CN118078810A

CN118078810A - 用于抑制肿瘤生长的材料和方法

Info

Publication number: CN118078810A
Application number: CN202410201525.5A
Authority: CN
Inventors: S·维德亚瑟格; R·古普塔; S·加托
Original assignee: Entelinco LLC; University of Florida Research Foundation Inc
Current assignee: Entelinco LLC; University of Florida Research Foundation Inc
Priority date: 2017-10-02
Filing date: 2018-10-02
Publication date: 2024-05-28
Also published as: US20200323820A1; EP3691628A1; JP2020536096A; WO2019070750A1; CN111417391A; JP2023171755A; US12109191B2; KR102709096B1; CN111417391B; CA3078335A1; KR20200060492A; JP7352901B2

Abstract

本发明提供了用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物和方法。本发明还提供了通过施用本文所述的组合物在需要治疗的受试者中治疗癌症的方法。本发明可通过将细胞暴露于组合物而用于抑制癌细胞生长。本发明还提供了可与外科手术、化学疗法和/或放射疗法联合使用的癌症治疗。

Description

用于抑制肿瘤生长的材料和方法

分案信息

本申请是2018年10月2日递交的申请号为201880076756.0、发明名称为“用于抑制肿瘤生长的材料和方法”的发明专利申请的分案申请。

相关申请

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2017年10月2日提交的美国临时专利申请U.S.S.N.62/566,787的优先权，该专利申请以引用方式并入本文。

背景技术

癌症是美国及世界各地男女死亡的主要原因之一。癌症死亡的主要原因包括肺癌、结直肠癌、胰腺癌和乳腺癌。

早期癌症诊断是提高存活率的关键。研究表明，在早期局部化阶段进行癌症诊断并通过手术消除此类疾病可提高五年存活率。然而，在癌症扩散到其他器官、尤其是远处部位后，存活率大大下降。不幸的是，包括肺癌在内的一些癌症在进入晚期之前通常是无症状的。

治疗和预后取决于癌症的类型和阶段(扩散程度)。可能的治疗方式包括外科手术、化学疗法和/或放射疗法。放射线和/或化学疗法可能会对胃肠道(GI)的内层造成严重损伤。中等至高剂量的放射线和/或化学疗法会导致具有集落生成潜力的细胞遭到破坏，这对于正常增殖、成熟和分化过程中从绒毛顶部脱落的细胞的连续替代至关重要。从隐窝向绒毛的迁移需要5至7天。因此，胃肠道毒性在放射线照射和/或化学疗法后的第一周就会表现出来，并且是癌症治疗中最重要的剂量限制因素。

由哺乳动物中的10个成员(ANO1-10)组成的Anoctamin(ANO，也称为TMEM16)蛋白质家族是具有Ca²⁺激活的Cl活性的跨膜蛋白家族。ANO蛋白在包括癌症在内的各种疾病中发挥作用。据报道，AN01(也称为TMEM16a)在胃肠道间质瘤以及口腔癌和头颈部鳞状细胞癌中被上调。Anoctamin 1(Ano1，TMEM16A)是一种新型的Ca2+激活的氯离子通道(CaCC)，它在上皮细胞和其他细胞类型中具有重要的生理功能。Ano1的编码序列位于11ql3区域内，该区域是在许多不同的人类癌症诸如膀胱癌、乳腺癌和HNSCC中常被扩增的染色体基因座。还据报道说，人体内的ANO5(也称为TMEM16e)突变会导致颌骨骨干发育不良。另外，据报道，ANO7(也称为TMEM16g)在正常和癌性前列腺中选择性表达并调控细胞-细胞聚集。

如2014年12月5日提交的美国专利申请号14/406,087中所述，Anoctamin蛋白还与由放射疗法引起的放射毒性相关，所述放射疗法是癌症的常见治疗方案，所述专利申请全文以引用方式并入本文。可用于治疗放射性肠炎的一种组合物是美国专利号8,993,522中所述的基于氨基酸的口服补液溶液(AA-ORS)，所述专利全文以引用方式并入本文。美国专利号8,993,522中使用的制剂的工作原理是：通过氨基酸偶联的钠转运来纠正补液，通过选择一组具有抗分泌特性的氨基酸减少来自隐窝的阴离子分泌，以及通过使粘膜变紧。

尽管在外科手术、化学疗法和放射疗法方面取得进展，但是仍需要开发用于癌症治疗的新型疗法，特别是有效、成本效益高并且能提高患者耐受性的疗法。

发明内容

本文提供了用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物，该组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的一种或多种游离氨基酸，以及任选地药学上可接受的载体、缓冲剂、电解质或赋形剂。在某些实施方案中，该组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种、五种或更多种、六种或更多种、七种或更多种、八种或更多种、九种或更多种、十种或更多种、十一种或更多种、十二种或更多种、十三种或更多种、十四种或更多种或者全部十五种游离氨基酸。

在某些实施方案中，该组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸的一种或多种游离氨基酸。在某些实施方案中，该组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸的两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种或者全部五种游离氨基酸。在某些实施方案中，该组合物还包含游离氨基酸天冬酰胺。在某些实施方案中，该组合物还包含游离氨基酸甘氨酸。在某些实施方案中，该组合物还包含游离氨基酸天冬酰胺和甘氨酸。在某些实施方案中，该组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自天冬酰胺、甘氨酸、缬氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的一种或多种游离氨基酸。在某些实施方案中，该组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自天冬酰胺、甘氨酸、缬氨酸，脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种、五种或更多种、六种或更多种或者全部七种游离氨基酸。在某些实施方案中，该组合物还包含水。在某些实施方案中，该组合物还包含药学上可接受的载体、缓冲剂、电解质或佐剂。

本文还提供了治疗癌症或肿瘤的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的组合物，该组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的一种或多种游离氨基酸，以及任选地药学上可接受的载体、缓冲剂、电解质、佐剂或赋形剂。

本文还公开了抑制癌细胞生长的方法，该方法包括使癌细胞暴露于组合物中，该组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的一种或多种游离氨基酸，以及任选地药学上可接受的载体、缓冲剂、电解质、佐剂或赋形剂。

在另一方面，本公开提供了用于治疗癌症的组合物，该组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的一种或多种游离氨基酸。在另一方面，本发明提供了氨基酸组合物在对其有需要的受试者体内治疗癌症的用途。

附图说明

图1示出了在存在和不存在氨基酸口服补液溶液(AA-ORS)的情况下，在暴露于0、0.5、1、3、5、7和9Gy放射线后(左上方)以及在暴露于0和5Gy放射线后(左下方)的Anocatmin-1(AN01)蛋白水平的蛋白质印迹分析。右上方的图示出了在进行和不进行治疗的情况下使用放射线后的ano1mRNA水平。

图2示出了在存在盐水或AA-ORS溶液的情况下暴露于0或5Gy放射线后，放射线对沿小肠刷状缘膜的ANO1表达的影响。

图3示出了在集落生成分析中，加扰对照siRNA和ANO1 siRNA在MCF10A正常乳腺细胞和MDAMB-231乳腺癌细胞中的作用。

图4进一步示出了在集落生成分析中，加扰对照siRNA和ANO1 siRNA在MDAMB-32乳腺癌细胞中的作用。

图5示出了在集落生成分析中，对照质粒载体pSV caco-2和ANO1siRNA在Caco2肠癌细胞和正常肠细胞(CRL-1831)中的作用。

图6示出了在集落生成分析中，对照质粒载体(pSV)和ANO1 siRNA在正常肺细胞(WI-38)和癌肺细胞(HTC171)中的作用。

图7示出了单个示例性氨基酸、对照蛋白质以及五个氨基酸的组合(5AA)对Ano1蛋白水平的归一化影响。

图8示出了用对照蛋白质、八个氨基酸的组合(8AA)(异亮氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、酪氨酸、丝氨酸、缬氨酸、甘氨酸、色氨酸)、五个氨基酸的组合(5AA)、另一种五个氨基酸的组合(5AA-Ano1)和七个氨基酸的组合(7AA-Ano1)处理后，从刷状缘膜的细胞中提取的ANO1蛋白的蛋白质水平的蛋白质印迹分析。

图9A示出了被Anoctamin-1激活的信号传导通路。图9B示出了Ano1的调控图。

图10A和图10B示出了在集落生成分析中，对照质粒载体pSV caco-2和ANO1 siRNA在Caco2肠癌细胞和正常肠细胞(CRL-1831)中的作用(也在图5中示出)。图10A示出了作为对照质粒载体pSV和ANO1 siRNA在正常肠细胞(CRL-1831)中的作用的一部分的集落数。图10B示出了作为对照质粒载体pSV和ANO1 siRNA在Caco2癌细胞中的作用的一部分的集落数以及含有pSV和SiAno1的集落数。pSV表示已转染的对照载体：板中的6个孔接种有caco2细胞，且密度不断增加。SiAno1 caco-2表示：特异于ANO1的小抑制性RNA，用于抑制ANO1的合成和表达。

图11A示出了在暴露于5Gy放射线(并用常规林格氏液(“RR”)、“5AA”(天冬氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸和缬氨酸)或“7AA-ANO1”(脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺和甘氨酸)处理)后的Anocatmin-1(ANO1)蛋白水平的蛋白质印迹分析。用5AA处理抑制了从肠上皮细胞分离的刷状缘膜上的ano1表达。用7AA-ANO1(特异性地抑制细胞膜上的ano1表达的氨基酸)处理进一步降低了刷状缘膜中的蛋白质水平。

图11B示出了在暴露于5Gy放射线并用基础水平的“5AA”、ANO1的特异性抑制剂(CaCCinh)和“Ano1”处理后的Cl-净通量。图11C示出了在暴露于5Gy放射线并用基础水平的“ANO7AA”、CaCCinh和“Ano1”处理后的Cl-净通量。尤斯室通量研究表明，ANO1的特异性抑制剂(CaCCinh)降低了氯离子净通量，而降低膜上的ano1表达的7个氨基酸(ANO7AA)同样降低了净氯离子通量。使用氯离子的同位素36C1研究通量。

图12示出了细胞周期的图。如下进行细胞周期的碘化丙啶(PI)染色：G1期的二倍体细胞将具有2N条染色体，换句话讲，具有4N染色体补体的G2或M期细胞数量的一半。在合成新染色体(新DNA)进程中的S期细胞具有中等数量。由于PI会按其DNA含量成比例地标记细胞，因此可以从直方图中读取每个阶段中细胞的百分比。

图13A至图13D示出了指定氨基酸组合物的4小时处理对结肠癌细胞(HT-29)的影响。在图13A至图13D中，使用在常规林格氏液(“RR”)、5AA和7AA的存在下孵育的细胞进行流式细胞术(FACS)分析。图13A至图13D所示的结果示出了7AA抑制处于G2/M期的细胞，因此在G1期更多细胞被阻滞(图13D)。图13A示出了氨基酸组合物“RR”的4小时处理对结肠癌细胞(HT-29)的影响(细胞计数)。图13B示出了氨基酸组合物“5AA”的4小时处理对结肠癌细胞(HT-29)的影响(细胞计数)。图13C示出了氨基酸组合物“7AA”的4小时处理对结肠癌细胞(HT-29)的影响(细胞计数)。图13D示出了对照和氨基酸组合物“5AA”和“7AA”的4小时处理对结肠癌细胞(HT-29)以及在细胞周期的G1期、S期和G2/M期中存在的细胞数目的影响。

图14示出了在HT-29结肠癌细胞中对照、5AA和7AA的4小时处理对CDT1、MCM2、p-ERK、半胱天冬酶3、细胞周期蛋白D1和p53的结合的影响。起点识别复合物(ORC)被认为在整个细胞周期(1,2)中都与染色质结合。前复制复合物(Pre-RC)在有丝分裂晚期/G1早期形成，始于CDT1和cdc6与起点的结合，以允许异源六聚化MCM2-7复合物的结合。MCM复合物被认为是复制解旋酶，并且pre-RC的形成被称为染色质许可。

图15A示出了在如下所述的4小时处理下用对照和7AA-ANO1处理HT-29结肠癌细胞的效果。与对照相比，在组合使用时会降低细胞刷状缘膜中ANO1蛋白水平的前七个氨基酸(7AA-Ano1)被证实减少了集落形成的数量。在7AA的存在下将细胞孵育4小时，然后洗涤并在常规培养基的存在下进一步生长。这些研究表明，7AA可以抑制肿瘤细胞并且可通过信号传导机制起作用。图15B示出了使用常规林格氏液(RR)和7AA进行结合图15A描述的处理后的集落数。

具体实施方式

通过参考以下结合附图的详细描述，可以更容易地理解本发明所公开的组合物和方法，所述附图构成本公开的一部分。应当理解，本发明所公开的组合物和方法不限于本文描述和/或示出的具体组合物和方法，并且本文所用的术语仅用于以举例方式描述特定实施方案，并不旨在限制所要求保护的组合物和方法。

除非另外特别说明，否则关于可能的机制或作用模式或改善原因的任何描述仅是例示性的，并且本发明所公开的组合物和方法不受任何此类建议的机制或作用模式或改善原因的正确或错误的约束。

在全文中，描述涉及组合物和使用所述组合物的方法。当本公开描述或要求保护与组合物相关的特征或实施方案时，这样的特征或实施方案同样适用于使用所述组合物的方法。同样，在本公开描述或要求保护与使用组合物的方法相关的特征或实施方案的情况下，这样的特征或实施方案同样适用于该组合物。

在本文中列举或建立数值范围时，该范围包括其端点以及该范围内的所有单个整数和小数，并且还包括其中由那些端点和内部整数和小数的所有各种可能组合形成的每个较窄的范围，以构成在所述范围内的较大值组的子组，如同已明确列举这些较窄范围中的每一个一样。当数值范围在本文中被表述为大于指定值时，该范围仍然是有限的，并且其上限受到在如本文所述的本发明的上下文中可操作的值的限制。当数值范围在本文中被表述为小于指定值时，该范围的下限仍以非零值为界。并非旨在当定义范围时将本发明的范围限于所列举的具体值。所有范围均包括端值并且是可组合的。

当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，应当理解，该特定值构成了另一个实施方案。除非上下文另外明确指出，否则对特定数值的引用至少包括该特定值。

应当理解，为清楚起见，本文在单独的实施方案的上下文中描述的本发明所公开的组合物和方法的某些特征也可以在单个实施方案中组合提供。反之，为简洁起见，在单个实施方案的上下文中描述的本发明所公开的组合物和方法的各种特征也可以单独地或以任何子组合形式提供。

除非本文另外指明或明确地与上下文矛盾，否则在描述本发明的上下文中使用的术语“一个”、“一种”和“所述”以及类似的指代物应理解为涵盖单数和复数形式。

与描述的各方面相关的各种术语在说明书和权利要求书中通篇使用。除非另外指明，否则此类术语被赋予本领域的普通含义。其他具体定义的术语应按照与本文所提供的定义相符的方式理解。

除非另外说明或明确地与上下文矛盾，否则本文相对于一个或多个要素使用诸如“包括”、“具有”、“包含”或“含有”的术语对本发明的任何方面或实施方案的描述旨在为本发明的“由一个或多个特定要素组成”、“基本上由一个或多个特定要素组成”或“基本上包括一个或多个特定要素”的类似方面或实施方案提供支持(例如，除非另外说明或明确地与上下文矛盾，否则在本文中描述为包含特定要素的组合物应理解为还描述由该要素组成的组合物)。

治疗组合物

本文提供了用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物，该组合物包含选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的一种或多种游离氨基酸，以及药学上可接受的赋形剂。

“药学上可接受的赋形剂”是指与本公开的化合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。“药学上可接受的赋形剂”指无毒的、生物学上可耐受的或换句话讲在生物学上适于施用于受试者的物质，诸如惰性物质，该物质被添加到药物组合物中或换句话讲用作媒介物、载体或稀释剂以促进药剂的施用并且与该药剂相容。赋形剂的示例包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油、硬脂酸酯、二氧化硅、聚乙烯醇、滑石、二氧化钛、氧化铁和聚乙二醇。

在一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项或基本上由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的仅一种游离氨基酸，以及任选地药学上可接受的载体、缓冲剂、电解质、佐剂或赋形剂。在某些实施方案中，该组合物基本上由以下项组成或由以下项组成：仅指定的游离氨基酸，无其他游离氨基酸，或可忽略量的其他游离氨基酸。在某些实施方案中，该组合物包含氨基酸衍生物，所述氨基酸衍生物是“天然”或“非天然”氨基酸的衍生物。在某些实施方案中，该组合物包含氨基酸的盐和/或前药。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的脯氨酸或基本上由作为游离氨基酸的脯氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的丝氨酸或基本上由作为游离氨基酸的丝氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的苏氨酸或基本上由作为游离氨基酸的苏氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的酪氨酸或基本上由作为游离氨基酸的酪氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的缬氨酸或基本上由作为游离氨基酸的缬氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的天冬酰胺或基本上由作为游离氨基酸的天冬酰胺组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的甘氨酸或基本上由作为游离氨基酸的甘氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的色氨酸或基本上由作为游离氨基酸的色氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的赖氨酸或基本上由作为游离氨基酸的赖氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的亮氨酸或基本上由作为游离氨基酸的亮氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的苯丙氨酸或基本上由作为游离氨基酸的苯丙氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的甲硫氨酸或基本上由作为游离氨基酸的甲硫氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的精氨酸或基本上由作为游离氨基酸的精氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的组氨酸或基本上由作为游离氨基酸的组氨酸组成。在另一个实施方案中，该组合物包含作为游离氨基酸的半胱氨酸或基本上由作为游离氨基酸的半胱氨酸组成。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意两种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸和丝氨酸的组合、脯氨酸和苏氨酸的组合、脯氨酸和酪氨酸的组合、脯氨酸和缬氨酸的组合、脯氨酸和天冬酰胺的组合、脯氨酸和甘氨酸的组合、脯氨酸和色氨酸的组合、脯氨酸和赖氨酸的组合、脯氨酸和亮氨酸的组合、脯氨酸和苯丙氨酸的组合、脯氨酸和蛋氨酸的组合、脯氨酸和精氨酸的组合、脯氨酸和组氨酸的组合、脯氨酸和半胱氨酸的组合、丝氨酸和苏氨酸的组合、丝氨酸和酪氨酸的组合、丝氨酸和缬氨酸的组合、丝氨酸和天冬酰胺的组合、丝氨酸和甘氨酸的组合、丝氨酸和色氨酸的组合、丝氨酸和赖氨酸的组合、丝氨酸和亮氨酸的组合、丝氨酸和苯丙氨酸的组合、丝氨酸和蛋氨酸的组合、丝氨酸和精氨酸的组合、丝氨酸和组氨酸的组合、丝氨酸和半胱氨酸的组合、苏氨酸和酪氨酸的组合、苏氨酸和缬氨酸的组合、苏氨酸和天冬酰胺的组合、苏氨酸和甘氨酸的组合、苏氨酸和色氨酸的组合、苏氨酸和赖氨酸的组合、苏氨酸和亮氨酸的组合、苏氨酸和苯丙氨酸的组合、苏氨酸和蛋氨酸的组合、苏氨酸和精氨酸的组合、苏氨酸和组氨酸的组合、苏氨酸和半胱氨酸的组合、酪氨酸和缬氨酸的组合、酪氨酸和天冬酰胺的组合、酪氨酸和甘氨酸的组合、酪氨酸和色氨酸的组合、酪氨酸和赖氨酸的组合、酪氨酸和亮氨酸的组合、酪氨酸和苯丙氨酸的组合、酪氨酸和蛋氨酸的组合、酪氨酸和精氨酸的组合、酪氨酸和组氨酸的组合、酪氨酸和半胱氨酸的组合、缬氨酸和天冬酰胺的组合、缬氨酸和甘氨酸的组合、缬氨酸和色氨酸的组合、缬氨酸和赖氨酸的组合、缬氨酸和亮氨酸的组合、缬氨酸和苯丙氨酸的组合、缬氨酸和蛋氨酸的组合、缬氨酸和精氨酸的组合、缬氨酸和组氨酸的组合、缬氨酸和半胱氨酸的组合、天冬酰胺和甘氨酸的组合、天冬酰胺和色氨酸的组合、天冬酰胺和赖氨酸的组合、天冬酰胺和亮氨酸的组合、天冬酰胺和苯丙氨酸的组合、天冬酰胺和蛋氨酸的组合、天冬酰胺和精氨酸的组合、天冬酰胺和组氨酸的组合、天冬酰胺和半胱氨酸的组合、甘氨酸和色氨酸的组合、甘氨酸和赖氨酸的组合、甘氨酸和亮氨酸的组合、甘氨酸和苯丙氨酸的组合、甘氨酸和蛋氨酸的组合、甘氨酸和精氨酸的组合、甘氨酸和组氨酸的组合、甘氨酸和半胱氨酸的组合、色氨酸和赖氨酸的组合、色氨酸和亮氨酸的组合、色氨酸和苯丙氨酸的组合、色氨酸和蛋氨酸的组合、色氨酸和精氨酸的组合、色氨酸和组氨酸的组合、色氨酸和半胱氨酸的组合、赖氨酸和亮氨酸的组合、赖氨酸和苯丙氨酸的组合、赖氨酸和蛋氨酸的组合、赖氨酸和精氨酸的组合、赖氨酸和组氨酸的组合、赖氨酸和半胱氨酸的组合、亮氨酸和苯丙氨酸的组合、亮氨酸和蛋氨酸的组合、亮氨酸和精氨酸的组合、亮氨酸和组氨酸的组合、亮氨酸和半胱氨酸的组合、苯丙氨酸和蛋氨酸的组合、苯丙氨酸和精氨酸的组合、苯丙氨酸和组氨酸的组合、苯丙氨酸和半胱氨酸的组合、精氨酸和组氨酸的组合、精氨酸和半胱氨酸的组合以及组氨酸和半胱氨酸的组合。本段中公开的组合在此进一步与选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二和/或第十三游离氨基酸组合公开。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意三种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸和苏氨酸的组合，所述脯氨酸、丝氨酸和苏氨酸的组合包括但不限于脯氨酸、丝氨酸和苏氨酸的组合，脯氨酸、丝氨酸和酪氨酸的组合，脯氨酸、丝氨酸和缬氨酸的组合，脯氨酸、苏氨酸和酪氨酸的组合，脯氨酸、苏氨酸和缬氨酸的组合，丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的组合，丝氨酸、酪氨酸和缬氨酸的组合，以及苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸的组合。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意四种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的组合，脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸和缬氨酸的组合，以及丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸的组合。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意五种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸的组合，天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸的组合，脯氨酸、天冬酰胺、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸的组合，脯氨酸、丝氨酸、天冬酰胺、酪氨酸和缬氨酸的组合，脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺和缬氨酸的组合，脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和天冬酰胺的组合，甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸的组合，脯氨酸、甘氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸的组合，脯氨酸、丝氨酸、甘氨酸、酪氨酸和缬氨酸的组合，脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸和缬氨酸的组合，以及脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和甘氨酸的组合。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意六种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸和天冬酰胺的组合，以及脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸和甘氨酸的组合。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意七种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺和甘氨酸的组合，脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、亮氨酸和天冬酰胺的组合，以及脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、亮氨酸和甘氨酸的组合。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意八种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸和色氨酸的组合。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意九种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸和赖氨酸的组合。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意十种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸和亮氨酸的组合。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意十一种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸的组合。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意十二种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和甲硫氨酸的组合。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意十三种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸和精氨酸的组合。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意十四种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸和组氨酸的组合。为简洁起见，并未解析所有组合。

在另一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的任意十五种游离氨基酸，包括但不限于脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的组合。

本发明的组合物可包含天然氨基酸或其在抑制癌细胞的生长、增殖和/或发展方面保持基本上相同或更好活性的衍生物。术语“氨基酸”涵盖含有胺(-NH2)官能团、羧基(-COOH)官能团和特定于每个氨基酸的侧链(“R”)基团的所有已知氨基酸。“氨基酸”涵盖由人类基因组编码的21个氨基酸(即，蛋白原性氨基酸)、由细菌或单细胞生物编码或产生的氨基酸以及天然衍生的氨基酸。出于本公开的目的，除非另有说明，否则具有碱性侧链的氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)的共轭酸形式或具有酸性侧链的氨基酸(天冬氨酸和谷氨酸)的共轭碱形式基本上相同。“氨基酸”还涵盖其在增强本发明的组合物的效果方面(例如，增加质膜中CFTR蛋白的数量，增加细胞的氯离子输出，治疗囊肿性纤维变性)保持基本上相同或更好的活性的衍生物。所述衍生物可以是例如对映异构体，并且包括氨基酸的D形式和L形式。所述衍生物可以是“天然”或“非天然”氨基酸的衍生物(例如，β-氨基酸、高氨基酸、脯氨酸衍生物、丙酮酸衍生物、3-取代的丙氨酸衍生物、甘氨酸衍生物、环取代的酪氨酸衍生物、环取代的苯丙氨酸衍生物、线性核心氨基酸和N-甲基氨基酸)，例如硒代半胱氨酸、吡咯赖氨酸、碘化酪氨酸、正亮氨酸或正缬氨酸。其他氨基酸衍生物包括但不限于通过例如氨基酸的酰化、甲基化、糖基化和/或卤化合成的那些。这些包括例如β-甲基氨基酸、C-甲基氨基酸和N-甲基氨基酸。本文所述的氨基酸可以游离氨基酸形式存在。术语“游离氨基酸”是指不属于肽或多肽的一部分(例如，不通过肽键连接至另一个氨基酸)的氨基酸。游离氨基酸在溶液中是游离的，但可以与溶液中的盐或其他组分缔合。

在某些实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物不包含或仅包含可忽略量的选自谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸的一种或多种游离氨基酸。所谓“可忽略的”意指存在的丝氨酸对癌细胞抑制没有影响。或者，在某些实施方案中，即使这些氨基酸存在于组合物中，它们也不以将会影响抑制肿瘤和/或癌细胞生长的治疗效果的量存在。

在某些实施方案中，可忽略的量是其中氨基酸的总浓度小于100mg/l、50mg/l、10mg/l、5mg/l、1mg/l、0.5mg/l、0.1mg/l或0.01mg/l的量。在某些实施方案中，可忽略的量是其中氨基酸的总浓度小于100mg/l的量。在某些实施方案中，可忽略的量是其中氨基酸的总浓度小于50mg/l的量。在某些实施方案中，可忽略的量是其中氨基酸的总浓度小于10mg/l的量。在某些实施方案中，可忽略的量是其中氨基酸的总浓度小于5mg/l的量。在某些实施方案中，可忽略的量是其中氨基酸的总浓度小于1mg/l的量。在某些实施方案中，可忽略的量是其中氨基酸的总浓度小于0.5mg/l的量。在某些实施方案中，可忽略的量是其中氨基酸的总浓度小于0.1mg/l的量。在某些实施方案中，可忽略的量是其中氨基酸的总浓度小于0.01mg/l的量。

在一个实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物不包含或仅包含可忽略量的选自谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸的游离氨基酸中的一种。在另一个实施方案中，该组合物不包含或仅包含可忽略量的谷氨酸作为游离氨基酸。在另一个实施方案中，该组合物不包含或仅包含可忽略量的谷氨酰胺作为游离氨基酸。在另一个实施方案中，该组合物不包含或仅包含可忽略量的天冬氨酸作为游离氨基酸。在另一个实施方案中，该组合物不包含或仅包含可忽略量的丙氨酸作为游离氨基酸。在另一个实施方案中，该组合物不包含或仅包含可忽略量的异亮氨酸作为游离氨基酸。

在另外的实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物不包含或仅包含可忽略量的选自谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸的游离氨基酸中的两种，包括但不限于谷氨酸和谷氨酰胺的组合，谷氨酸和天冬氨酸的组合，谷氨酸和丙氨酸的组合，谷氨酸和异亮氨酸的组合，谷氨酰胺和天冬氨酸的组合，谷氨酰胺和丙氨酸的组合，谷氨酰胺和异亮氨酸的组合，天冬氨酸和丙氨酸的组合，天冬氨酸和异亮氨酸的组合，以及丙氨酸和异亮氨酸的组合。

在另外的实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物不包含或仅包含可忽略量的选自谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸的游离氨基酸中的三种，包括但不限于谷氨酸、谷氨酰胺和天冬氨酸的组合，谷氨酸、谷氨酰胺和丙氨酸的组合，谷氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸的组合，谷氨酸、天冬氨酸和丙氨酸的组合，谷氨酸、天冬氨酸和异亮氨酸的组合，谷氨酸、丙氨酸和异亮氨酸的组合，谷氨酰胺、天冬氨酸和丙氨酸的组合，谷氨酰胺、天冬氨酸和异亮氨酸的组合，谷氨酰胺、天冬氨酸和异亮氨酸的组合，以及天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸的组合。

在另外的实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物不包含或仅包含可忽略量的选自谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸的游离氨基酸中的四种，包括但不限于谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸和丙氨酸的组合，谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸和异亮氨酸的组合，以及谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸的组合。

在另外的实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物不包含或仅包含可忽略量的选自谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸的游离氨基酸中的五种，包括但不限于谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸的组合。

在某些实施方案中，本发明的癌细胞表达选自由以下项组成的组的Anoctamin：Anoctamin-1、Anoctamin-2、Anoctamin-3、Anoctamin-4、Anoctamin-5、Anoctamin-6、Anoctamin-7、Anoctamin-8、Anoctamin-9和Anoctamin-10，优选Anoctamin-1(ANO1)，即Ca²⁺激活的Cl'通道(CaCC)。

Anoctamin表达水平可基于mRNA水平或蛋白质水平进行测定。Anoctamin表达的测定可以定性地、半定量地或定量地进行。多个哺乳动物物种的Anoctamin蛋白和mRNA的序列是公开可用的，并且可以从例如GenBank数据库中获得。在一个实施方案中，人Anoctamin-1(ANO1)蛋白具有与GenBank登录号NP_060513相关的氨基酸序列。在另一个实施方案中，人Anoctamin 1 mNRA转录物具有与GenBank登录号NM_018043相关的核酸序列。受益于本公开的本领域普通技术人员可以容易地使用感兴趣的哺乳动物物种的Anoctamin蛋白和核酸序列来实践本发明。

用于确定Anoctamin表达水平的方法是本领域众所周知的，包括但不限于蛋白质印迹、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫沉淀、包括逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的聚合酶链反应(PCR)方法、核酸杂交以及它们的任何组合。在一个优选的实施方案中，使用ELISA测定Anoctamin表达水平。

Anoctamin(例如，ANO1)表达水平可以基于Anoctamin(例如，ANO1)mRNA的水平进行测定。在一个实施方案中，Anoctamin mRNA水平可通过这样的方法来测定，该方法包括使生物样品与多核苷酸探针接触，该多核苷酸探针包含与Anoctamin(例如，ANO1)mRNA特异性结合或在严格条件下杂交的核酸序列；并且检测在多核苷酸探针与Anoctamin(例如，ANO1)mRNA之间形成的复合物。

在一个实施方案中，Anoctamin mRNA水平可通过聚合酶链反应方法来测定。聚合酶链反应(PCR)是用于使用引物和聚合试剂扩增核酸样品中存在的一个或多个目标核酸序列，然后检测扩增的序列的过程。一种引物在与另一种引物杂交后的延伸产物成为用于产生所需特异性核酸序列的模板，反之亦然，并且以产生所需量的序列所需的频率重复该过程。为了检测所需序列的存在(美国专利号4,683,195)，技术人员经常使用聚合酶链反应。

在一个实施方案中，根据本发明的组合物抑制癌细胞的生长，如通过ANO1的下调所证明。

在优选的实施方案中，本发明的癌细胞是脑肿瘤细胞、鼻咽癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞、异常白细胞、异常淋巴细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞、胃癌细胞、食道癌细胞、膀胱癌细胞或皮肤癌细胞。

在某些实施方案中，所述一种或多种游离氨基酸在组合物中的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，脯氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，丝氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，苏氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，酪氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，缬氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，天冬酰胺的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，甘氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，色氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，赖氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，亮氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，苯丙氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，甲硫氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，精氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，组氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。在一个实施方案中，半胱氨酸的浓度为约0.1至2.0克/升。

在其他实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物不包含或包含可忽略量的谷氨酸，其中谷氨酸的总浓度小于100mg/l、50mg/l、10mg/l、5mg/l、1mg/l、0.5mg/l、0.1mg/l或0.01mg/l。治疗组合物可不包含或可包含可忽略量的谷氨酰胺，其中谷氨酰胺的总浓度小于100mg/l、50mg/l、10mg/l、5mg/l、1mg/l、0.5mg/l、O.1mg/l或0.01mg/l。治疗组合物可不包含或可包含可忽略量的天冬氨酸，其中天冬氨酸的总浓度小于100mg/l、50mg/l、10mg/l、5mg/l、1mg/l、0.5mg/l、0.1mg/l或0.01mg/l。治疗组合物可不包含或可包含可忽略量的丙氨酸，其中丙氨酸的总浓度小于100mg/l、50mg/l、10mg/l、5mg/l、1mg/l、0.5mg/l、0.1mg/l或0.01mg/l。治疗组合物可不包含或可包含可忽略量的异亮氨酸，其中异亮氨酸的总浓度小于100mg/l、50mg/l、10mg/l、5mg/l、1mg/l、0.5mg/l、0.1mg/l或0.01mg/l。

在某些实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物还包含至少一种另外的活性剂。术语“试剂”在本文使用中用于指任何物质、化合物(例如，分子)、超分子复合物、材料或者它们的组合或混合物。化合物可以是可以由化学式、化学结构或序列表示的任何试剂。试剂的示例包括例如小分子、多肽、核酸(例如，RNAi试剂、反义寡核苷酸、适体)、脂质、多糖等。一般来讲，可使用本领域已知的任何合适方法获得试剂。普通技术人员将基于例如试剂的性质来选择适当的方法。术语“试剂”也可以涵盖“治疗剂”。术语“化合物”和“试剂”可互换使用。在一些实施方案中，已知所述至少一种另外的活性剂能够有效治疗癌症。所述组合物还可与至少一种其他试剂诸如稳定或缓冲化合物组合配制，所述试剂可在任何无菌的、生物相容的药物载体中进行施用，所述载体包括但不限于盐水、缓冲盐水、右旋糖和水。除了本文讨论的组合物的关键组分、细胞或影响因素外，所述组合物还可包含合适的药学上可接受的载体，所述载体包括有助于将活性化合物加工成可在药学上使用的制剂的赋形剂和辅助剂。该组合物可以使用药学上可接受的载体或赋形剂制备为单剂量形式，或者可以容纳在多剂量容器中。

在某些实施方案中，治疗组合物包含一种或多种电解质，所述电解质选自例如Na⁺；K⁺；HCO3-；CO3²-；Ca²⁺；Mg²⁺；Fe²；Cl-；磷酸根离子，诸如H2PO4^-、HPO4²-和PO4³-；锌；碘；铜；铁；硒；铬；和钼。在一个另选的实施方案中，该组合物不包含HCO3-或CO3²-。在另一个另选的实施方案中，该组合物包含总浓度小于5mg/l或浓度分别小于5mg/l的HCO3-和CO3²-。在某些实施方案中，该组合物不包含电解质。例如，在某些实施方案中，该组合物不包含Na⁺；K⁺；HCO3-；CO3²-；Ca²⁺；Mg²⁺；Fe²；Cl-；磷酸根离子，诸如H2PO4^-、HPO4²-和PO4³-；锌；碘；铜；铁；硒；铬；和钼中的一种或多种或任何一种。

在某些实施方案中，该组合物不包含下列成分中的一种或多种，所述成分选自寡糖、多糖和碳水化合物；寡聚、多肽或蛋白质；

脂质；短链脂肪酸、中链脂肪酸和/或长链脂肪酸；和/或含有一种或多种上述营养物质的食品。

在一个实施方案中，磷酸根离子诸如H2PO4-、HPO4²-和PO4³-用于缓冲本发明的组合物。在一个实施方案中，治疗组合物使用HCO3-或CO3²-作为缓冲剂。在另一个实施方案中，治疗组合物不使用HCO3-或CO3²-作为缓冲剂。

在另外的实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物的pH为约2.0至约8.5。例如，组合物的pH可为2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4或8.5。

在某些实施方案中，本文所述的组合物的氨基酸可以是游离氨基酸的前药。术语“前药”是指具有可裂解基团并且通过溶剂分解或在生理条件下变为本文所述的化合物，该化合物在体内具有药物活性。

在某些实施方案中，本文所述的组合物的氨基酸可以是氨基酸的盐(即，氨基酸盐)。氨基酸可以与阳离子(例如，溶液中带负电侧链的氨基酸盐(例如，谷氨酸和天冬氨酸))、阴离子(溶液中带正电侧链的氨基酸盐(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸))和无机化合物成盐形式。示例性氨基酸盐在Fleck M和Petrosyan AM，Salts of Amino Acids，第1版；Springer International Publishing，2014年中列出，该文献以引用方式并入本文。

在某些实施方案中，该组合物还包含水。

在某些实施方案中，该组合物还包含缓冲剂。示例性缓冲剂包括柠檬酸盐缓冲溶液、乙酸盐缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液、氯化铵、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、葡乳醛酸钙、葡庚糖酸钙、葡萄糖酸钙、D-葡萄糖酸、

甘油磷酸钙、乳酸钙、丙酸、乙酰丙酸钙、戊酸、磷酸氢钙、磷酸、磷酸三钙、碱式磷酸钙、乙酸钾、氯化钾、葡萄糖酸钾、钾混合物、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸钾混合物、乙酸钠、碳酸氢钠、氯化钠、柠檬酸钠、乳酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钠混合物、氨基丁三醇、氢氧化镁、氢氧化铝、藻酸，无热原水、等渗盐水、林格氏液、乙醇以及它们的混合物。

如本文所用，术语“盐”是指任何和所有盐，并且涵盖药学上可接受的盐。

术语“载体”可以指与本公开的组合物一起施用的任何稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。合适的药物载体的示例在Remington’s Essentials of Pharmaceuticals，第21版，Felton编，2012年中有所描述，该文献以引用方式并入本文。

示例性稀释剂包括碳酸钙、碳酸钠、磷酸钙、磷酸二钙、硫酸钙、磷酸氢钙、磷酸钠乳糖、蔗糖、纤维素、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、氯化钠、干淀粉、玉米淀粉、糖粉以及它们的混合物。

用于制造提供的药物组合物的药学上可接受的赋形剂包括惰性稀释剂、分散剂和/或粒化剂、表面活性剂和/或乳化剂、崩解剂、粘结剂、防腐剂、缓冲剂、润滑剂和/或油。所述组合物中还可以存在赋形剂诸如可可脂和栓剂蜡、着色剂，包衣剂、甜味剂、调味剂和香味剂。达到有效量所需的包含氨基酸的组合物的确切量将在受试者之间变化，具体取决于例如受试者的物种、年龄和一般状况、副作用或病症的严重程度、具体化合物的种类、施用方式等。有效量可以包含在单剂量(例如，单个口服剂量)或多剂量(例如，多个口服剂量)中。在某些实施方案中，当向受试者施用多个剂量或将多个剂量施用于组织或细胞时，多个剂量中的任意两个剂量包含不同量或基本上相同量的本文所述的化合物。在某些实施方案中，当向受试者施用多个剂量或将多个剂量施用于组织或细胞时，向受试者施用多个剂量或将多个剂量施用于组织或细胞的频率是每天三剂、每天两剂、每天一剂、每隔一天一剂、每三天一剂、每周一剂、每两周一剂、每三周一剂或每四周一剂。在某些实施方案中，向受试者施用多个剂量或将多个剂量施用于组织或细胞的频率是每天一剂。在某些实施方案中，向受试者施用多个剂量或将多个剂量施用于组织或细胞的频率是每天两剂。在某些实施方案中，向受试者施用多个剂量或将多个剂量施用于组织或细胞的频率是每天三剂。在某些实施方案中，当向受试者施用多个剂量或将多个剂量施用于组织或细胞时，所述多个剂量的第一剂量与最后剂量之间的持续时间是一天、两天、四天、一周、两周、三周、一个月、两个月、三个月、四个月、六个月、九个月、一年、两年、三年、四年、五年、七年、十年、十五年、二十年或者受试者、组织或细胞的整个生命期。在某些实施方案中，所述多个剂量的第一剂量与最后剂量之间的持续时间是三个月、六个月或一年。在某些实施方案中，所述多个剂量的第一剂量与最后剂量之间的持续时间是受试者、组织或细胞的整个生命期。在某些实施方案中，本文所述的剂量(例如，单个剂量，或者多个剂量的任一剂量)独立地包含0.1pg至1pg之间、0.001mg至0.01mg之间、0.01mg至0.1mg之间、0.1mg至1mg之间、1mg至3mg之间、3mg至10mg之间、10mg至30mg之间、30mg至100mg之间、100mg至300mg之间、300mg至1,000mg之间或1g至10g之间(包括端值在内)的包含本文所述氨基酸的组合物。在某些实施方案中，本文所述的剂量独立地包含1mg至3mg之间(包括端值在内)的包含本文所述氨基酸的组合物。在某些实施方案中，本文所述的剂量独立地包含3mg至10mg之间(包括端值在内)的包含本文所述氨基酸的组合物。在某些实施方案中，本文所述的剂量独立地包含10mg至30mg之间(包括端值在内)的包含本文所述氨基酸的组合物。在某些实施方案中，本文所述的剂量独立地包含30mg至100mg之间(包括端值在内)的包含本文所述氨基酸的组合物。

本文所述的剂量范围为将所提供的药物组合物施用于成人提供了指导。施用于例如儿童或青少年的量可以由医师或本领域技术人员确定，并且可以小于或等于施用于成人的量。在另外的实施方案中，用于抑制癌细胞生长和/或增殖的组合物为单个单位剂量的形式。如本文所用，“单个单位剂量”意指本文所公开的组合物在容器中并且其量适于重构和/或施用单个剂量，其中适于重构和施用单个剂量的量是治疗有效量。尽管通常以小瓶的形式，但单个单位剂量也可以是能够保持无菌环境的任何合适的容器，诸如安瓿、注射器(例如，预填充注射器)、共通瓶(co-vials)、药筒。

所述组合物可以与一种或多种另外的药剂或治疗剂同时、在其之前或之后施用，所述药剂或治疗剂可以用作例如联合疗法。药剂包含治疗活性剂。药剂还包含预防活性剂。药剂包含有机小分子，诸如药物化合物(例如，如联邦法规(CFR)提供的由美国食品药品监督管理局批准用于人用或兽用的化合物)、肽、蛋白质、碳水化合物、单糖、寡糖、多糖、核蛋白、粘蛋白、脂蛋白、合成多肽或蛋白质、与蛋白质相连的小分子、糖蛋白、类固醇、核酸、DNA、RNA、核苷酸、核苷、寡核苷酸、反义寡核苷酸、脂质、激素、维生素和细胞。在某些实施方案中，所述另外的药剂是可用于治疗和/或预防疾病(例如，增生性疾病、癌症)的药剂。在某些实施方案中，所述另外的治疗剂是可用于治疗癌症的剂。每种另外的药剂可按照针对该药剂确定的剂量和/或时间表来施用。所述另外的药剂也可以彼此一起和/或与本文所述的化合物或组合物一起以单个剂量施用或以不同剂量分开施用。方案中采用的特定组合将考虑本文所述化合物与另外的药剂的相容性和/或要实现的期望的治疗和/或预防效果。一般来讲，预期组合使用另外的药剂时的水平不超过单独使用时的水平。在一些实施方案中，组合使用的水平将低于单独使用的水平。在某些实施方案中，本文所述的化合物或药物组合物可以与抗癌疗法组合施用，所述抗癌疗法包括但不限于外科手术、放射疗法、移植(例如，干细胞移植、骨髓移植)、免疫疗法和化学疗法。

本公开还包括试剂盒(例如，药物包)。所提供的试剂盒可包含本文所述的药物组合物或化合物和容器(例如，小瓶、安瓿、瓶、注射器和/或分配器包装，或其他合适的容器)。在一些实施方案中，所提供的试剂盒还可任选地包括第二容器，该第二容器包含用于稀释或混悬本文所述的药物组合物或化合物的药物赋形剂。在一些实施方案中，将在第一容器和第二容器中提供的本文所述的药物组合物或化合物混合以形成一个单位剂型。在某些实施方案中，本文所述的试剂盒还包括使用该试剂盒的说明书。

治疗方法

本文提供了治疗癌症或肿瘤的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述组合物。例如，所述组合物可包含选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的一种或多种游离氨基酸，以及药学上可接受的赋形剂。

在某些实施方案中，所述一种或多种游离氨基酸包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸。在其他实施方案中，所述一种或多种游离氨基酸包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺和甘氨酸。

在其他实施方案中，本文提供的组合物不包含选自谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸的一种或多种游离氨基酸。

受试者可以是需要抑制肿瘤细胞和/或癌细胞生长的患者。受试者可以是任何动物，包括例如人类。除人类之外，动物还可以是例如哺乳动物，诸如牛、马、绵羊、猪、山羊、狗和猫。动物也可以是例如鸡、火鸡或鱼。在优选的方面，受试者是人类。

术语“施用”是指在受试者体内或之上植入、吸收、摄取、注射、吸入或以其他方式引入本文所述的化合物或其组合物。

如本文所用，短语“治疗有效量”是指如本文所述的组合物的量能够有效地实现特定的生物学或治疗结果，诸如但不限于本文所公开、描述或例示的生物学或治疗结果。治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及组合物在受试者体内引起所需应答的能力等因素而变化。如本领域的普通技术人员将理解的那样，有效的特定试剂或组合物的绝对量可根据诸如所需的生物学或药理学终点、待递送的试剂、靶组织等因素而变化。本领域的普通技术人员将进一步理解，在各种实施方式中，“有效量”可以单个剂量或通过使用多个剂量与细胞接触或施用于受试者。治疗有效量的示例性指标包括例如患者健康状况的改善、肿瘤负荷的减少、癌症生长的阻滞或减慢和/或癌细胞不向身体其他部位转移的情况。

在一些实施方案中，受试者还接受放射线、化学疗法、质子疗法、细胞毒剂或它们的组合。

在一个实施方案中，本发明提供了一种在患有肿瘤和/或癌症的患者中改善化学疗法和/或放射疗法的治疗结果的方法，该方法包括施用根据本发明的治疗组合物。本发明还提供了一种例如在患有肿瘤和/或癌症的患者中进行化学疗法和/或放射疗法之后的维持或支持疗法。

在一个实施方案中，受试者或患者在用本发明的组合物治疗之前已经受放射线。在一些实施方案中，受试者例如在前往太空的过程中暴露于低剂量辐射。在一些实施方案中，受试者暴露于高剂量辐射。在一些实施方案中，多个受试者暴露于来自意外暴露的放射线下，诸如通过辐射泄漏或来自有意暴露如核武攻击。在一些实施方案中，受试者暴露于作为预防性医疗程序的放射线。在一些实施方案中，受试者易患肿瘤或癌症。

在另一个实施方案中，受试者或患者在用本发明的组合物治疗之后将经受放射线。在用本发明的组合物处理癌细胞之前或之后，可对细胞施用放射线例如1分钟、5分钟、30分钟、1小时、6小时、12小时、1天、

5天、30天、3个月、6个月、1年、2年或3年或者更长时间。放射线剂量可为例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、80、85、90、95、100、120或150Gy。

另外，本发明的组合物可用于已接受化学疗法的受试者的癌症治疗。在某些实施方案中，本发明的组合物可以与一种或多种另外的治疗活性剂同时、在其之前或之后施用。在某些实施方案中，所述另外的治疗剂是抗癌剂。抗癌剂包括生物治疗抗癌剂以及化学治疗剂。示例性生物治疗抗癌剂包括但不限于干扰素、细胞因子(例如，肿瘤坏死因子、干扰素α、干扰素γ)、疫苗、造血生长因子、单株血清疗法、免疫刺激剂和/或免疫调节剂(例如，IL-1、2、4

6或12)、免疫细胞生长因子(例如，GM-CSF)和抗体(例如，HERCEPTIN(曲妥单抗)、T-DM1、AVASTIN(贝伐单抗)、ERBITUX(西妥昔单抗)、VECTIBIX(帕尼单抗)、RITUXAN(利妥昔单抗)、BEXXAR(托西莫单抗))。示例性化学治疗剂包括但不限于抗雌激素(例如，他莫昔芬、雷洛昔芬和甲地孕酮)、LHRH激动剂(例如，戈舍瑞林和亮丙瑞林)、抗雄激素(例如，氟他米特和比卡鲁胺)、光动力疗法(例如，维替泊芬(BPD-MA)、酞菁、光敏剂Pc4和脱甲氧基竹红菌素A(2BA-2-DMHA))、氮芥(例如，环磷酰胺、异环磷酰胺、曲磷胺、苯丁酸氮芥、雌莫司汀和美法仑)、亚硝基脲(例如，卡莫斯汀(BCNU)和洛莫司汀(CCNU))、烷基磺酸盐(例如，白消安和曲奥舒凡)、三氮烯(例如，达卡巴嗪、替莫唑胺)、含铂化合物(例如，顺铂、卡铂、奥沙利铂)、长春花生物碱(例如，长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨)、紫杉烷(例如，紫杉醇或紫杉醇等效物，诸如纳米白蛋白结合型紫杉醇(ABRAXANE)、二十二碳六烯酸结合型紫杉醇(DHA-紫杉醇，Taxoprexin)、聚谷氨酸结合型紫杉醇(PG-紫杉醇、聚谷氨酸紫杉醇、CT-2103、XYOTAX)、肿瘤活化前药(TAP)ANG1005(Angiopep-2与三个紫杉醇分子结合)、紫杉醇EC-1(紫杉醇与erbB2识别肽EC-1结合)以及与葡萄糖共轭的紫杉醇，例如2'-紫杉醇甲基2-吡喃葡萄糖基琥珀酸酯；多西他赛、紫杉酚)、表鬼臼毒素(例如，依托泊苷、依托泊苷磷酸酯、替尼泊苷、拓扑替康、9-氨基喜树碱、开普拓伊立替康、伊立替康、克立那托、丝裂霉素C)、抗代谢物、DHFR抑制剂(例如，甲氨蝶呤、二氯甲氨蝶呤、三甲曲沙、依达曲沙)、IMP脱氢酶抑制剂(例如，霉酚酸、噻唑呋林、利巴韦林和EICAR)、核糖核苷酸还原酶抑制剂(例如，羟基脲和去铁胺)、尿嘧啶类似物(例如，5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟尿苷、去氧氟尿苷、雷替曲塞、替加氟-尿嘧啶、卡培他滨)、胞嘧啶类似物(例如，阿糖胞苷(ara C)、胞嘧啶阿拉伯糖苷和氟达拉滨)、嘌呤类似物(例如，巯嘌呤和硫鸟嘌呤)、维生素D3类似物(例如，EB 1089、CB1093和KH 1060)、异戊二烯化抑制剂(例如，洛伐他汀)、多巴胺能神经毒素(例如，l-甲基-4-苯基吡啶离子)、细胞周期抑制剂(例如，十字孢碱)、放线菌素(例如，放线菌素D、更生霉素)、博来霉素(例如，博来霉素A2、博来霉素B2、培洛霉素)、蒽环霉素(例如，道诺霉素、多柔比星、聚乙二醇化脂质体多柔比星、伊达比星、表柔比星、吡柔比星、佐柔比星、米托蒽醌)、MDR抑制剂(例如，维拉帕米)、Ca2+ATP酶抑制剂(例如，毒胡萝卜素)、伊马替尼、沙利度胺、来那度胺、酪氨酸激酶抑制剂(例如，阿西替尼(AG013736)、博舒替尼(SKI-606)、西地尼布(RECENTINTM、AZD2171)、达沙替尼(BMS-354825)、埃罗替尼吉非替尼/>伊马替尼(/>CGP57148B、STI-571)、拉帕替尼/>来他替尼(CEP-701)、来那替尼(HKI-272)、尼罗替尼/>司马沙尼(semaxinib、SU5416)、舒尼替尼(/>SU11248)、托赛拉尼/>凡德他尼(/>ZD6474)、瓦他拉尼(PTK787、PTK/ZK)、曲妥单抗/>贝伐单抗/>利妥昔单抗西妥昔单抗/>帕尼单抗/>兰尼单抗尼洛替尼/>索拉非尼/>依维莫司阿仑单抗/>吉妥单抗/>替西罗莫司/>ENMD-2076、PCI-32765、AC220、多韦替尼乳酸盐(TKI258、CHIR-258)、BIBW 2992(TOVOKTM)、SGX523、PF-04217903、PF-02341066、PF-299804、BMS-777607、ABT-869、MP470、BIBF 1120/>AP24534、JNJ-26483327、MGCD265、DCC-2036、BMS-690154、CEP-11981、替沃扎尼(AV-951)、OSI-930、MM-121、XL-184、XL-647和/或XL228)、蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米(VELCADE))、mTOR抑制剂(例如，雷帕霉素、替西罗莫司(CCI-779)、依维莫司(RAD-001)、地磷莫司、AP23573(Ariad)、AZD8055(AstraZeneca)、BEZ235(Novartis)、BGT226(Norvartis)、XL765(Sanofi Aventis)、PF-4691502(Pfizer)、GDC0980(Genetech)、SF1126(Semafoe)和OSI-027(OSI))、奥利默森、吉西他滨、洋红霉素、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、环磷酰胺、达卡巴嗪、丙卡巴肼、泼尼松龙、地塞米松、喜树碱、普卡霉素、天冬酰胺酶、氨喋呤、甲喋呤、泊非霉素、美法仑、异长春碱、环氧长春碱、苯丁酸氮芥、曲贝替定、丙卡巴肼、圆皮海绵内酯、洋红霉素、氨喋呤、六甲基三聚氰胺、拓扑异构酶抑制剂(例如，拓扑异构酶I或拓扑异构酶II的抑制剂。拓扑异构酶I抑制剂诸如伊立替康(CPT-II)、氨基喜树碱、喜树碱、DX-8951f和拓扑替康。拓扑异构酶II抑制剂包括依托泊苷(VP-16)和替尼泊苷(VM-26))、噻替派、白消安、oxyplatin、甲酰四氢叶酸(FU)、长春碱、埃博霉素、聚乙二醇化阿霉素、长春地辛、新制癌菌素、顺铂、5-氟尿苷、依鲁替尼和卡奇霉素，和/或它们的组合。

在某些方面，通过本文所公开的方法和组合物治疗的癌症或肿瘤表达Anoctamin(ANO)。在某些实施方案中，Anoctamin(ANO)是Anoctamin-1(ANO1)。在某些实施方案中，Anoctamin是Anoctamin-2(ANO2)。在某些实施方案中，Anoctamin是Anoctamin-3(ANO3)。在某些实施方案中，Anoctamin是Anoctamin-4(ANO4)。在某些实施方案中，Anoctamin是Anoctamin-5(ANO5)。在某些实施方案中，Anoctamin是Anoctamin-6(ANO6)。在某些实施方案中，Anoctamin是Anoctamin-7(ANO7)。在某些实施方案中，Anoctamin是Anoctamin-8(ANO8)。在某些实施方案中，Anoctamin是Anoctamin-9(ANO9)。在某些实施方案中，Anoctamin是Anoctamin-10(ANO 10)。在某些实施方案中，癌症或肿瘤表达多于一个Anoctamin家族成员(例如，ANO1和ANO2)。

在某些实施方案中，通过本文所述的方法和组合物治疗的癌症或肿瘤是脑癌、鼻咽癌、乳腺癌、肺癌、造血系统癌症(例如，白血病、淋巴瘤、骨髓瘤)、结肠癌、肝癌、胃癌、食道癌、皮肤癌和膀胱癌。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的脑癌或脑肿瘤的组合物和方法，其中所述组合物阻抑ANO、优选ANO1的表达水平。本发明提供了用于抑制受试者的脑肿瘤细胞的生长和/或增殖的组合物和方法，其中所述组合物阻抑脑肿瘤细胞中ANO、优选ANO1的表达水平。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的鼻咽癌的组合物和方法，其中所述组合物阻抑ANO、优选ANO1的表达。本发明提供了用于抑制受试者的鼻咽癌细胞的生长和/或增殖的组合物和方法，其中所述组合物阻抑鼻咽癌细胞中ANO、优选ANO1的表达水平。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的乳腺癌的组合物和方法，其中所述组合物阻抑ANO、优选ANO1的表达水平。本发明提供了用于抑制受试者的乳腺癌细胞的生长和/或增殖的组合物和方法，其中所述组合物阻抑乳腺癌细胞中ANO、优选ANO1的表达水平。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的肺癌的组合物和方法，其中所述组合物阻抑ANO、优选ANO1的表达水平。本发明提供了用于抑制受试者的肺癌细胞的生长和/或增殖的组合物和方法，其中所述组合物阻抑肺癌细胞中ANO、优选ANO1的表达水平。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的白血病的组合物和方法，其中所述组合物阻抑ANO、优选ANO1的表达水平。本发明提供了用于抑制受试者的白血病的生长和/或增殖的组合物和方法，其中所述组合物阻抑白血病的ANO、优选ANO1的表达水平。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的淋巴瘤的组合物和方法，其中所述组合物阻抑ANO、优选ANO1的表达水平。本发明提供了用于抑制受试者的淋巴瘤的生长和/或增殖的组合物和方法，其中所述组合物阻抑淋巴瘤中ANO、优选ANO1的表达水平。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的结肠癌的组合物和方法，其中所述组合物阻抑ANO、优选ANO1的表达水平。本发明提供了用于抑制受试者的结肠癌的生长和/或增殖的组合物和方法，其中所述组合物阻抑结肠癌中ANO、优选ANO1的表达水平。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的肝癌的组合物和方法，其中所述组合物阻抑ANO、优选ANO1的表达水平。本发明提供了用于抑制受试者的肝癌的生长和/或增殖的组合物和方法，其中所述组合物阻抑肝癌中ANO、优选ANO1的表达水平。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的胃癌的组合物和方法，其中所述组合物阻抑ANO、优选ANO1的表达水平。本发明提供了用于抑制受试者的胃癌的生长和/或增殖的组合物和方法，其中所述组合物阻抑胃癌中ANO、优选ANO1的表达水平。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的食道癌的组合物和方法，其中所述组合物阻抑ANO、优选ANO1的表达水平。本发明提供了用于抑制受试者的食道癌的生长和/或增殖的组合物和方法，其中所述组合物阻抑食道癌中ANO、优选ANO1的表达

水平。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的膀胱癌的组合物和方法，其中所述组合物阻抑ANO、优选ANO1的表达水平。本发明提供了用于抑制受试者的膀胱癌的生长和/或增殖的组合物和方法，其中所述组合物阻抑膀胱癌中ANO、优选ANO1的表达水平。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的皮肤癌的组合物和方法，其中所述组合物阻抑ANO、优选ANO1的表达水平。本发明提供了用于抑制受试者的皮肤癌的生长和/或增殖的组合物和方法，其中所述组合物阻抑皮肤癌中ANO、优选ANO1的表达水平。

根据本发明的方法可治疗的癌症、癌细胞和肿瘤可包括例如原发性肿瘤和继发性或转移性肿瘤(包括从肺、乳腺或前列腺转移的那些)，以及复发性或难治性肿瘤。复发性肿瘤包括似乎会被此类剂的治疗所抑制的肿瘤，但在中断治疗长达五年、有时长达十年或更长时间后复发。难治性肿瘤是对于针对特定肿瘤类型的一种或多种常规疗法的治疗没有应答或耐受所述治疗的肿瘤。难治性肿瘤包括激素难治性肿瘤(例如，雄激素非依赖性前列腺癌；或激素难治性乳腺癌，诸如他莫昔芬难治的乳腺癌)；使用一种或多种化学治疗剂的治疗难治的肿瘤；放射线难治的肿瘤；以及化学疗法和放射疗法、化学疗法和激素疗法或者激素疗法和放射线的组合难治的肿瘤。在某些实施方案中，所述治疗抑制肿瘤转移和/或其他癌细胞迁移。

在一个实施方案中，本文提供的治疗方法预防受试者的肿瘤发生或癌变。本发明的治疗方法还提供了通过在需要预防肿瘤发生的受试者中施用有效量的组合物来预防受试者的肿瘤发生的方法。

根据本发明的方法可治疗的癌症、癌细胞和肿瘤的代表性类型包括癌、肉瘤、良性瘤和恶性瘤，以及恶性肿瘤。一般来讲，术语“癌症”是指以异常细胞的发展为特征的一类疾病，这些异常细胞不受控地增殖并且具有浸润和破坏正常人体组织的能力。参见例如Stedman’s Medical Dictionary，第25版，Hensyl编，Williams&Wilkins:Philadelphia，1990年。成人肿瘤/癌症和小儿肿瘤/癌症包括在内。癌症可以是血管化的或尚未基本上血管化的或非血管化的肿瘤。因此，癌症的特征可以在于非实体瘤或实体瘤，所述非实体瘤例如造血系统癌症，诸如白血病和淋巴瘤(霍奇金和非霍奇金)。

可根据本发明进行治疗的示例性癌症包括但不限于听神经瘤；腺癌；肾上腺癌；肛门癌；血管肉瘤(例如，淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、血管内皮瘤)；阑尾癌；良性单克隆丙种球蛋白病；胆道癌(例如，胆管癌)；膀胱癌；乳腺癌(例如，乳腺腺癌、乳腺乳头状瘤、乳腺肿瘤、乳腺髓样癌)；脑癌(例如，脑膜瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤(例如，星形细胞瘤、少突神经胶质瘤)、成神经管细胞瘤)；支气管癌；类癌瘤；宫颈癌(例如，宫颈腺癌)；绒毛膜癌；脊索瘤；颅咽管瘤；结直肠癌(例如，结肠癌、直肠癌、结直肠腺癌)；结缔组织癌；上皮癌；室管膜瘤；内皮肉瘤(例如，卡波西氏肉瘤、多发性特发性出血性肉瘤)；子宫内膜癌(例如，子宫癌、子宫肉瘤)；食道癌(例如，食道腺癌、巴雷特腺癌)；尤文氏肉瘤；眼癌(例如，眼内黑素瘤、视网膜母细胞瘤)；家族性嗜酸性粒细胞增多症；胆囊癌；胃癌(例如，胃腺癌)；胃肠道间质瘤(GIST)；生殖细胞癌；头颈癌(例如，头颈部鳞状细胞癌、口腔癌(例如，口腔鳞状细胞癌)、咽喉癌(例如，喉癌、咽喉癌、鼻咽癌、口咽癌))；造血系统癌症(例如，白血病，诸如急性淋巴细胞白血病(ALL)(例如，B细胞ALL、T细胞ALL)、急性粒细胞性白血病(AML)(例如，B细胞AML、T细胞AML)、慢性粒细胞性白血病(CML)(例如，B细胞CML、T细胞CML)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)(例如，B细胞CLL、T细胞CLL))；淋巴瘤，诸如霍奇金淋巴瘤(HL)(例如，B细胞HL、T细胞HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)(例如，B细胞NHL，诸如弥漫性大细胞淋巴瘤(DLCL)(例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤)、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区B细胞淋巴瘤(例如，粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、结节性边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(即，华氏巨球蛋白血症)、毛细胞白血病(HCL)、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞性淋巴瘤和原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤；以及T细胞NHL，诸如前体T淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)(例如，皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)(例如，蕈样真菌病、塞扎里综合征)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、结外自然杀伤T细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤)；如上所述的一种或多种白血病/淋巴瘤的混合物；以及多发性骨髓瘤(MM))、重链疾病(例如，α链疾病、γ链疾病、μ链疾病)；血管母细胞瘤；下咽癌；炎性肌纤维母细胞瘤；免疫细胞淀粉样变；肾癌(例如，肾母细胞瘤又称威尔姆氏瘤、肾细胞癌)；肝癌(例如，肝细胞癌(HCC)、恶性肝癌)；肺癌(例如，支气管癌，小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌)；平滑肌肉瘤(LMS)；肥大细胞增多症(例如，全身性肥大细胞增多症)；肌肉癌；骨髓增生异常综合征(MDS)；间皮瘤；骨髓增生性疾病(MPD)

(例如，真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、特发性髓样化生(AMM)又称骨髓纤维化(MF)、慢性特发性骨髓纤维化、慢性粒细胞性白血病(CML)、慢性中性粒细胞白血病(CNL)、嗜酸性粒细胞增多综合征(HES))；神经母细胞瘤；神经纤维瘤(例如，1型神经纤维瘤病(NF)或2型神经鞘瘤病)；神经内分泌癌(例如，胃肠胰神经内分泌肿瘤(GEP-NET)、类癌瘤)；骨肉瘤(例如，骨癌)；卵巢癌(例如，囊腺癌、卵巢胚胎癌、卵巢腺癌)；乳头状腺癌；胰腺癌(例如，胰腺腺癌、胰腺癌，导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMN)、胰岛细胞瘤)；阴茎癌(例如，阴囊阴茎佩吉特病)；松果体瘤；原始神经外胚层肿瘤(PNT)；浆细胞瘤；副肿瘤综合征；上皮内肿瘤；前列腺癌(例如，前列腺腺癌)；直肠癌；横纹肌肉瘤；唾液腺癌；皮肤癌(例如，鳞状细胞癌(SCC)、角膜棘皮瘤(KA)、黑素瘤、基底细胞癌(BCC))；小肠癌(例如，阑尾癌)；软组织肉瘤(例如，恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、脂肪肉瘤、恶性周围神经鞘瘤(MPNST)、软骨肉瘤、纤维肉瘤、粘液肉瘤)；皮脂腺癌；小肠癌；汗腺癌；滑膜瘤；睾丸癌(例如，精原细胞瘤、睾丸胚胎癌)；甲状腺癌(例如，甲状腺乳头状癌、乳头状甲状腺癌(PTC)、甲状腺髓样癌)；尿道癌；阴道癌；以及外阴癌(例如，外阴佩吉特病)、骨原性肉瘤、内皮肉瘤、食道癌、鼻癌、髓样癌、胆管癌、肠癌和血管母细胞瘤。在优选的实施方案中，所述癌症或肿瘤是脑肿瘤、鼻咽癌、乳腺癌、肺癌、白血病、淋巴瘤、结肠癌、肝癌、胃癌、食道癌、皮肤癌和膀胱癌。

治疗有效量可以定期提供，即，以少于每天、每天、每周、每月或每年，或者以包括不同施用天数、周数、月数等的不规则时间表。另选地，待施用的治疗有效量可以变化。在一个实施方案中，第一剂量的治疗有效量可以高于一个或多个后续剂量的治疗有效量。在某些实施方案中，本文所述的组合物以连续的每日给药时间表施用。

在另一个实施方案中，第一剂量的治疗有效量可以低于一个或多个后续剂量的治疗有效量。

可以在各种时间段内施用等效剂量，例如，大约每2小时、大约每6小时、大约每8小时、大约每12小时、大约每24小时、大约每36小时、大约每48小时、大约每72小时、大约每周、大约每2周、大约每3周、大约每月、大约每2个月、大约每3个月和大约每6个月。与抗癌疗法的整个疗程相对应的剂量的数量和频率将根据医护人员的判断确定。

本文提供的任何方法均可用于在任何发展阶段治疗癌症、癌细胞或肿瘤。此类阶段包括晚期、局部晚期、早期癌症、进行性癌症、缓解期癌症、复发性癌症以及已证明其他治疗(例如，FDA批准的治疗)难治的癌症。因此，疗法可以是“一线”治疗，即单独地或与其他治疗联合作为先前未接受过抗癌治疗方案的患者的初始治疗；或“二线”治疗，即单独地或与其他治疗联合作为先前已接受过抗癌治疗方案的患者的治疗；或作为单独地或与其他治疗联合的“三线”治疗、“四线”治疗等。也可以为先前治疗已部分成功但对特定治疗不耐受的患者提供疗法。所述疗法也可以作为辅助治疗提供，即，以防止在当前没有可检测疾病的患者中或在手术切除肿瘤之后癌症复发。

在一个实施方案中，所述组合物可以经口、全身或局部施用。在其他实施方案中，该组合物用于离体或体外抑制癌细胞生长、增殖和/或发展。治疗组合物也可经由肠内途径或非肠道或局部或通过吸入施用。

在一个实施方案中，本发明提供了一种用于通过施用根据本发明的组合物来抑制受试者的癌变的方法。癌变是正常细胞变成癌细胞时发生的一系列步骤。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的肺癌的组合物和方法。本发明提供了用于抑制受试者的肺癌细胞生长的组合物和方法。肺癌包括例如小细胞肺癌、肺腺癌、鳞状细胞肺癌、大细胞肺癌、类癌、腺样囊性癌、粘液表皮样癌、恶性混合瘤等。其中，本发明的用于治疗肺癌的组合物表现出优选效果的示例包括小细胞肺癌、肺腺癌、鳞状细胞肺癌、大细胞肺癌等，特别优选的是小细胞肺癌。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的乳腺癌的组合物和方法。本发明还提供了用于抑制受试者的乳腺癌细胞生长的组合物和方法。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的结肠癌的组合物和方法。本发明还提供了用于抑制受试者的结肠癌细胞生长的组合物和方法。

在一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物和方法，所述药物组合物和方法用于治疗胃肠道癌，特别是在绒毛区域和刷状缘中和/或与小肠吸收能力的改变相关的胃肠道癌。

在其他实施方案中，本文所述的组合物和方法可用于皮肤癌。在该实施方案中，本发明的方法通常包括将组合物局部施用于需要这种治疗的患者的皮肤(例如，表皮)的步骤，其中施用治疗有效量的此类组合物。

如本文所用，术语“局部施用”意指将本发明的组合物施用或散布在表皮组织的表面上。

抑制癌细胞生长的方法

本文还提供了抑制癌细胞生长的方法，该方法包括使癌细胞暴露于本文所述的组合物中。例如，所述组合物可包含选自脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、色氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、组氨酸和半胱氨酸的一种或多种游离氨基酸，以及药学上可接受的赋形剂。

在某些实施方案中，所述一种或多种游离氨基酸包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸。在某些实施方案中，所述一种或多种游离氨基酸包含以下项、基本上由以下项组成或者由以下项组成：脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺和甘氨酸。

在其他实施方案中，本文提供的组合物不包含或仅包含可忽略量的选自谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸的一种或多种游离氨基酸。在某些实施方案中，本文提供的组合物不包含或仅包含可忽略量的游离氨基酸谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸。

在一个实施方案中，所述方法导致癌细胞生长的抑制和/或癌细胞的死亡。在一个实施方案中，该方法包括将根据本发明的组合物引入培养中的癌细胞中以抑制其生长、增殖和/或发展。该组合物因此可用于治疗各种肿瘤和癌症。

当将该组合物在培养物中或原位施用于癌细胞时，在这些细胞中会发生例如细胞和分子水平上的变化。因此，细胞活性可能被改变。

可用作癌细胞来源的癌症的示例包括实体瘤，诸如源自例如以下的那些：听神经瘤；腺癌；肾上腺癌；肛门癌；血管肉瘤(例如，淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、血管内皮瘤)；阑尾癌；良性单克隆丙种球蛋白病；胆道癌(例如，胆管癌)；膀胱癌；乳腺癌(例如，乳腺腺癌、乳腺乳头状瘤、乳腺肿瘤、乳腺髓样癌)；脑癌(例如，脑膜瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤(例如，星形细胞瘤、少突神经胶质瘤)、成神经管细胞瘤)；支气管癌；类癌瘤；宫颈癌(例如，宫颈腺癌)；绒毛膜癌；脊索瘤；颅咽管瘤；结直肠癌(例如，结肠癌、直肠癌、结直肠腺癌)；结缔组织癌；上皮癌；室管膜瘤；内皮肉瘤(例如，卡波西氏肉瘤、多发性特发性出血性肉瘤)；子宫内膜癌(例如，子宫癌、子宫肉瘤)；食道癌(例如，食道腺癌、巴雷特腺癌)；尤文氏肉瘤；眼癌(例如，眼内黑素瘤、视网膜母细胞瘤)；家族性嗜酸性粒细胞增多症；胆囊癌；胃癌(例如，胃腺癌)；胃肠道间质瘤(GIST)；生殖细胞癌；头颈癌(例如，头颈部鳞状细胞癌、口腔癌(例如，口腔鳞状细胞癌)、咽喉癌(例如，喉癌、咽喉癌、鼻咽癌、口咽癌))；血管母细胞瘤；下咽癌；炎性肌纤维母细胞瘤；免疫细胞淀粉样变；肾癌(例如，肾母细胞瘤又称威尔姆氏瘤、肾细胞癌)；肝癌(例如，肝细胞癌(HCC)、恶性肝癌)；肺癌(例如，支气管癌，小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌)；平滑肌肉瘤(LMS)；肥大细胞增多症(例如，全身性肥大细胞增多症)；肌肉癌；骨髓增生异常综合征(MDS)；间皮瘤；神经母细胞瘤；神经纤维瘤(例如，1型神经纤维瘤病(NF)或2型神经鞘瘤病)；神经内分泌癌(例如，胃肠胰神经内分泌肿瘤(GEP-NET)、类癌瘤)；骨肉瘤(例如，骨癌)；卵巢癌(例如，囊腺癌、卵巢胚胎癌、卵巢腺癌)；乳头状腺癌；胰腺癌(例如，胰腺腺癌、胰腺癌，导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMN)、胰岛细胞瘤)；阴茎癌(例如，阴囊阴茎佩吉特病)；松果体瘤；原始神经外胚层肿瘤(PNT)；浆细胞瘤；副肿瘤综合征；上皮内肿瘤；前列腺癌(例如，前列腺腺癌)；直肠癌；横纹肌肉瘤；唾液腺癌；皮肤癌(例如，鳞状细胞癌(SCC)、角膜棘皮瘤(KA)、黑素瘤、基底细胞癌(BCC))；小肠癌(例如，阑尾癌)；软组织肉瘤(例如，恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、脂肪肉瘤、恶性周围神经鞘瘤(MPNST)、软骨肉瘤、纤维肉瘤、粘液肉瘤)；皮脂腺癌；小肠癌；汗腺癌；滑膜瘤；睾丸癌(例如，精原细胞瘤、睾丸胚胎癌)；甲状腺癌(例如，甲状腺乳头状癌、乳头状甲状腺癌(PTC)、甲状腺髓样癌)；尿道癌；阴道癌；外阴癌(例如，外阴佩吉特病)；以及鼻癌。

可用作癌细胞来源的其他癌症包括血源性癌症，诸如造血系统癌症(例如，白血病，诸如急性早幼粒细胞白血病(“APL”)、急性单核细胞白血病、急性红细胞白血病、急性巨核细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病、急性未分化白血病、急性淋巴细胞白血病(ALL)(例如，B细胞ALL、T细胞ALL)、急性粒细胞性白血病(AML)(例如，B细胞AML、T细胞AML)、慢性粒细胞性白血病(CML)(例如，B细胞CML、T细胞CML)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)(例如，B细胞CLL、T细胞CLL))；淋巴瘤，诸如霍奇金淋巴瘤(HL)(例如，B细胞HL、T细胞HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)(例如，华氏巨球蛋白血症、B细胞NHL，诸如弥漫性大细胞淋巴瘤(DLCL)(例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤)、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区B细胞淋巴瘤(例如，粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、结节性边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(即，华氏

巨球蛋白血症)、毛细胞白血病(HCL)、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞性淋巴瘤和原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤；以及T细胞NHL，诸如前体T淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)(例如，皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)(例如，蕈样真菌病、塞扎里综合征)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、结外自然杀伤T细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤)；如上所述的一种或多种白血病/淋巴瘤的混合物；以及多发性骨髓瘤(MM))、重链疾病(例如，α链疾病、γ链疾病、μ链疾病)；以及骨髓增生性疾病(MPD)(例如，真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、特发性髓样化生(AMM)又称骨髓纤维化(MF)、慢性特发性骨髓纤维化、慢性粒细胞性白血病(CML)、慢性中性粒细胞白血病(CNL)、嗜酸性粒细胞增多综合征(HES))。

实施例

提供以下实施例以进一步描述本文所公开的一些实施方案。实施例旨在说明而非限制本发明所公开的实施方案。

实施例1—放射线增加Anocatmin-1(ANO1)的表达

图1示出了在存在和不存在氨基酸口服补液溶液(AA-ORS)的情况下，在暴露于0、0.5、1、3、5、7和9Gy放射线后以及在暴露于0和5Gy放射线后的Anocatmin-1(ANO1)蛋白水平的蛋白质印迹分析。

实施例2—用siRNA下调ANO1表达会抑制癌细胞的生长，但不抑制正常细胞的生长

已知ANO1具有调节细胞形状和体积的能力，并且有助于细胞运动和转移。为了研究阻断Anoctamin表达对癌细胞的影响，使用siRNA进行了集落形成分析。

集落生成分析的方案(细胞系和培养条件)如下所述。使用以下人细胞系：HFL-1(人肺成纤维细胞-1)和HDFn(人真皮成纤维细胞)；(ATCC；美国马纳萨斯)。在含有95％02和5％ CO2的潮湿培养箱中，于37℃下在补充有10％胎牛血清(FBS)和10mg/mL青霉素/链霉素的F-12K培养基(Kaighn's改良型Ham's F-12培养基)中培养HFL-1细胞。在补充有5ng/mLFGFb、7.5mM L-谷氨酰胺、50mg/mL抗坏血酸、1mg/mL氢化可的松、5mg/mL胰岛素和2％ FBS(Sigma Aldrich,St.Louis,MO,USA)的成纤维细胞基础培养基(ATCC)中培养HDFn细胞。

调节培养物中的细胞浓度以允许指数生长。

铺板密度

将细胞以500个细胞/孔的密度在6孔平底培养板(Denville Scientific Inc.)中铺板，以形成单个集落。

集落评估

14天后，去除培养基，并用PBS冲洗细胞。固定集落，并在用50/50甲醇/水中稀释的0.5％结晶紫中染色30分钟。用水冲洗培养皿，并在室温下干燥。

通过Image J软件对阳性集落(>50个细胞/集落)进行计数，并按照别处所述计算存活分数(SF)。结果基于三个重复样。(参见Franken NA,Rodermond HM,Stap J,HavemanJ,van Bree C.Clonogenic assay of cells in vitro.Nat Protoc.2006；1:2315-2319.doi:10.1038/nprot.2006.339.)。集落生成分析的结果描绘于图5和图10中。

实施例3—示例性氨基酸降低了ANO1的表达

评估所有20种示例性氨基酸降低刷状缘膜的细胞中ANO1蛋白表达的能力。

图7示出了用对照蛋白质、八个氨基酸的组合(8AA)、五个氨基酸的组合(5AA)、另一种五个氨基酸的组合(5AA-Ano1)和七个氨基酸的组合(7AA-Ano1)处理后，从刷状缘膜的细胞中提取的ANO1蛋白的蛋白质水平的蛋白质印迹分析。

实施例4—示例性氨基酸在ANO1抑制和癌症中的作用

进行了一项研究，以检查在暴露于5Gy放射线(并用“RR”、“5AA”或“7AA-ANO1”处理)后的Anocatmin-1(ANO1)蛋白水平。用5AA处理抑制了从肠上皮细胞分离的刷状缘膜上的ano1表达(图11A)。用7AA-ANO1(特异性地抑制细胞膜上的ano1表达的氨基酸)处理进一步降低了刷状缘膜中的蛋白质水平(图11A)。尤斯室通量研究表明，ANO1的特异性抑制剂(CaCCinh)降低了氯离子净通量，而降低膜上的ano1表达的7个氨基酸(ANO7AA)同样降低了氯离子净通量(图11B和图11C)。使用氯离子的同位素36C1研究通量。

还通过研究检查了特定氨基酸组合物(常规林格氏液(“RR”)、5AA和7AA)的处理对结肠癌细胞(HT-29)的细胞周期的特定阶段G1、S和G2/M中细胞阻滞的影响。在结肠癌细胞(HT-29)中使用在常规林格氏液(“RR”)、5AA和7AA的存在下孵育了四小时的细胞进行流式细胞术(FACS)分析。7AA抑制处于G2/M期的细胞，因此在G1期中更多细胞被阻滞(图13A-D)。

在HT-29结肠癌细胞中检查了对照、5AA和7AA的4小时处理对CDT1、MCM2、p-ERK、半胱天冬酶3、细胞周期蛋白D1和p53的结合的影响(图14)。起点识别复合物(ORC)被认为在整个细胞周期(1,2)中都与染色质结合。前复制复合物(Pre-RC)在有丝分裂晚期/G1早期形成，始于CDT1和cdc6与起点的结合，以允许异源六聚化MCM2-7复合物的结合。MCM复合物被认为是复制解旋酶，并且pre-RC的形成被称为染色质许可。参见图14。

如下分析在4小时的处理下用对照和7AA-ANO1处理HT-29结肠癌细胞的效果。与对照相比，在组合使用时会降低细胞刷状缘膜中ANO1蛋白水平的前七个氨基酸(7AA-Ano1)被证实减少了集落形成的数量。在7AA的存在下将细胞孵育4小时，然后洗涤并在常规培养基的存在下进一步生长。这些研究表明，7AA可以抑制肿瘤细胞并且可通过信号传导机制起作用(图15A和图15B)。在使用常规林格氏液(RR)和7AA进行结合图15A描述的处理后，集落数减少(图15B)。

本领域的技术人员将理解，可以对本发明的优选实施方案进行多种改变和修改，并且可以在不脱离本发明的实质的情况下进行此类改变和修改。因此，所附权利要求旨在覆盖落入本发明的真正实质和范围内的所有此类等同变化。

本文所引用或描述的每项专利、专利申请和专利公布中的公开内容据此全文以引用方式并入本文。

Claims

1.一种用于抑制癌细胞增殖的制剂，所述制剂包含：

治疗有效量的游离氨基酸以及任选地药学上可接受的载体、缓冲剂、电解质、佐剂或赋形剂，所述游离氨基酸由以下项组成：脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺和甘氨酸；

其中治疗有效量的所述制剂抑制表达Anoctamin的癌细胞增殖。

2.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂不包含谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸或异亮氨酸或其任意组合的游离氨基酸；或

当所述制剂包含谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸或异亮氨酸或其任意组合的游离氨基酸时，所述谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸或异亮氨酸或其任意组合的游离氨基酸以可忽略量存在。

3.根据权利要求1所述的制剂，其中所述Anoctamin是Anoctamin-1。

4.根据权利要求1所述的制剂，其中所述癌细胞包括鼻咽癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞、结肠癌细胞、食道癌细胞或膀胱癌细胞。

5.根据权利要求1所述的制剂，还包含至少一种另外的治疗剂。

6.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂为单个单位剂量的形式。

7.根据权利要求1所述的制剂，所述制剂的pH为2.0至8.5。

8.一种制剂在制备用于治疗癌症的药物组合物中的用途，所述制剂包含治疗有效量的游离氨基酸以及任选地药学上可接受的载体、缓冲剂、电解质、佐剂或赋形剂，所述游离氨基酸由以下项组成：脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺和甘氨酸，

其中所述癌症包含癌细胞并且其中向对其有需要的受试者施用治疗有效量的所述制剂抑制表达Anoctamin的所述癌细胞的增殖。

9.根据权利要求8所述的用途，其中所述制剂不包含谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸或异亮氨酸或其任意组合的游离氨基酸；或

10.根据权利要求8所述的用途，其中所述受试者还接受放射线、化学疗法、质子疗法、细胞毒剂或它们的组合。

11.根据权利要求8所述的用途，其中所述受试者先前已被暴露于放射线。

12.根据权利要求8所述的用途，其中所述Anoctamin是Anoctamin-1。

13.根据权利要求8所述的用途，其中所述癌症包括鼻咽癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、食道癌或膀胱癌。

14.根据权利要求8所述的用途，其中所述受试者是人类。

15.根据权利要求8所述的用途，其中所述治疗抑制肿瘤转移和/或其他癌细胞迁移。

16.根据权利要求8所述的用途，其中所述治疗防止肿瘤发生或癌变。

17.根据权利要求8所述的用途，其中所述制剂按照连续的每日给药方案进行施用。

18.根据权利要求8所述的用途，其中所述制剂经口、全身或局部施用。

19.一种制剂在制备用于抑制癌细胞增殖的药物组合物中的用途，所述制剂包含有效量的游离氨基酸以及任选地药学上可接受的载体、缓冲剂、电解质、佐剂或赋形剂，所述游离氨基酸由以下项组成：脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺和甘氨酸，

其中所述有效量的游离氨基酸抑制表达Anoctamin的癌细胞增殖。

20.根据权利要求19所述的用途，其中所述制剂不包含谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸或异亮氨酸或其任意组合的游离氨基酸；或

21.根据权利要求19所述的用途，其中所述癌细胞是体外的。

22.根据权利要求19所述的用途，其中所述癌细胞包括鼻咽癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞、结肠癌细胞、食道癌细胞或膀胱癌细胞。

23.一种试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求1至7中任一项所述的制剂，其中所述试剂盒还包括用于向患有癌症的受试者施用所述制剂的说明书。

24.一种制剂在制备用于在癌细胞中下调Anoctamin表达的药物组合物中的用途，所述制剂包含有效量的游离氨基酸以及任选地药学上可接受的载体、缓冲剂、电解质、佐剂或赋形剂，所述游离氨基酸由以下项组成：脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺和甘氨酸，

其中所述有效量的游离氨基酸在所述癌细胞中下调Anoctamin。

25.根据权利要求24所述的用途，其中所述制剂不包含选自由谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸组成的组的一种或多种游离氨基酸。

26.根据权利要求24所述的用途，其中所述Anoctamin是ANO1、ANO2、ANO3、ANO4、ANO5、ANO6、ANO7、ANO8、ANO9或ANO1O。

27.根据权利要求24所述的用途，其中所述Anoctamin是ANO1。