CN117866770A - 一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法，属于分离黄酒酵母菌技术领域。该分离方法包括如下步骤：将操作台面清理干净、灭菌，使操作台面达到初步无菌状态；使用紫外线灯以每平方米10分钟的照射操作对于操作台面照射进一步灭菌；称取10g苦荞黄酒酒醅，加入100mL无菌水，在28℃恒温摇床中震荡20min，得到酵母富集液；本发明以黄酒酒醅作为提取原料，采用WL‑大曲酒糟平板培养基分离提取用于苦荞黄酒发酵的酵母菌，更有针对性的筛选到所需要的菌株，节约时间，提高效率，具有针对性强、筛选范围广的优点。
Description
技术领域
本发明涉及分离黄酒酵母菌技术领域，尤其涉及一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法。
背景技术
酵母菌广泛存在于制曲、堆积、窖内、空气、晾堂中，是黄酒生产过程中的重要产物，其生长代谢情况对黄酒的产量与风味具有重要影响。酵母菌以其独特的酶类作用，将酒原料中的淀粉转化为糖分，再将糖分发酵成酒精和二氧化碳。
正是酵母菌的精妙操作，使得酒获得了酒精度数和香气的双重提升。除此之外，通过酵母菌的代谢过程，一些有机化合物会被生成，如酯类和醛类物质。这些物质在酒中具有重要的味觉特征，直接影响着酒口感的优劣。因此，酵母菌在酒发酵过程中扮演着重要的“调味师”角色。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术中酵母菌代谢影响着酒口感优劣的问题，而提出的一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法，该分离方法包括如下步骤：
S1、将操作台面清理干净、灭菌，使操作台面达到初步无菌状态；
S2、使用紫外线灯以每平方米10分钟的照射操作对于操作台面照射进一步灭菌；
S3、称取10g苦荞黄酒酒醅，加入100mL无菌水，在28℃恒温摇床中震荡20min，得到酵母富集液；
S4、拿出培养基，加入200mL/L大曲酒糟浸提液，剩余量加入100mL无菌水，放置于高压灭菌锅内30min121℃灭菌，完成后拿出在常温下冷却后形成WL-大曲酒糟平板培养基，并且将WL-大曲酒糟平板培养基放置一旁备用；
S5、将酵母菌富集液分为三份，并且按照梯度稀释；
S6、从三份酵母菌富集液中各吸收100μL的稀释液，涂覆在WL-大曲酒糟平板培养基上，将WL-大曲酒糟平板培养基放入恒温箱28℃培养48-72小时；
S7、拿出WL-大曲酒糟平板培养基，挑选可疑菌落在WL-大曲酒糟平板培养基表面划线，并且再次放入恒温箱28℃培养48-72小时；
S8、拿出WL-大曲酒糟平板培养基，挑选单酵母菌落划线后保存；
S9、定期观察、记录酵母菌的生长情况，避免杂菌引入。
优选的，该酵母菌稀释后的浓度梯度分别为10-3、10-4、10-5三个梯度。
优选的，将WL-大曲酒糟平板培养基放入恒温箱内需要倒置。
优选的，WL-大曲酒糟浸提液的制作方法为：
S1、称取酒糟与大曲，并且称取的质量比为1:1；
S2、将称取好的酒糟与大曲混合后，加入其五倍质量的蒸馏纯水并且煮沸，并且沸腾后持续30-45秒；
S3、将完成的WL-大曲酒糟浸提液冷却至室温即可完成。
优选的，使用WL-大曲酒糟平板培养基进行S6-S9步骤。
优选的，稀释平板法筛选酵母菌后，再通过二次划线筛选单菌落。
与现有技术相比，本发明提供了一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法，具备以下有益效果：
1、本发明以黄酒酒醅作为提取原料，采用WL-大曲酒糟平板培养基分离提取用于苦荞黄酒发酵的酵母菌，更有针对性的筛选到所需要的菌株，节约时间，提高效率，具有针对性强、筛选范围广的优点。
2、本发明结合传统分离酵母菌的方法，在其中添加大曲酒糟浸提液，更好的模拟发酵黄酒的环境，有利于酒醅中适宜酵母菌的分离，有针对性的选择发酵性能好的酵母菌，从而达到分离目的，筛选范围广。
3、本发明能够有效地从苦荞黄酒酒醅中分离出高纯度的酵母菌，为进一步发酵生产苦荞黄酒提供优良的菌种资源。同时，通过使用WL-大曲酒糟平板培养基进行培养和筛选，能够提高酵母菌的存活率和纯度，从而得到更优质的酵母菌种，因为WL-大曲酒糟平板培养基筛选酵母菌的原理是利用不同酵母菌群生长速度和形成菌落的形状、大小、隆起程度等不同，来进行鉴别和筛选的。在WL-大曲酒糟平板培养基上，菌落颜色为奶油色(浅黄色)至绿色，表面为球形突起，光滑、不透明、奶油状的菌株，为酿酒酵母，因此以WL-大曲酒糟平板培养基培养对比普通培养基是可以得到更加优质的酵母菌菌种的。
4、本发明通过将WL-大曲酒糟平板培养基放入恒温箱内倒置，能够更好地保持培养基的水分和氧气的均匀分布，有利于酵母菌的生长和繁殖。同时，通过定期观察和记录酵母菌的生长情况，可以及时发现杂菌污染等问题，保证分离纯度和培养效果。
综上，该分离方法具有操作简单、分离纯度高、培养效果好等优点，能够有效地从苦荞黄酒酒醅中分离出高纯度的酵母菌，为进一步发酵生产苦荞黄酒提供优良的菌种资源。
附图说明
图1为本实施中方法的简化操作流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1
一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法，该分离方法包括如下步骤：
S1、将操作台面清理干净、灭菌，使操作台面达到初步无菌状态；
S2、使用紫外线灯以每平方米10分钟的照射操作对于操作台面照射进一步灭菌；
S3、称取10g苦荞黄酒酒醅，加入100mL无菌水，在28℃恒温摇床中震荡20min，得到酵母富集液；
S4、拿出培养基，加入200mL/L大曲酒糟浸提液，剩余量加入100mL无菌水，放置于高压灭菌锅内30min121℃灭菌，完成后拿出在常温下冷却后形成WL-大曲酒糟平板培养基，并且将WL-大曲酒糟平板培养基放置一旁备用；
S5、将酵母菌富集液分为三份，并且按照梯度稀释；
S6、从三份酵母菌富集液中各吸收100μL的稀释液，涂覆在WL-大曲酒糟平板培养基上，将WL-大曲酒糟平板培养基放入恒温箱28℃培养48-72小时；
S7、拿出WL-大曲酒糟平板培养基，挑选可疑菌落在WL-大曲酒糟平板培养基表面划线，并且再次放入恒温箱28℃培养48-72小时。
S8、拿出WL-大曲酒糟平板培养基，挑选单酵母菌落划线后保存。
S9、定期观察、记录酵母菌的生长情况，避免杂菌引入。
在本实施例中，该酵母菌稀释后的浓度梯度分别为10-3、10-4、10-5三个梯度。
在本实施例中，将WL-大曲酒糟平板培养基放入恒温箱内需要倒置。
在本实施例中，使用WL-大曲酒糟平板培养基进行S6-S9步骤。
在本实施例中，稀释平板法筛选酵母菌后，再通过二次划线筛选单菌落。
实施例2基于实施例1中的分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法进一步改进：即
WL-大曲酒糟浸提液的制作方法为：
S1、称取酒糟与大曲，并且称取的质量比为1:1；
S2、将称取好的酒糟与大曲混合后，加入其五倍质量的蒸馏纯水并且煮沸，并且沸腾后持续30-45秒；
S3、将完成的WL-大曲酒糟浸提液冷却至室温即可完成。
实施例3本方案中稀释瓶办法筛选酵母菌的步骤如下：
S1、准备培养基和培养皿，选择适合酵母菌生长的培养基，在本发明中，培养基为大曲酒糟培养皿以及WL-大曲酒糟平板培养基；
S2、从酵母菌培养基中取出一定量的菌落或液态培养基中的酵母菌悬液作为试验样本；
S3、从三份酵母菌富集液中各吸收100μL的稀释液，涂覆在WL-大曲酒糟平板培养基上。
S4、拿出WL-大曲酒糟平板培养基，挑选可疑菌落在WL-大曲酒糟平板培养基表面划线；
S5、拿出WL-大曲酒糟平板培养基，挑选单酵母菌落划线后保存。
实施例4对于酵母菌稀释到不同浓度划分；
稀释平板法是一种常用的微生物培养方法，用于分离和鉴定微生物。在稀释平板法中，通常按照一定比例将酵母菌培养物进行稀释，制备不同浓度的菌液。然后，将每个试管中的菌液接种到培养基平板上，每种浓度的菌液都会在培养基上形成一个菌落。通过观察菌落的特征和数量，可以初步鉴定出酵母菌的种类和数量，在本发明实验之前，已经预先做出了多种浓度梯度的尝试，详见下表：
从上表格可以得出10-3、10-4、10-5三个梯度，在本发明培养酵母菌实验中，培养实验时间较为居中，并且培养后在划线时其可见度都较为良好，因此在本方法中，选用10-3、10-4、10-5三个梯度作为浓度培养的基础。
实施例5实施例1的S9中，进一步细化避免杂菌引入的方法：
首先，我们要知道，在本发明的方法操作中，杂菌的种类一般为细菌、霉菌和其他酵母菌，这些菌种会大幅度的影响成品的品质，因此需要进行避免，操作如下(下述操作需要跟随着实施例1中的操作方法同步进行)
S1、在实验进行前中后，酵母菌是利用周围的营养物质进行繁殖和发酵的，如果周围环境存在其他细菌和病毒等，就会抢占营养物质，导致酵母菌不能正常生长。因此，在发酵过程中要保持清洁的环境，避免其它细菌和杂质的污染。
S2、在实验中，发酵过程中所用的材料要保持新鲜、干净、不带有病菌和其他细菌污染，以免产生杂菌和异质菌。
S3、在实验中，酵母菌在发酵过程中需要适宜的温度和湿度，如果温度过高或者过低，或者湿度过大或者过小，都会不利于酵母菌的繁殖和发酵。
S4、在实验培养时，适当的发酵剂能够促进酵母菌的繁殖和发酵，减少杂菌和异质菌的影响。
S5、在发酵过程中，要严格控制时间和发酵条件，避免发酵过程中出现外界因素干扰，影响酵母菌的正常生长。
实现了上述的操作，即可进一步的避免了本发明酵母菌在生长时杂菌侵蚀主培养菌体。
进一步的，苦荞黄酒酒醅可以选择其生产过程中的任意一个时期，苦荞黄酒酒醅是指经过发酵后的苦荞黄酒，是一种以苦荞为主要原料制成的酒类。其制作过程包括苦荞麦的浸泡、蒸煮、接种酵母菌、发酵、过滤、陈酿等步骤，在制作苦荞黄酒酒醅时，需要选用优质的苦荞麦，并经过浸泡、蒸煮、接种酵母菌等步骤进行发酵，待酒精发酵完全后，过滤出酒液，再经过陈酿和后处理，最终得到苦荞黄酒酒醅，苦荞黄酒酒醅具有独特的口感和营养价值，如含有丰富的氨基酸、维生素和矿物质等，对人体有一定的保健作用。
以上，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法，其特征在于，该分离方法包括如下步骤：
S1、将操作台面清理干净、灭菌，使操作台面达到初步无菌状态；
S2、使用紫外线灯以每平方米10分钟的照射操作对于操作台面照射进一步灭菌；
S3、称取10g苦荞黄酒酒醅，加入100mL无菌水，在28℃恒温摇床中震荡20min，得到酵母富集液；
S4、拿出培养基，加入200mL/L大曲酒糟浸提液，剩余量加入100mL无菌水，放置于高压灭菌锅内30min、121℃灭菌，完成后拿出在常温下冷却后形成WL-大曲酒糟平板培养基，并且将WL-大曲酒糟平板培养基放置一旁备用；
S5、将酵母菌富集液分为三份，并且按照梯度稀释；
S6、从三份酵母菌富集液中各吸收100μL的稀释液，涂覆在WL-大曲酒糟平板培养基上，将WL-大曲酒糟平板培养基放入恒温箱28℃培养48-72小时；
S7、拿出WL-大曲酒糟平板培养基，挑选可疑菌落在WL-大曲酒糟平板培养基表面划线，并且再次放入恒温箱28℃培养48-72小时；
S8、拿出WL-大曲酒糟平板培养基，挑选单酵母菌落划线后保存；
S9、定期观察、记录酵母菌的生长情况，避免杂菌引入。
2.根据权利要求1所述的一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法，其特征在于，该酵母菌稀释后的浓度梯度分别为10-3、10-4、10-5三个梯度。
3.根据权利要求2所述的一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法，其特征在于，将WL-大曲酒糟平板培养基放入恒温箱内需要倒置。
4.根据权利要求1所述的一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法，其特征在于，WL-大曲酒糟浸提液的制作方法为：
S1、称取酒糟与大曲，并且称取的质量比为1:1；
S2、将称取好的酒糟与大曲混合后，加入其五倍质量的蒸馏纯水并且煮沸，并且沸腾后持续30-45秒；
S3、将完成的WL-大曲酒糟浸提液冷却至室温即可完成。
5.根据权利要求1所述的一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法，其特征在于，使用WL-大曲酒糟平板培养基进行S6-S9步骤。
6.根据权利要求1所述的一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法，其特征在于，稀释平板法筛选酵母菌后，再通过二次划线筛选单菌落。
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| CN202311830951.7A Pending CN117866770A (zh) | 2023-12-27 | 2023-12-27 | 一种分离用于发酵苦荞黄酒酵母菌的方法 |
Country Status (1)
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| CN (1) | CN117866770A (zh) |
-
2023
- 2023-12-27 CN CN202311830951.7A patent/CN117866770A/zh active Pending
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