT-proBNP抗体：
取5mg NT-proBNP抗体加入到100μL 0.05 M PBS缓冲液（p H=7.2），然后加入35mL生物素溶液（由水N，N-二甲基甲酰胺将生物素配制成20mg/mL的混合溶液）混匀于室温中放置6h，再用蛋白纯化仪进行纯化，收集纯化后溶液，加入0.1M p H为4.2的柠檬酸缓冲液稀释至0.5mg/mL。
实施例2
一种N末端脑钠肽前体检测试剂盒，所述试剂盒包括生物素标记的NT-proBNP抗体、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体、偶联链霉亲和素的磁微粒、校准品、底物液（ 3-（2-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-4-（3-磷氧酰）-苯基-1，2-二氧环乙烷二钠盐）、清洗液（Tris缓冲液，pH为8.0）。具体配制如下所示：
1、稀释液1：1%牛血清白蛋白（BSA）、0.1% ProClin300、170mmol/L NaCl、0.2%吐温-20、0.5% 海藻糖、7%蔗糖、0.5%柠檬酸钠、0.5%苏氨酸、2%乙醇、15 mmol/L 三羟甲基氨基甲烷（Tris），调节pH稳定在7.0。
2、偶联链霉亲和素的磁微粒：
取10mg磁微粒（0.5μm，氧化锌铁）磁分离1min去上清，再用1mL 0.1M MES缓冲液（pH为5.0）重悬，然后加入120μL浓度为5mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺活化2h，然后加入1mg链霉亲和素室温反应3h，磁分离1min去上清后用清洗液洗涤3次，再加入1mL pH为7 .0含有8％BSA、0.1% ProClin300的磷酸盐缓冲液室温封闭2h，在磁力架吸磁10min，将上清液移除，使用稀释液1进行重复吸磁，定容至500 mL于4℃保存，得到偶联链霉亲和素的磁微粒。
3、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体溶液：
（1）用120μL 0.1 M碳酸盐缓冲液（p H=9.0）溶解2 mg碱性磷酸酶，使其浓度为10mg/mL，然后加入100μL K2Cr2O7溶液涡旋混匀后于4℃下避光反应1 h，再加入150μL N-甲基吡咯烷酮溶液于4℃下避光反应3 h，然后加入2mg NT-proBNP抗体涡旋混匀后转移至3.5K Slide-A-Lyzer™微量透析装置中，对0.05 M碳酸盐缓冲液（p H=9.5）于 4℃下避光透析20 h。
（2）透析完成后加入8μL NaBH4溶液于 4℃下避光反应1h，最后纯化未结合的碱性磷酸酶和兔抗猪 Ig GNT-proBNP抗体。
（3）用配制好的稀释液1将碱性磷酸酶标记的NT-proBNP 抗体进行1000倍稀释处理。
4、生物素标记的NT-proBNP抗体：
取5mg NT-proBNP抗体加入到100μL 0.02 M PBS缓冲液（p H=7.0），然后加入35mL生物素溶液（由水N，N-二甲基甲酰胺将生物素配制成15mg/mL的混合溶液）混匀于室温中放置8h，再用蛋白纯化仪进行纯化，收集纯化后溶液，加入0.2M p H为4.0的柠檬酸缓冲液稀释至0.2mg/mL。
实施例3
一种N末端脑钠肽前体检测试剂盒，所述试剂盒包括生物素标记的NT-proBNP抗体、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体、偶联链霉亲和素的磁微粒、校准品、底物液（ 3-（2-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-4-（3-磷氧酰）-苯基-1，2-二氧环乙烷二钠盐）、清洗液（Tris缓冲液，pH为8.0）。具体配制如下所示：
1、稀释液1：4%牛血清白蛋白（BSA）、0.01% ProClin300、120 mmol/L NaCl、0.7%吐温-20、2% 海藻糖、2%蔗糖、2%柠檬酸钠、2%苏氨酸、0.5%乙醇、5 mmol/L 三羟甲基氨基甲烷（Tris），调节pH稳定在7.8。
2、偶联链霉亲和素的磁微粒：
取10mg磁微粒（3.0μm，氧化锌铁）磁分离1min去上清，再用1mL 0.1M MES缓冲液（pH为5.0）重悬，然后加入120μL浓度为15mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺活化0.5h，然后加入1mg链霉亲和素室温反应1h，磁分离1min去上清后用清洗液洗涤3次，再加入1mL pH为7 .8含有2％BSA、0.1% ProClin300的磷酸盐缓冲液室温封闭0.5h，在磁力架吸磁10 min，将上清液移除，使用稀释液1进行重复吸磁，定容至500 mL于4℃保存，得到偶联链霉亲和素的磁微粒。
3、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体溶液：
（1）用120μL 0.02 M碳酸盐缓冲液（p H=9.0）溶解2 mg碱性磷酸酶，使其浓度为15mg/mL，然后加入150μL K2Cr2O7溶液涡旋混匀后于4℃下避光反应3h，再加入100μL N-甲基吡咯烷酮溶液于4℃下避光反应1 h，然后加入2mg NT-proBNP抗体涡旋混匀后转移至3.5 KSlide-A-Lyzer™微量透析装置中，对0.05 M碳酸盐缓冲液（p H=9.5）于 4℃下避光透析28h。
（2）透析完成后加入15 μL NaBH4溶液于 4℃下避光反应3h，最后纯化未结合的碱性磷酸酶和兔抗猪 Ig GNT-proBNP抗体。
（3）用配制好的稀释液1将碱性磷酸酶标记的NT-proBNP 抗体进行1000倍稀释处理。
4、生物素标记的NT-proBNP抗体：
取5mg NT-proBNP抗体加入到100μL 0.1 M PBS缓冲液（p H=7.5），然后加入35mL生物素溶液（由水N，N-二甲基甲酰胺将生物素配制成25mg/mL的混合溶液）混匀于室温中放置4h，再用蛋白纯化仪进行纯化，收集纯化后溶液，加入0.05M p H为5.0的柠檬酸缓冲液稀释至1mg/mL。
对比例1
对比例1与实施例1不同之处在于，所述稀释液1用同等质量的纯水代替，其他都相同。
对比例2
对比例2与实施例1不同之处在于，稀释液1配方不同，其他都相同。
稀释液1：4%牛血清白蛋白（BSA）、0.01% ProClin300、120 mmol/L NaCl、0.7%吐温-20、2% 海藻糖、2%蔗糖、0.5%乙醇、5 mmol/L 三羟甲基氨基甲烷（Tris），调节pH稳定在7.5。
对比例3
对比例3与实施例1不同之处在于，稀释液1配方不同，其他都相同。
稀释液1：4%牛血清白蛋白（BSA）、0.01% ProClin300、120 mmol/L NaCl、0.7%吐温-20、2% 海藻糖、2%柠檬酸钠、2%苏氨酸、5 mmol/L 三羟甲基氨基甲烷（Tris），调节pH稳定在7.5。
测试例1
将实施例1-3和对比例1-3的试剂盒按照化学发光测定仪操作指南操作。
首次启用新试剂盒前，将其小心颠倒多次，确保磁珠混匀，不要倒转已打开的试剂盒。校准品/质控品检测前均需平衡至室温。将试剂瓶放入仪器试剂仓，校准品置于仪器样本仓，待检样本置于仪器样本仓。
一、线性实验
配制校准品稀释液，使用20% BSA、150 mmol/L氯化钠、0.5% 3ProClin300、0.5%吐温-20、1%海藻糖、20 mmol/L Tris、10%甘油，调节pH 稳定在7.2。 使用校准品稀释液对NT-proBNP进行稀释，配制浓度为30、500、2 000、5000、10000、20000、30000pg/mL的校准品。
在仪器中分别添加50 μL待测样本 、50 μL生物素标记的NT-proBNP抗体、50 μL碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体、20μL偶联链霉亲和素的磁微粒，在 37℃环境下孵育10min，进行磁分离清洗；在避光环境下添加200 μL发光底物 3-（2-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-4-（3-磷氧酰）-苯基-1，2-二氧环乙烷二钠盐（AMPPD）；读取总相对光子量。 绘制校准曲线，进行样本检测，依据待检样本测定的相对发光值，通过校准曲线计算浓度。对每个浓度设置3个重复，取平均值，以浓度为横坐标，荧光信号强度测试值为纵坐标，建立拟合标准曲线。
如图1-3所示，实施例1-3的试剂盒在30-30000pg/mL之间具有很好的线性关系，同时该试剂盒的R值分别为0.9969、0.9908、0.9901。
二、精密度实验
用实施例1-3和对比例1-3分别制备20个检测卡，分别用500、2000pg/mL含有NT-proBNP标准品的血清进行检测，实验重复三次，将检测结果计算平均值、标准值，根据平均值和标准值计算变异系数CV，公式如下所示：
；
结果显示，对比例1-3的精密度批内精密度在8-10%之间，批间精密度15-20%之间，而实施例1-3的试剂盒批内精密度≤8%，批间精密度≤15%，说明本发明的试剂盒具有重复性好的优点。
三、稳定性实验
将实施例1-3和对比例1-3的试剂盒置于4℃保存，在3个月、6个月、12个月、20个月分别测试浓度为500pg/mL的NT-proBNP质控品，每次重复5次。结果显示，实施例1-3测试结果相对偏差均不超过±10%，对比例1-3的测试结果相对偏差超过±10%，说明本发明的试剂盒稳定性良好。
此外，本发明的试剂盒在交叉物质ANP：3.1 μg/mL，CNP：2.2 μg/mL，血管紧张素I：0.6 ng/mL，血管紧张素II：0.6 ng/mL，血管紧张素III：1 ng/mL，肾上腺素：1ng/mL时，无交叉反应。待测样本中胆红素≤20mg/dL、血红蛋白≤500mg/dL、甘油三脂≤1500mg/dL、生物素≤30pg/mL、类风湿因子≤1500IU/mL、人抗鼠抗体（HAMAs）≤30ng/mL时，对检测无影响。适用抗凝剂（EDTA、肝素）进行检测对检测无干扰。HOOK效应：300000pg/mL时不会出现钩状效应。
综上所述，本发明提供了一种N末端脑钠肽前体检测试剂盒及制备方法，所述试剂盒包括生物素标记的NT-proBNP抗体、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体、偶联链霉亲和素的磁微粒、校准品、底物液、清洗液，该试剂盒生物素标记的NT-proBNP抗体与碱性磷酸酶（AP）标记的配对NT-proBNP抗体和样本、校准品或质控品中的NT-proBNP结合形成“三明治”复合物。随后加入连有链霉亲和素的磁微粒，通过链霉亲和素与生物素的特异性结合使抗原抗体免疫复合物结合在磁微粒上，检测灵敏度高，线性范围宽，并且准确度高、稳定性好，有利于N末端脑钠肽前体检测的发展，并填补了链霉亲和素和生物素结合化学免疫荧光技术在N末端脑钠肽前体检测领域的空白。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (9)

1.一种N末端脑钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括生物素标记的NT-proBNP抗体、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体、偶联链霉亲和素的磁微粒、校准品、底物液、清洗液；
其中，所述磁微粒为氧化锌铁，粒径为0.5-3μm。
2.根据权利要求1所述的N末端脑钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的制备包括：先制备稀释液1，再用稀释液1分别制备偶联链霉亲和素的磁微粒、碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体溶液，再制备生物素标记的NT-proBNP抗体。
3.根据权利要求2所述的N末端脑钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，所述稀释液1包括1-4%牛血清白蛋白、0.01-0.1% ProClin300、120-170 mmol/L NaCl、0.2-0.7%吐温-20、0.5-2% 海藻糖、2-7%蔗糖、0.5-2%柠檬酸钠、0.5-2%苏氨酸、0.5-2%乙醇、5-15mmol/L 三羟甲基氨基甲烷，pH为7.0-7.8。
4.根据权利要求3所述的N末端脑钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，所述稀释液1包括3%牛血清白蛋白、0.05% ProClin300、150 mmol/L NaCl、0.5%吐温-20、1% 海藻糖、5%蔗糖、1%柠檬酸钠、1%苏氨酸、1%乙醇、10 mmol/L 三羟甲基氨基甲烷，pH为7.5。
5.根据权利要求2所述的N末端脑钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，所述偶联链霉亲和素的磁微粒的制备包括：将磁微粒用pH5.0缓冲液重悬，然后加入5-15mg/mL活化剂活化0.5-2h，加入链霉亲和素室温反应1-3h，磁分离上清后洗涤，再加入封闭剂封闭0.5-2h后加入稀释液1吸磁制得偶联链霉亲和素的磁微粒；
所述封闭剂为pH为7.0-7.8含有2-8％BSA、0.1% ProClin300的磷酸盐缓冲液。
6.根据权利要求5所述的N末端脑钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，所述活化剂为碳化二亚胺盐酸盐、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基丁二酰亚胺、辛二酸亚胺、N-羟基肌醇、琥珀酸酐及N, N'-二氰基-N, N-(二甲基甲酰胺)胍中的一种或者几种。
7.根据权利要求2所述的N末端脑钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体溶液：用0.02-0.1 M缓冲液配制10 -15mg/mL碱性磷酸酶溶液，再加入100-150μL K2Cr2O7溶液反应1-3h，加入100-150μL N-甲基吡咯烷酮溶液反应1-3h，然后加入抗体混匀后透析20-28h，再加入8-15μL NaBH4溶液反应1-3h后纯化，最后用稀释液1稀释1000倍得到碱性磷酸酶标记的NT-proBNP抗体溶液。
8.根据权利要求2所述的N末端脑钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的NT-proBNP抗体包括：先将抗体加入到p H为7.0-7.5 0.02-0.1 M缓冲液，然后加入15-25mg/mL生物素溶液于室温中放置4-8h，再纯化并收集纯化后溶液加入0.05-0.2M p H为4.0-5.0的柠檬酸缓冲液稀释至0.2-1mg/mL。
9.如权利要求1-8任一项所述的N末端脑钠肽前体检测试剂盒在检测N末端脑钠肽前体中的应用。
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