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CN117957020A - Asgpr细胞表面受体结合化合物和缀合物 - Google Patents

Asgpr细胞表面受体结合化合物和缀合物 Download PDF

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CN117957020A
CN117957020A CN202280061489.6A CN202280061489A CN117957020A CN 117957020 A CN117957020 A CN 117957020A CN 202280061489 A CN202280061489 A CN 202280061489A CN 117957020 A CN117957020 A CN 117957020A
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J·T·恩斯特
G·K·帕卡德
J·G·路易斯
E·D·图尔托
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Licia Therapeutics
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Abstract

本公开提供了一类包含特异性地结合到细胞表面无唾液酸糖蛋白质受体(ASGPR)的配体部分的化合物。所述细胞表面ASGPR结合化合物可以触发所述受体将结合的化合物内化到所述细胞中。本公开的配体部分可以与多种感兴趣的部分连接，而不影响与所述细胞表面受体ASGPR的特异性结合以及所述细胞表面受体ASGPR的功能。还提供了作为与诸如抗体的生物分子连接的配体部分的缀合物的化合物，所述缀合物可以利用细胞途径来从所述细胞表面或从所述细胞外环境中去除特定的感兴趣的蛋白质。本文还提供了使用所述缀合物靶向感兴趣的多肽以进行隔离和/或溶酶体降解的方法。

Description

ASGPR细胞表面受体结合化合物和缀合物
1.相关申请的交叉引用
本申请要求2021年7月14日提交的美国临时申请第63/221,918号的权益，该申请据此通过引用方式以其整体并入。
2.背景技术
许多治疗剂发挥作用是通过结合靶蛋白质上的重要功能位点，从而调节该蛋白质的活性，或者通过招募免疫效应子(与许多单克隆抗体药物一样)以作用于靶蛋白质。然而，存在尚未开发的医学上重要的被认为是“无成药性的”人类蛋白质库，因为这些蛋白质不容易接受目前可用的治疗靶向方法。因此，需要可以靶向更广泛的蛋白质的疗法。
无唾液酸糖蛋白质受体(ASGPR)，也称为Ashwell Morell受体，是主要在肝细胞中发现的跨膜糖蛋白质受体，其通过介导具有裸露的末端半乳糖或N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)残基的糖蛋白质的胞吞作用和溶酶体降解而在血清糖蛋白质稳态方面发挥重要作用。ASGPR在内涵体和细胞表面之间循环。
提供与细胞表面ASGPR结合然后跨细胞膜转运的替代配体是非常令人感兴趣的。
3.发明内容
本公开提供了一类包含特异性地结合到细胞表面无唾液酸糖蛋白质受体(ASGPR)的配体部分的化合物。细胞表面ASGPR结合化合物可以触发受体将结合的化合物内化到细胞中。本公开的配体部分可以与多种感兴趣的部分连接，而不影响与细胞表面ASGPR的特异性结合以及细胞表面受体ASGPR的功能。还提供了作为与诸如抗体的生物分子连接的配体部分的缀合物的化合物，该缀合物可以利用细胞途径来从细胞表面或从细胞外环境中去除特定的感兴趣的蛋白质。例如，本文所述的缀合物可以隔离和/或降解细胞溶酶体中的感兴趣的靶分子。本文还提供了包含此类缀合物的组合物和使用缀合物靶向感兴趣多肽以进行隔离和/或溶酶体降解的方法，以及使用缀合物治疗病症或疾病的方法。
4.附图说明
根据以下说明书和附图，本发明的这些和其他特征、方面和优点将变得更好理解，在附图中：
图1示出了细胞荧光(MFI)与抗体缀合物浓度([Ab])的关系图，其表明示例性ASGPR结合化合物和示例M6PR结合化合物(520)的各种抗体缀合物在温育1小时后表现出相似的稳健的进入HepG2细胞的摄取。
图2A-2D示出了细胞荧光与抗体缀合物浓度的关系图，其表明示例性ASGPR结合化合物的各种抗体缀合物在温育一小时后表现出稳健的进入HepG2细胞的摄取。
图3图示了示例三价化合物(1901(I-171)、1902(I-172)、XB32和2101)的荧光偏振筛查结果。
图4图示了作为参考化合物18G的活性的百分比的示例单价化合物(591、XB20、XB23、XB21、592和593)的结合。
图5图示了示例单价化合物(XB20、XB21、592、XB23、591)的荧光偏振筛查结果。
图6示出了HepG2细胞中与经Alexa488标记的靶IgE结合的OMA(抗IgE)与示例化合物I-160至I-163和I-141的各种缀合物的细胞摄取的图。
图7图示了如与OMA(参考)相比的OMA-示例化合物(I-160至I-163)的亲和力依赖性清除率。
图8图示了剂量调整OMA-I-163IgE清除率。
图9图示了如与hIgE(参考)相比的OMA-示例化合物(I-160至I-163)的亲和力依赖性清除率。
5.具体实施方式
如上所概述，本公开提供了各类包含配体部分的化合物，该配体部分特异性地结合到细胞表面受体。本文中还提供了包含部分X的缀合物，该部分X结合到此类细胞表面受体(例如内化细胞表面受体)，例如，以进行隔离和/或溶酶体降解。在某些实施方案中，细胞表面受体为ASGPR。
本公开包括式(I)的化合物：
X-L-一Y
(I)
或其盐，其中：
X是结合到ASGPR细胞表面受体的部分(如本文所述)；
n是1至500；
L是指定长度的接头(例如，单价或多价接头，如本文所述)；并且
Y是感兴趣的部分(例如，如本文所述)。
以下更详细地描述了本公开的化合物和缀合物以及方法。描述了特定类别的ASGPR结合化合物。还描述了包含结合到ASGPR的细胞表面受体结合部分(X)的生物分子缀合物。还描述了可用于ASGPR结合化合物的接头(L)和感兴趣的部分(Y)，以及生物分子缀合物。还描述了其中使用本公开的化合物和缀合物的方法。
5.1.ASGPR配体
如上所概述，本公开提供了一类包含配体部分的化合物，该配体部分特异性地结合到细胞表面ASGPR。本公开的ASGPR配体部分可以与多种感兴趣的部分连接，而不影响与细胞表面ASGPR的特异性结合以及细胞表面ASGPR的功能。本发明人已经证明，本公开的化合物可以利用生物系统中细胞表面ASGPR的功能例如来将化合物内化和隔离到细胞的溶酶体以及在一些情况下随后进行溶酶体降解。本公开的化合物可用于多种应用。
术语“无唾液酸糖蛋白质受体”(ASGPR)，也称为Ashwell Morell受体，意指主要在肝细胞中发现的跨膜糖蛋白质受体，该跨膜糖蛋白质受体通过介导具有暴露的末端半乳糖或N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)残基的糖蛋白质的胞吞作用和溶酶体降解而在血清糖蛋白质稳态方面发挥重要作用。ASGPR在内涵体和细胞表面之间循环。在特定实施方案中，ASGPR是智人无唾液酸糖蛋白质受体1(ASGR1)(参见，例如，NCBI参考序列：NM_001197216)。
包含此类ASGPR结合部分(X)的化合物(例如，如本文所述)可以与其他受体结合，例如，可以以如通过例如免疫测定法或本领域已知的其他测定法测定的较低的亲和力结合。在一个具体的实施方案中，X或如本文所述的包含此种X的化合物以比当X或该化合物或该缀合物结合到另一个细胞表面受体时的亲和力至少2个对数、2.5个对数、3个对数、4个对数或更高对数的亲和力特异性地结合到细胞表面ASGPR。在一个具体的实施方案中，X或如本文所述的包含X的化合物以20nM或更低的亲和力(Kd)特异性地结合到ASGPR。在特定实施方案中，此种结合具有10mM或更低、1mM或更低、100uM或更低、10uM或更低、1uM或更低、100nM或更低、10nM或更低、或1nM或更低的亲和力(Kd)。在此上下文中，术语“结合”、“结合到”、“特异性地结合”或“特异性地结合到”可互换使用。
本公开的ASGPR结合化合物包含特异性地结合到细胞表面受体ASGPR的部分(X)。ASGPR结合化合物可以是单价或多价(例如，二价或三价或更高价)，其中单价化合物包括单个ASGPR配体部分，并且多价化合物包括两个或更多个此类部分。
在某些实施方案中，ASGPR结合部分X能够结合到特异性细胞表面ASGPR，并将该分子引导(或靶向)到该受体。在某些实施方案中，ASGPR结合部分X能够结合到ASGPR并能够将本文所述的的化合物或缀合物引导(或靶向)来进行向溶酶体的内化和隔离和/或随后的溶酶体降解。
在一些实施方案中，ASGPR结合部分X包含半乳糖的氨基糖环衍生物(例如，N-乙酰基半乳糖胺和其类似物)，该半乳糖的氨基糖环衍生物经由连接部分连接到该糖环的1、6或2位。连接部分的长度可以是1-10个原子，诸如长度为1-6、或1-5、1-4、或1-3个原子。在一些实施方案中，该半乳糖的氨基糖环衍生物经由连接部分连接到该环的1位的氧、硫、氮或碳原子。在一些实施方案中，该半乳糖的氨基糖环衍生物经由连接部分连接到该环的6位的氧、硫、氮或碳原子。在一些实施方案中，该半乳糖的氨基糖环衍生物经由连接部分连接到该环的2位的氧、硫、氮或碳原子。在某些实施方案中，该半乳糖的氨基糖环衍生物经由连接部分连接到该环的1、6或2位的杂芳基基团。在某些实施方案中，该半乳糖的氨基糖衍生物是双环结构。
在一些实施方案中，ASGPR结合化合物是单价的(例如，在式(I)中，n是1)，使得ASGPR结合化合物包含单个ASGPR配体部分(X)，该配体部分(X)经由(X)的1、6或2位处的连接部分连接到感兴趣的部分(Y)。在式(I)的某些实施方案中，n是1，并且L包含具有经由X的1、2或6位中任一位置处的连接部分将ASGPR配体(X)共价连接至Y的20个或更多个连续原子的主链的直链接头。在某些情况下，n是20至100个连续原子，诸如25至80个、25至60个、或25至50个。在式(I)的某些实施方案中，n是1，并且L包含将ASGPR配体(X)共价连接至Y的25个或更多个连续原子的主链。
在一些实施方案中，ASGPR结合化合物是多价的(例如，在式(I)中，n是2或更大，使得ASGPR结合化合物包含两个或更多个ASGPR配体结合部分(X)，该配体结合部分(X)各自经由支链接头(例如，L是支链接头)共价连接至感兴趣的部分(Y)。在某些情况下，ASGPR结合化合物是二价的(例如，在式1中n是2)。在某些其他情况下，ASGPR结合化合物是三价的(例如，在式1中n是3)。在某些情况下，支链接头的每个分支包含14个或更多个连续原子的直链接头以将每个X的连接部分共价连接至该接头中的支化点。在某些情况下，接头的每个分支包含14至50个连续原子，诸如14至40个、14至30个、或14至20个原子。在某些情况下，接头的每个分支包含20个或更多个连续原子的直链接头。在某些情况下，接头包含12个或更多个连续原子的直链接头以将L的支化点共价连接至感兴趣的部分(Y)，诸如包含15个或更多个、20个或更多个、30个或更多个、或者甚至更多个连续原子的直链接头以将L的支化点共价连接至Y。
本公开的化合物的ASGPR结合部分(X)可由式(Ia)来描述：
其中：
R1选自–OH、–OC(O)R、-C(O)NHR、–Z1–*和任选取代的三唑，其中R是任选取代的C1-6烷基或任选取代的芳基；
R2选自–NHCOCH3、–NHCOCF3、–NHCOCH2CF3、–OH、任选取代的三唑和–Z1–*；
R3选自–H、–OH、–CH3、–OCH3、–OCH2CH＝CH和–Z1–*；
R1至R3中的一者是–Z1–或包括–Z1–*，其中“*”代表Z1与接头(L)的附接点；
R4和R5各自独立地选自H和引入部分(promoiety)；或者
R4和R5被环状连接从而形成引入部分；
R11是H，或形成连向1位碳原子的桥(例如，环状连接至1位碳原子的2个原子的桥)的基团；
Z1是选自以下的连接部分：Z11、任选取代的Z11-杂芳基、任选取代的Z11-芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、任选取代的烷基、任选取代的酰胺、任选取代的磺胺、任选取代的脲和任选取代的硫脲；
Z11选自-O-、-S-、NR21-和-C(R22)2，
每个R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基；并且
每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。
在式(Ia)的一些实施方案中：
i)当n是3，R1是OH，R2是–NHCOCH3，R4-R5是H，并且R3是Z1时，则Z1不是O；
ii)当n是2或3，R1是OAc，R2是–NHCOCH3，R4-R5是Ac，并且R3是Z1时，则Z1不是O；
iii)当n是2或3，R1是Obz，R2是–NHCOCH3，R4-R5是Bz，并且R3是Z1时，则Z1不是O；
iv)当n是3，R1是OH，R2是–NHCOCH3，R4-R5是H，并且R3是Z1且Z11是O时，则L包含连向支化点的至少16个连续原子的主链；
v)当n是3，R1是Z1，其中Z1是O；并且R4-R5是H时，则R3不是-CH3–OCH3或–OCH2CH＝CH；并且
vi)当R11是形成连向糖环上的1位碳原子的桥(即，环状连接至糖环上的1位碳原子)的式-CH2O-的基团，R2是–NHCOCH3，R4-R5是H时，则R1和R3不是Z1。
在一些实施方案中，本公开的化合物的ASGPR结合部分(X)可由式(Ia-1)描述：
其中：
R1选自–OH、–OC(O)R、-C(O)NHR、–Z1–*和任选取代的三唑，其中R是任选取代的C1-6烷基或任选取代的芳基；
R2选自–NHCOCH3、–NHCOCF3、–NHCOCH2CF3、–OH、任选取代的三唑和–Z1–*；
R3选自–H、–OH、–CH3、–OCH3、–OCH2CH＝CH和–Z1–*；
R1至R3中的一者是–Z1–*，其中“*”代表Z1与接头(L)的附接点；
R4和R5各自独立地选自H和引入部分(例如，酯引入部分)；
Z1是选自以下的连接部分：Z11、任选取代的Z11-杂芳基、任选取代的Z11-芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、任选取代的酰胺、任选取代的磺胺、任选取代的脲和任选取代的硫脲；
Z11选自-O-、-S-、NR21-和-C(R22)2，
每个R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基；并且
每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。
在式(Ia-1)的一些实施方案中：
i)当n是3，R1是OH，R2是–NHCOCH3，R4-R5是H，并且R3是Z1时，则Z1不是O；
ii)当n是2或3，R1是OAc，R2是–NHCOCH3，R4-R5是Ac，并且R3是Z1时，则Z1不是O；
iii)当n是2或3，R1是OBz，R2是–NHCOCH3，R4-R5是Bz，并且R3是Z1，则Z1不是O；
iv)当n是3，R1是OH，R2是–NHCOCH3，R4-R5是H，并且R3是Z1且Z1是O时，则L包含连向支化点的至少16个连续原子的主链；并且/或者
v)当n是3，R1是Z1，其中Z1是O；并且R4-R5是H时，则R3不是-CH3。
在一些实施方案中，本公开的化合物的ASGPR结合部分(X)可由式(Ib)描述：
其中R1、R2、R4、R5和Z1如本文所定义。
在式(Ib)的一些实施方案中，Z1处于α构型
在式(Ib)的一些实施方案中，Z1处于β构型
在式(Ib)的一些实施方案中，Z1是Z11-Ar，其中Ar是或任选取代的杂芳基或任选取代的芳基。在某些情况下，Ar是任选取代的杂芳基。在某些情况下，杂芳基是5或6元杂芳基。在某些情况下，杂芳基是5元杂芳基。在某些情况下，5元杂芳基是三唑。在某些情况下，三唑是1,2,3-三唑部分。在某些情况下，Z11是-C(R22)2。在某些情况下，至少一个R22是H。在某些情况下，两个R22都是H。在某些情况下，Z11是-O-。在某些情况下，Z11是-S-。在某些其他情况下，Z11是-NR21，其中R21是H或(C1-3)烷基。在某些情况下，Z1是-C(R22)2-三唑-。在某些情况下，Z1是：在某些情况下，Z1是：
在式(Ib)的某些实施方案中，Z1是Z11。在某些情况下，Z11是-C(R22)2。在某些情况下，至少一个R22是H。在某些情况下，两个R22都是H，并且Z11是-CH2-。在某些情况下，Z11是-O-。在某些情况下，Z11是-S-。在某些其他情况下，Z11是-NR21，其中R21是H或(C1-3)烷基。
在式(Ib)的某些实施方案中，Z1是单环的5或6元杂芳基或芳基。在某些情况下，Z1是在某些情况下，Z1是
在式(Ib)的某些实施方案中，Z1选自-O-、-S-、-C(R22)2-、-NR21-、-CONR21-和
其中：
X1是O或S；
t是0或1；
R21和每个R23独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基(例如，C(1-3)-烷基，诸如甲基)；并且
每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。
在式(Ib)的某些实施方案中，Z1是任选取代的(C1-C6)烷基。在Z1的一些情况下，烷基是甲基。在Z1的一些情况下，烷基是乙基。在Z1的一些情况下，烷基是丙基。在Z1的一些情况下，烷基是丁基。在Z1的一些情况下，烷基是戊基。在Z1的一些情况下，烷基是己基。
在某些实施方案中，式(Ib)的化合物选自以下结构之一：
其中R5独立地是H或引入部分。
在一些实施方案中，式(Ib)的化合物选自以下结构之一：
其中R5和R4独立地是H或引入部分，或者R5和R4被环状连接从而形成引入部分；并且n1是从1至6的整数。
在一些实施方案中，R4-R5中的至少一者具有式-COCH3、-COCH(CH3)2或-COC(CH3)3。在某些情况下，R4-R5中的至少一者具有式-CH2OCOC(CH3)3。在某些情况下，R4-R5中的至少一者具有式-COC(CH3)3或-CH2OCOC(CH3)3。在某些情况下，R4是H且R5选自-COCH3,-COCH(CH3)2、-COC(CH3)3和-CH2OCOC(CH3)3。在某些情况下，R4是H且R5是-COC(CH3)3。在某些情况下，R4是H且R5是-CH2OCOC(CH3)3。在一些实施方案中，式(Ib)的化合物选自以下结构之一：
其中n2是从1至6的整数。
在式(Ib)的化合物的一些实施方案中，R5和R4被环状连接从而形成引入部分；在一些情况下，式(Ib)的化合物选自以下结构之一：
其中n2是从1至6的整数；且Y4是合适的反离子。
在一些实施方案中，本公开的化合物的ASGPR结合部分(X)可由式(Ic)描述：
其中R2-R5和Z1如本文所定义。
在式(Ic)的某些实施方案中，Z1选自-O-、-S-、-CONR21-和任选取代的–(C(R22)2)q-杂芳基，其中q是0或1。在某些情况下，Z1是-O-。在某些其他情况下，Z1是任选取代的–(C(R22)2)q-三唑，其中q是0或1。在某些情况下，Z1是
在式(Ic)的某些实施方案中，Z1是Z11-Ar，其中Ar是或任选取代的杂芳基或任选取代的芳基。在某些情况下，Ar是任选取代的杂芳基。在某些情况下，杂芳基是5或6元杂芳基。在某些情况下，杂芳基是5元杂芳基。在某些情况下，5元杂芳基是三唑。在某些情况下，三唑是1,2,3-三唑部分。在某些情况下，Z11是-C(R22)2。在某些情况下，至少一个R22是H。在某些情况下，两个R22都是H。在某些情况下，Z11是-O-。在某些情况下，Z11是-S-。在某些其他情况下，Z11是-NR21，其中R21是H或(C1-3)烷基。在某些情况下，Z1是-C(R22)2-三唑-。在某些情况下，Z1是：
在式(Ic)的某些实施方案中，Z1是Z11。在某些情况下，Z11是-C(R22)2。在某些情况下，至少一个R22是H。在某些情况下，两个R22都是H，并且Z11是-CH2-。在某些情况下，Z11是-O-。在某些情况下，Z11是-S-。在某些其他情况下，Z11是-NR21，其中R21是H或(C1-3)烷基。
在式(Ic)的某些实施方案中，Z1是单环的5或6元杂芳基或芳基。在某些情况下，Z1是
在式(Ic)的某些实施方案中，Z1选自-O-、-S-、-C(R22)2-、-NR21-、-CONR21-和
其中：
X1是O或S；
t是0或1；
R21和每个R23独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基(例如，C(1-3)-烷基，诸如甲基)；并且
每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。
在某些实施方案中，式(Ic)的化合物是以下结构：
在某些实施方案中，式(Ic)的化合物是以下结构：
在一些实施方案中，本公开的化合物的ASGPR结合部分(X)可由式(Id)描述：
其中R1、R3-R5和Z1如本文所定义。
在一些实施方案中，Z1选自任选取代的–(C(R22)2)q-杂芳基和其中q是0或1。
在一些实施方案中，Z1是任选取代的–(C(R22)2)q-三唑，其中q是0或1。
在一些实施方案中，Z1是在一些实施方案中，Z1是
在一些实施方案中，Z1是其中R23是H或C(1-3)-烷基。
在一些实施方案中，Z1是-NR23CO-，其中R23是H或C(1-3)-烷基。
在式(Id)的某些实施方案中，Z1选自任选取代的–(C(R22)2)q-杂芳基和其中q是0或1。
在式(Id)的某些实施方案中，Z1是任选取代的–(C(R22)2)q-三唑，其中q是0或1。在某些情况下，Z1是
在某些情况下，Z1是其中R23是H或C(1-3)-烷基。
在某些情况下，Z1是-NR23CO-，其中R23是H或C(1-3)-烷基。
在式(Id)的某些实施方案中，Z1是单环的5或6元杂芳基或芳基。在某些情况下，Z1是
在式(Id)的某些实施方案中，Z1是以下结构之一的单环的5或6元杂芳基：
在式(Id)的某些实施方案中，Z1具有以下结构之一：
在式(Id)的某些实施方案中，Z1选自-O-、-S-、-C(R22)2-、-NR21-、-CONR21-和
其中：
X1是O或S；
t是0或1；
R21和每个R23独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基(例如，C(1-3)-烷基，诸如甲基)；并且
每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。
在某些实施方案中，式(Id)的化合物选自以下结构之一：
其中R6独立地是H或(C1-3)烷基。
在式(Id)的化合物的一些实施方案中，R3是H，使得式(Id)的化合物在糖环的1位处没有非氢取代基。
在一些实施方案中，本公开的化合物的ASGPR结合部分(X)可由式(Ie’)描述：
其中：
R1、R4、R5和R11如本文所定义；
Z2不存在或选自-O-、-S-、NR25-和-C(R22)2；
环A不存在或选自5元或6元的任选取代的芳基和5元或6元的任选取代的杂芳基；
Z3是选自以下的连接部分：Z12、任选取代的烷基、任选取代的Z12-烷基、任选取代的Z12-杂芳基、任选取代的Z12-芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、任选取代的酰胺、任选取代的磺胺、任选取代的脲和任选取代的硫脲；并且
Z12选自-CH2O-、-O-、-S-、-NR26-和-C(R22)2-；
R25和R26各自独立地选自H、任选取代的(C1-C6)烷基(例如，C(1-3)-烷基，诸如甲基)和任选取代的酰基；并且
每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。
在式(Ie’)的一些实施方案中，本公开的化合物的ASGPR结合部分(X)可由式(Ie”)描述：
(Ie”)。
在式(Ie’)的一些实施方案中，本公开的化合物的ASGPR结合部分(X)可由式(Ie)描述：
其中：
R1、R4、R5和R11如本文所定义；
Z2不存在或选自-O-、-S-、NR25-和-C(R22)2；
环A不存在或选自5元或6元的任选取代的芳基和5元或6元的任选取代的杂芳基；
Z3是选自以下的连接部分：Z12、任选取代的烷基、任选取代的Z12-烷基、任选取代的Z12-杂芳基、任选取代的Z12-芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、任选取代的酰胺、任选取代的磺胺、任选取代的脲和任选取代的硫脲；并且
Z12选自-CH2O-、-O-、-S-、-NR26-和-C(R22)2-；
R25和R26各自独立地选自H、任选取代的(C1-C6)烷基(例如，C(1-3)-烷基，诸如甲基)和任选取代的酰基；并且
每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。
在一些实施方案中，Z2不存在。在一些实施方案中，Z2是C(R22)2，其中R22是H或任选取代的(C1-C3)烷基。在一些实施方案中，Z2是-CH2-。在一些实施方案中，Z2是NR25，其中R25选自H、任选取代的(C1-C3)烷基和任选取代的酰基。在一些实施方案中，Z2是-N(COCH3)-。在一些实施方案中，Z2是-NH-。在一些实施方案中，Z2是-S-。在一些实施方案中，Z2是O。
在一些实施方案中，式(Ie)的化合物具有式(If)-(Ii)中的任一者：
其中A环、R1、R4、R5、R11、Z3和R25如本文所定义。
在式(Ie)-(Ii)中任一者的一些实施方案中，A环是5或6元芳基或杂芳基。在某些情况下，A环是选自三唑、噻二唑、噻吩、噁唑、异噁唑、异噻唑、噻唑、噁二唑和呋喃的5元杂芳基。在某些情况下，A环是选自吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪和三嗪的6元杂芳基。在某些情况下，A环是三唑。在某些情况下，A环是吡啶。在某些情况下，A环是嘧啶。在某些情况下，A环是噻二唑。
在式(Ie)-(Ii)中任一者的一些实施方案中，A环不存在。
在式(Ie)-(Ii)中任一者的一些实施方案中，A环是苯基或取代的苯基。
在式(If)的一些实施方案中，A环是5或6元杂芳基。在式(If)的某些情况下，A环是5元杂芳基。在式(If)的某些实施方案中，A环是三唑。在(If)的某些实施方案中，A环不存在。
在式(Ig)的一些实施方案中，A环是5或6元杂芳基且R25是H。在式(Ig)的一些实施方案中，A环是三唑。在式(Ig)的某些情况下，A环是吡啶。在式(Ig)的某些情况下，A环是嘧啶。在式(Ig)的某些情况下，A环是噻二唑。在式(Ig)的一些实施方案中，A环不存在且R25是H或任选取代的酰基。在一些情况下，R25是-COCH3。在一些情况下，R25是H。
在式(Ih)的一些实施方案中，A环是5或6元杂芳基。在式(Ih)的某些情况下，A环是5元杂芳基。在式(Ih)的某些实施方案中，A环是三唑。在(Ih)的某些实施方案中，A环不存在。
在式(Ii)的一些实施方案中，A环是5或6元杂芳基。在式(Ii)的某些情况下，A环是5元杂芳基。在式(Ii)的某些实施方案中，A环是三唑。在(Ii)的某些实施方案中，A环不存在。
在一些情况下，本公开的化合物的ASGPR结合部分(X)可由式(Ij)-(Im)中的任一者描述：
其中：
R1、R4、R5、R11、Z3和R25如本文所定义。
Y1-Y3各自独立地是N或CR27；并且
R24和R27各自独立地选自H、任选取代的C(1-6)-烷基、任选取代的氟烷基和卤素。
在式(Ie)-(Im)中任一者的一些实施方案中，Z3选自-O-、-CH2O-、-OCH2-、任选取代的-OCH2-杂芳基、任选取代的-OCH2-芳基、任选取代的-CH2O-杂芳基和任选取代的-CH2O-芳基。
在一些实施方案中，Z3选自：
在式(Ie)-(Im)中任一者的一些实施方案中，Z3选自-C(R22)2-、任选取代的烷基、任选取代的酰胺、任选取代的磺胺、任选取代的脲和任选取代的硫脲。在一些实施方案中，Z3是-CH2-。在一些实施方案中，Z3是-CH2CH2-。在一些实施方案中，Z3是-CH2CH2CH2-。在一些实施方案中，Z3是-NHSO2-(C1-3-烷基)。在一些实施方案中，Z3是-N(Ac)-(C1-3-烷基)。
在式(Ie)-(Im)中任一者的一些实施方案中，Z3选自-S-和-NR26-，其中R26选自H和任选取代的(C1-C3)烷基。
在式(Ik)的一些实施方案中，Y1至Y3中的至少一者是N。在一些情况下，Y1至Y3中的至少两者是N。在某些情况下，Y1和Y3是N且Y2是CR25。在某些情况下，Y1和Y2是N且Y3是CR25。在某些情况下，Y1和Y2是CR25且Y3是N。在某些情况下，R25是H。在某些情况下，R25是C(1-3)-烷基或C(1-3)-氟烷基。在一些情况下，氟烷基是CF3。
在式(Ie)-(Im)中任一者的某些实施方案中，R1是OH。
在式(Ie)-(Im)中任一者的一些实施方案中，R4和R5各自是H。在某些情况下，R4-R5中的至少一者是引入部分。在某些实施方案中，R4和R5被环状连接从而形成引入部分(例如，如本文所述)。
在某些实施方案中，式(Ie)的化合物选自以下结构之一：
在一些实施方案中，本公开的化合物的ASGPR结合部分(X)可由式(In’)描述：
其中：
R1、R4、R5和Z1如本文所定义；
Y1和Y2各自独立地选自-O-、-S-、NR28-和-C(R22)2；
R28选自H、任选取代的(C1-C6)烷基和-C(O)R22；
每个R22独立地选自H、卤素和任选取代的(C1-C6)烷基；
并且
环B是5或6元的任选取代的环状基团。在式(In’)的一些实施方案中，Y1经由α构型连接到糖环。在式(In’)的一些实施方案中，Y1经由β构型连接到糖环。
在一些实施方案中，本公开的化合物的ASGPR结合部分(X)可由式(In)描述：
其中：
R1、R4、R5和Z1如本文所定义；
Y1和Y2各自独立地选自-O-、-S-、NR28-和-C(R22)2；
R28选自H、任选取代的(C1-C6)烷基和-C(O)R22；
每个R22独立地选自H、卤素和任选取代的(C1-C6)烷基；
并且
环B是5或6元的任选取代的环状基团。
在式(In)-(In’)的一些实施方案中，Y1是O。在某些情况下，Y1是S。在某些情况下，Y1是-NR28-。在某些情况下，Y1是-C(R22)2且每个R22是H。
在式(In)-(In’)的一些实施方案中，Y2是-NR28-，其中R28是H。在某些情况下，Y2是-NR28-，其中R28是-C(O)R22。在一些情况下，R22是甲基。
在式(In)-(In’)的一些实施方案中，B环是5或6元杂环。在一些情况下，B环是5元杂环。在一些情况下，B环是6元杂环。
在式(In)-(In’)的一些实施方案中，Z1是Z11，其中Z11选自-O-、-S-、NR21-和-C(R22)2。在一些情况下，Z1是-O-。在一些情况下，Z1是-S-。在一些情况下，Z1是NR21，其中R21是H。在一些情况下，Z1是-C(R22)2，其中每个R22是H。
在式(In)-(In’)的一些实施方案中，Z1是任选取代的Z11-杂芳基或任选取代的Z11-芳基。在一些实施方案中，Z1是CH2-杂芳基或CH2-芳基。在式(In)-(In’)的一些实施方案中，Z1是任选取代的酰胺。在式(In)-(In’)的一些实施方案中，Z1是任选取代的磺胺。在式(In)-(In’)的一些实施方案中，Z1是任选取代的脲或任选取代的硫脲。
在一些实施方案中，式(In)-(In’)的化合物具有以下结构之一：
在式(Ia)-(In)中任一者的某些实施方案中，n是1，并且L包含具有经由Z1将X共价连接至Y的20个或更多个连续原子的主链(诸如25个或更多个连续原子、或30个或更多个连续原子，并且在一些情况下，至多100个连续原子的主链)的直链接头。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开20至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开21至50个连续原子的链、22至50个连续原子的链、23至50个连续原子的链、24至50个连续原子的链、25至50个连续原子的链、26至50个连续原子的链、27至50个连续原子的链、28至50个连续原子的链或29至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开30至60个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开31至60个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开32至60个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开33至60个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开34至60个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开35至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开36至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开41至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开46至50个连续原子的链。
在式(Ia)-(In)中任一者的某些实施方案中，n是2或更大，并且L是经由连接部分Z1将2个或更多个X部分共价连接至Y的支链接头。
在式(Ia)-(In)中任一者的某些实施方案中，n是2或更大且L的每个分支包含14个或更多个连续原子的直链接头以经由Z1将每个X部分共价连接至接头L的支化点，诸如包含15个或更多个连续原子、16个或更多个连续原子、或17个或更多个连续原子，并且在一些情况下，至多50个连续原子的直链接头。在某些情况下，L的每个分支包含14至50个连续原子(诸如14至45个、14至40个、14至35个或14至30个连续原子)的直链接头。在某些情况下，L的每个分支包含14至30个连续原子，诸如14至29个、14至28个、14至27个、14至26个、14至25个、14至24个、14至23个、14至22个、14至21个、或14至20个连续原子。在某些情况下，L包含(经由每个Z1基团)将每个X部分共价连接至接头的支化点的超过14个连续原子。在某些情况下，L包含将每个Z1基团与L的支化点分隔开的15个连续原子。在某些情况下，L包含将每个Z1基团与L的支化点分隔开的16个连续原子。在某些情况下，L包含将每个Z1基团与L的支化点分隔开的17个连续原子。在某些情况下，L包含将每个Z1基团与L的支化点分隔开的18个连续原子。在某些情况下，L包含将每个Z1基团与L的支化点分隔开的19个连续原子。在某些情况下，L包含将每个Z1基团与L的支化点分隔开的20个连续原子。在某些其他情况下，L包含将每个Z1基团与支化点L分隔开的20个或更多个连续原子的直链接头。
在式(Ia)-(In)中任一者的某些实施方案中，n是2，并且L包含具有将X的每个Z1基团与L的支化点分隔开的14个或更多个连续原子的支链接头。
在式(Ia)-(In)中任一者的某些实施方案中，n是3，并且L包含具有将X的每个Z1基团与L的支化点分隔开的14个或更多个连续原子的支链接头。
在式(Ia)-(In)中任一者的某些实施方案中，接头L具有式(II)(例如，如本文所述)。
在式(Ia)、(Ib)或(Id)-(In)中任一者的某些实施方案中，R1是OH。在某些其他情况下，R1是-OC(O)R。在某些情况下，R1是-C(O)NHR，其中R是任选取代的烷基。在某些情况下，R终止于烯基或炔基基团。在某些其他情况下，R1是任选取代的三唑。在某些情况下，三唑具有以下结构：
在(Ia)-(Ic)的某些实施方案中，R2是-NHCOCH3。在某些其他实施方案中，R2是–NHCOCF3。在某些其他实施方案中，R2是–NHCOCH2CF3。在某些情况下，R2是–OH。在某些其他情况下，R2是任选取代的三唑。在某些情况下，三唑具有以下结构：
在某些实施方案中，当R1或R2是取代的三唑时。该三唑是1,2,3-三唑，并且取代基在4或5位处。在某些情况下，该三唑部分上的取代基包括但不限于任选取代的(C1-6)烷基、任选取代的(C1-6)烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷芳基和任选取代的烷基杂芳基。应当理解，三唑部分中可以包含任何方便的取代基，参见，例如，Mamidayala等人,J.Am.Chem.Soc.2012,134,1978-1981中公开的三唑部分。
在式(Ia)-(In)中任一者的某些实施方案中，R4-R5中的至少一者是引入部分。在某些情况下，引入部分是酯。在某些实施方案中，式-OCOCH3、-OCOCH(CH3)2或-OCOC(CH3)3的酯。在某些情况下，R4-R5中的至少一者具有式-COCH3、-COCH(CH3)2或-COC(CH3)3。在某些情况下，R4-R5中的至少一者具有式-CH2OCOC(CH3)3。在某些实施方案中，R4是引入部分且R5是H。在某些其他情况下，R5是H且R4是引入部分。在某些情况下，R4和R5两者都是引入部分。在某些情况下，R4和R5被环状连接从而形成引入部分。在某些情况下，R4和R5被环状连接从而形成式(Io)或(Ip)的引入部分：
其中R1-R3和Y4如本文所定义。
在式(Ia)-(In)中任一者的某些实施方案中，R4和R5都是H。
在式(I)的某些实施方案中，n是2或3，并且X选自以下结构之一：
其中R5和R23独立地是H或(C1-3)烷基。
在式(I)的某些实施方案中，n是1、2或3，并且X选自以下结构之一：
其中R5和R4独立地是H或引入部分，或者R5和R4被环状连接从而形成引入部分；n1和n2各自独立地是从1至6的整数；并且Y4是合适的反离子。在一些实施方案中，Y4是钠。
在式(I)的某些实施方案中，n是1、2或3，并且X选自以下结构之一：
在式(I)的某些实施方案中，n是1、2或3，并且X是以下结构：
在式(I)的某些实施方案中，n是1、2或3，并且X是以下结构：
在式(I)的某些实施方案中，n是1且X是
在式(Ia)-(Ip)中任一者的某些实施方案中，-Z1-连接至-L1-部分(例如，本文所述的式(II)、(IIa)或(IIb)中任一者的接头的-L1-部分)。在一些实施方案中，主题化合物包含选自以下的-Z1-L1-基团：
其中o、p、q、r、s、t、u、v、w、x、y、z和z1各自独立地是1至6。
在某些实施方案中，Z1-L1-基团是且o是1或2。
在某些实施方案中，Z1-L1-基团是每个R22是H，且p是1或2。
在某些实施方案中，Z1-L1-基团是其中q是1-3。
在某些实施方案中，Z1-L1-基团是其中r是1-3。
在某些实施方案中，Z1-L1-基团是其中r是1-3。
在某些实施方案中，Z1-L1-基团是其中s和t各自独立地是1-3。
在某些实施方案中，Z1-L1-基团是其中u是1-3。
在某些实施方案中，Z1-L1-基团是其中v和w各自独立地是1-3。
在某些实施方案中，Z1-L1-基团是其中x是0-3。
在某些实施方案中，Z1-L1-基团是其中y是1-3。
在某些实施方案中，Z1-L1-基团是其中R21是H，且z是1-4。
在某些实施方案中，Z1-L1-基团是其中R21是H，且z1是1-4。
在某些实施方案中，主题化合物包含选自以下的-Z1-L-基团：
5.1.1.示例性ASGPR配体
表1-4中示出了结合ASGPR的示例性部分以及可以用于制备本公开的包含感兴趣的ASGPR配体的化合物的合成子。
在某些实施方案中，式(Ib)的化合物是表1中所示的化合物：
在某些实施方案中，式(Ic)的化合物是表2中所示的化合物：
在某些实施方案中，式(Id)的化合物是表3中所示的化合物：
在某些实施方案中，式(Id)的化合物是表4中所示的化合物：
表5中示出了可以用于制备本公开的包含感兴趣的ASGPR配体(X)的化合物的示例性结构单元(building block)。
在可以用于制备本公开的化合物的ASGPR配体(X)结构单元的一些实施方案中，R3是H，使得ASGPR配体(X)在1位处包含CH2，且R2是连接部分Z1。表6中示出了可以用于制备本公开的包含感兴趣的ASGPR配体(X)的化合物的示例性结构单元。
在一些实施方案中，可以用于制备本公开的化合物的ASGPR配体(X)结构单元是双环结构。表7中示出了可以用于制备本公开的包含感兴趣的ASGPR配体(X)的化合物的示例性结构单元。
5.1.1.前药
本公开的方面包括本文所述的并入到本公开的化合物和缀合物中的任何ASGPR结合部分的前药。
术语“前药”是指这样的剂，其在体内被一些生理或化学过程转化为药物(例如，前药在达到生理pH值时被转化为期望药物形式)。
本文所述的任何ASGPR结合部分的前药形式都可能是有用的，因为例如作为所得化合物或缀合物在身体内的半衰期延长或所需活性剂量减少的结果，可以引起特定的治疗益处。
前药在一些情况下也可能是有用的，因为它们可能比母体药物更容易施用。它们可能例如通过经口施用而具有可生物利用性，而母体药物则不能如此。与母体药物相比，前药在药物组合物中也可能具有改善的溶解度。
ASGPR结合部分的前药衍生物通常包含位于该化合物的合适的不稳定位点的引入部分取代基。引入部分是指当前药在体内转化为药物时被酶促或化学反应移除的基团。
在一些实施方案中，引入部分是经由酯键联附接至化合物或药物的羟基基团的基团。
在一些实施方案中，糖环的羟基基团中的一个或多个羟基基团的前药衍生物可被并入到化合物中。例如，酯引入部分可在糖的3和/或4个位置处的一个或多个羟基基团处并入(例如，如本文所述)。在一些实施方案中，该糖的3和4个位置处的羟基基团被环状连接从而形成引入部分(例如，如本文所述)。
5.2.接头
术语“接头”、“连接部分”和“连接基团(linking group)”可互换使用，是指共价连接两个或更多个部分或化合物的连接部分，诸如配体和其他感兴趣的部分。在一些情况下，接头是二价的并连接两个部分。在某些情况下，接头是三价或更高多价的支链连接基团。在一些情况下，连接两个或更多个部分的接头具有例如如在两个或更多个部分之间测量的500个原子或更少(诸如400个原子或更少、300个原子或更少、200个原子或更少、100个原子或更少、80个原子或更少、60个原子或更少、50个原子或更少、40个原子或更少、30个原子或更少、或甚至20个原子或更少)的长度的直链或支链主链。连接部分可以是连接两个基团的共价键或长度在1到500个原子之间的直链或支链，例如长度约1、2、3、4、5、6、8、10、12、14、16、18、20、30、40、50、100、150、200、300、400或500个碳原子，其中接头可以是直链、支链、环状或单个原子。在某些情况下，接头主链的一个、两个、三个、四个、五个或更多、十个或更多或甚至更多碳原子可任选地被杂原子例如硫、氮或氧杂原子取代。在某些情况下，当接头包括PEG基团时，接头主链的该区段的每三个原子被氧取代。主链原子之间的键可以是饱和的或不饱和的，通常在接头主链中将存在不超过一个、两个或三个不饱和键。接头可包括一个或多个例如烷基、芳基或烯基基团的取代基基团。接头可包括但不限于以下的一种或多种：寡聚(乙二醇)、醚、硫醚、二硫醚、酰胺、碳酸酯、氨基甲酸酯、叔胺、烷基，它们可以是直链的或支链的，例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1,1-二甲基乙基(叔丁基)等。接头主链可以包括环状基团，例如芳基、杂环、环烷基或杂环基，其中在主链中包含环状基团的2个或更多个原子，例如2、3或4个原子。
在一些实施方案中，“接头”或连接部分衍生自具有两个反应性末端的分子，一个反应性末端用于缀合至感兴趣的部分(Y)，例如生物分子(例如，抗体)，而另一个反应性末端用于缀合至结合到ASGPR细胞表面受体的部分(记为X)。当Y是多肽时，接头的多肽缀合反应性末端在一些情况下是能够通过多肽上的半胱氨酸硫醇或赖氨酸胺基团缀合至多肽的位点，因此可以是硫醇反应性基团例如马来酰亚胺或二溴马来酰亚胺，或如本文所定义，或胺反应性基团，如活性酯(例如，全氟苯基酯或四氟苯基酯)，或如本文所定义。
在本文所述式的某些实施方案中，接头L包含一个或多个直链或支链碳部分和/或聚醚(例如，乙二醇)部分(例如，-CH2CH2O-的重复单元)，和它们的组合。在某些实施方案中，这些接头任选地具有酰胺键联、脲或硫脲键联、氨基甲酸酯键联、酯键联、氨基键联、醚键联、硫醚键联、硫氢基键联、杂芳基键联或其他杂官能键联。在某些实施方案中，接头包含碳原子、氮原子、硫原子、氧原子及其组合中的一种或多种。在某些实施方案中，接头包含醚键、硫醚键、胺键、酰胺键、碳-碳键、碳-氮键、碳-氧键、碳-硫键及其组合中的一种或多种。在某些实施方案中，接头包含直链结构。在某些实施方案中，接头包含支链结构。在某些实施方案中，接头包含环状结构。在某些情况下，接头包含一个或多个杂芳基环状结构，例如，三唑，诸如1,2,3-三唑。
在某些实施方案中，L的长度介于约10和约20之间。在某些实施方案中，L的长度介于约15和约20之间。在某些实施方案中，L的长度为约15在某些实施方案中，L的长度为约16在某些实施方案中，L的长度为约17
在某些实施方案中，L是介于约5和约500之间的接头。在某些实施方案中，L介于约10和约400之间。在某些实施方案中，L介于约10和约300之间。在某些实施方案中，L介于约10和约200之间。在某些实施方案中，L介于约10和约100之间。在某些实施方案中，L介于约10和约20之间、介于约20和约30之间、介于约30和约40之间、介于约40和约50之间、介于约50和约60之间、介于约60和约70之间、介于约70和约80之间、介于约80和约90之间、或介于约90和约100之间。在某些实施方案中，L是介于约5和约500之间的接头，其包含与X连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基(heteroarylene)、与X连接的亚烷基(alkylene)基团或与X连接的杂原子。在某些实施方案中，L是介于约10和约500之间的接头，其包含与X连接的任选取代的亚芳基、或与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的亚烷基基团或与X连接的杂原子。在某些实施方案中，L是介于约10和约400之间的接头，其包含与X连接的任选取代的亚芳基、或与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的亚烷基基团或与X连接的杂原子。在某些实施方案中，L是介于约10和约200之间的接头，其包含与X连接的任选取代的亚芳基、或与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的亚烷基基团或与X连接的杂原子。
在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开4至500个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开4至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开6至50个连续原子的链、11至50个连续原子的链、16至50个连续原子的链、21至50个连续原子的链、26至50个连续原子的链、31至50个连续原子的链、36至50个连续原子的链、41至50个连续原子的链或46至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开6至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开11至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开16至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开21至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开26至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开31至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开36至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开41至50个连续原子的链。在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开46至50个连续原子的链。
在某些实施方案中，接头L将X和Y(或Z1)分隔开4或5个连续原子的链、6至10个连续原子的链、11至15个连续原子的链、16至20个连续原子的链、21至25个连续原子的链、26至30个连续原子的链、31至35个连续原子的链、36至40个连续原子的链、41至45个连续原子的链或46至50个连续原子的链。
在某些实施方案中，接头L是5至500个连续原子的链，该链将X和Y(或Z1)分隔开并且包含与X连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚烷基、或与X连接的杂原子。在某些实施方案中，接头L是7至500个连续原子的链，该链将X和Y(或Z1)分隔开并且包含与X连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚烷基、或与X连接的杂原子。在某些实施方案中，接头L是10至500个连续原子的链，该链将X和Y(或Z1)分隔开并且包含与X连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚烷基、或与X连接的杂原子。在某些实施方案中，接头L是15至400个连续原子的链，该链将X和Y(或Z1)分隔开并且包含与X连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚烷基、或与X连接的杂原子。
在某些实施方案中，接头L是5至500个连续原子的链，该链将X和Y(或Z1)分隔开并且包含亚烷基、杂原子、或与X连接的任选取代的亚杂芳基。在某些实施方案中，接头L是7至500个连续原子的链，该链将X和Y(或Z1)分隔开并且包含亚烷基、杂原子、或与X连接的任选取代的亚杂芳基。在某些实施方案中，接头L是10至500个连续原子的链，该链将X和Y(或Z1)分隔开并且包含亚烷基、杂原子、或与X连接的任选取代的亚杂芳基。在某些实施方案中，接头L是15至400个连续原子的链，该链将X和Y(或Z1)分隔开并且包含亚烷基、杂原子、或与X连接的任选取代的亚杂芳基。
在某些实施方案中，接头L是5至500个连续原子的链，该链将X和Y(或Z1)分隔开并且包含与X连接的任选取代的三唑。在某些实施方案中，接头L是7至500个连续原子的链，该链将X和Y(或Z1)分隔开并且包含与X连接的任选取代的三唑。在某些实施方案中，接头L是10至500个连续原子的链，该链将X和Y(或Z1)分隔开并且包含与X连接的任选取代的三唑。在某些实施方案中，接头L是15至400个连续原子的链，该链将X和Y(或Z1)分隔开并且包含与X连接的任选取代的三唑。
在某些实施方案中，接头L是16至400个连续原子的链，该链将X和Y(或Z)分隔开并且包含与X连接的任选取代的亚芳基、与X连接的任选取代的亚杂芳基、与X连接的任选取代的亚烷基、或与X连接的杂原子。
应当理解，接头可被视为直接连接至ASGPR结合部分(X)的Z1基团(例如，如本文所述)。在式(Ia)-(Ip)中任一者的一些实施方案中，接头可被视为直接连接至Z1基团。替代地，-Z1-L1-基团(例如，如本文所述)可被视为将L连接至Y的连接部分的一部分。本公开意在包括ASGPR结合部分(X)和接头(L)的所有此类构型。
在式(I)-(Ia)的一些实施方案中，L是式(II)的接头：
其中
L1和L3独立地是接头，并且L2是支链连接部分，其中L1至L3一起提供介于X和Y之间的直链或支链接头；
a、b和c独立地是0或1；
**代表X经由Z1与L1的附接点；并且
***代表与Y的附接点；
其中：
当n是1时，a是1，并且b是0；
当n是>1时，a是1，并且b是1。
在式(II)的接头的某些实施方案中，L1至L3各自独立地包含一个或多个独立地选自以下的连接部分：–C1-20-亚烷基–、–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、–NH C1-6-亚烷基–、–NHCONH-C1-6-亚烷基–、–NHCSNH-C1-6-亚烷基–、–C1-6-亚烷基–NHCO-、–C1-6-亚烷基–CONH-、–C1-6-亚烷基–NH-、–C1-6-亚烷基–NHCONH-、–C1-6-亚烷基–NHCSNH-、-O(CH2)p–、–(OCH2CH2)p–、–NHCO–、–CONH–、–NHSO2–、–SO2NH–、–CO–、–SO2–、–O–、–S–、单环杂芳基(例如，1,2,3-三唑)、单环芳基(例如，苯基，例如，1,4-连接的苯基或1,3-连接的苯基)、单环杂环(例如，如本文所述的吡咯烷-2,5-二酮、哌嗪或哌啶环)、氨基酸残基(天然或非天然存在的氨基酸残基)、–NH–和–NMe–，其中每个p独立地是1至50。
在式(II)的接头的某些实施方案中，L1-L3中的任一者都包含重复乙二醇部分(例如，-CH2CH2O-或-OCH2CH2-)。在某些情况下，式(II)的接头包含1至25个乙二醇部分，诸如3至25个、5至25个、7至25个、10至25个、15至25个、17至25个、20至25个或22至25个乙二醇部分。在一些情况下，式(II)的接头包含3个或更多个乙二醇部分，诸如5个或更多个、7个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、或甚至更多个乙二醇部分。
在式(II)的接头的某些实施方案中，L1-L3中的任一者都包含一个或多个三唑连接部分。在一些情况下，接头包含一个或多个1,2,3-三唑连接部分。在某些情况下，一个或多个1,2,3-三唑部分选自以下结构之一：
其中w1、u1和q1独立地是1至25(例如，1至12，诸如1至6)。
在式(II)的接头的某些实施方案中，n是1，使得b是0，并且接头具有式(IIa)：
其中
L1和L3独立地是接头(例如，如本文所述)，其中L1至L3一起提供介于X和Y之间的直链接头；
a是1；
c是0或1；
**代表X经由Z1与L1的附接点；并且
***代表与Y的附接点。
在式(IIa)的接头的某些实施方案中，直链接头具有经由Z1将X共价连接至Y的20个或更多个连续原子(诸如25个或更多个连续原子或30个或更多个连续原子，并且在一些情况下，至多100个连续原子)的主链。在式(IIa)的某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开20至50个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头L将X和Y(或Z1)分隔开21至50个连续原子的链、22至50个连续原子的链、23至50个连续原子的链、24至50个连续原子的链、25至50个连续原子的链、26至50个连续原子的链、27至50个连续原子的链、28至50个连续原子的链或29至50个连续原子的链。在式(IIa)的某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开30至60个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开31至60个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开32至60个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开33至60个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开34至60个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开35至50个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开36至50个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开41至50个连续原子的链。在某些实施方案中，直链接头将X和Y(或Z1)分隔开46至50个连续原子的链。
在式(II)的某些其他实施方案中，n为2或更大，使得L1至L3一起提供介于X和Y之间的支链接头。
在式(II)的某些实施方案中，n为2或更大，并且L2选自：
其中每个x和y独立地是1至10。
在式(II)的某些实施方案中，L1-L2包含介于X和支化原子之间的14个或更多个连续原子的主链，诸如介于X和支化原子之间的14至50个、14至40个、14至35个或14至30个连续原子的主链。
在式(II)或(IIa)的某些实施方案中，L3包含10至80个连续原子诸如12至70个、12至60个或12至50个连续原子的主链。
在式(II)或(IIa)的某些实施方案中，其中L3包含选自(C10-C20-亚烷基(例如，C12-亚烷基)或–(OCH2CH2)p–的连接部分，其中p是1至25，诸如3至25、5至24、7至25、10至25、15至25或20至24。
在某些实施方案中，L具有式(IIb)：
其中
每个L1至L5独立地是连接部分，其一起提供介于Z1和Y之间的直链或支链接头；
a、b、c、d和e各自独立地是0、1或2；
**代表X经由Z1与L1的附接点；并且
***代表与Y的附接点；
其中：
当n是1时，a是1，并且c是0；并且
当n是>1时，a是1，并且c是1。
在式(IIb)的接头的某些实施方案中，L1至L5各自独立地包含一个或多个独立地选自以下的连接部分：–C1-20-亚烷基–、–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、–NH C1-6-亚烷基–、–NHCONH-C1-6-亚烷基–、–NHCSNH-C1-6-亚烷基–、–C1-6-亚烷基–NHCO-、–C1-6-亚烷基–CONH-、–C1-6-亚烷基–NH-、–C1-6-亚烷基–NHCONH-、–C1-6-亚烷基–NHCSNH-、-O(CH2)p–、–(OCH2CH2)p–、–NHCO–、–CONH–、–NHSO2–、–SO2NH–、–CO–、–SO2–、–O–、–S–、单环杂芳基(例如，1,2,3-三唑)、单环芳基(例如，苯基，例如，1,4-连接的苯基或1,3-连接的苯基)、单环杂环(例如，如本文所述的吡咯烷-2,5-二酮、哌嗪或哌啶环)、氨基酸残基(天然或非天然存在的氨基酸残基)、–NH–和–NMe–，其中每个p独立地是1至50。
在式(IIb)的某些实施方案中，-(L1)a-包含任选取代的烷基或乙二醇连接部分。在某些情况下，L1包含任选取代的-C1-6-亚烷基–。在某些情况下，L1包含乙二醇连接部分。
在式(IIb)的某些实施方案中，L1独立地选自：
-C1-6-亚烷基–、–(CH2CH2O)t–、-C1-6-亚烷基-NR4CO–、–C1-6-亚烷基CONH–或OCH2，其中t是1至20；并且R4独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。在某些情况下，L1是-C1-6-亚烷基–，诸如-C1-3-亚烷基–。在某些情况下，L1是–(CH2CH2O)t–，其中t为1至20，诸如1至15、1至10、1至8、1至6或1至4。在某些情况下，L1是-C1-6-亚烷基-NR4CO–。在某些情况下，L1是–C1-6-亚烷基CONH–。在某些情况下，L1是或OCH2。
在式(IIb)的一些实施方案中，一个或多个L1独立地是–CH2O–；–(CH2CH2O)t–、–NR4CO–、-C1-6-亚烷基–、
其中：R13选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R21)2、-OCOR21、-COOR21、-CONHR21和-NHCOR21；
每个r独立地是0至20，并且任何L1部分任选地进一步被取代。
在式(IIb)的某些实施方案中，L2独立地选自：
–NR4’CO-C1-6-亚烷基–、–CONR4’-C1-6-亚烷基、
-OCH2-和–(OCH2CH2)q–，其中q是1至10，u是0至10，w是1至10，并且R4’独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基。在某些情况下，L2是–NR4’CO-C1-6-亚烷基–。在某些情况下，L2是–CONR4’-C1-6-亚烷基–。
在某些情况下，L2是其中w是1，并且u是0或1。
在某些情况下，L2是其中w是1，并且u是0或1。
在某些情况下，L2是其中w是1，u是0或1，并且q是1。
在某些情况下，L2是其中u是0或1。
在某些情况下，L2是
在某些实施方案中，L2是-OCH2-。在某些其他实施方案中，L2是(OCH2CH2)q–，并且q是1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2。在某些情况下，q是2至8，诸如2至6、4至6或2至4。
在式(IIb)的某些实施方案中，L4不存在或独立地选自-C1-6-亚烷基–、–(CH2CH2O)t–、-C1-6-亚烷基-NHCO–、–C1-6-亚烷基CONH–或OCH2，其中t是1至20。在某些情况下，L4不存在。在某些情况下，L4是-C1-6-亚烷基–。在某些情况下，L4是–(CH2CH2O)t–，其中t是1至20，诸如1至15、1至12、1至10、1至8、1至6、1至4或1至3。在某些情况下，L4是-C1-6-亚烷基-NHCO–。在某些情况下，L4是–C1-6-亚烷基CONH–。在某些情况下，L4是OCH2。
在主题化合物的一些实施方案中，n是1，并且式(IIb)中的L3不存在。
在主题化合物的某些实施方案中，n是2或更大，并且式(IIb)中的L3是支链连接部分。
因此，在式(IIb)的一些实施方案中，L3是支链连接部分，例如，二价或三价连接部分。例如，L3连接部分可以具有以下通式之一：
在式(IIb)的一些实施方案中，支链连接部分可以具有较高的价态，并且由以下通式之一描述：
其中任何两个L3基团可以直接连接或经由任选的直链连接部分(例如，如本文所述)连接。
在式(IIb)的一些实施方案中，支链连接部分可以包括一个、两个或更多个L3连接部分，每个均是三价部分，它们在被连接在一起时可以为配体的共价附接提供多个支化点并且可由以下通式描述：
其中t是0至500，诸如0至100、0至20或0至10。
在一些实施方案中，支链连接部分(例如，L3)包含以下中的一种或多种：氨基酸残基(例如，Asp、Lys、Orn、Glu)、N-取代的酰胺基(-N(-)C(＝O)-)、叔氨基、多元醇(例如，O-取代的甘油)等。
在式(IIb)的一些实施方案中，一个或多个L3是选自
的支化部分，
其中每个x和y各自独立地是1至10，诸如1-6、1-3，例如1或2。在一些情况下，每个x是1、2或3，例如2。
在式(IIb)的一些实施方案中，L5选自–CH2O–；–(CH2CH2O)t–、–NR4CO–、-C1-6-亚烷基–、
其中：
R13选自H、卤素、OH、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、COOH、NO2、CN、NH2、-N(R21)2、-OCOR21、-COOR21、-CONHR21和-NHCOR21；
每个r独立地是0至20，并且任何L5部分任选地进一步被取代。
在某些情况下，L5是–CH2O–。在某些情况下，L5是–(CH2CH2O)t–，其中t是1至20，诸如1-15、1-12、1-10、1-8、1-6或1至4。在某些情况下，L5是–NR4CO–，其中R4是H或任选取代的(C1-C6)烷基。在某些情况下，L5是-C1-6-亚烷基–。
在某些情况下，L5是其中r是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5。
在某些情况下，L5是其中每个r独立地是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5，并且R13是H或任选取代的(C1-C6)烷基。
在某些情况下，L5是其中r是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5，并且R13是H或任选取代的(C1-C6)烷基。
在某些情况下，L5是其中r是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5，并且R13是H或任选取代的(C1-C6)烷基。
在某些情况下，L5是其中r是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5，并且R13是H或任选取代的(C1-C6)烷基。
在某些情况下，L5是其中每个r独立地是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5。
在某些情况下，L5是其中每个r独立地是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5。
在某些情况下，L5是其中每个r独立地是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5。
在某些情况下，L5是其中每个r独立地是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5。
在某些情况下，L5是其中r是0至20，诸如0至15、0至10、0至8或0至5。
在式(IIb)的一些实施方案中，L5包含以下中的一者或多者：氨基酸残基(例如，Asp、Lys、Orn、Glu)、氨基酸类似物、N-取代的酰胺基(-N(-)C(＝O)-)、叔氨基、多元醇(例如，O-取代的甘油)等。氨基酸的类似物包括但不限于不饱和氨基酸以及本领域已知的其他修饰。氨基酸包括L-氨基酸、D-氨基酸或两者，并且可以含有本领域已知的多种氨基酸修饰或类似物中的任何一种。
在式(IIb)的一些实施方案中，L1-L5包含以下单元中的一种或多种：
其中Ra是(C1-C6)烷基或取代的(C1-C6)烷基，例如，任选被胺取代的(C1-C6)烷基、叔胺、任选取代的烷氧基、任选取代的羧基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。应当理解，Ra可以与M6PR结合部分连接。
在一些实施方案中，接头包括多肽支架，其中氨基酸残基的一些或全部侧链基团已被修饰成附接ASGPR结合部分(例如，如本文所述)。应当理解，ASGPR结合部分(例如，如本文所述)可以经由方便的缀合化学与含有多肽的接头的氨基酸残基诸如Asp、Lys、Orn、Glu和Ser缀合。在一些实施方案中，接头含有聚赖氨酸多肽。在一些实施方案中，接头含有聚鸟氨酸多肽。在一些实施方案中，接头含有聚丝氨酸多肽。在一些实施方案中，接头含有聚天冬氨酸多肽。该多肽可以是具有平均长度的随机聚合的聚合物或例如以受控分步方式制备的限定长度的聚合物。在一些情况下，多肽接头区段具有10-100个氨基酸残基诸如20-90个或20-50个氨基酸残基的长度。在一些实施方案中，多肽接头区段的N末端或C末端被修饰成包含连向另外的M6PR结合部分的连接单元(例如，如本文所述)。在一些实施方案中，多肽接头区段的N末端或C末端被修饰成具有一个或多个适合于与感兴趣的Y部分附接的连接单元(例如，如本文所述)。
在式(IIb)的某些实施方案中，a是1。在某些情况下，b、c、d和e中的至少一者不是0。在某些情况下，b是1或2。在某些情况下，c是1或2。在某些情况下，e是1或2。在某些情况下，b、d和e独立地是1或2。在某些情况下，a、b、d和e各自是1，并且c是0。
在式(II)、(IIa)或(IIb)的某些实施方案中，接头包含20至100个连续原子，诸如20至90个、20至80个、20至70个、20至60个、20至50个、20至40个或20至30个连续原子。在某些情况下，接头包含25至100个连续原子，诸如30至100个、35至100个、40至100个、45至100个、50至100个、55至100个、60至100个、65至100个、70至100个、75至100个、80至100个、85至100个、90至100个或95至100个连续原子。
在式(II)、(IIa)或(IIb)的某些实施方案中，接头包含25或更多个连续原子，诸如26个或更多个、27个或更多个、28个或更多个、29个或更多个或30个或更多个连续原子。在式(II)、(IIa)或(IIb)的某些实施方案中，接头包含30个或更多个连续原子，诸如31个或更多个、32个或更多个、33个或更多个、34个或更多个、35个或更多个、36个或更多个、37个或更多个、38个或更多个、39个或更多个、40个或甚至更多个连续原子。
本发明人已经证明，本公开的具有带有期望价态和长度的接头的特定构型的ASGPR结合化合物可以同时以高亲和力特异性地结合到ASGPR和靶标，并且表现出对靶标的高摄取活性。因此，本公开的缀合物可以提供靶蛋白质在细胞溶酶体中的隔离以及该靶蛋白质的降解。例如，如与在ASGPR结合化合物(Z1基团)和支化点之间具有较短接头(例如，少于14个原子的接头)的三价ASGPR结合化合物的缀合物相比，在ASGPR结合部分(例如，Z1基团)和接头的支化点之间具有14个或更多个原子的三价ASGPR结合化合物的缀合物可以表现出优良的细胞摄取。例如，本发明人观察到，具有1-三唑部分和从ASGPR配体到该配体的支化点的短键联(例如，6个原子)的缀合物(I-157，至支化点的接头长度为6个原子)在HepG2细胞中表现出的摄取活性低于具有1-三唑部分和从ASGPR配体到支化点的更长键联(例如，14个原子)的缀合物(I-143，长度为14个原子)(参见，例如，图2A)。根据该发现，本文描述了在ASGPR结合部分和接头支化点之间具有一定接头长度范围的多价ASGPR结合化合物，其提供了对被结合靶标的期望的结合和细胞摄取。
进一步地，如与二价或单价的ASGPR结合化合物(例如，式(I)的化合物，其中n＝2或1)的缀合物相比，三价ASGPR结合化合物(例如，式(I)的化合物，其中n＝3)的缀合物可以在细胞中表现出优良的的摄取活性。本发明人观察到，如与二价缀合物(I-144，n＝2)相比，缀合物(I-124，n＝3)在HepG2细胞中显示出优良的的摄取活性(参见，例如，图2B)。
仍进一步地，如与在接头的支化点和感兴趣的Y部分之间具有较短接头(例如，少于12个原子的接头)的多价ASGPR结合化合物的缀合物相比，在接头的支化点和感兴趣的Y部分之间具有12个或更多个原子的多价ASGPR结合化合物的缀合物可以表现出优良的细胞摄取。本发明人也已经证明，在接头的支化点和Y之间具有超过12个原子的ASGPR结合化合物的缀合物表现出可比的摄取活性。例如，观察到在ASGPR接头和Y之间具有较长接头的缀合物(例如，在支化点和Y之间具有81个原子的化合物I-137的缀合物；以及在支化点和Y之间具有33个原子的化合物I-129的缀合物)表现出与参考缀合物(例如，在支化点和Y之间具有12个原子的化合物I-124的缀合物)可比的活性(参见，例如，图2B)。
因此，在其中式(II)或(IIb)的接头是支链接头的某些实施方案中，接头的每个分支包含14个或更多个连续原子的直链接头以经由Z1将每个X部分共价连接至该接头的支化点。在某些情况下，接头的每个分支包含连向支化点的15个或更多个连续原子的直链接头。在某些情况下，接头的每个分支包含连向支化点的16个或更多个连续原子的直链接头。在某些情况下，接头的每个分支包含连向支化点的17个或更多个连续原子的直链接头。在某些情况下，接头的每个分支包含连向支化点的18个或更多个连续原子的直链接头。在某些情况下，接头的每个分支包含连向支化点的19个或更多个连续原子的直链接头。
在式(II)或(IIb)的某些实施方案中，接头是包含经由Z1将每个X部分共价连接至接头的支化点的分支的支链接头和将支化点共价连接至Y的直链接头。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是12个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是15个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是20个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是25个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是30个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是40个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是50个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是60个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是70个或更多个连续原子。在某些情况下，将支化点共价连接至Y的直链接头是80个或更多个连续原子。
5.2.1.示例性接头和连接部分
表8-10中示出了可以用于制备本公开的化合物的示例性接头和连接部分(例如，将ASGPR配体(X)连接至感兴趣的部分(Y)的示例性接头和连接部分)。
在某些实施方案中，接头是如表8中所示的直链接头或连接部分。
表9包括可以用于制备主题化合物的多种接头组分合成前体(例如，直链和支链接头前体)。
在某些实施方案中，接头是如表10中所示的支链接头或连接部分。
5.3.化学选择性连结基团
在式(I)的某些实施方案中，Y是化学选择性连结基团或其前体。化学选择性连结基团是具有能够与第二部分的相容基团缀合的反应性功能团(functionality)或官能基团的基团。例如，化学选择性连结基团(或其前体)可以是与缀合化学相关的一对基团中的一个，所述缀合化学诸如叠氮基-炔烃点击化学、无铜点击化学、Staudinger连结、四嗪连结、肼-异-Pictet-Spengler(HIPS)连结、半胱氨酸反应性连结化学(例如，硫醇-马来酰亚胺、硫醇-卤代乙酰胺或炔烃硫氢醇化(hydrothiolation))、胺活性酯偶联、酪氨酸特异性缀合化学(例如，e-Y-CLICK)、甲硫氨酸特异性缀合化学(例如，基于氧杂吖丙丙啶(oxaziridine)的或ReACT化学)、还原性胺化、芳酸二烷基酯化学等。
可用于连接两个部分的化学选择性连结基团包括但不限于氨基(例如多肽的N-末端氨基或赖氨酸侧链基团)、叠氮基、芳基叠氮、炔基(例如乙炔基或环辛炔或衍生物)、活性酯(例如，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯、磺基-NHS酯或PFP酯或硫酯)、卤代乙酰胺(例如，碘乙酰胺或溴乙酰胺)、氯乙酰、溴乙酰、酰肼、马来酰亚胺、乙烯基砜、2-磺酰基吡啶、氰基-炔烃、硫醇(例如，半胱氨酸残基)、二硫化物或受保护的硫醇、异氰酸酯、异硫氰酸酯、醛、酮、烷氧基胺、酰肼、氨氧基、膦、HIPS肼基-吲哚基或氮杂-HIPS肼基-吡咯并吡啶基、四嗪、环辛烯、方酸等。
在一些情况下，当两个基团在合适的条件(例如，无铜点击化学条件)下接触时，化学选择性连结基团能够自发缀合至相容的化学基团。在一些情况下，当两个基团在催化剂或其他试剂(例如，铜催化的点击化学条件)的存在下接触时，化学选择性连结基团能够与相容的化学基团缀合。
在一些实施方案中，化学选择性连结基团是光活性连结基团。例如，在用紫外线照射时，二氮丙啶基团可以形成反应性卡宾，其可以插入第二部分的C-H、N-H和O-H键中。
在一些情况下，Y是能够与第二部分的相容基团缀合的反应性功能团或官能基团的前体。例如，羧酸是活性酯化学选择性连结基团的前体。
在式(I)的某些实施方案中，Y是能够形成连向多肽的共价键(例如，与具有相容反应性基团的多肽的氨基酸侧链)的反应性部分。反应性部分可以称为化学选择性连结基团。
在式(I)的某些实施方案中，Y是硫代反应性化学选择性连结基团(例如，如表11中所述)。在一些情况下，Y可以产生由硫醇反应性化学选择性连结基团与蛋白质(例如，Ab)的一个或多个半胱氨酸残基的共价键联产生的残基部分Z。
在式(I)的某些实施方案中，Y是氨基反应性化学选择性连结基团(例如，如表11中所述)。在一些情况下，Y可以产生由胺反应性化学选择性连结基团与蛋白质(例如，Ab)的一个或多个赖氨酸残基的共价键联产生的残基部分Z。
可适用于本公开的化合物的示例性化学选择性连结基团及其合成前体示于表11中。
在表11中，可以代表Y与连接部分或连接的X部分的附接点。
5.3.1.具有化学选择性连结基团的示例性化合物
本公开包括式(I)的化合物，该式(I)的化合物可以包含：
(1)一个或多个特定ASGPR配体(X)(例如，如本文所述，诸如表1-4的配体X1-X20)或特定ASGPR配体(X)(例如，如本文所述)，
(2)包含一个或多个连接部分(例如，如本文所述，诸如表8至表10的连接部分中的任何一个或多个连接部分)的接头；和
(3)化学选择性连结基团(Y)(例如，如本文所述，诸如表11的基团中的任何一个基团)。
表12示出了用于本公开的缀合物的多种单价配体-接头化合物。
表13示出了用于本公开的缀合物的多种多价配体-接头化合物。
表14-17示出了本公开的包含化学选择性连结基团或其前体的若干示例性ASGPR结合化合物。应当理解，本公开包括表12-18中每种示例性化合物的Y(例如，如本文所述)缀合物。例如，其中化学选择性连结基团已与不同的Y(诸如用于靶蛋白质的生物分子或小分子配体)缀合的缀合物。
此类化合物的化学选择性连结基团可以被用于连接至另一个感兴趣的Y部分(例如，如下所述)。应当理解，这些化合物中的任何化合物也可被从头制备成包含替代的感兴趣的Y部分(例如，如下所述)而不是化学选择性连结基团。在一些实施方案中，此类化合物是指缀合物，例如，特异性地结合靶蛋白质的生物分子缀合物。
本公开意在涵盖本文所述的化合物中的任何一种化合物的立体异构体。在一些情况下，该化合物包括D-N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)的对映异构体，或GalNAc的类似物或衍生物。
5.3.2.其他示例性化合物
表18示出了本公开的包含结合部分或其前体的示例性ASGPR结合化合物。
表19示出了本公开的包含式(Ie)的X基团的示例性三价ASGPR结合中间化合物。
表20示出了本公开的包含引入部分和具有式(Ib)的X基团的示例性单价ASGPR结合中间化合物。
表21示出了本公开的包含具有式(In)的X基团的示例性ASGPR结合中间化合物。
5.4.具有感兴趣的部分的缀合物
本公开的化合物例如在感兴趣的部分(Y)是分子(例如，如本文所述)时可以被称为缀合物。此类缀合物可以通过将本文所述的化合物中的任一种化合物的化学选择性连结基团与分子Y的相容反应性基团缀合来制备。分子Y的相容基团可通过缀合之前的修饰来引入，或者可以是该分子中存在的基团。替代地，此类缀合物可例如通过修饰感兴趣的Y分子起始材料以引入例如配体X可以附接至其上的接头来从头制备。
在一些实施方案中，ASGPR结合部分所连接至的感兴趣的部分是生物分子。在一些实施方案中，该感兴趣的部分是生物分子。在一些实施方案中，该生物分子选自肽、蛋白质、多核苷酸、多糖、聚糖、糖蛋白质、脂质、酶、抗体和抗体片段。在一些实施方案中，感兴趣的部分Y选自小分子、小分子药物、化疗剂、细胞毒性剂、诊断剂、染料、荧光团等。
在优选的实施方案中，感兴趣的部分是特异性地结合到感兴趣靶标(即，靶结合部分)的分子。在此类情况下，本公开的缀合物可提供靶标在其非共价地结合到缀合物后的细胞摄取，和/或降解。本发明人已经证明，其中ASGPR结合部分呈现出带有期望价态和长度的接头的具有期望亲和力的特定构型的本公开的缀合物可以同时以高亲和力特异性地结合到ASGPR和靶标。因此，本公开的缀合物可以提供靶蛋白质在细胞溶酶体中的隔离以及该靶蛋白质的降解。
在一些实施方案中，感兴趣的部分是不结合到细胞外靶标的分子，而是本身希望在细胞内递送的分子。在一些实施方案中，感兴趣的部分选自酶(例如，溶酶体酶)、纳米颗粒、病毒组合物(例如，病毒颗粒)、治疗性蛋白质、治疗性抗体和细胞毒性剂。
在一些实施方案中，感兴趣的部分是用于递送到细胞以用于酶替换疗法的溶酶体酶，诸如酸性α-葡糖苷酶(GAA)。可以适合用于本公开的缀合物的感兴趣的溶酶体酶包括但不限于酸性α-葡糖苷酶、酸性β-半乳糖苷酶-1、酸性鞘磷脂酶、α-D-甘露糖苷酶、α-岩藻糖苷酶、α-半乳糖苷酶A、α-氨基葡糖苷乙酰转移酶、α-葡糖苷酶、α-L-艾杜糖醛酸酶、α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶、α-乙酰氨基葡糖苷酶、α-D-神经氨酸苷酶、芳基硫酸酯酶A、芳基硫酸酯酶B、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶、β-甘露糖苷酶、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、神经酰胺酶、胱氨酸转运蛋白(cystinosine)、神经节苷脂活化剂GM2、半乳糖脑苷脂酶、葡糖脑苷脂酶、肝素硫酸酯酶、氨基己糖苷酶A、氨基己糖苷酶B、透明质酸酶、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶、LAMP2、溶酶体酸性脂酶、N-乙酰葡糖胺-1-磷酸转移酶、N-乙酰半乳糖胺6-硫酸酯酶、N-乙酰葡糖胺-1-磷酸转移酶、N-乙酰葡糖胺-6-硫酸酯酶、N-天冬氨酰-β-氨基葡糖苷酶、棕榈酰-硫代酯酶-1、酸性磷酸酶、受保护的蛋白质/组织蛋白酶A(PPCA)、唾液酸转运蛋白(sialin)、三肽基肽酶1。
本公开的方面包括式(I)的化合物，其中感兴趣的部分Y选自小分子、染料、荧光团、单糖、二糖、三糖和生物分子。在一些实施方案中，Y是特异性地结合到靶分子诸如靶蛋白质的小分子。
在本公开的化合物的一些实施方案中，Y是生物分子。在一些实施方案中，该生物分子选自蛋白质、多核苷酸、多糖、肽、糖蛋白质、脂质、酶、抗体和抗体片段。在一些实施方案中，Y是特异性地结合到靶分子诸如靶蛋白质的的生物分子。
本公开的化合物在一些情况下例如在感兴趣的部分(Y)是分子诸如生物分子时可以被称为缀合物，其中该缀合物可以源自化学选择性连结基团和该生物分子上的相容基团之间的缀合或偶联反应。在一些实施方案中，该生物分子经由生物分子的天然存在的基团缀合。在一些实施方案中，该生物分子经由在化学选择性缀合之前引入到生物分子中的相容官能团缀合。在此类情况下，介于X和Y之间的连接部分并入了残基基团(例如，Z)，该残基基团为化学选择性连结化学的产物。
本公开的方面包括式(I)的化合物，其中感兴趣的部分Y是特异性地结合到靶分子诸如靶蛋白质的部分。靶蛋白质可以是作为膜结合蛋白质或细胞外蛋白质的靶蛋白质。在本公开的化合物的一些实施方案中，Y是特异性地结合到靶蛋白质的生物分子。本公开提供了特定ASGPR结合化合物和缀合物的缀合物。在一些实施方案中，该缀合物包含特异性地结合靶蛋白质的感兴趣的部分Y，并且可用于靶蛋白质的经由与细胞表面受体结合的细胞摄取或内化，以及靶蛋白质的最终降解的方法中。
在一些实施方案中，Y是特异性地结合到靶分子诸如靶蛋白质的适体。在一些实施方案中，Y是特异性地结合到靶分子(诸如靶蛋白质)的肽或蛋白质(例如，肽结合基序、蛋白质结构域、经工程化的多肽或糖蛋白质)。在一些实施方案中，Y是特异性地结合到靶分子(诸如靶蛋白质)的抗体或抗体片段。在一些实施方案中，Y是特异性地结合到靶分子(诸如靶蛋白质或靶核酸)的多核苷酸或寡核苷酸。
在一些实施方案中，一个Y生物分子经由接头L缀合至特异性地结合到细胞表面受体(例如，ASGPR)的单一部分(X)。在一些实施方案中，一个Y生物分子缀合至一个(Xn-L)-基团，其中当n＝1时，(Xn-L)-基团称为单价，并且当n>1时，(Xn-L)-基团称为多价(例如，二价、三价等)。应当理解，在式(I)的一些实施方案中，其中Y是生物分子，Y可以缀合至两个或更多个(Xn-L)-基团，其中每个(Xn-L)-基团自身可以是单价或多价(例如，二价、三价等)。在此类情况下，连接的(Xn-L)-基团与生物分子的比率可以是2或更大。
在一些实施方案中，Y是特异性地结合靶蛋白质的抗体或抗体片段，并且该化合物是(III)的缀合物：
其中：
n是1至20；
m是1至80的平均负载；
每个X是结合到细胞表面ASGPR的部分；
每个L是接头；
每个Z是由化学选择性连结基团与Ab的相容基团的共价键联产生的残基部分；并且
Ab是特异性地结合靶蛋白质的抗体或抗体片段。
在式(III)的某些实施方案中，每个X独立地具有式(Ib)(例如，如本文所述)。在某些情况下，每个X独立地选自表1的化合物。在某些情况下，每个X独立地选自以下化合物之一：
在式(III)的某些实施方案中，每个X独立地选自以下化合物之一：
其中R5和R4独立地是H或引入部分，或者R5和R4被环状连接从而形成引入部分；n1和n2各自独立地是从1至6的整数；并且Y4是合适的反离子。在一些实施方案中，Y4是钠。
在式(III)的某些实施方案中，n是1且X是：
在式(III)的某些其他实施方案中，每个X独立地具有式(Ic)(例如，如本文所述)。在某些情况下，每个X独立地选自表2的化合物。
在式(III)的某些其他实施方案中，每个X独立地具有式(Id)(例如，如本文所述)。在某些情况下，每个X独立地选自表3的化合物。在某些情况下，每个X独立地选自表4的化合物。
在式(III)的某些实施方案中，每个X独立地选自以下化合物之一：
在式(III)的缀合物的某些实施方案中，L是式(III)的接头(例如，如本文所述)。
在式(III)的缀合物的某些实施方案中，n是1至6。在某些情况下，n是1，使得该抗体缀合至单价ASGPR配体，并且接头具有式(IIa)(例如，如本文所述)。在某些情况下，n至少为2，使得该抗体缀合至多价ASGPR配体。在某些情况下，n是2。在某些情况下，n是3。
在式(III)的缀合物的某些实施方案中，Z是由表8的化学选择性连结部分的共价键联产生的残基部分。
在式(III)的缀合物的某些实施方案中，Z是由硫醇反应性化学选择性连结基团与Ab的一个或多个半胱氨酸残基的共价键联产生的残基部分。
在式(III)的缀合物的某些其他实施方案中，Z是由胺反应性化学选择性连结基团与Ab的一个或多个赖氨酸残基的共价键联产生的残基部分。
在某些实施方案中，具有本文所述的缀合物的接头结构的缀合物具有与细胞表面受体的较弱结合亲和力。不受任何特定机制或理论的限制，此类较弱的结合亲和力可能与缀合物的较长半衰期相关，并且可以用于调整(例如，改良)本文所述的缀合物的药代动力学特性。在某些实施方案中，此类较弱的结合缀合物仍具有足够稳健的摄取。
多肽的缀合物，例如，抗体(Ab)和化合物(Xn-L-Y)，可使用多种双官能蛋白质偶联剂诸如BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB和SVSB(琥珀酰亚胺基-(4-乙烯砜)苯甲酸酯)来制备。本公开进一步考虑了本文所述的缀合物可使用如本领域中公开的任何合适的方法(参见，例如，Bioconjugate Techniques(Hermanson编著，第2版，2008))来制备。
在本文所述的缀合物的某些实施方案中，L通过酰胺键与多肽的赖氨酸残基键合。在本文所述的缀合物的某些实施方案中，L通过硫醚键与多肽的半胱氨酸残基键合。在本文所述的缀合物的某些实施方案中，L通过酰胺键与Ab的赖氨酸残基键合。在本文所述的缀合物的某些实施方案中，L通过硫醚键与Ab的半胱氨酸残基键合。在本文所述的缀合物的某些实施方案中，L通过两个硫醚键与Ab的两个半胱氨酸残基键合，其中该两个半胱氨酸残基来自Ab中打开的半胱氨酸-半胱氨酸二硫键。在某些实施方案中，打开的半胱氨酸-半胱氨酸二硫键是链间二硫键。
在本文所述的缀合物的某些实施方案中，当L通过酰胺键与多肽(例如，抗体)的赖氨酸残基键合时，m是从1至80的整数。在本文所述的缀合物的某些实施方案中，当L通过硫醚键与P的半胱氨酸残基键合时，m是从1至8的整数。
在某些实施方案中，与多肽或抗体Ab的缀合可经由位点特异性缀合进行。例如，位点特异性缀合可以导致均匀负载和最小化缀合物亚群，其中可能改变抗原结合或药代动力学。在某些实施方案中，例如，缀合可以包括在多肽或抗体上的位置处工程化半胱氨酸取代，例如在抗体的重链和/或轻链上，这提供反应性硫醇基团并且不破坏多肽或抗体折叠和组装或改变多肽或抗原结合(参见例如Junutula等人，J.Immunol.Meth.2008；332:41-52；和Junutula等人，Nature Biotechnol.2008；26:925-32；也可参见WO2006/034488(通过引用方式以其整体并入本文))。在另一种非限制性方法中，通过将终止密码子UGA从终止重新编码到硒代半胱氨酸插入，将硒代半胱氨酸共翻译地插入多肽或抗体序列中，从而允许在存在其他天然氨基酸的情况下在硒代半胱氨酸的亲核硒醇基团处进行位点特异性共价缀合(参见，例如，Hofer等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2008；105:12451-56；和Hofer等人，Biochemistry 2009；48(50):12047-57)。允许与多肽或抗体进行位点特异性缀合的其他非限制性技术包括在特定键联位点处工程化非天然氨基酸，包括例如对乙酰基苯丙氨酸(对乙酰基-Phe)、对叠氮甲基-N-苯丙氨酸(对叠氮基甲基-Phe)和叠氮赖氨酸(叠氮-Lys)，并且可以进一步包括工程化独特的功能标签，包括例如LPXTG、LLQGA、唾液酸和GlcNac，用于酶介导的缀合。参见Jackson,Org.Process Res.Dev.2016；20:852-866；以及Tsuchikama和An，Protein Cell 2018；9(1)：33-46，其中每一个的内容以引用方式以其整体并入。还可参见US2019/0060481 A1&US2016/0060354 A1，其每一个的内容通过引用以其整体并入本文。所有此类方法均被考虑用于与制备本文所述的缀合物结合使用。
式(I)的化合物向本文所述的多肽(例如，抗体)的负载由式(III)中的“m”表示，并且是每个缀合物分子中“Xn-L-”或“Xn-”的平均单元数。如本文所用，术语“DAR”是指“m”的平均值或缀合物的负载。每个“Xn-L-”或“Xn-”单元的“X”部分(例如，叶酸酯/盐部分)的数目由式(III)中的“n”表示。如本文所用，术语“价态(valency)”或“价态(valencies)”是指每单元的“X”部分的数目(“n”)。应当理解，负载或DAR不一定等于每个缀合物分子的“X”部分的数目。例如，如果每个单元有一个“X”部分(n＝1；价态为“1”)，并且每个缀合物有一个“Xn-L-”单元(m＝1)，则每个缀合物将有1x 1＝1个“X”部分。然而，如果每个单元有两个“X”部分(n＝2；价态为“2”)，并且每个缀合物有四个“Xn-L-”单元(m＝4)，则每个缀合物将有2x4＝8个“X”部分。因此，对于本文所述的缀合物，每个缀合物分子的“X”部分的总数将为n xm。如本文所用，术语“总价态(total valency)”或“总价态(total valencies)”是指每个缀合物分子的“X”部分的总数目(n x m；总价态)。
DAR(负载)范围为每个缀合物1至80个单元。本文提供的缀合物可以包括与单元范围例如1至80缀合的多肽、抗体或抗原结合片段的集合。来自缀合反应的缀合物制剂中每个多肽或抗体的平均单元数可以通过常规手段诸如质谱来表征。也可以确定关于m的DAR(负载)的定量分布。在一些情况下，可以通过诸如电泳的手段实现对其中m是某值的均质缀合物的分离、纯化和表征。
在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至80。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至70。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至60。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至50。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至40。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至35。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至30。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至25。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至20。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至18。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至15。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至12。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至10。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至9。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至8。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至7。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至6。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至5。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至4。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至3。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至12。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至10。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至9。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至8。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至7。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至6。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至5。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从2至4。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至12。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至10。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至9。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至8。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至7。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至6。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至5。在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从3至4。
在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR范围为从1至约8；从约2到约6；从约3至约5；从约3到约4；从约3.1至约3.9；从约3.2至约3.8；从约3.2至约3.7；从约3.2至约3.6；从约3.3至约3.8；或从约3.3至约3.7。
在某些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12或更多。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约3.1、约3.2、约3.3、约3.4、约3.5、约3.6、约3.7、约3.8或约3.9。
在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为从2至20、2至19、2至18、2至17、2至16、2至15、2至14或2至13。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为从3至20、3至19、3至18、3至17、3至16、3至15、3至14或3至13。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约1。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约2。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约3。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约4。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约3.8。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约5。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约6。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约7。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约8。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约9。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约10。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约11。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约12。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约13。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约14。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约15。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约16。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约17。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约18。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约19。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约20。
在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约25。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约30。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约35。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约40。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约50。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约60。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约70。在一些实施方案中，本文提供的缀合物的DAR为约80。
在某些实施方案中，在缀合反应期间，少于理论最大值的单元与多肽例如抗体缀合。多肽可以包含例如不与化合物或接头试剂反应的赖氨酸残基。一般地，例如，抗体不包含许多可与药物单元连接的游离和反应性半胱氨酸硫醇基团；事实上，抗体中的大多数半胱氨酸硫醇残基以二硫桥键的形式存在。在某些实施方案中，可以在部分或全部还原条件下用还原剂诸如二硫苏糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)还原抗体，以产生反应性半胱氨酸硫醇基团。在某些实施方案中，抗体经受变性条件以显示反应性亲核基团，诸如赖氨酸或半胱氨酸。在一些实施方案中，化合物经由抗体上的赖氨酸残基缀合。在一些实施方案中，接头单元或药物单元经由抗体上的半胱氨酸残基缀合。
在某些实施方案中，与单元连接的氨基酸在抗体的重链中。在某些实施方案中，与单元连接的氨基酸在抗体的轻链中。在某些实施方案中，与单元连接的氨基酸位于抗体的铰链区中。在某些实施方案中，与单元连接的氨基酸位于抗体的Fc链区中。在某些实施方案中，与单位连接的氨基酸位于抗体的恒定区(例如，重链的CH1、CH2或CH3，或轻链的CH1)中。在又其他实施方案中，与单元或药物单元连接的氨基酸在抗体的VH框架区中。在又其他实施方案中，与单元连接的氨基酸在抗体的VL框架区中。
缀合物的DAR(负载)可以不同方式控制，例如，通过：(i)限制化合物或缀合试剂相对于多肽的摩尔过量，(ii)限制缀合反应时间或温度，(iii)部分或限制半胱氨酸硫醇修饰的还原条件，(iv)通过重组技术改造多肽的氨基酸序列，从而修饰半胱氨酸残基的数目和位置以控制接头-药物连接的数目和/或位置(例如对于如WO2006/034488(通过引用方式以其整体并入本文)中公开制备的硫代单抗)。
应当理解，本文所述的缀合物的制备可以产生缀合物的混合物，其具有与多肽(例如抗体)连接的一个或多个单元的分布。可以通过质谱鉴定混合物中的单个缀合物分子并且可通过HPLC，例如疏水相互作用色谱(包括本领域已知的此类方法)对该单个缀合物分子进行分离。在某些实施方案中，可以通过电泳或色谱法从缀合混合物中分离具有单一DAR(负载)值的均质缀合物。
在式(III)的缀合物的某些实施方案中，m是1至20，诸如2至10、2至8、或2至6。在某些情况下，m是10或更小。在某些情况下，m是2至8。在某些情况下，m是2至6。在某些情况下，m是约4的平均负载。
应当理解，本文所述的缀合物的制备可以产生缀合物的混合物，其具有与多肽(例如抗体)附接的一个或多个单元的分布。可以通过质谱法鉴定混合物中的单个缀合物分子并且可通过HPLC，例如疏水相互作用色谱(包括本领域已知的此类方法)对该单个缀合物分子进行分离。在某些实施方案中，可以通过电泳或色谱法从缀合混合物中分离具有单一DAR(负载)值的均质缀合物。
5.4.1.靶结合部分
靶结合部分可以是例如如在体外结合测定中所测量对靶标的亲和力小于1μm(诸如300nM或更低、100nM或更低、30nM或更低、10nM或更低、3nM或更低、或1nM或更低)的任何部分。
在一些实施方案中，靶结合部分是生物分子。在一些实施方案中，靶结合部分是特异性地结合到靶蛋白质的生物分子。在一些实施方案中，该生物分子选自肽、蛋白质、多核苷酸、多糖、聚糖、糖蛋白质、脂质、酶、抗体和抗体片段。
在一些实施方案中，靶结合部分是特异性地结合到靶分子(诸如靶蛋白质)的多肽(例如，肽或蛋白质结合基序、蛋白质结构域、经工程化的多肽或糖蛋白质)。在一些实施方案中，双官能化合物的靶结合部分包含结合到感兴趣的可溶性(例如，分泌的)靶蛋白质的多肽。在一些实施方案中，靶结合是结合靶细胞表面受体的包括受体配体或受体配体的受体结合部分或片段在内的多肽配体。靶结合多肽可含有L-氨基酸、D-氨基酸或两者，并且可含有多种天然存在的氨基酸、非天然存在的氨基酸和/或本领域已知的氨基酸修饰或类似物中的任一种。有用的修饰包括例如N-末端乙酰化、酰胺化、甲基化等。
在一些实施方案中，靶结合部分是特异性地结合到靶分子(诸如靶蛋白质或靶核酸)的多核苷酸。术语多核苷酸和核酸可以互换使用。在一些实施方案中，靶结合部分是特异性地结合到靶分子(诸如靶蛋白质)的核酸适体。
在一些实施方案中，靶结合部分是聚糖。在一些实施方案中，靶结合部分是自抗体的聚糖表位。
5.4.1.1抗体
在一些实施方案中，靶结合部分是特异性地结合到靶部分(诸如靶蛋白质)的抗体或抗体片段。
ASGPR结合部分可以经由任选的连接部分位点特异性地共价连接至抗体或抗体片段。ASGPR结合部分可以经由抗体或抗体片段(例如，L443C)上的位点特异性半胱氨酸修饰、和硫醇反应性化学选择性连结基团共价连接至抗体或抗体片段。ASGPR结合部分可以经由抗体或抗体片段的一个或多个赖氨酸残基、和胺反应性化学选择性连结基团共价连接至抗体或抗体片段。
在一些实施方案中，本公开的双官能缀合物包含抗体(Ab)。在一些实施方案中，Ab是单克隆抗体。在一些实施方案中，Ab是人抗体。在一些实施方案中，Ab是人源化抗体。在一些实施方案中，Ab是嵌合抗体。在一些实施方案中，Ab是包含两个重链和两个轻链的全长抗体。在一些实施方案中，Ab是IgG抗体，例如是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。在一些实施方案中，Ab是单链抗体。在一些实施方案中，靶结合部分是抗体的抗原结合片段，例如，Fab片段。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到癌抗原。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到干细胞抗原。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到巨噬细胞上呈递的抗原。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到完整补体或其片段。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到完整补体或其片段内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到细胞表面受体。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到细胞表面受体配体。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到表皮生长因子(EGF)蛋白质，例如人EGF。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到EGF蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到表皮生长因子(EGFR)蛋白质，例如人EGFR。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到EGFR蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体或抗体片段包含存在于西妥昔单抗中的CDR。在一些实施方案中，抗体或抗体片段包含存在于西妥昔单抗中的可变轻链和可变重链。在一些实施方案中，抗体是西妥昔单抗。在一些实施方案中，抗体或抗体片段包含存在于马妥珠单抗中的CDR。在一些实施方案中，抗体或抗体片段包含存在于马妥珠单抗中的可变轻链和可变重链。在一些实施方案中，抗体是马妥珠单抗。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到血管内皮生长因子(VEGF)蛋白质，例如人VEGF蛋白质。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到VEGF蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到血管内皮生长因子(VEGFR)蛋白质，例如人VEGFR蛋白质。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)蛋白质，例如人VEGFR2蛋白质。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)蛋白质，例如人VEGFR3蛋白质。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到VEGFR蛋白质、VEGFR2蛋白质或VEGFR3蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到成纤维细胞生长因子(FGF)，例如人FGF。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到FGF蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到成纤维细胞生长因子(FGFR)，例如人FGFR。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)蛋白质，例如人FGFR2蛋白质，例如FGFR2b蛋白质。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合血管内皮生长因子受体3(FGFR3)蛋白质，例如人FGFR3蛋白质。在一些实施方案中，抗体或抗体片段特异性地结合到FGFR蛋白质、FGFR2蛋白质或FGFR3蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合到受体酪氨酸激酶cMET蛋白质。在一些实施方案中，抗体特异性地结合到受体酪氨酸激酶cMET蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合到CD47蛋白质，例如人CD47蛋白质。在一些实施方案中，抗体特异性地结合到CD47蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合到免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，抗体结合到免疫检查点抑制剂内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体特异性地结合到程序性死亡蛋白质，例如人PD-1。在一些实施方案中，抗体特异性地结合到PD-1蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合到程序性死亡配体-1(PD-L1)蛋白质，例如人PD-L1。在一些实施方案中，抗体特异性地结合到PD-L1蛋白质内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体结合到TIM3。在一些实施方案中，抗体结合到TIM3内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合到卵磷脂。在一些实施方案中，抗体特异性地结合到卵磷脂内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体结合到SIGLEC。在一些实施方案中，抗体结合到SIGLEC内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体结合到细胞因子受体。在一些实施方案中，抗体结合到细胞因子受体内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体结合到sIL6R。在一些实施方案中，抗体结合到sIL6R内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体结合到细胞因子。在一些实施方案中，抗体结合到细胞因子内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体结合到MCP-1、TNF(例如，TNF-α)、IL1a、IL1b、IL4、IL5、IL6、IL12/IL23、IL13、IL17或p40。在一些实施方案中，抗体结合到MCP-1、TNF(例如，TNF-α)、IL1a、IL1b、IL4、IL5、IL6、IL12/IL23、IL13、IL17或p40内的一个或多个免疫优势表位。
在一些实施方案中，抗体结合到主要组织相容性蛋白质(例如，MHC I类或II类分子)。在一些实施方案中，抗体结合到主要组织相容性蛋白质(例如，MHC I类或II类分子)内的一个或多个免疫优势表位。在一些实施方案中，抗体结合到β2微球蛋白。在一些实施方案中，抗体结合到β2微球蛋白内的一个或多个免疫优势表位。
5.4.1.2经修饰的病毒组合物
在具体的实施方案中，Y是病毒颗粒、病毒衣壳、病毒包膜或病毒蛋白质。在一些实施方案中，病毒组合物是包含转基因的病毒颗粒。在一些实施方案中，病毒蛋白质是病毒衣壳蛋白质或病毒包膜蛋白质。
在某些方面，本文提供了包括病毒组合物的经修饰的病毒组合物，例如附接到(例如，直接或例如经由插入接头序列间接缀合到)结合到细胞表面受体的ASGPR结合部分的病毒颗粒、病毒衣壳或病毒蛋白质(例如，病毒衣壳蛋白质或包膜蛋白质)。在某些实施方案中，经修饰的病毒组合物包括包含多核苷酸的病毒颗粒，该多核苷酸任选地包含转基因，例如可用于治疗性应用的转基因。
本文提出的经修饰的病毒组合物，例如病毒缀合物，可包括本文所述的任何病毒组合物，例如任何病毒颗粒、衣壳或病毒蛋白质，例如衣壳蛋白质或包膜蛋白质，或其片段，如本文所述。
在某些方面，本文所述的病毒组合物可包括病毒颗粒。术语“病毒颗粒(virusparticle)”、“病毒颗粒(viral particle)”、“病毒载体(virus vector)”或“病毒载体(viral vector)”在本文中可互换使用。“病毒颗粒”是指病毒衣壳和多核苷酸(DNA或RNA)，其可以包含病毒基因组、病毒基因组的一部分，或衍生自病毒基因组的多核苷酸(例如，一个或多个ITR)，该多核苷酸任选地包含转基因。在某些情况下，病毒颗粒进一步包含包围衣壳或部分包围衣壳的包膜(其通常包含脂质部分和包膜蛋白质)。
病毒颗粒可以称为“重组病毒颗粒(recombinant viral particler)”或“重组病毒颗粒(recombinant virus particle)”，如本文使用的这些术语是指已经例如通过内源性病毒基因的缺失或其他突变和/或异源性核酸构建体向病毒颗粒的多核苷酸中的添加或插入进行遗传改变的病毒颗粒。因此，重组病毒颗粒通常是指包含其中包装有多核苷酸序列的衣壳外衣(capsid coat)或外壳(和任选的外包膜)的病毒颗粒，该多核苷酸序列包括病毒起源的序列和非病毒起源的序列(即，对于病毒来说是异源的多核苷酸)。此多核苷酸序列通常是细胞遗传改变感兴趣的序列。
在某些方面，本文所述的病毒组合物可包含“病毒衣壳”、“空病毒颗粒(emptyviral particle)”、“空病毒颗粒(empty virus particle)”或“衣壳”或“空颗粒”，当在本文中在病毒的上下文中被提及时，如本文所用的这些术语是指包含任选地被外包膜包围或部分包围的病毒衣壳蛋白质的三维外壳或外衣。在特定实施方案中，病毒组合物是病毒颗粒或其片段、病毒衣壳或其片段、病毒蛋白质，例如，病毒衣壳蛋白质或其片段或包膜蛋白质或其片段。
在一些实施方案中，本文提供的经修饰的病毒组合物中使用的病毒是腺病毒(AV)；腺相关病毒(AAV)；逆转录病毒(例如，慢病毒(LV)、弹状病毒、鼠白血病病毒)；单纯疱疹病毒、冠状病毒、呼肠孤病毒等。在一些实施方案中，本公开中使用的病毒载体、病毒颗粒或病毒蛋白质衍生自无包膜病毒，例如，腺相关病毒(AAV)。
在一些实施方案中，慢病毒载体可用于CAR-T基因递送、疫苗或研究工具，例如，以将基因引入到成熟T细胞中以通过递送嵌合抗原受体(CAR)或经克隆的T细胞受体来产生针对癌症的免疫力。
天然存在的AAV形成病毒颗粒，其包含由衣壳蛋白质(VP1、VP2和VP3)构成的三维衣壳外衣或外壳(“衣壳”)以及包含在衣壳内的AAV病毒基因组。
本文提出的经修饰的AAV组合物，例如AAV缀合物或融合体，可包括本文所述的任何AAV组合物，例如任何AAV颗粒、衣壳或衣壳蛋白质，或其片段，如本文所述。术语“AAV衣壳蛋白质”或“AAV cap蛋白质”是指由AAV衣壳(cap)基因(例如，VP1、VP2和VP3)或其变体或片段编码的蛋白质。该术语包括由AAV(例如，重组AAV，诸如嵌合AAV)表达或从该AAV衍生的衣壳蛋白质。例如，术语包括但不限于衍生自诸如以下的任何AAV血清型的衣壳蛋白质：AAV1、AAV2、AAV2i8、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV rh10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV-DJ、AAV3b、AAV LK03、AAV rh74、AAV Anc81、Anc82、Anc83、Anc84、Anc110、Anc113、Anc126或Anc127、AAV_go.1、AAV hu.37或AAVrh.8或其变体。
5.4.1.3结合病毒组合物的桥接部分
在一些实施方案中，Y是特异性地结合到病毒组合物，例如病毒颗粒、病毒衣壳、病毒包膜或病毒蛋白质(例如，病毒衣壳蛋白质或包膜蛋白质)的桥接部分，其中该结合不是经由共价键联进行。
结合病毒颗粒、病毒衣壳、病毒包膜或病毒蛋白质(例如，病毒衣壳蛋白质或包膜蛋白质)的任何合适部分可以适合用于本公开的缀合物中。
在某些实施方案中，桥接部分是特异性地结合病毒组合物的多肽。在一些实施方案中，桥接部分是结合到病毒组合物(例如，病毒颗粒、病毒衣壳、病毒包膜或病毒蛋白质，例如病毒衣壳蛋白质或病毒包膜蛋白质)的多肽。在某些方面，当病毒蛋白质是病毒颗粒的一部分时，桥接组合物结合病毒衣壳蛋白质或病毒包膜蛋白质。
在某些实施方案中，桥接部分是特异性地结合病毒组合物的抗体或抗体片段(例如，抗体的抗原结合片段)。在某些实施方案中，结合病毒蛋白质的桥接部分还可以结合病毒颗粒，例如经由结合到并入在病毒颗粒中的病毒蛋白质来结合病毒颗粒。同样，在某些实施方案中，即使如果病毒蛋白质未并入在病毒颗粒中，结合病毒颗粒的桥接部分也可以结合该病毒蛋白质。病毒颗粒可以是AAV病毒颗粒。病毒蛋白可以是AAV衣壳蛋白质。
在一些实施方案中，本公开的桥接部分特异性地结合到AAV组合物，例如AAV颗粒、AAV衣壳或AAV病毒蛋白质(例如，AAV衣壳蛋白质，例如VP1、VP2或VP3蛋白质)。
可以与本文提供的经修饰的病毒组合物结合使用，例如与本文提出的桥接组合物和桥接部分结合使用的抗体或抗原结合片段包括但不限于单克隆抗体，由至少两种完整抗体形成的具有多表位或单表位特异性的抗体组合物、多克隆或单价抗体、多价抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体，只要它们表现出所需的生物活性即可)，单链抗体，及其片段(例如，结构域抗体)。
5.4.1.4小分子
在一些实施方案中，本公开的双官能化合物的靶结合部分是特异性地结合到靶分子诸如靶蛋白质的小分子。在一些实施方案中，双官能化合物包括靶蛋白质的小分子抑制剂或配体。小分子靶结合部分可经由接头共价连接到一个或多个ASGPR结合部分。接头可经由小分子的任何合适位点处的取代共价附接到小分子，使得与靶蛋白质的结合基本上得以保留。
在一些实施方案中，靶结合部分是靶蛋白质的小分子抑制剂或拮抗剂(例如，如本文所述)。已知结合感兴趣靶标的任何方便的小分子都可以适合用于主题化合物和缀合物。
在一些实施方案中，靶结合部分是VEGF的小分子抑制剂或拮抗剂。
在一些实施方案中，靶结合部分是PD-L1的小分子抑制剂或拮抗剂。
在一些实施方案中，靶结合部分是EGFR蛋白质、VEGFR蛋白质、FGFR2蛋白质或FGFR3蛋白质的小分子抑制剂或拮抗剂。
在一些实施方案中，靶结合部分是TNF蛋白质(例如，TNF-α)的小分子抑制剂或拮抗剂。TNF-α(TNFα)是作为免疫和炎症性过程的一部分的单核细胞和巨噬细胞产生的可溶性细胞因子，并且参与包括分化、增殖、炎症和细胞死亡在内的各种各样的细胞反应。TNFα是可以被切割并且以可溶形式被分泌的II类跨膜蛋白质。TNFα的跨膜和可溶性生物活性形式是可以通过TNF受体1和2(TNF-R1和TNF-R2)发出信号的同三聚体复合体。TNFα通过调控细胞内NF-κB、JNK和p38-MAPK信号传导通路而直接参与全身炎症。
TNFα结合部分可以是TNFα抑制剂，诸如TNF受体结合的竞争抑制剂或TNF信号传导的变构抑制剂。本公开的化合物可以包括强效的TNFα抑制剂，例如具有亚微摩尔抑制活性的抑制剂。在一些实施方案中，TNFα抑制剂是变构抑制剂。在一些实施方案中，TNFα结合部分是变构去对称TNFα抑制剂。变构去对称TNFα抑制剂是指结合到TNFα内的变构位点并将三聚体单元稳定在非对称构象的化合物，该非对称构象允许TNFα三聚体仅募集三个拷贝中的两个拷贝的TNF受体(TNFR，例如TNFR1)，导致TNFα-TNFR信号传导复合体不能发挥作用。
参见例如，Xiao等人,Journal of Medicinal Chemistry 2020 63(23),15050-15071和McMillan等人在Nature Communications(2021)12:582，其公开了与TNFα结合的示例性抑制剂的X射线共晶结构的分析。变构去对称TNFα抑制剂可以经由特定作用机制发挥作用以提供强效的抑制活性。例如，(a)TNFα抑制剂结合位点是TNFα三聚体内经由单体A的运动产生的空腔，(b)该抑制剂通过形成关键的π-π和氢键合相互作用将TNFα三聚体稳定在非活性构象，(c)变构去对称TNFα抑制剂结合到TNFα三聚体，导致一个TNFR结合位点的主要破坏和第二位点的次要破坏，而第三位点保持不变，以及(d)变构去对称TNFα抑制剂通过变构机制而不是与TNFR的直接竞争来调节TNF-R活性。因此，变构去对称TNFα抑制剂与对称性TNFα三聚体的结合可以导致不对称三聚体的形成，不对称三聚体阻止信号传导所需的三种TNF受体分子的募集。
5.4.2.靶标
如上所概述，本公开的双官能化合物可以包含特异性地结合靶分子的感兴趣的部分(Y)。靶分子可以是细胞表面分子或细胞外分子。
在本公开的化合物和方法的一些实施方案中，靶分子是细胞表面分子。“细胞表面分子”意指与细胞膜相关的靶分子，例如因为该分子具有插入到细胞膜中或者跨越细胞膜的结构域，例如细胞膜栓连的结构域或跨膜结构域。细胞表面分子可以是经由内体/溶酶体途径的靶向降解所需的任何细胞表面分子。在一些实施方案中，细胞表面分子是细胞表面受体。
感兴趣的细胞表面受体包括但不限于干细胞受体、免疫细胞受体、生长因子受体、细胞因子受体、激素受体、受体酪氨酸激酶、表皮生长因子受体(EGFR)家族中的受体(例如，HER2(人表皮生长因子受体2)等)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)家族中的受体、血管内皮生长因子受体(VEGFR)家族中的受体、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)家族中的受体、转染过程中重排(RET)的受体家族中的受体、Eph受体家族中的受体、盘状蛋白结构域受体(discoidin domain receptor,DDR)家族中的受体，和粘蛋白蛋白质(例如，MUC1)。在一些实施方案中，细胞表面分子是CD71(转铁蛋白受体)。在某些方面，细胞表面受体是选自T细胞受体、B细胞受体、自然杀伤(NK)细胞受体、巨噬细胞受体、单核细胞受体、嗜中性粒细胞受体、树突细胞受体、肥大细胞受体、嗜碱性粒细胞受体和嗜酸性粒细胞受体的免疫细胞受体。
在一些实施方案中，感兴趣的部分(Y)特异性地结合细胞表面分子，该细胞表面分子不是通过特定的分子相互作用介导其作用(并且因此不易受阻断影响)，而是通过本体生物物理或聚集效应介导其作用。此类细胞表面分子的非限制性实例是粘蛋白。粘蛋白的实例包括但不限于MUC1、MUC16、MUC2、MUC5AC、MUC4、CD43、CD45、GPIb等。
在一些实施方案中，当感兴趣的部分特异性地结合细胞表面分子时，癌细胞上存在该细胞表面分子。“癌细胞”意指表现出肿瘤细胞表型的细胞，其特征可以是例如以下中的一种或多种：例如异常细胞生长、异常细胞增殖、密度依赖性生长抑制丧失、锚定非依赖性生长潜力、在免疫功能低下的非人类动物模型中促进肿瘤生长和/或发育的能力，和/或细胞转化的任何适当指标。“癌细胞”可在本文中与“肿瘤细胞”、“恶性细胞”或“癌性细胞”互换使用，并且涵盖实体瘤、半实体瘤、血液恶性肿瘤(例如，白血病细胞、淋巴瘤细胞、骨髓瘤细胞等)、原发性肿瘤、转移性肿瘤等的癌细胞。在一些实施方案中，癌细胞上存在的细胞表面分子是肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原。在某些方面，当感兴趣的部分(Y)特异性地结合细胞表面分子时，细胞表面分子存在于免疫细胞上。在一些实施方案中，细胞表面分子存在于选自以下的免疫细胞上：T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。在某些方面，免疫细胞上存在的细胞表面分子是抑制性免疫受体。如本文所用，“抑制性免疫受体”是负向调控免疫反应的免疫细胞上存在的受体。可以根据本公开的方法抑制的抑制性免疫受体的实例包括Ig超家族的抑制性免疫受体，包括但不限于：CD200R、CD300a(IRp60；小鼠MAIR-I)、CD300f(IREM-1)、CEACAM1(CD66a)、FcyRIIb、ILT-2(LIR-1；LILRB1；CD85j)、ILT-3(LIR-5；CD85k；LILRB4)、ILT-4(LIR-2；LILRB2)、ILT-5(LIR-3；LILRB3；小鼠PIR-B)；LAIR-1、PECAM-1(CD31)、PILR-a(FDF03)、SIRL-1和SIRP-a。可以根据本公开的方法抑制的抑制性免疫受体的进一步实例包括唾液酸结合Ig样卵磷脂(Siglec)受体，例如Siglec 7、Siglec 9和/或等。可以根据本公开的方法抑制的抑制性免疫受体的另外的实例包括C型卵磷脂，包括但不限于：CLEC4A(DCIR)、Ly49Q和MICL。关于抑制性免疫受体的详细信息可在例如Steevels等人(2011)Eur.J.Immunol.41(3):575-587中找到。在一些实施方案中，免疫细胞上存在的细胞表面分子是抑制性免疫受体的配体。在某些方面，免疫细胞上存在的细胞表面分子是免疫检查点分子。感兴趣的部分(Y)可特异性地结合到的免疫检查点分子的非限制性实例包括PD-1、PD-L1、CTLA4、TIM3、LAG3、TIGIT和B7家族的成员。
在本公开的化合物和方法的一些实施方案中，靶分子是细胞外分子。“细胞外分子”意指可溶性分子附近的任何细胞的细胞膜外部的可溶性分子。细胞外分子可以是经由内体/溶酶体途径的靶向降解所需的任何细胞外分子。
在一些实施方案中，细胞外分子是可溶性靶蛋白质。在一些实施方案中，细胞外分子是疾病中蓄积的分泌的蛋白质(例如，α-突触核蛋白)、胆固醇载剂(例如，ApoB)、感染性疾病毒素(例如，AB毒素、ESAT-6)、感染性颗粒(例如，全病毒、全细菌等)、凝固因子(例如，因子IX)、结合到细胞外分子的任何FDA批准的抗体的靶标(例如，TNFα)、任何趋化因子或细胞因子(例如，脓毒症或慢性炎症的介体诸如IL-1)、蛋白质类激素(例如，胰岛素、ACTH等)、心境病症的蛋白质类介体、能量稳态的蛋白质类介体(例如，瘦素、脑肠肽等)、存在于血流中的蛋白质类过敏原或针对此类过敏原的抗体(例如，对于花生过敏)、蛋白质类毒素(例如，蛇毒透明质酸酶等)、自身抗体等。
在一些实施方案中，靶分子是细胞外分子，其为抗体，例如特异性地结合细胞表面分子或不同细胞外分子的抗体。在一些实施方案中，抗体是自身抗体。在一些实施方案中，抗体是人免疫球蛋白A(IgA)。在一些实施方案中，IgA是在粘膜的免疫功能中起到关键作用的特定抗体。在血液中，IgA与在免疫效应细胞上表达的称为CD89的Fc受体相互作用，以启动炎性反应。异常IgA表达与许多自身免疫病症和免疫介导的病症相关。在一些实施方案中，靶标是人免疫球蛋白G(IgG)。IgG的Fc区包括重链恒定区中天冬酰胺297处的保守N-糖基化位点。各种N-聚糖可连接到此位点。N-聚糖IgG组成与数种自身免疫、感染性和代谢性疾病有关。此外，IgG4的过表达与IG4相关疾病相关。在一些实施方案中，靶标是人免疫球蛋白E(IgE)。IgE是一类在I型超敏反应中发挥重要作用的免疫球蛋白，I型超敏反应可表现为各种过敏性疾病和疾患。
在一些实施方案中，细胞外分子是细胞表面受体的配体。感兴趣的细胞表面受体配体包括但不限于生长因子(例如，表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)等)、细胞因子(例如，白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子(TNF)、转化生长因子b(TGF-b)，包括此类细胞因子的任何特定亚型)、激素等。在某些方面，感兴趣的部分(Y)特异性地结合载脂蛋白E4(ApoE4)。
5.5.药物组合物
在另一个实施方案中，本文提供了包含一种或多种本文公开的缀合物和药学上可接受的载剂的药物组合物。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物在药学上可接受的载剂中含有治疗有效量的一种或多种本文提供的缀合物，以及任选的一种或多种另外的预防或治疗剂。
适用于施用本文提供的缀合物的药用载剂包括本领域技术人员已知的适用于特定施用方式的任何此类载剂。
本文所述的缀合物可配制成组合物中唯一的药物活性成分或可与其他活性成分组合。
在某些实施方案中，将缀合物配制成一种或多种合适的药物制剂，例如用于肠胃外施用的无菌溶液或悬浮液中的溶液、悬浮液、粉剂、缓释制剂或酏剂，或作为透皮贴剂制剂和干粉吸入剂。
在本文提供的组合物中，本文所述的缀合物可以与合适的药用载剂混合。组合物中缀合物的浓度可以例如在施用后有效递送治疗、预防或改善本文所述的病况或病症或其症状的量。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物被配制用于单剂量施用。为了配制组合物，将重量分数的缀合物以有效浓度溶解、悬浮、分散或以其他方式混合在选定的载剂中，从而缓解、预防所治疗的疾患或改善一种或多种症状。
本文提供的药物组合物中缀合物的浓度将取决于例如缀合物的物理化学特征、施用方案和施用量以及本领域技术人员已知的其他因素。
本文所述的药物组合物以单位剂型提供以施用给受试者，例如人或动物(例如哺乳动物)，例如含有适量化合物或其药学上可接受的衍生物的无菌肠胃外(例如静脉内)溶液或悬浮液。还提供了用于以单位剂型施用于人和动物的药物组合物，包括含有适量的缀合物或其药学上可接受的衍生物的口服或鼻用溶液或混悬剂以及油水乳剂。在某些实施方案中，缀合物以单位剂量形式或多剂量形式配制和施用。如本文所用的单位剂量形式是指适用于人或动物(例如哺乳动物)受试者并且如本领域已知的单独包装的物理上离散的单位。每个单位剂量含有预定量的足以产生期望治疗效果的缀合物，以及所需的药物载剂、赋形剂或稀释剂。单位剂量形式的实例包括安瓿和注射器以及单独包装的胶囊。单位剂量形式可以分次或多次施用。多剂量形式是包装在单个容器中的多个相同的单位剂量形式，以便以分开的单位剂量形式施用。多剂量形式的实例包括小瓶、胶囊瓶或瓶子。因此，在特定方面，多剂量形式是在包装中不分离的多个单位剂量。
在某些实施方案中，本文的缀合物在液体药物制剂中。液体药学上可施用制剂可以例如通过将缀合物和任选的药用佐剂溶解、分散或以其他方式混合在载剂例如水、盐水、含水右旋糖、甘油、乙二醇等中来制备，从而形成溶液或悬浮液。在某些实施方案中，本文提供的待施用的药物组合物还可以包含少量无毒辅助物质，例如润湿剂、乳化剂、增溶剂和pH缓冲剂等。
制备此类剂型的实际方法对于本领域技术人员而言是已知的或将是显而易见的；例如，参见，例如，Remington:The Science and Practice of Pharmacy(2012)第22版，Pharmaceutical Press,Philadelphia,PA。可以制备含有范围在0.005％至100％的抗体、余量由非毒性载剂构成的剂型或组合物。
在某些实施方案中，胃肠外施用的特征在于注射，皮下、肌内或静脉内也在本文中考虑。可将注射剂制备成常规形式，或者作为液体溶液或悬浮液、适合在注射前溶解或悬浮在液体中的固体形式，或者作为乳液。注射剂、溶液和乳液还含有一种或多种赋形剂。合适的赋形剂是例如水、盐水、右旋糖、甘油或乙醇。其他施用途径可包括肠内施用、脑内施用、鼻内施用、动脉内施用、心内施用、骨内输注、鞘内施用和腹膜内施用。
用于肠胃外施用的制剂包括准备用于注射的无菌溶液、准备在使用前与溶剂结合的无菌干燥可溶性产品，例如冻干粉剂，包括皮下注射用片剂、准备用于注射的无菌混悬剂、准备在使用前与载体结合的无菌干燥不溶性产品，和无菌乳液。溶液可以是水性的或非水性的。
如果静脉内施用，合适的载剂包括生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)，以及含有增稠剂和增溶剂例如葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇及其混合物的溶液。
用于肠胃外制剂的药学上可接受的载剂包括水性载剂、非水性载剂、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮剂和分散剂、乳化剂、隔离剂或螯合剂和其他药学上可接受的物质。
药物载剂还包括用于水溶性载剂的乙醇、聚乙二醇和丙二醇；用于调节pH的氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。
在某些实施方案中，含有本文所述的缀合物的无菌水溶液的静脉内或动脉内输注是有效的施用方式。另一个实施方案是含有本文所述的缀合物的无菌水性或油性溶液或悬浮液，其在必要时注射以产生期望的药理作用。
在某些实施方案中，药物制剂是冻干粉剂，其可以重构以作为溶液、乳液和其他混合物施用。它们也可以重构并配制成固体或凝胶。
通过将本文提供的缀合物溶解在合适的溶剂中来制备冻干粉末。在一些实施方案中，冻干粉末是无菌的。合适的溶剂可以包含改善稳定性的赋形剂或粉末或由粉末制备的重构溶液的其他药理学成分。可以使用的赋形剂包括但不限于右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他合适的试剂。合适的溶剂还可包含缓冲剂，例如柠檬酸盐、磷酸钠或磷酸钾或本领域技术人员已知的其他此类缓冲剂，在某些实施方案中，pH约为中性。随后对溶液进行无菌过滤，然后在本领域技术人员已知的标准条件下冻干提供了制剂的实例。在某些实施方案中，所得溶液将被分配到小瓶中用于冻干。冻干粉末可以在适当的条件下储存，例如在约4℃至室温。
用注射用水重构这种冻干粉末提供了用于肠胃外施用的制剂。对于重构，将冻干粉末添加到无菌水或其他合适的载剂中。
在某些实施方案中，本文提供的缀合物可配制成凝胶、乳膏和洗剂的形式用于局部施用或外部施用，例如用于皮肤和粘膜的局部施用，例如在眼睛中，以及用于施用至眼睛或脑池内或脊柱内应用。局部施用被考虑用于透皮递送，也用于向眼睛或粘膜施用，或用于吸入疗法。也可以单独施用活性化合物的鼻溶液或与其他药学上可接受的赋形剂组合。
5.6.用途和方法
一方面，本文提供了使用本文所述的缀合物从细胞表面去除感兴趣的多肽(靶蛋白质)的方法。一方面，本文提供了使用本文所述的缀合物从细胞外环境中去除感兴趣的多肽(靶蛋白质)的方法。例如，在一个实施方案中，本文提供了使用本文所述的缀合物通过将靶蛋白质隔离在细胞的溶酶体中从细胞表面去除感兴趣的多肽(靶蛋白质)的方法。在另一个实施方案中，本文提供了使用本文所述的缀合物通过将靶蛋白质隔离在细胞的溶酶体中从细胞的胞外空间(胞外环境)去除感兴趣的多肽(靶蛋白质)的方法。在另一个实施方案中，本文提供了使用本文所述的缀合物通过将靶蛋白质隔离在细胞的溶酶体中并降解靶蛋白质来从细胞表面去除感兴趣的多肽(靶蛋白质)的方法。在另一个实施方案中，本文提供了使用本文所述的缀合物通过将靶蛋白质隔离在细胞的溶酶体中并降解靶蛋白质来从细胞的细胞外空间(细胞外环境)去除感兴趣的多肽(靶蛋白质)的方法。
靶蛋白质的去除可以指靶蛋白质从细胞表面或细胞外空间或细胞外环境中的减少或消耗，即靶蛋白质在细胞表面上或细胞外环境中的量的减少或消耗。
一方面，本文提供了使用本文所述的缀合物将感兴趣的多肽(靶蛋白质)隔离在细胞的溶酶体中的方法。一方面，本文提供了使用本文所述的缀合物将感兴趣的多肽(靶蛋白质)隔离在细胞的溶酶体中并降解感兴趣的多肽的方法。
一方面，本文提供了使用本文所述的缀合物降解感兴趣多肽(靶蛋白质)的方法。
一方面，本文提供了通过经由细胞的溶酶体途径降解来消耗本文所述的感兴趣多肽(靶蛋白质)的方法。
在另一方面，本文提供了通过向有需要的受试者施用有效量的本文所述的缀合物或药学上可接受的盐或本文所述的药物组合物来消耗本文所述的感兴趣多肽(靶蛋白质)的方法。在某些实施方案中，受试者是哺乳动物(例如，人)。
在某些实施方案中，靶蛋白质是VEGF蛋白质、EGFR蛋白质、VEGFR蛋白质、PD-L1蛋白质、FGFR2蛋白质或FGFR3蛋白质。
在另一个方面，本文提供了通过向有需要的受试者例如人施用有效量的本文所述的缀合物或药学上可接受的盐或本文所述的药物组合物来治疗疾病或病症的方法。
术语“施用(administer)”、“施用(administration)”或“施用(administering)”是指将物质(例如，本文提供的缀合物或药物组合物)注射或以其他方式物理递送至受试者或患者(例如，人)的行为，诸如通过粘膜、局部、皮内、肠胃外、静脉内、肌肉内递送和/或本文所述或本领域已知的任何其他物理递送方法。在一个具体实施方案中，施用是通过静脉输注。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以治疗、诊断、预防、延迟发作、减少和/或改善给定状况、障碍或疾病和/或与其相关的症状的严重程度和/或持续时间的治疗剂(例如，本文提供的缀合物或药物组合物)的量。这些术语还涵盖减少、减缓或改善给定疾病的进展或进程，减少、减缓或改善给定疾病的复发、发展或发作，和/或改善或增强另一种疗法的预防或治疗效果或作为另一种疗法的桥梁。在一些实施方案中，如本文所用的“有效量”还指本文所述的缀合物达到特定结果的量。
在某些实施方案中，当病症或疾病是癌症时，“有效量”或“治疗有效量”是指本文提供的缀合物或药物组合物在施用至患有癌症的人时足以实现对癌症的治疗的量。癌症的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括以下一项或多项：
(1)限制/抑制癌症的生长，例如限制其发展；
(2)减少/预防癌症扩散，例如减少/预防转移；
(3)缓解癌症，例如导致癌症消退，
(4)减少/预防癌症复发；和
(5)减轻癌症的症状。
术语“受试者”和“患者”可互换使用。受试者可以是哺乳动物，例如非灵长类动物(例如，牛、猪、马、猫、狗、山羊、兔子、大鼠、小鼠等)或灵长类动物(例如，猴子和人)，例如人类。在某些实施方案中，受试者是被诊断患有本文提供的疾病或病症的哺乳动物，例如人。在另一个实施方案中，受试者是有发生本文提供的疾病或病症的风险的哺乳动物，例如人。在一个具体实施方案中，受试者是人。
术语“疗法(therapies)”和“疗法(therapy)”可指可用于预防、治疗、管理或改善疾病或病症或其症状(例如，本文提供的疾病或病症或与其相关的一种或多种症状或病况)的任何方案、方法、组合物、制剂和/或药剂。在某些实施方案中，术语“疗法(therapies)”和“疗法(therapy)”是指可用于治疗、管理、预防或改善疾病或病症或其一种或多种症状的药物疗法、辅助疗法、放射疗法、手术、生物疗法、支持疗法和/或其他疗法。在某些实施方案中，术语“疗法”是指不同于本文所述的缀合物或其药物组合物的疗法。
在某些实施方案中，通过溶酶体途径降解消耗靶蛋白质来治疗疾病或病症。
在某些实施方案中，通过消耗某些蛋白质，例如可溶性蛋白质，例如分泌蛋白质、细胞表面蛋白质(例如细胞表面受体蛋白质，例如酪氨酸激酶受体、可溶性细胞因子受体和免疫检查点受体，例如EGFR、VEGFR、FGFR和PD-L1)、凝集素、补体、脂蛋白质、转运蛋白质、MHC I类和II类分子、细胞因子、趋化因子和/或受体，或上述任何一个的片段或子单元来治疗疾病或病症。
在某些实施方案中，疾病或病症是癌症。
在某些实施方案中，癌症选自膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管癌、子宫内膜癌、肝细胞癌、肾癌、黑色素瘤、骨髓瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、尤文氏肉瘤和霍奇金淋巴瘤。
在某些实施方案中，癌症是实体瘤。
在某些实施方案中，疾病或病症是炎性或自身免疫性疾病。
在某些实施方案中，疾病或病症是炎性疾病。
在某些实施方案中，疾病或病症是自身免疫性疾病。
在某些实施方案中，疾病或病症是病毒性疾病。在某些情况下，病毒性疾病是乙型肝炎。
5.7.定义
应当理解，本公开不限于所描述的特定实施方案，因此当然可以变化。还应理解，本文所用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并且并非旨在是限制性的，因为本公开的范围将仅由所附权利要求进行限制。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域中普通技术人员通常所理解的相同的含义。与本文所述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可以用于本公开的实施方案的实践或测试。
必须指出，如本文和所附权利要求中所用，单数形式“一个/种(a)”“和”和“该/所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另有明确指示。因此，例如，对“化合物”的提及不仅包括单一化合物，而且包括两种或更多种化合物的组合，对“取代基”的提及包括单一取代基以及两种或更多种取代基等。
在描述并要求保护本发明时，某些术语将根据以下列出的定义来使用。应了解，本文提供的定义并非旨在相互排斥。因此，一些化学部分可落在多于一个术语的定义范围内。
如本文所用，短语“例如(for example)”、“例如(for instance)”、“诸如(suchas)”或“包括”意在引入进一步阐明更一般主题的实例。提供这些实例仅仅是为了帮助理解本公开，并非旨在以任何方式进行限制。
本文所论述的公布仅针对它们在本申请提交日之前的公开内容而提供。此处的任何信息都不应解释为承认本发明无权先于现有发明的此类公开。进一步地，所提供的出版物的日期可不同于可能需要被单独确认的实际出版日期。
术语“蛋白质”和“多肽”可互换使用。蛋白质可以包括除氨基酸以外的部分(例如，可以是糖蛋白质等)并且/或者可以以其他方式加工或修饰。本领域普通技术人员将理解，“蛋白质”可以是由细胞产生的完整蛋白质链(具有或不具有信号序列)，或者可以是其蛋白质部分。普通技术人员将理解蛋白质有时可以包括多于一条例如非共价或共价附接，例如通过一个或多个二硫键连接或通过其他方式缔合的蛋白质链。在某些实施方案中，多肽可以以单链或者两个或更多个相关链的形式存在，例如，可以以多聚体例如二聚体、三聚体的形式存在。该术语还涵盖已经被天然地修饰或通过干预，例如，通过二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰而修饰的氨基酸聚合物。还包括在该定义内的是例如，含有一种或多种氨基酸类似物(包括但不限于非天然氨基酸)以及本领域已知的其他修饰的多肽。多肽可以包含L-氨基酸、D-氨基酸或两者，并且可以包含本领域已知的多种氨基酸修饰或类似物中的任何一种。有用的修饰包括例如末端乙酰化、酰胺化、甲基化等。在一些实施方案中，蛋白质可以包括天然氨基酸、非天然氨基酸、合成氨基酸及其组合。在一些实施方案中，蛋白质是抗体、抗体片段、其生物活性部分和/或其特征部分。
术语“抗体”和“免疫球蛋白”是本领域术语并且在本文中可以以其最广泛的含义互换使用，并且包括包含一个或多个特异性地结合到抗原或表位的抗原结合结构域的某些类型的免疫球蛋白分子。
在某些实施方案中，特异性地结合感兴趣的蛋白质例如EGFR的本文所述的分离的抗体(例如单克隆抗体)或其抗原结合片段与一个或多个溶酶体靶向部分缀合，例如，经由接头。
“抗原”是包含抗体可以特异性地结合的表位的部分或分子。因此，抗原也与抗体特异性地结合。在一个具体的实施方案中，本文所述的抗体所结合的抗原是感兴趣的蛋白质，例如，EGFR(例如，人EGFR)，或其片段，或例如，EGFR(例如，人EGFR)的胞外结构域。
“表位”是本领域已知的术语，是指抗体可以特异性地结合的抗原的局部区域。表位可以是连续氨基酸的线性表位或可以包含来自抗原的两个或更多个非连续区域的氨基酸。
在抗体结合的上下文中，术语“结合”、“结合到”、“特异性地结合”或“特异性地结合到”是指抗体与抗原(例如，表位)的结合，因为这种结合是本领域技术人员所理解的。例如，特异性地结合到抗原的分子可以结合到其他多肽，通常以较低的亲和力，如通过例如免疫测定、BiacoreTM、KinExA 3000仪器(Sapidyne Instruments，Boise，ID)或本领域已知的其他测定所确定的。在一个具体的实施方案中，与抗原特异性地结合的分子与该抗原以比当该分子与另一种抗原结合时的Kd低(高)至少2个对数、2.5个对数、3个对数、4个对数的亲和力(Kd)结合。在另一个具体实施方案中，与抗原特异性地结合的分子不与其他蛋白质发生交叉反应。在另一个具体的实施方案中，其中EGFR是感兴趣的蛋白质，与抗原特异性地结合的分子不与其他非EGFR蛋白质发生交叉反应。
抗体具体包括但不限于全长抗体(完整的免疫球蛋白)、抗体片段、单克隆抗体、多克隆抗体、重组产生的抗体、单特异性抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、合成抗体、包含两条重链和两条轻链分子的四聚体抗体、抗体轻链单体、抗体重链单体、抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体、抗体轻链/抗体重链对、具有两个轻链/重链对(例如，相同对)的抗体、胞内抗体、异源缀合抗体、单域抗体、单价抗体、二价抗体(包括单特异性或双特异性二价抗体)、单链抗体或单链Fvs(scFv)、骆驼化抗体、affybodies、Fab片段、F(ab’)片段、F(ab’)2片段、二硫键连接的Fvs(sdFv)、抗独特型(anti-Id)抗体(包括，例如，抗-抗-Id抗体)，和上述任一种的表位结合片段。
抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY)、任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a或IgG2b)的免疫球蛋白分子。在某些实施方案中，本文所述的抗体是IgG抗体(例如，人IgG)，或其类别(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或其亚类。
在一个具体实施方案中，抗体是包含两个重(H)链/轻(L)链对的4链抗体单元，其中H链的氨基酸序列是相同的并且L链的氨基酸序列是相同的。在一个具体实施方案中，H链和L链包含恒定区，例如人恒定区。在又一个更具体的实施方案中，此类抗体的L链恒定区是κ或λ轻链恒定区，例如人κ或λ轻链恒定区。在另一个具体实施方案中，此类抗体的H链恒定区包含γ重链恒定区，例如人γ重链恒定区。在一个具体实施方案中，此类抗体包含IgG恒定区，例如人IgG恒定区。
术语“恒定区域”或“恒定域”是本领域众所周知的抗体术语(有时称为“Fc”)，并且是指抗体部分，例如轻链和/或重链的羧基末端部分，其不直接参与抗体与抗原的结合，但可以表现出各种效应子功能，例如与Fc受体的相互作用。该术语是指免疫球蛋白分子的一部分，其相对于免疫球蛋白可变结构域具有通常更保守的氨基酸序列。
当用于提及抗体时，基于恒定结构域的氨基酸序列，术语“重链”可以指任何不同的类型，例如阿尔法(α)、德尔塔(δ)、艾普西龙(ε)、伽马(γ)和缪(μ)，其分别产生IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类抗体，包括IgG的亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
当用于提及抗体时，基于恒定结构域的氨基酸序列，术语“轻链”可以指任何不同的类型，例如卡帕(κ)或拉姆达(λ)。轻链氨基酸序列是本领域众所周知的。在具体实施方案中，轻链是人轻链。
术语“单克隆抗体”是本领域众所周知的术语，是指从同源或基本同源抗体群体中获得的抗体。术语“单克隆”不限于用于制备抗体的任何特定方法。通常，单克隆抗体群体可以由细胞、细胞群体或细胞系产生。在具体实施方案中，如本文所用，“单克隆抗体”是由单细胞(例如，产生重组抗体的杂交瘤或宿主细胞)产生的抗体，其中该抗体特异性地结合表位，如通过例如ELISA或本领域或本文提供的实施例中已知的其他抗原结合或竞争性结合测定确定的。在特定实施方案中，单克隆抗体可以是嵌合抗体或人源化抗体。在某些实施方案中，单克隆抗体是单价抗体或多价(例如，二价)抗体。在特定实施方案中，单克隆抗体是单特异性或多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体的一部分，通常是轻链或重链的一部分，通常在成熟重链中氨基末端约110至120个氨基酸和成熟轻链中约90至100个氨基酸。可变区包括两侧为框架区(FR)的互补决定区(CDR)。通常，CDR和FR的空间方向如下，在N端到C端的方向：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。不希望受任何特定机制或理论的束缚，认为轻链和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用和抗体对表位的特异性。在一个具体的实施方案中，本文所述的抗体的氨基酸位置编号是根据欧盟索引，如Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department ofHealth and Human Services，NIH出版号91-3242。在某些实施方案中，可变区是人可变区。
在某些方面，抗体的CDR可以根据以下确定：(i)Kabat编号系统(Kabat等人(1971)Ann.NY Acad.Sci.190:382-391和Kabat等人(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH出版号91-3242)；或(ii)Chothia编号方案，在本文将被称为“Chothia CDRs”(参见例如Chothia和Lesk,1987,J.Mol.Biol.,196:901-917；Al-Lazikani等人,1997,J.Mol.Biol.,273:927-948；Chothia等人,1992,J.Mol.Biol.,227:799-817；Tramontano等人,1990,J.Mol.Biol.215(1):175-82；美国专利7,709,226；和Martin,A.,“Protein Sequence andStructure Analysis of Antibody Variable Domains”，Antibody Engineering,Kontermann和Dübel编辑，第31章，pp.422-439,Springer-Verlag,Berlin(2001))；或(iii)ImMunoGeneTics(IMGT)编号系统，例如描述于Lefranc,1999,The Immunologist,7:132-136和Lefranc等人,1999,Nucleic Acids Res.,27:209-212(“IMGT CDRs”)；或(iv)AbM编号系统，本文将被称为“AbM CDRs”，例如，如MacCallum等人,1996,J.Mol.Biol.,262:732-745中描述。也参见例如Martin,A.,“Protein Sequence and Structure Analysis ofAntibody Variable Domains”，Antibody Engineering,Kontermann和Dübel编辑，第31章，pp.422-439,Springer-Verlag,Berlin(2001)；或(v)Contact编号系统，本文将其称为“Contact CDRs”(Contact定义是基于对可用复杂晶体结构的分析(bioinf.org.uk/abs)(参见，例如，MacCallum等人，1996，J.Mol.Biol.,262:732-745))。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“整个抗体”在本文中可互换使用，是指基本上完整形式的抗体，而不是如下定义的抗体片段。该术语特别是指具有包含Fc区的重链的抗体。
“抗体片段”仅包含完整抗体的一部分，其中当存在于完整抗体中时，该部分保留至少一种、两种、三种和尽可能最多的或全部的通常与该部分相关的功能。一方面，抗体片段包含完整抗体的抗原结合位点，因此保留了结合抗原的能力。在另一个方面，抗体片段，例如包含Fc区的抗体片段，当存在于完整抗体中时保留至少一种通常与Fc区相关的生物学功能。这样的功能可以包括FcRn结合、抗体半衰期调节、缀合物功能和补体结合。在另一个方面，抗体片段是具有与完整抗体基本相似的体内半衰期的单价抗体。例如，这样的抗体片段可以包含与能够赋予片段体内稳定性的Fc序列连接的抗原结合臂。适合用于本公开的化合物的抗体片段包括例如Fv片段、Fab片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、scFv(sFv)片段和scFv-Fc片段。
如本文可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任何长度的核苷酸(脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸,或其类似物)的多聚形式。多核苷酸可以具有任何三维结构，并且可以执行任何已知或未知的功能。多核苷酸的非限制性实例包括基因、基因片段、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA、核糖体RNA、核酶、cDNA、重组多核苷酸、支链多核苷酸、质粒、载体、任何序列的经分离的DNA、控制区、任何序列的经分离的RNA、核酸探针和引物。核酸分子可为直链的或环状的。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基和/或它们的类似物，或者可以通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应并入到聚合物中的任何底物。多核苷酸可以包含经修饰的核苷酸，诸如甲基化的核苷酸及其类似物。核苷酸分子可以是适体。
术语“纯化(的)”是指物质(化合物、多核苷酸、蛋白质、多肽、多肽组合物)的分离，该分离使得感兴趣的物质占其所在样本的大部分。通常在样本中，基本上纯化的组分占样本的50％、80％-85％、90-99％，诸如至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％。用于纯化感兴趣的多核苷酸、多肽和病毒颗粒的技术是本领域众所周知的，并且包括例如离子交换色谱、亲和色谱和根据密度的沉降。
术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”等是指获得所需的药理和/或生理作用，诸如肿瘤负荷减少。该作用就完全或部分预防疾病或其症状而言可为预防性的并且/或者就部分或完全治愈疾病和/或可归因于疾病的副作用而言可为治疗性的。如本文所用的“治疗(Treatment)”涵盖哺乳动物特别是人类疾病的任何治疗，并且包括：(a)预防可能易患疾病但尚未被诊断患有疾病(例如，包括可能与原发性疾病相关或由原发性疾病引起的疾病(如在慢性HCV感染的上下文中可能引起的肝纤维化中))的受试者发生疾病或疾病症状发生；(b)抑制疾病，即遏制其发展；和(c)缓解疾病，即导致疾病消退(例如，肿瘤负担减少)。
术语“个体”、“宿主”、“受试者”和“患者”在本文中可互换使用，并且是指动物，包括但不限于人和非人灵长类动物，包括猿猴和人类；啮齿动物类，包括大鼠和小鼠；牛科动物；马科动物；绵羊；猫科动物；犬科动物等。“哺乳动物”意指任何哺乳动物物种的一个或多个成员，并且包括例如犬科动物；猫科动物；马科动物；牛科动物；绵羊；啮齿动物等以及灵长类动物(例如非人灵长类动物)和人。非人动物模型，例如哺乳动物，例如非人灵长类动物、鼠科动物、兔形目等可用于实验研究。
“治疗有效量”或“有效量”意指当施用给哺乳动物或其他受试者用于治疗疾病、疾患或病症时，足以实现此种针对该疾病、疾患或病症的治疗的化合物的量。“治疗有效量”将取决于化合物、疾病及其严重程度和待治疗的受试者的年龄、体重等。
除非另有特别说明，在化合物可呈现替代互变异构体、区域异构体和/或立体异构体形式的情况下，所有代替异构体旨在涵盖在要求保护的主题的范围内。例如，当化合物被描述为特定的旋光异构体D-或L-时，意在将两种旋光异构体都包括在本文中。例如，在化合物被描述为具有两种互变异构形式之一的情况下，旨在将两种互变异构体都包括在本文中。因此，本文提供的化合物可以是对映体纯的，或者是立体异构体或非对映异构体混合物。本文提供的化合物可以包含手性中心。这样的手性中心可以是(R)或(S)构型，或者可以是它们的混合物。本文提供的化合物的手性中心可在体内进行差向异构化。因此，本领域技术人员将认识到，对于在体内经历差向异构化的化合物而言，施用其(R)形式的化合物等同于施用其(S)形式的化合物。
本公开还包括根据本公开的化合物的所有合适的同位素变体，无论是否具有放射性。根据本公开的化合物的同位素变体被理解为是指这样的化合物，其中根据本公开的化合物中的至少一个原子已被交换为具有相同原子序数但具有与通常或主要存在于自然界中的原子质量不同的原子质量的另一原子。可以结合到根据本公开的化合物中的同位素的实例是氢、碳、氮、氧、氟、氯、溴和碘的同位素，例如2H(氘)、3H(氚)、13C、14C、15N、17O、18O、18F、36Cl、82Br、123I、124I、125I、129I和131I。根据本公开的化合物的特定同位素变体，尤其是其中已并入一种或多种放射性同位素的那些，可能有益于例如检查体内的作用机制或活性化合物分布。用3H、14C和/或18F同位素标记的化合物适用于此目的。此外，同位素(例如氘)的并入由于化合物的更高代谢稳定性，例如延长体内半衰期或减少所需的活性剂量，可导致特别的治疗益处。在一些实施方案中，本文所述的化合物的氢原子可以被氘原子替换。在某些实施方案中，“氘化的”如应用于化学基团并且除非另有说明，是指以显著大于其天然丰度的量在同位素方面富含氘的化学基团。根据本公开的化合物的同位素变体可以通过各种方法制备，包括例如下文和工作实施例中描述的方法，其通过使用其中的特定试剂和/或起始化合物的相应同位素修饰。
因此，本文所述的任何实施方案意在包括化合物的盐、单一立体异构体、立体异构体的混合物和/或同位素形式。
“药学上可接受的赋形剂”、“药学上可接受的稀释剂”、“药学上可接受的载剂”和“药学上可接受的佐剂”意指可用于制备药物组合物的赋形剂、稀释剂、载剂和佐剂，其通常安全、无毒且在生物学上和在其他方面不是不符合需要的，并且包括对于兽用以及人类药物使用是可接受的赋形剂、稀释剂、载剂和佐剂。如说明书和权利要求中使用的“药学上可接受的赋形剂、稀释剂、载剂和佐剂”包括一种和多于一种此类赋形剂、稀释剂、载剂和佐剂。
“药物组合物”意在涵盖适合于施用给受试者(诸如哺乳动物，尤其是人)的组合物。一般地讲，“药物组合物”是无菌的，并且优选不含能够在受试者内引起不希望的反应的污染物(例如，药物组合物中的一种或多种化合物是药用级)。药物组合物可以被设计用于经由许多不同的施用途径施用给有此需要的受试者或患者，该施用途径包括经口、经颊、直肠、胃肠外、腹膜内、真皮内、气管内、肌内和皮下等。
术语“药学上可接受的”意指被联邦或州政府的监管机构批准，或在美国药典、欧洲药典或其他公认的药典中列出用于动物，更特别是用于人类。
术语“药学上可接受的盐”是指适用于与人和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应等的那些盐。药学上可接受的盐是本领域众所周知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,66:1-19(1977)中详细描述了药学上可接受的盐。该盐可以在缀合物化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或者通过化合物的游离碱官能团或基团与合适的有机酸反应单独制备。药学上可接受的盐的实例包括但不限于无毒的酸加成盐，或与无机酸形成的氨基的盐
“酰基”是指基团H-C(O)-、烷基-C(O)-、取代的烷基-C(O)-、烯基-C(O)-、取代的烯基-C(O)-、炔基-C(O)-、取代的炔基-C(O)-、环烷基-C(O)-、取代的环烷基-C(O)-、环烯基-C(O)-、取代的环烯基-C(O)-、芳基-C(O)-、取代的芳基-C(O)-、杂芳基-C(O)-、取代的杂芳基-C(O)-、杂环基-C(O)-和取代的杂环基-C(O)-，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环的和取代的杂环如本文所定义。例如，酰基包括“乙酰基”基团CH3C(O)-
术语“烷基”是指支链的或无支链的饱和烃基基团(即,单基)，通常但不一定含有1至约24个碳原子，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、辛基、癸基等，以及环烷基，诸如环戊基、环己基等。通常，尽管不是必须的，本文中烷基基团可含有1至约18个碳原子，并且此类基团可含有1至约12个碳原子。术语“低级烷基”意指1至6个碳原子的烷基基团。“取代的烷基”是指被一个或多个取代基基团取代的烷基，并这包括其中来自烷基取代基中同一碳原子的两个氢原子被替换的情况，诸如在羰基基团(即，取代的烷基基团可包含-C(＝O)-部分)中。术语“含有杂原子的烷基”和“杂烷基”是指其中至少一个碳原子被杂原子替换的烷基取代基，如下文进一步所详述。如果未另行说明，术语“烷基”和“低级烷基”分别包括直链、支链、环状、未取代、取代和/或含杂原子的烷基或低级烷基。
术语“取代的烷基”意在包括如本文定义的烷基基团，其中烷基链中的一个或多个碳原子已任选地被杂原子诸如-O-、-N-、-S-、-S(O)n-(其中n为0至2)、-NR-(其中R是氢或烷基)替换，并且该烷基基团具有1个至5个选自由以下组成的组的取代基：烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、氨基酰基、氨基酰基氧基、氧基氨基酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代基、硫代酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳基氧基、硫代杂芳基氧基、硫代杂环氧基(thioheterocyclooxy)、硫醇、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、芳基、芳基氧基、杂芳基、杂芳基氧基、杂环基、杂环氧基、羟基氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基和-NRaRb，其中R’和R”可为相同或不同的并且选自氢、任选取代的烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、杂芳基和杂环。
术语“烯基”是含有至少一个双键的2至24个碳原子的直链、支链或环状烃基团，诸如乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、辛烯基、癸烯基、十四烯基、十六烯基、二十烯基、二十四烯基等。通常，尽管同样不是必须的，本文的烯基基团可含有2个至约18个碳原子，并且例如可含有2个至12个碳原子。术语“低级烯基”意指2至6个碳原子的烯基基团。术语“取代的烯基”是指被一个或多个取代基基团替换的烯基，并且术语“含杂原子的烯基”和“杂烯基”是指其中至少一个碳原子被杂原子取代的烯基。如果未另行说明，术语“烯基”和“低级烯基”分别包括直链、支链、环状、未取代、取代和/或含杂原子的烯基和低级烯基。
术语“炔基”是指含有至少一个三键的2至24个碳原子的直链或支链烃基团，诸如乙炔基、正丙炔基等。通常，尽管同样不是必须的，本文的炔基基团可含有2个至约18个碳原子，并且此类基团可进一步含有2至12个碳原子。术语“低级炔基”意指2至6个碳原子的炔基基团。术语“取代的炔基”是指被一个或多个取代基基团替换的炔基，并且术语“含杂原子的炔基”和“杂炔基”是指其中至少一个碳原子被杂原子取代的炔基。如果未另行说明，术语“炔基”和“低级炔基”分别包括直链、支链、未取代、取代和/或含杂原子的炔基和低级炔基。
术语“烷氧基”是指通过单一的末端醚键联结合的烷基基团；即，“烷氧基”基团可以表示为-O-烷基，其中烷基如上所定义。“低级烷氧基”基团是指含有1至6个碳原子的烷氧基基团，并且包括例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基等。本文中标识为“C1-C6烷氧基”或“低级烷氧基”的取代基可以，例如，可以含有1至3个碳原子，并且作为进一步的实例，此类取代基可含有1或2个碳原子(即，甲氧基和乙氧基)。
术语“取代的烷氧基”是指以下基团：取代的烷基-O-、取代的烯基-O-、取代的环烷基-O-、取代的环烯基-O-和取代的炔基-O-，其中取代的烷基、取代的烯基、取代的环烷基、取代的环烯基和取代的炔基如本文所定义。
除非另有规定，术语“芳基”是指芳族取代基，其通常但并非一定，含有5至30个碳原子并且含有单个芳族环或多个芳族环，该多个芳族环稠合在一起、直接连接或间接连接(使得不同的芳族环结合到常见基团诸如亚甲基或亚乙基部分)。芳基基团可以，例如，含有5至20个碳原子，并且作为进一步的实例，芳基基团可含有5至12个碳原子。例如，芳基基团可含有一个芳族环或两个或更多个稠合或连接的芳族环(即，联芳基、芳基取代的芳基等)。实例包括苯基、萘基、联苯基、二苯醚、二苯基胺、二苯甲酮等。“取代的芳基”是指被一个或多个取代基基团取代的芳基部分，并且术语“含杂原子的芳基”和“杂芳基”是指芳基取代基，其中至少一个碳原子被杂原子替换，如下文进一步所详述。芳基意在包括稳定的环状、杂环、多环和多杂环不饱和C3-C14部分，例如但不限于苯基、联苯基、萘基、吡啶基、呋喃基、噻吩基(thiophenyl)、咪唑基、嘧啶基和噁唑基；其可以被一至五个选自由以下组成的组的成员进一步取代：羟基、C1-C8烷氧基、C1-C8支链或直链烷基、酰基氧基、氨基甲酰基、氨基、N-酰基氨基、硝基、卤素、三氟甲基、氰基和羧基(参见例如Katritzky,Handbook ofHeterocyclic Chemistry)。如果没有其他指示，术语“芳基”包括未取代的、取代的和/或含杂原子的芳族取代基。
术语“芳烷基”是指具有芳基取代基的烷基基团，并且术语“烷芳基”是指具有烷基取代基的芳基基团，其中“烷基”和“芳基”如上所定义。一般地讲，本文中芳烷基和烷芳基含有6至30个碳原子。芳烷基和烷芳基基团可以，例如，含有6至20个碳原子，并且作为进一步的实例，此类基团可含有6至12个碳原子。
术语“亚烷基”是指双基(di-radical)的烷基基团。除非另有指示，此类基团包括含有1至24个碳原子的饱和烃链，其可为取代的或未取代的，可含有一个或多个脂环族基团，并且可为含杂原子的。“低级亚烷基”是指含有1至6个碳原子的亚烷基键联。实例包括亚甲基(--CH2--)、亚乙基(--CH2CH2--)、亚丙基(--CH2CH2CH2--)、2-甲基亚丙基(--CH2--CH(CH3)--CH2--)、亚己基(--(CH2)6--)等。
类似地，术语“亚烯基”、“亚炔基”、“亚芳基”、“亚芳烷基”和“亚烷芳基”分别是指双基的烯基、炔基、芳基、芳烷基和烷芳基基团。
术语“氨基”是指基团-NRR’，其中R和R’独立地是氢或非氢取代基，其中非氢取代基包括例如烷基、芳基、烯基、芳烷基和它们的取代的变体和/或含杂原子的变体。
术语“卤基”和“卤素”以常规意义用于指代氯基、溴基、氟基或碘基取代基。
“羧基(Carboxyl)”、“羧基(carboxy)”或“羧酸酯/盐”是指–CO2H或其盐。
“环烷基”是指具有单个或多个环状环(包括稠合环、桥接环和螺环体系)的3至10个碳原子的环状烷基基团。合适的环烷基的实例包括例如金刚烷基、环丙基、环丁基、环戊基、环辛基等。此类环烷基包括例如单环结构(诸如环丙基、环丁基、环辛基等)或多环结构(诸如金刚烷基等)。
术语“取代的环烷基”是指具有1至5个取代基或1至3个取代基的环烷基基团，该取代基选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰胺基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨酰基、氨基酰氧基、氧基氨酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基(thioketo)、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、硫醇、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟基氨基、烷氧氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基和-SO2-杂芳基。
如“含杂原子的烷基基团”(也称为“杂烷基”基团)或“含杂原子的芳基基团”(也称为“杂芳基”基团)中的术语“含杂原子的”是指其中一个或多个碳原子被除碳以外的原子(例如，氮、氧、硫、磷或硅，通常为氮、氧或硫)替换的分子、键联或取代基。同样地，术语“杂烷基”是指含杂原子的烷基取代基，术语“杂环烷基”是指含杂原子的环烷基取代基，术语“杂环的”或“杂环”是指含杂原子的环状取代基，术语“杂芳基”和“杂芳族”分别是指含杂原子的“芳基”和“芳族”取代基等。杂烷基基团的实例包括烷氧基芳基、烷基硫烷基取代的烷基、N-烷基化氨基烷基等。杂芳基取代基的实例包括吡咯基、吡咯烷基、吡啶基、喹啉基、吲哚基、呋喃基、嘧啶基、咪唑基、1,2,4-三唑基、四唑基等，并且含杂原子的脂环族基团的实例为吡咯烷子基、吗啉代、哌嗪子基、哌啶子基、四氢呋喃基等。
“杂芳基”是指环中具有1至15个碳原子(诸如1至10个碳原子)和1至10个选自由氧、氮和硫组成的组的杂原子的芳族基团。此类杂芳基基团可以在环体系中具有单环(诸如吡啶基、咪唑基或呋喃基)或多个稠合环(例如，如在诸如吲哚嗪基、喹啉基、苯并呋喃、苯并咪唑基或苯并噻吩基的基团中)，其中环体系内的至少一个环是芳族的，条件是附接点是通过芳族环的原子。在某些实施方案中，杂芳基基团的一个或多个氮和/或硫环原子任选地被氧化以提供N-氧化物(N→O)、亚磺酰基或磺酰基部分。该术语包括例如吡啶基、吡咯基、吲哚基、噻吩基和呋喃基。除非另外受杂芳基取代基的定义所限制，此类杂芳基基团可以任选地被1至5个取代基、或1至3个取代基取代，该取代基选自酰基氧基、羟基、硫醇、酰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、取代的烷基、取代的烷氧基、取代的烯基、取代的炔基、取代的环烷基、取代的环烯基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、酰基氨基、烷芳基、芳基、芳基氧基、叠氮基、羧基、羧基烷基、氰基、卤素、硝基、杂芳基、杂芳基氧基、杂环基、杂环氧基、氨基酰基氧基、氧基酰基氨基、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、硫代芳基氧基、硫代杂芳基氧基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基和-SO2-杂芳基以及三卤代甲基。
术语“杂环”、“杂环的”和“杂环基”是指具有单环或多个稠合环(包括稠合环、桥接环和螺环体系)和具有3至15个环原子(包括1至4个杂原子)的饱和或不饱和基团。这些环杂原子选自氮、硫和氧，其中在稠合环体系中，一个或多个环可以是环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，条件是附接点是通过非芳香族环。在某些实施方案中，杂环基团的一个或多个氮原子和/或硫原子被任选地氧化以提供N-氧化物、-S(O)-或–SO2-部分。
杂环和杂芳基的实例包括但不限于：氮杂环丁烷、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、吲嗪、异吲哚、吲哚、二氢吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、萘基吡啶、喹噁啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、异噻唑、吩嗪、异噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚啉、邻苯二甲酰亚胺、1,2,3,4-四氢异喹啉、4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩、噻唑、噻唑烷、噻吩、苯并[b]噻吩(benzo[b]thiophene)、吗啉基、硫代吗啉基(也称为硫杂吗啉基(thiamorpholinyl))、1,1-二氧代硫代吗啉基、哌啶基、吡咯烷、四氢呋喃基等。
除非另外受杂环取代基的定义所限制，此类杂环基团可以任选地被1至5个，或1至3个取代基取代，该取代基选自烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰胺基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨酰基、氨基酰氧基、氧基氨酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、硫醇、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟基氨基、烷氧氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基和稠合的杂环。
“烃基”是指含有1至约30个碳原子(包括1至约24个碳原子，进一步包括1至约18个碳原子，并且进一步包括约1至12个碳原子)的单价烃基自由基，包括直链、支链、环状、饱和和不饱和的物质，诸如烷基基团、烯基基团、芳基基团等。烃基可被一个或多个取代基基团取代。术语“含杂原子的烃基”是指其中至少一个碳原子被杂原子替换的烃基。除非另外指示，术语“烃基”应解释为包括取代的和/或含杂原子的烃基部分。
如前面提到的定义中一些定义中提到的，如“取代的烃基”、“取代的烷基”、“取代的芳基”等中的“取代(的)”意指在烃基、烷基、芳基或其他部分中，与碳(或其他)原子结合的至少一个氢原子被一个或多个非氢取代基替换。此类取代基的实例包括但不限于官能团和烃基部分C1-C24烷基(包括C1-C18烷基，进一步包括C1-C12烷基，并且进一步包括C1-C6烷基)、C2-C24烯基(包括C2-C18烯基，进一步包括C2-C12烯基，并且进一步包括C2-C6烯基)、C2-C24炔基(包括C2-C18炔基，进一步包括C2-C12炔基，并且进一步包括C2-C6炔基)、C5-C30芳基(包括C5-C20芳基，并且进一步包括C5-C12芳基)和C6-C30芳烷基(包括C6-C20芳烷基，并且进一步包括C6-C12芳烷基)。上面提到的烃基部分可进一步被一个或多个官能团或另外的烃基部分诸如具体枚举的那些官能团取代。除非另外指示，本文所述的任何基团除未取代的基团外，需解释为包括取代的和/或含杂原子的部分。
“磺酰基”是指基团SO2-烷基、SO2-取代的烷基、SO2-烯基、SO2-取代的烯基、SO2-环烷基、SO2-取代的环烷基、SO2-环烯基、SO2-取代的环烯基、SO2-芳基、SO2-取代的芳基、SO2-杂芳基、SO2-取代的杂芳基、SO2-杂环基和SO2-取代的杂环基，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基和取代的杂芳基如本文所定义。磺酰基包括例如甲基-SO2-、苯基-SO2-和4-甲基苯基-SO2-。
术语“官能团”意指化学基团，诸如卤基、羟基、硫氢基、C1-C24烷氧基、C2-C24烯基氧基、C2-C24炔基氧基、C5-C20芳基氧基、酰基(包括C2-C24烷基羰基(-CO-烷基)和C6-C20芳基羰基(-CO-芳基))、酰基氧基(-O-酰基)、C2-C24烷氧基羰基(-(CO)-O-烷基)、C6-C20芳基氧基羰基(-(CO)-O-芳基)、卤代羰基(-CO)-X，其中X是卤基)、C2-C24烷基氧基羰氧基(carbonato)(-O-(CO)-O-烷基)、C6-C20芳基氧基羰氧基(-O-(CO)-O-芳基)、羧基(-COOH)、羧酸根基(-COO-)、氨基甲酰基(-(CO)-NH2)、单取代的C1-C24烷基氨基甲酰基(-(CO)-NH(C1-C24烷基))、二取代的烷基氨基甲酰基(-(CO)-N(C1-C24烷基)2)、单取代的芳基氨基甲酰基(-(CO)-NH-芳基)、硫代氨基甲酰基(-(CS)-NH2)、脲基(-NH-(CO)-NH2)、氰基(-C≡N)、异氰基(-N+≡C-)、氰氧基(-O-C≡N)、异氰氧基(-O-N+≡C-)、异氰硫基(-S-C≡N)、叠氮基(-N＝N+＝N-)、甲酰基(-(CO)-H)、硫代甲酰基(-(CS)-H)、氨基(-NH2)、单-和二-(C1-C24烷基)-取代的氨基、单-和二-(C5-C20芳基)-取代的氨基、C2-C24烷基酰胺基(-NH-(CO)-烷基)、C5-C20芳基酰胺基(-NH-(CO)-芳基)、亚胺基(-CR＝NH，其中R＝氢、C1-C24烷基、C5-C20芳基、C6-C20烷芳基、C6-C20芳烷基等)、烷基亚胺基(-CR＝N(烷基)，其中R＝氢、烷基、芳基、烷芳基等)、芳基亚胺基(-CR＝N(芳基)，其中R＝氢、烷基、芳基、烷芳基等)、硝基(-NO2)、亚硝基(-NO)、磺酸基(-SO2-OH)、磺基氧基(-SO2-O-)、C1-C24烷基硫烷基(-S-烷基；也称为“烷硫基”)、芳基硫烷基(-S-芳基；也称为“芳硫基”)、C1-C24烷基亚磺酰基(-(SO)-烷基)、C5-C20芳基亚磺酰基(-(SO)-芳基)、C1-C24烷基磺酰基(-SO2-烷基)、C5-C20芳基磺酰基(-SO2-芳基)、膦酸基(-P(O)(OH)2)、膦酸根基(-P(O)(O-)2)、亚膦酸根基(-P(O)(O-))、二氧磷基(-PO2)和膦基(-PH2)、单-和二-(C1-C24烷基)-取代的膦基、单-和二-(C5-C20芳基)-取代的膦。此外，如果特定基团允许，前面提到的官能团可被一个或多个另外的官能团或被一个或多个烃基部分诸如以上具体枚举的那些进一步取代。
如“连接基团(linking group)”、“接头部分”等中的“连接”或“接头”意指经由共价键连接两个基团的连接部分。接头可为直链、支链、环状或单原子。此类连接基团的实例包括烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基、亚烷芳基、亚芳烷基和含有官能团的连接部分，该官能团包括但不限于：酰胺基(-NH-CO-)、亚脲基(-NH-CO-NH-)、二酰亚胺(-CO-NH-CO-)、环氧(-O-)、环硫(-S-)、环二氧(-O-O-)、羰基二氧基(-O-CO-O-)、烷基二氧基(-O-(CH2)n-O-)、环氧亚胺基(-O-NH-)、环亚胺基(-NH-)、羰基(-CO-)等。在某些情况下，接头主链的一个、两个、三个、四个或五个或多个碳原子可任选地被硫、氮或氧杂原子取代。主链原子之间的键可以是饱和的或不饱和的，通常在接头主链中将存在不超过一个、两个或三个不饱和键。接头可包括一个或多个取代基，其例如具有烷基、芳基或烯基。接头可包括但不限于一个或多个聚(乙二醇)单元(例如，-(CH2-CH2-O)-)；醚、硫醚、胺、烷基(例如，(C1-C12)烷基)，其可以是直链的或支链的，例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1,1-二甲基乙基(叔丁基)等。接头主链可以包含环状基团，例如芳基、杂环或环烷基，其中主链中包含环状基团的2个或更多个原子，例如2个、3个或4个原子。接头可以是可切割的或不可切割的。可使用接头到被连接的基团的任何方便的取向和/或连接。
当术语“取代的”出现在可能的取代的基团清单之前时，预期该术语适用于该基团的每个成员。例如，短语“取代的烷基和芳基”应解释为“取代的烷基和取代的芳基”。
除本文的公开之外，术语“取代的”当用于修饰指定基团或自由基时，也可以意指该指定基团或自由基的一个或多个氢原子彼此独立地被如以下定义的相同或不同取代基基团替换。
除了针对本文各个术语而公开的基团外，除非另有指示，用于取代指定基团或自由基中饱和碳原子上的一个或多个氢(单个碳上的任何两个氢都可被＝O、＝NR70、＝N-OR70、＝N2或＝S替换)的取代基基团是-R60、卤基、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-SO2R70、-SO2O–M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O–M+、-OSO2OR70、-P(O)(O–)2(M+)2、-P(O)(OR70)O–M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O–M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2 –M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下组成的组：任选取代的烷基、环烷基、杂烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基和杂芳基烷基，每个R70独立地是氢或R60；每个R80独立地是R70或替代地，两个R80’与它们所键合至的氮原子一起形成5-、6-或7-元杂环烷基，该杂环烷基可任选地包含1至4个选自由O、N和S组成的组的相同或不同的另外的杂原子，其中N可具有-H或C1-C3烷基取代；并且每个M+是带有单个净正电荷的反离子。每个M+可独立地是例如碱金属离子，诸如K+、Na+、Li+；铵离子，诸如+N(R60)4；或碱土离子，诸如[Ca2+]0.5、[Mg2+]0.5或[Ba2+]0.5(“下标0.5意指此类二价碱土离子的其中一个反离子可以是本发明化合物的离子化形式而另一个为典型的反离子诸如氯离子，或者本文公开的两种离子化化合物可以用作此类二价碱土离子的反离子，或者本发明的双离子化化合物可以用作此类二价碱土离子的反离子)。作为具体的实例，-NR80R80意在包括-NH2、-NH-烷基、N-吡咯烷基、N-哌嗪基、4N-甲基-哌嗪-1-基和N-吗啉基。
除本文的公开之外，除非另有指示，“取代的”烯烃、炔烃、芳基和杂芳基基团中不饱和碳原子上氢的取代基基团为-R60、卤基、-O-M+、-OR70、-SR70、-S–M+、-NR80R80、三卤代甲基、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、-N3、-SO2R70、-SO3 –M+、-SO 3R70、-OSO2R70、-OSO3 –M+、-OSO3R70、-PO3 -2(M+)2、-P(O)(OR70)O–M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-CO2 –M+、-CO2R70、-C(S)OR 70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OCO2 –M+、-OCO2R70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2 –M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60、R70、R80和M+如先前所定义，条件是在取代的烯烃或炔烃的情况下，取代基不是-O-M+、-OR70、-SR70或-S–M+。
除针对本文各个术语而公开的基团外，除非另有指示，用于“取代的”杂烷基和环杂烷基基团中氮原子上氢的取代基基团是-R60、-O-M+、-OR70、-SR70、-S-M+、-NR80R80、三卤基甲基、-CF3、-CN、-NO、-NO2、-S(O)2R70、-S(O)2O-M+、-S(O)2OR70、-OS(O)2R70、-OS(O)2O-M+、-OS(O)2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)(OR70)、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70C(O)OR70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60、R70、R80和M+如先前所定义。
除本文的公开之外，在某些实施方案中，被取代的基团具有1、2、3或4个取代基，1、2或3个取代基，1或2个取代基，或1个取代基。
本文中未明确定义的取代基的命名是通过命名功能团的末端部分，随后命名朝向该附接点的相邻功能团而实现，另有说明的除外。例如，取代基“芳基烷氧基羰基”是指基团(芳基)-(烷基)-OC(O)-。
对于本文所公开的含有一个或多个取代基的任何基团，当然应当理解，此类基团不含在空间上不切实际和/或在合成上不可行的任何取代或取代模式。此外，主题化合物包括由这些化合物的取代产生的所有立体化学异构体。
在某些实施方案中，取代基可促成化合物的旋光异构和/或立体异构。化合物的盐、溶剂化物、水合物和前药形式也是感兴趣的。本公开包含了所有此类形式。因此，本文所述的化合物包括其盐、溶剂化物、水合物、前药和异构体形式，包括其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药和异构体。在某些实施方案中，化合物可被代谢成药学上活性的衍生物。
除非另有指示，对原子的提及意指包括该原子的同位素。例如，对H的提及意指包括1H、2H(即，D)和3H(即，T)，并且对C的提及意指包括12C和碳的所有同位素(诸如13C)。
除非另有说明，否则术语“约”或“大约”意指由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差，这部分取决于如何测量或确定该值。在某些实施方案中，术语“约”或“大约”意指在1、2或3个标准差内。在某些实施方案中，术语“约”或“大约”意指在给定值或范围的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.25％、0.2％、0.1％或0.05％之内。在需要整数的某些实施方案中，术语“约”意指在给定值或范围的正负10％内，向上或向下舍入到最接近的整数。
在本说明书中，化学名称与化学结构如有不一致之处，以化学结构为准。
其他术语和概念的定义出现在整个具体实施方式中。
ASGPR结合化合物和缀合物描述于2021年1月8日提交的国际申请号PCT/US2021/012846，其公开内容通过引用方式以其整体并入本文。
5.8.附加实施方案
本公开的附加实施方案也描述在以下条款中。
条款1.一种式(I)的细胞表面受体结合缀合物：
Xn-L—Y
(I)
或其盐，
其中：
X是结合到细胞表面无唾液酸糖蛋白质受体(ASGPR)的部分；
n是1至500(例如，n是1至20、1至10、1至6或1至5)；并且
L是接头；
Y是特异性地结合靶蛋白质的生物分子。
条款2.如条款1所述的缀合物，其中所述缀合物是式(V)：
或其药学上可接受的盐，
其中：
n是1至20；
m是1至80的平均负载；
Ab是特异性地结合所述靶蛋白质的抗体或抗体片段；并且
Z是由化学选择性连结基团与Ab的相容基团的共价键联产生的残基部分。
条款3.如条款1或2所述的缀合物，其中X是结合到ASGPR并且选自式(III-a)至(III-j)的部分：
其中：
R1选自–OH、–OC(O)R和其中R是C1-6烷基；
R2选自–NHCOCH3、–NHCOCF3、–NHCOCH2CF3、–OH和并且
R3选自–H、–OH、–CH3、–OCH3和–OCH2CH＝CH2。
条款4.如条款3所述的缀合物，其中X是：
条款5.如条款3所述的缀合物，其中X是：
条款6.如条款1至5所述的缀合物，其中所述接头L具有式(IIa)：
-[(L1)a-(L2)b-(L3)c]n-(L4)d-(L5)e-(L6)f-(L7)g-
(IIa)
其中
每个L1至L7独立地是连接部分，并且一起提供介于X和Y之间的直链或支链接头；
a是1或2；
b、c、d、e、f和g各自独立地是0、1或2；
n是1至6(例如，n是1至5，或2至6，或1、2或3)。
条款6a.如条款6所述的缀合物，其中：
当d是0时，n是1；
当d是1时，n是1至3；并且
当d是2时，n是1至6。
条款7.如条款6所述的缀合物，其中-(L1)a-包括任选取代的芳基或杂芳基连接部分。
条款8.如条款6所述的缀合物，其中每个L1独立地选自
其中v是0至10并且z是0至10。
条款9.如条款6至8中任一项所述的缀合物，其中：
每个L2独立地选自–C1-6-亚烷基–、–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-O(CH2)p–和–(OCH2CH2)p–，其中p是1至10；并且
每个L3独立地选自：
和–(OCH2CH2)q–，其中q是1至10，u是0至10，并且w是1至10。
条款10.如条款6至9中任一项所述的缀合物，其中当n是2或更大时，至少一个L4存在并且为支链连接部分。
条款11.如条款6至10中任一项所述的缀合物，其中每个L4独立地选自：
–OCH2CH2–、
其中每个x和y各自独立地是1至10。
条款12.如条款6至11中任一项所述的缀合物，其中：
每个L5独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–、或–(OCH2CH2)r–；
每个L6独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–或–(OCH2CH2)s–；
每个L7独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–、–(OCH2CH2)t–或–OCH2–；且r、s和t各自独立地是1至20。
条款13.如条款6至12中任一项所述的缀合物，其中a是1。
条款14.如条款6至13中任一项所述的缀合物，其中b、c、e、f和g中的至少一者不是0。
条款15.如条款6至14中任一项所述的缀合物，其中b或c中的至少一者不是0，并且e、f和g中的至少一者不是0。
条款16.如条款6至15中任一项所述的化合物，其中a、b和c各自独立地是1或2。
条款17.如条款6至16中任一项所述的缀合物，其中所述接头L选自表2-3的结构中的任何一种结构。
条款18.如条款1或17所述的缀合物，其中所述缀合物选自：
i)衍生自本文所述的化合物表中的结构中的任何一种结构的化合物和生物分子的缀合的缀合物；
ii)衍生自本文所述化合物表中的结构中的任何一种结构的化合物和多肽的缀合的缀合物；或
iii)衍生自本文所述化合物表中的结构中的任何一种结构的化合物和抗体或抗体片段的缀合的缀合物。
条款19.如条款18所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段是IgG抗体。
条款20.如条款18所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段是人源化抗体。
条款21.如条款18至20中任一项所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段特异性地结合到分泌的或可溶性蛋白。
条款22.如条款18至20中任一项所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段特异性地结合到细胞表面受体。
条款23.一种使靶蛋白质在包含ASGPR细胞表面受体的细胞中内化的方法，所述方法包括：使包含所述细胞和所述靶蛋白质的细胞样本与有效量的根据条款1至22中任一项所述的缀合物接触，其中所述缀合物特异性地结合所述靶蛋白质并特异性地结合所述细胞表面受体以促进所述靶蛋白质的细胞摄取。
条款24.如条款23所述的方法，其中所述靶蛋白质是膜结合蛋白质。
条款25.如条款24所述的方法，其中所述靶蛋白质是细胞外蛋白质。
条款26.如条款23至25中任一项所述的方法，其中所述化合物或缀合物包含特异性地结合所述靶蛋白质的抗体或抗体片段(Ab)。
条款27.一种降低生物系统中靶蛋白质水平的方法，所述方法包括：使所述生物系统与有效量的根据条款1至22中任一项所述的缀合物接触，其中所述缀合物特异性地结合所述靶蛋白质并且特异性地结合所述生物系统中细胞的ASGPR细胞表面受体以促进所述靶蛋白质的细胞摄取和降解。
条款28.如权利要求27所述的方法，其中所述生物系统是人类受试者。
条款29.如权利要求27所述的方法，其中所述生物系统是体外细胞样本。
条款30.如权利要求28所述的方法，其中所述靶蛋白质是膜结合蛋白质。
条款31.如权利要求29所述的方法，其中所述靶蛋白质是细胞外蛋白质。
条款32.一种治疗与靶蛋白质相关的疾病或病症的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用有效量的根据条款1至22中任一项所述的缀合物，其中所述缀合物特异性地结合所述靶蛋白质。
条款33.如条款32所述的方法，其中所述疾病或病症是炎性疾病。
条款34.如条款32所述的方法，其中所述疾病或病症是自身免疫性疾病。
条款35.如条款32所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
条款36.一种下式(I)的化合物：
Xn-L-Y (I)
或其盐、单一立体异构体、立体异构体的混合物或其同位素形式，其中：
X是结合到ASGPR细胞表面受体的部分；
L是下式(IIa)的接头：
-[(L1)a-(L2)b-(L3)c]n-(L4)d-(L5)e-(L6)f-(L7)g-(IIa)；并且
其中
每个L1独立地是
每个L2独立地是–C1-6-亚烷基–、–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、–(OCH2)p–或–(OCH2CH2)p–；
每个L3独立地是 或–(OCH2CH2)q–；
每个L4独立地是–OCH2CH2–、
每个L5独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、
-C1-6-亚烷基–、或–(OCH2CH2)r–；
每个L6独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、
-C1-6-亚烷基–或–(OCH2CH2)s–；
每个L7独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、
-C1-6-亚烷基–、–(OCH2CH2)t–或–OCH2–；
p、q、r、s和t各自独立地是1至20的整数；a是1或2；b、c、d、e、f和g各自独立地是0、1或2；u、v、w、x、y和z各自独立地是1至10的整数；
n是1至5的整数；其中当d是0时，n是1，当d是1时，n是1-3的整数，并且当d是2时，n是1-5的整数；
Y是选自由以下组成的组的部分
其中表示与L的附接点；
R是氢或氟；
每个R’独立地是氢或卤基；
G选自-F、-Cl、-Br、-I、-O-甲磺酰基和-O-甲苯磺酰基；
J选自-Cl、-Br、-I、-F、-OH、-O-N-琥珀酰亚胺、-O-(4-硝基苯基)、-O-五氟苯基、-O-四氟苯基和–O-C(O)-ORJ’，并且RJ’是-C1-C8烷基或-芳基。
条款37.如条款36所述的化合物，其中a是1。
条款38.如条款36所述的化合物，其中b、c、e、f和g中的至少一者不是0。
条款39.如条款36所述的化合物，其中b或c中的至少一者不是0，并且e、f和g中的至少一者不是0。
条款40.如条款36所述的化合物，其中a、b和c各自独立地是1或2。
条款41.如条款36所述的化合物，其中每个X独立地选自式(III-a)至(III-j)：
其中：
R1选自–OH、–OC(O)R和其中R是C1-6烷基；
R2选自–NHCOCH3、–NHCOCF3、–NHCOCH2CF3、–OH和并且
R3选自–H、–OH、–CH3、–OCH3和–OCH2CH＝CH2。
条款42.如条款41所述的缀合物，其中X是：
条款43.如条款41所述的缀合物，其中X是：
条款44.一种下式(IVa)的缀合物：
或其药学上可接受的盐，
其中：
X是结合到ASGPR细胞表面受体的部分；
L是下式(IIa)的接头：
-[(L1)a-(L2)b-(L3)c]n-(L4)d-(L5)e-(L6)f-(L7)g-(IIa)；并且
其中
每个L1独立地是
每个L2独立地是–C1-6-亚烷基–、–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、–(OCH2)p–或–(OCH2CH2)p–；
每个L3独立地是 或–(OCH2CH2)q–；
每个L4独立地是–OCH2CH2–、
每个L5独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–、或–(OCH2CH2)r–；
每个L6独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–或–(OCH2CH2)s–；
每个L7独立地是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、C1-6-亚烷基–、–(OCH2CH2)t–或–OCH2–；
p、q、r、s和t各自独立地是1至20的整数；a是1或2；b、c、d、e、f和g各自独立地是0、1或2；u、v、w、x、y和z各自独立地是1至10的整数；
n是1至5的整数；其中当d是0时，n是1，当d是1时，n是1-3的整数，并且当d是2时，n是1-5的整数；
Z选自由以下组成的组
其中表示与L的附接点，
其中表示与P的附接点，
X是CH2、NH、O或S；并且
P是多肽。
条款45.如条款44所述的缀合物，其中P包含抗体或抗体的抗原结合片段。
条款46.一种下式(Va)的缀合物：
或其药学上可接受的盐，
其中：
X是结合到ASGPR细胞表面受体的部分；
L是下式(IIa)的接头：
-[(L1)a-(L2)b-(L3)c]n-(L4)d-(L5)e-(L6)f-(L7)g-(IIa)；并且
其中
每个L1独立地是
每个L2独立地是–C1-6-亚烷基–、–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、–(OCH2)p–或–(OCH2CH2)p–；
每个L3独立地是 或–(OCH2CH2)q–；
每个L4独立地是–OCH2CH2–、
每个L5是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–、或–(OCH2CH2)r–；
每个L6是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–或–(OCH2CH2)s–；
每个L7是–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、-C1-6-亚烷基–、–(OCH2CH2)t–或–OCH2–；
p、q、r、s和t各自独立地是1至20的整数；a是1或2；b、c、d、e、f和g各自独立地是0、1或2；u、v、w、x、y和z各自独立地是1、2、3、4、5或6；
n是1至5的整数；其中当d是0时，n是1，当d是1时，n是1-3的整数，并且当d是2时，n是1-5的整数；
m是从1至8的整数；
Z选自由以下组成的组： 其中表示与L的附接点，其中表示与的附接点；并且
是抗体。
条款47.如条款44至46中任一项所述的缀合物，其中每个X独立地选自式(III-a)至(III-j)：
其中：
R1选自–OH、–OC(O)R和其中R是C1-6烷基；
R2选自–NHCOCH3、–NHCOCF3、–NHCOCH2CF3、–OH和并且
R3选自–H、–OH、–CH3、–OCH3和–OCH2CH＝CH2。
条款48.如条款47所述的缀合物，其中X是：
条款49.如条款47所述的缀合物，其中X是：
条款50.一种药物组合物，其包含条款44-50中任一项所述的缀合物或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载剂。
条款51.如条款50所述的药物组合物，其中m是4至8的整数。
条款52.如条款51所述的包含所述缀合物或药学上可接受的盐的药物组合物，其中m是4。
条款53.如条款44至49中任一项所述的缀合物，其中所述抗体是IgG抗体。
条款54.如条款44至49中任一项所述的缀合物，其中所述抗体是人源化抗体。
条款55.如条款44至49中任一项所述的缀合物，其中所述抗体特异性地结合到分泌的或可溶性蛋白质。
条款56.如条款44至49中任一项所述的缀合物，其中所述抗体特异性地结合到细胞表面受体。
条款57.如条款44至49中任一项所述的缀合物，其中所述抗体特异性地结合到程序性死亡配体-1(PD-L1)蛋白质。
条款58.如条款44至49中任一项所述的缀合物，其中所述抗体特异性地结合到血管内皮生长因子(VEGF)蛋白质。
条款59.如条款44至49中任一项所述的缀合物，其中所述抗体特异性地结合到成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)蛋白质或成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)蛋白质。
条款60.如条款44至49中任一项所述的缀合物，其中所述抗体是西妥昔单抗。
条款61.如条款44至49中任一项所述的缀合物，其中所述抗体是马妥珠单抗。
条款62.如条款44至49中任一项所述的缀合物，其中所述抗体是阿替利珠单抗。
条款63.一种通过向有需要的受试者施用有效量的条款44至49中任一项的缀合物或药学上可接受的盐或如条款50至52中任一项的药物组合物来治疗疾病或病症的方法。
条款64.如条款63所述的方法，其中所述疾病或病症是炎性疾病。
条款65.如条款63所述的方法，其中所述疾病或病症是自身免疫性疾病。
条款66.如条款63所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
条款67.一种式(I)的细胞表面ASGPR结合化合物：
X-LY
(I)
或其前药、或其盐，
其中：
Y是感兴趣的部分。
n是1至500；
L是接头；并且
X是结合到式(Ia)的细胞表面无唾液酸糖蛋白质受体(ASGPR)的部分：
其中：
R1选自–OH、–OC(O)R、-C(O)NHR、–Z1–*和任选取代的三唑，其中R是任选取代的C1-6烷基或任选取代的芳基；
R2选自–NHCOCH3、–NHCOCF3、–NHCOCH2CF3、–OH、任选取代的三唑和–Z1–*；
R3选自–H、–OH、–CH3、–OCH3、–OCH2CH＝CH和–Z1–*；
R1至R3中的一者是–Z1–*，其中“*”代表Z1与接头(L)的附接点；
R4和R5各自独立地选自H和引入部分(例如，酯引入部分)；
Z1是选自以下的连接部分：Z11、任选取代的Z11-杂芳基、任选取代的Z11-芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、任选取代的酰胺、任选取代的磺胺、任选取代的脲和任选取代的硫脲；
Z11选自-O-、-S-、NR21-和-C(R22)2，
每个R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基；并且
每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；
其中：
i)当n是3，R1是OH，R2是–NHCOCH3，R4-R5是H，并且R3是Z1时，则Z1不是O；
ii)当n是2或3，R1是OAc，R2是–NHCOCH3，R4-R5是Ac，并且R3是Z1时，则Z1不是O；
iii)当n是2或3，R1是OBz，R2是–NHCOCH3，R4-R5是Bz，并且R3是Z1，则Z1不是O；
iv)当n是3，R1是OH，R2是–NHCOCH3，R4-R5是H，并且R3是Z1且Z1是O时，则L包含连向支化点的至少16个连续原子的主链；和/或
v)当n是3，R1是Z1，其中Z1是O；并且R4-R5是H时，则R3不是-CH3。
6.实施例
本节中的实施例通过说明而非限制的方式提供。
6.1.化合物的制备
以下是如何制备和测试本文所述的化合物的说明性方案和实施例。尽管这些实施例可以仅代表一些实施方案，但应该理解以下实施例是说明性的而不是限制性的。除非另有说明，所有取代基均如先前所定义。试剂和起始材料对于本领域普通技术人员来说是容易获得的。可以将描述的每条路线的具体合成步骤以不同方式或与来自不同方案的步骤结合来组合，以制备本文描述的化合物。
实施例1-54：ASGPR配体-接头实例的制备
实施例1：[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4-双(乙酰基氧基)-6-(丁-3-炔-1-基氧基)-5-乙酰胺基噁烷-2-基]甲基乙酸酯(中间体A)的合成
向活化的4分子筛(5.0g)和[(2R,3R,4R,5R,6S)-3,4,6-三(乙酰基氧基)-5-乙酰胺基噁烷-2-基]甲基乙酸酯(A-1)(5.0g,12.8mmol)中添加二氯甲烷(50mL)并在室温下搅拌5分钟，随后添加丁-3-炔-1-醇(2.92mL,3.0eq.,38.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后冷却至0℃。向以上反应混合物中逐滴添加三氟硼酸二乙酯(4.75mL,38.5mmol)，并在室温下再次搅拌10分钟，随后在51℃下回流5小时。通过TLC检查反应的完成并添加三乙胺以淬灭三氟硼酸二乙酯(直至中性pH)，并通过硅藻土床过滤，随后在旋转蒸发仪上浓缩。将得到的稠残留物通过使用60-75％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的硅胶柱纯化进行纯化，得到中间体A-2，为灰白色泡沫。产率：4.50g,87％；Rf＝0.45(7.5％的在二氯甲烷中的甲醇)；LC-MS m/z 400.0[M+1]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ5.44(d,J＝8.6Hz,1H),5.35(d,J＝7.0Hz,1H),5.30(dd,J＝11.2,3.0Hz,1H),4.79(d,J＝8.2Hz,1H),4.14–4.09(m,2H),3.99–3.90(m,3H),3.71–3.65(m,1H),2.49–2.47(m,2H),2.14(s,3H),2.05(s,3H),2.00(s,3H),1.96(s,3H)。
将中间体A-2(7.8g,17.5mmol)溶解于甲醇(50mL)中并冷却至0℃。向此溶液中逐滴添加25％w/v在甲醇中的甲醇钠(2.48mL,11.3mmol)并将反应物在室温下维持3小时。通过TLC检查反应的完成并在反应完成后逐滴添加1NHCl以淬灭甲醇钠。蒸发甲醇并用乙醚(30mL X 4)洗涤得到的残留物。将得到的粗残留物用制备型HPLC(5-20％的在含0.1％TFAH的水中的乙腈)纯化从而得到中间体A，为白色固体。产率：2.6g,84％；LC-MS m/z274.0[M+1]+；1H NMR(400MHz,D2O)δ4.58(d,J＝8.4Hz,1H),3.97–3.86(m,3H),3.82–3.73(m,5H),2.49–2.44(m,2H),2.04(s,3H)。
实施例2：N-((2R,3R,4R,5R,6R)-6-((丁-3-炔-1-基氧基)甲基)-2,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(中间体B)的合成
向在0℃下搅拌的N-((2R,3R,4R,5R,6R)-2,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(B-1)(1eq.)在二氯甲烷中的溶液中缓慢地添加对甲苯磺酰氯(1.1eq.)在二氯甲烷中的溶液。让反应混合物升温至室温并通过LC-MS监测反应混合物以指示所需甲苯磺酸伯醇酯的完全形成。添加吡啶(3.5eq.)，随后添加乙酸酐(3.1eq.)。在室温下搅拌反应混合物并通过LC-MS监测反应混合物以指示中间体B-2的完全形成，该中间体通过硅胶色谱法进行分离。向在0℃下的搅拌的丁-3-炔-1-醇(1.1eq.)在四氢呋喃中的溶液中添加氢化钠(1.1eq.)。在0℃下搅拌10分钟后，添加中间体B-2(1eq.)在四氢呋喃中的溶液。让所得混合物升温至室温并通过LC-MS监测所得混合物以指示中间体B-3的完全形成，该中间体通过硅胶色谱法进行分离。向在0℃下的搅拌的中间体B-3(1eq.)在甲醇中的溶液中添加在甲醇中的甲醇钠(3eq.)。将所得混合物在0℃下搅拌，直至LC-MS指示完全转化为中间体B，该中间体B通过反相色谱法分离。
实施例3：三价GalNAc配体A全氟苯基酯(化合物I-107)的合成
向搅拌的2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇(3A)(1eq.)和吡啶(1.2eq.)在二氯甲烷中的溶液中添加对甲苯磺酰氯(1.1eq.)在二氯甲烷中的溶液。在室温下搅拌所得混合物并通过LC-MS监测所得混合物以指示化合物3B的完全形成，该化合物3B通过硅胶色谱法进行分离。向在-78℃下的搅拌的(1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1eq.)和化合物3B(3.3eq.)在THF中的混合物中添加氢化钠。移除冷浴并将所得混合物在室温下搅拌，直至LC-MS指示完全转化为化合物3C，该化合物3C通过硅胶色谱法进行分离。向在室温下的搅拌的化合物3C(1eq.)在二氯甲烷中的溶液中添加在乙醚中的HCl(3eq.)。将所得混合物在室温下搅拌至LC-MS指示完全转化，然后在旋转蒸发仪上除去挥发物以得到化合物3D。向在室温下的搅拌的化合物3D(1eq.)在二氯甲烷中的溶液中添加二异丙基乙胺(2eq.)。添加3,3’-(乙烷-1,2-二基双(氧基))二丙酸双(全氟苯基)酯(3E)(1.1eq.)并将所得混合物在室温下搅拌至LC-MS指示完全转化为化合物3F，该化合物3F通过硅胶色谱法进行分离。将化合物3F(1eq.)和中间体A(1eq.)在室温和搅拌下溶解于DMSO中。添加四氟硼酸四(乙腈)铜(I)(3eq.)并将所得混合物在室温下搅拌至LC-MS指示完全转化为化合物I-107，该化合物I-107经由反相制备型HPLC被纯化并随后被冻干。
实施例4：三价GalNAc配体B全氟苯基酯(化合物I-108)的合成
将化合物3F(1eq.)和中间体B(1eq.)在室温和搅拌下溶解于DMSO中。添加四氟硼酸四(乙腈)铜(I)(3eq.)并将所得混合物在室温下搅拌至LC-MS指示完全转化为化合物I-108，该化合物I-108经由反相制备型HPLC被纯化并随后被冻干。
实施例5：二价GalNAc配体A全氟苯基酯(化合物I-109)的合成
向在-78℃下的搅拌的(1,3-二羟基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(5A)(1eq.)和化合物3B(3.3eq.)在THF中的混合物中添加氢化钠。移除冷浴并将所得混合物在室温下搅拌，直至LC-MS指示完全转化为化合物5B，该化合物5B通过硅胶色谱法进行分离。在室温下向搅拌的化合物5B(1eq.)在二氯甲烷中的溶液中添加在乙醚中的HCl(3eq.)。将所得混合物在室温下搅拌至LC-MS指示完全转化，然后在旋转蒸发仪上除去挥发物以得到化合物5C。向在室温下的搅拌的化合物5C(1eq.)在二氯甲烷中的溶液中添加二异丙基乙胺(2eq.)。添加3,3’-(乙烷-1,2-二基双(氧基))二丙酸双(全氟苯基)酯(化合物3E)(1.1eq.)并将所得混合物在室温下搅拌至LC-MS指示完全转化为化合物5D，该化合物5D通过硅胶色谱法进行分离。将化合物5D(1eq.)和中间体A(1eq.)在室温和搅拌下溶解于DMSO中。添加四氟硼酸四(乙腈)铜(I)(3eq.)并将所得混合物在室温下搅拌至LC-MS指示完全转化为化合物I-5，该化合物I-5经由反相制备型HPLC被纯化并随后被冻干。
在以上合成后，得到41mg的化合物I-109。LC-MS m/z 1336.7[M+1]+；1HNMR(400MHz,D2O)d 7.87(s,2H),4.65-4.61(m,4H),4.47(d,J＝8.0Hz,2H),4.23-4.11(m,2H),4.01-3.91(m,10H),3.88-3.82(m,10H),3.81(s,1H),3.79-3.77(m,4H),3.76-3.73(m,12H),3.72-3.68(m,14H)。3.63-3.55(m,6H),3.09(t,J＝6.0Hz,2H),3.00(t,J＝6.4Hz,4H),1.88(s,6H)。
实施例6：二价GalNAc配体B全氟苯基酯(化合物I-110)的合成
将化合物5D(1eq.)和中间体B(1eq.)在室温和搅拌下溶解于DMSO中。添加四氟硼酸四(乙腈)铜(I)(3eq.)并将所得混合物在室温下搅拌至LC-MS指示完全转化为化合物I-110，该化合物I-110经由反相制备型HPLC被纯化并随后被冻干。
实施例7：1-(4-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-12-(2-(2-(2-(2-(4-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3,6,9,15,18,21-六氧杂-12-氮杂二十四烷-24-酸全氟苯基酯(二价GalNAc配体A全氟苯基酯，化合物I-111)的合成
向1-叠氮基-12-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3,6,9,15,18,21-六氧杂-12-氮杂二十四烷-24-酸全氟苯基酯(7B,1.0eq,0.050g,0.063mmol)和N-((2R,3R,4R,5R,6R)-2-(丁-3-炔-1-基氧基)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(中间体A,2.0eq,0.034g,0.127mmol)在二甲基亚砜(2mL)中的溶液中添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(5.0eq,0.118g,0.317mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(45-75％的在含0.1％三氟乙酸的水中的乙腈)进行纯化。将含有所需化合物的级分合并并冻干以得到1-(4-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-12-(2-(2-(2-(2-(4-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3,6,9,15,18,21-六氧杂-12-氮杂二十四烷-24-酸全氟苯基酯(化合物I-111)，为浓稠浆状物。产率：0.044g,52.01％；LCMS m/z 1336.70[M+1]+；1H-NMR(400MHz,D2O)δ7.86(s,2H),4.65-4.61(m,4H),4.47(d,J＝8.0Hz,2H),4.22-4.16(m,2H),4.10-3.91(m,10H),3.92-3.82(m,10H),3.82-3.79(m,4H),3.75-3.62(m,26H),3.59-3.57(m,6H),4.47(t,J＝6.0Hz,2H),2.99(t,J＝5.6Hz,4H),1.87(s,6H)。
实施例8：GalNac配体A全氟苯基酯(化合物I-112)的合成
向化合物3E(1.0eq,0.50g,0.929mmol)在四氢呋喃(5mL,10vol.)中的溶液中添加化合物8A(1.0eq,0.203g,0.929mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.0eq,0.34mL,1.86mmol)。让反应混合物在室温下搅拌2小时。通过LCMS监测反应的进展。当完成时，将反应混合物用乙腈稀释并通过反相制备型HPLC(55-65％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)进行纯化。将含有所需产物的级分合并并冻干至干以得到1-叠氮基-13-氧代-3,6,9,16,19-五氧杂-12-氮杂二十二烷-22-酸全氟苯基酯(化合物8B)，为无色粘稠液体。产率：0.130g,23％；LCMS m/z573.25[M+1]+。
向化合物8B(1.0eq,0.070g,0.122mmol)在二甲基亚砜(2mL)中的溶液中添加中间体A(1.0eq,0.0334g,0.122mmol)。将反应混合物搅拌5分钟，然后添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.5eq,0.100g,0.306mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。通过LCMS监测反应的进展。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(35-55％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)进行纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物I-112，为无色粘稠液体。产率：0.015g,14.5％；LCMS m/z 846.33[M+1]+；1H NMR(400MHz,D2O)7.83(s,1H),4.60-4.58(m,2H),4.43(d,J＝8.4Hz,1H),4.17-4.13(m,1H),3.97-3.90(m,5H),3.88-3.72(m,6H),3.70-3.49(m,16H),3.37-3.34(m,2H),3.05(t,J＝6.0Hz,2H),2.96(t,J＝6.0Hz,2H),2.50(t,J＝6.0Hz,2H),1.84(s,3H)。
实施例9：1-(4-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4,6-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13-氧代-3,6,9,16,19-五氧杂-12-氮杂二十二烷-22-酸全氟苯基酯(化合物I-113)的合成
化合物I-113是通过修改用于合成I-112的程序从而将中间体A用中间体B代替来制备。
实施例10：化合物I-114至I-118的合成
向1-叠氮基-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷-21-酸全氟苯基酯(10A)(1.0eq,0.0998g,0.183mmol)在二甲基亚砜(1mL)中的溶液中添加中间体A(1.0eq,0.050g,0.183mmol)并搅拌5分钟。然后，添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.5eq,0.170g,0.457mmol)并将反应混合物在室温搅拌1小时。通过LC-MS监测反应的进展。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(30-45％的在含0.1％乙酸的水中的乙腈)进行纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物I-114，为灰白色固体。产率：0.022g,14.1％；LC-MS m/z819.24[M+1]+；1H NMR(400MHz,D2O)δ7.81(s,1H),4.57-4.55(m,2H),4.40(d,J＝19.2Hz,1H),4.16-4.11(m,1H),3.94-3.85(m,6H),3.80-3.73(m,3H),3.71-3.59(m,22H),3.04(t,J＝5.6Hz,2H),2.94(t,J＝6.0Hz,2H),1.81(s,3H)。
化合物I-115至I-118是通过修改用于化合物I-114的程序来制备。下面列出了化合物I-115至I-118中每一者的结构和相应数据：
实施例11：中间体C的合成
向活化的4分子筛和[(2R,3R,4R,5R,6S)-3,4,6-三(乙酰基氧基)-5-乙酰胺基噁烷-2-基]甲基乙酸酯(C-1)(1eq.)中添加二氯甲烷。向反应混合物中添加丁-3-炔-1-胺(3eq)。让反应混合物冷却至0℃，然后添加三氟硼酸二乙酯(2eq)。将反应物在室温下搅拌，并然后加热至回流，持续16小时。添加NaHCO3水溶液以淬灭三氟硼酸二乙酯，并分配DCM层并将其经MgSO4干燥。过滤该溶液并将其在旋转蒸发仪上浓缩。使用以60-75％的在二氯甲烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的硅胶柱纯化得到中间体C-2。
将中间体C-2(1eq.)溶解于甲醇中并冷却至0℃。向该溶液中逐滴添加25％w/v在甲醇中的甲醇钠(10eq)。将反应物维持在室温下3小时。反应完成后，逐滴添加1N HCl以淬灭甲醇钠。蒸发甲醇并用乙醚洗涤得到的残留物。用制备型HPLC HPLC(5-20％的在含0.1％TFAH的水中的乙腈)纯化得到的粗残留物以得到中间体C。
实施例12：化合物I-120的合成
将化合物5D(1eq.)和中间体C(1eq.)在室温和搅拌下溶解于DMSO中。添加四氟硼酸四(乙腈)铜(I)(3eq.)并将所得混合物在室温下搅拌至LC-MS指示完全转化为化合物I-120，该化合物I-120经由反相制备型HPLC被纯化并随后被冻干。
实施例13：化合物I-146的合成
使用化合物17A代替化合物8A采用针对化合物8B描述的程序合成化合物17B。使用化合物17B代替化合物8B(32mg)采用针对化合物I-8描述的程序合成化合物I-146。LC-MSm/z 978.3[M+1]+。
实施例14：化合物I-122的合成
在室温下向化合物A-1(1.0eq,5.05g,13.0mmol)和N-[3-(5-羟基戊酰胺基)丙基]氨基甲酸苄酯(化合物18A)(1.0eq,4.00g,13.0mmol)在二氯甲烷(50.0mL)中的溶液中逐滴添加三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(1.1eq,2.52mL,14.3mmol)。将反应混合物在40℃下搅拌5小时。完成后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭并用二氯甲烷萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并在高真空下浓缩得到粗品。通过使用0-30％的在水中的乙腈的反相色谱法纯化该粗品，得到化合物18B，为黄色粘稠液体，产率：(5.80g,70.12％)；LCMS m/z638.2[M+1]+
向化合物18B(1.0eq,4.80g,7.53mmol)在甲醇(40.0mL)中的溶液中添加10％钯碳(1.60g)并在室温和氢气气氛下搅拌4小时。完成后，将反应混合物通过注射器过滤器过滤，浓缩滤液并干燥以得到粗品。将粗品与乙醚一起研磨以得到化合物18C，为淡黄色粘稠液体。产率：(3.4g,80.73％)；LCMS m/z504.37[M+1]+。
将3-(2-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-3-[3-氧代-3-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)丙氧基]-2-{[3-氧代-3-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)丙氧基]甲基}丙氧基)丙酸2,3,4,5,6-五氟苯酯(18D)(1.0eq,1.20g,1.24mmol)和化合物18C(3.0eq,1.87g,3.71mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30.0mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物浓缩并干燥以得到粗品。将该粗品通过使用20％的在二氯甲烷中的甲醇的快速柱色谱法纯化，得到化合物18E，为淡黄色粘稠液体。产率：(1.60g；67.05％)；LCMS m/z 1926.78[M-1]-。
向化合物18E(1.0eq,1.60g,0.830mmol)在甲醇(20mL)和乙酸(1.0mL)中的溶液中添加10％钯碳(250mg)。将反应混合物在室温和氢气气氛下搅拌16小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤，浓缩滤液并干燥以得到化合物18F，为淡黄色粘稠液体。产率：1.45g(粗品)；LCMS m/z 1794.05[M+1]+。
在0℃下向化合物18F(1.0eq,1.45g,0.808mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中添加25％甲醇钠溶液(8.0eq,1.45mL,6.47mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成反应后，将反应混合物浓缩并干燥以得到粗品。将该粗品用乙腈稀释并通过制备型HPLC(30％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物18G，为灰白色半固体。产率：(0.20g,17.4％)；LCMS m/z 1415.77[M+1]+。
向化合物18G(1.0eq,0.090g,0.0636mmol)在二甲基亚砜(1.00mL)中的溶液中添加化合物3E(1.0eq,0.030g,0.0636mmol)并在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(42％的含0.1％乙酸的水中的乙腈(0-13min))纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物I-122，为灰白色固体。产率：0.004g,3.55％；LC-MS m/z 1769.93[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.84(bs,3H),7.73(bs,3H),7.63(d,J＝9.2Hz,3H),7.13(s,1H),4.58-4.54(m,4H),4.47(bs,3H),4.22(d,J＝8.8Hz,3H),3.77-3.67(m,12H),3.53-3.52(m,30H),3.32-3.27(m,4H),3.02(bs,14H),2.29(t,J＝6.0Hz,6H),2.05(t,J＝7.2Hz,6H),1.79(s,9H),1.50-1.41(m,18H)。
实施例15：N-[1,3-双(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙烷-2-基]-12-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)十二烷酰胺(化合物I-123)的合成
向12-氨基十二烷酸(19A)(2.00g,9.29mmol)在乙酸(15.00ml)中的溶液中添加2,5-二氢呋喃-2,5-二酮(1.09g,11.1mmol)，并将反应混合物在120℃下回流16小时。完成后，将反应混合物在真空下浓缩以得到粗化合物，将粗化合物通过使用硅胶和5％的在二氯甲烷中的甲醇作为洗脱剂的快速柱色谱法纯化，得到化合物19B，为灰白色固体。产率：1.60g(57.17％)；LCMS m/z 294.3[M-1]-。
向在0℃下的化合物19B(0.300g,1.02mmol)在四氢呋喃(15.00mL)中的溶液中添加五氟苯酚(168mg,0.914mmol)和二异丙基甲烷二亚胺(0.192mL,1.22mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物浓缩以得到粗产物，将该粗产物通过使用硅胶和5％至7％的在己烷中的乙酸乙酯作为洗脱剂的快速柱色谱法纯化，得到化合物19C，为灰白色固体。产率：0.250g(53.34％)LCMS m/z 479.0[M+18]+。
向化合物18G(0.060g,0.04mmol)在二甲基亚砜(1.0mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(0.015mL,0.084mmol)和化合物19C(0.019g,0.04mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(25-45％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物I-123，为灰白色固体。产率：0.0035g,4.88％；LC-MS m/z 1692.93[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.83(t,J＝5.2Hz,3H),7.73(t,J＝6.0Hz,3H),7.61(d,J＝9.6Hz,3H),6.98(s,3H),4.57-4.53(m,7H),4.22(d,J＝8.4Hz,3H),3.72-3.63(m,9H),3.55-3.51(m,20H),3.37-3.27(m,10H),3.04-3.01(m,12H),2.29(t,J＝6.4Hz,6H),2.05(t,J＝6.8Hz,6H),1.81(bs,8H),1.51-1.41(m,24H),1.21(s,14H)。
实施例16：化合物I-124和I-132的合成
向在0℃下的十二烷二酸(20A)(1.00g,4.34mmol)在乙酸乙酯(10.00mL)中的溶液中添加五氟苯酚(1.60g,8.68mmol)和二异丙基甲烷二亚胺(1.91mL,13.0mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤并将滤液在减压下浓缩，得到粗化合物。将得到的粗化合物通过使用5％的在己烷中的乙酸乙酯的硅胶柱快速柱色谱法纯化，得到化合物20B，为灰白色固体。产率：1.00g(40.95％)；LCMS m/z 580.39[M+18]+。
向化合物18G(45.0mg,0.031mmol)在二甲基亚砜(1.0mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(0.016mL,0.093mmol)和化合物20B(17.9mg,0.031mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将反应混合物经由制备型HPLC(40-60％的在含0.1％三氟乙酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物I-124，为灰白色固体。产率：0.006g(10.52％)；LCMS m/z 1793.94[M+1]+,897.99[M/2+1]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.83(t,J＝5.6Hz,3H),7.73(t,J＝5.2Hz,3H),7.60(d,J＝9.2Hz,3H),6.99(s,1H),4.57-4.47(m,6H),4.46(d,J＝4.4Hz,3H),4.21(d,J＝8.4Hz,3H),3.70-3.63(m,9H),3.55-3.49(m,21H),3.32-3.28(m,4H),3.02(t,J＝5.6Hz,12H),2.76(t,J＝5.6Hz,2H),2.27(t,J＝6.4Hz,6H),2.03(t,J＝7.2Hz,8H),1.79(s,9H),1.70-1.67(m,2H),1.52-1.41(m,20H),1.23(bs,14H)。
通过修改针对化合物I-124的程序合成化合物I-132。下面列出了化合物I-132的结构：
实施例17：化合物I-163的合成
向化合物I-124(1eq,17.2mg.0.00959mmol)和1-(2-氨基乙基)吡咯-2,5-二酮盐酸盐(1.1eq,1.86mg,0.00105mmol)在NMP(0.5mL)中的混合物中添加DIEA(3eq,5uL,0.0288mmol)。将该混合物在室温下搅拌10分钟并添加乙酸(4uL)。将混合物通过制备型HPLC(10-40％ MeCN/含0.1％ TFA的水)纯化，得到化合物I-163，为白色固体(10.1mg，产率64％)。(纯度：99％)。LCMS m/z 1751.0[M+H]+。
实施例18：化合物I-125和I-145的合成
向化合物18G(1.0eq,0.10g,0.070mmol)在二甲基亚砜(1.00mL)中的溶液中添加乙基双(丙烷-2-基)胺(3.0eq,39.1μL,0.212mmol)和4,7,10,13,16,19,22,25,28-九氧杂三十一烷二酸双(2,3,4,5,6-五氟苯基)酯(21A)(1.0eq,0.0598g,0.070mmol)并在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(50％的在含0.1％乙酸的水中的乙腈(0-10min))纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物I-125，为灰白色固体。产率：0.006g,4.09％；LC-MS m/z 1039.74[M/2+1]+；1HNMR(400MHz,D2O)δ4.45(d,J＝8.4Hz,3H),3.96-3.83(m,11H),3.80-3.58(m,61H),3.24-3.19(m,12H),3.10(t,J＝5.6Hz,2H),2.52-2.47(m,8H),2.27(t,J＝6.0Hz,6H),2.02(s,9H),1.75-1.70(m,6H),1.58-1.50(m,12H),1.35-1.34(m,1H)。
通过修改针对化合物I-125合成的程序合成化合物I-145。下面列出了化合物I-145的结构和数据。
MS(ESI)m/z,1858[M+1]+,729[M/2+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.83(t,J＝5.6Hz,3H),7.35(t,J＝5.2Hz,3H),7.61(d,J＝8.8Hz,3H),7.13(s,1H),4.59-4.54(m,6H),4.46(d,J＝4.4Hz,3H),4.21(d,J＝8.4Hz,3H),3.76-3.70(m,2H),3.67-3.63(m,10H),3.55-3.46(m,34H),3.14(s,2H),3.32-3.28(m,2H),3.02(t,J＝6Hz,16H),2.27(t,J＝6Hz,6H),2.03(t,J＝7.2Hz,6H),1.79(s,9H),1.51-139(m,20H)。
实施例19：化合物I-159和I-170的合成
根据针对化合物I-125的程序用中间体22-B替换21-A合成化合物I-159。
下面列出了化合物I-159的结构和数据：
LCMS m/z 1698.9[M+H]+。
根据针对化合物I-125和I-159的程序用3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2,5-二氧代吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(2,3,4,5,6-五氟苯基)酯替换中间体22-B(3-[2-[2-[2-(2,5-二氧代吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(2,3,4,5,6-五氟苯基)酯)合成化合物I-170。
下面列出了化合物I-170的结构和数据：
LCMS m/z 1831.7[M+H]+。
实施例20：化合物I-127和I-129的合成
向3,3’-((2-((3-氧代-3-(全氟苯氧基)丙氧基)甲基)-2-(戊-4-炔酰胺基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸双(全氟苯基)酯(23A)(1.0eq,0.500g,0.54mmol)和化合物18C(4.0eq,1.3g,2.16mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(6.0eq,0.59mL,3.24mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物浓缩并干燥以得到化合物23B，为淡棕色粘稠液体。产率：3.0g(粗品)，LCMS m/z 937.4[M+2H]++。
向化合物23B(1.0eq,3.0g,1.60mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中添加甲醇钠(25％的在甲醇中的溶液)(10.0eq,3.92mL,16.0mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。通过ELSD监测反应。完成后，将反应混合物用Dowex50WX8氢型(200-400目)中和并过滤。将滤液浓缩以得到粗品，将粗品用乙腈稀释并通过制备型HPLC(13-25％的在水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物23C，为灰白色固体。产率：0.380g,15.45％；LCMS m/z 748.35[M+2H]++。
向化合物23C(1.0eq,0.040g,0.026mmol)在二甲基亚砜(1.0mL)中的溶液中添加化合物13A(1.2eq,0.010g,0.032mmol)并搅拌5分钟。然后，添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.8eq.,0.027g,0.074mmol)并将反应混合物在室温下搅拌15分钟。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(20-45％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)进行纯化。合并含有所需产物的级分并将其冷冻至干，得到化合物I-127，为灰白色固体。产率：0.008g,16.6％；LCMS m/z 911.31[M+2H]++；1H NMR(400MHz,D2O)δ7.71(s,1H),4.57-4.54(m,3H),4.39(d,J＝8.4Hz,4H),3.94(t,J＝8.4Hz,2H),3.91-3.79(m,10H),3.76-3.72(m,5H),3.69-3.67(m,2H),3.65-3.63(m,10H),3.58(bs,5H),3.55-3.52(m,4H),3.18-3.13(m,12H),2.95(t,J＝5.2Hz,2H),2.81(t,J＝6.8Hz,2H),2.49-2.46(m,2H),2.44-2.41(m,6H),2.19-2.17(m,6H),1.98(s,9H),1.69-1.62(m,6H),1.60-1.49(m,12H)。
通过修改针对化合物I-127的合成程序合成化合物I-129。下面列出了化合物I-129的结构和数据。
LCMS m/z 1065.25[M+2H]++。
1H NMR(400MHz,D2O)δ7.81(s,1H),4.55(bs,2H),4.39(d,J＝8.4Hz,3H),3.89-3.82(m,12H),3.78-3.74(m,5H),3.71-3.58(m,51H),3.19-3.14(m,12H),3.04(t,J＝5.2Hz,2H),2.91(t,J＝7.2Hz,2H),2.56(t,J＝7.6Hz,2H),2.42(bs,6H),2.21-2.10(m,6H),1.98(s,9H),1.66(t,J＝6.8Hz,6H),1.53(bs,12H)。
实施例21：1-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-16-((3-((3-(5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-5,11,18-三氧代-14-氧杂-6,10,17-三氮杂二十九烷-29-酸全氟苯基酯(化合物I-144)的合成
在0℃下向搅拌的2-氨基丙烷-1,3-二醇(21-1,1.00g,11.0mmol)在二甲基亚砜(27mL)中的溶液中添加氢氧化钠水溶液(3.62mmol/L,4mL)。逐渐添加溶解于二甲基亚砜(4.0mL)中的丙烯酸叔丁酯(3.52g,27.4mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。向反应混合物中添加水，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤并经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到粗品，将粗品通过使用30％的在己烷中的乙酸乙酯的硅胶柱色谱法纯化，得到3,3’-((2-氨基丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸二叔丁酯(21-2)。产率：1.20g,32％。ESI-MS m/z:348.0(M+H)+
向搅拌的3,3’-((2-氨基丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸二叔丁酯(21-2,1.20g,3.45mmol)在1,4-二噁烷(20.0mL)中的溶液中添加溶于水(4.0mL)中的碳酸钠(0.54g,5.18mmol)。然后将反应混合物放在冰浴处，并向其中添加氯甲酸苄酯(0.74mL,5.18mmol)。10分钟后，移除冰浴并在室温下再搅拌3小时。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到粗产物，将该粗产物通过使用4％至7％的在二氯甲烷中的甲醇的快速柱色谱法纯化，得到3,3’-((2-(((苄基氧基)羰基)氨基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸二叔丁酯(21-3)。产率：1.0g,60.12％；LCMS m/z 482.0[M+1]+。
将3,3’-((2-(((苄基氧基)羰基)氨基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸二叔丁酯(21-3,1.00g,11.0mmol)在甲酸(5.0mL)中的溶液在室温下搅拌48小时。将反应混合物减压浓缩，得到粗3,3’-((2-(((苄基氧基)羰基)氨基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸(21-4)。将得到的粗产物照原样用于下一反应。产率：0.380g,49.29％；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.38-7.29(m,5H),7.14(d,J＝8Hz,1H),5.01(s,1H),3.72(t,J＝6.8Hz,4H)3.34(d,J＝6Hz.,4H),2.42(t,J＝6Hz4H)。
向搅拌的3,3’-((2-(((苄基氧基)羰基)氨基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸(21-4,0.750g,2.03mmol)在乙酸乙酯(10.0mL)中的溶液中添加二异丙基甲烷二亚胺(0.894mL,3.0eq.,6.09mmol)和五氟苯酚(5.86g,5.0eq.,31.8mmol)在乙酸乙酯(10.0mL)中的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，将反应混合物经硅藻土垫过滤并将滤液减压浓缩以得到粗品。将粗品通过使用硅胶(100-200目)并在20-30％的在己烷中的乙酸乙酯中洗脱的柱色谱法纯化，得到3,3’-((2-(((苄基氧基)羰基)氨基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸双(全氟苯基)酯(21-5)，为灰白色固体。产率：0.69g,47.96％1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.32(s,5H),7.13(d,J＝8Hz,1H),4.99(s,2H),4.10-3.94(m,5H)3.42(t,J＝6Hz.,4H),3.00(t,J＝5.6Hz 4H)。
向搅拌的3,3’-((2-(((苄基氧基)羰基)氨基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸双(全氟苯基)酯(21-5,0.680g,1.0eq,0.969mmol)和(2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-((5-((3-氨基丙基)氨基)-5-氧代戊基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(21-6,1.95g,4.0eq.,3.88mmol)在乙腈中的溶液中添加DIPEA，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将溶剂减压蒸发以得到粗品，将该粗品通过使用10％的在二氯甲烷中的甲醇的快速色谱法纯化，得到(2R,2’R,3R,3’R,4R,4’R,5R,5’R,6R,6’R)-((16-(((苄基氧基)羰基)氨基)-5,11,21,27-四氧代-14,18-二氧杂-6,10,22,26-四氮杂三十一烷-1,31-二基)双(氧基))双(5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-6,3,4-三基)四乙酸酯(21-7)，为无色液体。产率：1.10g,62.94％；LCMS m/z 670.8[M/2+1]+。
向搅拌的((2R,2’R,3R,3’R,4R,4’R,5R,5’R,6R,6’R)-((16-(((苄基氧基)羰基)氨基)-5,11,21,27-四氧代-14,18-二氧杂-6,10,22,26-四氮杂三十一烷-1,31-二基)双(氧基))双(5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-6,3,4-三基)四乙酸酯(21-7,1.10g,0.821mmol)在甲醇(10.0mL)中的溶液中添加乙酸(0.0469mL,0.821mmol)和10％钯碳(0.300g)，并将反应混合物在氢气气氛下在室温搅拌2小时。然后，让反应混合物通过硅藻土垫并将滤液减压蒸发，得到粗品(2R,2’R,3R,3’R,4R,4’R,5R,5’R,6R,6’R)-((16-氨基-5,11,21,27-四氧代-14,18-二氧杂-6,10,22,26-四氮杂三十一烷-1,31-二基)双(氧基))双(5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-6,3,4-三基)四乙酸酯(21-8)，为无色液体。产率：0.850g(粗品)；LCMS m/z 1206.20[M+1]+。
在室温下向搅拌的(2R,2’R,3R,3’R,4R,4’R,5R,5’R,6R,6’R)-((16-氨基-5,11,21,27-四氧代-14,18-二氧杂-6,10,22,26-四氮杂三十一烷-1,31-二基)双(氧基))双(5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-6,3,4-三基)四乙酸酯(21-8,0.830g,0.688mmol)在甲醇(10.0mL)中的溶液中添加甲醇钠(25％的在甲醇中的溶液，0.330mL,12.0eq.,8.26mmol)，并将反应混合物在相同温度下搅拌30分钟。然后，将反应混合物用1N盐酸淬灭并将该溶液在冻干下干燥，得到N,N’-(10-氨基-5,15-二氧代-8,12-二氧杂-4,16-二氮杂十九烷-1,19-二基)双(5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺)(21-9)，为淡棕色固体。产率：0.700g,98.10％；LCMS m/z 954.2[M+1]+。
在室温下向搅拌的N,N’-(10-氨基-5,15-二氧代-8,12-二氧杂-4,16-二氮杂十九烷-1,19-二基)双(5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺)(21-9,0.200g,0.210mmol)在二甲基亚砜(2.00mL)中的溶液中添加12-氧代-12-(2,3,4,5,6-五氟苯基)十二烷酸2,3,4,5,6-五氟苯酯(9a,0.172g,1.5eq.,0.314mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.0366mL,0.210mmol)，并将反应混合物在相同温度下搅拌1小时。通过LC-MS监测反应的进展，完成后，将反应混合物通过制备型HPLC(45-55％的在含0.5％TFA缓冲液的水中的乙腈)纯化，得到1-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-16-((3-((3-(5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-5,11,18-三氧代-14-氧杂-6,10,17-三氮杂二十九烷-29-酸全氟苯基酯(化合物I-144)，为白色固体。产率：0.026g,9.0％；LCMS m/z 1332.98[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6加D2O)δ4.20(d,J＝8.4Hz,2H),3.92-3.90(m,2H),3.67-3.62(m,6H),3.55-3.50(m,3H),3.41-3.38(m,3H),3.35-3.25(m,8H),3.05-2.95(m,8H),2.74(t,J＝7.2Hz,2H),2.30-2.25(m,4H),2.17(t,J＝6.8Hz,1H),2.05-1.98(m,6H),1.85(s,6H),1.68-1.60(m,2H),1.55-1.38(m,16H),1.37-1.14(m,15H)。
实施例22：化合物I-131和I-133的合成
N,N'-(10-(12-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)十二烷酰胺基)-5,15-二氧代-8,12-二氧杂-4,16-二氮杂十九烷-1,19-二基)双(5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺)(化合物I-131)
使用化合物27A代替化合物9A通过采用针对化合物I-144描述的程序合成化合物I-131，得到N,N’-(10-(12-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)十二烷酰胺基)-5,15-二氧代-8,12-二氧杂-4,16-二氮杂十九烷-1,19-二基)双(5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺)(化合物I-131)，为白色固体。产率：0.026g,9.0％；LCMS m/z1231.91[M+1]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6,D2O交换)δ6.94(s,1H),4.20(d,J＝8.4Hz,2H),3.90(t,J＝10.8Hz,1H),3.70-3.63(m,4H)3.56-3.40(m,8H),3.37-3.29(m,13H)3.02-3.00(m,8H)2.27(t,J＝11.6Hz,4H),2.05(t,J＝6.4Hz,4H),1.79(s,6H),1.49-1.41(m,16H),1.19(s,15H)。
N-(2-(3-((3-(5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙基)-12-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)十二烷酰胺(化合物I-133)可通过修改针对化合物I-131的程序来合成。下面列出了化合物I-133的化合物结构和数据。
LC-MS；m/z 770.43[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6与D2O交换)δ6.93(s,2H),4.19(d,J＝8.4Hz,1H),3.60-3.57(m,2H),3.57(t,J＝6.4Hz,2H),3.53-3.44(m,2H),3.40-3.27(m,7H),3.15-3.13(m,2H),3.01(brs,4H),2.28(t,J＝6Hz,2H),2.02(br t,J＝7Hz,4H),1.78(s,3H),1.46(m,9H),1.18(br m,15H)。
实施例23：1-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-5,16-二氧代-9,12-二氧杂-6,15-二氮杂二十七烷-27-酸全氟苯基酯(I-150)
将5-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢吡喃-2-基]氧基戊酸(中间体C)(1.00eq,109mg,0.244mmol)和HATU(1.45eq,134mg,0.353mmol)的混合物溶于DMF(1.2mL)中，然后添加N,N-二异丙基乙胺(2.00eq,85mL,0.487mmol)，并随后添加叠氮基-PEG2-胺(1.10eq,42mL,0.268mmol)。30分钟后，将反应物过滤，然后直接通过反相HPLC(10-80％的在含0.1％甲酸的水中的乙腈)纯化，得到[(2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二乙酰氧基-6-[5-[2-[2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基]乙基氨基]-5-氧代-戊氧基]四氢吡喃-2-基]甲基乙酸酯(中间体D)。产率：136mg,92.5％。LCMSm/z 604.3[M+H]+。
将[(2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二乙酰氧基-6-[5-[2-[2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基]乙基氨基]-5-氧代-戊氧基]四氢吡喃-2-基]甲基乙酸酯(中间体D)(1.00eq,130mg,0.215mmol)在乙腈(1mL)和THF(0.500mL)中的溶液用三苯基膦(3.00eq,169mg,0.646mmol)处理2小时，然后添加水(0.500mL)。在室温下搅拌反应物过夜。将挥发性组分减压移除并将残留物通过反相HPLC(10-100％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)纯化，得到[(2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二乙酰氧基-6-[5-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基氨基]-5-氧代-戊氧基]四氢吡喃-2-基]甲基乙酸酯(中间体E)，为TFA盐。产率：40mg,26％。LCMS m/z 578.2[M+H]+。
将[(2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二乙酰氧基-6-[5-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基氨基]-5-氧代-戊氧基]四氢吡喃-2-基]甲基乙酸酯；2,2,2-三氟乙酸(中间体E)(1.00eq,40.0mg,0.0463mmol)在甲醇(116mL)中的溶液用0.75M在甲醇中的甲醇钠溶液(1.00eq,62mL,0.0463mmol)处理，直至达到pH>8(5eq)，然后添加0.75M在甲醇中的甲醇钠(1.00eq,62mL,0.0463mmol)的另一次加料，并将反应物在室温下搅拌。在24小时后，将反应物用4M在二噁烷中的HCl(1.00eq,0.046mL,0.0463mmol)酸化，然后将挥发性组分减压移除。将粗材料在未经进一步纯化的情况下用于下一步骤中。LCMS m/z488.2[M+H]+。
将5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-N-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)戊酰胺盐酸盐(中间体F)(1.00eq,20.0mg,0.0410mmol)和三乙胺(2.00eq,11mL,0.0820mmol)在DMF(0.439mL)中的浆料添加到十二烷二酸双(2,3,4,5,6-五氟苯基)酯(2.50eq,57.6mg,0.102mmol)在DMF(0.439mL)中的溶液中，并将反应物在室温下搅拌。30分钟后，将反应物用DMSO稀释，过滤，然后通过反相HPLC(20-80％的在水中的乙腈)纯化，得到标题化合物12-[2-[2-[2-[5-[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]氧基戊酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙基氨基]-12-氧代-十二烷酸(2,3,4,5,6-五氟苯基)酯(I-150)，为白色固体，产率：13mg,34％。LCMS m/z 830.2[M+H]+。
化合物I-149和I-151可通过修改针对化合物I-150合成的程序而获得。下面列出了I-149和I-151的结构和LCMS数据。
LCMS m/z 786.2[M+H]+。
LCMS m/z 874.2[M+H]+。
实施例24：12-((3-(5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-12-氧代十二烷酸全氟苯基酯(I-164)的合成
将(2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-((5-((3-氨基丙基)氨基)-5-氧代戊基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯乙酸酯(ISP2-99-3a)(1.00eq,80.0mg,0.159mmol)在甲醇(530uL)中的溶液用1M在甲醇中的甲醇钠溶液(1.40eq,223μL,0.223mmol)处理。在18小时后，将反应物用1M HCl水溶液(0.500eq,79μL,0.0794mmol)酸化，直至该溶液变为酸性(pH～3)。将反应物减压浓缩，得到粗品5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-N-(3-氨基丙基)戊酰胺(中间体3b)，为HCl盐。将该材料在未经进一步纯化的情况下用于下一步骤中。产率：90mg。LCMS m/z 378.2[M+H]+。
将5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-N-(3-氨基丙基)戊酰胺(中间体3b)(1.00eq,10.0mg,0.0265mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.00eq,4.6mL,0.0265mmol)在DMF(265mL)中的溶液添加到冰冷的十二烷二酸双(2,3,4,5,6-全氟苯基)酯(2.00eq,29.8mg,0.0530mmol)在DMF(265mL)中的溶液中，并将反应物在0℃下搅拌1小时。将反应溶液用一滴甲酸酸化，然后直接通过制备型HPLC(10-100％在含0.1％甲酸的水中的乙腈)纯化，得到12-((3-(5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-12-氧代十二烷酸全氟苯基酯(I-164)，为白色固体。产率：6.5mg,32％。LCMS m/z778.34[M+Na]+。
实施例25：1-(4-(3-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13,13-双(3-((2-(2-(2-(4-(3-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(化合物编号I-135)
向1-叠氮基-13,13-双(3-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(131A,1.0eq,0.095g,0.086mmol)在二甲基亚砜(2.0mL)中的溶液中添加N-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-(戊-4-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(XB7,3.0eq,0.074g,0.26mmol)并搅拌5分钟。然后，加入六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(8.4eq,0.272g,0.729mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(33-53％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有期望产物的级分并冷冻至干，得到1-(4-(3-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13,13-双(3-((2-(2-(2-(4-(3-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(化合物编号I-135)，为灰白色固体。产率：0.036g,19.2％；LCMS m/z978.89[M+2H]++；1H NMR(400MHz,DMSO-d6加D2O)δ7.76(s,3H),4.42(t,J＝5.2Hz,6H),4.22(d,J＝8.8Hz,3H),3.75-3.68(m,11H),3.63-3.62(m,3H),3.54-3.46(m,13H),3.43-3.42(m,8H),3.40-3.37(m,4H),3.35-3.24(m,10H),3.12(t,J＝5.6Hz,6H),2.71(t,J＝7.2Hz,2H),2.61-2.57(m,6H),2.05-1.92(m,7H),1.79(s,9H),1.76-1.73(m,10H),1.62-1.60(m,2H),1.45-1.41(m,2H),1.36-1.29(m,2H),1.25-1.16(m,10H)。
实施例26：1-(4-((((2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二羟基-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13,13-双(3-((2-(2-(2-(4-((((2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二羟基-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(化合物编号I-136)
向1-叠氮基-13,13-双(3-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(132A,1.0eq,0.160g,0.146mmol)在二甲基亚砜(3mL)中的溶液中添加N-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-2-甲氧基-6-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(XB3,3.0eq,0.120g,0.439mmol)和六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(8.4eq,0.458g,1.23mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(用30-57％的在含0.1％TFA的水中的乙腈从C18柱洗脱)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到1-(4-((((2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二羟基-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13,13-双(3-((2-(2-(2-(4-((((2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二羟基-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(化合物编号I-136)，为灰白色固体。产率：0.055g,19.6％；LCMS m/z 957.74[M+2H]++；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.04(s,3H),7.81-7.80(m,2H),7.63(d,J＝8.8Hz,2H),7.11(s,1H),4.54(d,J＝4.4Hz,5H),4.50(t,J＝5.2Hz,6H),4.16(d,J＝8.4Hz,3H),3.80(t,J＝5.2Hz,8H),3.76-3.69(m,4H),3.63-3.56(m,12H),3.52-3.49(m,14H),3.47-3.44(m,11H),3.29(s,9H),3.20(s,1H),3.15(d,J＝6.0Hz,8H),2.76(t,J＝6.8Hz,2H),2.03-1.96(m,9H),1.83-1.76(m,11H),1.71-1.63(m,2H),1.45-1.40(m,2H),1.36-1.32(m,2H),1.28-1.20(m,12H)。
实施例27：1-[4-(2-{[1,3-双(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙烷-2-基]氨基甲酰基}乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-二十四氧杂七十五烷-75-酸2,3,4,5,6-五氟苯酯(化合物编号I-137)
向1-叠氮基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-二十四氧杂七十五烷-75-羧酸(27-1,1.0eq,0.050g,0.042mmol)在二氯甲烷(1.0mL)中的溶液中添加五氟苯酚(27-1a,1.1eq,0.008g,0.046mm ol)和N,N’-二异丙基碳二亚胺(1.5eq,0.008g,0.064mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，通过注射器过滤器过滤，将滤液浓缩并干燥，得到1-叠氮基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-二十四氧杂七十五烷-75-酸2,3,4,5,6-五氟苯酯(27-2)，为无色粘性固体。产率：0.070g(粗品)，LCMS m/z 669.8[M+2H]++。
向[(2R,3R,4R,5R,6R)-3,4-双(乙酰基氧基)-6-{4-[(3-{3-[3-(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-双(乙酰基氧基)-6-[(乙酰基氧基)甲基]-3-乙酰胺基噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-双(乙酰基氧基)-6-[(乙酰基氧基)甲基]-3-乙酰胺基噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]-2-(戊-4-炔酰胺基)丙氧基]丙酰胺基}丙基)氨基甲酰基]丁氧基}-5-乙酰胺基噁烷-2-基]甲基乙酸酯(27-2a,1.0eq,0.030g,0.016mmol)在二甲基亚砜(0.5mL)中的溶液中添加1-叠氮基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-二十四氧杂七十五烷-75-酸2,3,4,5,6-五氟苯酯(27-2,2.0eq,0.042g,0.032mmol)并搅拌5分钟。然后，添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.8eq.,0.016g,0.044mmol)并将反应混合物在室温下搅拌15分钟。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(27-62％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到1-[4-(2-{[1,3-双(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙烷-2-基]氨基甲酰基}乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-二十四氧杂七十五烷-75-酸2,3,4,5,6-五氟苯酯(化合物编号I-137)，为无色粘性固体。产率：0.012g,25.93％；LCMS m/z 1417.18[M+2H]++；1H NMR(400MHz,D2O)δ7.82(s,1H),4.56(bs,3H),4.40(d,J＝8.4Hz,4H),3.90-3.82(m,14H),3.75-3.70(m,5H),3.67-3.49(m,111H),3.17(d,J＝6.4Hz,12H),3.05(t,J＝5.2Hz,2H),2.92(t,J＝7.6Hz,2H),2.57(t,J＝6.0Hz,2H),2.43(bs,6H),2.20(bs,6H),1.99(s,9H),1.71-1.66(m,6H),1.54(bs,12H)。
实施例28：11-{[1,5-双({[2-(2-{2-[4-(3-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-4-[(2-甲基丙酰基)氧基]噁烷-2-基]氧基}丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]乙氧基}乙氧基)乙基]氨基甲酰基})-3-(2-{[2-(2-{2-[4-(3-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-4-[(2-甲基丙酰基)氧基]噁烷-2-基]氧基}丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]乙氧基}乙氧基)乙基]氨基甲酰基}乙基)戊烷-3-基]氨基甲酰基}十一烷酸2,3,4,5,6-五氟苯酯(化合物编号I-138)
向1-叠氮基-13,13-双(3-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(LC 19,1.0eq,0.100g,0.091mmol)在二甲基亚砜(1mL)中的溶液中添加(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-2-(戊-4-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-4-基异丁酸酯(XB4,3.0eq,0.098g,0.274mmol)和六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(8.4eq.,0.286g,0.768mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物用乙酸淬灭并通过制备型HPLC(42-60％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到11-{[1,5-双({[2-(2-{2-[4-(3-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-4-[(2-甲基丙酰基)氧基]噁烷-2-基]氧基}丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]乙氧基}乙氧基)乙基]氨基甲酰基})-3-(2-{[2-(2-{2-[4-(3-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-4-[(2-甲基丙酰基)氧基]噁烷-2-基]氧基}丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]乙氧基}乙氧基)乙基]氨基甲酰基}乙基)戊烷-3-基]氨基甲酰基}十一酸2,3,4,5,6-五氟苯酯(化合物编号I-138)，为灰白色固体。产率：0.040g,20.2％；LCMS m/z 1083.15[M+2H]++；1H NMR(400MHz,DMSO-d6与D2O交换)δ7.76(s,3H),4.65-4.61(m,3H),4.41(t,J＝4.8Hz,6H),4.35(d,J＝8.4Hz,3H),4.01(dd,J＝8.4,10.8Hz,3H),3.80(d,J＝2.8Hz,3H),3.75(t,J＝5.2Hz,6H),3.72-3.65(m,3H),3.54-3.49(m,6H),3.47-3.45(m,6H),3.43-3.40(m,12H),3.32(t,J＝6.0Hz,6H),3.12(t,J＝5.6Hz,6H),2.70-2.67(m,2H),2.58(t,J＝5.6Hz,6H),2.53-2.47(m,26H),2.45-2.43(m,2H),2.02-1.95(m,8H),1.79-1.72(m,20H),1.61-1.60(m,2H),1.48-1.38(m,2H),1.27-1.17(m,14H),1.08-1.05(m,1H),1.03-0.99(m,18H)。
实施例29：N-(3-{3-[2-(3-{2-[2-({12-[2-(4-{1-[(2,5-二甲基苯基)甲基]-2-[羟基(吡啶-4-基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-6-基}-1H-吡唑-1-基)乙氧基]十二烷基}氨基甲酰基)乙氧基]乙氧基}丙酰胺基)-3-(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙氧基]丙酰胺基}丙基)-5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺(化合物编号I-139)
向在0℃下的3,3’-((2-氨基-2-((3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸二叔丁酯(29-1,1.0g,1.0eq,1.98mmol)在乙腈(15.0mL)中的溶液中添加3,3’-(乙烷-1,2-二基双(氧基))二丙酸双(全氟苯基)酯(0.958g,1.0eq,1.78mmol)在乙腈(15.0mL)中的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。然后，将反应混合物在20℃至25℃下减压浓缩并通过使用50％至90％的在水和作为缓冲剂的0.1％乙酸中的乙腈的反相制备型HPLC纯化。合并所需产物并将其减压(在20至25℃下)浓缩以移除大部分乙腈并冻干，得到6,6-双((3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)-8-氧代-4,11,14-三氧杂-7-氮杂十七烷二酸1-(叔丁基)17-(全氟苯基)酯(29-2)，为无色粘性胶状物。产率：0.45g(26.46％)。LCMS m/z 861.25[M+1]+。
在0℃下向6,6-双((3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)-8-氧代-4,11,14-三氧杂-7-氮杂十七烷二酸1-(叔丁基)酯17-(全氟苯基)酯(29-2,0.400g,1.0eq.,0.465mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中的溶液中添加溶于N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中的(6-(1-(2-((12-氨基十二烷基)氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-1-(2,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)(吡啶-4-基)甲醇(29-2a,0.296g,1.0eq.,0.465mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。然后，将反应混合物用水淬灭并用乙酸乙酯萃取，将有机层用水洗涤并浓缩以得到粗化合物，将该粗化合物通过使用7％至10％的在二氯甲烷中的甲醇作为洗脱剂的柱色谱法纯化，得到28,28-双((3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)-1-(4-(1-(2,5-二甲基苄基)-2-(羟基(吡啶-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1H-吡唑-1-基)-17,26-二氧代-3,20,23,30-四氧杂-16,27-二氮杂三十三烷-33-酸叔丁酯(29-3)，为无色粘性胶状物。产率：0.400g(65.5％)。LCMS m/z 1313.14[M+1]+。
向在0℃下的28,28-双((3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)-1-(4-(1-(2,5-二甲基苄基)-2-(羟基(吡啶-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1H-吡唑-1-基)-17,26-二氧代-3,20,23,30-四氧杂-16,27-二氮杂三十三烷-33-酸叔丁酯(29-3,0.400g 1.0eq,0.345mmol)在二氯甲烷(10.00mL)中的溶液中添加三氟乙酸(1.00mL)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩，与二氯甲烷共蒸发以移除残留的三氟乙酸，得到28,28-双((2-羧基乙氧基)甲基)-1-(4-(1-(2,5-二甲基苄基)-2-(羟基(吡啶-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1H-吡唑-1-基)-17,26-二氧代-3,20,23,30-四氧杂-16,27-二氮杂三十三烷-33-羧酸(29-4)，为淡黄色粘性胶状物。产率：0.400g(99.9％)。LCMS m/z1144.15[M+1]+。
在0℃下向28,28-双((2-羧基乙氧基)甲基)-1-(4-(1-(2,5-二甲基苄基)-2-(羟基(吡啶-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1H-吡唑-1-基)-17,26-二氧代-3,20,23,30-四氧杂-16,27-二氮杂三十三烷-33-羧酸(29-4,0.380g,1.0eq,0.332mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(7.0mL)中的溶液中添加五氟苯酚(0.61g,10eq.,3.32mmol)和N,N’-二异丙基碳二亚胺(0.505mL,10eq.,3.32mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌12小时。LCMS显示存在中间体，因此再次在0℃下添加五氟苯酚(0.61g,10eq.,3.32mmol)和N,N’-二异丙基碳二亚胺(0.505mL,10eq.,3.32mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物直接通过制备型HPLC(在50％至93％的在水中的乙腈中洗脱)纯化。将所需级分减压浓缩以移除大部分的乙腈并冻干，得到1-(4-(1-(2,5-二甲基苄基)-2-异烟酰基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1H-吡唑-1-基)-17,26-二氧代-28,28-双((3-氧代-3-(全氟苯氧基)丙氧基)甲基)-3,20,23,30-四氧杂-16,27-二氮杂三十三烷-33-酸全氟苯基酯(29-5)，为淡黄色固体。产率：0.18g(33.04％)。LCMS m/z 1641.05[M+1]+。
N-(3-{3-[2-(3-{2-[2-({12-[2-(4-{1-[(2,5-二甲基苯基)甲基]-2-(吡啶-4-羰基)-1H-1,3-苯并二唑-6-基}-1H-吡唑-1-基)乙氧基]十二烷基}氨基甲酰基)乙氧基]乙氧基}丙酰胺基)-3-(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙氧基]丙酰胺基}丙基)-5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺(I-139a)的合成
向在0℃下的1-(4-(1-(2,5-二甲基苄基)-2-(羟基(吡啶-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1H-吡唑-1-基)-17,26-二氧代-28,28-双((3-氧代-3-(全氟苯氧基)丙氧基)甲基)-3,20,23,30-四氧杂-16,27-二氮杂三十三烷-33-酸全氟苯基酯(5,0.170g,1.0eq,0.103mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中的溶液中添加在N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中的5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-N-(3-氨基丙基)戊酰胺(29-5a,0.156g,4eq.,0.414mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌30分钟。之后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(35％至54％的在含0.1％三氟乙酸的水中的乙腈)纯化，得到N-(3-{3-[2-(3-{2-[2-({12-[2-(4-{1-[(2,5-二甲基苯基)甲基]-2-(吡啶-4-羰基)-1H-1,3-苯并二唑-6-基}-1H-吡唑-1-基)乙氧基]十二烷基}氨基甲酰基)乙氧基]乙氧基}丙酰胺基)-3-(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙氧基]丙酰胺基}丙基)-5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺(I-139a)，为淡黄色固体。产率：90.0mg(39.16％)。LCMS m/z 1111.12[m/2+1]+
向在0℃下的N-(3-{3-[2-(3-{2-[2-({12-[2-(4-{1-[(2,5-二甲基苯基)甲基]-2-(吡啶-4-羰基)-1H-1,3-苯并二唑-6-基}-1H-吡唑-1-基)乙氧基]十二烷基}氨基甲酰基)乙氧基]乙氧基}丙酰胺基)-3-(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙氧基]丙酰胺基}丙基)-5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺(化合物编号I-139a,0.080g,1.0eq,0.036mmol)在甲醇(4.0mL)中的溶液中添加硼氢化钠(0.0012g,1.0eq,0.036mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌5分钟。LCMS显示形成所需化合物。然后将反应混合物直接提交用于HPLC制备型HPLC纯化。将反应混合物通过使用28％至50％的在含0.1％三氟乙酸的水中的乙腈的制备型HPLC纯化。将所需级分混合并冻干，得到N-(3-{3-[2-(3-{2-[2-({12-[2-(4-{1-[(2,5-二甲基苯基)甲基]-2-[羟基(吡啶-4-基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-6-基}-1H-吡唑-1-基)乙氧基]十二烷基}氨基甲酰基)乙氧基]乙氧基}丙酰胺基)-3-(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙氧基]丙酰胺基}丙基)-5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺(化合物编号I-139)，为灰白色固体。产率：0.035g(43.71％)。LC-MS m/z1111.91[m/2+1]+1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(bs,1H),8.07(s,1H),7.83-7.79(m,2H),7.73-7.49(m,8H),7.13(s,1H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),6.87(d,J＝8.0Hz,1H),6.23(bs,1H),5.78(s,1H),5.64(1H,J＝18.4Hz,1H),5.53(1H,J＝18.4Hz,1H),4.22-4.20(m,4H),3.70-3.27(m,71H),3.03-3.00(m,13H),2.34(s,3H),2.29-2.27(m,8H),2.07-2.02(m,6H),1.90(s,3H),1.85(s,1H),1.79(s,8H),1.52-1.49(m,11H).1.45-1.37(m,9H),1.24-1.14(m,16H)。
实施例30：1-(4-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-16,16-双(1-(4-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷-15-基)-13,18-二氧代-3,6,9-三氧杂-12,17-二氮杂二十九烷-29-酸全氟苯基酯(化合物编号I-140)
向0.25M甲醇钠(4.95mL)在甲醇(90.0mL)中的溶液中以小份添加D-半乳糖胺盐酸盐(30-1,1.0eq,5.0g,23.2mmol)。在搅拌15分钟后，添加3,4,5,6-四氯邻苯二甲酸酐(30-1a,0.6eq,4.0g,14.0mmol)，并将反应混合物在室温下剧烈搅拌20分钟。添加三乙胺(1.4eq,4.5mL,32.5mmol)和第二批次的3,4,5,6-四氯邻苯二甲酸酐(30-1a,0.6eq,4.0g,14.0mmol)并将反应混合物在室温下搅拌24小时。完成(通过LCMS监测)后，将甲醇减压浓缩，得到4,5,6,7-四氯-2-((3R,4R,5R,6R)-2,4,5-三羟基-6(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(30-2)，为橙色浆状物，该浆状物在未经任何进一步纯化的情况下照原样用于下一步骤。产率：10.0g(粗品)；LC m/z 447.8[M+1]+。
在0℃下向4,5,6,7-四氯-2-((3R,4R,5R,6R)-2,4,5-三羟基-6(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(30-2,1.0eq,10.0g,22.4mmol)在吡啶(100.0mL)中的溶液中添加乙酸酐(15.0eq,31.7mL,335.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成(通过TLC监测)后后，将反应混合物倒到冰水上中并用二氯甲烷萃取。将有机层用5％盐酸水溶液、饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品。将粗品通过柱色谱法(二氧化硅目数：100-200；洗脱：30-40％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(3R,4R,5R,6R)-6-(乙酰氧基甲基)-3-(4,5,6,7-四氯-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)四氢-2H-吡喃-2,4,5-三基三乙酸酯(30-3)，为白色蓬松固体(作为异头混合物)。产率：6.8g,49.4％；LC-MS m/z 631.31[M+17]+。
向(3R,4R,5R,6R)-6-(乙酰氧基甲基)-3-(4,5,6,7-四氯-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)四氢-2H-吡喃-2,4,5-三基三乙酸酯(30-3,1.0eq.,6.0g,9.76mmol)在乙腈(40.0mL)中的溶液中添加烯丙基三甲基硅烷(30-3a,4.0eq,3.1mL,19.5mmol)，然后在0℃和氮气下依次添加三氟化硼乙醚合物(4.0eq,2.4mL,19.5mmol)和三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(0.3eq,0.26mL,1.46mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成(通过TLC监测)后，将反应混合物倒入冰冷的饱和碳酸氢钠溶液中并用二氯甲烷萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品。将粗品通过柱色谱法(二氧化硅目数：100-200；洗脱：30-40％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(2R,3R,4R,5S,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-6-烯丙基-5-(4,5,6,7-四氯-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(30-4)，为黄色液体。产率：4.3g,73.8％；LC-MS m/z 598.2[M+1]+。
向(2R,3R,4R,5S,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-6-烯丙基-5-(4,5,6,7-四氯-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(30-4,1.0eq,4.3g,7.2mmol)在乙醇(4.0mL)中的溶液中添加乙烷-1,2-二胺(10.0eq,4.8mL,72mmol)。将反应混合物在80℃下加热8小时。完成后，将反应混合物减压浓缩并干燥，得到(2R,3R,4R,5R,6S)-6-烯丙基-5-氨基-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二醇(30-5)，为粗品(3.0g)。在0℃下向(2R,3R,4R,5S,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-6-烯丙基-5-氨基四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(1.0eq,3.0g(crude),9.1mmol)在吡啶(30.0mL)中的溶液中添加乙酸酐(3.0eq,2.6mL,27.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成(通过TLC监测)后，将反应混合物倒到冰水上并用二氯甲烷萃取。将有机层用5％盐酸水溶液、饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品。将粗品通过柱色谱法(二氧化硅目数：100-200；洗脱：50-60％的在己烷中的乙酸乙酯)，得到(2R,3R,4R,5S,6S)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-烯丙基四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(30-6)，为粘稠液体。产率：0.84g(峰-1)和0.24g(峰-2)，42％；LC-MS m/z 372.1[M+1]+。
向(2R,3R,4R,5S,6S)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-烯丙基四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(30-6,峰-1,1.0eq,0.78g,2.09mmol)在丙酮:水(5:1)(10.0mL)中的溶液中添加N-甲基吗啉N-氧化物(1.5eq,0.4mL,3.1mmol)和四氧化锇(4％在水中)(0.1eq,1.33mL,0.210mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成(通过TLC监测)后，将反应混合物用乙酸乙酯稀释并分离各层。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品。将粗品溶于丙酮:水(2:1)(20mL)中并添加高碘酸钠(2.0eq,0.9g,4.2mmol)。完成(通过TLC监测)后，将反应混合物用乙酸乙酯稀释并分离各层。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到(2R,3R,4R,5S,6S)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-(2-氧代乙基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(30-7)，为粘性固体，该粘性固体在未经任何进一步纯化的情况下照原样用于下一步骤。产率：0.85g(粗品)；LCMS:374.0[M+1]+。
向在0℃下的(2R,3R,4R,5S,6S)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-(2-氧代乙基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(0.85g,1.0eq,2.30mmol)在甲醇(20.0mL)中的溶液中添加碳酸钾(0.950g,3.0eq,6.89mmol)和(1-重氮基-2-氧代丙基)磷酸二甲酯(0.88g,2.0eq,4.59mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成(通过TLC监测)后，将反应混合物减压浓缩以得到粗品。将粗品通过反相制备型HPLC纯化，将含有所需产物的级分冻干，得到N-((2S,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-(丙-2-炔-1-基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(30-8)，为白色固体。产率：0.13g,20.89％；LCMS:244.0[M+1]+。
向1-叠氮基-16,16-双(1-叠氮基-13-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷-15-基)-13,18-二氧代-3,6,9-三氧杂-12,17-二氮杂二十九烷-29-酸全氟苯基酯(LC19.1,1.0eq,0.07g,0.0571mmol)和N-((2S,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-(丙-2-炔-1-基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(XB4,3.6eq,0.050g,0.205mmol)在二甲基亚砜(2.0mL)中的溶液中添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(8.4eq,0.179g,0.479mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时并将反应混合物直接通过制备型HPLC(30-45％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到1-(4-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-16,16-双(1-(4-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷-15-基)-13,18-二氧代-3,6,9-三氧杂-12,17-二氮杂二十九烷-29-酸全氟苯基酯(化合物编号I-140)，为奶油状固体。产率：0.011g；9.85％。LCMS；m/z 978.93[M+2H]++；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.84-7.81(m,6H),7.68(d,J＝8.8Hz,3H),7.12(s,1H),4.50-4.43(m,13H),3.82-3.77(m,9H),3.63(s,1H),3.49-3.46(m,10H),3.42-3.36(m,27H),3.25-3.21(m,6H),3.16-3.15(m,6H),2.86-2.82(m,3H),2.76(t,J＝7.2Hz,2H),2.01-1.98(m,8H),1.83(s,9H),1.77(s,5H),1.65-1.63(m,2H),1.44(s,2H),1.23(s,14H)。
实施例31：化合物I-160
向化合物I-140(1.00eq,26.3mg,0.0127mmol)和1-(2-氨基乙基)吡咯-2,5-二酮盐酸盐(1.15eq,2.6mg,0.0146mmol)在NMP(0.6mL)中的混合物中添加二异丙基乙胺(DIPEA)(3.50eq,0.0077uL,0.0445mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时并添加乙酸(6uL)。将混合物通过制备型HPLC(5-30％ MeCN/含0.1％ TFA的水)纯化，得到化合物I-160，为白色固体(17.8mg，产率73％)。(纯度：99％)。LCMS m/z 1912.3[M+H]+。
实施例32：1-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)-16,16-双((3-((5-(3-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)丙酰胺基)戊基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-3,11,18-三氧代-14-氧杂-4,10,17-三氮杂二十九烷-29-酸全氟苯基酯(化合物编号I-141)
将(2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2,4,5-三基三乙酸酯(32-1,1.0eq,5.0g,12.8mmol)和3-巯基丙酸甲酯(32-1a,2.0eq,3.09mL,25.7mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液在0℃下冷却，逐滴添加三氟化硼乙醚合物(5.0eq,8.28mL,64.2mmol)并将反应混合物在40℃下加热16小时。通过LCMS监测反应。完成后，将反应混合物冷却，用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到粗品，该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-5％的在二氯甲烷中的甲醇的柱色谱法纯化，得到(2R,3R,4R,5R,6S)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫代)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(32-2)，为无色粘稠液体。产率：5.2g,87.39％；LCMS m/z 450.1[M+1]+。
向(2R,3R,4R,5R,6S)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫代)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(32-2,1.0eq,4.0g,8.9mmol)在甲醇(40mL)中的溶液中添加甲醇钠(25％的在甲醇中的溶液)(0.1eq,0.21mL,0.89mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，将反应混合物用Dowex 50WX8氢型(200-400目)中和并经烧结漏斗(无硅藻土)过滤。将滤液浓缩并干燥，得到3-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)丙酸甲酯(32-3)，为灰白色固体。产率：1.7g,59.0％；LCMS m/z 324.0[M+1]+。
向3-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)丙酸甲酯(32-3,1.0eq,2.0g,6.19mmol)在四氢呋喃(18mL)、甲醇(12mL)和水(6mL)中的溶液中添加氢氧化锂一水合物(2.0eq,0.519g,12.4mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将反应混合物浓缩，添加甲醇，用Dowex 50WX8氢型(200-400mesh)中和并经烧结漏斗(无硅藻土)过滤。将滤液浓缩并干燥，得到3-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)丙酸(32-4)，为灰白色粘性固体。产率：2.4g(粗品)；LCMS m/z 310.0[M+1]+。
向3-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)丙酸(32-4,1.0eq,1.1g,3.56mmol)在吡啶(11mL)中的溶液中添加乙酸酐(10.0eq,3.36mL,35.6mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-7％的在二氯甲烷中的甲醇的柱色谱法纯化，得到3-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)丙酸(XB5)，为无色粘稠液体。产率：1.25g,76.74％；LCMS m/z436.0[M+1]+。
将3,3’-((2-(12-(苄基氧基)-12-氧代十二烷酰胺基)-2-((2-羧基乙氧基)甲基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸(32-6,1.0eq,1.0g,1.56mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液在0℃下冷却，添加(5-氨基戊基)氨基甲酸叔丁酯(32-5a,3.3eq,1.04g,5.16mmol)、N,N-二异丙基乙胺(10.0eq,2.77mL,15.6mmol)和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU)(4.5eq,2.67g,7.03mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，向反应混合物中添加水并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品，该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-4％的在二氯甲烷中的甲醇的柱色谱法纯化，得到17,17-双(15,15-二甲基-5,13-二氧代-2,14-二氧杂-6,12-二氮杂十六烷基)-2,2-二甲基-4,12,19-三氧代-3,15-二氧杂-5,11,18-三氮杂三十烷-30-酸苄酯(32-7)，为淡棕色粘稠液体。产率：1.3g,69.74％；LCMS m/z 1192.8[M+1]+。
将17,17-双(15,15-二甲基-5,13-二氧代-2,14-二氧杂-6,12-二氮杂十六烷基)-2,2-二甲基-4,12,19-三氧代-3,15-二氧杂-5,11,18-三氮杂三十烷30-酸苄酯(32-7,1.0eq,0.100g,0.083mmol)在二氯甲烷(0.5mL)中的溶液在0℃下冷却，添加三氟乙酸(0.5mL)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，将反应混合物浓缩，与二氯甲烷一起共沸(2-3次)，用乙醚洗涤(2-3次)并干燥，得到11-{[1,3-双(2-{[5-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[5-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙烷-2-基]氨基甲酰基}十一烷酸苄酯(32-8)，为淡棕色粘稠液体。产率：0.110g(粗品)；LCMS m/z 892.6[M+1]+。
将11-{[1,3-双(2-{[5-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[5-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙烷-2-基]氨基甲酰基}十一烷酸苄酯(32-8,1.0eq,0.220g,0.18mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液在0℃下冷却，添加3-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)丙酸(XB5,3.0eq,0.235g,0.54mmol)、N,N-二异丙基乙胺(10.0eq,0.33mL,1.8mmol)和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU)(4.5eq,0.308g,0.81mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，向反应混合物中添加水并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到11-{[1,3-双(2-{[5-(3-{[(2S,3R,4R,5R,6R)-4,5-双(乙酰基氧基)-6-[(乙酰基氧基)甲基]-3-乙酰胺基噁烷-2-基]硫烷基}丙酰胺基)戊基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[5-(3-{[(2S,3R,4R,5R,6R)-4,5-双(乙酰基氧基)-6-[(乙酰基氧基)甲基]-3-乙酰胺基噁烷-2-基]硫烷基}丙酰胺基)戊基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙烷-2-基]氨基甲酰基}十一烷酸苄酯(32-9)，为淡黄色粘稠液体。产率：0.230g(粗品)；LCMS m/z1072.8[M+2H]++。
向11-{[1,3-双(2-{[5-(3-{[(2S,3R,4R,5R,6R)-4,5-双(乙酰基氧基)-6-[(乙酰基氧基)甲基]-3-乙酰胺基噁烷-2-基]硫烷基}丙酰胺基)戊基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[5-(3-{[(2S,3R,4R,5R,6R)-4,5-双(乙酰基氧基)-6-[(乙酰基氧基)甲基]-3-乙酰胺基噁烷-2-基]硫烷基}丙酰胺基)戊基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙烷-2-基]氨基甲酰基}十一烷酸苄酯(32-9,1.0eq,0.180g,0.083mmol)在甲醇(4mL)中的溶液中添加甲醇钠(25％的在甲醇中的溶液)(0.2eq,0.003mL,0.016mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，将反应混合物用Dowex 50WX8氢型(200-400目)中和并通过注射器过滤器过滤。将滤液浓缩并干燥，得到1-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)-16,16-双((3-((5-(3-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)丙酰胺基)戊基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-3,11,18-三氧代-14-氧杂-4,10,17-三氮杂二十九烷-29-酸甲酯(32-10)，为无色粘稠液体。产率：0.130g(粗品)；LCMS m/z 845.6[M+2H]++。
向1-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)-16,16-双((3-((5-(3-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)丙酰胺基)戊基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-3,11,18-三氧代-14-氧杂-4,10,17-三氮杂二十九烷-29-酸甲酯(32-10,1.0eq,0.160g,0.094mmol)在四氢呋喃:甲醇:水(3:2:1)(2mL)中的溶液中添加氢氧化锂一水合物(2.0eq,0.007g,0.189mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，将反应混合物浓缩，添加甲醇，用Dowex 50WX8氢型(200-400目)中和并通过注射器过滤器过滤。将滤液浓缩并干燥，得到1-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)-16,16-双((3-((5-(3-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)丙酰胺基)戊基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-3,11,18-三氧代-14-氧杂-4,10,17-三氮杂二十九烷-29-羧酸(32-11)，为淡黄色固体。产率：0.140g,88.23％；LCMS m/z 838.6[M+2H]++。
将1-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)-16,16-双((3-((5-(3-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)丙酰胺基)戊基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-3,11,18-三氧代-14-氧杂-4,10,17-三氮杂二十九烷-29-羧酸(32-11,1.0eq,0.140g,0.083mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液在0℃下冷却，添加2,3,4,5,6-五氟苯酚(32-10a,2.0eq,0.030g,0.166mmol)和N,N’-二异丙基碳二亚胺(3.0eq,0.038mL,0.249mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物直接通过制备型HPLC(32-53％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化，得到1-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)-16,16-双((3-((5-(3-(((2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)硫代)丙酰胺基)戊基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-3,11,18-三氧代-14-氧杂-4,10,17-三氮杂二十九烷-29-酸全氟苯基酯(化合物编号I-141)，为白色固体。产率：0.020g,13.1％；LCMS m/z921.89[M+2H]++；1H NMR(400MHz,DMSO-d6加D2O)δ4.29(d,J＝10.4Hz,3H),3.82-3.79(m,3H),3.66(s,3H),3.50-3.47(m,19H),3.41-3.35(m,6H),2.99-2.97(m,12H),2.75-2.70(m,6H),2.33-2.31(m,6H),2.26-2.24(m,6H),2.03-2.01(m,3H),1.78(m,9H),1.63-1.61(m,2H),1.40-1.30(m,16H),1.35-1.20(m,16H)。
实施例33：化合物I-162的合成
向化合物I-141(1.00eq,10.9mg,0.00592mmol)和1-(2-氨基乙基)吡咯-2,5-二酮盐酸盐(1.15eq,1.2mg,0.00680mmol)在NMP(0.3mL)中的混合物中添加二异丙基乙胺(DIPEA)(2.50eq,0.0026mL,0.0148mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时并添加TFA(4uL)。将混合物通过制备型HPLC(5-30％ MeCN/含0.1％ TFA的水)纯化，得到化合物I-162，为白色固体(8.2mg，产率77％)。(纯度：99％)。LCMS m/z 1797.8[M+H]+。
实施例34：N1-(1,25-双(4-(3-(((2S,3S,4S,5S,6S)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13-(3-((2-(2-(2-(4-(3-(((2S,3S,4S,5S,6S)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,16-二氧代-3,6,20,23-四氧杂-9,17-二氮杂二十五烷-13-基)-N12-(12-(2-(4-(1-(2,5-二甲基苄基)-2-(羟基(吡啶-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1H-吡唑-1-基)乙氧基)十二烷基)十二烷二酰胺(化合物编号142)的合成
在室温和氮气气氛下向搅拌的(2S,3S,4S)-2-(乙酰氧基甲基)-3,4-二氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(34-1,0.860g,1eq,3.16mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中添加(苯基二硒烷基)苯(1.73g,1.75eq,5.53mmol)、叠氮化钠(0.4719g,3.5eq,11.1mmol)和(二乙酰氧基)碘苯(2.24g,2.2eq,6.95mmol)。在18小时后，TLC分析(乙酸乙酯/石油醚1:2)显示起始化合物被完全消耗。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，分离各相并将水相用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。柱色谱法(20％的在己烷中的乙酸乙酯)得到(2S,3S,4S,5S,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-5-叠氮基-6-(苯基硒烷基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(34-2)，为无色浆状物。产率：0.560g,37.69％。LCMS；m/z 488.9[M+18]+
将三氟甲磺酰基三氟甲磺酸酯(0.260mL,1.3eq,1.55mmol)添加到在-60℃下的搅拌的(2S,3S,4S,5S,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-5-叠氮基-6-(苯基硒烷基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(34-2,0.560g,1eq,1.19mmol)、1-(苯亚磺酰基)哌啶(BSP)(0.299g,1.2eq,1.43mmol)和2,4,6-三叔丁基嘧啶(0.651g,2.2eq,2.62mmol)在含有4分子筛(0.500g)的二氯甲烷(5.00mL)中的溶液中。将反应混合物在该温度下搅拌30分钟，然后添加戊-4-炔-1-醇(34-2a,0.222mL,2.0eq,2.38mmol)。让该混合物逐渐温热至室温。在2小时后，通过添加三乙胺将反应混合物淬灭。过滤后，将有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。将粗化合物通过快速柱色谱法(使用20％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到(2S,3S,4S,5S,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-5-叠氮基-6-(戊-4-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(34-3)，为无色油状物。产率：0.30g,60.87％。LCMS；m/z415.1[M+18]+
将(2S,3S,4S,5S,6S)-3,4-双(乙酰基氧基)-5-叠氮基-6-(戊-4-炔-1-基氧基)噁烷-2-基甲基乙酸酯(34-3,0.3g,1eq,0.755mmol)溶于四氢呋喃(4.00mL)中，添加三丁基膦(0.56mL,3eq,2.26mmol)和水(0.400mL)并将该混合物在室温下搅拌3天。记录显示完全转化的粗化合物的ELSD-MS数据。随后，将混合物浓缩并与甲苯一起共浓缩，得到粗品(2S,3S,4S,5S,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-5-氨基-6-(戊-4-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(34-4)，为棕色油状物，将该油状物溶于吡啶(4.0mL)中，并在室温下添加乙酸酐(2.0mL)。在搅拌24小时后，将混合物浓缩并将所得粗产物与甲苯一起共蒸发。柱色谱法(使用5％的在二氯甲烷中的甲醇)得到(2S,3S,4S,5S,6S)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-(戊-4-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(34-5)，为淡黄色浆状物。产率：0.185g,59.28％；LCMS；m/z 414.1[M+1]+
将(2S,3S,4S,5S,6S)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-(戊-4-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(34-5,0.185g,1eq,0.447mmol)溶于甲醇(5mL)中，添加25％甲醇钠在甲醇中的溶液(0.295mL,3eq,1.34mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌30分钟，ELSD-MS数据显示完全转化。之后，添加Dowex-50w-氢型直至中性pH，然后经烧结漏斗过滤反应物并将其真空浓缩得到粗物质，将该粗物质通过制备型HPLC(使用65-70％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)纯化，得到N-((2S,3S,4S,5S,6S)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-(戊-4-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(34-6)，为白色固体。产率：0.070g,54.45％；LCMS；m/z 288.0[M+1]+
在惰性气氛中，将N1-(1,25-二叠氮基-13-(3-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,16-二氧代-3,6,20,23-四氧杂-9,17-二氮杂二十五烷-13-基)-N12-(12-(2-(4-(1-(2,5-二甲基苄基)-2-(羟基(吡啶-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1H-吡唑-1-基)乙氧基)十二烷基)十二烷二酰胺(34-7,0.100g,1eq,0.0646mmol)在室温下溶于二甲基亚砜(2.00mL)中并在室温下搅拌5分钟。然后，添加N-((2S,3S,4S,5S,6S)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-(戊-4-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(34-6,66.9mg,3.6eq.,0.233mmol)，并再次搅拌5分钟，随后添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(0.178g,8.4eq.,0.543mmol)。在30分钟后，将反应混合物用乙酸(0.5mL)淬灭并直接用于制备型HPLC纯化(使用30-40％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)。合并所有含所需化合物的级分并将其冻干，得到N1-(1,25-双(4-(3-(((2S,3S,4S,5S,6S)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13-(3-((2-(2-(2-(4-(3-(((2S,3S,4S,5S,6S)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,16-二氧代-3,6,20,23-四氧杂-9,17-二氮杂二十五烷-13-基)-N12-(12-(2-(4-(1-(2,5-二甲基苄基)-2-(羟基(吡啶-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1H-吡唑-1-基)乙氧基)十二烷基)十二烷二酰胺(I-142)为灰白色固体。产率：0.032g,20.55％,LC-MS；m/z 803.2[M/3+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.65(d,J＝5.2Hz,2H),8.10(s,1H),7.85-7.78(m,8H),7.71-7.65(m,4H),7.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.13(bs,1H),7.06(d,J＝7.6Hz,1H),6.87(d,J＝7.2Hz,1H),6.37(s,1H),5.74(s,1H),5.62(ABq,Jab＝17.6Hz,2H),4.47-4.44(m,10H),4.25-4.22(m,7H),3.79-3.77(m,6H),3.72-3.70(m,7H),3.64(d,J＝2.8Hz,3H),3.52-3.30(m,36H),3.15-3.14(m,6H),3.05-2.95(m,2H),2.62-261(m,6H),2.35(s,3H),2.01-1.99(m,10H),1.89(s,4H),1.79-1.76(m,21H),1.50-1.32(m,8H),1.20-1.13(m,29H)。
实施例35：1-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-15,15-双(1-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-12-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十四烷-14-基)-12,17-二氧代-2,5,8-三氧杂-11,16-二氮杂二十八烷-28-酸全氟苯基酯(化合物编号143)的合成
将(2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2,4,5-三基三乙酸酯(35-1’,1.0eq,2.0g,5.14mmol)在1,2-二氯乙烷(20mL)中的溶液在0℃下冷却，并添加三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(1.5eq,1.4mL,7.71mmol)，并将反应混合物在50℃下加热1.5小时，然后在室温下搅拌3小时。完成后，将反应混合物用三乙胺淬灭，浓缩并干燥，得到(3aR,5R,6R,7R,7aR)-5-(乙酰氧基甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6,7-二基二乙酸酯(35-2’)，为棕色液体。产率：1.6g(粗品)；LCMS m/z 330.0[M+1]+。
将(3aR,5R,6R,7R,7aR)-5-(乙酰氧基甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6,7-二基二乙酸酯(35-2’,1.0eq,1.6g,4.86mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液在0℃下冷却，逐滴添加叠氮化三甲基硅烷(2.0eq,1.28mL,9.72mmol)和三氟化硼乙醚合物(6.0eq,3.69mL,29.2mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物用冰(非常小的量)淬灭，用饱和碳酸氢钠水溶液稀释并用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-10％的在二氯甲烷中的甲醇的柱色谱法纯化，得到(2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-叠氮基四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(35-3’)，为灰白色固体。产率：0.600g,33.17％；LCMS m/z 372.8[M+1]+。
将(2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-叠氮基四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(35-3’,1.0eq,0.600g,1.61mmol)在甲醇(6mL)中的溶液在0℃下冷却，添加甲醇钠(25％的在甲醇中的溶液)(0.2eq,0.07mL,0.322mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将反应混合物用Dowex50WX8氢型(200-400目)中和并经烧结漏斗(无硅藻土)过滤。将滤液浓缩以得到粗品，将该粗品通过制备型HPLC(16-30％的在含0.1％三氟乙酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到N-((2R,3R,4R,5R,6R)-2-叠氮基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(XB6)，为灰白色固体。产率：0.218g,54.94％；LCMS m/z 247.0[M+1]+。
将4-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(3-氧代-3-(全氟苯氧基)丙基)庚二酸双(全氟苯基)酯(35-1,1.0eq,1.87g,1.93mmol)和2-(2-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷-1-胺(35-1a,3.0eq,1.09g,5.80mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(18mL)中的溶液在室温下搅拌16小时。完成后，向反应混合物中添加水并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品，将该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-5％的在二氯甲烷中的甲醇的柱色谱法纯化，得到(14,20-二氧代-17-(3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十六烷-15-炔-1-基)-4,7,10,24,27,30-六氧杂-13,21-二氮杂三十三烷-1,32-二炔-17-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(35-2)，为无色粘稠液体。产率：1.67g,88.43％；LCMS m/z 977.36[M+1]+。
向(14,20-二氧代-17-(3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十六烷-15-炔-1-基)-4,7,10,24,27,30-六氧杂-13,21-二氮杂三十三烷-1,32-二炔-17-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(35-2,1.0eq,1.57g,1.61mmol)在甲醇(20mL)中的溶液中添加二乙胺(20.0eq,3.36mL,32.1mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物浓缩以得到粗品，将该粗品与乙醚一起研磨(2-3次)，得到4-氨基-4-(3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十六烷-15-炔-1-基)-N1,N7-双(2-(2-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)庚烷二酰胺(35-3)，为淡黄色粘稠液体。产率：1.2g,98.93％；LCMS m/z 755.2[M+1]+。
将12-(叔丁氧基)-12-氧代十二烷酸(35-4,1.0eq,1.4g,4.89mmol)在二氯甲烷(14mL)中的溶液在0℃下冷却，添加草酰氯(1.5eq,0.66mL,7.33mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(0.14mL)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。通过TLC监测反应(用甲醇稀释后进行TLC检查)。完成后，将反应混合物在氮气气氛下浓缩并干燥，得到12-氯-12-氧代十二烷酸叔丁酯(35-5)，为淡棕色粘稠液体，其直接照原样用于下一个反应。产率：1.5g(粗品)。
将12-氯-12-氧代十二烷酸叔丁酯(35-5,2.0eq,0.808g,2.65mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在0℃下冷却，然后逐滴添加4-氨基-4-(3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十六烷-15-炔-1-基)-N1,N7-双(2-(2-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)庚烷二酰胺(35-3,1.0eq,1.0g,1.32mmol)和N,N-二异丙基乙胺(5.0eq,1.22mL,6.62mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，向反应混合物中添加水并用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-8％的在二氯甲烷中的甲醇的柱色谱法纯化，得到14,19-二氧代-17,17-双(3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十六烷-15-炔-1-基)-4,7,10-三氧杂-13,18-二氮杂三十烷-1-炔-30-酸叔丁酯(35-6)，为淡棕色粘稠液体。产率：1.2g,88.53％；LCMS m/z 1023.5[M+1]+。
将14,19-二氧代-17,17-双(3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十六烷-15-炔-1-基)-4,7,10-三氧杂-13,18-二氮杂三十烷-1-炔-30-酸叔丁酯(35-6,1.0eq,1.2g,1.17mmol)在0℃下冷却，添加三氟乙酸(15mL)并将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，将反应混合物浓缩，与二氯甲烷一起共沸(2-3次)，用乙醚洗涤(3次)并冻干至干，得到14,19-二氧代-17,17-双(3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十六烷-15-炔-1-基)-4,7,10-三氧杂-13,18-二氮杂三十烷-1-炔-30-羧酸(35-7)，为棕色粘稠液体。产率：1.1g,96.98％；LCMS m/z 967.2[M+1]+。
将14,19-二氧代-17,17-双(3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十六烷-15-炔-1-基)-4,7,10-三氧杂-13,18-二氮杂三十烷-1-炔-30-酸(35-7,1.0eq,0.900g,0.930mmol)和三乙胺(3.0eq,0.324mL,2.79mmol))溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中并添加2,2,2-三氟乙酸全氟苯基酯(35-6a,2.0eq,0.326mL,1.86mmol)。在1小时后，LCMS分析表明反应完成。在减压和50℃下移除N,N-二甲基甲酰胺。将残留物用二氯甲烷稀释并将由此得到的溶液用硫酸氢钠(80mL)、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干，得到14,19-二氧代-17,17-双(3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十六烷-15-炔-1-基)-4,7,10-三氧杂-13,18-二氮杂三十烷-1-炔-30-酸全氟苯基酯(LC31)，为黄色浓稠浆状物。产率：0.110g,10.43％；LCMS m/z 1133.0[M+1]+。
向14,19-二氧代-17,17-双(3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十六烷-15-炔-1-基)-4,7,10-三氧杂-13,18-二氮杂三十烷-1-炔-30-酸全氟苯基酯(LC31,1.0eq,0.107g,0.094mmol)在二甲基亚砜(3mL)中的溶液中添加N-((2R,3R,4R,5R,6R)-2-叠氮基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(XB6,3.3eq,0.076g,0.311mmol)和六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(8.4eq.,0.296g,0.793mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，添加乙酸(0.3mL)并将反应混合物通过制备型HPLC(20-35％的在含0.1％三氟乙酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到1-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-15,15-双(1-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-12-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十四烷-14-基)-12,17-二氧代-2,5,8-三氧杂-11,16-二氮杂二十八烷-28-酸全氟苯基酯(化合物编号I-143)，为灰白色固体。产率：0.121g,68.46％；1H NMR(400MHz,DMSO-d6加D2O)δ8.09(s,3H)5.60(d,J＝10.0Hz,3H),4.48(s,6H),4.36(t,J＝10.0Hz,3H),3.80-3.75(m,6H),3.70-3.66(m,6H),3.55-3.46(m,31H),3.37-3.35(m,6H),3.16-3.13(m,6H),2.72-2.69(m,2H),2.02-1.95(m,9H),1.80-1.75(m,6H),1.60(s,12H),1.45-1.40(m,2H),1.35-1.15(m,14H)。
实施例36：化合物I-161的合成
向化合物I-143(1.00eq,25.3mg.0.0135mmol)和1-(2-氨基乙基)吡咯-2,5-二酮盐酸盐(1.15eq,2.7mg,0.0155mmol)在NMP(0.6mL)中的混合物中添加二异丙基乙胺(DIPEA)(2.50eq,0.0059mL,0.0338mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时并添加乙酸(5uL)。将混合物通过制备型HPLC(5-30％ MeCN/含0.1％ TFA的水)纯化并将不纯的级分通过制备型HPLC(5-30％ MeCN/含0.1％ TFA的水)重新纯化，得到化合物I-161，为白色固体(14.8mg，产率60％)。(纯度：99％)。LCMS m/z 1829.0[M+H]+。
实施例37：1-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-15,15-双(1-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-12-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十四烷-14-基)-12,17-二氧代-2,5,8-三氧杂-11,16-二氮杂二十八烷-28-酸全氟苯基酯(化合物编号I-153)的合成
向(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-叠氮基-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(37-1,1.0eq,1.1g,3.19mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中添加甲醇钠(25％的在甲醇中的溶液)(0.1eq,0.073mL,0.319mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物用Dowex 50WX8氢型(200-400目)中和并经烧结漏斗(无硅藻土)过滤。将滤液浓缩以得到粗品，将该粗品通过制备型HPLC(5-20％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到(2R,3R,4R,5R,6R)-5-叠氮基-2-(羟基甲基)-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-3,4-二醇(化合物编号XB14)，为白色固体。产率：0.400g,57.28％。LCMS,m/z 218.1[M-1]-。
向14,19-二氧代-17,17-双(3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十六烷-15-炔-1-基)-4,7,10-三氧杂-13,18-二氮杂三十烷-1-炔-30-酸全氟苯基酯(化合物编号LC 31,1.0eq,0.047g,0.041mmol)和(2R,3R,4R,5R,6R)-5-叠氮基-2-(羟基甲基)-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-3,4-二醇(化合物编号XB14,3.5eq,0.031g,0.145mmol)在二甲基亚砜(2mL)中的溶液中添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.5eq.,0.038g,0.104mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物用乙酸(0.2mL)淬灭并通过制备型HPLC(23-41％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到{1-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-15,15-双(1-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-12-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十四烷-14-基)-12,17-二氧代-2,5,8-三氧杂-11,16-二氮杂二十八烷-28-酸全氟苯基酯(化合物编号I-153)，为灰白色固体。产率：0.028g,37.7％；LCMS m/z896.28[M+2H]++；1H NMR(400MHz,DMSO-d6加D2O)δ8.05(s,3H),4.77(s,1H),4.70(d,J＝8.4Hz,3H),4.33(t,J＝10.8Hz,3H),4.02(dd,J＝10.8,3.2Hz,3H),3.76(d,J＝3.2Hz,4H),3.57(s,8H),3.54-3.49(m,14H),3.46(s,13H),3.36(t,J＝8.4Hz,7H),3.27(s,1H),3.21(s,9H),3.15-3.14(m,8H),2.71(d,J＝6.8Hz,2H),2.00-1.95(m,9H),1.81-1.69(m,7H),1.63-1.60(m,2H),1.45-1.35(m,3H),1.34-1.15(m,15H)。
实施例38：1-(4-((2-(3-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)脲基)乙氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13,13-双(3-((2-(2-(2-(4-((2-(3-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)脲基)乙氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(化合物编号I-154)的合成
在0℃下向(2R,3R,4R,5R,6R)-5-氨基-2-(羟基甲基)-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-3,4-二醇(38-1,1.0eq.,0.200g,1.04mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(4.0eq.,0.721mL,4.14mmol)和N-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙基)-1H-咪唑-1-甲酰胺(1.2eq.,0.240g,1.24mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物用乙酸乙酯稀释并萃取。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品，将该粗品通过快速柱色谱法(使用15％的在二氯甲烷中的甲醇作为洗脱剂)纯化，得到1-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)-3-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙基)脲(化合物编号XB15)，为白色固体。产率：0.115g,35.0％；LCMS m/z 319.0[M+1]+。
向1-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)-3-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙基)脲(XB15,3.3eq,0.0403g,0.127mmol)在二甲基亚砜(1.5mL)中的溶液中添加1-叠氮基-13,13-双(3-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(LC19,1.0eq.,0.042g,0.038mmol)和六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.8eq,0.120g,0.322mmol)并将反应混合物在室温下搅拌30分钟。完成后，将反应混合物用乙酸(0.3mL)淬灭并通过制备型HPLC(20-48％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到1-(4-((2-(3-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)脲基)乙氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13,13-双(3-((2-(2-(2-(4-((2-(3-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)脲基)乙氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(化合物编号I-154)，为白色蓬松固体。产率：0.025g,31.78％；LCMS m/z1025.2,[M+2H]++；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6加D2O)δ8.02(s,2H),4.55-4.45(m,12H),4.09(d,J＝8.0Hz,3H),3.80-3.75(m,6H),3.62-3.60(m,3H),3.48-3.41(m,28H),3.34-3.29(m,20H),3.19-3.13(m,13H),2.71-2.67(m,1H),2.16(t,J＝7.6Hz,2H),2.05-1.95(m,8H),1.80-1.70(m,6H),1.67-1.60(m,1H),1.47-1.37(m,3H),1.35-1.15(m,14H)。
实施例39：1-(4-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13,13-双(3-((2-(2-(2-(4-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(化合物编号I-155)的合成
与实施例38(化合物编号I-154)类似地合成标题化合物。LCMS m/z 1002.9,[M+2H]++
实施例40：1-[4-(2-{[1,3-双(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙烷-2-基]氨基甲酰基}乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]-N-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-27-酰胺(化合物I-158)的合成
向1-叠氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-27-酸全氟苯基酯(40-1,1.0eq.,0.040g,0.063mmol)和1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮盐酸盐(40-1a,1.2eq.,0.013g,0.075mmol)在二甲基亚砜(1mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(2.0eq,0.023mL,0.126mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。通过LCMS监测反应。在反应完成后，将粗品1-叠氮基-N-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-27-酰胺(40-2)的溶液照原样用于下一个反应。向该溶液中添加N-[1,3-双(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙烷-2-基]戊-4-炔酰胺(40-2a,0.53eq,0.050g,0.033mmol)和六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.8eq.,0.065g,0.177mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。通过LCMS监测反应。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(16-35％的在含0.1％乙酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到1-[4-(2-{[1,3-双(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)-2-[(2-{[3-(5-{[(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}戊酰胺基)丙基]氨基甲酰基}乙氧基)甲基]丙烷-2-基]氨基甲酰基}乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]-N-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-27-酰胺(化合物I-158)，为无色粘性固体。产率：0.024g,17.93％；LCMS m/z 1043.72[(M/2)+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.94-7.93(m,1H),7.86-7.84(m,4H),7.76-7.73(m,3H),7.62(d,J＝6.0Hz,3H),7.17(bs,1H),7.00(s,2H),4.62-4.44(m,9H),4.20(d,J＝8.8Hz,3H),3.78(t,J＝5.2Hz,2H),3.71-3.67(m,6H),3.63(bs,3H),3.53-3.48(m,37H),3.45-3.39(m,10H),3.33-3.28(m,4H),3.20-3.16(m,2H),3.02-2.97(m,12H),2.79-2.75(m,2H),2.53-2.49(m,8H),2.43-2.40(m,4H),2.27(t,J＝5.6Hz,6H),2.21(t,J＝6.8Hz,2H),2.03(t,J＝7.2Hz,6H),1.79(s,9H),1.49-1.45(m,12H),1.42-1.36(m,6H)。
实施例41：(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-2-(戊-4-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-4-基异丁酸酯(中间体D)的合成
在惰性气氛下，将N-[(2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-(戊-4-炔-1-基氧基)噁烷-3-基]乙酰胺(41-1,2.00g,6.97mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20.0mL)中。然后将反应器皿冷却至0℃，随后添加(二甲氧基甲基)苯(41-2,1.53mL,1.5eq.,10.5mmol)和{7,7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚烷-1-基}甲磺酸(323mg,0.2eq.,1.39mmol)。之后，将反应物在60℃下搅拌6小时并通过TLC和LC-MS监测。在反应完成后，添加三乙胺至中性pH并蒸发N,N-二甲基甲酰胺，得到浓稠残留物，将该残留物通过使用10％的在二氯甲烷中的甲醇作为流动相的硅胶柱色谱法纯化，得到N-((4aR,6R,7R,8R,8aR)-8-羟基-6-(戊-4-炔-1-基氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁英-7-基)乙酰胺(41-3)，为白色固体。产率：1.60g(61.22％)；LCMS m/z 374.5[M-1]-。
在0℃下向N-[(4aR,6R,7R,8R,8aR)-8-羟基-6-(戊-4-炔-1-基氧基)-2-苯基-六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁英-7-基]乙酰胺(41-3,1.0g,2.66mmol)在吡啶(10.0mL)中的溶液中添加2-甲基丙酰氯(41-1a,0.334mL,1.2eq.,3.20mmol)。将反应物在室温下搅拌1小时并用TLC进行检查。在反应完成后，将吡啶蒸发至干并将观察到的粗品通过使用5％的在二氯甲烷中的甲醇作为流动相的硅胶柱色谱法纯化，得到(4aR,6R,7R,8R,8aR)-7-乙酰胺基-6-(戊-4-炔-1-基氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁英-8-基异丁酸酯(41-4)，为白色固体。产率：0.91g(76.68％)；LCMS m/z 444.25[M-1]-。
在0℃下向(4aR,6R,7R,8R,8aR)-7-乙酰胺基-6-(戊-4-炔-1-基氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁英-8-基异丁酸酯(41-4,0.91g,2.04mmol)在DCM:MeOH(4:1,10mL)中的溶液中添加4-甲基苯-1-磺酸(0.035g,0.1eq.,0.204mmol)。将反应物在室温下搅拌3小时并通过TLC进行监测。在反应完成后，添加三乙胺直至中性pH。将反应混合物在旋转蒸发仪上浓缩，并将观察到的浓稠浆状物在制备型HPLC(使用45-75％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)中纯化，得到(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-2-(戊-4-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-4-基异丁酸酯(中间体D)，为白色固体。产率：0.18g(24.66％)；LCMS m/z 330.2[M+1]+。
实施例42：1-(4-(3-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-4-(异丁酰基氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷-21-酸全氟苯基酯(化合物I-148)的合成
在室温下向搅拌的(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-2-(戊-4-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-4-基异丁酸酯(中间体D,0.30g,1.0eq.,0.0839mmol)在二甲基亚砜(2.0mL)中的溶液中添加1-叠氮基-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷-21-酸2,3,4,5,6-五氟苯酯(0.045g,1.0eq,0.0839mmol)并搅拌5分钟。然后在室温下向反应混合物中添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(0.060g,2.2eq.,0.185mmol)。通过LC-MS监测反应的进展。在15分钟后，将反应混合物直接用于制备型HPLC纯化(0.1％ TFA，13-40％的在水中的乙腈)。将含有所需化合物的级分冻干，得到1-(4-(3-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-4-(异丁酰基氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷-21-酸全氟苯基酯(化合物I-148)，为白色固体。产率：0.021g(27.71％)。LC-MS:m/z 903.29[M+1]+。1H NMR(DMSO-d6,D2O交换)：7.64(s,1H),4.63(dd,J＝10.8,2.8Hz 1H),4.42(t,J＝4.8Hz,2H),4.34(d,J＝8.4Hz,1H),4.04-4.01(m,1H),3.77-3.71(m,5H),3.50-3.39(m,26H),2.95(t,J＝11.6Hz,2H),2.57(d,J＝8.0Hz,2H),2.49-2.46(s,1H),1.72-1.76(m,5H),1.01(dd,J＝6.8,2.4Hz,6H)。
实施例43：1-(4-(3-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-4-(异丁酰基氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13-氧代-3,6,9,16,19-五氧杂-12-氮杂二十二烷-22-酸全氟苯基酯(化合物I-147)的合成
将3,3’-(乙烷-1,2-二基双(氧基))二丙酸双(全氟苯基)酯(43-1,1.0eq,0.100g,0.186mmol)和2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷-1-胺(43-1a,0.9eq,0.036g,0.167mmol)在二甲基亚砜(2.0mL)中的溶液在室温下搅拌2小时。之后，将得到的粗品1-叠氮基-13-氧代-3,6,9,16,19-五氧杂-12-氮杂二十二烷-22-酸全氟苯基酯(43-2)照原样用于下一个反应。产率：0.110g(粗品),LCMS m/z 573.05[M+1]+。
将(2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-2-(戊-4-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-4-基异丁酸酯(中间体D,1.0eq,0.050g,0.140mmol)、1-叠氮基-13-氧代-3,6,9,16,19-五氧杂-12-氮杂二十二烷-22-酸全氟苯基酯(43-2,1.3eq,0.104g,0.182mmol)和六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.8eq,0.146g,0.392mmol)在二甲基亚砜(2mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。之后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(37-48％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到1-(4-(3-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-5-羟基-6-(羟基甲基)-4-(异丁酰基氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13-氧代-3,6,9,16,19-五氧杂-12-氮杂二十二烷-22-酸全氟苯基酯(化合物I-147)，为无色粘稠液体。产率：0.023g,15.65％；LCMSm/z 930.20[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.86(t,J＝5.6Hz,1H),7.80(s,1H),7.71(d,J＝9.6Hz,1H),4.65(dd,J＝11.2Hz,3.2Hz,1H),4.45(t,J＝5.6Hz,2H),4.36(d,J＝8.4Hz,1H),4.08-4.03(m,1H),3.83(s,1H),3.80-3.74(m,5H),3.59-3.52(m,7H),3.49-3.47(m,10H),3.40-3.36(m,5H),3.19-3.16(m,2H),3.02(t,J＝4.0Hz,2H),2.61(t,J＝6.4Hz,2H),2.53(s,1H),2.32-2.28(m,2H),1.79-1.75(m,5H),1.06-1.03(m,6H)。
实施例44：2-(((4-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)丁酰基)氧基)甲基)-2-(12-氧代-12-(全氟苯氧基)十二烷酰胺基)丙烷-1,3-二基双(4-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)丁酸酯)(化合物I-157)的合成
在0℃下向2-氨基-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(44-1,5.00g,1.0eq,41.3mmol)在甲醇(25.0mL)/二氯甲烷(25.0mL)混合物中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(19.0mL,2.0eq,82.6mmol.)和三乙胺(20.3mL,3.5eq 144mmol.)，然后将反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，将混合物减压蒸发至干，并将所得残留物从乙酸乙酯重结晶，得到(1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(44-2)，白色固体。产率：4.0g,43.8％；ELSD-MS m/z 222.0[M+1]+。
向(1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2,3.0g,1.0eq,13.6mmol)、5-己酸(44-2a,4.73ml,3.3eq,44.7mmol)在二氯甲烷(30ml)中的溶液中，将N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC.HCl)(8.58g,3.3eq,44.7mmol)和N,N-二异丙基乙胺(8.03ml,3.3eq,44.7mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.82g,0.5eq,and6.78mmol)添加到该反应混合物中，将该反应混合物在环境条件下搅拌24小时。将混合物用盐水和饱和碳酸氢钠洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压蒸发至干以得到粗产物，将该粗产物通过使用在己烷中的乙酸乙酯(10-40％)作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，得到2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((戊酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基双(己-5-炔酸酯)(44-3)。产率：2.0g,29.29％；ELSD-MS m/z 502.0[M-1]-。
在0℃下向搅拌的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((戊酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基双(己-5-炔酸酯)(44-3,0.60g,1.0eq,1.19mmol))在无水二氯甲烷(2mL)中的溶液中逐滴添加三氟乙酸(0.5mL)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。然后将反应混合物减压蒸发至干，随后与二氯甲烷(2次)和乙醚(2次)一起研磨，得到2-氨基-2-((己-5-炔酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基双(己-5-炔酸酯)(44-4)，为淡黄色固体。产率：0.33g,粗品；ELSD-MS m/z 404.0[M+1]+。
在0℃下向搅拌的12-氯-12-氧代十二烷酸叔丁酯(44-4a,0.49g,2.0eq1.64mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加2-氨基-2-((己-5-炔酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基双(己-5-炔酸酯)(44-4,0.330g,1.0eq,0.818mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.755mL,5.0eq,4.09mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的溶液，然后逐滴添加并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，向反应混合物中添加水并用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用0-8％的在二氯甲烷中的甲醇的硅胶柱色谱法纯化，得到2-(12-(叔丁氧基)-12-氧代十二烷酰胺基)-2-((己-5-炔酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基双(己-5-炔酸酯)(44-5)，为淡棕色粘稠液体。产率：0.28g,50.95％；LCMS m/z 672.50[M+1]+。
在0℃下向搅拌的2-(12-(叔丁氧基)-12-氧代十二烷酰胺基)-2-((己-5-炔酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基双(己-5-炔酸酯)(44-5,0.50g,0.744mmol)在无水二氯甲烷(4mL)中的溶液中逐滴添加三氟乙酸(4mL)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。然后将反应混合物减压蒸发至干，随后与二氯甲烷(2次)和乙醚(2次)一起研磨，得到12-((1,3-双(己-5-炔酰基氧基)-2-((己-5-炔酰基氧基)甲基)丙烷-2-基)氨基)-12-氧代十二烷酸(44-6)，为淡黄色固体。产率：0.40g,粗品。ELSD-MS m/z 614.20[M-1]+。
向搅拌的12-((1,3-双(己-5-炔酰基氧基)-2-((己-5-炔酰基氧基)甲基)丙烷-2-基)氨基)-12-氧代十二烷酸(44-6,0.40g,1.0eq,0.650mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中添加溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的五氟苯酚(44-6a,0.10g,0.9eq.,0.580mmol)和N,N’-二异丙基碳二亚胺(0.16g,2.0eq,1.30mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌18小时。完成后，将反应混合物减压浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用30-50％的在己烷中的乙酸乙酯的硅胶快速柱色谱法纯化，得到2-((己-5-炔酰基氧基)甲基)-2-(12-氧代-12-(全氟苯氧基)十二烷酰胺基)丙烷-1,3-二基双(己-5-炔酸酯)(44-7)，为灰白色半固体。产率：0.350g,68％；ELSD-MS m/z 782.0[M+1]+。
向搅拌的2-((己-5-炔酰基氧基)甲基)-2-(12-氧代-12-(全氟苯氧基)十二烷酰胺基)丙烷-1,3-二基双(己-5-炔酸酯)(44-7,0.10g,1.0eq,0.128mmol)和N-((2R,3R,4R,5R,6R)-2-叠氮基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(XB6,3.3eq,0.10g,0.422mmol)在二甲基亚砜(3mL)中的溶液中添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(0.40g,8.4eq.,1.07mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物通过制备型HPLC(使用23-41％的在含0.1％TFA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到2-(((4-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)丁酰基)氧基)甲基)-2-(12-氧代-12-(全氟苯氧基)十二烷酰胺基)丙烷-1,3-二基双(4-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)丁酸酯)(化合物I-157)，为灰白色固体。产率：0.14g,72％LCMS m/z 1520.60[M+1]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6与D2O交换)δ7.85(s,3H),5.55(d,J＝9.6Hz,3H),4.35(t,J＝10.0Hz,3H),4.26(s,6H),3.77(d,J＝2.4,Hz,3H),3.69-3.66(m,6H),3.55-3.46(m,6H),2.72(t,J＝7.0Hz,2H),2.58(t,J＝7.2Hz,6H),2.29(t,J＝7.2Hz,6H),2.02(t,J＝6.8Hz,2H),1.81-1.74(m,6H),1.64-1.58(m,11H),1.41-1.39(m,2H),1.30-1.38(m,13H)。
实施例45：1-(4-(3-(((3S,4S,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13,13-双(3-((2-(2-(2-(4-(3-(((3S,4S,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-羧酸(化合物I-165)的合成
将在氮气下的1-叠氮基-13,13-双(3-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-羧酸(1.00eq,8.0mg,0.00862mmol)和(2R,3R,4S,5S)-2-(羟基甲基)-5-戊-4-炔氧基-四氢吡喃-3,4-二醇(3.30eq,6.5mg,0.0284mmol)在DMSO(200mL)中的溶液用六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(3.10eq,10.0mg,0.0267mmol)处理，并将反应物在室温下搅拌1小时。将反应物用TFA酸化，然后通过反相HPLC(10-50％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)纯化两次，得到化合物I-165(2.2mg,0.00129mmol,15％产率)。LCMS m/z 1616.2[M-H]-。
实施例46：1-(4-(((2-(((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-6-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13,13-双(3-((2-(2-(2-(4-(((2-(((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-6-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-羧酸(I-166)的合成
将在氮气下的1-叠氮基-13,13-双(3-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-羧酸(1.00eq,7.6mg,0.00819mmol)和(2R,3R,4R,5S)-2-(羟基甲基)-5-((4-(丙-2-炔-1-基氧基)-6-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)四氢-2H-吡喃-3,4-二醇(XB25B,3.30eq,9.8mg,0.0270mmol)在DMSO(200mL)中的溶液用六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(3.10eq,9.5mg,0.0254mmol)处理，并将反应物在室温下搅拌1小时。将反应物用TFA酸化，然后直接通过反相HPLC(10-50％的在含0.1％ TFA的水中的乙腈)纯化，得到化合物I-166(11mg,0.00555mmol,68％产率)。LCMS m/z1007.4[(M-2H)/2]-。
通过修改针对化合物I-166的程序，用中间体XB25A(例如，如本文所述)替换中间体XB25B合成化合物I-167。下面提供了化合物I-167的结构、名称和数据。
1-(4-(((4-(((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-6-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13,13-双(3-((2-(2-(2-(4-(((4-(((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-6-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-羧酸(I-167)。
LCMS m/z 1007.4[(M-2H)/2]-。
实施例47：N1-(1-(4-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-基)-N12-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)十二烷二酰胺(化合物I-168)的合成
将(2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2,4,5-三基三乙酸酯(47-1,1.0eq,20.0g,51.4mmol)在乙酰氯(60mL)中的溶液在0℃下冷却，添加甲醇(2.4eq,4.98mL,123.3mmol)并将反应混合物在室温下搅拌48小时。完成后，将反应混合物浓缩，用10％的在乙酸乙酯中的乙醚洗涤并干燥，得到(2R,3R,4R,5R)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-氯四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(47-2)，为白色固体。产率：16.0g,85.16％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.08(d,J＝2.0Hz,1H),5.36-5.31(m,2H),5.26-5.25(m,1H),5.29-5.25(m,1H),4.15-4.02(m,3H),2.16(d,J＝3.2Hz,3H),2.09(s,3H),2.07(s,3H),2.00(s,3H)。
向搅拌的(2R,3R,4R,5R)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-氯四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(47-2,5.0g,1.0eq.,13.7mmol)在无水四氢呋喃(50mL)中的溶液中添加烯丙基三丁基锡烷(47-2a,42.7mL,10.0eq.,137mmol)和偶氮二异丁腈(AIBN)(0.673g,0.3eq.,4.1mmol)。然后用氩气吹扫反应混合物，并将其回流12小时。之后，将挥发物真空移除，并将剩余的残留物在乙腈和戊烷之间分配。将乙腈层用戊烷萃取(3次)以移除剩余的有机锡化合物，然后浓缩至干以得到粗品，将该粗品通过使用45-50％的在己烷中的乙酸乙酯洗脱的硅胶快速柱色谱法纯化，得到(2R,3R,4R,5S,6R)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-烯丙基四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(47-3)，为粘性无色浆状物。产率：2.4g,47.0％；ELSD-MS m/z 372.21[M+H]+。
在0℃下向搅拌的(2R,3R,4R,5S,6R)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-烯丙基四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(1.5g,1eq,4.03mmol)在丙酮:水(5:1)(15mL)中的溶液中添加N-甲基吗啉-N-氧化物(0.708g,1.5eq,6.04mmol)，随后添加四氧化锇(4.0重量％在水中，0.274mL,0.1eq,0.0403mmol)，并在室温下搅拌2小时。完成后，将反应混合物用乙酸乙酯萃取。然后将有机部分经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，将该粗产物再次溶于丙酮:水(2:1)(15mL)中，并添加高碘酸钠(1.55g,2.0eq.,8.06mmol)，在室温下再搅拌3小时。之后，将反应混合物用乙酸乙酯萃取，并将收集的乙酸乙酯经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗品(2R,3R,4R,5S,6R)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-(2-氧代乙基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(47-4)，为无色浆状物。该粗品在未经纯化的情况下立即用于下一步骤。产率：1.4g(粗品)；ELSD-MS m/z374.19[M+H]+。
向在0℃下的搅拌的(2R,3R,4R,5S,6R)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-(2-氧代乙基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(1.0g,1.00eq,2.68mmol)在甲醇(25.0mL)中的溶液中添加碳酸钾(1.11g,3.0eq.,8.04mmol)、(1-重氮基-2-氧代丙基)磷酸二甲酯(1.03g,2.0eq.,5.36mmol)并在室温下搅拌5小时。之后，将挥发物真空蒸发以得到粗品，将该粗品通过制备型HPLC(70％的在含0.1％三氟乙酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到N-((2R,3R,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-2-(丙-2-炔-1-基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺(XB4B)，为灰白色固体。产率：0.112g,17.04％。LCMS m/z 244.11[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6与D2O交换)δ4.05-4.00(m,2H),3.73(bs,1H),3.58-3.45(m,4H),2.60(t,J＝2.4Hz,1H),2.46-2.41(m,1H),2.33-2.27(m,1H),1.82(s,3H)。
向化合物47-5(1.00eq,14.7mg,0.0285mmol)在DMSO(0.5mL)中的混合物中添加DIEA(4.00eq,0.020mL,0.114mmol)和HATU(1.10eq,11.9mg,0.0314mmol)，随后添加2-马来酰亚胺乙胺盐酸盐(1.00eq,5.0mg,0.0285mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟并向该混合物中添加化合物XB4B(1.00eq,6.9mg,0.0285mmol)。将混合物用氮气吹扫并添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(2.00eq,21.5mg,0.0570mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物通过制备型HPLC(10-40％ MeCN/含0.1％ TFA的水)纯化，得到I-168，为白色固体(11.8mg，产率：47％)。LCMS m/z 881.2[M+H]+。
实施例48：(2R,3R,4R,5S)-5-((5-(丁-3-炔-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-yl)氨基)-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二醇(XB26)的合成
将(2S,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2,4,5-三基三乙酸酯(48-1,1.0eq,20.0g,51.4mmol)在乙酰氯(60mL)中的溶液在0℃下冷却，添加甲醇(2.4eq,4.98mL,123.3mmol)并将反应混合物在室温下搅拌48小时。完成后，将反应混合物浓缩，用10％的在乙酸乙酯中的乙醚洗涤并干燥，得到(2R,3R,4R,5R)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-氯四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(48-2)，为白色固体。产率：16.0g,85.16％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.08(d,J＝2.0Hz,1H),5.36-5.31(m,2H),5.26-5.25(m,1H),5.29-5.25(m,1H),4.15-4.02(m,3H),2.16(d,J＝3.2Hz,3H),2.09(s,3H),2.07(s,3H),2.00(s,3H)。
向(2R,3R,4R,5R)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-氯四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(48-2,1.0eq,10.0g,27.3mmol)在甲苯(100mL)中的溶液中添加三丁基氢化锡(1.2eq,8.84mL,32.8mmol)和偶氮二异丁腈(AIBN)(0.1eq,0.449g,2.73mmol)，并将反应混合物在120℃下加热16小时。完成后，将反应混合物冷却并浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-80％的在己烷中的乙酸乙酯的柱色谱法纯化，得到(2R,3R,4R,5S)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(48-3)，为无色粘性固体。产率：8.7g,84.52％；ELSD m/z 330.0[M-1]-。
将(2R,3R,4R,5S)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(48-3,1.0eq,4.0g,12.1mmol)在2.5M盐酸水溶液(25mL)中的溶液在100℃下加热16小时。完成后，将反应混合物冷却，浓缩，用甲醇、乙醚洗涤并干燥，得到(2R,3R,4R,5S)-5-氨基-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二醇盐酸盐(48-4)，为淡棕色固体。产率：1.6g,81.22％；ELSD m/z 164.15[M+1]+。
向(2R,3R,4R,5S)-5-氨基-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二醇盐酸盐(48-4,1.0eq,2.1g,12.9mmol)在甲醇:水(9:1)(21mL)中的溶液中添加硫酸铜五水合物(0.1eq,0.320g,1.29mmol)和碳酸钾(5.0eq,8.89g,64.3mmol)，在0℃下冷却，添加1H-咪唑-1-磺酰基叠氮盐酸盐(1.2eq,3.24g,15.4mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物浓缩，添加水并用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用硅胶和0-15％的在二氯甲烷中的甲醇氨的柱色谱法纯化，得到(2R,3R,4R,5S)-5-叠氮基-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二醇(XB29)，为奶油状固体。产率：1.6g,65.72％；LCMS m/z 188.05[M-1]-；1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.82(bs,1H),7.12(bs,2H),3.98-3.91(m,1H),3.84-3.83(m,1H),3.74-3.62(m,3H),3.52-3.47(m,1H),3.39-3.36(m,1H),3.07(t,J＝10.8Hz,1H)。
向(2R,3R,4R,5S)-5-氨基-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二醇盐酸盐(48-5,1.0eq,2.0g,10.0mmol)在甲醇(40mL)中的溶液中添加甲醇钠(25％在甲醇中)(1.2eq,2.89mL,12.0mmol)并将反应混合物在室温下搅拌30分钟。然后，添加邻苯二甲酸酐(48-1a,1.2eq,1.78g,12.0mmol)并将反应混合物在室温下搅拌30分钟。然后，添加三乙胺(1.4eq,2.03mL,14.0mmol)和第二部分的邻苯二甲酸酐(48-1a,1.2eq,1.78g,12.0mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。之后，将反应混合物浓缩，用乙醚洗涤并干燥，得到2-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(48-6)，为淡紫色固体，该固体照原样用于下一个反应。产率：7.0g(粗品)。
将2-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(48-6,1.0eq,7.0g,23.9mmol)在吡啶(70mL)中的溶液在0℃下冷却，添加乙酸酐(10.0eq,24.4mL,239.0mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物用1N盐酸稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-50％的在己烷中的乙酸乙酯的柱色谱法纯化，得到(2R,3R,4R,5S)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(48-7)，为灰白色粘性固体。产率：1.1g,10.99％；ELSD m/z 437.45[M+18]+。
将(2R,3R,4R,5S)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(48-7,1.0eq,1.1g,2.62mmol)在甲醇(11mL)中的溶液在0℃下冷却，添加甲醇钠(25％的在甲醇中的溶液)(0.1eq,0.06mL,0.262mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，将反应混合物用Dowex50Wx8氢型(200-400目)中和并通过烧结漏斗(无硅藻土)过滤。将滤液浓缩，用乙醚洗涤并干燥，得到2-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(48-8)，为灰白色固体。产率：0.640g,83.2％；ELSD m/z 294.15[M+1]+。
将2-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(48-8,1.0eq,0.900g,3.07mmol)在二氯甲烷(9mL)中的溶液在0℃下冷却，添加N,N-二异丙基乙胺(8.0eq,4.53mL,24.6mmol)和氯甲基甲醚(6.0eq,1.48mL,18.4mmol)，并将反应混合物在80℃下加热16小时。完成后，将反应混合物冷却，添加水并用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-25％的在己烷中的乙酸乙酯的柱色谱法纯化，得到2-((3S,4R,5R,6R)-4,5-双(甲氧基甲氧基)-6-((甲氧基甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(48-9)，为无色粘稠液体。产率：0.600g,45.96％；ELSD m/z 443.25[M+18]+。
向2-((3S,4R,5R,6R)-4,5-双(甲氧基甲氧基)-6-((甲氧基甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(48-9,1.0eq,0.580g,1.36mmol)在乙醇(6mL)中的溶液中添加乙二胺(10.0eq,0.91mL,13.6mmol)并将反应混合物在80℃下加热16小时。完成后，将反应混合物冷却并浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-5％的在二氯甲烷中的甲醇的柱色谱法纯化，得到(3S,4R,5R,6R)-4,5-双(甲氧基甲氧基)-6-((甲氧基甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺(48-10)，为无色粘稠液体。产率：0.310g,76.99％；ELSD m/z 296.20[M+1]+。
将(3S,4R,5R,6R)-4,5-双(甲氧基甲氧基)-6-((甲氧基甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺(48-10,1.0eq,0.100g,0.339mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液在0℃下冷却，添加三乙胺(2.0eq,0.097mL,0.677mmol)和硫光气(1.0eq,0.038g,0.339mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过ELSD监测反应。完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并干燥，得到(2R,3R,4R,5S)-5-异硫氰基-3,4-双(甲氧基甲氧基)-2-((甲氧基甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃(48-11)，为淡棕色粘稠液体。产率：0.110g(粗品)；ELSD m/z 355.15[M+18]+。
向(2R,3R,4R,5S)-5-异硫氰基-3,4-双(甲氧基甲氧基)-2-((甲氧基甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃(7,1.0eq,0.300g,0.889mmol)和戊-4-炔醛(48-7a,1.0eq,0.073g,0.889mmol)在甲醇(12mL)中的溶液中添加水合肼(1.0eq,0.044g,0.889mmol)并将反应混合物在65℃下加热3小时。之后，将反应混合物冷却至室温，添加硫酸铵铁(III)十二水合物(3.0eq,1.29g,2.67mmol)，并将反应混合物在65℃下加热16小时。完成后，将反应混合物冷却，通过烧结漏斗(无硅藻土)过滤并将滤液浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-3％的在二氯甲烷中的甲醇的柱色谱法纯化，得到N-((3S,4R,5R,6R)-4,5-双(甲氧基甲氧基)-6-((甲氧基甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-5-(丁-3-炔-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(48-12)，为无色粘稠液体。产率：0.180g,45.41％；LCMS m/z 432.15[M+1]+。
将N-((3S,4R,5R,6R)-4,5-双(甲氧基甲氧基)-6-((甲氧基甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-5-(丁-3-炔-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(48-12,1.0eq,0.025g,0.057mmol)在四氢呋喃(0.5mL)中的溶液在0℃下冷却，添加6N盐酸水溶液(0.5mL)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物浓缩并通过制备型HPLC(11-23％的在含0.05％三氟乙酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到(2R,3R,4R,5S)-5-((5-(丁-3-炔-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二醇(XB26)，为奶油状固体。产率：0.003g,17.64％；LCMS m/z 300.10[M+1]+；1H NMR(400MHz,MeOD)δ4.17-4.13(m,1H),3.97-3.89(m,2H),3.77-3.72(m,1H),3.70-3.66(m,1H),3.63-3.57(m,1H),3.48-3.43(m,1H),3.20(t,J＝10.8Hz,1H),3.08(t,J＝7.2Hz,2H),2.62-2.58(m,2H),2.38(t,J＝2.4Hz,1H)。
实施例49：4-氨基-4-(1-(1-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羟基-1-(羟基甲基)-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-4-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-12-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十四烷-14-基)-N1,N7-双(2-(2-(2-((1-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-二羟基-1-(羟基甲基)-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-4-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)庚烷二酰胺(XB40)的合成
化合物XB40是由与实施例34中的化合物I-142类似的化合物49-1和XB39(Sanhueza,J.Am.Chem.Soc.2017,139,3528-3536.)合成，得到化合物XB40，为23％产率。纯度99％。LCMS m/z 1406.8[M+H]+。
实施例50：13,13-双((3-((4-(3-((1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲酰胺基)丁基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-1-(3-((1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯基)-1,8,15-三氧代-11-氧杂-2,7,14-三氮杂二十六烷-26-羧酸(化合物I-171)
将3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸(50-1,1.0eq,1.0g,5.68mmol)和(4-氨基丁基)氨基甲酸叔丁酯(50-1a,1.5eq,1.6g,8.51mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液在0℃下冷却，添加N,N-二异丙基乙胺(3.0eq,3.12mL,17.0mmol)和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU)(1.5eq,3.24g,8.51mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，向反应混合物中添加水并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品，将该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-30％的在己烷中的乙酸乙酯的柱色谱法纯化，得到(4-(3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酰胺基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(50-2)，为白色固体。产率：1.5g,76.28％；LCMS m/z 347.10[M+1]+。
将(4-(3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酰胺基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(50-2,1.0eq,1.5g,4.33mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液在0℃下冷却，添加三氟乙酸(8mL)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物浓缩，与二氯甲烷共沸(2-3次)，用乙醚洗涤(2-3次)并干燥，得到N-(4-氨基丁基)-3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酰胺(50-3)，为白色固体。产率：1.8g(粗品)；LCMS m/z247.15[M+1]+。
向3,3’-((2-(12-(苄基氧基)-12-氧代十二烷酰胺基)-2-((3-氧代-3-(全氟苯氧基)丙氧基)甲基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸双(全氟苯基)酯(50-3a,1.0eq,0.250g,0.22mmol)和N-(4-氨基丁基)-3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酰胺(50-3,3.6eq,0.195g,0.792mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(10.0eq,0.4mL,2.2mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。之后，添加2N氢氧化钠水溶液(2.5mL)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物直接通过制备型HPLC(22-35％的在含0.05％三氟乙酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到1,8,15-三氧代-13,13-双((3-氧代-3-((4-(3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酰胺基)丁基)氨基)丙氧基)甲基)-1-(3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)-11-氧杂-2,7,14-三氮杂二十六烷-26-羧酸(50-4)，为白色固体。产率：0.022g,8.87％；LCMS m/z 618.52[(M/2)+1]+。
向1,8,15-三氧代-13,13-双((3-氧代-3-((4-(3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酰胺基)丁基)氨基)丙氧基)甲基)-1-(3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)-11-氧杂-2,7,14-三氮杂二十六烷-26-羧酸(50-4,1.0eq,0.025g,0.020mmol)和(2R,3R,4R,5S)-5-叠氮基-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二醇(XB29,3.0eq,0.011g,0.060mmol)在二甲基亚砜(1mL)中的溶液中添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(4.5eq.,0.033g,0.091mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物用乙酸(0.1mL)淬灭并通过制备型HPLC(33-45％的在含0.05％三氟乙酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到13,13-双((3-((4-(3-((1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲酰胺基)丁基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-1-(3-((1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯基)-1,8,15-三氧代-11-氧杂-2,7,14-三氮杂二十六烷-26-羧酸(I-171)，为白色固体。产率：0.005g,13.7％；LCMS m/z 902.27[(M/2)+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6加D2O)δ8.18(s,3H),7.37-7.33(m,9H),7.15-7.12(m,3H),5.10(s,6H),4.67-4.63(m,3H),4.02-3.95(m,6H),3.81(d,J＝3.2Hz,3H),3.62(t,J＝10.8Hz,3H),3.54-3.45(m,21H),3.20(t,J＝6.0Hz,6H),3.02(t,J＝6.4Hz,6H),2.22(t,J＝5.6Hz,6H),2.08(t,J＝7.6Hz,2H),1.99-1.97(m,2H),1.45-1.35(m,16H),1.08(s,12H)。
按照针对化合物I-171的程序，将化合物50-1用以下结构的4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸代替来合成化合物I-172：
下面提供了化合物I-172的结构、名称和数据。
13,13-双((3-((4-(4-((1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲酰胺基)丁基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-1-(4-((1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯基)-1,8,15-三氧代-11-氧杂-2,7,14-三氮杂二十六烷-26-羧酸(I-172)。
LCMS m/z 902.36[(M/2)+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6加D2O)δ8.20(s,3H),7.74(d,J＝8.8Hz,6H),7.04(d,J＝8.8Hz,6H),5.13(s,6H),4.70-4.64(m,3H),4.00-3.95(m,6H),3.81(d,J＝3.2Hz,3H),3.62(t,J＝10.8Hz,3H),3.53-3.47(m,21H),3.19-3.17(m,6H),3.02(t,J＝6.4Hz,6H),2.23(t,J＝5.2Hz,6H),2.10(t,J＝7.2Hz,2H),2.00(t,J＝6.8Hz,2H),1.45-1.38(m,16H),1.11(s,12H)。
实施例51：4-氨基-4-(1-(1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-12-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十四烷-14-基)-N1,N7-双(2-(2-(2-((1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)庚烷二酰胺(XB32)
向(4-氨基-4-(3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十六烷-15-炔-1-基)-N1,N7-双(2-(2-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)庚烷二酰胺(51-1,1.0eq,0.20g,0.265mmol)和(2R,3R,4R,5S)-5-叠氮基-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二醇(XB29,3.6eq,0.180g,0.954mmol)在二甲基亚砜(2mL)中的溶液中添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(7.5eq,0.741g,1.99mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时并将反应混合物直接通过制备型HPLC(15-20％的在含0.1％ FA的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到4-氨基-4-(1-(1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-12-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十四烷-14-基)-N1,N7-双(2-(2-(2-((1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)庚烷二酰胺(XB32)，为淡蓝色固体。产率：0.18g；51.38％：LCMS；m/z 1322.50[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6与D2O交换)δ8.05(s,3H),4.68-4.61(m,3H),4.48(s,6H),3.99-3.93(m,6H),3.80(d,J＝3.2Hz,3H),3.63-3.58(m,3H),3.54-3.46(m,33H),3.38(t,J＝5.6Hz,6H),3.17(t,J＝5.6Hz,6H),2.15-2.11(m,6H),1.99(s,1H),1.72(bs,6H)。
实施例52：3-((1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲酸(XB20)的合成
向3-羟基苯甲酸甲酯(52-1,1.0eq,3.0g,19.7mmol)和3-溴丙-1-炔(52-1a,2.0eq,4.69g,39.4mmol)在乙腈(30mL)中的溶液中添加碳酸钾(2.5g,6.81g,49.3mmol)并将反应混合物在70℃下加热16小时。完成后，向反应混合物中添加水并用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将该产物通过使用硅胶(100-200目)和0-25％的在己烷中的乙酸乙酯的柱色谱法纯化，得到3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸甲酯(52-2)，为白色固体。产率：3.6g,95.99％；LCMS m/z 189.05[M-1]-。
向3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸甲酯(52-2,1.0eq,3.6g,18.9mmol)在四氢呋喃(18mL)中的溶液中添加2N氢氧化钠水溶液(18mL)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物浓缩，添加水，用1N盐酸水溶液酸化以得到固体，将该固体滤出并干燥，得到3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸(52-3)，为白色固体。产率：2.7g,80.97％；LCMS m/z175.05[M-1]-。
向(2R,3R,4R,5S)-5-叠氮基-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二醇(XB29,1.0eq,0.200g,1.05mmol)和3-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸(52-3,1.0eq,0.186g,1.05mmol)在二甲基亚砜(4mL)中的溶液中添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(1.5eq,0.588g,1.58mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物用乙酸(0.4mL)淬灭并通过制备型HPLC(20-45％的在含0.05％三氟乙酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需产物的级分并将其冻干至干，得到3-((1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲酸(XB20)，为白色固体。产率：0.078g,20.25％；LCMS m/z 366.10[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6加D2O)δ8.22(s,1H),7.54-7.51(m,2H),7.42(t,J＝8.0Hz,1H),7.29-7.26(m,1H),5.15(s,2H),4.75-4.62(m,1H),4.01-3.95(m,2H),3.80(d,J＝2.8Hz,1H),3.63(t,J＝10.8Hz,1H),3.53-3.48(m,3H)。
通过修改针对化合物XB20合成的程序，将化合物52-3用4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯甲酸(下面再现了其结构)代替来合成化合物XB21：
下面提供了化合物XB21的结构、名称和数据。
4-((1-((3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯甲酸。
LCMS m/z 366.19[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6加D2O)δ8.24(s,1H),7.92-7.88(m,2H),7.15-7.11(m,2H),5.17(s,2H),4.71-4.65(m,1H),4.01-3.95(m,2H),3.80(d,J＝2.8Hz,1H),3.63(t,J＝11.2Hz,1H),3.53-3.46(m,3H)。
实施例53：12-((3-(5-(((3aR,4R,6R,7R,7aR)-7-乙酰胺基-4-(羟基甲基)-2-氧代四氢-4H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-c]吡喃-6-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-12-氧代十二烷酸全氟苯基酯(化合物I-173)的合成
向12-((3-(5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-12-氧代十二烷酸叔丁酯(53-5,1.0eq,0.400g,0.619mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中添加咪唑(2.0eq,0.084g,1.24mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(1.5eq,0.140g,0.929mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-4％的在二氯甲烷中的甲醇的柱色谱法纯化，得到12-((3-(5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4,5-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-12-氧代十二烷酸叔丁酯(53-6)，为灰白色固体。产率：0.300g,63.73％；LCMS m/z760.30[M+1]+。
向12-((3-(5-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙酰胺基-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4,5-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-12-氧代十二烷酸叔丁酯(53-6,1.0eq,0.300g,0.395mmol)和1,1’-羰二咪唑(CDI)(1.5eq,0.096g,0.592mmol)在乙腈(6mL)中的溶液中添加4-二甲基氨基吡啶(0.1eq,0.004g,0.039mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，向反应混合物中添加水并用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到粗品，将该粗品通过使用硅胶(100-200目)和0-5％的在二氯甲烷中的甲醇的柱色谱法纯化，得到12-((3-(5-(((3aR,4R,6R,7R,7aR)-7-乙酰胺基-4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-氧代四氢-4H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-c]吡喃-6-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-12-氧代十二烷酸叔丁酯(53-7)，为灰白色粘性固体。产率：0.200g,64.46％；LCMS m/z 786.25[M+1]+。
将12-((3-(5-(((3aR,4R,6R,7R,7aR)-7-乙酰胺基-4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-氧代四氢-4H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-c]吡喃-6-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-12-氧代十二烷酸叔丁酯(53-7,1.0eq,0.050g,0.063mmol)在二氯甲烷(0.25mL)中的溶液在0℃下冷却，添加4N的在1,4-二噁烷中的盐酸(0.25mL)并将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，将反应混合物浓缩,与二氯甲烷共沸(2-3次)，干燥并冻干至干，得到12-((3-(5-(((3aR,4R,6R,7R,7aR)-7-乙酰胺基-4-(羟基甲基)-2-氧代四氢-4H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-c]吡喃-6-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-12-氧代十二烷酸(53-8)，为灰白色粘性固体。产率：0.035g(粗品)；LCMS m/z 616.30[M+1]+。
向12-((3-(5-(((3aR,4R,6R,7R,7aR)-7-乙酰胺基-4-(羟基甲基)-2-氧代四氢-4H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-c]吡喃-6-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-12-氧代十二烷酸(53-8,1.0eq,0.030g,0.048mmol)和五氟苯酚(53-8a,1.2eq,0.010g,0.058mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中添加N,N’-二异丙基碳二亚胺(2.0eq,0.012g,0.097mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物直接通过制备型HPLC(20-35％的在含0.05％三氟乙酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需化合物的级分并将其冻干，得到12-((3-(5-(((3aR,4R,6R,7R,7aR)-7-乙酰胺基-4-(羟基甲基)-2-氧代四氢-4H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-c]吡喃-6-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-12-氧代十二烷酸全氟苯基酯(化合物I-173)，为白色固体。产率：0.008g,21.0％；LCMS m/z782.72[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6与D2O交换)δ4.88-4.81(m,2H),4.49(d,J＝7.2Hz,1H),3.86-3.83(m,2H),3.70-3.64(m,1H),3.58-3.55(m,3H),3.39-3.35(m,1H),2.99(t,J＝6.4Hz,4H),2.71-2.67(m,1H),2.16(t,J＝7.2Hz,1H),2.03-2.00(m,4H),1.83(s,3H),1.65-1.58(m,1H),1.49-1.43(m,9H),1.32-1.28(m,3H),1.25-1.19(m,8H)。
实施例54：1-(4-(3-((2S,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二羟基-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-甲酰胺基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13,13-双(3-((2-(2-(2-(4-(3-((2S,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二羟基-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-甲酰胺基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(化合物I-152)的合成
向1-叠氮基-13,13-双(3-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(LC19,1.0eq,0.030g,0.027mmol)和(2S,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二羟基-6-甲氧基-N-(戊-4-炔-1-基)四氢-2H-吡喃-2-甲酰胺(54-1,3.5eq,0.0298g,0.0947mmol)在二甲基亚砜(2mL)中的溶液中添加六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(8.4eq,0.0848g,0.227mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物用乙腈稀释并通过制备型HPLC(35-45％的在含0.1％三氟乙酸的水中的乙腈)纯化。合并含有所需化合物的级分并将其冻干，得到1-(4-(3-((2S,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二羟基-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-甲酰胺基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-13,13-双(3-((2-(2-(2-(4-(3-((2S,3R,4R,5R,6R)-5-乙酰胺基-3,4-二羟基-6-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-甲酰胺基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-3-氧代丙基)-10,15-二氧代-3,6-二氧杂-9,14-二氮杂二十六烷-26-酸全氟苯基酯(I-152)，为白色固体。产率：0.016g,28.64％；LCMS m/z 1019.39[M/2+1]+；1H-NMR(400MHz,与D2O交换)δ7.80(s,3H),4.43(t,J＝4.8Hz,6H),4.24(d,J＝8.8Hz,3H),3.93(d,J＝2.4Hz,3H),3.86(s,3H),3.79-3.74(m,9H),3.49-3.43(m,15H),3.38(s,9H),3.34(t,J＝6.0Hz,6H),3.15-3.12(m,12H),2.73(t,J＝7.2Hz,2H),2.59(t,J＝7.2Hz,2H),2.03-1.96(m,8H),1.80(s,9H),1.77-1.70(m,12H),1.65-1.62(m,2H),1.43-1.41(m,1H),1.32-1.13(m,14H)。
6.2.缀合物的制备
实施例55：基于异硫氰酸酯的配体-接头化合物与抗EGFR和抗PD-L1抗体的缀合。
该实施例提供了用于将基于异硫氰酸酯的配体-接头化合物与抗EGFR抗体(例如，马妥珠单抗、西妥昔单抗)和抗PD-L1抗体(例如，阿替利珠单抗、抗PD-L1(29E.2A3))的赖氨酸残基上的伯胺缀合的通用方案。
将抗体缓冲液更换为5mg/mL浓度的100mM碳酸氢钠缓冲液pH 9.0，之后将约30当量的基于异硫氰酸酯的配体-接头化合物(例如，新鲜制备为20mM的在DMSO中的储备溶液)加入并在环境温度下在管式旋转器中以10rpm的速度温育过夜。
将缀合物使用PD-10脱盐柱(GE Healthcare)纯化，并随后使用Amicon Ultra15mL离心过滤器将最终缀合物配制到PBS pH 7.4中，过滤器截留分子量30kDa。
实施例56：基于全氟苯氧基的配体-接头化合物与抗EGFR和IgG抗体的缀合。
该实施例提供了用于将基于全氟苯氧基的配体-接头化合物(例如，化合物I-141)与抗EGFR抗体(例如，马妥珠单抗、西妥昔单抗)和IgG抗体(例如，IgG2a-UNLB)的赖氨酸残基上的伯胺缀合的通用方案。
将抗体缓冲液更换为5mg/mL浓度的50mM磷酸钠缓冲液pH 8.0，然后加入约22当量的基于全氟苯氧基配体-接头化合物(例如，化合物I-141；新鲜制备为DMSO中的20mM储备溶液)加入并在环境温度下在管式旋转器中以10rpm的速度温育3小时。
使用PD-10脱盐柱(GE Healthcare)纯化每个抗体平均含有四个配体-接头部分的缀合物，然后使用Amicon Ultra 15mL离心过滤器将最终缀合物配制到PBS pH 7.4中，过滤器截留分子量30kDa。
实施例57：通过质谱法测定DAR值。
该实施例提供了确定如实施例55和56中所述制备的缀合物的DAR值的方法。为了确定DAR值，将10μg抗体(未缀合的或缀合的)在2μL非还原性变性缓冲液(10X，New EnglandBiolabs)中在75℃下处理10分钟。然后通过添加1.5μL Rapid-PNGase F(New EnglandBiolabs)对变性抗体溶液进行去糖基化，并在50℃下温育10分钟。将去糖基化样本在水中稀释50倍，并在与Xevo G2-S QToF质谱仪连接的Waters ACQUITY UPLC上进行分析。使用Waters MassLynx 4.2软件获得解卷积质量。使用以下公式，使用与每种负载物质相对应的峰强度的加权平均值计算DAR值：
DAR＝Σ(具有药物负载n的每个Ab的药物负载分布(％))(n)/100
表15至18中示出了所制备的缀合物的DAR值。
实施例58：通过SEC方法测定缀合物的纯度。
如实施例55和56中所述制备的缀合物的纯度通过尺寸排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC)使用20分钟等度法测定，其中流动相为0.2M磷酸钠、0.2M氯化钾、15w/v异丙醇，pH6.8。以0.35mL/min的恒定流速将10μL的进样体积加载到TSKgel SuperSW3000色谱柱。基于洗脱时间对色谱仪进行积分以计算单体缀合物种类的纯度。
实施例59：抗体二硫化物还原和硫醇反应性配体-接头与抗体的缀合。
此实施例提供了用于还原本文所述抗体的二硫化物以及将经还原的抗体与本文所述的硫醇反应性配体-接头化合物(例如，含有马来酰亚胺化学反应性连结基团的硫醇反应性配体-接头化合物)缀合的示例性方案。
方案：抗体二硫化物还原
A)在PBS pH 7.4中稀释抗体至15mg/mL(0.1mM IgG)。
B)在H2O中制备新鲜的20mM(5.7mg/mL)三(2羧乙基)膦(TCEP)储备溶液。
C)将上述步骤B)中的25μL TCEP储备溶液添加到上述步骤A)中的1mL抗体中(0.5mM最终浓度TCEP)。
D)在37℃下温育2小时(使用5,5’-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)(DTNB)测试检查游离硫醇)。
E)将经还原抗体等分分装到4个管中(每管250μL)。
配体-接头与抗体的缀合
A)在DMSO(DMA、DMF或CH3CN也是可接受的)中制备硫醇反应性配体-接头化合物的10mM储备溶液。
B)将上述步骤A)中5当量的12.5μL储备溶液添加到每管经还原抗体(0.5mM终浓度配体-接头化合物储备溶液)中。
C)在室温下4℃温育过夜4小时；使用DTNB测试检查游离硫醇。
D)运行分析疏水相互作用色谱(HIC)以确定DAR和均匀性。
实施例60：奥马珠单抗缀合物的制备
使用与实施例55至58中所述的方法类似的方法制备和表征示例性抗体奥马珠单抗(一种抗IgE抗体)与一系列含全氟苯基酯的配体-接头化合物的一系列缀合物。
如实施例67中所述，评估这些缀合物的细胞摄取活性。
6.3.化合物和缀合物活性的评估
实施例61：Alexa Fluor标记。
根据制造商的方案，使用Alexa FluorTM蛋白质标记试剂盒(Invitrogen)将西妥昔单抗、马妥珠单抗和人IgG同种型抗体与Alexa Fluor 647缀合。简而言之，将要标记的抗体在PBS中稀释至2mg/mL，总体积为500μL。15DOL(标记度)用于与荧光团的缀合。通过用PBS预润湿Amicon 30kDa过滤器去除游离染料。温育后，然后将缀合反应加入过滤器并高速旋转10分钟。然后将保留的溶液重新悬浮在PBS中，最终体积为1mL，并在4℃下无限期储存。
可对以上程序进行修改，以使用例如NHS-赖氨酸缀合化学用替代染料诸如AlexaFluorTM488对多种抗体或感兴趣的靶蛋白质进行荧光标记。
实施例62：通过表面染色测量EGFR/IgG水平。
本实施例提供了西妥昔单抗和马妥珠单抗缀合物对通过表面染色测量的Hela亲代细胞中的表面EGFR和IgG水平的时程活性的测量方案。
第-1天
将1e6 Hela亲代细胞接种在6孔板中的2mL培养基中。
第0天
用1.5mL新鲜培养基替换培养基。
将PBS、未缀合抗体和缀合抗体以20nM的最终浓度添加到各个孔中。
第1/2/3天
从孔中吸出培养基并用PBS洗涤三次。加入750μL无酶解离缓冲液，让细胞在冰上分离。
将细胞收集在试管中并在4℃下以300xg减速旋转5分钟。
将细胞重新悬浮在PBS中，并将体积等分到两个试管中。
所有管在4℃下以300xg旋转5分钟。一组，抽吸PBS并将沉淀冷冻在-80℃。
另一组，抽吸PBS并用冷的FACS缓冲液洗涤2次。
最后一次洗涤后，将沉淀重新悬浮在300μL FACS缓冲液中。
将300μL悬浮液分成96孔板的三个孔(每个孔100μL)。
第1组：Ctx::AF647以1:100稀释，并在黑暗中在冰上温育1小时。
第2组：Mtz::AF647以1:100稀释，并在黑暗中在冰上温育1小时。
第3组：山羊抗人IgG PE，浓度为2μg/mL，并在黑暗中在冰上温育1小时。
将细胞在4℃下以1000xg减速旋转3分钟并倾析出液体。将细胞沉淀重新悬浮在200μL冷FACS缓冲液中。总共重复3次。
在最后一次洗涤和倾析后，将细胞重新悬浮在含有DAPI的100μL冷FACS缓冲液中(最终为25ug/mL)。
然后在Biorad ZE5上分析染色的细胞。
实施例63：流式细胞术对活细胞EGFR表面染色。
本实施例提供了用于确定马妥珠单抗缀合物对通过使用流式细胞仪进行表面染色测量的表面EGFR水平的影响的替代方案。
将Hela亲本细胞接种在6孔板中，并用媒介物(PBS)、未缀合的抗EGFR抗体(马妥珠单抗、Mtz)或马妥珠单抗缀合物处理指定的时间段。
温育后，吸出培养基并用PBS洗涤细胞三次，使用Accutase提起并通过在300xg下离心5分钟来沉淀。将细胞重新悬浮在冷的FACS缓冲液中，并在剩余的染色过程中保持低温。作为未染色对照，一部分细胞被排除在染色程序之外。将细胞在黑暗中在冰上用人IgG同种型-AF647或西妥昔单抗-AF647缀合物染色1小时。然后将细胞在4℃下以300xg离心5分钟，并用冷的FACS缓冲液洗涤总共三次。最后一次洗涤后，将细胞重新悬浮在100μL的FACS缓冲液中，并以5μg/mL的最终浓度添加DAPI。使用BioRad ZE5流式细胞仪分析细胞，并使用FlowJo软件分析数据。首先对细胞进行门控以去除碎片、双峰和死细胞(DAPI阴性)。基于AF647平均荧光强度(MFI)确定EGFR细胞表面水平。
在亲代Hela细胞中，用缀合的抗体处理可导致与用未偶联抗体(Ctx或Mtz)处理的细胞相比，EGFR的表面水平减小。
用本文所述的缀合物处理细胞可以诱导被靶向细胞表面受体的减少。
实施例64：通过蛋白质印迹测量总EGFR水平。
本实施例提供了西妥昔单抗和马妥珠单抗缀合物对通过传统蛋白质印迹测量的Hela亲代细胞中的总IgG水平的时程活性的测量方案。
一旦收集了上述实施例的所有时间点后，将所有细胞沉淀重悬于50μL放射免疫沉淀测定(RIPA)缓冲液(+蛋白酶/磷酸酶抑制剂+核酸酶)中。
将裂解物在冰上温育1小时。
然后将裂解物在4℃下高速旋转10分钟
将40μL澄清的裂解物转移到96孔板中。
使用BCA测定(1:3稀释)，计算所有裂解物浓度。
使用RIPA作为稀释剂将所有裂解物平衡至2mg/mL。
然后将等体积(15μL)的裂解液与LDS样本缓冲液(3x LDS+2.5x还原剂)混合。
将样本在98℃下温育几分钟并使其冷却。
将样本涡旋并减速旋转。
将15μL样本上样到26孔bis-tris 4-12％midi-gel上。
让凝胶在180V下运行20分钟。
使用iBlot 2(恒定20V，7分钟)将凝胶转移到硝酸纤维素膜上。
将膜在PBS中洗涤1次，然后在室温下置于Odyssey封闭缓冲液中1小时，伴随摇动。
将一抗小鼠抗β肌动蛋白(SCB)和兔抗EGFR(CST)在封闭缓冲液中按1:1000稀释，并在4℃下摇动温育过夜。
用PBS-T(吐温20 0.1％)洗涤膜三次，每次洗涤至少5分钟。
将二抗抗小鼠680rd和抗兔800cw在封闭缓冲液中按1:5000稀释，并在室温下振荡温育1小时。
用PBS-T(吐温20 0.1％)洗涤膜三次，每次洗涤至少5分钟。
使用licor odyssey扫描仪对膜进行成像。
实施例65：通过细胞内蛋白质印迹测量总EGFR水平。
本实施例提供了西妥昔单抗和马妥珠单抗缀合物对通过细胞内蛋白质印迹法测量的Hela亲代细胞中的总EGFR水平的剂量反应的测量方案。
第-1天
将3e4 Hela亲代细胞以每孔100μL接种在透明底黑壁96孔板(Costar3603)中
第0天
将培养基倒出并将100μL新鲜培养基添加回孔中。
将50μL 3x剂量反应的未缀合和缀合抗体添加到各个孔中。
80nM最终起始浓度，1:2稀释。在3个孔中加入EGF，最终浓度为50ng/mL。
第2天
倒出培养基并用PBS洗涤孔三次。
孔在室温下用PBS中的4％ PFA固定15分钟。
孔用PBS洗涤三次。
用0.2％triton-x100在PBS中渗透细胞15分钟。总共重复3次。
将细胞在含有0.2％triton-x100的Odyssey封闭缓冲液中在室温下封闭1小时。
将细胞在封闭缓冲液中用山羊抗EGFR(AF231,R&D，最终为1μg/mL)在4℃下染色过夜。
用PBS-T(吐温20 0.1％)洗涤细胞3次。
将细胞用驴抗山羊800CW二抗(1:200)和CellTag700(1:500)在封闭缓冲液中在黑暗中室温染色1小时。
用PBS-T(吐温20 0.1％)洗涤细胞3次。
倒出最后一次洗涤物并将板吸干在纸巾上以去除残留液体。
将板在Licor扫描仪上成像(偏移3mm)。
实施例66：M6PR或ASGPR结合化合物的缀合物介导IgG2a进入人肝癌细胞的摄取
使用与以上实施例中描述的方法类似的方法，在Hep G2细胞中评估示例性M6PR或ASGPR结合化合物的抗体缀合物的摄取。图1示出了细胞荧光与抗体缀合物浓度的关系图，其表明示例性ASGPR结合化合物和示例M6PR结合化合物(参见，例如，PCT US21/12846，其通过引用方式并入本文)的各种抗体缀合物在温育一小时后表现出稳健的进入HepG2细胞的摄取。化合物1209(ASGPR结合化合物I-124)(平均负载DAR6)、化合物1210(ASGPR结合化合物I-123)(平均负载DAR4)和M6PR结合化合物520(平均负载DAR4)的缀合物表现出相似的HepG2细胞摄取。
实施例67：HepG2细胞中靶蛋白质的摄取
如下使实施例60的奥马珠单抗缀合物与IgE-Alexa488(根据实施例62制备)结合：在室温下将等摩尔比的奥马珠单抗(抗-IgE)缀合物和IgE-Alexa488加入到组织培养基中并保持30分钟。将所得的抗-IgE缀合物:IgE抗体-Alexa488组合物加入到HepG2细胞(100k细胞/50ul/孔，n＝2)中，并在1小时时通过流式细胞术测量细胞中的Alexa488荧光水平。由于经荧光标记的靶标(IgE抗体)在细胞中蓄积，因此荧光提供了一种测量细胞随时间推移的细胞内总摄取量的方法。
图2A示出了HepG2细胞中与经Alexa488标记的靶IgE结合的奥马珠单抗(抗IgE)与表26中示例性ASGPR配体-接头的各种缀合物的细胞摄取的图。缀合物在表26中根据如图2A所示的相对摄取活性进行了排序。
如图2A中所见，所有缀合物包含多价化合物(例如，n＝3)。具有1-三唑部分的缀合物(I-143，ASGPR配体X4)具有优于具有1-氧部分的参考缀合物(I-124，ASGPR配体X1)的活性。
具有6-位氧键联的缀合物(I-136，ASGPR配体X8)具有优于参考缀合物I-124的活性。
具有1-三唑部分和从ASGPR配体至该配体的支化点的较短键联的缀合物(I-157，连向支化点的接头长度为6个原子)与具有1-三唑部分和从ASGPR配体至支化点的较长键联的缀合物(I-143，长度为14个原子)相比表现出较低的活性。
图2B示出了HepG2细胞中与经Alexa488标记的靶IgE结合的奥马珠单抗(抗IgE)与表27中示例性ASGPR配体-接头的各种缀合物的细胞摄取的图。缀合物在表27中根据如图2B所示的相对摄取活性进行了排序。
如图2B中所见，所有缀合物包含ASGPR配体X1和支链的三价接头L29或其二价等效物L30。具有介于ASGPR接头和Y之间的较长接头的缀合物(例如，化合物I-137和I-129的缀合物)表现出与参考缀合物(例如，化合物I-124的缀合物)可比的活性。
参考缀合物(I-124，n＝3)显示出优于二价缀合物(I-144，n＝2)的活性。
图2C示出了HepG2细胞中与经Alexa488标记的靶IgE结合的奥马珠单抗(抗IgE)与表28中示例性ASGPR配体-接头的各种缀合物的细胞摄取的图。缀合物在表28中根据如图2C所示的相对摄取活性进行了排序。
如图2C中所见，具有S-糖苷的缀合物(I-141，ASGPR配体X2)显示优于O-糖苷的缀合物(I-145，ASGPR配体X1)的摄取。
具有1-亚甲基部分的缀合物(I-140，ASGPR配体X3)具有与具有O-糖苷的缀合物(I-145，ASGPR配体X1)可比的活性。
图2D示出了HepG2细胞中与经Alexa488标记的靶IgE结合的奥马珠单抗(抗IgE)与表29中示例性ASGPR配体-接头的各种缀合物的细胞摄取的图。缀合物在表29中根据如图2D所示的相对摄取活性进行了排序。
如图2D中所见，具有3的价态的缀合物(I-145，n＝3)显示出优于具有2或1的价态的缀合物(I-111，n＝2；和I-146，n＝1)的摄取。
具有在2-位处附接至ASGPR配体的接头的缀合物(例如，I-153，ASGPR配体X10；I-154，ASGPR配体X11；和I-155，ASGPR配体X12)在该测定中也表现出活性，但其活性低于1-位连接的缀合物(例如，I-145，ASGPR配体X1)。
实施例68：通过荧光偏振测定评估三价化合物的结合亲和力
如与作为阳性对照的参考化合物18G(例如，实施例14中中间化合物18G，其具有下面的结构)和作为第二参考化合物的化合物I-124的相应羧酸(I-124酸，其具有下面的结构)相比，通过荧光偏振测定评估了示例三价化合物(1901(I-171)、1902(I-172)(参见表19)、XB32(参见表6)和2101(参见表21))与ASGPR的结合亲和力。
测定程序：使用荧光偏振测定在黑色96孔板中测量ASGPR结合。定制合成了由连接到Cy5的三-GalNAc(GalNac-Cy5，描绘如下)组成的荧光探针。将示例化合物悬浮于DMSO中，并以100x最终浓度进行3倍连续稀释。以100μl最终体积在20mM Hepes(pH 7.5)50mM NaCl5mM CaCl2 0.015％Triton X-100 1％ DMSO中利用80nM ASGPR(Acro Biosystems)和1nM探针进行结合反应。在2小时温育时间后，在Envision读板器(Perkin Elmer)上使用λex＝620nm、λem＝688nm测量荧光偏振。按一式两份分析剂量反应并将其针对每个板上与DMSO(高)和1μM参考化合物18G(低)的反应作归一化。通过在GraphPad Prism中拟合至4参数曲线来确定IC50值。
测量了示例化合物的剂量反应曲线。观察到化合物1901(I-171)、1902(I-172)和XB32以与参考化合物18G可比的亲和力结合ASGPR。如与测定的其他三价化合物相比，其他参考化合物I-124酸具有降低的ASGPR结合亲和力。
图3图示了示例三价化合物(1901(I-171)、1902(I-172)、XB32和2101)的荧光偏振筛查结果。
测定的化合物的IC50范围呈现在表30中。在表30中，A:IC50≤50nM；B:50nM<IC50≤100nM；且C:IC50>100nM
实施例69：通过荧光偏振测定评估单体化合物的结合亲和力
如与作为阳性对照的参考化合物18G(例如，实施例14中的中间化合物18G)相比，遵循实施例68中概括的测定程序以100μM评估示例单价化合物(描绘如下)。
观察到除化合物593外，筛查的所有单价化合物以参考化合物18G的活性的至少50％结合。
图4图示了作为参考化合物18G的活性的百分比的示例单价化合物(591、XB20、XB23、XB21、592和593)的结合。
测量了示例化合物的剂量反应曲线。观察到化合物591以所测试单体的最高亲和力结合ASGPR。
图5图示了示例单价化合物(XB20、XB21、592、XB23、591)的荧光偏振筛查结果。
所测定的单价化合物的IC50范围呈现在表31中。在表31中，A:IC50≤1μM；B:1μM<IC50≤50μM；且C:IC50>50μM
实施例70：在异头位置(1-位，Z1基团)处具有原子变化的式(Ib)的三价化合物的比较
为了研究ASGPR配体的异头位置处替代的糖苷键联(例如，S-糖苷键联和C-糖苷键联)的优点，将在ASGPR配体的异头位置(1-位)处具有各种替代键联的化合物与具有1-位O-糖苷键联的参考化合物(化合物I-163)进行比较。
如下使示例化合物I-160-I-163和I-141的OMA Ab缀合物与IgE-Alexa488(通过修改实施例61中的程序来制备)结合：在室温下将等摩尔比的OMA(抗-IgE)缀合物和IgE-Alexa488加入到组织培养基中并保持30分钟。将所得的抗-IgE缀合物:IgE抗体-Alexa488组合物加入到HepG2细胞(100k细胞/50ul/孔，n＝2)中，并在1小时时通过流式细胞术测量细胞中的Alexa488荧光水平。由于经荧光标记的靶标(IgE抗体)在细胞中蓄积，因此荧光提供了一种测量细胞随时间推移的细胞内总摄取量的方法。
图6示出了HepG2细胞中与经Alexa488标记的靶IgE结合的OMA(抗IgE)与表32的示例化合物的各种缀合物的细胞摄取活性的图。缀合物在表32中根据如图6所示的相对摄取活性进行了排序。
如图6中所见，所有缀合物包含通过异头位置(ASGPR配体的1-位)与接头连接的多价化合物(例如，n＝3)。具有1-三唑部分的缀合物(I-161)具有与具有1-氧部分的参考缀合物(I-163)基本上相同的活性。具有1-位-S-糖苷键联的缀合物具有与化合物I-163和I-161相似的活性。
在异头位置处具有原子变化的示例化合物的体内比较
与O-糖苷连接的化合物I-163相比在体内评价了在HepG2摄取测定中鉴定的三种最具活性的异头位置变体(I-161、I-162和I-160)。
药代动力学研究
进行了药代动力学(PK)研究以确定各种OMA连接的示例化合物(I-161至I-163)的药代动力学曲线。
方案：经由IV按5mg/kg的OMA-示例化合物和OMA-参考给雌性C57BL/6小鼠给药。以每个时间点3只动物在给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、24、48、72和168小时收集血清样本。
通过ELISA测量血清hIgG浓度。
图7图示了如与单独OMA IgG抗体(参考)相比的OMA-连接的示例化合物(I-160至I-163)的亲和力依赖性清除率。
这些结果证明，具有氧的替代异头位置糖苷键联的化合物(例如，1-位-S-(I-162)、-CH2-(I-160)和-三唑-(I-161))具有与参考化合物I-163(1-位-O-键联)不同的PK曲线，到第7天时特定的OMA连接的化合物几乎完全消耗至检测下限(LLOD)。
药效学研究
进行OMA-连接的化合物I-163对靶IgE清除率的影响的剂量调整以确定小鼠中IgE和OMA-I-163的药效学(PD)参数。
方案：给雌性C57BL/6小鼠IV给药1mg/kg的IgE，随后在16小时后给药0.1、0.3、1或3mg/kg的OMA-I-163。以每个时间点3只动物在OMA-I-163给药后0(放血前)、1、4和24小时时收集血清样本。
通过ELISA测量血清hIgE和hIgG浓度。
图8图示了剂量调整OMA-I-163IgE清除率。
这些结果证明，0.1mg/kg的化合物OMA-I-163使以1mg/kg给药的IgE在2和4小时时部分清除，并在24小时时完全清除。从这些结果确定了在小鼠中IgE和OMA-I-163的限制剂量为0.1mg/kg。
接下来，以确定的限制剂量对示例化合物缀合物对IgE清除率的影响进行研究，以将OMA-I-163(参考化合物)的PD活性与OMA-连接的化合物I-160、I-161和I-162进行比较。
方案：给雌性C57BL/6小鼠IV给药1mg/kg的IgE，随后在16小时后给药0.1mg/kg的OMA-I-163、OMA-I-162、OMA-I-161和OMA-I-160。以每个时间点3只动物在LYTAC给药后0(放血前)、1、4和24小时时收集血清样本。
通过Elisa测量血清浓度。
图9图示了如与hIgE(参考)相比的经由OMA-示例化合物(I-160至I-163)的靶IgE清除率是亲和力依赖性的。
这些结果证明，在低剂量(0.1mg/kg的示例OMA缀合物)下，具有氧的替代异头位置糖苷键联的OMA示例化合物(例如，1-位-S-(I-162)、-CH2-(I-160)和-三唑-(I-161))比在异头位置具有氧键联的参考化合物(OMA-I-163)更有效地清除IgE。所有的化合物OMA-I-60、OMA-I-161和OMA-I-162都在4小时内完全清除了IgE。
总结
总之，具有氧的替代异头位置糖苷键联的ASGPR化合物的体内和体外数据集表明，可以通过替换1-位氧原子(例如，用-S-、-CH2-或-三唑-替换)可以实现增加的靶清除率。
7.等效物和通过引用并入
虽然已经参考优选的实施方案和各种替代实施方案对本发明进行特别展示和描述，但相关领域的技术人员应理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可对其做出形式和细节上的改变。
本说明书的正文中引用的所有参考文献、已发布的专利和专利申请，都通过引用以其整体并入本文用于所有目的。

Claims (123)

1.一种式(I)的细胞表面ASGPR结合化合物：
Xn-L-Y
(I)
或其前药、或其盐，
其中：
Y是感兴趣的部分；
n是1至500；
L是接头；并且
X是结合到式(Ia)的细胞表面无唾液酸糖蛋白质受体(ASGPR)的部分：
其中：
R1选自–OH、–OC(O)R、-C(O)NHR、–Z1–*和任选取代的三唑，其中R是任选取代的C1-6烷基或任选取代的芳基；
R2选自–NHCOCH3、–NHCOCF3、–NHCOCH2CF3、–OH、任选取代的三唑和–Z1–*；
R3选自–H、–OH、–CH3、–OCH3、–OCH2CH＝CH和–Z1–*；
R1至R3中的一者是–Z1–或包含–Z1–*，其中“*”代表Z1与所述接头(L)的附接点；
R4和R5各自独立地选自H和引入部分，或者R4和R5被环状连接从而形成引入部分；
R11是H或与1-位碳原子形成桥的基团；
Z1是选自以下的连接部分：Z11、任选取代的Z11-杂芳基、任选取代的Z11-芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、任选取代的烷基、任选取代的酰胺、任选取代的磺胺、任选取代的脲和任选取代的硫脲；
Z11选自-O-、-S-、NR21-和-C(R22)2，
每个R21独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基；并且
每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基；
其中：
i)当n是3，R1是OH，R2是–NHCOCH3，R4-R5是H，并且R3是Z1时，则Z1不是O；
ii)当n是2或3，R1是OAc，R2是–NHCOCH3，R4-R5是Ac，并且R3是Z1时，则Z1不是O；
iii)当n是2或3，R1是Obz，R2是–NHCOCH3，R4-R5是Bz，并且R3是Z1时，则Z1不是O；
iv)当n是3，R1是OH，R2是–NHCOCH3，R4-R5是H，并且R3是Z1且Z11是O时，则L包含连向支化点的至少16个连续原子的主链；
v)当n是3，R1是Z1，其中Z1是O；并且R4-R5是H时，则R3不是-CH3–OCH3或–OCH2CH＝CH；并且
vi)当R11是与2-位碳原子形成桥的式-CH2O-的基团，R2是–NHCOCH3，R4-R5是H时，则R1和R3都不是Z1。
2.如权利要求1所述的化合物，其中每个X独立地具有下式之一：
3.如权利要求2所述的化合物，其中Z1是Z11-Ar，其中Ar是任选取代的杂芳基或任选取代的芳基。
4.如权利要求3所述的化合物，其中：
Z11是O、S或C(R22)2；并且
Ar是单环的5元或6元杂芳基或芳基。
5.如权利要求4所述的化合物，其中Z1是-C(R22)2-三唑-。
6.如权利要求5所述的化合物，其中Z1是
7.如权利要求2所述的化合物，其中Z1是单环的5元或6元杂芳基或芳基。
8.如权利要求7所述的化合物，其中Z1是
9.如权利要求2所述的化合物，其中Z1选自-O-、-S-、-C(R22)2-、-NR21-、-CONR21-和
其中：
X1是O或S；
t是0或1；
R21和每个R23独立地选自H和任选取代的(C1-C6)烷基；并且
每个R22独立地选自H、卤素和任选取代的(C1-C6)烷基。
10.如权利要求9所述的化合物，其中Z1是-S-。
11.如权利要求9所述的化合物，其中Z1是-O-。
12.如权利要求9所述的化合物，其中Z1是-CH2-。
13.如权利要求2至12中任一项所述的化合物，其中n是1，并且L包含具有经由Z1将X共价连接至Y的20个或更多个连续原子的主链的直链接头。
14.如权利要求13所述的化合物，其中L包含20至100个连续原子的主链。
15.如权利要求13或14所述的化合物，其中L包含25个或更多个连续原子的主链。
16.如权利要求15所述的化合物，其中L包含30个或更多个连续原子的主链。
17.如权利要求2至12中任一项所述的化合物，其中n是2或更大，并且L是经由所述连接部分Z1将2个或更多个X部分共价连接至Y的支链接头。
18.如权利要求17所述的化合物，其中L的每个分支包含14个或更多个连续原子的直链接头，以经由Z1将每个X部分共价连接至所述接头L的支化点。
19.如权利要求18所述的化合物，其中L的每个分支包含14至50个连续原子的直链接头。
20.如权利要求18或19所述的化合物，其中L的每个分支包含20个或更多个连续原子的直链接头。
21.如权利要求17至20中任一项所述的化合物，其中n是2。
22.如权利要求17至20中任一项所述的化合物，其中n是3。
23.如权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中L具有式(II)：
其中
L1和L3独立地是接头，并且L2是支链连接部分，其中L1至L3一起提供介于X和Y之间的直链或支链接头；
a、b和c独立地是0或1；
**代表X经由Z1与L1的附接点；并且
***代表与Y的附接点；
其中：
当n是1时，a是1，并且b是0；
当n是>1时，a是1，并且b是1。
24.如权利要求23所述的化合物，其中L1至L3各自独立地包含一个或多个独立地选自以下的连接部分：–C1-20-亚烷基–、–NHCO-C1-6-亚烷基–、–CONH-C1-6-亚烷基–、–NH C1-6-亚烷基–、–NHCONH-C1-6-亚烷基–、–NHCSNH-C1-6-亚烷基–、–C1-6-亚烷基–NHCO-、–C1-6-亚烷基–CONH-、–C1-6-亚烷基–NH-、–C1-6-亚烷基–NHCONH-、–C1-6-亚烷基–NHCSNH-、-O(CH2)p–、–(OCH2CH2)p–、–NHCO–、–CONH–、–NHSO2–、–SO2NH–、–CO–、–SO2–、–O–、–S–、吡咯烷-2,5-二酮、1,2,3-三唑、–NH–和–NMe–，其中每个p独立地是1至50。
25.如权利要求23或24所述的化合物，其中L包含重复的乙二醇部分。
26.如权利要求25所述的化合物，其中L包含1至25个乙二醇部分。
27.如权利要求23至26中任一项所述的化合物，其中L包含一个或多个1,2,3-三唑连接部分。
28.如权利要求27所述的化合物，其中L包含一个或多个选自以下结构的1,2,3-三唑部分：
其中w1、u1和q1独立地是1至25。
29.如权利要求23至28中任一项所述的化合物，其中n是1。
30.如权利要求23至28中任一项所述的化合物，其中n是2或更大。
31.如权利要求30所述的化合物，其中L2选自：
其中每个x和y独立地是1至10。
32.如权利要求23至31中任一项所述的化合物，其中L1-L2包含介于X和支化原子之间的14个或更多个连续原子的主链。
33.如权利要求23至32中任一项所述的化合物，其中L3包含10至80个连续原子的主链。
34.如权利要求33所述的化合物，其中L3包含选自(C10-C20-亚烷基或–(OCH2CH2)p–的连接部分，其中p是1至25。
35.如权利要求23至34中任一项所述的化合物，其中式(II)的所述接头包含20至100个连续原子。
36.如权利要求35所述的化合物，其中式(II)的所述接头包含25个或更多个连续原子。
37.如权利要求33所述的化合物，其中式(II)的所述接头包含30个或更多个连续原子。
38.如权利要求23至37中任一项所述的化合物，其中-Z1-L1-包含选自以下的基团：
其中o、p、q、r、s、t、u、v、w、x、y、z和z1各自独立地是1至6。
39.如权利要求38所述的化合物，其中-Z1-L-包含选自以下的基团：
40.如权利要求1所述的化合物，其中至少一个X具有(Ic)：
41.如权利要求40所述的化合物，其中Z1选自-O-、-S-、-CONR21-和任选取代的–(C(R22)2)q-杂芳基，其中q是0或1。
42.如权利要求41所述的化合物，其中Z1是-O-。
43.如权利要求41所述的化合物，其中Z1是任选取代的–(C(R22)2)q-三唑，其中q是0或1。
44.如权利要求43所述的化合物，其中Z1是
45.如权利要求40至44中任一项所述的化合物，其中n是1，并且L包含具有20个或更多个连续原子的主链的直链接头以经由Z1将X共价连接至Y。
46.如权利要求37至41中任一项所述的化合物，其中n是2或更大，并且L是将2个或更多个X部分共价连接至Y的支链接头，其中L的每个分支包含14个或更多个连续原子的直链接头以经由Z1将每个X部分共价连接至所述接头L的支化点。
47.如权利要求1所述的化合物，其中至少一个X具有(Id)：
48.如权利要求47所述的化合物，其中Z1选自任选取代的–(C(R22)2)q-杂芳基和其中q是0或1。
49.如权利要求48所述的化合物，其中Z1是任选取代的–(C(R22)2)q-三唑，其中q是0或1。
50.如权利要求49所述的化合物，其中Z1是
51.如权利要求47所述的化合物，其中Z1是其中R23是H或C(1-3)-烷基。
52.如权利要求47所述的化合物，其中R3是H。
53.如权利要求52所述的化合物，其中式(Id)具有式(Ie)：
其中：
Z2不存在或选自-O-、-S-、NR25-和-C(R22)2；
环A不存在或选自5元或6元的任选取代的芳基和5元或6元的任选取代的杂芳基；
Z3是选自以下的连接部分：Z12、任选取代的烷基、任选取代的Z12-烷基、任选取代的Z12-杂芳基、任选取代的Z12-芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、任选取代的酰胺、任选取代的磺胺、任选取代的脲和任选取代的硫脲；并且
Z12选自-CH2O-、-O-、-S-、-NR26-和-C(R22)2-；
R25和R26各自独立地选自H、任选取代的(C1-C6)烷基(例如，C(1-3)-烷基，诸如甲基)和任选取代的酰基；并且
每个R22独立地选自H、卤素(例如，F)和任选取代的(C1-C6)烷基。
54.如权利要求53所述的化合物，其中式(Ie)具有式(If)-(Ih)中的任一者：
55.如权利要求53或54所述的化合物，其中所述A环是5元或6元杂芳基。
56.如权利要求55所述的化合物，其中所述A环选自三唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪、三嗪、噻二唑、噻吩、噁唑、异噁唑、异噻唑、噻唑、噁二唑和呋喃。
57.如权利要求56所述的化合物，其中所述A环选自三唑、嘧啶和噻二唑。
58.具有式(Ij)-(Im)中的任一者的如权利要求54至57中任一项所述的化合物：
其中：
Y1-Y3各自独立地是N或CR27；并且
R24和R27各自独立地选自H、任选取代的C(1-6)-烷基、任选取代的氟烷基和卤素。
59.如权利要求58所述的化合物，其中Z3选自-O-、-CH2O-、-OCH2-、任选取代的-OCH2-杂芳基、任选取代的-OCH2-芳基、任选取代的-CH2O-杂芳基和任选取代的-CH2O-芳基。
60.如权利要求59所述的化合物，其中Z3选自：
61.如权利要求47所述的化合物，其中Z1是-NR23CO-，其中R23是H或C(1-3)-烷基。
62.如权利要求47至61中任一项所述的化合物，其中n是1，并且L包含具有20个或更多个连续原子的主链的直链接头以经由Z1将X共价连接至Y。
63.如权利要求44至49中任一项所述的化合物，其中n是2或更大，并且L是将2个或更多个X部分共价连接至Y的支链接头，其中L的每个分支包含14个或更多个连续原子的直链接头以经由Z1将每个X部分共价连接至所述接头L的支化点。
64.如权利要求1至39和47-63中任一项所述的化合物，其中R1是OH。
65.如权利要求1至39和47-63中任一项所述的化合物，其中R1是-OC(O)R或
66.如权利要求1至46中任一项所述的化合物，其中R2是-NHCOCH3。
67.如权利要求1至46中任一项所述的化合物，其中R2是–NHCOCF3。
68.如权利要求1至46中任一项所述的化合物，其中R2是–NHCOCH2CF3。
69.如权利要求1至46中任一项所述的化合物，其中R2是–OH。
70.如权利要求1至46中任一项所述的化合物，其中R2是
71.如权利要求1至70中任一项所述的化合物，其中R4-R5中的至少一者是引入部分。
72.如权利要求71所述的化合物，其中所述引入部分是酯。
73.如权利要求72所述的化合物，其中所述酯具有式-OCOCH3、-OCOCH(CH3)2或-OCOC(CH3)3。
74.如权利要求71或72所述的化合物，其中R4和R5被环状连接从而形成引入部分。
75.如权利要求74所述的化合物，其中R4和R5被环状连接从而形成式(Io)或(Ip)的引入部分：
其中Y4是反离子。
76.如权利要求1至70中任一项所述的化合物，其中R4和R5两者都是H。
77.如权利要求1至76中任一项所述的化合物，其中每个X选自以下结构之一：
其中R6和R23独立地是H或(C1-3)烷基。
78.如权利要求77所述的化合物，其中n是1且X是
79.如权利要求1至76中任一项所述的化合物，其中每个X选自以下结构之一：
其中R5和R4独立地是H或引入部分；或者
R5和R4被环状连接从而形成引入部分；
n1和n2各自独立地是从1至6的整数；并且
Y4是反离子。
80.如权利要求1至76中任一项所述的化合物，其中每个X选自以下结构之一：
81.如权利要求1至80中任一项所述的化合物，其中Y选自小分子、染料、荧光团、单糖、多糖、脂质、蛋白质、多核苷酸、酶、酶底物、聚合物和化学选择性连结基团或其前体。
82.如权利要求1至80中任一项所述的化合物，其中Y是特异性地结合细胞外靶蛋白质的部分。
83.如权利要求82所述的化合物，其中所述靶蛋白质是膜结合蛋白质。
84.如权利要求82所述的化合物，其中所述靶蛋白质是可溶性细胞外蛋白质。
85.如权利要求82至84中任一项所述的化合物，其中Y是靶结合的小分子。
86.如权利要求82至84中任一项所述的化合物，其中Y是靶结合的生物分子。
87.如权利要求86所述的化合物，其中所述生物分子选自肽、蛋白质、糖蛋白质、多核苷酸、适体和抗体或抗体片段。
88.如权利要求86所述的化合物，其中Y选自抗体、抗体片段、嵌合融合蛋白质、经工程化的蛋白质结构域、和靶蛋白质的D蛋白质结合剂。
89.如权利要求1至80中任一项所述的化合物，其中Y是特异性地结合所述靶蛋白质的抗体或抗体片段，并且所述化合物是式(III)的缀合物：
其中：
n是1至20；
m是1至80的平均负载；
每个X是结合到细胞表面ASGPR的部分；
每个L是接头；
每个Z是由化学选择性连结基团与Ab的相容基团的共价键联产生的残基部分；并且
Ab是特异性地结合所述靶蛋白质的所述抗体或抗体片段。
90.如权利要求89所述的化合物，其中每个X独立地具有式(Ib)：
91.如权利要求89所述的化合物，其中每个X选自：
92.如权利要求89所述的化合物，其中每个X是：
其中R5和R4独立地是H或引入部分；或者
R5和R4被环状连接从而形成引入部分。
93.如权利要求89所述的化合物，其中每个X独立地具有式(Ie)：
94.如权利要求91所述的化合物，其中n是1且X是
95.如权利要求89至93中任一项所述的化合物，其中n是1至6。
96.如权利要求89至93中任一项所述的化合物，其中n是至少2。
97.如权利要求96所述的化合物，其中n是2。
98.如权利要求96所述的化合物，其中n是3。
99.如权利要求89至98中任一项所述的化合物，其中Z是由硫醇反应性化学选择性连结基团与Ab的一个或多个半胱氨酸残基的共价键联产生的残基部分。
100.如权利要求89至98中任一项所述的化合物，其中Z是由胺反应性化学选择性连结基团与Ab的一个或多个赖氨酸残基的共价键联产生的残基部分。
101.如权利要求89至100中任一项所述的化合物，其中m是1至20。
102.如权利要求101所述的化合物，其中m是10或更小。
103.如权利要求101所述的化合物，其中m是2至8。
104.如权利要求101所述的化合物，其中m是2至6。
105.如权利要求101所述的化合物，其中m是约4的平均负载。
106.如权利要求89至105中任一项所述的化合物，其中所述抗体或抗体片段是IgG抗体。
107.如权利要求89至106中任一项所述的化合物，其中所述抗体或抗体片段是人源化抗体。
108.如权利要求89至107中任一项所述的化合物，其中所述抗体或抗体片段特异性地结合到分泌的或可溶性靶蛋白质。
109.如权利要求89至107中任一项所述的化合物，其中所述抗体或抗体片段特异性地结合到细胞表面受体靶标。
110.一种使靶蛋白质在包含细胞表面无唾液酸糖蛋白质受体(ASGPR)的细胞中内化的方法，所述方法包括：
使包含所述细胞和所述靶蛋白质的细胞样本与有效量的根据权利要求1至109中任一项所述的化合物接触，其中所述化合物特异性地结合所述靶蛋白质并且特异性地结合所述细胞表面受体以促进所述靶蛋白质的细胞摄取。
111.如权利要求110所述的方法，其中所述靶蛋白质是膜结合蛋白质。
112.如权利要求110所述的方法，其中所述靶蛋白质是细胞外蛋白质。
113.如权利要求110至112中任一项所述的方法，其中所述化合物包含特异性地结合所述靶蛋白质的抗体或抗体片段(Ab)。
114.一种降低生物系统中靶蛋白质的水平的方法，所述方法包括：
使所述生物系统与有效量的根据权利要求1至109中任一项所述的化合物接触，其中所述化合物特异性地结合所述靶蛋白质并特异性地结合所述生物系统中细胞的细胞表面受体以促进所述靶蛋白质的细胞摄取和降解。
115.如权利要求114所述的方法，其中所述生物系统包括包含细胞表面无唾液酸糖蛋白质受体(ASGPR)的细胞。
116.如权利要求114或115所述的方法，其中所述生物系统是人类受试者。
117.如权利要求114至116中任一项所述的方法，其中所述生物系统是体外细胞样本。
118.如权利要求114至117中任一项所述的方法，其中所述靶蛋白质是膜结合蛋白质。
119.如权利要求114至117中任一项所述的方法，其中所述靶蛋白质是细胞外蛋白质。
120.一种治疗与靶蛋白质相关的疾病或病症的方法，所述方法包括：
向有需要的受试者施用有效量的根据权利要求1至109中任一项所述的化合物，其中所述化合物特异性地结合所述靶蛋白质。
121.如权利要求120所述的方法，其中所述疾病或病症是炎性疾病。
122.如权利要求120所述的方法，其中所述疾病或病症是自身免疫性疾病。
123.如权利要求120所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
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