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CN118184658A - Usp1抑制剂 - Google Patents

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Publication number
CN118184658A
CN118184658A CN202311672923.7A CN202311672923A CN118184658A CN 118184658 A CN118184658 A CN 118184658A CN 202311672923 A CN202311672923 A CN 202311672923A CN 118184658 A CN118184658 A CN 118184658A
Authority
CN
China
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mmol
cyclopropyl
pharmaceutically acceptable
trifluoromethyl
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202311672923.7A
Other languages
English (en)
Inventor
覃华
石谷沁
张宇星
徐一鸣
郝俊国
陈昫
冯昊
祝盼虎
付家胜
孙维梅
孙大庆
陶维康
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Qilu Pharmaceutical Research and Development Centre Ltd
Original Assignee
Shanghai Qilu Pharmaceutical Research and Development Centre Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Qilu Pharmaceutical Research and Development Centre Ltd filed Critical Shanghai Qilu Pharmaceutical Research and Development Centre Ltd
Publication of CN118184658A publication Critical patent/CN118184658A/zh
Pending legal-status Critical Current

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Abstract

本发明提供一类式(I’)所示的具有USP1抑制活性的新型化合物，含有所述化合物的药物组合物、制备所述化合物的有用中间体以及利用本发明化合物治疗癌症的方法。

Description

USP1抑制剂
技术领域
本发明属于药物化学领域，涉及具有USP1抑制活性的新型化合物，含有所述化合物的药物组合物、制备所述化合物的有用中间体，以及利用本发明化合物治疗癌症的方法。
背景技术
泛素是一个小的，高度保守的蛋白质76个氨基酸，是翻译后缀合底物蛋白质，包括本身，通过三步酶反应。最初的共价附着主要发生在泛素的C-末端甘氨酸和靶蛋白的赖氨酸残基的ε-氨基之间。1另外的泛素分子可以连接到泛素的七种内部赖氨酸之一，导致不同的泛素链拓扑结构。泛素化的生物学结果是由长度和连接拓扑决定的。与其他类型的翻译后修饰类似，泛素化是一种被称为去泛素化酶(DUBs)的酶反调节的可逆过程，其催化从修饰的蛋白质中去除泛素。更重要的是，泛素依赖性信号通路的功能障碍与各种人类疾病有关，提示抑制泛素途径成分是药物发现的新的治疗靶点。
泛素-蛋白酶体系统为治疗干预提供了额外的机会，可以提高特异性和改善临床疗效的可能性。最明显的目标包括参与泛素缀合和去缀合(即泛素连接酶和DUB)的酶，蛋白酶体介导的蛋白降解的上游过程。在DUB中，泛素特异性蛋白酶1(USP1)因参与调节DNA损伤反应途径而成为一个有吸引力的抗癌靶点。USP1与UAF1(USP1相关因子1)结合，产生去泛素化酶活性所需的异二聚体USP1/UAF1复合物。已经显示USP1/UAF1复合物通过PCNA(增殖细胞核抗原)11和FANCD2(Fanconi贫血互补组D2)的去泛素化来调节DNA交联剂诱导的DNA损伤的耐受性，其分别是在跨损伤合成和Fanconi贫血途径中起作用的蛋白质。
目前根据此类作用机制进行的研究很多，但是并未发现USP1抑制剂类药物上市，因此急需开发有效的USP1抑制剂应用于临床患者。
发明内容
本发明提供了式(I’)所示化合物、其异构体及其药学上可接受的盐：
其中，
X1为CH、N；X2、X3各自独立的为CH、N或CR’，其中，R’为取代或未取代的C3-6环烷基、5-6元杂芳基、苯基、卤素、C1-4卤代烷基、羟基C1-4烷基、-NH-Ar、4-6元杂环基、-NH-CO-C3-6环烷基、8-14元稠杂环基、7-11元螺杂环基、7-14元桥杂环基；
Ra为氢或C1-4烷基；
环A为5-6元杂芳基，Rb各自独立的为卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基；m为0、1、2、3或4；
环B为苯基或11-18三元稠杂环基；Rc为卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、或两个相邻Rc形成取代或未取代的C3-6元环烷基；
所述环C为含有1-4个氮原子的5-10元杂芳基、8-14元稠杂环基；所述Rd各自独立的为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、卤素、C3-6环烷基；n为1、2、3或4；p为1、2、3或4；L1为C1-4亚烷基、C3-6亚环烷基。
本发明提供了式(I’)所示化合物、其异构体及其药学上可接受的盐：
其中，
X1为CH、N；X2、X3各自独立的为CH、N或CR’，其中，R’为取代或未取代的C3-6环烷基、5-6元杂芳基；
Ra为氢或C1-4烷基；
环A为5-6元杂芳基，Rb各自独立的为卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基；m为0、1、2、3或4；
环B为苯基或11-18元三环稠杂环基；Rc为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、或卤素，
所述环C为含有1-4个氮原子的5-10元杂芳基、8-14元稠杂环基；所述Rd各自独立的为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、卤素、C3-6环烷基；n为1、2、3或4；p为1、2、3或4；L1为C1-4亚烷基、C3-6亚环烷基。
本发明提供了式(I’)所示化合物及药学上可接受的盐：
其中，
X1为CH、N；X2、X3各自独立的为CH、N或CR’，其中，R’为取代或未取代的C3-6环烷基、5-6元杂芳基；
Ra为氢或C1-4烷基；
环A为5-6元杂芳基，Rb各自独立的为卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基；m为1、2、3或4；
环B为苯基或11-14元三环稠杂环基；Rc为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基或所述环C为含有1-4个氮原子的5-10元杂芳基；所述Rd各自独立的为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基；n为1、2、3或4；p为1、2、3或4；
L1为C1-4亚烷基、C3-6亚环烷基。
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，R’为
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，中，其特征在于，R’为-Cl、-CHF2、
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，，其特征在于，环A为
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，环A为
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，Rb为Cl-、CH3-、CH(CH3)2-、CH3O-、
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元为
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元为
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，环B为苯基，Rc为环C，其中环C可以被p个Rd取代；所述环C为含有1-4个氮原子的5-10元杂芳基、5-10元杂环基；所述Rd各自独立的为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、卤素、C3-6环烷基；n为1、2、3或4；p为1、2、3或4。
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，环B为苯基，Rc为环C，其中环C可以被p个Rd取代；所述环C为含有1-4个氮原子的5-10元杂芳基；所述Rd各自独立的为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、卤素、C3-6环烷基；n为1、2、3或4；p为1、2、3或4。
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，环B为11-18元三环稠杂环基；Rc为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、卤素；n为1、2、3或4。
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，环B为11-14元三环稠杂环基；Rc为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基；n为1、2、3或4。
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，环B为
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，环B为
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，Rc为-CF3、-OCH3、-F、
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元为
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，Rd为-CH3、-CH(CH3)2、-CF3、-OCH2CH3。
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，Rd为-Cl、-F、
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，环C为
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元为
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，L1为-CH2-。
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元为
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，，其特征在于，所述化合物、其异构体及药学上可接受的盐选自，
其中环A、环B、Ra、Rb、Rc、R’、L1、m、n如前述所述定义。
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，选自，
其中环A、环C、Ra、Rb、R’、L1、Rd、p、m如前述所述定义。
在本发明的一些方案中，上述式(I’)化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，选自，
其中R’如前述所述定义。
本发明还提供了下列所示化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，
本发明还提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的上述化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
“药学上可接受的载体”指本领域通常可接受的用于将生物活性药剂递送给动物、特别是哺乳动物的介质，根据给药方式和剂型的性质包括例如佐剂、赋形剂或赋形物，例如稀释剂、防腐剂、填充剂、流动调节剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂。药学上可接受的载体在本领域普通技术人员的眼界范围内根据大量因素配制。其包括但不限于：配制的活性药剂的类型和性质，要将含有该药剂的组合物给药的对象，组合物的预期给药途径，和目标治疗适应症。药学上可接受的载体包括含水介质和非水介质这两者以及多种固体和半固体剂型。除了活性药剂以外，这样的载体包括许多不同的成分和添加剂，因多种原因(例如稳定活性药剂、粘合剂等)在处方中包括的这样的另外的成分对于本领域普通技术人员是众所周知的。
本发明还提供上述化合物或其药学上可接受的盐或上述的药物组合物在制备治疗USP1介导的疾病药物中的应用，所述USP1介导的相关疾病包括癌症。
技术效果
本发明化合物有明显的USP1酶学抑制活性，可用于癌症的治疗。
说明和定义
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。
术语“药学上可接受的”指在合理的医学判断范围内适合与人类和动物的组织接触使用而无过度的毒性、刺激、过敏反应或其它的问题或并发症，与合理的收益/风险比相当的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与相对无毒的酸或碱制备得到的衍生物。这些盐可以在化合物合成、分离、纯化期间就被制备，或者单独使用经过纯化的化合物的游离形式与适合的酸或碱反应。当化合物中含有相对酸性的官能团时，与碱金属、碱土金属氢氧化物或有机胺反应得到碱加成盐，包括基于碱金属与碱土金属的阳离子以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，还涵盖氨基酸的盐等。当化合物中含有相对碱性的官能团时，与有机酸或无机酸反应得到酸加成盐。
术语“药学上可接受的载体”是指本领域通常可接受的用于将生物活性药剂递送给动物、特别是哺乳动物的介质，根据给药方式和剂型的性质包括例如佐剂、赋形剂或赋形物，例如稀释剂、防腐剂、填充剂、流动调节剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂。药学上可接受的载体在本领域普通技术人员的眼界范围内根据大量因素配制。其包括但不限于：配制的活性药剂的类型和性质，要将含有该药剂的组合物给药的对象，组合物的预期给药途径，和目标治疗适应症。药学上可接受的载体包括含水介质和非水介质这两者以及多种固体和半固体剂型。除了活性药剂以外，这样的载体包括许多不同的成分和添加剂，因多种原因(例如稳定活性药剂、粘合剂等)在处方中包括的这样的另外的成分对于本领域普通技术人员是众所周知的。
术语“赋形剂”通常是指配制有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。
术语“有效预防或治疗量”是指本发明化合物或其药学上可接受的盐以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明式I’所示化合物或其药学上可接受的盐和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
除非另有规定，通式中是指可以是单键，也可以是双键。
除非另有规定，通式中“Ar”是指具有共轭π电子体系的单环或双环基团。所述“Ar”的实例包括但不限于苯基、萘基。
除非另有规定，术语“5-10元杂芳基”，表示由5-10个环原子组成的具有共轭π电子体系的单环或双环基团，其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子，其余为碳原子。其中氮原子任选地被季铵化，氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。5-10元杂芳基可通过杂原子或碳原子连接到分子的其余部分。所述“5-10元杂芳基”可以为稠杂芳基，优选的可以为5-6元杂芳基并5-6元杂芳基、苯基并5-6元杂芳基，更优选的可以为5元杂芳基并5元杂芳基、5元杂芳基并6元杂芳基。所述5-10元杂芳基的实例包括但不限于吡咯基(包括N-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基(包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基(包括N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、噁唑基(包括2-噁唑基、4-噁唑基和5-噁唑基等)、三唑基(1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基、1H-1,2,4-三唑基和4H-1,2,4-三唑基等)、四唑基、异噁唑基(3-异噁唑基、4-异噁唑基和5-异噁唑基等)、噻唑基(包括2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基等)、呋喃基(包括2-呋喃基和3-呋喃基等)、噻吩基(包括2-噻吩基和3-噻吩基)、吡啶基、嘧啶基、苯并咪唑基、吡啶并咪唑基等。
除非另有规定，术语“三环稠杂环基”是指三个环相互间共用两个相邻的环原子所形成的环状结构，且其中至少一个环为杂环；所述的稠杂环基可由选自苯基、环烷基、杂环基、杂芳基的环状基团稠合而成，且其中至少一个是杂环基或杂芳环基，具体稠合方式包括但不限于苯并杂环基并杂芳基、苯并杂芳基并杂芳基、杂芳基并杂环基并杂芳基等。三环稠杂环基的实例，包括但不限于
除非另有规定，术语“C1-4亚烷基”用于表示C1-4直链或支链的饱和亚烃基。亚烷的实例包括，但不限于-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3、-(CH2)4-、-CH(CH3)-、-C(CH3)2-。
除非另有规定，术语“羟基C1-4烷基”指C1-4烷基中的氢原子任意被羟基取代的结构，“C1-4烷基-OH”的实例包括但不仅限于-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2CH2CH2OH、-CH2CH(OH)CH3、、-CH2CH2CH2CH2OH、-CH2CH(OH)CH2CH3、-CH2CH2CH(OH)CH3、等。
除非另有规定，术语“C3-6亚环烷基”用于表示C3-6环状亚烃基。环状亚烃基的实例包括，但不限于
除非另有规定，术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘原子。
除非另有规定，术语“C1-4的烷基”用于表示C1-4直链或支链的饱和烃基。烷基的实例包括，但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基等。
除非另有规定，术语“C1-4烷氧基”是指通过氧桥连接的C1-4烷基，化合物包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基。
除非另有规定，“C3-6环烷基”是指3-6元单环烷基，优选5-6元环烷基，这些单环烷基的实例包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基。
除非另有规定，术语“含有1-4个氮原子的5-6元杂芳基”是指环中5-6元杂芳基中的环原子中含有1，2，3或者4个氮原子，实例包括但不仅限于
除非另有规定，“取代或未取代的C3-6环烷基、5-6元杂芳基”，是指C3-6环烷基、5-6元杂芳基可以被一个或多个取代基取代，也可以不被取代，所述的取代基可选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基等；这些“取代或未取代的C3-6环烷基、5-6元杂芳基”的实例包括，但不限于
除非另有规定，术语“杂环基”是指含有至少一个杂原子作为环原子、去除一个氢原子所衍生的、非芳族的环状基团，杂原子选自CO、N、O、S、NO、SO、S(O)2。包括饱和或部分饱和的单环杂环基和多环杂环基；所述杂环基与连接位置无关(即，可以通过碳原子或杂原子结合)。所述多环杂环基包括稠杂环基、螺杂环基、桥杂环基。所述“杂环基”优选5-6元单杂环基、8-14元稠杂环基、7-11元螺杂环基、5至14元桥杂环基。所述“杂环基”的具体实例包括但不限于
除非另有规定，所述的“稠杂环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子所形成的、含有至少一个环原子为杂原子的、饱和或部分饱和的非芳香性环状基团；所述杂原子一般选自CO、N、O、S、NO、SO、S(O)2。本发明所述的“8-14元稠杂环基”包括“8-14元饱和稠杂环基”和“8-14元部分饱和稠杂环基”。稠和方式可以为5-6元杂环基并5-6元环烷基、5-6元杂环基并5-6元杂环基、5-6元杂芳基并5-6元杂环基、苯并5-6元杂环基。所述的稠杂环基的具体实例包括但不限于：
除非另有规定，所述的“螺杂环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用一个环原子所形成的、含有至少一个环原子为杂原子的、饱和或部分饱和的环状结构。所述杂原子一般选自CO、N、O、S、NO、SO、S(O)2。所述“7-11元螺杂环基”包括“7-11元饱和螺杂环基”和“7-11元部分饱和螺杂环基”。具体实例包括但不仅限于：等。
除非另有规定，所述的“桥杂环基”指任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自CO、N、O、S、NO、SO、S(O)2的杂原子，其余环原子为碳。优选为5至14元，更优选为7至14元。根据组成环的数目可以分为双环、三环。具体实例包括但不仅限于：
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)，或超高效液质联用色谱(UPLC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker Neo 400M或者Bruker Ascend 400核磁仪器，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代甲醇(CD3OD)和氘代氯仿(CDCl3)，重水(D2O)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent 1260-6125B single quadrupole massspectrometer，质谱仪(离子源为电喷雾离子化)。
超高效液质联用色谱UPLC-MS的测定用Waters UPLC H-class SQD质谱仪(离子源为电喷雾离子化)。
HPLC的测定使用Waters e2695-2998或Waters ARC和Agilent 1260或AgilentPoroshell HPH高效液相色谱。
制备HPLC使用Waters 2555-2489(10μm，ODS250cm×5cm)或GILSON TrilutionLC。
手性HPLC测定使用waters acquity UPC2；柱子为Daicel chi环Clpak AD-H(5um,4.6*250mm)。
超临界流体色谱(SFC)使用waters SFC 80Q。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气气氛下进行，溶剂为干燥溶剂，反应温度单位为摄氏度。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
一、制备方法
中间体INT-1:(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯基)甲醇
步骤A:在室温条件下，将3,3-二溴-1,1,1-三氟丙烷-2-酮(144g,0.54mol)和醋酸钠(80g,0.67mol)溶于水(320mL)中。随后，将上述溶液升温至90℃，搅拌0.5小时。然后反应体系降至0℃，将4-甲酰基苯甲酸甲酯(80g,0.49mol)和28％wt氨水(400mL)的甲醇(120mL)混合溶液缓慢滴加到上述反应溶液中。最后该反应体系在室温条件下继续搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤饼用乙酸乙酯(100mL×3次)淋洗。然后收集滤液，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到104g 4-(4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯甲酸甲酯。
MS(ESI)M/Z:271.0[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将4-(4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯甲酸甲酯(69g,0.25mol)和碳酸铯(250g,0.76mol)溶于乙腈(1.2L)中，搅拌2小时。随后，2-碘代丙烷(64.9g,0.38mol)加入到上述溶液中，将反应体系加热至50℃，并搅拌24小时。接着将反应体系降至0℃，继续加入2-碘代丙烷(21.6g,0.13mo)。然后该反应体系在50℃搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应溶液加入到冰水(1.5L)淬灭，混合液用有乙酸乙酯(500mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(150mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到33g 4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯甲酸甲酯。
MS(ESI)M/Z:313.2[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯甲酸甲酯(33g,0.11mol)溶于干燥四氢呋喃(528mL)中。随后，在0℃下，向上述溶液中缓慢滴加2.5M氢化铝锂溶液(85mL,0.22mol)。然后该反应体系在室温条件下继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢滴加到冰水(1L)淬灭，过滤，滤饼用乙酸乙酯(100mL×3次)洗涤。滤液用有乙酸乙酯(500mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(150mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到28g(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯基)甲醇。
MS(ESI)M/Z:285.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47-7.32(m,5H),4.72(s,2H),4.59-4.46(m,1H),2.97(br,1H),1.44(d,J＝6.8Hz,6H).
中间体INT-2:2-(4-(溴甲基)苯基)-1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H咪唑
步骤A:在室温条件下，将(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯基)甲醇(700mg,2.46mmol)溶于二氯甲烷(12.5mL)中。然后，向上述溶液中依次加入三苯基膦(1.29g,4.93mmol)、碳酸氢钠(414mg,4.93mmol)和四溴化碳(1.63g,4.93mmol)。然后该反应体系在室温条件下继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用有二氯甲烷(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到820mg 2-(4-(溴甲基)苯基)-1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H咪唑。
MS(ESI)M/Z:347.2[M+H]+.
中间体INT-3:2-(4-(溴甲基)苯基)-1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H咪唑
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物4-氯-6-甲氧基嘧啶(25g,172.94mmol)、环丙基硼酸(25.25g,294mmol)、1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(6.3g,8.68mmol)、磷酸钾(73.42g,345.88mmol)和氧化银(20.04g,86.47mmol)溶于1,4-二氧六环(868mL)中。然后将上述溶液升温至90℃，搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，趁热过滤，滤液减压浓缩。向所得残留物中加水(500mL)淬灭，混合液用二氯甲烷(100mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(150mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到18.3g 4-环丙基-6-甲氧基嘧啶。
MS(ESI)M/Z:151.2[M+H]+.
步骤B：在-20摄氏度条件下，氮气保护，将4-环丙基-6-甲氧基嘧啶(45g,299.64mmol)溶于乙醇(1.5L)中。随后，向上述溶液中缓慢滴加液溴(240g，1.5mol)。然后该反应体系在室温下继续搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将上述反应液减压蒸馏浓缩。所得粗品用乙酸乙酯打浆，过滤，收集滤饼。然后将滤饼加入到水(150mL)中，并在0℃下搅拌，滴加饱和碳酸氢钠溶液至溶液体系pH至7。最后将混合液过滤，滤饼用水(150mL×2次)淋洗，收集滤饼，减压浓缩，得到56g 5-溴-4-环丙基-6-甲氧基嘧啶。
MS(ESI)M/Z:230.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),3.99(s,3H),2.50-2.44(m,1H),1.16-1.09(m,2H),1.08-1.02(m,2H).
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将5-溴-4-环丙基-6-甲氧基嘧啶(15.0g,65.79mmol)和硼酸三异丙酯(16.08g,85.53mmol)溶于甲苯/四氢呋喃(150mL/45mL)中。随后，将上述反应液将至-78℃，搅拌30分钟，并缓慢滴加2.5M正丁基锂溶液(34.2mL,85.53mmol)，搅拌30分钟。然后反应体系升温至-20℃，继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液加入到冰水(100mL)中淬灭，然后将混合液过滤，滤饼用水(20mL×3次)淋洗,得到9.7g(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸。
MS(ESI)M/Z:195.0[M+H]+.
中间体INT-4:2-(4-(溴甲基)苯基)-1-甲基-4-(三氟甲基)-1H咪唑
步骤A:在室温条件下，将4-(4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯甲酸甲酯(5g,18.45mmol)和碳酸钾(5.1g,36.7mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(92mL)中。随后，将反应体系降至0℃，缓慢滴加碘甲烷(3.14g,22.14mmol。然后该反应体系在室温条件下继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(200mL)淬灭，混合液用有乙酸乙酯(60mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到3.2g 4-(1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯甲酸甲酯。
MS(ESI)M/Z:285.0[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将4-(1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯甲酸甲酯(3.2g,11.26mmol)溶于四氢呋喃(28mL)中。随后，将反应体系降至0℃，缓慢滴加四氢铝锂(2.14g,56.32mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(100mL)淬灭，混合液用有乙酸乙酯(60mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到2.6g(4-(1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯基)甲醇。
MS(ESI)M/Z:257.0[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将(4-(1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯基)甲醇(2.6g,10.12mmol)、碳酸氢钠(1.7g,20.24mmol)、三苯基膦(5.3g,20.24mmol)溶于二氯甲烷(51mL)中。随后，将反应体系降至0℃，缓慢加入四溴化碳(6.7g,20.24mmol)。然后该反应体系升至室温，继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(100mL)淬灭，混合液用有二氯甲烷(50mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(80mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到2.4g(2-(4-(溴甲基)苯基)-1-甲基-4-(三氟甲基)-1H咪唑。
MS(ESI)M/Z:319.0[M+H]+.
中间体INT-5:(4-(1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)-3-甲氧基苯基)甲醇
步骤A:在室温条件下，将3,3-二溴-1,1,1-三氟丙烷-2-酮(40.2g,0.15mol)和醋酸钠(12.25g,0.15mol)溶于水(36mL)中。随后，将上述溶液升温至90℃，搅拌0.5小时。然后，将反应体系降至0℃，将4-甲酰基-3-甲氧基苯甲酸甲酯(10g,51.54mmol)、28％wt氨水(45mL)和甲醇(135mL)的混合溶液缓慢滴加到上述反应溶液中。最后，该反应体系在室温条件下继续搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，然后滤饼用乙酸乙酯/石油醚(v/v,3/1)淋洗，收集滤液，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到10.85g 3-甲氧基-4-(4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯甲酸甲酯。
MS(ESI)M/Z:301.0[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将3-甲氧基-4-(4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯甲酸甲酯(500mg,1.67mmol)和碳酸钾(461mg,3.34mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(9mL)中。随后，在冰水浴条件下，向上述溶液中滴加2-碘代甲烷(355mg,2.50mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(50mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(25mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(40mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到500mg 3-甲氧基-4-(1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯甲酸甲酯。
MS(ESI)M/Z:315.0[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将3-甲氧基-4-(1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯甲酸甲酯(500mg,1.60mmol)溶于干燥四氢呋喃(8mL)中。随后，在0摄氏度条件下，向上述溶液中缓慢滴加2.5M氢化铝锂溶液(3.2mL,8mmol)。然后该反应体系在室温条件下继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢滴加到冰水(50m L)中淬灭，过滤，滤饼用乙酸乙酯(30mL×3次)淋洗。然后所得滤液分液，水相用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并所有有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤。最后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到400mg(3-甲氧基-4-(1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯基)甲醇。
MS(ESI)M/Z:287.0[M+H]+.
中间体INT-6:4-氯-1-异丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯并呋喃-2-基)-1H吡唑
步骤A:在室温条件下，将4-氯-1H-吡唑(5g,0.049mol)、2-碘丙烷(20g,0.118mol)和碳酸铯(33g,0.1mol)溶于乙腈(40mL)中。然后反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(100mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到3.62g 4-氯-1-异丙基-1H-吡唑。
MS(ESI)M/Z:145.2[M+H]+.
步骤B：在0℃下，氮气保护，将4-氯-1-异丙基-1H-吡唑(2g,0.014mol)溶于四氢呋喃(14mL)中。随后，向上述溶液中滴加正丁基锂(11.2mL,0.017mol)，升至室温，搅拌1小时。然后将反应液降至-78℃，缓慢滴加2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(3.45g,0.018mol)，升至室温，搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加饱和氯化铵水溶液(40mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到2.4g 4-氯-1-异丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯并呋喃-2-基)-1H吡唑。
MS(ESI)M/Z:271.0[M+H]+.
中间体INT-7:1-(4-(溴甲基)苯基)-5-乙氧基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑
步骤A:在室温条件下，将4-肼基苯甲酸(5g,32.9mmol)和4,4,4-三氟-3-氧代丁酸乙酯(6g,32.9mmol)溶于甲醇/盐酸(73mL/14.6mL)中。然后反应体系在室温条件下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到8.3g4-(5-羟基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯。
MS(ESI)M/Z:287.0[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将4-(5-羟基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(5g,17.5mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(87mL)中。随后，向上述溶液中加入氢化钠(1.39g,34.96mmol)，搅拌30分钟。然后缓慢滴加碘乙烷(5.4g,34.96mmol)，并在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(250mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(80mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(250mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到3.7g 4-(5-乙氧基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯。
MS(ESI)M/Z:315.0[M+H]+.
步骤C：在0℃条件下，氮气保护，将4-(5-乙氧基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(3.7g,11.78mmol)溶于四氢呋喃(59mL)中。随后，向上述溶液中加入氢化铝锂(9.4mL,23.56mmol)，并继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，将反应溶液缓慢滴加到冰水(150mL)中淬灭，过滤，滤液用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水溶液(150mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到3g(4-(5-乙氧基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯基)甲醇。
MS(ESI)M/Z:287.0[M+H]+.
步骤D：在0℃条件下，氮气保护，将(4-(5-乙氧基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯基)甲醇(1.5g,5.24mmol)溶于二氯甲烷(26mL)中。随后，向上述溶液中依次加入三苯基膦(2.7g,10.48mmol)、碳酸氢钠(880mg,10.48mmol)和四溴化碳(3.46g,10.48mmol)。然后该反应体系在室温下继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(150mL)淬灭。混合液用二氯甲烷(50mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水溶液(150mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到1.8g 1-(4-(溴甲基)苯基)-5-乙氧基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑。
MS(ESI)M/Z:348.8[M+H]+.
中间体INT-8:1-(4-(溴甲基)苯基)-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H吡唑
步骤A：在室温条件下，将4-肼基苯甲酸甲酯盐酸盐(1g,4.93mmol)溶于乙醇(25mL)中。随后，在冰水浴条件下，向上述溶液中加入1,1,1-三氟戊烷-2,4-二酮(912mg,5.92mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，将所得残余物加入到冰水(50mL)中淬灭。混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到170mg 4-(5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯。
MS(ESI)M/Z:285.0[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将4-(5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯甲酸甲酯(170mg,0.60mmol)溶于干燥四氢呋喃(3mL)中。随后，在0摄氏度条件下，向上述溶液中缓慢滴加2.5M氢化铝锂溶液(1.2mL,3mmol)。然后该反应体系在室温条件下继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢滴加到冰水(50mL)中淬灭，过滤，滤饼用乙酸乙酯(30mL×3次)淋洗。然后收集滤液，分液，水相用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤。最后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到120mg(4-(5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯基)甲醇。
MS(ESI)M/Z:257.2[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，将(4-(5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯基)甲醇(120mg,0.47mmol)溶于二氯甲烷(2.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入碳酸氢钠(79mg,0.94mmol)、三苯基膦(247mg,0.94mmol)和四溴化碳(312mg,0.94mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到140mg 1-(4-(溴甲基)苯基)-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H吡唑。
MS(ESI)M/Z:319.0[M+H]+.
实施例1:3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(1g,6.49mmol)、3.4二氢-2H-吡喃(1.1g,12.98mmol)和4-甲基苯磺酸吡啶(163mg,0.65mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中。然后该反应体系在60℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加入冰水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得残余物。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到1.4g中间体1-1。
MS(ESI)M/Z:239.2[M+H]+.
步骤B:在室温条件下，将6-氯-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(800mg,2.27mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(1.71g,8.82mmol)、磷酸钾(1.37g,6.47mmol)、2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(694mg,0.88mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(50mg,0.06mmol)溶于1,4-二氧六环/水(21mL/7mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加入到冰水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得残余物。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到800mg中间体1-2。
MS(ESI)M/Z:353.0[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，将6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(800mg,2.27mmol)溶于二氯甲烷(12mL)中。随后，在0℃下，向上述溶液中加入三氟乙酸(12mL)。然后该反应体系在室温下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，向所得残余物中加入冰水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到740mg中间体1-3。
MS(ESI)M/Z:269.2[M+H]+.
步骤D：在室温条件下，将6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(200mg,0.75mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，向上述溶液中加入N-溴代丁二酰亚胺(267mg,1.5mmol)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应溶液加入到冰水(40mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到230mg中间体1-4。
MS(ESI)M/Z:347.0[M+H]+.
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(230mg,0.67mmol)、(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯基)甲醇(208mg,0.73mmol)和三苯基膦(262mg,1.0mmol)溶于四氢呋喃(4.0mL)中。随后，在冰水浴条件下，向上述溶液中加入偶氮二甲酸二异丙酯(202mg,1.0mmol)。然后该反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到230mg中间体1-5。
MS(ESI)M/Z:613.0[M+H]+.
步骤F：在室温条件下，将3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶(100mg,0.16mmol)、环丙基硼酸(30mg,0.28mmol)、磷酸钾(70mg,0.32mmol)、氧化银(20mg,0.08mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(20mg,0.02mmol)溶于1,4-二氧六环(4mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在100摄氏度下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，向上述反应溶液中加冰水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。，得到63.21mg化合物1。
MS(ESI)M/Z:575.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.46(s,1H),8.70(s,1H),8.17(d,J＝0.8Hz,1H),7.52(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(d,J＝8.4Hz,2H),5.67(s,2H),4.48-4.37(m,1H),3.85(s,3H),2.47-2.40(m,1H),1.69-1.61(m,1H),1.38(d,J＝6.8Hz,6H),1.15-1.10(m,4H),1.08-1.02(m,2H),0.88-0.81(m,2H).
实施例2:5-环丙基-2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(200mg,0.87mmol)、(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯基)甲醇(270mg,0.95mmol)和三苯基磷(342mg,1.31mmol)溶于四氢呋喃(4.5mL)中。随后，在冰水浴条件下，向上述溶液中加入偶氮二甲酸二异丙酯(264mg,1.31mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加入冰水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到400mg中间体2-1。
MS(ESI)M/Z:497.8[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将5-溴-2-氯-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(400mg,0.80mmol)、环丙基硼酸(118mg,1.37mmol)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(98mg,0.12mmol)、氧化银(93mg,0.40mmol)和磷酸钾(340mg,1.60mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)中。然后，真空抽空气置换氮气4次，升至100℃，搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应溶液加入到冰水(40mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得残余物。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到200mg中间体2-2。
MS(ESI)M/Z:460.0[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，将2-氯-5-环丙基-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(100mg,0.22mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(86mg,0.44mmol)、碳酸铯(144mg,0.44mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(35mg,0.04mmol)溶于1,4-二氧六环/水(2.7mL/0.3mL)中。然后反应体系真空抽空气置换氮气3次，升至100℃，搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，向上述反应溶液中加冰水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到8.42mg化合物2。
MS(ESI)M/Z:574.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,1H),8.67(s,1H),8.16(d,J＝0.8Hz,1H),7.57(s,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(d,J＝8.4Hz,2H),5.48(s,2H),4.46-4.35(m,1H),3.83(s,3H),2.13-2.04(m,1H),1.67-1.59(m,1H),1.37(d,J＝6.8Hz,6H),1.05-1.00(m,2H),0.99-0.92(m,2H),0.84-0.74(m,4H).
实施例3:3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-(4-(5-乙氧基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苄基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶
参考实施例1制备方法制备得到化合物3
MS(ESI)M/Z:577.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),8.70(s,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),6.44(s,1H),5.64(s,2H),4.26(q,J＝6.8Hz,2H),3.85(s,3H),2.46-2.39(m,1H),1.70-1.59(m,1H),1.33(t,J＝7.0Hz,3H),1.16-1.08(m,4H),1.08-1.01(m,2H),0.90-0.78(m,2H).
实施例4:3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-(4-(1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶
参考实施例1制备方法制备得到化合物4
MS(ESI)M/Z:547.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.45(s,1H),8.70(s,1H),7.92(s,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,2H),7.38(d,J＝8.4Hz,2H),5.66(s,2H),3.85(s,3H),3.75(s,3H),2.46-2.40(m,1H),1.71-1.59(m,1H),1.12(d,J＝6.8Hz,4H),1.09-1.02(m,2H),0.89-0.82(m,2H).
实施例5:6-(4-氯-1-异丙基-1H-吡唑-5-基)-3-环丙基-1-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶
参考实施例1制备方法制备得到化合物5
MS(ESI)M/Z:569.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),8.16(d,J＝0.8Hz,1H),7.75(s,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,2H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),5.69(s,2H),5.31-5.19(m,1H),4.49-4.36(m,1H),2.48-2.40(m,1H),1.43-1.35(m,12H),1.14(d,J＝6.8Hz,4H).
实施例6:6-(4-氯-1-异丙基-1H-吡唑-5-基)-3-环丙基-1-(4-(1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶
参考实施例1制备方法制备得到化合物6
MS(ESI)M/Z:541.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),7.92(d,J＝1.4Hz,1H),7.75(s,1H),7.69(d,J＝8.3Hz,2H),7.42(d,J＝8.3Hz,2H),5.68(s,2H),5.25(p,J＝6.6Hz,1H),3.75(s,3H),2.48-2.41(m,1H),1.40(d,J＝6.6Hz,6H),1.14(d,J＝6.7Hz,4H).
实施例7:6-(4-氯-1-异丙基-1H-吡唑-5-基)-3-环丙基-1-(3-甲氧基-4-(1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶
参考实施例1制备方法制备得到化合物7
MS(ESI)M/Z:571.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.52(s,1H),7.88(d,J＝1.3Hz,1H),7.75(s,1H),7.31(d,J＝7.7Hz,1H),7.20(d,J＝1.6Hz,1H),6.87(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),5.68(s,2H),5.35-5.17(m,1H),3.78(s,3H),3.46(s,3H),2.49-2.42(m,1H),1.40(d,J＝6.6Hz,6H),1.17-1.11(m,4H).
实施例8:3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-(4-(5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苄基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶
参考实施例1制备方法制备得到化合物8
MS(ESI)M/Z:547.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.46(s,1H),8.70(s,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.8Hz,2H),6.74(s,1H),5.68(s,2H),3.85(s,3H),2.46-2.41(m,1H),2.31(s,3H),1.69-1.61(m,1H),1.13(d,J＝6.4Hz,4H),1.08-1.01(m,2H),0.90-0.81(m,2H).
实施例9:6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-3-(呋喃-3-基)-1-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
反应路线:
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(150mg,0.43mmol)、(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯基)甲醇(124mg,0.43mmol)和三苯基膦(170mg,0.65mmol)溶于干燥四氢呋喃(2.5mL)中。随后，在冰水浴条件下，向上述溶液中缓慢滴加偶氮二甲酸二异丙酯(130mg,0.65mmol)。然后该反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(40mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到200mg 3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:613.0[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶(100mg,0.16mmol)、2-(呋喃-3-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(54mg,0.28mmol)、磷酸钾(70mg,0.32mmol)、氧化银(20mg,0.08mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(20mg,0.02mmol)溶于1,4-二氧六环(1mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在100摄氏度下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，向上述反应溶液中加冰水(50mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到63.21mg化合物9。
MS(ESI)M/Z:601.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.83(s,1H),8.74(s,1H),8.72(s,1H),8.16(d,J＝1.4Hz,1H),7.91(t,J＝1.7Hz,1H),7.54(d,J＝8.3Hz,2H),7.45(d,J＝8.2Hz,2H),7.13(d,J＝1.9Hz,1H),5.81(s,2H),4.48-4.35(m,1H),3.87(s,3H),1.77-1.64(m,1H),1.37(d,J＝6.6Hz,6H),1.11-1.04(m,2H),0.92-0.79(m,2H).
实例10:6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-3-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
参考实施例9制备方法制备得到化合物10
MS(ESI)M/Z:601.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.34(s,1H),9.76(s,1H),8.72(s,1H),8.16(d,J＝1.4Hz,1H),7.94(s,1H),7.54(d,J＝8.2Hz,2H),7.45(d,J＝8.0Hz,2H),6.88(s,1H),5.82(s,2H),4.48-4.35(m,1H),3.87(s,3H),1.78-1.66(m,1H),1.37(d,J＝6.6Hz,6H),1.09-1.03(m,2H),0.90-0.82(m,2H).
实施例11:3-环丙基-6-(2-异丙基吡啶-3-基)-1-(4-(1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
参考实施例1制备方法制备得到化合物11
MS(ESI)M/Z:518.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.47(s,1H),8.66(dd,J＝4.7,1.8Hz,1H),8.10(dd,J＝7.8,1.8Hz,1H),7.69(d,J＝8.3Hz,2H),7.43-7.32(m,3H),5.68(s,2H),3.75(s,3H),3.73-3.62(m,1H),2.49-2.43(m,1H),1.20(d,J＝6.7Hz,6H),1.17-1.09(m,4H).
实施例12:2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(4.0g,25.97mmol)、碳酸钾(1.34g,9.74mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(33mL)中，搅拌30分钟。随后，苯磺酰氯(6.9g,38.96mmol)缓慢滴加到上述反应溶液中，并在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(150mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到2g 2-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:294.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.05(s,1H),8.19-8.141(m,2H),8.04(d,J＝4.0Hz,1H),7.84-7.78(m,1H),7.75-7.66(m,2H),6.99(d,J＝4.0Hz,1H).
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将2-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2g,6.83mmol)溶于干燥四氢呋喃(34mL)中。随后，在-78摄氏度条件下，向上述溶液中缓慢滴加二异丙基氨基锂(3.27mL,8.2mmol)，并搅拌1小时。然后向上述反应液中加入碘(2.6g,10.25mmol)，继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢加入到饱和氯化铵水溶液(50mL)中淬灭。混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到500mg 2-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:419.9[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.17-8.10(m,2H),7.90-7.83(m,1H),7.82-7.72(m,2H),7.42(s,1H).
步骤C：在室温条件下，将2-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(200mg,0.47mmol)、1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼-2-基)-1H-吡唑(137mg,0.66mmol)、碳酸钠(97mg,0.94mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(41mg,0.05mmol)溶于1,4-二氧六环/水(2mL/0.2mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在75摄氏度条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到120mg 2-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:374.1[M+H]+.
步骤D：在室温条件下，将2-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(120mg,0.12mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(125mg,0.64mmol)、碳酸铯(209mg,0.64mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(50mg,0.06mmol)溶于1,4-二氧六环/水(1.6mL/0.15mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90摄氏度微波条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到80mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:488.2[M+H]+.
步骤E：在室温条件下，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(80mg,0.16mmol)和叔丁醇钾(90mg,0.84mmol)溶于四氢呋喃(0.8mL)中。该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到50mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:348.2[M+H]+.
步骤F：在室温条件下，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(50mg,0.14mmol)、碳酸钾(28mg,0.28mmol)和2-(4-(溴甲基)苯基)-1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑(50mg,0.14mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中。然后该反应体系在50摄氏度条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到31.7mg化合物12。
MS(ESI)M/Z:614.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,1H),8.66(s,1H),8.13(d,J＝1.5Hz,1H),7.84(d,J＝2.3Hz,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,2H),7.26(d,J＝8.2Hz,2H),7.11(s,1H),6.83(d,J＝2.3Hz,1H),6.08(s,2H),4.42-4.32(m,1H),3.94(s,4H),3.83(s,4H),1.71-1.60(m,1H),1.35(d,J＝6.6Hz,6H),1.03-0.98(m,2H),0.80-0.73(m,2H).
实施例13:2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将2-氯-9H-嘌呤(1.0g,6.49mmol)、2-(4-(溴甲基)苯基)-1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑(2.24g,6.49mmol)、碳酸钾(1.34g,9.74mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(33mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在35摄氏度条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(100mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到1.5g 2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:421.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMS-d6)δ9.15(s,1H),8.84(s,1H),8.18(d,J＝1.2Hz,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,2H),7.47(d,J＝8.0Hz,2H),5.60(s,2H),4.52-4.37(m,1H),1.39(d,J＝6.4Hz,6H).
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤(800mg,1.90mmol)溶于四氢呋喃(8mL)中。随后，在-78摄氏度条件下，向上述溶液中缓慢滴加二异丙基氨基锂(1.4mL,2.92mmol)，并搅拌1小时。然后向上述溶液中加入1,2-二溴-1,1,2,2-四氯乙烷(1.25g,3.90mmol)，继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到300mg 8-溴-2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:498.8[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，将8-溴-2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤(100mg,0.20mmol)、1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(58mg,0.28mmol)、碳酸钠(42mg,0.40mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(33mg,0.04mmol)溶于1,4-二氧六环/水(0.9mL/0.1mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在85摄氏度条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到80mg 2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:501.0[M+H]+.
步骤D：在室温条件下，将2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤(60mg,0.12mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(47mg,0.24mmol)、碳酸铯(78mg,0.24mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(19mg,0.02mmol)溶于1,4-二氧六环/水(0.54mL/0.06mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90摄氏度微波条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到31.73mg化合物13。
MS(ESI)M/Z:615.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.69(s,1H),8.15(d,J＝1.3Hz,1H),7.97(d,J＝2.3Hz,1H),7.53-7.42(m,4H),7.07(d,J＝2.3Hz,1H),6.12(s,2H),4.47-4.31(m,1H),4.02(s,3H),3.85(s,3H),1.75-1.62(m,1H),1.36(d,J＝6.6Hz,6H),1.06-0.99(m,2H),0.85-0.74(m,2H).
实施例14:9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-2,8-双(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤
反应路线:
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将8-溴-2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤(100mg,0.20mmol)、1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(33mg,0.16mmol)、碳酸钠(42mg,0.40mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(32mg,0.04mmol)溶于1,4-二氧六环/水(0.9mL/0.1mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在75摄氏度微波条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(40mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到10.05mg 9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-2,8-双(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:548.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.17(s,1H),8.14(d,J＝1.3Hz,1H),7.93(d,J＝2.3Hz,1H),7.80(d,J＝2.2Hz,1H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.01(d,J＝2.3Hz,1H),6.96(d,J＝2.2Hz,1H),6.14(s,2H),4.50-4.35(m,1H),3.99(s,3H),3.95(s,3H),1.35(d,J＝6.6Hz,6H).
实施例15:9-(3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2-(三氟甲基)-6,7-二氢-5H-苯并[c]咪唑并[1,2-a]氮杂卓
参考实施例1制备方法制备得到化合物15
MS(ESI)M/Z:573.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),8.70(s,1H),7.97(d,J＝1.3Hz,1H),7.63(d,J＝7.9Hz,1H),7.30(d,J＝1.8Hz,1H),7.22(dd,J＝8.0,1.8Hz,1H),5.62(s,2H),3.97(t,J＝6.8Hz,2H),3.85(s,3H),2.63(t,J＝7.0Hz,2H),2.48-2.40(m,1H),2.27-2.19(m,2H),1.71-1.58(m,1H),1.12(d,J＝6.7Hz,4H),1.09-0.99(m,2H),0.89-0.78(m,2H).
实施例16:4'-环丙基-5-(呋喃-3-基)-N-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-6'-甲氧基-[2,5'-双嘧啶]-4-胺
参考实施例1制备方法制备得到化合物16
MS(ESI)M/Z:576.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60(s,1H),8.31(s,1H),8.18-8.12(m,2H),7.93-7.87(m,1H),7.50-7.39(m,5H),6.94-6.90(m,1H),4.68(d,J＝6.1Hz,2H),4.48-4.38(m,1H),3.81(s,3H),1.76-1.65(m,1H),1.39(d,J＝6.6Hz,7H),1.00-0.91(m,2H),0.78-0.69(m,2H).
实施例17:7-((3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2-(三氟甲基)-5H-咪唑并[2,1-a]异吲哚
反应路线:
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(109mg,0.31mmol)、(2-(三氟甲基)-5H-咪唑并[2,1-a]异吲哚-7-基)甲醇(80mg,0.31mmol)和三苯基膦(122mg,0.46mmol)溶于干燥四氢呋喃(1.5mL)中。随后，在冰水浴条件下，向上述溶液中缓慢滴加偶氮二甲酸二异丙酯(94mg,0.46mmol)。然后该反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到220mg 7-((3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2-(三氟甲基)-5H-咪唑并[2,1-a]异吲哚。
MS(ESI)M/Z:583.1[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将7-((3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2-(三氟甲基)-5H-咪唑并[2,1-a]异吲哚(220mg,0.38mmol)、环丙基硼酸(65mg,0.76mmol)、磷酸钾(161mg,0.76mmol)、氧化银(44mg,0.19mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(37mg,0.05mmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在100℃下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，向上述反应溶液中加冰水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到44.31mg 7-((3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2-(三氟甲基)-5H-咪唑并[2,1-a]异吲哚。
MS(ESI)M/Z:545.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),8.71(s,1H),8.11(s,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.53(s,1H),7.41(d,J＝8.0Hz,1H),5.68(s,2H),5.11(s,2H),3.86(s,3H),2.48-2.38(m,1H),1.72-1.63(m,1H),1.12(d,J＝6.8Hz,4H),1.09-1.02(m,2H),0.89-0.81(m,2H).
实施例18:8-((3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[2,1-a]异喹啉
反应路线:
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将(2-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[2,1-a]异喹啉-8-基)甲醇(23mg,0.09mmol)、3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(30mg,0.09mmol)和三苯基膦(33mg,0.13mmol)溶于干燥四氢呋喃(0.4mL)中。随后，在0℃下，向上述溶液中加入偶氮二甲酸二异丙酯(26mg,0.13mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到37mg 8-((3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[2,1-a]异喹啉。
MS(ESI)M/Z:597.0[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，8-((3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[2,1-a]异喹啉(37mg,0.06mmol)、环丙基硼酸(8.6mg,0.10mmol)、磷酸钾(25mg,0.12mmol)、氧化银(7mg,0.03mmol)和二氯[1,1'-二(二苯基膦)二茂铁]钯(6mg,0.008mmol)溶于1,4-二氧六环(0.3mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到30mg粗品。所得粗品经制备型高效液相色谱纯化。得到10.05mg 8-((3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[2,1-a]异喹啉。
MS(ESI)M/Z:559.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.44(s,1H),8.71(s,1H),7.86(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(d,J＝1.2Hz,1H),7.29(s,1H),7.26(d,J＝8.0Hz,1H),5.61(s,2H),4.22(t,J＝7.0Hz,2H),3.85(s,3H),3.16(t,J＝7.0Hz,2H),2.47-2.39(m,1H),1.71-1.61(m,1H),1.12(d,J＝6.8Hz,4H),1.09-1.01(m,2H),0.89-0.80(m,2H).
实施例19:2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-6-(1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将2-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(300mg,0.72mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(315mg,0.1.07mmol)、碳酸钠(153mg,1.44mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(74mg,0.07mmol)溶于1,4-二氧六环/水(3.6mL/0.36mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在75℃下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到250mg 2-氯-7-(苯基磺酰基)-6-(1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:490.1[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将2-氯-7-(苯基磺酰基)-6-(1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(250mg,0.51mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(199mg,1.02mmol)、碳酸铯(333mg,1.02mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(164mg,0.2mmol)溶于1,4-二氧六环/水(2.5mL/0.25mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃微波条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到150mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(苯基磺酰基)-6-(1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:474.0[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(苯基磺酰基)-6-(1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(150mg,0.25mmol)和叔丁醇钾(139mg,1.24mmol)溶于四氢呋喃(1mL)中。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到70mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(1-((2-(三甲基甲硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:464.2[M+H]+.
步骤D：在室温条件下，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(1-((2-(三甲基甲硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(70mg,0.15mmol)、碳酸钾(41mg,0.3mmol)和2-(4-(溴甲基)苯基)-1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑(52mg,0.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。然后该反应体系在50℃下搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到65mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-6-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:730.2[M+H]+.
步骤D：在室温条件下，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-6-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(65mg,0.09mmol)溶于三氟乙酸(6mL)中。然后该反应体系在40℃下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，减压浓缩。在0℃下，所得残留物用甲醇溶解，再用氨水调节pH至8-9，减压浓缩，所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到14.92mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-6-(1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:600.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.28(s,1H),9.16(s,1H),8.66(s,1H),8.13(d,J＝0.8Hz,1H),7.91(s,1H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),7.22(d,J＝8.0Hz,2H),7.14(s,1H),6.89(s,1H),6.12(s,2H),4.43-4.30(m,1H),3.83(s,3H),1.69-1.59(m,1H),1.35(d,J＝6.4Hz,6H),1.04-0.95(m,2H),0.80-0.70(m,2H).
实施例20:2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-8-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将8-溴-2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤(100mg,0.20mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(91mg,0.28mmol)、碳酸钠(42mg,0.40mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(33mg,0.04mmol)溶于1,4-二氧六环/水(0.9mL/0.1mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在85℃下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到120mg 2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-8-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:617.3[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-8-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤(80mg,0.13mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(51mg,0.26mmol)、碳酸铯(85mg,0.26mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(21mg,0.03mmol)溶于1,4-二氧六环/水(0.54mL/0.06mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃微波条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到68mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-8-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:731.2[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-8-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤(60mg,0.08mmol)溶于三氟乙酸(2mL)中。然后反应体系在室温条件下搅拌48小时。
LCMS监测显示原料消失后，减压浓缩。在0℃下，所得残留物用甲醇溶解，再用氨水调节pH至8-9，减压浓缩，所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到31.73mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:601.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.65(s,1H),9.31(s,1H),8.68(s,1H),8.15(d,J＝0.8Hz,1H),8.03(d,J＝2.4Hz,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.11(d,J＝1.6Hz,1H),6.16(s,2H),4.45-4.29(m,1H),3.84(s,3H),1.72-1.61(m,1H),1.35(d,J＝6.4Hz,6H),1.07-0.96(m,2H),0.85-0.72(m,2H).
实施例21:7-((3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)-5H-咪唑并[2,1-a]异吲哚
反应路线:
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(33mg,0.10mmol)、(3-(三氟甲基)-5H-咪唑并[2,1-a]异吲哚-7-基)甲醇(20mg,0.08mmol)和三苯基膦(31.4mg,0.12mmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)中。随后，在冰水浴条件下，向上述溶液中缓慢滴加偶氮二甲酸二异丙酯(24.2mg,0.12mmol)。然后该反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(5mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(10mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到98mg 7-((3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)-5H-咪唑并[2,1-a]异吲哚。
MS(ESI)M/Z:583.1[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将7-((3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)-5H-咪唑并[2,1-a]异吲哚(98mg,0.16mmol)、环丙基硼酸(29mg,0.33mmol)、磷酸钾(71mg,0.33mmol)、氧化银(19.4mg,0.08mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(17.1mg,0.02mmol)溶于1,4-二氧六环(1mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在100℃下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，向上述反应溶液中加冰水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到13.66mg 7-((3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)-5H-咪唑并[2,1-a]异吲哚。
MS(ESI)M/Z:545.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),8.71(s,1H),7.78(d,J＝7.6Hz,1H),7.69(d,J＝1.2Hz,1H),7.54(s,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),5.69(s,2H),5.19(s,2H),3.85(s,3H),2.48-2.39(m,1H),1.70-1.61(m,1H),1.12(d,J＝6.8Hz,4H),1.09-1.02(m,2H),0.88-0.81(m,2H).
实施例22:2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-8-(呋喃-3-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将8-溴-2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤(170mg,0.34mmol)、2-(呋喃-3-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(99mg,0.51mmol)、碳酸钠(72mg,0.68mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)(55mg,0.062mmol)溶于1,4-二氧六环/水(1.7mL/0.1mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液加入到冰水(10mL)中淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到35mg 2-氯-8-(呋喃-3-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:487.2[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将2-氯-8-(呋喃-3-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤(35mg,0.07mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(28mg,0.17mmol)、碳酸铯(45.5mg,0.14mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(11mg,0.014mmol)溶于1,4-二氧六环/水(0.5mL/0.01mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃微波条件下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(5mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到9.88mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-8-(呋喃-3-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:601.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.33(s,1H),8.68(s,1H),8.47(t,J＝1.0Hz,1H),8.15(d,J＝1.2Hz,1H),7.93(t,J＝1.8Hz,1H),7.51(d,J＝8.0Hz,2H),7.28(d,J＝8.4Hz,2H),7.11(dd,J＝2.0,0.8Hz,1H),5.84(s,2H),4.44-4.34(m,1H),3.84(s,3H),1.72-1.63(m,1H),1.36(d,J＝6.8Hz,6H),1.06-0.99(m,2H),0.85-0.77(m,2H).
实施例23:2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-6-(2H-1,2,3-三唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，氮气保护，将2-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(360mg,0.86mmol)、2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼-2-基)-2H-1,2,3-三唑(360mg,1.29mmol)和碳酸钠(182mg,1.72mmol)溶于1,4-二氧六环/水(4.1mL/0.45mL)中。随后，向上述溶液中加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(70mg,0.08mmol)。真空抽空气置换氮气4次，该反应体系在75℃搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，减压浓缩，所得残余物经硅胶柱层析纯化得到280mg 2-氯-7-(苯基磺酰基)-6-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:445.2[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将2-氯-7-(苯基磺酰基)-6-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(280mg,0.63mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(252mg,1.29mmol)和碳酸铯(420mg,1.29mmol)溶于1,4-二氧六环/水(3.2mL/0.35mL)中。随后，向上述溶液中加入氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(98mg,0.13mmol)，真空抽空气置换氮气4次，反应体系在90℃，微波条件下反应1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到140mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(苯基磺酰基)-6-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:559.2[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(苯基磺酰基)-6-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(140mg,0.25mmol)和叔丁醇钾(140mg,1.25mmol)溶于四氢呋喃(1.3mL)中。该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到80mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:419.2[M+H]+.
步骤D：在室温条件下，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(80mg,0.19mmol)、2-(4-(溴甲基)苯基)-1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑(99mg,0.28mmol)和碳酸钾(57mg,0.38mmol)溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。该反应体系在45℃下搅拌5小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到100mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-6-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:685.3[M+H]+.
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-6-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(100mg,0.15mmol)和三氟乙酸(2.5mL)溶于二氯甲烷(5mL)中。该反应体系在室温条件下继续搅拌6小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应溶液减压浓缩，然后用氨水调节pH＝7。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到17.25mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-6-(2H-1,2,3-三唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:601.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.17(s,1H),8.66(s,1H),8.36(s,1H),8.13(d,J＝0.8Hz,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,2H),7.22(d,J＝8.0Hz,2H),7.12(s,1H),6.09(s,2H),4.42-4.30(m,1H),3.83(s,3H),1.70-1.61(m,1H),1.34(d,J＝6.8Hz,6H),1.03-0.96(m,2H),0.80-0.72(m,2H).
实施例24:2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-8-(呋喃-2-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将8-溴-2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤(30mg,0.08mmol)、2-(呋喃-2-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(23mg,0.12mmol)、碳酸钠(17mg,0.16mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)(7mg,0.01mmol)溶于1,4-二氧六环/水(0.5mL/0.05mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在85℃下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液加入到冰水(10mL)中淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到27mg 2-氯-8-(呋喃-2-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:487.2[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将2-氯-8-(呋喃-2-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤(27mg,0.06mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(23mg,0.12mmol)、碳酸铯(39mg,0.12mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(9mg,0.012mmol)溶于1,4-二氧六环/水(0.5mL/0.05mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃微波条件下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(15mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到2.3mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-8-(呋喃-2-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:601.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.33(s,1H),8.69(s,1H),8.15(s,1H),8.09(d,J＝1.2Hz,1H),7.51(d,J＝8.0Hz,2H),7.42(d,J＝3.6Hz,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,2H),6.82(dd,J＝3.6,1.6Hz,1H),5.90(s,2H),4.45-4.32(m,1H),3.85(s,3H),1.75-1.65(m,1H),1.36(d,J＝6.8Hz,6H),1.08-1.00(m,2H),0.88-0.77(m,2H).
实施例25:2,8-二(呋喃-2-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将8-溴-2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤(60mg,0.12mmol)、2-(呋喃-2-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(47mg,0.24mmol)、碳酸钠(25mg,0.24mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)(20mg,0.024mmol)溶于1,4-二氧六环/水(0.6mL/0.06mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在85℃搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液加入到冰水(10mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到2.66mg 2,8-二(呋喃-2-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤
MS(ESI)M/Z:519.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.20(s,1H),8.15(s,1H),8.04(d,J＝0.8Hz,1H),7.91(s,1H),7.52(d,J＝8.0Hz,2H),7.40-7.32(m,4H),6.78(dd,J＝3.4,1.6Hz,1H),6.71(dd,J＝3.4,1.6Hz,1H),5.92(s,2H),4.49-4.35(m,1H),1.36(d,J＝6.8Hz,6H).
实施例26:4-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)-3,5-二甲基异恶唑
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将2-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(140mg,0.33mmol)、3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼-2-基)异恶唑(110mg,0.5mmol)、碳酸钠(70mg,0.66mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(27mg,0.03mmol)溶于1,4-二氧六环/水(1.6mL/0.17mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在75℃下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到100mg 4-(2-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)-3,5-二甲基异恶唑。
MS(ESI)M/Z:389.0[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将4-(2-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)-3,5-二甲基异恶唑(100mg,0.26mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(101mg,0.52mmol)、碳酸铯(170mg,0.52mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(41mg,0.05mmol)溶于1,4-二氧六环/水(1mL/0.1mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到50mg 4-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)-3,5-二甲基异恶唑。
MS(ESI)M/Z:503.2[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，将4-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)-3,5-二甲基异恶唑(50mg,0.1mmol)和叔丁醇钾(56mg,0.5mmol)溶于四氢呋喃(1mL)中。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到35mg 4-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)-3,5-二甲基异恶唑。
MS(ESI)M/Z:363.2[M+H]+.
步骤D：在室温条件下，将4-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)-3,5-二甲基异恶唑(35mg,0.1mmol)、碳酸钾(28mg,0.2mmol)和2-(4-(溴甲基)苯基)-1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑(35mg,0.1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。然后该反应体系在50℃下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到5.83mg 4-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)-3,5-二甲基异恶唑。
MS(ESI)M/Z:629.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.24(s,1H),8.68(s,1H),8.15(s,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,2H),7.01(d,J＝8.0Hz,2H),6.88(s,1H),5.41(s,2H),4.40-4.28(m,1H),3.86(s,3H),2.19(s,3H),1.90(s,3H),1.75-1.65(m,1H),1.35(d,J＝6.4Hz,6H),1.07-1.00(m,2H),0.87-0.79(m,2H).
实施例27:2-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)恶唑
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(5g,32.56mmol)和碳酸钾(5.3g,45.53mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(19.8mL)中，搅拌1小时。随后，向上述溶液中加入苯磺酰氯(11.5g，65.12mmol)，升至50℃，搅拌6小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液加入到水(200mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(90mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到7.6g 2-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:294.0[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将2-氯-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(300mg,1.02mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(297.2mg,1.53mmol)、碳酸铯(665mg,2.04mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(161mg,0.2mmol)溶于1,4-二氧六环/水(2mL/0.2mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃微波条件下搅拌2.5小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经硅胶柱层析纯化得到220mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:408.0[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(100mg,0.24mmol)溶于四氢呋喃(2mL)中。随后，将上述溶液降至-78℃，向上述溶液中缓慢滴加二异丙基胺基锂(0.16mL,0.37mmol)，并搅拌1小时。然后缓慢滴加碘(93mg,0.37mmol)的四氢呋喃(0.5mL)溶液，继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应溶液缓慢加入到冰水(10mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到39mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:534.1[M+H]+.
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(30mg,0.056mmol)、2-(三丁基锡基)恶唑(40mg,0.112mmol)和四三苯基膦钯(6.5mg,0.005mmol)溶于干燥甲苯(2mL)中。然后该反应体系在110℃下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液浓缩，向所得残余物中加水(10mL)。混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到15mg 2-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)恶唑。
MS(ESI)M/Z:475.2[M+H]+.
步骤E：在室温条件下，将2-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)恶唑(70mg,0.147mmol)和叔丁醇钾(83mg,0.74mmol)溶于四氢呋喃(2mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到27mg 2-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)恶唑。
MS(ESI)M/Z:335.2[M+H]+.
步骤F：在室温条件下，氮气保护，将2-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)恶唑(26mg,0.077mmol)和碳酸钾(21.5mg,0.155mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，向上述溶液中加入2-(4-(溴甲基)苯基)-1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H咪唑(27mg,0.077mmol)。然后该反应体系在55℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到12.61mg 2-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)恶唑。
MS(ESI)M/Z:601.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.34(s,1H),8.68(s,1H),8.37(s,1H),8.14(s,1H),7.54(s,1H),7.51(s,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.4Hz,2H),6.15(s,2H),4.43-4.33(m,1H),3.84(s,3H),1.71-1.61(m,1H),1.35(d,J＝6.8Hz,6H),1.06-0.98(m,2H),0.84-0.73(m,2H).实施例28:4-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤-8-基)-3,5-二甲基异恶唑
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在常温下，将8-溴-2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤(40mg,0.08mmol)、3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼-2-基)异恶唑(29mg,0.12mmol)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(7mg,0.01mmol)和碳酸钠(17mg,0.16mmol)加入到1,4-二氧六环/水(0.9mL/0.1mL)中。真空抽空气置换氮气3次，该反应液在85℃搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加冰水(10mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到35mg 4-(2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤-8-基)-3,5-二甲基异恶唑。
MS(ESI)M/Z:516.2[M+H]+.
步骤B:在常温下，将4-(2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤-8-基)-3,5-二甲基异恶唑(35mg,0.07mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(20mg,0.11mmol)、氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(11mg,0.01mmol)和碳酸铯(36mg,0.11mmol))加入到1,4-二氧六环/水(0.9mL/0.1mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃微波条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加冰水(10mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到2.78mg 4-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤-8-基)-3,5-二甲基异恶唑。
MS(ESI)M/Z:630.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.41(s,1H),8.70(s,1H),8.16(d,J＝1.2Hz,1H),7.47(d,J＝8.4Hz,2H),7.15(d,J＝8.4Hz,2H),5.51(s,2H),4.41-4.30(m,1H),3.85(s,3H),2.37(s,3H),2.03(s,3H),1.73-1.65(m,1H),1.36(d,J＝6.8Hz,6H),1.07-1.00(m,2H),0.85-0.79(m,2H).
实施例29:4-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)异恶唑
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(201mg,1.31mmol)、碳酸钾(362mg,2.62mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6.5mL)中，并搅拌5分钟。随后，向上述反应液中加入2-(4-溴甲基)苯基-1-异丙基-4-三氟甲基-1H-咪唑(500mg,1.44mmol)，升至45℃，继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(50mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到580mg 2-氯-7-(4-(1-异丙基-4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:420.2[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将2-氯-7-(4-(1-异丙基-4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(500mg,1.19mmol)、4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-硼酸(416mg,2.14mmol)、氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(94mg,0.12mmol)和碳酸钠(252mg,2.38mmol)溶于1,4-二氧六环/水(6mL/0.6mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(50mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。合并有机相，所得残余物经硅胶柱层析纯化得到520mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:534.2[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(520mg,0.98mmol)溶于二氯甲烷(4.9mL)中。随后，向上述溶液中加入N-溴代丁二酰亚胺(208mg,1.17mmol)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液加水(20mL)淬灭。混合液用二氯甲烷(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到510mg 5-溴-2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-异丙基-4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:612.2[M+H]+.
步骤D：在室温条件下，将5-溴-2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-异丙基-4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(210mg,0.34mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)异恶唑(134mg,0.68mmol)、碳酸钠(109mg,1.03mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(27mg,0.03mmol)溶于1,4-二氧六环/水(1.7mL/0.2mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃微波条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液加水(50mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到16.23mg 4-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-7-(4-(1-异丙基-4-三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)异恶唑。
MS(ESI)M/Z:601.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.63(s,1H),9.55(s,1H),9.22(s,1H),8.69(s,1H),8.27(s,1H),8.17(d,J＝1.2Hz,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,2H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),5.62(s,2H),4.45-4.35(m,1H),3.85(s,3H),1.70-1.63(m,1H),1.37(d,J＝6.4Hz,6H),1.07-1.00(m,2H),0.84-0.79(m,2H).
实施例30:4'-环丙基-5-(呋喃-2-基)-N-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-6'-甲氧基-[2,5'-双嘧啶]-4-胺
反应路线:
操作步骤：
步骤A：在0℃下，氮气保护，将5-溴-2,4-二氯嘧啶(1.0g,4.83mmol)、(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯基)甲胺(1.67g,4.83mmol)溶于乙腈(25mL)中。随后，向上述溶液中缓慢滴加N,N-二异丙基乙胺(1.25g,9.66mmol)。然后反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰(100mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到2g 5-溴-2-氯-N-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)嘧啶-4-胺。
MS(ESI)M/Z:474.0[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，将5-溴-2-氯-N-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)嘧啶-4-胺(250mg,0.53mmol)、2-(呋喃-2-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(206mg,1.06mmol)、氧化银(25mg,0.11mmol)、磷酸钾(226mg,1.06mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(41mg,0.05mmol)溶于1.4-二氧六环(3mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃微波条件下搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰(50mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到200mg 2-氯-5-(呋喃-2-基)-N-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)嘧啶-4-胺。
MS(ESI)M/Z:462.2[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，将2-氯-5-(呋喃-2-基)-N-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)嘧啶-4-胺(200mg,0.43mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(168mg,0.86mmol)、碳酸铯(280mg,0.86mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(68mg,0.086mmol)溶于1.4-二氧六环/水(2mL/0.02mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃微波条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰(50mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到85.85mg 4'-环丙基-5-(呋喃-2-基)-N-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-6'-甲氧基-[2,5'-双嘧啶]-4-胺。
MS(ESI)M/Z:576.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.61(s,1H),8.59(s,1H),8.16(d,J＝1.2Hz,1H),7.89(d,J＝1.6Hz,1H),7.80(t,J＝6.0Hz,1H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.44(d,J＝8.0Hz,2H),7.06(dd,J＝3.6,0.4Hz,1H),6.72(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),4.77(d,J＝6.0Hz,2H),4.50-4.39(m,1H),3.82(s,3H),1.78-1.68(m,1H),1.39(d,J＝6.4Hz,6H),0.99-0.91(m,2H),0.79-0.70(m,2H).实施例31:1-((2-(三氟甲基)-5,6-二氢苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-9-基)甲基)-3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
反应路线:
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将(2-(三氟甲基)-5,6-二氢苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧杂氮-9-基)甲醇(100mg,0.35mmol)和3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(119mg,0.35mmol)溶于四氢呋喃(1.7mL)中。随后，在0摄氏度下，向反应体系中加入三苯基膦(139mg,0.53mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(202mg,0.53mmol)，升至室温，继续搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到200mg 1-((2-(三氟甲基)-5,6-二氢苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-9-基)甲基)-3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:613.0[M+H]+.
步骤F:在室温条件下，氮气保护，将9-(3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2-(三氟甲基)-5,6-二氢苯并[f]咪唑并[1，2-d][1,4]恶泽平(200mg，0.33mmol)、环丙基硼酸(20mg，0.56mmol)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(40mg，0.05mmol)、磷酸钾(140mg，0.66mmol)和氧化银(38mg，0.17mmol)溶解于1,4-二氧六环(3mL)中。然后该反应液在100℃搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加冰水(10mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到39.84mg 1-((2-(三氟甲基)-5,6-二氢苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-9-基)甲基)-3-环丙基-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:575.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),8.71(s,1H),8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.96(s,1H),7.03(d,J＝8.4Hz,1H),6.88(s,1H),5.58(s,2H),4.45(brs,4H),3.86(s,3H),2.47-2.38(m,1H),1.72-1.61(m,1H),1.19-1.09(m,4H),1.08-1.00(m,2H),0.96-0.80(m,2H).
实施例32:2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-8-(1-异丙基-1H-吡唑-3-基)-9-(4-(1-异基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在0℃下，将2-氯-9H-嘌呤(2.0g,12.99mmol)、3,4-二氢-2H-吡喃(2.18g,25.97mmol)和4-甲基苯磺酸吡啶(652mg,1.30mmol)溶于二氯甲烷溶液(65mL)中，升至室温，搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到3.11g 2-氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:239.2[M+H]+.
步骤B:在-78℃下，氮气保护，将2-氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(2.00g,8.40mmol)溶于干燥四氢呋喃溶液(42mL)中。随后，向上述溶液中缓慢滴加2.5M二异丙基氨基锂溶液(5.01mL,12.6mmol)，搅拌1小时。然后缓慢滴加1,2-二溴-1,1,2,2-四氯乙烷(4.10g,12.6mmol)，继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加冰水(100mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水溶液(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到830mg 8-溴-2-氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:233.0[M-84]+
步骤C：在室温条件下，将8-溴-2-氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(800mg,2.53mmol)和对甲基苯磺酸一水合物(97mg,0.51mmol)溶于甲醇溶液(13mL)中，升至65℃，继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到320mg 8-溴-2-氯-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:233.0[M+H]+.
步骤D：在冰水浴条件下，将8-溴-2-氯-9H-嘌呤(320mg,1.38mmol)、(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯基)甲醇(588mg,2.07mmol)和三苯基膦(588mg,2.07mmol)溶于四氢呋喃(7mL)中。随后，向上述溶液中缓慢加入偶氮二甲酸二异丙酯(419mg,2.07mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加冰水(10mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到600mg 8-溴-2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:499.0[M+H]+.
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将8-溴-2-氯-9-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤(200mg,0.40mmol)、1-异丙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼-2-基)-1H-吡唑(142mg,0.60mmol)、碳酸钠(85mg,0.80mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(33mg,0.04mmol)溶于1,4-二氧六环/水(1.8mL/0.2mL)。然后该反应体系在85℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加冰水(10mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到600mg N-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)甲磺酰胺。
MS(ESI)M/Z:529.2[M+H]+.
步骤F:在室温条件下，将N-(2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)甲磺酰胺(100mg,0.19mmol)、(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(55mg,0.29mmol)、磷酸钾(44mg,0.21mmol)、2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(18mg,0.04mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(23mg,0.03mmol)溶于1,4-二氧六环/水(2.7mL/0.3mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加冰水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到39.62mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-8-(1-异丙基-1H-吡唑-3-基)-9-(4-(1-异基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-9H-嘌呤。
MS(ESI)M/Z:643.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.31(s,1H),8.69(s,1H),8.15(d,J＝1.2Hz,1H),8.03(d,J＝2.4Hz,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),7.06(d,J＝2.4Hz,1H),6.12(s,2H),4.72-4.62(m,1H),4.42-4.32(m,1H),3.86(s,3H),1.76-1.67(m,1H),1.45(d,J＝6.8Hz,6H),1.35(d,J＝6.8Hz,6H),1.09-1.01(m,2H),0.87-0.78(m,2H).
实施例33:2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(1-异丙基-1H-吡唑-3-基)-7-(4-(1-异基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(50mg,0.094mmol)、1-异丙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼-2-基)-1H-吡唑(29mg,0.122mmol)、碳酸铯(61mg,0.187mmol)和氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(73mg,0.18mmol)溶于1,4-二氧六环/水(2mL/0.2mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在90℃、微波条件下搅拌2.5小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经硅胶柱层析纯化得到50mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(1-异丙基-1H-吡唑-3-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:516.2[M+H]+.
步骤B:在室温条件下，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(1-异丙基-1H-吡唑-3-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(50mg,0.116mmol)和叔丁醇钾(65mg,0.582mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，升至30℃，继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将混合溶液加入到水(20mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到40mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(1-异丙基-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:376.3[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(1-异丙基-1H-吡唑-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(40mg,0.106mmol)和碳酸钾(30mg,0.213mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，向上述溶液中加入2-(4-(溴甲基)苯基)-1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H咪唑(37mg,0.106mmol)。然后该反应体系在45℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应溶液中加冰水(30mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到26.51mg 2-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-6-(1-异丙基-1H-吡唑-3-基)-7-(4-(1-异基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:642.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,1H),8.67(s,1H),8.13(d,J＝0.8Hz,1H),7.90(d,J＝2.4Hz,1H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝8.4Hz,2H),7.11(s,1H),6.83(d,J＝2.4Hz,1H),6.09(s,2H),4.63-4.53(m,1H),4.39-4.30(m,1H),3.84(s,3H),1.71-1.64(m,1H),1.42(d,J＝6.8Hz,6H),1.34(d,J＝6.8Hz,6H),1.05-0.98(m,2H),0.83-0.76(m,2H).
实施例34:3-(6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)异恶唑
反应路线:
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(2.6g,7.51mmol)溶于四氢呋喃(37mL)中，随后，将上述溶液降至0℃，加入氢化钠(360mg,9.01mmol)，搅拌0.5小时。然后缓慢滴加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(1.2g,7.51mmol)，升至室温，继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×2次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(40mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到2g 3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:477.2[M+H]+.
步骤B：在室温条件下，3-溴-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(1.9g,3.99mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼烷(801mg,5.99mmol)、碳酸钾(1.1g,7.98mmol)、2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(164mg,0.39mmol)和醋酸钯(87mg,0.39mmol)溶于1,4-二氧六环/水(20mL/3mL)中。真空抽空气置换氮气3次，反应体系在85℃下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(50mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(25mL×2次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到1.2g 6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶。
MS(ESI)M/Z:425.2[M+H]+.
步骤C：在室温条件下，将6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(1.2g,2.83mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中。随后，将上述溶液降至-78℃，向反应体系中持续通臭氧，搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(50mL)淬灭。混合液用二氯甲烷(30mL×3次)萃取，合并有机相，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到400mg 6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基甲硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-甲醛。
MS(ESI)M/Z:427.2[M+H]+。
步骤D：在室温条件下，将6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基甲硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-甲醛(400mg,441mmol)溶于乙醇(9mL)中。随后，将上述溶液降至0℃，依次加入三乙胺(284mg,2.82mmol)和盐酸羟胺(130mg,1.89mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌8小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到370mg 6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基甲硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-甲醛肟粗品。
MS(ESI)M/Z:443.2[M+H]+.
步骤E：在室温条件下，将6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基甲硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-甲醛肟(370mg,0.75mmol)溶于二氯甲烷/N,N-二甲基甲酰胺(7.5mL/0.75mL)中。随后，将上述溶液降至0℃，向反应体系加入N-氯代丁二酰亚胺(643mg,3.18mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到350mg(Z)-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-N-羟基-1-((2-(三甲基甲硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-甲酰亚胺基氯。
MS(ESI)M/Z:476.2[M+H]+.
步骤F：在室温条件下，将(Z)-6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-N-羟基-1-((2-(三甲基甲硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-甲酰亚胺基氯(345mg,0.73mmol)溶于二氯甲烷(7mL)中。随后，将上述溶液降至0℃，向反应体系依次加入三乙胺(0.2mL,1.45mmol)和三甲基硅基乙炔(142mg,1.45mmol)。然后该反应体系在常温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到140mg 3-(6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基甲硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-5-(三甲基甲硅烷基)异恶唑。
MS(ESI)M/Z:538.2[M+H]+.
步骤G：在室温条件下，将3-(6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基甲硅基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-5-(三甲基甲硅烷基)异恶唑溶于二氯甲烷(10mL)中。随后，将上述溶液降至0℃，向反应体系中加入三氟乙酸(5mL)。然后该反应体系在室温条件下搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩。所得浓缩物用四氢呋喃(10mL)溶解，加入饱和碳酸氢钠溶液(5mL)，然后该混合溶液在室温下搅拌1小时。接着向反应液中加入水(20mL)稀释，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析纯化得到65mg 3-(6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-5-(三甲基甲硅烷基)异恶唑。
MS(ESI)M/Z:408.2[M+H]+.
步骤H：在室温条件下，氮气保护，将3-(6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-5-(三甲基甲硅烷基)异恶唑(65mg,0.16mmol)和(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苯基)甲醇溶于四氢呋喃(1.6mL)中。随后，将上述溶液降至0℃，向反应体系依次加入三苯基膦(84mg,0.32mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(65mg,0.32mmol)。然后该反应体系在室温条件搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化。得到4.44mg 3-(6-(4-环丙基-6-甲氧基嘧啶-5-基)-1-(4-(1-异丙基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)异恶唑。
MS(ESI)M/Z:602.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.75(s,1H),9.22(d,J＝1.6Hz,1H),8.73(s,1H),8.17(d,J＝0.8Hz,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(d,J＝8.0Hz,2H),7.26(d,J＝2.0Hz,1H),5.90(s,2H),4.46-4.36(m,1H),3.87(s,3H),1.77-1.68(m,1H),1.37(d,J＝6.8Hz,6H),1.10-1.04(m,2H),0.90-0.82(m,2H).
二、生物活性
实施例1：USP1酶活力实验方法
以荧光384孔形式针对USP1筛选化合物。实验材料：重组人His6-USP1/His6-UAF1复合蛋白(R&D，目录号E-568-050),泛素罗丹明110蛋白，CF(Ub-Rho)(R&D，目录号U-555-050),384孔板(Perkin Elmer，货号6007279)。将待测化合物溶解在100％ DMSO中的10mM原液中备用。
实验过程：
1准备1x检测缓冲液。准备1x检测缓冲液(改良的Tris缓冲液)。
2化合物系列稀释：通过Echo将化合物转移到检测板。DMSO的最终比例为1％。
3制备酶溶液：在1x检测缓冲液中制备酶溶液。
4准备底物溶液：在1x检测缓冲液中加入泛素罗丹明110(Ub-Rho)，形成底物溶液。
5将10μL酶溶液转移至检测板。
6在室温下孵育1小时。
7每孔加入10μL底物溶液开始反应，离心30s，振摇30s。
8在Spect环CMax Pa环Cdigm上读取板30分钟，激发波长为480nm，发射波长为540nm。
9收集有关Spect环CMax Pa环Cdigm的数据。
10曲线拟合
使用等式(1)在Excel中拟合数据以获得抑制值
等式(1)：抑制率％＝(最大信号值-目标信号值)/(最大信号值-最小信号值)*100
使用等式(2)拟合XL-Fit中的数据以获得IC50值
等式(2)：Y＝底部+(顶部-底部)/(1+(IC50/X)*HillSlope)
Y是抑制百分比，X是化合物浓度。
经测定，本发明化合物对USP1有很好的抑制作用，其IC50值一般低于1微摩尔；部分本发明化合物的IC50值低于0.5微摩尔，更为优异的本发明化合物的IC50值低于0.3微摩尔，甚至低于0.1微摩尔。本发明部分化合物对USP1的抑制结果见表1。
表1酶学抑制结果
结论：数据显示，物对USP1有很好的抑制作用。
实施例2：USP1 CTG测试方法
使用CTG assay(NCI-H1693)对USP1i化合物的生物学活性进行验证。实验材料：NCI-H1693细胞购自ATCC(货号：CRL-5866)，培养于37℃，5％ CO2细胞培养箱。NCI-H1693完全培养基：RPMI-1640液体培养基(货号：Gibico 11875-093)，5％FBS(货号：Gibico10099-141)，1％Pen StRap(货号：Gibico 15070-063)。
实验过程：
1将75cm2培养瓶中的NCI-H1693细胞使用2mL胰酶进行消化2-3min后，使用完全培养基2mL 1640完全培养基进行中和。使用离心机1200rpm，离心5min。使用4mL 1640完全培养基将细胞进行重悬。取500ul细胞悬液用Vi-CELL-XR细胞计数仪进行细胞计数。
2使用Multidrop仪器，以500个NCI-H1693细胞每孔(40uL 1640Growth Media)的密度接种在384孔板中，24小时后加药。
3使用超微量加样器，将化合物(浓度：3.33mM，溶于DMSO)依次以10uM为最高起始浓度，依次以1:3的比例梯度稀释9个梯度(10000nM，3333nM，1111nM，370nM，123nM，41nM，13.7nM，4.6nM，1.5nM)，进行加药处理，每个浓度设置两个复孔；设置阳性及阴性对照各9个孔，阳性对照为10uM阳性化合物的复孔，阴性对照为DMSO复孔。
4将加药完成后的细胞放入37℃培养箱继续培养6天，6天后每孔加入25ul CTGbuffer进行CTG assay检测，使用酶标仪进行读板分析。
5对CTG读值进行分析。
以阳性对照复孔的抑制率的平均值设置为相对抑制率100％；
以阴性对照复孔的平均值设置为相对抑制率0％。
将CTG读值转换为相对抑制率，按照以下公式对化合物A各个浓度对于细胞的抑制率(inhibition％)进行换算。
Inhibition％＝(b-x)/(b-a)*100％
a＝CTG value(highest concent环Ction)
b＝CTG value(blank well)
x＝CTG value(x nM)
6使用G环CphPad PRISM 8对IC50进行计算。
(1)将10000nM，3333nM，1111nM，370nM，123nM，41nM，13.7nM，4.6nM，1.5nM对应的浓度及抑制率进行统计。以Log10(Acompound concent环Ction)对其进行统计计算。
(2)将数据输入值G环CphPad PRISM 8中，选择Analysis。
(3)选择Nonlinear RagRassion(curve fit)
(4)选择Log(inhibitor)vs.Rasponse—Variable slope。
(5)选择计算公式，按照以下公式对其进行计算。
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
X:log of dose or concent环Ction
Y:Rasponse,decRaasing as X incRaases
Top and Bottom:Plateaus in same units as Y.
TIP:
-If X is not alRaady the log of dose,go back and t环Cnsform yourdata.
-If you have subt环Ccted off any basal Rasponse,consider const环Cining Bottom to a constantvalue of 0.0.
(6)对数据进行拟合，得到IC50值。
(7)根据数据具体情况对拟合条件进行调整。对Bottom，TOP及HillSlope进行适当的Const环Cint条件调整，以达到最符合实际情况的曲线。
经测定，本发明化合物对NCI-H1693细胞有很好的抑制作用，其IC50值一般低于1微摩尔；部分本发明化合物的IC50值低于0.5微摩尔，更为优异的本发明化合物的IC50值低于0.3微摩尔，甚至低于0.1微摩尔。本发明部分化合物对NCI-H1693细胞的抑制结果见表2。
表2NCI-H1693细胞抑制结果
*注：括号内数据表示同批次KSQ-4279细胞抑制活性数值。
数据显示，和KSQ-4279细胞抑制活性相比，本发明化合物对NCI-H1693细胞有更优的抑制作用。
KSQ-4279化合物结构：
来源：参考WO2020132269专利制备方法合成。

Claims (20)

1.一种式(I’)所示的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐：
其中，
X1为CH、N；X2、X3各自独立的为CH、N或CR’，其中，R’为取代或未取代的C3-6环烷基、5-6元杂芳基、苯基、卤素、C1-4卤代烷基、羟基C1-4烷基、-NH-Ar、4-6元杂环基、-NH-CO-C3-6环烷基、8-14元稠杂环基、7-11元螺杂环基、7-14元桥杂环基；
Ra为氢或C1-4烷基；
环A为5-6元杂芳基，Rb各自独立的为卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基；m为0、1、2、3或4；
环B为苯基或11-18三元稠杂环基；Rc为卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、或两个相邻Rc形成取代或未取代的C3-6元环烷基；
所述环C为含有1-4个氮原子的5-10元杂芳基、8-14元稠杂环基；所述Rd各自独立的为C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、卤素、C3-6环烷基；n为1、2、3或4；p为1、2、3或4；L1为C1-4亚烷基、C3-6亚环烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，R’为 -Cl、-CHF2、
3.根据权利要求1-2任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，环A为
4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，Rb为Cl-、CH3-、CH(CH3)2-、CH3O-、
5.根据权利要求1-4任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元为
6.根据权利要求1-5任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，环B为
7.根据权利要求1-6任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，Rc为-CF3、-OCH3、-F、
8.根据权利要求1-7任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元为
9.根据权利要求1-8任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，Rd为-CH3、-CH(CH3)2、-CF3、-OCH2CH3、-Cl、-F、
10.根据权利要求1-8任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，环C为
11.根据权利要求1-10任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元为
12.根据权利要求1-11任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，L1为-CH2-。
13.根据权利要求1-12任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元为
14.根据权利要求1-13任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物、其异构体及其药学上可接受的盐选自，
其中环A、环B、Ra、Rb、Rc、R’、L1、m、n如前述任一权利要求所述定义。
15.根据权利要求1-14任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐选自
其中环A、环C、Ra、Rb、R’、L1、Rd、p、m如前述任一权利要求所述定义。
16.根据权利要求1-15任一项所述的化合物、其异构体及其药学上可接受的盐选自
其中R’如前述任一权利要求所述定义。
17.化合物、其异构体以及其药学上可接受的盐：
18.一种药物组合物，其包含权利要求1-17任一项所述的化合物、异构体及其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。
19.权利要求1-17任一项所述的化合物、异构体及其药学上可接受的盐或权利要求18所述的药物组合物在制备治疗USP1靶点介导的相关疾病药物中的应用。
20.根据权利要求19所述的用途，所述USP1靶点介导的相关疾病包括细胞炎性疾病、神经退行性疾病、癌症。
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WO2025067259A1 (zh) * 2023-09-26 2025-04-03 上海济煜医药科技有限公司 一类氮杂环胺类化合物作为泛素-特异性蛋白酶1抑制剂的制备方法、应用及其用途

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