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CN117538545A - 一种用于阿尔茨海默症检测的蛋白抗原组合及应用 - Google Patents

一种用于阿尔茨海默症检测的蛋白抗原组合及应用 Download PDF

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CN117538545A CN202410026086.9A CN202410026086A CN117538545A CN 117538545 A CN117538545 A CN 117538545A CN 202410026086 A CN202410026086 A CN 202410026086A CN 117538545 A CN117538545 A CN 117538545A
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Abstract

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种用于阿尔茨海默症检测的蛋白抗原组合及应用。具体技术方案包括：一种抗原组合，所述抗原组合至少同时包括：DOC2A蛋白质、LGALS1蛋白质、KDM4D蛋白质和ADARB1蛋白质。本发明提供了几种新的蛋白质抗原及其组合，可用于早筛阿尔茨海默症的检测或诊断，尤其适用于阿尔茨海默症发病前的风险评估和预测；同时可以鉴别阿尔茨海默症与其它类型的痴呆症；并可根据需要进一步制备为相关试剂或试剂盒。

Description

一种用于阿尔茨海默症检测的蛋白抗原组合及应用
技术领域
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种用于阿尔茨海默症早期检测的蛋白抗原组合及应用。
背景技术
阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是最常见的痴呆疾病之一，占所有痴呆病例的60%～80%。根据患者病情，AD通常分为临床前期、轻度认知障碍（mild cognitiveimpairment，MCI）、轻度（早期）、中度（中期）和重度（后期）。将临床前期（包括AD源的主观认知下降阶段）和MCI阶段定义为AD极早期。在临床前期和MCI阶段，患者症状往往较不明显，但生物标志物指标已出现异常。如果能在无（明显）症状的早期实现及时、准确诊断，患者就可以提前10～20年进行病情干预。
2023年，阿尔茨海默病协会国际会议（AAIC）宣布了美国国立老化研究院和阿尔茨海默病协会（NIA-AA）的《修订版阿尔茨海默病诊断临床标准（草案）》（NIA-AA RevisedClinical Criteria for Alzheimer's Disease）。该草案将生物标志物分为三大类，分别为：血液标志物（BBBM）、脑脊液（CSF）标志物和“金标准”影像学（PET/MRI）标志物。
脑脊液生物标志可用于无症状阶段的检测，其变化早于PET影像，但需要做有创的腰椎穿刺，临床接受度很低。脑PET/MRI成像可检测MCI（轻度认知障碍）及无症状AD，但其变化晚于脑脊液生物标志物，且价格昂贵，检测设备普及率低，国内仅有少数医院可开展该检测，还需要注射显影剂，存在放射性，患者接受度依然不高。
相较于脑脊液和脑PET/MRI成像等生物标志物检测而言，血液标志物检测具有微创、低成本、易操作、易普及等优势。血液检测较CSF和PET影像而言，费用更低，检测更快速，操作更简便，仅需抽取静脉血即可，无辐射伤害及侵入性，覆盖人群广，对于AD早发现、早预防有非常大的指导价值。
将血液标志物用于AD早期检测，可缩短诊疗时间，是AD转诊路径中重要的工具。即BBBM（+）将会进一步帮助认知功能评估及AD病理的确诊（CSF检查及PET影像）；而BBBM（-）将会帮助AD病理诊断，排除其他导致认知下降的病因的检查，减少不必要的CSF及PET影像检查。
主观认知下降（SCD）是指患者主观上认为自己较之前正常状态有记忆或认知功能下降，而客观的神经心理测验在正常范围之内。SCD是介于正常认知老化与轻度认知障碍（MCI）之间的阶段。引起SCD的原因众多，包括阿尔茨海默病临床前期、抑郁、焦虑、人格和睡眠障碍等。
SCD在老年人群中相当普遍，基于人口的研究显示，65岁以上认知正常的老年人中，有50%～80%报告自我感觉认知下降。然而临床上对SCD的关注度不高。认知下降形式、个体性格特点、文化背景和统计假阳性等因素使SCD的分类和量化面临极大的困难。因为SCD是一种主观认知感受，缺乏客观判断标准，因此研究者们提出了更多关于SCD的自评量表。目前常用的量表包括：主观认知下降问卷（subjective cognitive declinequestionnaire，SCD-Q）、日常认知测量（measurement of everyday cognition，Ecog）等。
很多临床流行病学研究显示：SCD个体发生AD的风险高于非SCD个体更高，与此同时，并不是所有SCD患者都会发展到AD或痴呆阶段。
轻度认知障碍（MCI）是一种轻度认知损害但对日常生活无明显影响的异质性临床综合征，是正常衰老与轻度痴呆之间的过度阶段。MCI可由神经退行性疾病引起，如阿尔茨海默病、帕金森病、额颞叶变性等，也可能由其他全身性、神经系统和精神性疾病导致。如果能根据MCI病因进行针对性治疗，有望逆转或使得认知障碍不进一步发展。
因此，如果能在临床前期到主观认知下降（SCD）、轻度认知障碍MCI阶段筛查出阿尔茨海默病，将阿尔茨海默症与其它痴呆类型进行有效区分，将有望进行提前干预、针对治疗，防止病情进一步加重。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于阿尔茨海默症早期检测的蛋白抗原组合及应用。
为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种抗原组合，所述抗原组合至少同时包括：DOC2A蛋白质、LGALS1蛋白质、KDM4D蛋白质和ADARB1蛋白质中的任意两种。
优选的，所述DOC2A蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，和/或，所述LGALS1蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，和/或，所述KDM4D蛋白质的氨基酸序列如SEQ IDNO：7所示，和/或，所述ADARB1蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示。
优选的，所述抗原组合还包括：SERF2蛋白质。
优选的，所述SERF2蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。
优选的，所述抗原组合还包括：HIST1H2BD蛋白质、ICAM1蛋白质、RIOK2蛋白质和DNAJC8蛋白质中的任意一种或多种。
优选的，所述HIST1H2BD蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，和/或，所述ICAM1蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，和/或，所述RIOK2蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，和/或，所述DNAJC8蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。
相应的，所述抗原组合在制备检测/鉴定阿尔茨海默症产品中的应用。
优选的，在制备检测/鉴定阿尔茨海默症中期及以前阶段产品中的应用，尤其是在制备检测/鉴定阿尔茨海默症早期及以前阶段产品中具有突出优势。
相应的，利用所述抗原组合制备的检测/鉴定阿尔茨海默症的试剂或试剂盒。
相应的，LGALS1蛋白质和/或HIST1H2BD蛋白质和/或RIOK2蛋白质在制备检测/鉴定阿尔茨海默症产品中的应用，所述LGALS1蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，和/或，所述HIST1H2BD蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，和/或，所述RIOK2蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。
相应的，利用所述蛋白质制备的检测/鉴定阿尔茨海默症的产品，例如试剂或试剂盒；在制备检测/鉴定阿尔茨海默症中期及以前阶段尤其是早期及以前阶段产品中具有突出优势。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供了几种可用于从临床前期到主观认知下降（SCD）、轻度认知障碍（MCI）阶段有效区分阿尔茨海默症自身抗体检测的蛋白抗原，检测方法简单便捷，不存在辐射，也不会造成难以被受试者接受的创伤，检测结果与使用脑脊液或“金标准”检测的结果匹配度高。其中涉及的蛋白质抗原可利用人工合成、基因重组等方法制得。
本发明提供的抗原或其组合可用于测试来自受试者的生物学样品中针对上述抗原组合的自身抗体是否存在或存在水平，从而判断所述受试者是否处于阿尔茨海默症早期阶段，或是否具有阿尔茨海默症的患病风险，同时鉴别受试者所患痴呆类型是否为阿尔茨海默症。其中，所述生物学样品可以是血清、血浆、全血、唾液、口腔粘膜拭子、尿液、淋巴液、脑脊液等。根据具体情况，所述生物学样品可经提取、稀释、富集等手段进行预处理，使用方法多样、简便易操作。将本发明提供的抗原及组合用于上述测试时，通过使所述抗原及组合中的蛋白质或其片段与可能存在的相应自身抗体发生结合或相互作用，来测试该自身抗体的存在或存在水平。
本发明提供的蛋白质抗原或其组合还可用于制备阿尔茨海默症相关自身抗体早筛试剂或阿尔茨海默症早筛诊断试剂。应当理解为，所述蛋白质抗原组合还可用于制备早筛阿尔茨海默症相关自身抗体检测试剂盒，所述试剂盒可以参照本发明实施例中使用所述蛋白质抗原组合进行早筛阿尔茨海默症相关自身抗体检测时的方法和试剂制备，也可根据需要进行相应调整。本发明提供的蛋白质抗原或其组合除可用于阿尔茨海默症的早筛外，在AD早期、中期的鉴定上也有优越的表现。
综上，本发明提供了几种新的蛋白质抗原及其组合，可用于早筛阿尔茨海默症的检测或诊断，尤其适用于阿尔茨海默症发病前的风险评估和预测；同时可以鉴别阿尔茨海默症与其它类型的痴呆症；并可根据需要进一步制备为相关试剂或试剂盒。
具体实施方式
本发明首次发现DOC2A、LGALS1、HIST1H2BD、ICAM1、RIOK2、SERF2、DNAJC8、KDM4D（又名JMJD2D）和ADARB1蛋白质与阿尔茨海默症的极早期诊断密切相关；尤其是LGALS1、HIST1H2BD、RIOK2三种蛋白质，首次发现与阿尔茨海默症的诊断相关。所述DOC2A蛋白序列如SEQ ID NO：1所示。所述LGALS1蛋白序列如SEQ ID NO：2所示。所述HIST1H2BD蛋白序列如SEQ ID NO：3所示。所述ICAM1蛋白序列如SEQ ID NO：4所示。所述RIOK2蛋白序列如SEQ IDNO：5所示。所述SERF2蛋白序列如SEQ ID NO：6所示。所述KDM4D蛋白序列如SEQ ID NO：7所示。所述DNAJC8蛋白序列如SEQ ID NO：8所示。所述ADARB1蛋白序列如SEQ ID NO：9所示。
基于该新发现，本发明提供了上述蛋白质在制备检测、诊断阿尔茨海默症相关产品（例如试剂盒）中的应用。上述各蛋白质可单独进行使用，也可以联合形成蛋白质组合物后进行使用。
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。所获得的数据均为进行至少3次重复后获得的平均值，且各重复获得的均为有效数据。
实施例一：抗原的重组载体构建、表达和纯化
获得抗原的方法可选为：合成蛋白质抗原的编码DNA，以合成DNA为模板，设计引物，通过PCR、酶切、连接等分子克隆手段，将所述蛋白质抗原或其片段的基因片段克隆到表达质粒上，然后通过大肠杆菌、酵母或细胞进行表达，再经过层析纯化得到目标蛋白。同时，还可选择性地在蛋白抗原或其片段上增加Trx、GST、AVI、HIS、c-myc等标签。增加这些标签可以方便的对蛋白质抗原进行提纯或标记，但本质上并不会改变抗原与其自身抗体的结合特性。
选择DOC2A、LGALS1、HIST1H2BD、ICAM1、RIOK2、SERF2、DNAJC8、KDM4D和ADARB1蛋白质，其分别的数据库ID具体如表1所示。
表1 各候选蛋白质数据库ID对照表
以人类cDNA文库（购自Invitrogen公司）或者全基因合成DNA为模板，分别设计引物，通过PCR、酶切、连接等分子克隆手段，将所述蛋白的基因片段克隆到pET28质粒上。同时，在蛋白N-端增加HIS、FLAG等标签，形成融合蛋白。将得到的重组表达载体通过DNA测序鉴定，确认包含正确的蛋白基因片段。需要说明的是：添加标签只是为了方便识别和提取蛋白，并未对蛋白作为抗原时的功能产生决定性影响，使用时，不添加标签或根据需要添加其它标签或采取其他标记/识别手段均可。
将上述包含蛋白基因片段的重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，挑取克隆接种至LB培养基中，37℃摇床培养。当菌体密度OD600约为0.8时，降温至16℃，在每个LB培养基中加入0.1mM异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG），诱导表达过夜，获得菌体。
离心收集诱导表达的所述菌体，用PBS漂洗两遍。用裂解液（每g菌体加5～10mL裂解液）重悬并分散菌体，冰浴，超声破碎菌体（超声功率200W，破碎5s，休息5s）。破碎后13000rpm，10℃，离心20分钟，取上清，经Ni柱亲和层析和分子筛层析两步纯化后，采用SDS-PAGE电泳分析，确认蛋白的分子量、纯度，用Bradford法测定浓度后，保存在-80℃备用。即获得纯化后的各候选蛋白质。
实施例二：各候选蛋白质单独检测AD源性SCD和AD源性MCI样本的效果展示
1、本实施例中使用的溶液和试剂如下：
（1）包被缓冲液为PBS缓冲液，pH=7.4。其制备方法为：准确称取3.58g Na2HPO4·12H2O、0.23g KH2PO4·2H2O、0.2g KCl、8.0g NaCl，溶解于水中，加水定容至1L。
（2）封闭液/样本稀释液/抗体稀释液：将10g BSA（牛血清白蛋白）溶解于800ml包被缓冲液中，用包被缓冲液定容至1L。
（3）洗涤液：现配现用，使用前在包被缓冲液中加入0.5% Tween20（V/V），pH=7.4。
（4）TMB显色剂，购自KPL公司。
（5）终止液：1M盐酸。
2、固相包被待测蛋白。用包被缓冲液将实施例一获得的纯化后的各候选蛋白质稀释至5μg/mL，加至96孔板，每孔50μL，4℃包被过夜。次日倒掉溶液，甩干，用洗涤液洗三次，每次每孔200μL。然后每孔加入200μL封闭液，室温孵育1h后，将封闭液倒掉，甩干，再用洗涤液洗三次，每次每孔200μL，并再次甩干；获得位于96孔板中的固相包被的抗原。
3、加入待测样本。将待测人血清用样本稀释液稀释100倍后，加入所述含待测蛋白的96孔板，每孔加稀释后的待测样本50μL。随后将96孔板置于微孔板振荡仪上，室温振荡孵育1h；甩干，用洗涤液洗三次，每次每孔200μL，并再次甩干。
4、加入酶标二抗。将1.0mg/mL辣根过氧化物酶标记的重组羊抗人免疫球蛋白G抗体（购自Jackson ImmunoResearch Inc.）用抗体稀释液稀释20000倍后，加入步骤3处理后的96孔板中，每孔加50μL。随后将96孔板置于微孔板振荡仪上，室温振荡孵育0.5h，将板甩干，用洗涤液洗三次，每次每孔200μL，并再次甩干。
5、显色反应及光密度值读数。在步骤4处理后的96孔板中，每孔加50μL TMB显色剂，振荡15s，室温下避光反应15min，再加入50μL终止液；然后用酶标仪读取450nm波长的吸收值，获得每个待测样本的检测信号（S）。
6、敏感性和特异性分析。分别取300例阳性样本（入组定义为阳性样本）和300例阴性样本（健康受试者血清）。
入组定义为阳性样本的标准为同时满足如下条件：个人主观感觉记忆下降而非其他认知功能障碍疾病，发病时间＜5年，发病年龄大于55岁，对认知减退存在担忧，自我感觉记忆力较同年龄人差。无近期（7天内）或长期（≥5年）服用以下药物，包括：免疫调节剂、含抗胆碱能成分的抗抑郁药或神经阻断剂，抗帕金森类药物，或其他临床实验药物；无自身免疫疾病，主要包括类风湿性关节炎、甲状腺机能亢进、系统性红斑狼疮以及原发性胆汁性肝硬化等。量表评估：总体衰退量表（GDs）2～3分、临床痴呆量表（CDR）小于等于0.5分、记忆分值在年龄和教育匹配对照组的1.5倍标准差以下、简明精神状态量表（MMsE）＞24分、mattis痴呆评价表（DRs）＞123分。
需要说明的是：现有通用的阿尔茨海默症诊断并不完全准确，尤其难以精确诊断极早期（潜在）阿尔茨海默症患者，因此此处定义为阳性的样本并不代表全部都是真实的（极早期）阿尔茨海默症患者，其中存在误诊/误判的正常人，及其它非阿尔茨海默症引起的认知下降、认知障碍和记忆力衰减人群。
入组定义为阴性样本（健康人）的标准为同时满足如下条件：（1）受试者意识清楚，生命体征平稳，无异常神经系统症状或体征，无神经、精神系统疾病；（2）无主观的记忆功能下降或其他神经、精神疾病史，且近期无失眠或慢性失眠（≥3次/周、持续≥3个月的失眠症状）；（3）简易精神状态量表（MMSE）得分＞26分；（4）蒙特利尔认知评估表（MoCA）＞26分；（5）汉密尔顿抑郁量表（HAMD）＜7分；（6）汉密尔顿焦虑量表-HAMA（14项）＜7分；（7）临床痴呆量表（CDR）=0分；（8）无近期（7天内）或长期（≥5年）服用以下药物，包括：免疫调节剂、含抗胆碱能成分的抗抑郁药或神经阻断剂，抗帕金森类药物，或其他临床实验药物；（9）无自身免疫疾病，主要包括类风湿性关节炎、甲状腺机能亢进、系统性红斑狼疮以及原发性胆汁性肝硬化等。
按步骤4方法（450nm波长的吸收值）测定每个样本的检测信号（S）。以阴性样本为阴性参考样本，计算所有阴性参考样本检测信号（S）的平均值（M）及标准差（SD），以M+3SD为Cut Off值。
将检测信号（S）≥Cut Off值的样本（S≥M+3SD）定为阳性；将检测信号（S）＜CutOff值的样本（S＜M+3SD）定为阴性。
基于样本阳性和阴性结果计算特异性和敏感性。其中，特异性是指健康受试者样本被正确地判定为阴性的比例，即在阴性样本中被判定为阴性的数量除以阴性样本总数。敏感性是指入组阳性患者样本被判定为阳性的比例，即在阳性样本中被判定为阳性的数量除以阳性样本总数。通过计算得出使用每个被测蛋白作为抗原进行样本检测时的敏感性和特异性。
同时将阳性样本在医院分别检测：β-Amyloid Accumulation（β-淀粉样蛋白积累，CSF/PET）、FDG-PET/fMRI或Tau-mediated neuronal injury（Tau介导的神经元损伤，CSF）。将医院的检测结果作为对照，计算敏感性。另外，由于β-Amyloid Accumulation等测试存在有辐射/有创伤等，正常人（阴性样本）未进行对应检测，因此没有对应的特异性数据。结果如表2所示。
表2 各候选蛋白质检测结果对照表
结果显示：现有常用的便捷方法（自我评估、量表评估）检测极早期阿尔茨海默症的准确率较低，定义为阳性的样本中含有大量被误诊的患者。
实施例三：蛋白质组合物联合检测AD源性SCD和AD源性MCI样本的效果展示
1、使用“单指标”法利用抗原组合物进行检测。
“单指标”法是指：使用每个抗原分别单独进行检测，一个抗原对应一个数据；当某个待测样本使用某个抗原组合进行检测时，抗原组合中只要有任意一个抗原得到的检测信号为阳性检测信号，则认为该抗原组合检测该样本的结果为阳性，否则为阴性。
利用实施例二各候选蛋白质抗原组成不同的抗原组合，具体如表3所示。参照实施例二的方法使用各抗原组合检测实施例一各阳性样本和阴性样本的特异性和敏感性，检测结果如表4所示。需要说明的是，发明人并非只进行了表3的组合试验；发明人经过大量前期试验后才获得表3中所示的各抗原组合。
表3 各抗原组合对照表
表4 各抗原组合使用“单指标”法的检测结果对照表
结果显示：利用“单指标”进行判断时，相较于三种常用现有方法而言，敏感性较高，相较于各单独的蛋白质抗原检测而言，特异性偏低，说明检测准确性可能可以进一步提高。
2、使用“双指标”法利用抗原组合物进行检测。
“双指标”法是指：某个待测样本使用某个抗原组合进行检测时，抗原组合中两个及以上的抗原得到的检测信号为阳性检测信号，则该样本的检测结果为阳性，否则为阴性。其余操作同“单指标”法。同时利用多种现有技术检测时也按“双指标”法进行判断，即同时两种检测方法的检测结果均为阳性，才将检测结果定义为阳性，反之为阴性。例如：β-Amyloid Accumulation + FDG - PET/fMRI(CSF/PET)的组合，需要β-AmyloidAccumulation和FDG-PET/fMRI (CSF/PET)的检测结果均为阳性，检测结果才是阳性。结果如表5所示。
表5 各抗原组合使用“双指标”法的检测结果对照表
结果显示：“双指标”法的检测结果与β-Amyloid Accumulation等的检测结果更接近，且特异性明显更高，说明“双指标”法的检测准确性更高。
3、使用各单独的蛋白质抗原或通过“单指标”法/“双指标”法利用抗原组合物检测被β-淀粉样蛋白等检测定义为阳性的样本。
为了进一步确认单独的抗原或者各抗原组合检测出的阳性结果与现有方法检测出的阳性结果的重叠情况，分别使用各抗原组合再次检测被表5中的β-AmyloidAccumulation、 FDG-PET/fMRI (CSF/PET)、Tau-mediated neuronal injury (CSF)、β-Amyloid Accumulation + FDG-PET/fMRI (CSF/PET)、β-Amyloid Accumulation + Tau-mediated neuronal injury (CSF)、FDG-PET/fMRI + Tau-mediated neuronal injury(CSF)分别检测为阳性的样本，结果如表6所示。表6中的总数与表5中各现有方法检测为阳性的数量、样本对应。
表6 各抗原或抗原组合检测结果对照表
；
结果显示：组合7、8、9的检测结果与现有公认具有较高准确性的检测方法具有高匹配度，可以将现有方法检测认为是阳性的患者全部准确检测出来。
实施例四：蛋白质组合物联合检测AD早期及中期病人效果展示
取100例临床诊断为AD早期阳性样本、100例临床诊断为AD中期阳性样本，按照实施例二的方法，以表3中的候选抗原及组合来测定每个样本的检测信号（S）。将检测信号（S）≥Cut Off值的样本（S≥M+3SD）定为阳性；将检测信号（S）＜Cut Off值的样本（S＜M+3SD）定为阴性。
基于样本阳性和阴性结果计算特异性和敏感性。其中，特异性是指健康受试者样本被正确地判定为阴性的比例，即在阴性样本中被判定为阴性的数量除以阴性样本总数。敏感性是指入组阳性患者样本被判定为阳性的比例，即在阳性样本中被判定为阳性的数量除以阳性样本总数。通过计算得出使用每个被测蛋白作为抗原进行样本检测时的敏感性和特异性。结果如表7所示。
表7 各抗原或抗原组合检测结果对照表
结果显示：组合5、6、7、8、9的检测结果在AD早期和中期具有较高特异性比较好的敏感性。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形、变型、修改、替换，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种抗原组合，其特征在于：所述抗原组合至少同时包括DOC2A蛋白质、LGALS1蛋白质、KDM4D蛋白质和ADARB1蛋白质中的任意两种。
2.根据权利要求1所述的抗原组合，其特征在于：所述DOC2A蛋白质的氨基酸序列如SEQID NO：1所示，和/或，所述LGALS1蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，和/或，所述KDM4D蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，和/或，所述ADARB1蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示。
3.根据权利要求1或2所述的抗原组合，其特征在于：所述抗原组合还包括：SERF2蛋白质；所述SERF2蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。
4.根据权利要求3所述的抗原组合，其特征在于：所述抗原组合还包括：HIST1H2BD蛋白质、ICAM1蛋白质、RIOK2蛋白质和DNAJC8蛋白质中的任意一种或多种。
5.根据权利要求4所述抗原组合，其特征在于：所述HIST1H2BD蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，和/或，所述ICAM1蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，和/或，所述RIOK2蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，和/或，所述DNAJC8蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。
6.权利要求1～5任意一项所述抗原组合在制备检测/鉴定阿尔茨海默症产品中的应用。
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于：在制备检测/鉴定阿尔茨海默症中期及以前阶段产品中的应用。
8.利用权利要求1～5任意一项所述抗原组合制备的检测/鉴定阿尔茨海默症的试剂或试剂盒。
9.LGALS1蛋白质和/或HIST1H2BD蛋白质和/或RIOK2蛋白质在制备检测/鉴定阿尔茨海默症产品中的应用，其特征在于：所述LGALS1蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，和/或，所述HIST1H2BD蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，和/或，所述RIOK2蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。
10.利用权利要求9所述蛋白质制备的检测/鉴定阿尔茨海默症的产品。
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