CN118160835B - 一种胆汁酸合成促进剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种胆汁酸合成促进剂及其制备方法和应用，属于水产养殖领域。上述渔用胆汁酸合成促进剂，按质量份计，包括以下组分：木酚素10～30份；槐耳多糖2～10份；载体460～488份，可作为饲料添加剂应用于水产类动物养殖中。本发明充分利用木酚素、槐耳多糖和载体三者的有益作用，并对其进行科学配伍，通过深入研究，掌握了其适宜作用剂量，并明确了其对鱼体中胆汁酸代谢的调控作用及机制，具有较强的针对性，再结合相关养殖试验的生长及理化指标，证明了本发明制得的胆汁酸合成促进剂可显著促进鱼体中胆汁酸生物合成，改善鱼体中胆汁酸稳态，进而维持鱼体正常代谢机能。

Description

一种胆汁酸合成促进剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及水产养殖领域，尤其涉及一种胆汁酸合成促进剂及其制备方法和应用。

背景技术

水产饲料中蛋白质含量相对较高，导致饲料成本居高不下。糖脂具有来源广泛、价格低廉等优点，且具有蛋白节约效应。生产上，常通过提高糖脂含量的方式来降低饲料中蛋白质含量，进而降低饲料成本。然而，二者的不合理使用常导致鱼体代谢紊乱，进而诱发肝胆综合症等营养代谢病，给水产养殖业带来了巨大经济损失。研究表明，胆汁酸对鱼体糖脂代谢具有重要调控作用。基于此，生产上，常通过在饲料中添加胆汁酸的方式来预防和治疗鱼类肝脏综合症。然而，胆汁酸自身具有异味，可在一定程度上降低鱼体摄食量，进而降低其生长性能。此外，商品用胆汁酸多提取自畜禽胆膏，并未考虑水产动物与畜禽之间胆汁酸图谱的差异，造成胆汁酸作用特异性不强。基于此，通过营养调控手段增强鱼体自身胆汁酸生物合成能与重吸收功能意义重大。

正常情况下，胆固醇在胆固醇7a羟化酶(CYP7A1)催化作用下，在肝脏中转化为初级胆汁。后者经胆盐输出泵进入胆囊储存，并于进食后分泌进入肠道。在肠道菌群的作用下，初级胆汁酸被转化为次级胆汁酸。95％以上的次级胆汁酸会在回肠部位被重吸收，并通过静脉返回肝脏，进而用于胆汁酸的重新合成，上述过程被称为胆汁酸的肠肝循环。在胆汁酸代谢过程中，肝脏和肠道等器官起着重要作用。鉴于此，通过营养调控手段改善鱼体肝脏胆汁酸生物合成功能与肠道胆汁酸重吸收功能，可显著增强胆汁酸的肠肝循环，进而改善鱼体代谢机能。

发明内容

发明目的：本发明旨在提供一种能够提高胆汁酸生物合成能力，改善动物体代谢机能，进而增强动物体对饲料中糖脂的利用率的胆汁酸合成促进剂，并且，本发明还提供了该胆汁酸合成促进剂的制备方法和应用。

技术方案：本发明提供的胆汁酸合成促进剂按质量份计，包括以下组分：木酚素10～30份；槐耳多糖2～10份；载体460～488份。

优选的，胆汁酸合成促进剂按质量份计，包括以下组分：木酚素15～25份；槐耳多糖2～8份；载体467～483份。

更优选的，胆汁酸合成促进剂按质量份计，包括以下组分：木酚素20份；槐耳多糖5份；载体475份。

进一步地，所述载体为稻壳粉。

本发明提供的胆汁酸合成促进剂的制备方法，步骤为：木酚素、槐耳多糖和载体分别粉碎后过筛，混合后即得胆汁酸合成促进剂。

进一步地，所述木酚素的粉碎和混合条件均为：光照强度＜800lx，温度为＜40℃。

进一步地，所述过筛的目数为100-120。

本发明提供的胆汁酸合成促进剂作为饲料添加剂在养殖动物中的应用。

进一步地，所述养殖动物为水产类动物，优选的，为鲤科鱼类。

进一步地，所述胆汁酸合成促进剂的添加量为1.0-5.0％，可根据水产类动物的种类、生长阶段、规格、养殖方式及饲料营养水平等的不同进行适当调整；所述饲料为高糖或高脂饲料。

发明原理：在本发明中，木酚素作为一种天然多酚类物质，可上调胆汁酸合成限速酶CYP7A1表达，促进肝脏中胆汁酸的生物合成，进而降低鱼体胆固醇含量。槐耳多糖是一类功能性聚合糖，可促进肠道内有益菌增殖并抑制有害菌生长，维持鱼体肠道微生态平衡，进而为次级胆汁酸的形成与胆汁酸重吸收创造良好条件。稻壳粉具有良好的流动性和吸附性，可以承载木酚素和槐耳多糖，并使二者均匀分散在饲料中。基于此，本发明充分结合二者在促进胆汁酸合成与重吸收等方面的有益作用，将其科学配伍并用于水产饲料中，将有助于改善鱼体胆汁酸的生物合成及肠肝循环，进而改善糖脂代谢机能，并降低肝胆综合症等营养代谢病的发病率，最终促进水产养殖业的健康、可持续发展。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：

(1)本发明胆汁酸促进剂以木酚素与槐耳多糖为核心成分，以稻壳粉为载体，充分结合了木酚素与槐耳多糖在促进胆汁酸生物合成与重吸收方面的有益作用，通过深入研究掌握了其适宜作用剂量及配伍比例，并明确了其对鱼体胆汁酸代谢的调控作用和机制，具有较强的针对性。

(2)木酚素与槐耳多糖均已广泛应用于人类膳食补充剂，其生理作用、有益效果和安全性等均被证实。稻壳粉作为饲料添加剂载体，已广泛应用于饲料加工行业。三者对水产动物、畜禽和人体均无毒副作用。

(3)本发明结合相关养殖试验的生长及理化指标，证明了该饲料添加剂可显著促进鱼体肝脏胆汁酸生物合成，增强肠道胆汁酸重吸收，进而提高鱼体胆汁酸分泌；其可显著降低鱼体胆固醇水平，提高鱼体糖耐受性，改善鱼体糖脂代谢，显著降低肝胆综合症等营养代谢病的发病率；可显著提高鱼体对饲料中非蛋白能量的利用率，降低饲料中蛋白质用量及水产动物氨氮排放量，进而降低饲料生产成本并改善水质，最终促进水产养殖的健康、可持续发展。

附图说明

图1为应用实施例2中不同饲料对团头鲂幼鱼血浆生化指标的影响；

图2为应用实施例2中不同饲料对团头鲂幼鱼肝脏生化指标的影响；

图3为应用实施例2中不同饲料的团头鲂幼鱼后肠生化指标的影响；

图4为应用实施例2中不同饲料对团头鲂肝脏CYP7A1表达水平的影响。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明的技术方案作进一步说明。

实施例1：本实施例提供的胆汁酸合成促进剂按质量份计，包括以下组分：木酚素10g、槐耳多糖10g和稻壳粉480g。

制备方法为：将木酚素、槐耳多糖和稻壳粉分别粉碎并过120目筛，备用；然后采用逐级混匀的方式将过筛后的木酚素10g、槐耳多糖10g和稻壳粉480g混合均匀，混合时要保证混合物的均一稳定，即制得500g胆汁酸合成促进剂。

实施例2：本实施例提供的胆汁酸合成促进剂按质量份计，包括以下组分：木酚素15g、槐耳多糖10g和稻壳粉475g。

制备方法为：将木酚素、槐耳多糖和稻壳粉分别粉碎并过120目筛，备用；然后采用逐级混匀的方式将过筛后的木酚素15g、槐耳多糖10g和稻壳粉475g混合均匀，混合时要保证混合物的均一稳定，即制得500g胆汁酸合成促进剂。

实施例3：本实施例提供的胆汁酸合成促进剂按质量份计，包括以下组分：木酚素20g、槐耳多糖5g和稻壳粉475g。

制备方法为：将木酚素、槐耳多糖和稻壳粉分别粉碎并过120目筛，备用；将过筛后的木酚素20g与槐耳多糖5g混合均匀后，逐渐添加到475g过筛后的稻壳粉中，添加的同时不断搅拌，混合，保证混合物均一稳定，即制得500g胆汁酸合成促进剂。

实施例4：本实施例提供的胆汁酸合成促进剂按质量份计，包括以下组分：木酚素25g、槐耳多糖5g和稻壳粉470g。

制备方法为：将木酚素、槐耳多糖和稻壳粉分别粉碎并过120目筛，备用；然后采用逐级混匀的方式将过筛后的木酚素25g、槐耳多糖5g和稻壳粉470g混合均匀，混合时要保证混合物的均一稳定，即制得500g胆汁酸合成促进剂。

实施例5：本实施例提供的胆汁酸合成促进剂按质量份计，包括以下组分：木酚素30g、槐耳多糖2g和稻壳粉468g。

制备方法为：将木酚素、槐耳多糖和稻壳粉分别粉碎并过120目筛，备用；将过筛后的木酚素30g与槐耳多糖2g混合均匀后，逐渐添加到468g过筛后的稻壳粉中，添加的同时不断搅拌，混合，保证混合物均一稳定，即制得500g胆汁酸合成促进剂。

对比例1：本对比例提供的胆汁酸合成促进剂按质量份计，包括以下组分：木酚素20g和稻壳粉480g。

制备方法为：将木酚素与稻壳粉分别粉碎并过120目筛，备用；将过筛后的木酚素20g逐渐添加到480g过筛后的稻壳粉中，添加的同时不断搅拌，混合，保证混合物均一稳定，即制得500g胆汁酸合成促进剂1。

对比例2：本对比例提供的胆汁酸合成促进剂按质量份计，包括以下组分：槐耳多糖5g和稻壳粉495g。

制备方法为：将槐耳多糖与稻壳粉分别粉碎并过120目筛，备用；将过筛后的槐耳多糖5g逐渐添加到495g过筛后的稻壳粉中，添加的同时不断搅拌，混合，保证混合物均一稳定，即制得500g胆汁酸合成促进剂2。

应用实施例1：鲤鱼养殖试验及结果分析

养殖试验在南京农业大学水产教学科研基地(南京市浦口区星甸镇)的池塘(规格：100m×50m)中进行。选取400尾规格整齐的实验鱼(均重：28.95±0.29g)随机分到20个网箱(规格：2m×1m×1m)中，每个网箱饲喂20尾实验。其中，1)对照组投喂基础饲料，糖水平为31.6％；2)高糖组投喂高糖饲料，糖水平为45％；3)高糖+调控物1组，投喂高糖饲料+1％对比例1制作的胆汁酸合成促进剂1作为饲料添加剂；4)高糖+调控物2组，投喂高糖饲料+1％对比例2制作的胆汁酸合成促进剂2作为饲料添加剂；5)高糖+复合调控物组，投喂高糖饲料+1％实验例3制作的胆汁酸合成促进剂作为饲料添加剂。饲料配方见表1。试验期共12周。养殖试验期间人工投喂(每日投喂时间：7:10、12:10和16:10)6种试验饲料直到鱼呈现明显的饱食状态，观察团头鲂生长情况，试验结束后采集样品进行下一步的分析测定。试验结果见表2-表4。

表1试验饲料配方

表2不同饲料对鲤鱼幼鱼生长和饲料利用率的影响

表3不同饲料对鲤鱼幼鱼血浆生化指标的影响

注：同行数据上标含相同字母者差异不显著。

表4不同饲料对鲤鱼幼鱼肝脏与后肠生化指标的影响

由表2可知，不同饲料处理对鲤鱼幼鱼的末重、增重率、特定生长率、采食量、料重比和蛋白效率比均未造成显著影响(P>0.05)。

由表3可知，相较于对照组，高糖组鲤鱼幼鱼的血浆葡萄糖、糖化血清蛋白、甘油三脂和总胆固醇含量显著升高，胆汁酸含量显著降低(P<0.05)。与高糖组相比，高糖+调控物1和高糖+调控物2均有显著的降低血浆葡萄糖的作用，而高糖+复合调控物进一步提高了这一效果(P<0.05)。此外，复合调控物显著降低了糖化血清蛋白、甘油三酯与总胆固醇含量(P<0.05)，而单独使用调控物1(木酚素)或调控物2(槐耳多糖)并未对这两个指标造成显著影响(P>0.05)。在高糖饲料中添加调控物1具有显著提高血浆胆汁酸含量的作用(P<0.05)，复合调控物组的的血浆胆汁酸含量进一步提高(P<0.05)。

由表4可知，高糖组实验鱼的肝脏甘油三酯和总胆固醇含量显著高于对照组，而胆汁酸含量与胆汁酸合成关键酶CYP7A1酶活性显著低于对照组(P<0.05)。在高糖饲料中添加调控物1显著降低了肝脏甘油三酯含量，调控物2显著降低了胆固醇含量，调控物1和调控物2单独使用均有增加胆汁酸含量与CYP7A1酶活性的作用(P<0.05)。与调控物1和调控物2组相比，复合调控物组实验鱼具有更低水平的甘油三酯与总胆固醇含量的作用，以及更高的胆汁酸含量与CYP7A1酶活性(P<0.05)。

以上结果表明，调控物1与调控物2的配伍使用具有明显的改善鱼体胆汁酸的生物合成的作用，进而发挥与单独使用调控物1或调控物2更强的糖脂代谢改善效果。

应用实施例2：团头鲂幼鱼养殖试验及结果分析：

养殖试验在南京农业大学水产教学科研基地(南京市浦口区星甸镇)的池塘(规格：100m×50m)中进行。团头鲂幼鱼购于中国湖北鄂州鱼苗原种场，经过驯化后，240尾规格整齐的幼鱼(均重：35.04±0.14g)随机分到12个网箱(规格：2m×1m×1m)中，每个网箱饲喂20尾团头鲂。其中，1)对照组投喂基础饲料，糖水平为31.6％；2)高糖组投喂高糖饲料，糖水平为45％；3)高糖+添加剂组，投喂高糖饲料+1％实施例3制作的胆汁酸合成促进剂作为饲料添加剂。饲料配方如表5所示。

试验期共12周。养殖试验期间人工投喂(每日投喂时间：7:10、12:10和16:10)3种试验饲料直到鱼呈现明显的饱食状态，观察团头鲂生长情况，试验结束后采集样品进行下一步的分析测定，具体结果如表6和图1-图4所示。

表5试验饲料配方

表6不同饲料对团头鲂幼鱼生长和饲料利用率的影响

注：同行数据上标含相同字母者差异不显著。

由表6可知，不同饲料处理对团头鲂末重、增重率、特定生长率(SGR)、采食量、料重比、蛋白效率比和脏体比影响不大(P>0.05)。高糖组团头鲂肝体比和腹脂率显著高于对照组(P<0.05)，高糖组添加胆汁酸合成促进剂后，肝体比显著下降(P<0.05)。这表明，高糖组添加胆汁酸合成促进剂不会对鱼类的生长性能造成负面影响。此外，添加胆汁酸合成促进剂后，鱼体腹脂积累和肝脏肿大现象有所改善。

由图1、图2和图3可知，不同饲料处理对团头鲂血糖以及血浆中甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇含量没有显著差异(P>0.05)。高糖组团头鲂血浆、肝脏和后肠甘油三酯和胆固醇含量均显著高于对照组(P<0.05)，而添加胆汁酸合成促进剂这一现象有所改善。总胆汁酸含量趋势变化则与之相反(P<0.05)。

由图4可知，与对照组相比，高糖组团头鲂肝脏CYP7A1的表达水平显著降低(P<0.05)，添加胆汁酸合成促进剂后这CYP7A1的转录水平显著提高(P<0.05)。这表明，与对照组相比，高糖组肝脏和后肠内胆固醇积累明显增加，胆汁酸合成减少，高糖可能会导致鱼类产生高胆固醇血症和高甘油三酯血症，而胆汁酸合成促进剂可缓解这一现象。此外，长期饲喂高糖饲料可降低团头鲂胆汁酸合成水平，而添加胆汁酸合成促进剂会显著提高团头鲂胆汁酸合成水平。

应用实施例3：团头鲂幼鱼养殖试验及结果分析：

养殖试验在南京农业大学水产教学科研基地(南京市浦口区星甸镇)的池塘(规格：100m×50m)中进行。团头鲂幼鱼购于中国湖北鄂州鱼苗原种场，经过驯化后，240尾规格整齐的幼鱼(均重：40.12±0.35g)随机分到12个网箱(规格：2m×1m×1m)中，每个网箱饲喂20尾团头鲂。其中，1)对照组投喂基础饲料，脂肪水平为6％；2)高脂组投喂高脂饲料，脂肪水平为12％；3)高脂+添加剂组，投喂高脂饲料+1％实施例3制作的胆汁酸合成促进剂作为饲料添加剂。饲料配方如表7所示。

试验期共12周。养殖试验期间人工投喂(每日投喂时间：7:10、12:10和16:10)3种试验饲料直到鱼呈现明显的饱食状态，观察团头鲂生长情况，试验结束后采集样品进行下一步的分析测定，结果见表8-表10。

表7试验饲料配方

表8不同饲料对团头鲂幼鱼生长和饲料利用率的影响

注：同行数据上标含相同字母者差异不显著。

由表8可知，不同饲料处理对团头鲂末重、增重率、特定生长率(SGR)、采食量、料重比和蛋白效率比未造成显著影响(P>0.05)。高脂组团头鲂的肝体比、腹脂率与脏体比均显著高于对照组(P<0.05)，而在高脂饲料中添加胆汁酸合成促进剂显著降低以上指标(P<0.05)。这表明，在高脂饲料中添加胆汁酸合成促进剂不会对鱼类的生长性能与饲料利用能力造成负面影响。此外，胆汁酸合成促进剂能够显著改善高脂造成的鱼类内脏脂肪过度沉积现象。

表9不同饲料对团头鲂幼鱼血浆生化指标的影响

注：同行数据上标含相同字母者差异不显著。

由表9可知，与对照组相比，高脂饲料饲喂团头鲂具有显著升高的血浆葡萄糖、甘油三脂与胆固醇含量，以及显著降低的胆汁酸含量(P<0.05)，而添加胆汁酸合成促进剂显著降低了葡萄糖、甘油三脂与总胆固醇含量，并提升胆汁酸含量(P<0.05)。

表10不同饲料对团头鲂幼鱼肝脏与后肠生化指标的影响

注：同行数据上标含相同字母者差异不显著。

由表10可知，高脂组团头鲂的血浆与后肠中的甘油三酯与总胆固醇含量均显著高于对照组，同时胆汁酸含量显著低于对照组(P<0.05)，胆汁酸合成促进剂对这些现象均有显著的改善作用(P<0.05)。与对照组相比，高脂组团头鲂肝脏胆汁酸合成关键酶CYP7A1活性显著降低，而添加胆汁酸合成促进剂显著提高了CYP7A1酶活性(P<0.05)。以上结果表明，但胆汁酸合成促进剂可以通过缓解胆汁酸合成障碍，有效改善高脂诱导的甘油三酯与胆固醇过度沉积。

以上实验结果表明，在养殖鱼类饲料中添加适宜剂量本发明制备的胆汁酸合成促进剂可显著减少鱼体脂质积累，增加鱼体胆汁酸合成，提高鱼类对高能饲料的利用率。且本发明制备的胆汁酸合成促进剂组为添加剂对鱼体无不良影响。木酚素、槐耳多糖和稻壳粉均可规模化的生产，其价格也廉价，在水产养殖业中具有广泛的应用前景。

Claims (8)

1.一种鱼类动物用饲料添加剂胆汁酸合成促进剂，其特征在于，按质量份计，包括以下组分：木酚素10~30份；槐耳多糖2~10份；载体460~488份。

2.根据权利要求1所述的胆汁酸合成促进剂，其特征在于，按质量份计，包括以下组分：木酚素15~25份；槐耳多糖2~8份；载体467~483份。

3.根据权利要求2所述的胆汁酸合成促进剂，其特征在于，按质量份计，包括以下组分：木酚素20份；槐耳多糖5份；载体475份。

4.根据权利要求1所述的胆汁酸合成促进剂，其特征在于，所述载体为稻壳粉。

5.根据权利要求1所述的胆汁酸合成促进剂，其特征在于，所述胆汁酸合成促进剂在饲料中的添加量为1.0-5.0%。

6.一种权利要求1所述的胆汁酸合成促进剂的制备方法，其特征在于，步骤为：木酚素、槐耳多糖和载体分别粉碎后过筛，混合后即得胆汁酸合成促进剂。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述木酚素的粉碎和混合条件均为：光照强度＜800lx，温度＜40℃。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述过筛的目数为100-120。