CN117737136A - 优化的雌鱼育性控制的方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种优化的雌鱼育性控制的方法及应用。该方法利用基因编辑技术敲除鱼类的性腺孕激素合成的关键编码基因，阻断鱼类孕激素的合成，使获得的缺失纯合子雌鱼的卵母细胞的成熟和排卵受阻，无法与野生型雄鱼交配产卵，从而获得不育的雌鱼。通过采用促性腺激素及相应制剂对获得的不育的雌鱼进行处理后，能够使其恢复与野生型雄鱼自然交配与产卵的能力，并达到较高的受精率和出膜率，且存活的子代个体在形态上与野生型同时期鱼无明显差异。通过上述方式，能够将本发明提供的方法广泛应用于各类水产养殖鱼类中，以实现对水产养殖鱼类中雌鱼育性的有效控制，并保护生态安全，在水产养殖鱼类遗传育种与生态安全领域中具有广阔的应用前景。

Description

优化的雌鱼育性控制的方法及应用

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域和分子生物学领域，尤其涉及一种优化的雌鱼育性控制的方法及应用。

背景技术

近些年来，为了提高水产养殖品种的生长速度，增加水产养殖产量，增强抗病能力，改善水产养殖品种的品质，众多学者利用遗传操作技术在水产养殖相关领域开展了广泛的研究。但遗传操作的水产养殖材料一旦释放或逃逸到自然水体中，则有可能与野生型群体发生自然繁殖，导致遗传操作位点渐渗至自然界野生型群体中，从而破坏了天然的种群遗传结构和遗传多样性，造成人工遗传操作位点对野生物种的“基因污染”，产生难以预见和难以消除的生态安全风险，这阻碍着基于遗传操作的新型育种技术和遗传操作的水产养殖品种在水产养殖行业中的应用及推广。

育性控制是指人为干预目标物种的育性，使其实现育性人工可控的技术。通过建立和优化育性控制技术能有效地控制这些遗传操作水产养殖材料的育性，防止人工遗传操作位点在野生型群体中发生漂移造成的“基因污染”，是实现基因编辑等新型育种技术在生产性状高效改良的产业育种中应用的关键，并以此保障天然种群的生态安全。同时，也能有效保护经过遗传改良性状的水产品种的知识产权，保障种业科技发展动力，促进水产养殖行业绿色健康的可持续发展。

为了进行育性控制，申请号为201310049161.5的发明专利公开了一种控制鱼类生殖的方法，该专利通过分别构建转GAL4基因斑马鱼纯合子和转UAS-antisense dnd基因斑马鱼纯合子，再将二者进行杂交，获得的两系杂交子代生殖败育。该方法通过性腺组织切片发现两系杂交雌鱼卵巢中有3％左右的卵细胞处于第四发育期，两系杂交雄鱼精巢中小叶腔的大小和数量均约为对照的10％左右。该方法需要构建两种转基因鱼，步骤较为繁琐，且涉及外源基因的导入，因此，是否能在经济鱼类中开展应用还有待进一步研究。

申请号为202111369875.5的发明专利公开了泥鳅CDK1基因及其在不育多倍体泥鳅分子育种中的应用，该专利利用CRISPR/Cas9技术对多倍体泥鳅的CDK1基因进行敲除，从而获得不育多倍体泥鳅。但是，虽然该方法能够获得不育个体，但是并没有育性挽救的方法，因此，无法持续获得不育子代供养殖实践，必须不断通过杂合子亲本的交配和对子代进行筛选，获得纯合子不育子代，方能实现不育子代供养殖使用，这对于水产养殖鱼类的大量苗种供应，人力、物力等经济成本在规模化养殖实践中显然难以承受。因此，难以在水产养殖动物中进行推广应用。

有鉴于此，有必要设计一种优化的雌鱼育性控制的方法及应用，以解决上述问题。

发明内容

针对上述现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种优化的雌鱼育性控制的方法及应用。本发明通过利用基因编辑技术特异性切割鱼类的性腺孕激素合成的关键编码基因，高效地获得不育的雌鱼；并采用促性腺激素以及促进卵母细胞成熟和排卵的制剂对不育的雌鱼进行处理，较好的挽救了雌鱼的育性，以实现对雌鱼育性的控制。

为实现上述目的，本发明提供了一种优化的雌鱼育性控制的方法，具体为：

采用基因编辑技术敲除鱼类的性腺孕激素合成的关键编码基因，阻断鱼类孕激素的合成，以获得缺失纯合子不育雌鱼；

采用促性腺激素以及促进卵母细胞成熟和排卵的制剂对所述缺失纯合子不育雌鱼进行处理后，所述缺失纯合子不育雌鱼能够恢复与野生型雄鱼自然交配、产卵的能力。

作为本发明的进一步改进，所述性腺孕激素合成的关键编码基因为孕激素合成通路的调节蛋白编码基因(steroidogenic acute regulatory protein,star)，即star基因。

作为本发明的进一步改进，所述雌鱼育性控制的方法具体包括如下步骤：

S1、采用基因编辑技术敲除鱼类中的star基因，获得star缺失纯合子鱼；

S2、从所述star缺失纯合子鱼中筛选出star缺失纯合子雌鱼；所述star缺失纯合子雌鱼的卵母细胞成熟受阻且排卵障碍，无法自然繁殖；

S3、采用促性腺激素以及促进star缺失纯合子雌鱼卵母细胞成熟和排卵的制剂处理所述star缺失纯合子雌鱼；

S4、将经步骤S3处理后得到的star缺失纯合子雌鱼与野生型雄鱼自然交配。

作为本发明的进一步改进，在步骤S3中，所述促性腺激素为人绒毛膜促性腺激素，所述促进star缺失纯合子雌鱼卵母细胞成熟和排卵的制剂为4-孕烷-17α,20β-二醇-3-酮。

作为本发明的进一步改进，在步骤S3中，所述处理的方法为：

在所述star缺失纯合子雌鱼自然交配前8小时，注射所述人绒毛膜促性腺激素；随后，在所述star缺失纯合子雌鱼自然交配前6小时，使用所述4-孕烷-17α,20β-二醇-3-酮进行药浴处理。

作为本发明的进一步改进，在步骤S1中，获得所述star缺失纯合子鱼具体包括如下步骤：

S11、利用基因编辑技术敲除鱼类中的star基因，获得F0代；

S12、将F0代雄鱼与野生型雌鱼进行杂交，并对获得的F1代的基因组进行目的检测片段扩增和测序，检测F1代突变情况，获得有效突变的F1代star杂合子鱼；

S13、将所述F1代star杂合子鱼进行自交，通过酶切鉴定筛选获得F2代star缺失纯合子鱼。

作为本发明的进一步改进，在步骤S11中，所述利用基因编辑技术敲除鱼类中的star基因具体包括如下步骤：

P1、基于TALENs技术，设计鱼类的star基因编辑靶位点；

P2、根据所述鱼类的star基因编辑靶位点，设计靶向双臂并组装合成TALENsmRNA；所述靶向双臂包括左臂和右臂；

P3、将预定浓度的靶向双臂mRNA作为star基因编辑的注射物，进行鱼类受精卵的显微注射。

作为本发明的进一步改进，在步骤P1中，所述鱼类的star基因编辑靶位点位于star基因第二个外显子上，以所述star基因第二个外显子上的一个22bpDNA序列为中间序列。

作为本发明的进一步改进，在步骤P3中，所述预定浓度为50～100ng/μL，所述显微注射时注入的所述star基因编辑的注射物的体积为1.0～2.0nL。

为实现上述目的，本发明还提供了上述优化的雌鱼育性控制的方法在水产养殖鱼类遗传育种与生态安全领域中的应用。

本发明的有益效果是：

1、本发明提供的优化的雌鱼育性控制的方法，通过利用基因编辑技术特异性切割鱼类的star基因，能够获得有效突变的F1代star杂合子鱼，并进行自交，通过酶切鉴定筛选出F2代star缺失纯合子鱼，从而阻断鱼类孕激素的合成，获得的star缺失纯合子鱼中的所有雌鱼由于性腺孕激素合成受阻，其卵母细胞的最终成熟和排卵存在障碍，无法与野生型雄鱼交配产卵，从而获得不育的雌鱼。同时，基于上述方法获得的不育的雌鱼，可以通过使用促性腺激素以及促进star缺失纯合子雌鱼卵母细胞成熟和排卵的制剂进行处理，以使其能够完成自然排卵和受精，并且存活的子代个体在形态上与野生同时期鱼没有明显差异。并且，与单纯使用促进star缺失纯合子雌鱼卵母细胞成熟和排卵的制剂进行处理的方式相比，本发明进一步增加了促性腺激素的使用，能够使处理后的雌鱼的受精率和出膜率显著提高，对雌鱼的育性具有更好的挽救效果。因此，本发明提供的方法不仅能够高效的获得不育的雌鱼，还能够利用促性腺激素与相应制剂有效挽救其育性，从而实现雌鱼育性的控制。

2、本发明提供的优化的雌鱼育性控制的方法，能够高效地实现遗传操作雌鱼亲本繁育的人工控制和优化，并可实现其不育子代苗种的可控供应，有效地控制这些遗传操作水产养殖材料的育性，防止人工遗传操作位点在野生型群体中发生漂移造成的“基因污染”，从根本上解决利用新型遗传育种技术进行遗传操作应用的生态安全问题，对于鱼类的遗传操作改良及育种研究的持续发展和推广具有重要意义。同时，也能有效保护经过遗传改良性状的水产品种的知识产权，保障种业科技发展动力，促进水产养殖行业绿色健康的可持续发展。

3、star在卵巢中高表达，且与卵母细胞成熟和排卵紧密相关，在鱼类中广泛存在，功能保守。本发明提供的优化的雌鱼育性控制的方法，能够应用于各种水产养殖鱼类中，以实现对水产养殖鱼类中雌鱼育性的有效控制，并保护生态安全，在水产养殖鱼类遗传育种与生态安全领域中具有广阔的应用前景。

附图说明

图1为本发明提供的优化的雌鱼育性控制的方法的流程示意图。

图2为3月龄的野生型对照斑马鱼和本发明提供的star缺失纯合子斑马鱼的starcDNA部分序列对比图。

图3为实施例1及对比例1中对star缺失纯合子雌鱼进行处理的示意图。

图4为实施例1及对比例1处理后的star缺失纯合子雌鱼与未处理的star缺失纯合子雌鱼的产卵效果对比分析柱状图。

图5为实施例1及对比例1处理后star缺失纯合子斑马鱼所产子代与野生型同时期鱼的发育情况对比图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细描述。

在此，还需要说明的是，为了避免因不必要的细节而模糊了本发明，在附图中仅仅示出了与本发明的方案密切相关的结构和/或处理步骤，而省略了与本发明关系不大的其他细节。

另外，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

本发明提供了一种优化的雌鱼育性控制的方法，具体为：

采用基因编辑技术敲除鱼类的性腺孕激素合成的关键编码基因，阻断鱼类孕激素的合成，以获得缺失纯合子不育雌鱼；

采用促性腺激素以及促进卵母细胞成熟和排卵的制剂对所述缺失纯合子不育雌鱼进行处理后，所述缺失纯合子不育雌鱼能够恢复与野生型雄鱼自然交配、产卵的能力。

通过上述方式，本发明能够利用基因编辑技术特异性切割鱼类的性腺孕激素合成的关键编码基因，高效地获得不育的雌鱼；并采用促性腺激素以及促进卵母细胞成熟和排卵的制剂对不育的雌鱼进行处理，较好的挽救了雌鱼的育性，以实现对雌鱼育性的控制。

优选的，所述性腺孕激素合成的关键编码基因为star基因。

优选的，所述雌鱼育性控制的方法具体包括如下步骤：

S1、采用基因编辑技术敲除鱼类中的star基因，获得star缺失纯合子鱼；

S2、从所述star缺失纯合子鱼中筛选出star缺失纯合子雌鱼；所述star缺失纯合子雌鱼的卵母细胞成熟受阻且排卵障碍，无法自然繁殖；

S3、采用促性腺激素以及促进star缺失纯合子雌鱼卵母细胞成熟和排卵的制剂处理所述star缺失纯合子雌鱼；

S4、将经步骤S3处理后得到的star缺失纯合子雌鱼与野生型雄鱼自然交配。

通过上述方式，能够利用基因编辑技术特异性切割鱼类的star基因，高效地获得star缺失纯合子不育雌鱼；且该不育雌鱼经上述处理后能够正常排卵并受精，可以对其成功率、受精率、出膜率以及胚胎存活率进行测试与统计，其受精率与出膜率相较于单独使用制剂进行处理的方式具有显著提升。

优选的，在步骤S1中，获得所述star缺失纯合子鱼具体包括如下步骤：

S11、利用基因编辑技术敲除鱼类中的star基因，获得F0代；

S12、将F0代雄鱼与野生型雌鱼进行杂交，并对获得的F1代的基因组进行目的检测片段扩增和测序，检测F1代突变情况，获得有效突变的F1代star杂合子鱼；其基因型为star+/-；

S13、将所述F1代star杂合子鱼进行自交，通过酶切鉴定筛选获得F2代star缺失纯合子鱼，其基因型为star-/-。

优选的，在步骤S11中，所述利用基因编辑技术敲除鱼类中的star基因具体包括如下步骤：

P1、基于TALENs技术，设计鱼类的star基因编辑靶位点；

P2、根据所述鱼类的star基因编辑靶位点，设计靶向双臂并组装合成TALENsmRNA；所述靶向双臂包括左臂和右臂；

P3、将预定浓度的靶向双臂mRNA作为star基因编辑的注射物，进行鱼类受精卵的显微注射。

优选的，在步骤P1中，鱼类的star基因编辑靶位点位于star基因第二个外显子上，以所述star基因第二个外显子上的一个22bpDNA序列为中间序列。

优选的，在步骤P3中，所述预定浓度为50～00ng/μL，所述显微注射时注入的所述star基因编辑的注射物的体积为1.0～2.0nL。

优选的，在步骤S3中，所述促性腺激素为人绒毛膜促性腺激素，所述促进star缺失纯合子雌鱼卵母细胞成熟和排卵的制剂为4-孕烷-17α,20β-二醇-3-酮；所述处理的方法为：

在所述star缺失纯合子雌鱼自然交配前8小时，注射所述人绒毛膜促性腺激素；随后，在所述star缺失纯合子雌鱼自然交配前6小时，使用所述4-孕烷-17α,20β-二醇-3-酮进行药浴处理；其中，人绒毛膜促性腺激素的浓度优选为5IU/μL，注射体积优选为10μL；药浴处理star缺失纯合子雌鱼时，药浴中4-孕烷-17α,20β-二醇-3-酮制剂的浓度优选为300μg/L。

上述优化的雌鱼育性控制的方法能够应用于各种水产养殖鱼类中，以实现对水产养殖鱼类中雌鱼育性的有效控制，并保护生态安全，能够被应用于水产养殖鱼类遗传育种与生态安全领域。

下面结合具体的实施例及对比例对本发明提供的优化的雌鱼育性控制的方法及应用进行说明。

实施例1

请参阅图1所示，本实施例以斑马鱼为例，提供了一种优化的雌鱼育性控制的方法及应用，具体包括如下步骤：

S1、采用基因编辑技术敲除斑马鱼中的star基因，获得star缺失纯合子鱼，具体过程如下：

S11、采用TALENs技术敲除斑马鱼的star基因，获得F0代，具体方法为：

1)依据美国NCBI数据库中斑马鱼star的基因序列信息(NC_007119.6，NCBI)，将斑马鱼的star基因编辑靶位点设计在star基因第二个外显子上；以斑马鱼的star基因的第二个外显子上的一个22bp DNA序列为中间序列，该中间序列包含一个常用限制性核酸内切酶SacI的识别位点(GAGCTC)，基因序列信息为CCGAAGAAGGAGCTCCTTGCTC。

2)斑马鱼的star基因编辑靶位点左臂和右臂以其中间序列左右各20、17bp分别作为TALENs左右双臂的结合位点，进行靶向双臂的组装；左臂的基因序列信息为AGCACTTGGATAAACCACAT，右臂的基因序列信息为ATGCAAGATCTCTTACT。

用限制性核酸内切酶SacI将组装完成后正确测序的TALENs质粒线性化；TALENs靶向双臂mRNA转录自线性化的TALENs质粒，具体为：利用Invitrogen公司的mMESSAGEmMACHINE^TMSP6 Transcription试剂盒体外合成mRNA；再用超微量分光光度计测定mRNA的浓度，分装后于-80℃条件下备用。

3)将浓度为100ng/μL的靶向双臂mRNA作为star基因编辑的注射物，利用显微注射仪注射进入1-或2-细胞的斑马鱼胚胎中，注射体积为1.0nL；将注射后的斑马鱼卵养至性成熟，得到F0代，通过对star基因进行特异性切割，实现star的基因编辑，造成star基因突变。

S12、将斑马鱼F0代雄鱼与野生型雌鱼进行杂交，获得F1代，对F1代基因组进行目的检测片段扩增和测序，检测F1代突变情况，筛选出有效突变的F1代star杂合子斑马鱼(star+/-)；进行所述目的检测片段扩增和测序的引物中，筛选star杂合子斑马鱼的正向引物的序列和反向引物的序列分别为TGACAGGTAAGAGCACTTTC和AGCCTGCATAAAGGAGTCTG。

S13、将有效突变的F1代star杂合子斑马鱼进行自交，通过酶切鉴定筛选出在靶位点处缺失1bp的有效突变系(如图2所示)，即获得F2代star缺失纯合子斑马鱼(基因型为star-/-)。

S2、所述F2代star缺失纯合子鱼中，雌鱼的卵母细胞成熟障碍且排卵受阻，无法正常繁殖，与野生型雄性进行自然交配，产卵的成功率均为0.00％。

S3、在所述star缺失纯合子雌鱼自然交配前8小时(0:00a.m.)，注射所述人绒毛膜促性腺激素(HCG)；随后，在所述star缺失纯合子雌鱼自然交配前6小时(2:00a.m.-8:00a.m.)，使用促进卵母细胞成熟和排卵的制剂4-孕烷-17α,20β-二醇-3-酮进行药浴处理(如图3中的B所示)。其中，人绒毛膜促性腺激素的浓度为5IU/μL，注射体积为10μL，药浴中4-孕烷-17α,20β-二醇-3-酮的浓度为300μg/L。

S4、将处理后的star缺失纯合子雌鱼与野生型雄鱼进行自然交配。

试验结果表明，处理后的star缺失纯合子雌鱼能正常排卵和受精，且处理后的star缺失纯合子雌鱼产卵的成功率为60.00％、受精率为50.82％、出膜率为88.51％、三周存活率为69.36％。

需要说明的是，本实施例仅仅是以斑马鱼为例，并非对本发明提供的雌鱼育性控制的方法的应用领域的限定。本领域技术人员应当理解，对于含有star基因的各种水产养殖鱼类，均能够按照本发明提供的方法对其进行基因编辑，以实现对雌鱼育性的有效控制，均属于本发明的保护范围。在本发明的其他实施例中，还可以将鱼类的品种改变为鲤鱼、鲫鱼、草鱼、鲈鱼、罗非鱼等多种水产养殖鱼类，基于相同的原理，均能够达到与实施例1相似的技术效果，故在此不再赘述。并且，由于本发明提供的优化的雌鱼育性控制的方法能够应用于各种水产养殖鱼类中，以实现对水产养殖鱼类中雌鱼育性的有效控制，并保护生态安全，因而在水产养殖鱼类遗传育种与生态安全领域中具有广阔的应用前景。

对比例1

为便于与实施例1比较，本对比例同样以斑马鱼为例，提供了一种优化的雌鱼育性控制的方法，与实施例1相比，区别仅在于步骤S3并未注射人绒毛膜促性腺激素，而是只使用了4-孕烷-17α,20β-二醇-3-酮进行药浴处理(如图3中的A所示)。

试验结果表明，对比例中仅采用4-孕烷-17α,20β-二醇-3-酮进行药浴处理后得到的star缺失纯合子雌鱼的产卵成功率为40.00％、受精率为18.34％、出膜率为47.81％、三周存活率为55.03％，其与实施例1中相应数据的对比图如图4所示。由图4可以看出，与对比例1中仅使用促进star缺失纯合子雌鱼卵母细胞成熟和排卵的制剂进行药浴处理的方式相比，实施例1在药浴之前进一步增加了促性腺激素的注射，能够使处理后的雌鱼的受精率和出膜率显著提高，对雌鱼的育性具有更好的挽救效果。

对比例2

为便于与实施例1和对比例1比较，本对比例同样以斑马鱼为例，选择野生型雌、雄鱼自然交配所产子代作为对比例2，进行产卵效果对比测试。

请参阅图5所示，对实施例1中处理后的star缺失纯合子雌鱼、对比例1中处理后的star缺失纯合子雌鱼与野生型雄鱼自然交配所产子代和野生型雌、雄鱼自然交配所产子代的产卵效果进行对比实验。结果表明，star缺失纯合子雌鱼产下的存活子代无明显的发育障碍，且在形态上与野生型同时期鱼没有明显差异，证明了经实施例1及对比例1中两种处理方式的star缺失纯合子雌鱼均能够恢复与野生型雄鱼自然交配、产卵的能力，且其存活的子代个体在形态上与野生型同时期鱼无明显差异。

综上所述，本发明提供了一种优化的雌鱼育性控制的方法及应用。该方法利用基因编辑技术敲除鱼类的性腺孕激素合成的关键编码基因，阻断鱼类孕激素的合成，使获得的缺失纯合子雌鱼的卵母细胞的成熟和排卵受阻，无法与野生型雄鱼交配产卵，从而获得不育的雌鱼。通过采用促性腺激素及相应制剂对获得的不育的雌鱼进行处理后，能够使其恢复与野生型雄鱼自然交配与产卵的能力，并达到较高的受精率和出膜率，且存活的子代个体在形态上与野生型同时期鱼无明显差异。通过上述方式，能够将本发明提供的方法广泛应用于各类水产养殖鱼类中，以实现对水产养殖鱼类中雌鱼育性的有效控制，并保护生态安全，在水产养殖鱼类遗传育种与生态安全领域中具有广阔的应用前景。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种优化的雌鱼育性控制的方法，其特征在于：

采用基因编辑技术敲除鱼类的性腺孕激素合成的关键编码基因，阻断鱼类孕激素的合成，以获得缺失纯合子不育雌鱼；

采用促性腺激素以及促进卵母细胞成熟和排卵的制剂对所述缺失纯合子不育雌鱼进行处理后，所述缺失纯合子不育雌鱼能够恢复与野生型雄鱼自然交配、产卵的能力。

2.根据权利要求1所述的优化的雌鱼育性控制的方法，其特征在于：所述性腺孕激素合成的关键编码基因为star基因。

3.根据权利要求1所述的优化的雌鱼育性控制的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

S1、采用基因编辑技术敲除鱼类中的star基因，获得star缺失纯合子鱼；

S2、从所述star缺失纯合子鱼中筛选出star缺失纯合子雌鱼；所述star缺失纯合子雌鱼的卵母细胞成熟受阻且排卵障碍，无法自然繁殖；

S3、采用促性腺激素以及促进star缺失纯合子雌鱼卵母细胞成熟和排卵的制剂处理所述star缺失纯合子雌鱼；

S4、将经步骤S3处理后得到的star缺失纯合子雌鱼与野生型雄鱼自然交配。

4.根据权利要求3所述的优化的雌鱼育性控制的方法，其特征在于：在步骤S3中，所述促性腺激素为人绒毛膜促性腺激素，所述促进star缺失纯合子雌鱼卵母细胞成熟和排卵的制剂为4-孕烷-17α,20β-二醇-3-酮。

5.根据权利要求4所述的优化的雌鱼育性控制的方法，其特征在于：在步骤S3中，所述处理的方法为：

在所述star缺失纯合子雌鱼自然交配前8小时，注射所述人绒毛膜促性腺激素；随后，在所述star缺失纯合子雌鱼自然交配前6小时，使用所述4-孕烷-17α,20β-二醇-3-酮进行药浴处理。

6.根据权利要求3所述的优化的雌鱼育性控制的方法，其特征在于：在步骤S1中，获得所述star缺失纯合子鱼具体包括如下步骤：

S11、利用基因编辑技术敲除鱼类中的star基因，获得F0代；

S12、将F0代雄鱼与野生型雌鱼进行杂交，并对获得的F1代的基因组进行目的检测片段扩增和测序，检测F1代突变情况，获得有效突变的F1代star杂合子鱼；

S13、将所述F1代star杂合子鱼进行自交，通过酶切鉴定筛选获得F2代star缺失纯合子鱼。

7.根据权利要求3所述的优化的雌鱼育性控制的方法，其特征在于：在步骤S11中，所述利用基因编辑技术敲除鱼类中的star基因具体包括如下步骤：

P1、基于TALENs技术，设计鱼类的star基因编辑靶位点；

P2、根据所述鱼类的star基因编辑靶位点，设计靶向双臂并组装合成TALENs mRNA；所述靶向双臂包括左臂和右臂；

P3、将预定浓度的靶向双臂mRNA作为star基因编辑的注射物，进行鱼类受精卵的显微注射。

8.根据权利要求7所述的优化的雌鱼育性控制的方法，其特征在于：在步骤P1中，所述鱼类的star基因编辑靶位点位于star基因第二个外显子上，以所述star基因第二个外显子上的一个22bpDNA序列为中间序列。

9.根据权利要求7所述的优化的雌鱼育性控制的方法，其特征在于：在步骤P3中，所述预定浓度为50～100ng/μL，所述显微注射时注入的所述star基因编辑的注射物的体积为1.0～2.0nL。

10.一种权利要求1～9中任一权利要求所述的优化的雌鱼育性控制的方法在水产养殖鱼类遗传育种与生态安全领域中的应用。