[go: up one dir, main page]

CN117377692A - Tim-3-靶向抗体及其用途 - Google Patents

Tim-3-靶向抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN117377692A
CN117377692A CN202280037113.1A CN202280037113A CN117377692A CN 117377692 A CN117377692 A CN 117377692A CN 202280037113 A CN202280037113 A CN 202280037113A CN 117377692 A CN117377692 A CN 117377692A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
amino acid
cdr2
cdr3
cdr1
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280037113.1A
Other languages
English (en)
Inventor
董欣
董金瑜
王彬彬
王东
张煜
邵烈刚
高倩
王浩杰
马骏
王白杨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Luosheng Bio Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Suzhou Luosheng Bio Pharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Luosheng Bio Pharmaceutical Co ltd filed Critical Suzhou Luosheng Bio Pharmaceutical Co ltd
Publication of CN117377692A publication Critical patent/CN117377692A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本文公开了抗TIM‑3抗体和抗原结合片段、编码所述抗体和抗原结合片段的多核苷酸和包含所述抗体和抗原结合片段的药物组合物。还公开了本文所描述的抗TIM‑3抗体和抗原结合片段在癌症治疗中的用途。

Description

TIM-3-靶向抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本发明申请主张2021年4月23日提交的PCT专利申请No.PCT/CN2021/089261和2021年9月24日提交的PCT专利申请No.PCT/CN2021/120140的优先权，以上每篇专利完全作为参考并入本文。
1.技术领域
本发明涉及分子生物学和免疫肿瘤学。本文所提供的包括抗TIM-3抗体及其在治疗肿瘤或癌症中的用途。
2.背景技术
免疫检查点抑制剂已成为用于治疗剂开发(例如，靶向PD-l、TIM-3和CTLA-4的那些治疗剂)的有前景的分子种类。尽管检查点抑制剂，如和等已获成功，但是仅一部分患者对这些疗法具有持久的临床反应。在临床试验中，一些肿瘤类型对抗CTLA-4或抗PD-1/PD-L1单一疗法显示出较低的反应。TIM-3表达已与癌症相关，但是TIM-3-靶向治疗选择的发展成功有限。因此，对于癌症患者，特别是对于TIM-3-靶向试剂的其它治疗选择的需求仍未满足。本文所提供的组合物和方法满足了这些需求并提供了其它相对优势。
3.发明内容
本文提供了特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含(1)具有选自SEQ ID NO：86-93和129-137的氨基酸序列的轻链CDR1(VL CDR1)；(2)具有选自SEQ ID NO：94-100和138-144的氨基酸序列的轻链CDR2(VL CDR2)；和(3)具有选自SEQ ID NO：47-55、145-153和198-206的氨基酸序列的轻链CDR3(VL CDR3)；或其在VL CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体；和/或(b)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含(1)具有选自SEQ ID NO：101-108和154-161的氨基酸序列的重链CDR1(VH CDR1)；(2)具有选自SEQ ID NO：109-118和162-170的氨基酸序列的重链CDR2(VH CDR2)；和(3)具有选自SEQ ID NO：119-128和171-179的氨基酸序列的重链CDR3(VH CDR3)；或其在VH CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
在本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的一些实施方式中，(a)VL CDR1、CDR2和CDR3(1)分别具有由SEQ ID NO：86、94和47所示的氨基酸序列；(2)分别具有由SEQID NO：87、95和48所示的氨基酸序列；(3)分别具有由SEQ ID NO：88、96和49所示的氨基酸序列；(4)分别具有由SEQ ID NO：89、97和50所示的氨基酸序列；(5)分别具有由SEQ ID NO：90、94和51所示的氨基酸序列；(6)分别具有由SEQ ID NO：91、98和52所示的氨基酸序列；(7)分别具有由SEQ ID NO：91、98和53所示的氨基酸序列；(8)分别具有由SEQ ID NO：92、99和54所示的氨基酸序列；(9)分别具有由SEQ ID NO：93、100和55所示的氨基酸序列；(10)分别具有由SEQ ID NO：129、138和145所示的氨基酸序列；(11)分别具有由SEQ ID NO：130、139和146所示的氨基酸序列；(12)分别具有由SEQ ID NO：131、140和147所示的氨基酸序列；(13)分别具有由SEQ ID NO：132、141和148所示的氨基酸序列；(14)分别具有由SEQ IDNO：133、139和149所示的氨基酸序列；(15)分别具有由SEQ ID NO：134、142和150所示的氨基酸序列；(16)分别具有由SEQ ID NO：135、143和151所示的氨基酸序列；(17)分别具有由SEQ ID NO：136、144和152所示的氨基酸序列；(18)分别具有由SEQ ID NO：137、100和153所示的氨基酸序列；(19)分别具有由SEQ ID NO：86、94和198所示的氨基酸序列；(20)分别具有由SEQ ID NO：86、94和199所示的氨基酸序列；(21)分别具有由SEQ ID NO：86、94和200所示的氨基酸序列；(22)分别具有由SEQ ID NO：86、94和201所示的氨基酸序列；(23)分别具有由SEQ ID NO：86、94和202所示的氨基酸序列；(24)分别具有由SEQ ID NO：86、94和203所示的氨基酸序列；(25)分别具有由SEQ ID NO：86、94和204所示的氨基酸序列；(26)分别具有由SEQ ID NO：86、94和205所示的氨基酸序列；或(27)分别具有由SEQ ID NO：86、94和206所示的氨基酸序列；或其在VL CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体；和/或(b)VH CDR1、CDR2和CDR3(1)分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；(2)分别具有由SEQ ID NO：102、110和120所示的氨基酸序列；(3)分别具有由SEQ IDNO：103、111和121所示的氨基酸序列；(4)分别具有由SEQ ID NO：104、112和122所示的氨基酸序列；(5)分别具有由SEQ ID NO：105、113和123所示的氨基酸序列；(6)分别具有由SEQID NO：106、114和124所示的氨基酸序列；(7)分别具有由SEQ ID NO：106、115和125所示的氨基酸序列；(8)分别具有由SEQ ID NO：107、116和126所示的氨基酸序列；(9)分别具有由SEQ ID NO：108、117和127所示的氨基酸序列；(10)分别具有由SEQ ID NO：106、118和128所示的氨基酸序列；(11)分别具有由SEQ ID NO：106、162和171所示的氨基酸序列；(12)分别具有由SEQ ID NO：154、163和172所示的氨基酸序列；(13)分别具有由SEQ ID NO：155、164和173所示的氨基酸序列；(14)分别具有由SEQ ID NO：156、165和174所示的氨基酸序列；(15)分别具有由SEQ ID NO：157、166和175所示的氨基酸序列；(16)分别具有由SEQ ID NO：158、167和176所示的氨基酸序列；(17)分别具有由SEQ ID NO：159、168和177所示的氨基酸序列；(18)分别具有由SEQ ID NO：160、169和178所示的氨基酸序列；或(19)分别具有由SEQID NO：161、170和179所示的氨基酸序列；或其在VH CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
在本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的一些实施方式中，(1)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和47所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；(2)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：87、95和48所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：102、110和120所示的氨基酸序列；(3)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ IDNO：88、96和49所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：103、111和121所示的氨基酸序列；(4)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：89、97和50所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：104、112和122所示的氨基酸序列；(5)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：90、94和51所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：105、113和123所示的氨基酸序列；(6)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：91、98和52所示的氨基酸序列；和/或VHCDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：106、114和124所示的氨基酸序列；(7)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：91、98和53所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：106、115和125所示的氨基酸序列；(8)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：92、99和54所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：107、116和126所示的氨基酸序列；(9)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ IDNO：93、100和55所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：108、117和127所示的氨基酸序列；(10)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：91、98和52所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：106、118和128所示的氨基酸序列；(11)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：129、138和145所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：106、162和171所示的氨基酸序列；(12)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：130、139和146所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：154、163和172所示的氨基酸序列；(13)VLCDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：131、140和147所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：155、164和173所示的氨基酸序列；(14)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：132、141和148所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：156、165和174所示的氨基酸序列；(15)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：133、139和149所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：157、166和175所示的氨基酸序列；(16)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ IDNO：134、142和150所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：158、167和176所示的氨基酸序列；(17)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：135、143和151所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：159、168和177所示的氨基酸序列；(18)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：136、144和152所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：160、169和178所示的氨基酸序列；(19)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：137、100和153所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：161、170和179所示的氨基酸序列；(20)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和198所示的氨基酸序列；和/或VHCDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；(21)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和199所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；(22)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和200所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；(23)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQID NO：86、94和201所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；(24)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和202所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；(25)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和203所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；(26)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和204所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；(27)VLCDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和205所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；或(28)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和206所示的氨基酸序列；和/或VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VL CDR1、VLCDR2、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VL CDR1、VL CDR2、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94、101、109和119所示的氨基酸序列，和VL CDR3，所述VL CDR3具有选自SEQ ID NO：47和198-206的氨基酸序列；或其在VL CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失且在VH CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。在一些实施方式中，VH CDR1的F残基(SEQ ID NO：101的氨基酸3)、VH CDR2的H和S残基(SEQ IDNO：109的氨基酸4和5)、VH CDR3的Y、R、S和W残基(SEQ ID NO：119的氨基酸2、3、4和6)以及VL CDR2的S残基(SEQ ID NO：94的氨基酸7)未突变。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94、47、101、109和119所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)VL，所述VL与选自SEQ ID NO：1-10和180-188的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性；和/或(b)VH，所述VH与选自SEQ ID NO：11-20和189-197的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VL和VH，其中所述VL和VH分别与：(1)分别由SEQ ID NO：1和11所示的氨基酸序列；(2)分别由SEQ ID NO：2和12所示的氨基酸序列；(3)分别由SEQ ID NO：3和13所示的氨基酸序列；(4)分别由SEQID NO：4和14所示的氨基酸序列；(5)分别由SEQ ID NO：5和15所示的氨基酸序列；(6)分别由SEQ ID NO：6和16所示的氨基酸序列；(7)分别由SEQ ID NO：7和17所示的氨基酸序列；(8)分别由SEQ ID NO：8和18所示的氨基酸序列；(9)分别由SEQ ID NO：9和19所示的氨基酸序列；(10)分别由SEQ ID NO：10和20所示的氨基酸序列；(11)分别由SEQ ID NO：180和189所示的氨基酸序列；(12)分别由SEQ ID NO：181和190所示的氨基酸序列；(13)分别由SEQID NO：182和191所示的氨基酸序列；(14)分别由SEQ ID NO：183和192所示的氨基酸序列；(15)分别由SEQ ID NO：184和193所示的氨基酸序列；(16)分别由SEQ ID NO：185和194所示的氨基酸序列；(17)分别由SEQ ID NO：186和195所示的氨基酸序列；(18)分别由SEQ IDNO：187和196所示的氨基酸序列；或(19)分别由SEQ ID NO：188和197所示的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。在一些实施方式中，所述VL和VH分别与SEQ ID NO：1和11具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)VL，所述VL与SEQ ID NO：21和207-215具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性；和/或(b)VH，所述VH与选自SEQ ID NO：22-29的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包含来自具有选自SEQ ID NO：1-10和180-188的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3；和/或(b)VH，所述VH包含来自具有选自SEQ IDNO：11-20和189-197的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含(1)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(2)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(3)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(4)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的VL的VLCDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(5)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(6)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(7)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(8)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ IDNO：18所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(9)VL，所述VL包含来自具有由SEQID NO：9所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(10)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(11)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：180所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：189所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(12)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：181所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：190所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(13)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：182所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列的VH的VHCDR1、CDR2和CDR3；(14)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：183所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：192所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(15)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：184所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：193所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(16)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ IDNO：194所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(17)VL，所述VL包含来自具有由SEQID NO：186所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；(18)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：187所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：196所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；或(19)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：197所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL和VH，其中VL包含来自具有选自SEQ ID NO：1、21和207-215的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，且VH包含来自具有选自SEQ ID NO：11和22-29的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。
在一些实施方式中，本文提供了与本文所公开的任何抗TIM-3抗体或抗原结合片段竞争对人TIM-3的结合的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段特异性结合至包含人TIM-3的氨基酸71-82中的至少一个的表位。在一些实施方式中，本文所公开的抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的下列氨基酸残基中的至少一个：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。在一些实施方式中，本文所公开的抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的下列残基中的至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个或8个：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。在一些实施方式中，本文所公开的抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的至少D71、N76或Y82。在一些实施方式中，本文所公开的抗体或抗原结合片段不特异性结合至人TIM-3的氨基酸71-82之外的表位。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段以5×10-8M或以下的KD结合人TIM-3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段以范围在10-11M至5×10-9M的KD结合人TIM-3。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段阻断TIM-3和TIM-3配体之间的相互作用。在一些实施方式中，TIM-3配体是磷脂酰丝氨酸、CEACAM1、HMGB1或它们的任意组合。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段(1)抑制TIM-3介导的T细胞抑制，(2)抑制TIM-3介导的骨髓细胞抑制，(3)抑制TIM-3介导的炎性体激活的抑制或它们的任意组合。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段选自IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体和IgG4抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段是IgG1抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、(scFv)2、单域抗体(sdAb)和重链抗体(HCAb)。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段是嵌合抗体或抗原结合片段、人源化抗体或抗原结合片段或者人抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段是人源化抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段是双重特异性抗体或多重特异性抗体。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段是进一步特异性结合PD-1、PD-L1、CEACAM1或CEACAM5的双重特异性抗体。
在一些实施方式中，本文提供了编码本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的多核苷酸。在一些实施方式中，本文提供了包含本文所提供的多核苷酸的载体。在一些实施方式中，本文提供了包含本文所提供的多核苷酸或者本文所提供的载体的宿主细胞。
在一些实施方式中，本文提供了包含治疗有效量的本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段和药物可用的载体的药物组合物。
在一些实施方式中，本文提供了诱导或刺激免疫细胞激活和/或增殖的方法，所述方法包括将免疫细胞与有效量的本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段接触。在一些实施方式中，本文提供了降低TIM-3-介导的免疫细胞抑制的方法，所述方法包括将免疫细胞与有效量的本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段接触。在一些实施方式中，所述免疫细胞是T细胞、NK细胞、NKT细胞或骨髓细胞。在一些实施方式中，所述免疫细胞是T细胞。在一些实施方式中，所述免疫细胞是NK细胞。在一些实施方式中，所述免疫细胞是骨髓细胞，其中所述骨髓细胞是巨噬细胞或树突状细胞。
在一些实施方式中，本文提供了在对其有需要的受试者中刺激抗肿瘤免疫的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者本文所提供的药物组合物。在一些实施方式中，本文提供了在对其有需要的受试者中抑制肿瘤细胞生长的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者本文所提供的药物组合物。
在一些实施方式中，本文提供了治疗对其有需要的受试者中癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者本文所提供的药物组合物。
在一些实施方式中，本文所提供的方法还包括向受试者施用其它疗法。在一些实施方式中，所述其它疗法包含特异性结合PD-L1、PD-1、CEACAM1、CTLA4、CEACAM5、潜在TGF-β、TGF-β受体、CD70、B7H4或B7H3的抗体。在一些实施方式中，所述其它疗法包括放疗或化疗。
在本文所提供的方法的一些实施方式中，所述受试者是人。
在一些实施方式中，本文提供了本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段在癌症治疗中的用途。在一些实施方式中，本文提供了抗TIM-3抗体或抗原结合片段用于制备治疗癌症的药剂的用途。
在一些实施方式中，所述癌症是血液学癌症。在一些实施方式中，所述血液学癌症是急性髓性白血病(AML)或骨髓增生异常综合征(MDS)。在一些实施方式中，所述癌症是实体瘤。在一些实施方式中，所述癌症是黑素瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌/宫颈癌、睾丸癌、甲状腺癌、食道癌、软组织肉瘤、肝癌、胆囊癌、宫颈癌、十二指肠癌、骨癌、神经内分泌系统癌、肠癌、皮肤癌或生殖细胞癌。在一些实施方式中，所述癌症选自肾细胞癌(RCC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、头颈鳞状细胞癌(SCCHN)、三阴性乳腺癌(TNBC)、胃腺癌(gastric/stomach adenocarcinoma，STAD)、胰腺腺癌(PAAD)、结肠腺癌(COAD)或者直肠腺癌(READ)。在一些实施方式中，所述癌症具有高度的微卫星不稳定。在一些实施方式中，所述癌症是转移性癌症、难治性癌症或复发性癌症。
4.附图说明
图1A提供了显示多种抗TIM-3抗体与食蟹猴TIM-3的交叉反应的流式细胞术数据。图1B提供了显示所测试的抗TIM-3抗体无一与小鼠TIM-3交叉反应的流式细胞术数据。
图2提供了显示一些人源化抗TIM-3抗体不与食蟹猴TIM-3交叉反应的流式细胞术数据。
图3提供了显示某些抗TIM-3抗体阻断TIM-3与凋亡细胞上的磷脂酰丝氨酸结合的流式细胞术数据。
图4提供了显示某些抗TIM-3抗体诱导TIM-3内化的流式细胞术数据。
图5A提供了显示抗TIM-3抗体以剂量-依赖性方式提高293T/OS8靶细胞和效应细胞的共培养中的IFN-γ分泌的ELISA数据。图5B提供了对于亲和力成熟的3E6抗体的相同测定的结果。
图6提供了显示某些抗TIM-3抗体以剂量-依赖性方式提高NK细胞中的CD107a表达的流式细胞术数据。
图7A-7B提供了来自测量具有不同同种型(IgG1、IgG1 LALA、IgG2和IgG4)的人源化抗TIM-3抗体3E6与不同Fc受体之间的结合的生物分子相互作用系统Gator(Probe Life)的数据。图7A(人Fc受体)：CD32a H167、CD32a R167、CD32b、Cd16a 176F、Cd16a 176V和FCRN；图7B(小鼠Fc受体)：CD16、CD32B、FCRN或FCGR4.IgG1 LALA：具有L234A和L235A突变的IgG1。
图8提供了BxPC-3/hCD34+人源化小鼠模型结果，其显示具有不同同种型(IgG1LALA、IgG2和IgG4)的人源化抗TIM-3抗体3E6有效抑制肿瘤生长。
图9提供了在BxPC-3/hCD34+人源化小鼠模型中在终点血清样品中所检测到的细胞因子水平(LEGENDplexTM Human Essential Immune Response Panel)，其显示人源化抗TIM-3抗体(h3E6 IgG1 LALA)提高了小鼠模型中一些细胞因子的血清水平。
图10提供了MC38/TIM3-人源化C57BL/6小鼠模型结果，其显示具有不同同种型(IgG1、IgG1 LALA、IgG2和IgG4)的人源化抗TIM-3抗体有效抑制肿瘤生长。
图11A提供了结合至人TIM-3(左图：hTIM-3；右图：人源化3E6 Fab(上：VH；下：VL))的人源化3E6 Fab的晶体结构。图11B显示了TIM-3抗原的特异性残基与VH CDR和VL CDR的那些残基之间的相互作用。
图12A-12B提供了通过同时与人源化3E6 Fab和另一种抗TIM-3抗体结合的人TIM-3所形成的复合物的晶体结构(图12A：6TXZ；图12B：7KQL)。
5.具体实施方式
在进一步描述本发明公开之前，应理解本发明公开不局限于本文所述的具体实施方式，并且还应理解本文所使用的术语出于描述具体实施方式的目的，并且不意欲限制。
本发明公开提供了特异性结合TIM-3(例如，人TIM-3)的新型抗体，包括抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至人TIM-3的新型表位，并且能够通过降低或抑制TIM-3介导的先天性免疫应答和获得性免疫应答两者的抑制来抑制肿瘤生长。本文还公开了包含治疗有效量的这类抗体或抗原结合片段的药物组合物。本文还公开了这些药物组合物用于治疗癌症(例如，表达TIM-3的癌症)的用途和癌症治疗的方法。
T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域-3(TIM-3)，也称为甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2)是免疫检查点蛋白。首先鉴别为在产生IFN-g的CD4+T辅助l(Thl)和CD8+T细胞毒1(Tel)T细胞上选择性表达的分子(Monney等人(2002),Nature,415(6871):536-41)，TIM-3还在多种免疫细胞类型，包括某些T细胞亚型，如FOXP3+CD4+调节性T细胞(Treg)、自然杀伤(NK)细胞、NKT细胞、单核细胞和肿瘤相关树突状细胞(TADC)的表面上表达(Clayton等人(2014)J.Immunol.,192(2):782-791；Anderson等人(2007)Science 318(5853):1141-1143；Baitsch等人(2012)Plos One 7(2):e30852；Ndhlovu等人(2012)Blood 119(16):3734-3743)。
含T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域的蛋白3(TIM-3)，也称为甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2)、TIM-3、TIMD3、TIMD-3、肾损伤分子-3、KIM-3和CD366。TIM-3是起到免疫应答关键调剂因子作用的I型跨膜蛋白。一开始，在激活的产生IFN-γ的T细胞(例如，1型辅助CD4+T细胞和细胞毒CD8+T细胞)上识别TIM-3，并且TIM-3显示在结合至半乳凝素-9后诱导T细胞死亡或耗竭(Monney等人,2002)。最近的研究已表明TIM-3表达在调节多种天然免疫细胞(例如，巨噬细胞、单核细胞、树突状细胞、肥大细胞和自然杀伤细胞)的活性中同样重要(Han等人,2013)。
已报道的TIM-3的配体(TIM-3L)包括磷脂酰丝氨酸(“PtdSer”；Nakayama等人,(2009)Blood 113(16):3821-30)、半乳凝素-9(Gal-9)(Zhu等人(2005)Nat Immunol 6(12):1245-52)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)(Chiba等人(2012)Nat Immunol l3(9):832-42)、癌胚抗原细胞粘附分子1(CEACAM1)(Huang等人(2015)Nature 517(7534):386-90)、导向蛋白-4A和ILT-4。PtdSer是重要的细胞膜组分并且通常定位至细胞膜的内侧小页。但是由于细胞经历细胞凋亡，PtdSer再分布并且暴露于外膜。在多种肿瘤细胞系中也观察到了这种重新分布。TIM-3与PtdSer的结合可以对于吞噬和交叉递呈是重要的(Nakayama 2009，如上)。
TIM-3调节免疫应答的多个方面。TIM-3与其配体半乳凝素-9(Gal-9)的相互作用诱导细胞死亡。在实验模型中，这种相互作用的体内阻断使自体免疫恶化并且消除了耐受性，表明TIM-3/Gal-9相互作用负调控免疫应答(Zhu等人(2005),如上；Kanzaki等人(2012)Endocrinology153(2):612-620)。在体内实验自体免疫脑脊髓炎中，TIM-3抑制还增强病理严重程度(Monney等人(2002)Nature 415:536-541；Das,等人(2017)Immunol Rev 276(l):97-111)。在使用来自患有多发性硬化(Koguchi等人(2006)J Exp Med 203(6):1413-1418)、克罗恩氏病(CD)(Morimoto等人(2011)Scand JGastroenterol 46(6):70l-709)和类风湿性关节炎(RA)(Liu等人(2010)Clin Immunol l37(2):288-295；Li等人(2014)PLoSONE 9(2):e85784)的人患者的材料的研究中，T细胞上TIM-3表达水平与自体免疫疾病发展负相关的观察结果证实了Tim-3对T细胞的免疫抑制作用。
TIM-3被认为是癌症免疫疗法的有希望的候选，这部分是由于它在肿瘤浸润淋巴细胞，包括Foxp3+CD4+Treg和耗竭的CD8+T细胞中上调，这两种细胞是在多种人癌症的肿瘤环境中构成免疫抑制的两种关键免疫细胞群体(McMahan等人(2010)J.Clin.Invest.120(12):4546-4557；Jin等人(2010)Proc Natl Acad Sci USA 107(33):14733-8；Zhou等人(2011)Blood117(17):4501-4510；Yan等人(2013)PLoS ONE 8(3):e58006)。据报道CD8+T细胞上的TIM-3与其在肿瘤细胞上的配体半乳凝素-9的相互作用导致TIM-3胞质尾在酪氨酸256和263处的磷酸化，从而导致HLA-B-相关转录本3(Bat3)和催化活性的淋巴细胞-特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)从TIM-3胞质尾的释放。Bat3和Lck从TIM-3的解离导致非活性磷酸化的Lck的积累，这可以解释所观察到的T细胞功能障碍(Rangachari等人(2012)Nat.Med.18(9):1394-400)。
此外，据报道肿瘤内TIM-3+FoxP3+Treg细胞表达大量Treg效应分子(IL-10、穿孔素和颗粒酶)。据报道TIM-3+Treg在肿瘤环境中促进CD8+肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中功能障碍表型的发展(Sakuishi等人(2013)Oncoimmunology 2(4):e23849)。还据报道TIM-3在骨髓隔室中具有影响。已表明TIM-3的T细胞表达以半乳凝素-9-依赖性方式促进CD1lb+Gr-l+骨髓-来源的抑制性细胞(MDSC)(Dardalhon等人(2010)J Immunol185(3):1383-92)。此外，TIM-3在肿瘤相关树突状细胞(TADC)上特异性上调并且可以干扰对经历坏死性细胞死亡的细胞所释放的DNA的感知。TIM-3结合至高迁移率蛋白组蛋白1(HMGB 1)，借此防止HMGB1结合至将死细胞所释放的DNA并介导经由晚期糖基化终末(RAGE)产物的受体和/或Toll-样受体(TLR)2和4通路向先天性细胞的递送。结合至HMGB 1的TIM-3减弱了肿瘤组织中先天性免疫应答的激活(Chiba等人(2012),如上)。TIM-3还潜在起到炎症守卫作用并且通过调节炎性体激活限制抗肿瘤免疫(Gayden等人,Nature Genetics 50.12(2018):1650-1657；Dixon等人,Nature 595.7865(2021):101-106)。总体上，这些观察结果显示TIM-3可以通过T细胞外源机制，包括骨髓细胞和不同的TIM-3/配体相互作用来进一步抑制抗肿瘤T细胞应答。
像多种抑制性受体(例如，PD-1和CTLA-4)一样，TIM-3表达已与多种慢性疾病类型，包括癌症相关。已在患有晚期黑素瘤、非小细胞肺癌或者滤泡性B细胞非霍奇金氏淋巴瘤的患者中检测到了TIM-3+T细胞。并且，已将TIM-3+调节性T细胞的存在描述为肺癌发展的有效指示物(Anderson(2014),Cancer Immunol.Res.2,393-98)。研究已显示出TIM-3和抑制性受体PD-1之间的密切关系。例如，多种肿瘤-特异性T细胞表达PD-1和TIM-3两者，并且已显示这些T细胞比仅表达PD-1或TIM-3的T细胞更加功能障碍(Fourcade等人,2010,J.Exp.Med.207,2175-2186)。
术语“TIM-3”包括通过细胞天然表达的TIM-3的任何变体或异构体。本文所描述的一些抗体可以与来自除人以外的某些物种的TIM-3(例如，食蟹猴TIM-3)交叉反应，但不能与来自一些其它物种的TIM-3，如小鼠TIM-3交叉反应。本文所描述的一些抗体(例如，人源化3E6)不与来自除人以外的物种的TIM-3交叉反应，包括食蟹猴TIM-3和小鼠TIM-3。TIM-3或其任何变体和异构体可以分离自天然表达它们的细胞或组织或者可以使用本领域中熟知的技术和/或本文所描述的那些技术重组产生。
已鉴别了人TIM-3的两种异构体。异构体1(NCBI参考序列：NP_116171.3；SEQ IDNO：84)由301个氨基酸组成并且表示规范序列。人TIM-3的胞外区包括SEQ ID NO：84的氨基酸残基22-202。人TIM-3的跨膜结构域包括SEQ ID NO：84的氨基酸残基203-223。人TIM-3的胞质结构域包括SEQ ID NO：84的氨基酸残基224-301。
1MFSHLPFDCV LLLLLLLLTR SSEVEYRAEV GQNAYLPCFY TPAAPGNLVP VCWGKGACPV
61 FECGNVVLRT DERDVNYWTS RYWLNGDFRK GDVSLTIENV TLADSGIYCC RIQIPGIMND
121 EKFNLKLVIK PAKVTPAPTR QRDFTAAFPR MLTTRGHGPA ETQTLGSLPD INLTQISTLA
181 NELRDSRLAN DLRDSGATIR IGIYIGAGIC AGLALALIFG ALIFKWYSHS KEKIQNLSLI
241 SLANLPPSGL ANAVAEGIRS EENIYTIEEN VYEVEEPNEY YCYVSSRQQP SQPLGCRFAM
301 P(SEQ ID NO：84)
人TIM-3的异构体2(登录号No.AAH20843；SEQ ID NO：85)由142个氨基酸组成并且是可溶性的。它缺少异构体1的氨基酸残基143-301，这些氨基酸残基编码TIM-3的跨膜结构域、胞质结构域和胞外结构域的一部分。氨基酸残基132-142也不同于以上所描述的规范序列。
1MFSHLPFDCV LLLLLLLLTR SSEVEYRAEV GQNAYLPCFY TPAAPGNLVP VCWGKGACPV
61 FECGNVVLRT DERDVNYWTS RYWLNGDFRK GDVSLTIENV TLADSGIYCC RIQIPGIMND
121 EKFNLKLVIK PGEWTFACHL YE(SEQ ID NO：85)
5.1定义
除非在本文中另外定义，否则在本发明公开中使用的科学和技术术语应具有本领域那些技术人员通常所理解的含义。此外，除非上下文另外要求，否则单数术语应包括复数并且复数术语应包括单数。一般地，结合本文所描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交所使用的术语以及这些领域的技术是本领域中熟知且常用的那些。
术语“一个”实体是指一个或多个该实体；例如，“一个抗体”应被理解为表示一个或多个抗体。
当在本文中使用时，术语“和/或”将被视为对两种所指明的特征或组分中的每一种在具有或不具有另一种的情况下的具体公开。因此，在本文中，如在短语如“A和/或B”中所使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、(单独的)“A”；和(单独的)“B”。同样地，如在短语如“A、B和/或C”中所使用的术语“和/或”旨在涵盖以下方面中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；(单独的)A；(单独的)B；和(单独的)C。
如本文所使用的术语“抗体”及其语法等价形式是指通过至少一个抗原结合位点识别并特异性结合靶标，如蛋白、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质或任何上述的组合的免疫球蛋白分子，其中所述抗原结合位点通常在所述免疫球蛋白分子的可变区内。如本文所使用的，该术语涵盖了完整多克隆抗体、完整单克隆抗体、单域抗体(sdAb；例如，骆驼科动物抗体、羊驼抗体)、单链Fv(scFv)抗体、重链抗体(HCAb)、轻链抗体(LCAb)、多重特异性抗体、双重特异性抗体、单特异性抗体、一价抗体和包含抗原结合位点的任何其它修饰的免疫球蛋白分子(例如，双重可变域免疫球蛋白分子)，只要所述抗体显示出所期望的生物活性。抗体还包括(但不限于)小鼠抗体、骆驼抗体、嵌合抗体、人源化抗体和人抗体。基于它们分别被称为α、δ、ε、γ和μ的重链恒定结构域的特性，抗体可以是5类主要免疫球蛋白中的任一种：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM或其亚类(同种型)(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。除非另外明确表明，否则如本文所使用的术语“抗体”包括完整抗体的“抗原结合片段”。如本文所使用的术语“抗原结合片段”是指作为全抗体的抗原决定可变区的全抗体的部分或片段。抗原结合片段的实例包括(但不限于)Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、线性抗体、单链抗体分子(例如，scFv)、重链抗体(HCAb)、轻链抗体(LCAb)、二硫键-连接的scFv(dsscFv)、双链抗体、三链抗体、四链抗体、微抗体、双重可变域抗体(DVD)、单一可变域抗体(sdAb；例如，骆驼抗体、羊驼抗体)和重链抗体的单一可变域(VHH)以及由抗原片段所形成的双重特异性或多重特异性抗体。“双重特异性”抗体是具有两个不同的抗原结合位点的人工杂交抗体，它识别并特异性结合两个不同的靶标。可以通过多种方法产生双重特异性抗体，其包括杂交瘤融合或者Fab'片段的连接。参见，例如，Songsivilai&Lachmann,Clin.Exp.Immunol.79:315-321(1990)；Kostelny等人,J.Immunol.148,1547-1553(1992)。
如本文所使用的术语“人源化抗体”是指作为含有最少非人序列的特异性免疫球蛋白链、嵌合免疫球蛋白或其片段的非人(例如，鼠科)抗体形式。通常，人源化抗体是人免疫球蛋白。在一些情况下，用来自非人物种的抗体中的相应残基替换人免疫球蛋白的Fv框架区残基。在一些情况下，通过来自具有所期望的特异性、亲和力和/或结合能力的非人物种(例如，小鼠、大鼠、仓鼠、骆驼)的CDR的残基替换CDR的残基。可以通过在Fv框架区中和/或在替换的非人残基内其它残基的替换来进一步修饰人源化抗体以改进和优化抗体特异性、亲和力和/或结合能力。如本文所使用的术语“人抗体”是指通过人产生的抗体或者使用本领域中已知的任何技术制备的具有对应于通过人产生的抗体的氨基酸序列的抗体。
当用于表示抗体时，术语“重链”是指约50-70kDa的多肽链，其中氨基-末端部分包括约120至130个或更多个氨基酸的可变区且羧基-末端部分包括恒定区。基于重链恒定区的氨基酸序列，恒定区可以是5种不同类型之一，其被称为α、δ、ε、γ和μ。不同重链的尺寸不同：α、δ和γ含有约450个氨基酸，而μ和ε含有约550个氨基酸。当与轻链组合时，这些不同类型的重链产生了5种熟知的抗体种类，分别为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其包括4种IgG亚类，即IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。重链可以是人重链。
当用于表示抗体时，术语“轻链”是指约25kDa的多肽链，其中氨基-末端部分包括约100至约110个或更多个氨基酸的可变区并且羧基-末端部分包括恒定区。轻链的大致长度为211至217个氨基酸。基于恒定结构域的氨基酸序列，存在两种不同的类型，其被称为κ或λ。轻链氨基酸序列在本领域中是熟知的。轻链可以是人轻链。
术语“可变结构域”或“可变区”是指通常位于轻链或重链的氨基-末端并且在重链中具有约120至130个氨基酸长度且在轻链中具有约100至110个氨基酸长度，并且在每个特定抗体对于其特定抗原的结合和特异性中使用的抗体的轻链或重链的一部分。不同抗体之间可变域的序列广泛不同。序列的变化集中在CDR，而可变域中不太变化的部分称为框架区(FR)。轻链和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用。本文所使用的氨基酸位置编号是根据EU指数进行的，如Kabat等人(1991)Sequences of proteins of immunologicalinterest(U.S.Department of Health and Human Services,Washington,D.C.)，第5版。可变区可以是人可变区。
CDR是指免疫球蛋白(Ig或抗体)VHβ-折叠框架的非框架区内的三个高变区(H1、H2或H3)之一，或者抗体VLβ-折叠框架的非框架区内的三个高变区(L1、L2或L3)之一。因此，CDR是散布在框架区序列内的可变区序列。CDR区对于本领域技术人员来说是熟知的并且已通过多种方法/系统定义。这些系统和/或定义已开发和改进了数年并且包括Kabat、Chothia、IMGT、AbM和Contact。例如，Kabat定义了抗体可变(V)域内最高变的区域(Kabat等人,J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；Kabat,Adv.Prot.Chem.32:1-75(1978))。Chothia定义基于结构环区的位置，其将CDR区序列定义为不是保守β-折叠框架的一部分并因此能够适应不同构象的那些残基(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。两个术语在本领域中是良好承认的。另外，IMGT系统基于可变区结构内的序列差异度和位置。AbM定义是Kabat和Chothia之间的折中。Contact定义基于可得的抗体晶体结构的分析。软件程序(例如，abYsis)是本领域技术人员用于分析抗体序列和确定CDR可用且已知的。已通过多个结构的比较确定了典型抗体可变域内的CDR的位置(Al-Lazikani等人,J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；Morea等人,Methods 20:267-279(2000))。由于在不同的抗体中高变区内残基数目是不同的，因此通常用紧邻典型可变域编号方案中的残基编号的a、b、c等对相对于典型位置的其它残基编号(Al-Lazikani等人,如上(1997))。这些命名类似地对于本领域技术人员来说是熟知的。
例如，根据Kabat(高变)或Chothia(结构)命名定义的CDR如下表中所示。
Kabat1 Chothia2 环位置
VHCDRl 31-35 26-32 连接B和C链
VHCDR2 50-65 53-55 连接C’和C”链
VHCDR3 95-102 96-101 连接F和G链
VLCDRl 24-34 26-32 连接B和C链
VLCDR2 50-56 50-52 连接C’和C”链
VLCDR3 89-97 91-96 连接F和G链
1残基编号按照Kabat等人，如上的命名法
2残基编号按照Chothia等人，如上的命名法
还可以将一个或多个CDR共价或非共价引入分子以使其成为免疫粘附素。免疫粘附素可以作为较大的多肽链的一部分引入CDR，可以将CDR共价连接至另一多肽链，或者可以非共价引入CDR。CDR使得免疫粘附素能够结合至所关心的特定抗原。可以通过(例如)abysis网址(http://abysis.org/)分析CDR区。
术语“表位”和“抗原决定簇”在本文中是可互换使用的并且表示抗体或抗原结合片段所结合的靶标分子表面上的位点，如抗原表面上的局部区域。所述靶标分子可以包括蛋白质、肽、核酸、碳水化合物或脂质。具有免疫原性活性的表位是在动物中引起免疫应答的靶标分子的一部分。具有抗原性活性的靶标分子的表位是抗体所结合的靶标分子的一部分，如通过本领域中熟知的任何方法，包括(例如)通过免疫测定所确定的。抗原性表位不必需是免疫原性的。表位通常由化学活性表面分子集团(surface groupings ofmolecules)，如氨基酸或糖侧链组成，并且具有特定的立体结构特征以及特定的电荷特征。术语“表位”包括线性表位和构象表位。有助于表位的靶标分子(例如，多肽)区可以是多肽的邻接氨基酸或者表位可以从两个或更多个非邻接靶标分子区聚集而成。表位可以是或可以不是靶标分子的立体表面特征。一旦蛋白质变性，则通常保留由邻接氨基酸所形成的表位(也称为线性表位)，而通常丧失通过三级折叠所形成的表位(也称为构象表位)。表位通常包括处于独特空间构象的至少3个，并且更通常地，至少5、6、7或8-10个氨基酸。
如本文所使用的，术语“特异性结合”表示与替代物质，包括相关和无关蛋白相比，多肽或分子更频繁、更快速、以更长持续时间、以更大亲和力或者以上述的一些组合与表位、蛋白或靶标分子相互作用。例如，可以通过免疫测定、ELISA、生物膜干涉技术(“BLI”)、SPR(例如，Biacore)或本领域技术人员已知的其它技术鉴别特异性结合靶标分子(例如，抗原)的结合部分(例如，抗体)。通常，特异性反应将是背景信号或噪音的至少两倍并且可以是背景的大于10倍。有关抗体特异性的讨论，参见，例如，Paul主编,1989,Fundamental Immunology,第2版,Raven Press,New York,第332-336页。特异性结合靶标分子的结合部分可以以比其对于不同分子的亲和力更高的亲和力结合靶标分子。在一些实施方式中，特异性结合靶标分子的结合部分可以以比其对于不同分子的亲和力大至少20倍、大至少30倍、大至少40倍、大至少50倍、大至少60倍、大至少70倍、大至少80倍、大至少90倍或者大至少100倍的亲和力结合靶标分子。在一些实施方式中，特异性结合特定靶标分子的结合部分以使用本文所描述的或本领域中另外已知的测定不可检测到结合的低亲和力结合不同分子。在一些实施方式中，“特异性结合”表示(例如)结合部分以约0.1mM或以下的KD结合分子靶标。在一些实施方式中，“特异性结合”表示多肽或分子以约10μM或以下或者约1μM或以下的KD结合靶标。在一些实施方式中，“特异性结合”表示多肽或分子以约0.1μM或以下，约0.01μM或以下或者约1nM或以下的KD结合靶标。由于不同物种中同源蛋白之间的序列同一性，特异性结合可以包括识别不止一种物种中的蛋白或靶标的多肽或分子。同样地，由于不同蛋白的多肽序列的某些区域内的同源性，特异性结合可以包括识别不止一种蛋白或靶标的多肽或分子。应理解，在一些实施方式中，特异性结合第一靶标的结合部分(例如，抗体)可以或可以不特异性结合第二靶标。照此，“特异性结合”不必须要求(尽管它可以包括)排他的结合，即结合至单个靶标。因此，在一些实施方式中，结合部分(例如，抗体)可以特异性结合不止一种靶标。例如，在某些情况下，抗体可以包含两个相同的抗原结合位点，它们中的每一个特异性结合两种或更多种蛋白上的相同表位。在某些替代实施方式中，抗体可以是双重特异性的并且包含至少两个具有不同特异性的抗原结合位点。
如本文所使用的术语“结合亲和力”一般地表示结合部分和靶标分子(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和强度。结合部分和靶标分子的结合是可逆过程，并且通常将结合亲和力报告为平衡解离常数(KD)。KD是解离速率(koff或kd)与结合速率(kon或ka)之比。结合对的KD越低，则亲和力越高。测量结合亲和力的多种方法在本领域中是已知的，它们中的任一种可以用于本发明公开的目的。具体的说明性实施方式包括下列。在一些实施方式中，可以通过本领域中已知的测定，例如，通过结合测定测量“KD”或“KD值”。可以在放射性标记的抗原结合测定(RIA)中测量KD(Chen等人,(1999)J.Mol Biol 293:865-881)。还可以通过使用(例如)Gator系统(Probe Life)或者Octet-96系统(Sartorius AG)，使用生物膜干涉测量法(BLI)测量KD或KD值。还可以使用(例如)BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ，通过使用表面等离子共振测定，通过Biacore测量KD或KD值。
如本文所使用的术语“变体”相对于具有特定序列特征的蛋白或多肽(“对照蛋白”或“参考多肽”)表示与对照蛋白或参考多肽相比，具有一个或多个(如(例如)约1至约25、约1至约20、约1至约15、约1至约10或者约1至约5个)氨基酸替换、缺失和/或添加的不同的蛋白或多肽。氨基酸序列的变化可以是氨基酸替换。氨基酸序列的变化可以是保守氨基酸替换。蛋白或多肽的功能性片段或功能性变体维持了对照蛋白或多肽的基本结构和功能性质。
在本文中可互换使用的术语“多肽”、“肽”、“蛋白”以及它们的语法等价形式表示具有任何长度的氨基酸的聚合物，其可以是直链或支链的。它可以包括非天然或修饰的氨基酸或可以被非氨基酸中断。还可以通过(例如)二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或者任何其它操作或修饰来修饰多肽、肽或蛋白。
在本文中可互换使用术语“多核苷酸”、“核酸”和它们的语法等价形式表示具有任何长度的核苷酸的聚合物并且包括DNA和RNA。所述核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基和/或它们的类似物，或者可以通过DNA或RNA聚合酶引入聚合物的任何底物。
如本文在两种或更多种多核苷酸或多肽的背景中所使用的术语“同一的”、“同一性百分比”和它们的语法等价形式表示当出于最大对应性进行比较和比对(如有必要，引入缺口)时且不将任何保守氨基酸替换认为是序列同一性的一部分，相同或者具有指定百分比的相同的核苷酸或氨基酸残基的两条或更多条序列或子序列。可以使用序列比较软件或算法或者通过目视检查测量百分比同一性。可以用于获得氨基酸或核苷酸序列比对的多种算法和软件在本领域中是熟知的。这些包括(但不限于)BLAST、ALIGN、Megalign、BestFit、GCG Wisconsin软件包及其变化形式。在一些实施方式中，本文所提供的两种多核苷酸或多肽是基本相同的，这表示当出于最大对应性进行比较和比对时，如使用序列比较算法或通过目视检查所测量的，它们具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％，并且在一些实施方式中，至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或者至少99％的核苷酸或氨基酸残基同一性。在一些实施方式中，同一性存在于至少约10个残基、至少约20个残基、至少约40-60个残基、至少约60-80个残基长度或者它们之间的任何整数值的长度的氨基酸序列区域内。在一些实施方式中，在大于60-80个残基，如至少约80-100个残基的区域内存在同一性，并且在一些实施方式中，序列在所比较的序列全长(如靶标蛋白或抗体的编码区)上基本相同。在一些实施方式中，在长度至少约10个碱基，至少约20个碱基，至少约40-60个碱基，至少约60-80个碱基或它们之间的任何整数值的核苷酸序列区域内存在同一性。在一些实施方式中，在大于60-80个碱基，如至少约80-100个碱基或更多个碱基的区域内存在同一性，并且在一些实施方式中，序列在所比较的序列全长(如编码所关心的蛋白的核苷酸序列)上基本相同。
如本文所使用的术语“载体”及其语法等价形式表示用于携带基因材料(例如，多核苷酸序列)的媒介物，其可以被引入宿主细胞，在此它可以复制和/或表达。适合使用的载体包括(例如)表达载体、质粒、噬菌体载体、病毒载体、附加体和人造染色体，其可以包括对于向宿主细胞的染色体中稳定整合可操作的选择序列或标志物。另外，所述载体可以包括一个或多个可选择标志物基因和适当的表达控制序列。可以包括的可选择标志物基因(例如)提供了抗生素或毒素抗性、补充营养缺陷或者提供培养基中不存在的关键营养物。表达控制序列可以包括在本领域中熟知的组成型和诱导型启动子、转录增强子、转录终止子等。当共表达两种或更多种多核苷酸时，两种多核苷酸可以插入(例如)到单一表达载体或者不同的表达载体中。对于单一载体表达，所述编码多核苷酸可以操作性地连接至一个公共表达控制序列或者连接至不同的表达控制序列，如一个诱导型启动子和一个组成型启动子。可以使用本领域中熟知的方法确认多核苷酸向宿主细胞的引入。本领域技术人员应理解以足够的量表达所述多核苷酸以产生所期望的产物(例如，如本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段)，并且还应理解可以使用本领域中熟知的方法优化表达水平以获得足够的表达。
如本文所使用的，术语“编码”及其语法等价形式表示多核苷酸或核酸中的特定核苷酸序列，如基因、cDNA或mRNA用作生物过程中用于具有限定的核苷酸序列(即，rRNA、tRNA和mRNA)或者具有从中所获得的限定的氨基酸序列和生物学性质的其它聚合物和大分子的合成的模板的固有性质。因此，如果对应于所述基因的mRNA的转录和翻译产生了蛋白，则所述基因编码所述蛋白。除非另作说明，否则“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括作为彼此的简并形式并且编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。编码蛋白和RNA的核苷酸序列可以包括内含子。
“分离的”多肽、肽、蛋白、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是处于自然界中不存在的形式的多肽、肽、蛋白、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物。分离的多肽、肽、蛋白、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物包括已纯化至它们不再处于它们在自然界中存在的形式的程度的那些。在一些实施方式中，分离的多肽、肽、蛋白、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是基本纯的。
如本文所使用的与疾病或病况或者患有疾病或病况的受试者有关的术语“治疗”及其语法等价形式表示抑制、消除、降低和/或改善与正在治疗的疾病或病症有关的症状、症状的严重程度和/或症状频率的动作。例如，当对于癌症或肿瘤使用时，术语“治疗”及其语法等价形式表示降低癌症或肿瘤的严重程度或者延迟或减缓癌症或肿瘤的发展，包括(a)抑制癌症或肿瘤的生长或终止癌症或肿瘤的发展，(b)导致癌症或肿瘤消退，或者(c)延迟、改善或最大程度减少与癌症或肿瘤的存在有关的一种或多种症状的作用。
如本文所使用的术语“施用”及其语法等价形式是指通过本文所述的或者另外如本领域中已知的方法向受试者身体递送或者导致向受试者身体递送治疗剂或药物组合物的动作。所述治疗剂可以是化合物、多肽、抗体、细胞或细胞群体。施用治疗剂或药物组合物包括开出要向受试者身体递送的治疗剂或药物组合物的处方。示例性的施用形式包括口服剂量形式，如片剂、胶囊、糖浆、混悬剂；可注射剂量形式，如静脉内(IV)、肌内(IM)或腹膜内(IP)可注射剂量形式；透皮剂量形式，包括乳膏剂、胶凝剂、粉剂或贴片；口腔剂量形式；吸入粉剂、喷雾、混悬剂和直肠栓剂。
如本文所使用的术语“有效量”、“治疗有效量”和它们的语法等价形式表示当向所述受试者施用时，单独或作为药物组合物的一部分并且以单一剂量或作为一系列剂量的一部分，以能够对疾病、病症或病况的任何症状、方面或特征具有任何可检测的积极效果的量向受试者施用试剂。可以通过测量相关生理作用确定治疗有效量。基于受试者的年龄、体重和一般条件、要治疗的病况的严重程度以及临床医师的判断等，所需要的确切的量因受试者而异。本领域的技术人员可以使用常规实验确定任何个体病例中的适当的“有效量”。
术语“药物可用的载体”或“药物可用的赋形剂”是指适合于和活性剂一起向个体药物施用，且不会导致不希望的生物学影响或者以有害方式与所述药物组合物的任何其它组分相互作用的材料。
如本文所使用的术语“受试者”是指任何动物(例如，哺乳动物)，包括(但不限于)人、非人灵长类动物、犬、猫、啮齿类等，其将是特定治疗的受体。受试者可以是人。受试者可以具有特定疾病或病况。
范围：在整个发明公开中，本发明的多个方面可以以范围格式存在。应理解以范围格式的描述仅是为了方便和简洁，并且不应将其视为对本发明范围的刻板限制。因此，对范围的描述应认为具有具体公开的所有可能的子范围以及所述范围内的各个数值。例如，对范围，如1至6的描述应认为具有具体公开的子范围，如1至3，1至4，1至5，2至4，2至6，3至6等，以及该范围内的各个数值，例如，1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。这是适用的，而无需考虑范围的宽度。
本文参考GenBank编号、GI号和/或SEQ ID NO描述了示例性基因和多肽。应理解本领域技术人员可以通过参考序列来源，包括(但不限于)GenBank(ncbi.nlm.nih.gov/genbank/)和EMBL(embl.org/)容易地识别同源序列。
5.2抗TIM-3抗体和抗原结合片段
本文提供了特异性结合TIM-3(例如，人TIM-3)的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了抗TIM-3抗体。在一些实施方式中，所述抗体是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗体。在一些实施方式中，所述抗体是IgA抗体。在一些实施方式中，所述抗体是IgD抗体。在一些实施方式中，所述抗体是IgE抗体。在一些实施方式中，所述抗体是IgG抗体。在一些实施方式中，所述抗体是IgM抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗体可以是IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体或IgG4抗体。在一些实施方式中，所述抗体是IgG1抗体。在一些实施方式中，所述抗体是IgG2抗体。在一些实施方式中，所述抗体是IgG3抗体。在一些实施方式中，所述抗体是IgG4抗体。
在一些实施方式中，本文提供了抗TIM-3抗体的抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗原结合片段可以是单域抗体(sdAb)、重链抗体(HCAb)、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、单-链可变片段(scFv)或(scFv)2。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体的抗原结合片段是单域抗体(sdAb)。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体的抗原结合片段是重链抗体(HCAb)。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体的抗原结合片段是Fab。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体的抗原结合片段是Fab’。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体的抗原结合片段是F(ab’)2。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体的抗原结合片段是Fv。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体的抗原结合片段是scFv。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体的抗原结合片段是二硫键-连接的scFv[(scFv)2]。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体的抗原结合片段是双链抗体(dAb)。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含重组抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含单克隆抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含多克隆抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含骆驼科动物(例如，骆驼、单峰驼和美洲驼)抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含嵌合抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含人抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了抗TIM-3人scFv。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段是分离的。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段是基本纯的。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含多重特异性抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含双重特异性抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了双重特异性T细胞衔接体(BiTE)。BiTE是结合至T细胞抗原(例如，CD3)和肿瘤抗原的双重特异性抗体。BiTE已显示诱导靶标肿瘤细胞的直接溶胞并因此为癌症和其它病症提供了大量潜在疗法。在一些实施方式中，本文提供了特异性结合CD3和TIM-3的BiTE。在一些实施方式中，BiTE包含本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，BiTE包含本文所提供的抗TIM-3scFv。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含一价抗原结合位点。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含单特异性结合位点。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含二价结合位点。
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或抗原结合片段。可以通过本领域技术人员已知的任何方法制备单克隆抗体。一种示例性方法是筛选蛋白表达文库，例如，噬菌体或核糖体展示文库。噬菌体展示描述于(例如)Ladner等人,美国专利No.5,223,409；Smith(1985)Science 228:1315-1317；和WO 92/18619。在一些实施方式中，从表达所期望的种的可变区或CDR的噬菌体展示文库分离重组单克隆抗体。可以通过本领域中已知的多种技术实现噬菌体文库筛选。
在一些实施方式中，使用本领域技术人员已知的杂交瘤方法制备单克隆抗体。例如，如以上所描述的，使用杂交瘤方法，使小鼠、大鼠、兔、仓鼠或其它适合的宿主动物免疫。在一些实施方式中，使淋巴细胞体外免疫。在一些实施方式中，所述免疫抗原是人蛋白或其片段。在一些实施方式中，所述免疫抗原是人蛋白或其片段。
在免疫后，分离淋巴细胞并使用(例如)聚乙二醇与适合的骨髓瘤细胞融合，使用如本领域中已知的特化培养基选择杂交瘤细胞，并且未融合的淋巴细胞和骨髓瘤细胞不会在选择过程中存活。可以通过多种方法识别产生抗所选抗原的单克隆抗体的杂交瘤，所述方法包括(但不限于)免疫沉淀、免疫印迹和体外结合测定(例如，流式细胞术、FACS、ELISA、BLI、SPR(例如，Biacore)和放射免疫测定)。一旦鉴别了产生具有所期望的特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞，可以通过有限稀释或其它技术亚克隆所述克隆。可以使用标准方法在体外培养中或者在动物中作为腹水肿瘤体内增殖杂交瘤。可以根据本领域中的标准方法从培养基或腹水流体纯化单克隆抗体，所述标准方法包括(但不限于)亲和色谱、离子交换色谱、凝胶电泳和透析。
在一些实施方式中，使用如本领域技术人员已知的重组DNA技术制备单克隆抗体。例如，从成熟B细胞或杂交瘤细胞分离编码抗体的多核苷酸，如使用特异性扩增编码所述抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸引物通过RT-PCR分离，并使用标准技术确定它们的序列。然后，将编码所述重链和轻链的分离的多核苷酸克隆至适合的表达载体，所述表达载体在转染到宿主细胞，如大肠杆菌(E.coli)、猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或者不另外产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞中时，产生单克隆抗体。
在一些实施方式中，通过使用DNA重组技术修饰单克隆抗体以产生替代抗体。在一些实施方式中，用人抗体的恒定区替代小鼠单克隆抗体的轻链和重链的恒定结构域以产生嵌合抗体。在一些实施方式中，将所述恒定区截短或移除以产生单克隆抗体所期望的抗体片段。在一些实施方式中，将可变区的定点突变或高密度突变用于优化单克隆抗体的特异性和/或亲和力。
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段是人源化抗体或抗原结合片段。用于产生人源化抗体的多种方法在本领域中是已知的。用于通过人源化抗体实现高亲和力结合的方法在本领域中是已知的。这种方法的非限制性实例是可变区的超突变和表达这些高亲和力抗体的细胞的选择(亲和力成熟)。除使用展示文库外，具体的抗原(例如，重组TIM-3或其表位)可以用于免疫非人动物，例如，啮齿类。在某些实施方式中，可以使用本领域中已知和/或本文所公开的方法产生和分离啮齿类抗原结合片段(例如，小鼠抗原结合片段)。在一些实施方式中，可以用抗原(例如，重组TIM-3或其表位)免疫小鼠。
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段是人抗体或抗原结合片段。可以使用本领域中已知的多种技术制备人抗体。在一些实施方式中，从体外免疫的永生人B淋巴细胞产生人抗体。在一些实施方式中，从分离自免疫个体的淋巴细胞产生人抗体。在任何情况下，可以产生和分离产生抗靶标抗原的抗体的细胞。在一些实施方式中，人抗体选自噬菌体文库，其中该噬菌体文库表达人抗体。作为另外一种选择，噬菌体展示技术可以用于从来自未免疫供体的免疫球蛋白可变区基因组库体外产生人抗体和抗体片段。用于产生和使用抗体噬菌体文库的技术在本领域中是熟知的。一旦识别抗体，本领域中已知的亲和力成熟策略，包括(但不限于)链改组和定点突变，可以用于产生更高亲和力的人抗体。在一些实施方式中，在含有人免疫球蛋白基因座的转基因小鼠中产生人抗体。通过免疫，这些小鼠能够在不存在内源免疫球蛋白生产的情况下产生人抗体的全部组库。
本文所定义的具体CDR序列通常基于Kabat和Chothia定义的组合。然而，应理解对特定抗体的一个或多个重链CDR和/或一个或多个轻链CDR的提及涵盖了如本领域技术人员已知的所有CDR定义。
本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包括下列克隆：3E6、4H2、16H1、18C6、19D11、CH 5#、CH 8#、CH 9#、CH 10#、CH 11#、3F2、36A2、36B11、38F8、38A8、40F11、50H9、84G10和39D1。序列特性如下所述。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含本文所描述的抗体中任一个的1、2、3、4、5和/或6个CDR。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含3E6、4H2、16H1、18C6、19D11、CH 5#、CH 8#、CH9#、CH 10#、CH 11#、3F2、36A2、36B11、38F8、38A8、40F11、50H9、84G10或39D1的1、2、3、4、5和/或6个CDR。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VL，所述VL包含来自表1a-1c的1、2和/或3个VL CDR。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VH，所述VH包含来自表2a-2b的1、2和/或3个VH CDR。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含来自表1的1、2和/或3个VL CDR和来自表2a-2b的1、2和/或3个VH CDR。
表1a抗TIM-3Ab的轻链可变区CDR(VL CDR；Kabat命名)的氨基酸序列
表1b抗TIM-3Ab的VL CDR(替代命名)的氨基酸序列
表1c 3E6 VL CDR(亲和力成熟)的氨基酸序列
表2a抗TIM-3Ab的重链可变区CDR(VH CDR；Kabat命名)的氨基酸序列
表2b抗TIM-3Ab的VH CDR(替代命名)的氨基酸序列
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或其抗原结合片段包含人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或其抗原结合片段包含来自本文所描述的抗体或抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或其抗原结合片段包含本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的变体。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段的变体在抗TIM-3抗体或抗原结合片段中包含1至30个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段的变体在抗TIM-3抗体或抗原结合片段中包含1至25个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段的变体在抗TIM-3抗体或抗原结合片段中包含1至20个替换、添加和/或缺失。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段的变体在抗TIM-3抗体或抗原结合片段中包含1至15个替换、添加和/或缺失。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段的变体在抗TIM-3抗体或抗原结合片段中包含1至10个替换、添加和/或缺失。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段的变体在抗TIM-3抗体或抗原结合片段中包含1至5个保守氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段的变体在抗TIM-3抗体或抗原结合片段中包含1至3个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失是保守氨基酸替换。在一些实施方式中，所述保守氨基酸替换处于抗体或抗原结合片段的CDR中。在一些实施方式中，所述保守氨基酸替换不在抗体或抗原结合片段的CDR中。在一些实施方式中，所述保守氨基酸替换在抗体或抗原结合片段的框架区中。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含(1)具有选自SEQ IDNO：86-93的氨基酸序列的轻链CDR1(VL CDR1)；(2)具有选自SEQ ID NO：94-100的氨基酸序列的轻链CDR2(VL CDR2)；或(3)具有选自SEQ ID NO：47-55和198-206的氨基酸序列的轻链CDR3(VL CDR3)；或其在VL CDR中具有至多约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。在一些实施方式中，所述变体在VL CDR中具有约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含全部三种VL CDR。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含(1)具有选自SEQ IDNO：101-108的氨基酸序列的重链CDR1(VH CDR1)；(2)具有选自SEQ ID NO：109-118的氨基酸序列的重链CDR2(VH CDR2)；或(3)具有选自SEQ ID NO：119-128的氨基酸序列的重链CDR3(VH CDR3)；或其在VH CDR中具有至多约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。在一些实施方式中，所述变体在VH CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含全部三种VH CDR。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包含(1)具有选自SEQ ID NO：86-93的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有选自SEQ ID NO：94-100的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有选自SEQID NO：47-55和198-206的氨基酸序列的VL CDR3；或其在VL CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体；和(b)VH，所述VH包含(1)具有选自SEQ ID NO：101-108的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自SEQ ID NO：109-118的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有选自SEQ ID NO：119-128的氨基酸序列的VH CDR3；或其在VH CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
在一些实施方式中，本文提供了具有VL的特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL包含具有特定序列的VL CDR1、CDR2和CDR3。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(1)由SEQ ID NO：86、94和47所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(2)由SEQ ID NO：87、95和48所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(3)由SEQ ID NO：88、96和49所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(4)由SEQ IDNO：89、97和50所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(5)由SEQ ID NO：90、94和51所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(6)由SEQ ID NO：91、98和52所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(7)由SEQ ID NO：91、98和53所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(8)由SEQ ID NO：92、99和54所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(9)由SEQ ID NO：93、100和55所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(10)由SEQ ID NO：129、138和145所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(11)由SEQ ID NO：130、139和146所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(12)由SEQ ID NO：131、140和147所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(13)由SEQ ID NO：132、141和148所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(14)由SEQ ID NO：133、139和149所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(15)由SEQ ID NO：134、142和150所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(16)由SEQ ID NO：135、143和151所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(17)由SEQ ID NO：136、144和152所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(18)由SEQ ID NO：137、100和153所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(19)由SEQ ID NO：86、94和198所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(20)由SEQ ID NO：86、94和199所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(21)由SEQ ID NO：86、94和200所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(22)由SEQ ID NO：86、94和201所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(23)由SEQ ID NO：86、94和202所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(24)由SEQ ID NO：86、94和203所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(25)由SEQ ID NO：86、94和204所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(26)由SEQ ID NO：86、94和205所示的氨基酸序列。VLCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(27)由SEQ ID NO：86、94和206所示的氨基酸序列。所述VL可以是在VL CDR中具有至多约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸替换、添加和/或缺失的以上所描述的VL的变体。在一些实施方式中，所述变体在VL CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。
在一些实施方式中，本文提供了具有VH的特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH包含具有特定序列的VH CDR1、CDR2和CDR3。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(1)分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(2)分别具有由SEQ ID NO：102、110和120所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(3)分别具有由SEQ ID NO：103、111和121所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(4)分别具有由SEQ ID NO：104、112和122所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(5)分别具有由SEQ ID NO：105、113和123所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(6)分别具有由SEQ ID NO：106、114和124所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(7)分别具有由SEQID NO：106、115和125所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(8)分别具有由SEQ IDNO：107、116和126所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(9)分别具有由SEQ ID NO：108、117和127所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(10)分别具有由SEQ ID NO：106、118和128所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(11)分别具有由SEQ ID NO：106、162和171所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(12)分别具有由SEQ ID NO：154、163和172所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(13)分别具有由SEQ ID NO：155、164和173所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(14)分别具有由SEQ ID NO：156、165和174所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(15)分别具有由SEQ ID NO：157、166和175所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(16)分别具有由SEQ ID NO：158、167和176所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(17)分别具有由SEQ ID NO：159、168和177所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(18)分别具有由SEQ ID NO：160、169和178所示的氨基酸序列。VH CDR1、CDR2和CDR3可以(19)分别具有由SEQ ID NO：161、170和179所示的氨基酸序列。所述VH可以是在VH CDR中具有至多约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸替换、添加和/或缺失的以上所描述的VH的变体。在一些实施方式中，所述变体在VH CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有VL和VH。在一些实施方式中，通过连接子连接所述VL和VH。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列(GGGGS)n，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO：216)。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列(EAAAK)n，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO：217)。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有VL和VH，其中(a)VL包含具有(1)分别由SEQ ID NO：86、94和47；(2)分别由SEQ ID NO：87、95和48；(3)分别由SEQ ID NO：88、96和49；(4)分别由SEQ ID NO：89、97和50；(5)分别由SEQ ID NO：90、94和51；(6)分别由SEQ ID NO：91、98和52；(7)分别由SEQ ID NO：91、98和53；(8)分别由SEQ ID NO：92、99和54；(9)分别由SEQ ID NO：93、100和55；(10)分别由SEQ ID NO：129、138和145；(11)分别由SEQ ID NO：130、139和146；(12)分别由SEQ ID NO：131、140和147；(13)分别由SEQ ID NO：132、141和148；(14)分别由SEQ IDNO：133、139和149；(15)分别由SEQ ID NO：134、142和150；(16)分别由SEQ ID NO：135、143和151；(17)分别由SEQ ID NO：136、144和152；(18)分别由SEQ ID NO：137、100和153；(19)分别由SEQ ID NO：86、94和198；(20)分别由SEQ ID NO：86、94和199；(21)分别由SEQ IDNO：86、94和200；(22)分别由SEQ ID NO：86、94和201；(23)分别由SEQ ID NO：86、94和202；(24)分别由SEQ ID NO：86、94和203；(25)分别由SEQ ID NO：86、94和204；(26)分别由SEQID NO：86、94和205；或(27)分别由SEQ ID NO：86、94和206所示的氨基酸序列的VL CDR1、CDR2和CDR3；或其在VL CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体；和/或(b)VH CDR1、CDR2和CDR3具有(1)分别由SEQ ID NO：101、109和119；(2)分别由SEQ ID NO：102、110和120；(3)分别由SEQ ID NO：103、111和121；(4)分别由SEQ ID NO：104、112和122；(5)分别由SEQ ID NO：105、113和123；(6)分别由SEQ ID NO：106、114和124；(7)分别由SEQ IDNO：106、115和125；(8)分别由SEQ ID NO：107、116和126；(9)分别由SEQ ID NO：108、117和127；(10)分别由SEQ ID NO：106、118和128；(11)分别由SEQ ID NO：106、162和171；(12)分别由SEQ ID NO：154、163和172；(13)分别由SEQ ID NO：155、164和173；(14)分别由SEQ IDNO：156、165和174；(15)分别由SEQ ID NO：157、166和175；(16)分别由SEQ ID NO：158、167和176；(17)分别由SEQ ID NO：159、168和177；(18)分别由SEQ ID NO：160、169和178；或(19)分别由SEQ ID NO：161、170和179所示的氨基酸序列；或其在VH CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有VL和VH，其中VL包含VL CDR1、CDR2和CDR3，并且VH包含VHCDR1、CDR2和CDR3，并且其中所述VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3具有特定序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(1)由SEQ ID NO：86、94、47、101、109和119所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(2)由SEQ ID NO：87、95、48、102、110和120所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(3)由SEQID NO：88、96、49、103、111和121所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(4)由SEQ ID NO：89、97、50、104、112和122所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(5)由SEQ IDNO：90、94、51、105、113和123所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3可以分别具有(6)由SEQ ID NO：91、98、52、106、114和124所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(7)由SEQ IDNO：91、98、53、106、115和125所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3可以分别具有(8)由SEQ ID NO：92、99、54、107、116和126所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(9)由SEQ IDNO：93、100、55、108、117和127所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3可以分别具有(10)由SEQ ID NO：91、98、52、106、118和128所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(11)由SEQ IDNO：129、138、145、106、162和171所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(12)由SEQ ID NO：130、139、146、154、163和172所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(13)由SEQ ID NO：131、140、147、155、164和173所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(14)由SEQ ID NO：132、141、148、156、165和174所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(15)由SEQ ID NO：133、139、149、157、166和175所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(16)由SEQ ID NO：134、142、150、158、167和176所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(17)由SEQ ID NO：135、143、151、159、168和177所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VLCDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(18)由SEQ ID NO：136、144、152、160、169和178所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(19)由SEQ ID NO：137、100、153、161、170和179所示的氨基酸序列。VL CDR1、VLCDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(20)由SEQ ID NO：86、94、198、101、109和119所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(21)由SEQ ID NO：86、94、199、101、109和119所示的氨基酸序列。VL CDR1、VLCDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(22)由SEQ ID NO：86、94、200、101、109和119所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(23)由SEQ ID NO：86、94、201、101、109和119所示的氨基酸序列。VL CDR1、VLCDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(24)由SEQ ID NO：86、94、202、101、109和119所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(25)由SEQ ID NO：86、94、203、101、109和119所示的氨基酸序列。VL CDR1、VLCDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(26)由SEQ ID NO：86、94、204、101、109和119所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(27)由SEQ ID NO：86、94、205、101、109和119所示的氨基酸序列。VL CDR1、VLCDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分别具有(28)由SEQ ID NO：86、94、206、101、109和119所示的氨基酸序列。所述抗体或抗原结合片段可以是在CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的以上所描述的抗体或抗原结合片段的变体。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含(1)具有选自SEQ ID NO：31-38的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有选自SEQ ID NO：39-46的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有选自SEQ IDNO：47-55的氨基酸序列的VL CDR3；或其在VL CDR中具有至多约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。在一些实施方式中，所述变体在VL CDR中具有约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含全部三种VL CDR。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含(1)具有选自SEQ ID NO：56-63的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自SEQ ID NO：64-73的氨基酸序列的VH CDR2；或者(3)具有选自SEQ IDNO：74-83的氨基酸序列的VH CDR3；或其在VH CDR中具有至多约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。在一些实施方式中，所述变体在VH CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含全部三种VH CDR。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包含(1)具有选自SEQ ID NO：31-38的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有选自SEQ ID NO：39-46的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有选自SEQID NO：47-55的氨基酸序列的VL CDR3；或其在VL CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体；和(b)VH，所述VH包含(1)具有选自SEQ ID NO：56-63的氨基酸序列的VHCDR1；(2)具有选自SEQ ID NO：64-73的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有选自SEQ ID NO：74-83的氨基酸序列的VH CDR3；或其在VH CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
在一些实施方式中，本文提供了具有VL的特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL包含具有特定序列的VL CDR1、CDR2和CDR3。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(1)由SEQ ID NO：31、39和47所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(2)由SEQ ID NO：32、40和48所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(3)由SEQ ID NO：33、41和49所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(4)由SEQ IDNO：34、42和50所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(5)由SEQ ID NO：35、43和51所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(6)由SEQ ID NO：36、44和52所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(7)由SEQ ID NO：36、44和53所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(8)由SEQ ID NO：37、45和54所示的氨基酸序列。VL CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(9)由SEQ ID NO：38、46和55所示的氨基酸序列。所述VL可以是在VL CDR中具有至多约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸替换、添加和/或缺失的以上所描述的VL的变体。在一些实施方式中，所述变体在VL CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。
在一些实施方式中，本文提供了具有VH的特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，其中VH包含分别具有(1)由SEQ ID NO：56、64和74所示的氨基酸序列的VH CDR1、CDR2和CDR3。VH CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(2)由SEQ ID NO：57、65和75。VH CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(3)由SEQ ID NO：58、66和76。VH CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(4)由SEQ ID NO：59、67和77。VH CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(5)由SEQ ID NO：60、68和78。VHCDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(6)由SEQ ID NO：61、69和79。VH CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(7)由SEQ ID NO：61、70和80。VH CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(8)由SEQ ID NO：62、71和81。VH CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(9)由SEQ ID NO：63、72和82。VH CDR1、CDR2和CDR3可以分别具有(10)由SEQ ID NO：61、73和83。在一些实施方式中，所述VH可以是在VHCDR中具有至多约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸替换、添加和/或缺失的以上所描述的VH的变体。在一些实施方式中，所述变体在VH CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有VL和VH。在一些实施方式中，通过连接子连接所述VL和VH。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列(GGGGS)n，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO：216)。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列(EAAAK)n，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO：217)。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有VL和VH，其中(a)VL包含分别具有(1)由SEQ ID NO：31、39和47；(2)由SEQ ID NO：32、40和48；(3)由SEQ ID NO：33、41和49；(4)由SEQ ID NO：34、42和50；(5)由SEQ ID NO：35、43和51；(6)由SEQ ID NO：36、44和52；(7)由SEQ ID NO：36、44和53；(8)由SEQ ID NO：37、45和54；或(9)由SEQ ID NO：38、46和55所示的氨基酸序列的VL CDR1、CDR2和CDR3；或其在VL CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体；且(b)VH包含分别具有(1)由SEQ ID NO：56、64和74；(2)由SEQ ID NO：57、65和75；(3)由SEQ ID NO：58、66和76；(4)由SEQ ID NO：59、67和77；或(5)由SEQ ID NO：60、68和78；(6)由SEQ ID NO：61、69和79；(7)由SEQ ID NO：61、70和80；(8)由SEQ ID NO：62、71和81；(9)由SEQ ID NO：63、72和82；或(10)由SEQ ID NO：61、73和83所示的氨基酸序列的VH CDR1、CDR2和CDR3；或其在VH CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有VL和VH，其中VL包含VL CDR1、CDR2和CDR3并且VH包含VH CDR1、CDR2和CDR3，并且其中VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有(1)由SEQ ID NO：31、39、47、56、64和74所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有(2)由SEQ ID NO：32、40、48、57、65和75所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有(3)由SEQ ID NO：33、41、49、58、66和76所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3分别具有(4)由SEQ ID NO：34、42、50、59、67和77所示的氨基酸序列。VL CDR1、VLCDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有(5)由SEQ ID NO：35、43、51、60、68和78所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有(6)由SEQ ID NO：36、44、52、61、69和79所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有(7)由SEQ ID NO：36、44、53、61、70和80所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有(8)由SEQ ID NO：37、45、54、62、71和81所示的氨基酸序列。VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3分别具有(9)由SEQ ID NO：38、46、55、63、72和82所示的氨基酸序列。VL CDR1、VLCDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有(10)由SEQ ID NO：36、44、52、61、73和83所示的氨基酸序列。所述抗体或抗原结合片段可以是在CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的以上所描述的抗体或抗原结合片段的变体。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含本文所述的抗体中的任一个的VL和/或VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含3E6、4H2、16H1、18C6、19D11、CH 5#、CH 8#、CH 9#、CH 10#、CH 11#、3F2、36A2、36B11、38F8、38A8、40F11、50H9、84G10或39D1的VL和/或VH。
表3抗TIM-3抗体的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)的氨基酸序列
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是本文所描述的抗体中任一个的人源化形式。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是3E6、4H2、16H1、18C6、19D11、CH 5#、CH 8#、CH 9#、CH 10#、CH 11#、3F2、36A2、36B11、38F8、38A8、40F11、50H9、84G10或39D1的人源化形式。以下提供了示例性序列。
表4a人源化抗TIM-3抗体的VL和VH的氨基酸序列
表4b亲和力成熟的3E6 VL0的氨基酸序列
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含与选自SEQ ID NO：1-10和180-188的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的VL。在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含与选自SEQ ID NO：11-20和189-197的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的VH。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含VL和VH两者。
抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以包含本文所公开的任何VL和本文所公开的任何VH的组合。在一些实施方式中，通过连接子连接所述VL和VH。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列(GGGGS)n，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO：216)。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列(EAAAK)n，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO：217)。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL和VH，其中VH具有选自SEQ ID NO：11-20和189-197的氨基酸序列，并且VL具有选自SEQ ID NO：1-10和180-188的特定序列。VL可以具有由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ IDNO：3所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQID NO：5所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：180所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：181所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：182所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：183所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：184所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQID NO：187所示的氨基酸序列。VL可以具有由SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL和VH，其中VL具有选自SEQ ID NO：1-10和180-188的氨基酸序列，并且VH具有选自SEQ ID NO：11-20和189-197的具体序列。VH可以具有由SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQID NO：13所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：189所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：190所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ IDNO：192所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：193所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：194所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：196所示的氨基酸序列。VH可以具有由SEQ ID NO：197所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL，其中VL与SEQ ID NO：1具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ IDNO：2具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：3具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：4具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：5具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：6具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：7具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：8具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：9具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：10具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQID NO：180具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：181具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ IDNO：182具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：183具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：184具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：185具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：186具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：187具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：188具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VH，其中VH与SEQ ID NO：11具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQID NO：12具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：13具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ IDNO：14具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：15具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：16具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：17具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：18具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：19具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：20具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：189具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：190具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：191具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：192具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：193具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：194具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQID NO：195具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：196具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ IDNO：197具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL和VH，其中VL和VH分别具有由SEQ ID NO：1和11所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：2和12所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：3和13所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：4和14所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：5和15所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQID NO：6和16所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：7和17所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：8和18所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：9和19所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：10和20所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：180和189所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：181和190所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：182和191所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ IDNO：183和192所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：184和193所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：185和194所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：186和195所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：187和196所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有由SEQ ID NO：188和197所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的人源化抗体或其抗原结合片段，所述人源化抗体或其抗原结合片段包含与选自SEQ ID NO：21和207-215的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的VL。在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含与选自SEQ ID NO：22-29的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的VH。在一些实施方式中，人源化抗体或抗原结合片段包含VL和VH两者。
抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以包含本文所公开的任何VL和本文所公开的任何VH的组合。在一些实施方式中，通过连接子连接所述VL和VH。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列(GGGGS)n，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO：216)。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列(EAAAK)n，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO：217)。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL，其中VL与SEQ ID NO：21具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQID NO：207具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：208具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ IDNO：209具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：210具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：211具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：212具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：213具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：214具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VL可以与SEQ ID NO：215具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VH，其中VH与SEQ ID NO：22具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQID NO：23具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：24具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ IDNO：25具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：26具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：27具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：28具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。VH可以与SEQ ID NO：29具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL和VH，其中VL和VH分别具有由SEQ ID NO：21和22所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：21和23所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：21和24所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：21和25所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：21和26所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：21和27所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：21和28所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：21和29所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：207和22所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ IDNO：207和23所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：207和24所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：207和25所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：207和26所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：207和27所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：207和28.所示的氨基酸序列，VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：207和29所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：208和22所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：208和23所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：208和24所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：208和25所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：208和26所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：208和27所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：208和28所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：208和29所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：209和22所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：209和23所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ IDNO：209和24所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：209和25所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：209和26所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：209和27所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：209和28所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：209和29所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：210和22所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：210和23所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：210和24所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：210和25所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQID NO：210和26所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：210和27所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：210和28所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：210和29所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：211和22所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：211和23所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：211和24所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：211和25所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：211和26所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：211和27所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：211和28所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：211和29所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：212和22所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：212和23所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：212和24所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：212和25所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：212和26所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ IDNO：212和27所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：212和28所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：212和29所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：213和22所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：213和23所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：213和24所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：213和25所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：213和26所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：213和27所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：213和28所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQID NO：213和29所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：214和22所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：214和23所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：214和24所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：214和25所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：214和26所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：214和27所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：214和28所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：214和29所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：215和22所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：215和23所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：215和24所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：215和25所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：215和26所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：215和27所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：215和28所示的氨基酸序列。VL和VH可以分别具有由SEQ ID NO：215和29所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包含来自具有选自SEQ ID NO：1-10和180-188的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3；和/或(b)VH，所述VH包含来自具有选自SEQ ID NO：11-20和189-197的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包含来自具有选自SEQ ID NO：21和207-215的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3；和/或(b)VH，所述VH包含来自具有选自SEQ ID NO：22-29的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL，其中VL包含来自具有由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列的VL的VLCDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：180所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：181所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：182所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：183所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：184所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ IDNO：185所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：187所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列的VL的VLCDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：207所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：208所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：209所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：210所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：211所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ IDNO：212所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：213所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：214所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。VL可以包含来自具有由SEQ ID NO：215所示的氨基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VH，其中VH包含来自具有由SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列的VH的VHCDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQID NO：17所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：189所示的氨基酸序列的VH的VHCDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：190所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：192所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：193所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：194所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ IDNO：195所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：196所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：197所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列的VH的VHCDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQID NO：28所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。VH可以包含来自具有由SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL和VH，其中VL包含来自具有特定序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，并且VH包含来自具有特定序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方式中，VLCDR和VH CDR分别来源于具有由SEQ ID NO：1和11所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VHCDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：2和12所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：3和13所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：4和14所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：5和15所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：6和16所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：7和17所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：8和18所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：9和19所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：10和20所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：180和189所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：181和190所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：182和191所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：183和192所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：184和193所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：185和194所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：186和195所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：187和196所示的氨基酸序列的VL和VH。VL CDR和VH CDR可以分别来源于具有由SEQ ID NO：188和197所示的氨基酸序列的VL和VH。
在一些实施方式中，本文提供了特异性结合TIM-3的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL和VH，其中VL包含来自具有选自SEQ ID NO：21和207-215的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，并且VH包含来自具有选自SEQ ID NO：22-29的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。分别地，VL CDR可以来源于具有由SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列的VL，并且VH CDR可以来源于具有选自SEQ ID NO：22-29(例如，SEQ IDNO：22)的氨基酸序列的VH。分别地，VL CDR可以来源于具有由SEQ ID NO：207所示的氨基酸序列的VL，并且VH CDR可以来源于具有选自SEQ ID NO：22-29(例如，SEQ ID NO：22)的氨基酸序列的VH。分别地，VL CDR可以来源于具有由SEQ ID NO：208所示的氨基酸序列的VL，并且VH CDR可以来源于具有选自SEQ ID NO：22-29(例如，SEQ ID NO：22)的氨基酸序列的VH。分别地，VL CDR可以来源于具有由SEQ ID NO：209所示的氨基酸序列的VL，并且VH CDR可以来源于具有选自SEQ ID NO：22-29(例如，SEQ ID NO：22)的氨基酸序列的VH。分别地，VLCDR可以来源于具有由SEQ ID NO：210所示的氨基酸序列的VL，并且VH CDR可以来源于具有选自SEQ ID NO：22-29(例如，SEQ ID NO：22)的氨基酸序列的VH。分别地，VL CDR可以来源于具有由SEQ ID NO：211所示的氨基酸序列的VL，并且VH CDR可以来源于具有选自SEQ IDNO：22-29(例如，SEQ ID NO：22)的氨基酸序列的VH。分别地，VL CDR可以来源于具有由SEQID NO：212所示的氨基酸序列的VL，并且VH CDR可以来源于具有选自SEQ ID NO：22-29(例如，SEQ ID NO：22)的氨基酸序列的VH。分别地，VL CDR可以来源于具有由SEQ ID NO：213所示的氨基酸序列的VL，并且VH CDR可以来源于具有选自SEQ ID NO：22-29(例如，SEQ IDNO：22)的氨基酸序列的VH。分别地，VL CDR可以来源于具有由SEQ ID NO：214所示的氨基酸序列的VL，并且VH CDR可以来源于具有选自SEQ ID NO：22-29(例如，SEQ ID NO：22)的氨基酸序列的VH。分别地，VL CDR可以来源于具有由SEQ ID NO：215所示的氨基酸序列的VL，并且VH CDR可以来源于具有选自SEQ ID NO：22-29(例如，SEQ ID NO：22)的氨基酸序列的VH。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为3E6的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自3E6(SEQID NO：1)的VL。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自3E6(SEQ ID NO：11)的VH。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自3E6的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于3E6(SEQ ID NO：1)的VL的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于3E6(SEQ ID NO：11)的VH的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于3E6的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是3E6的变体。3E6变体可以具有作为在SEQ ID NO：1中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的3E6的VL的变体的VL。3E6变体可以具有作为在SEQ ID NO：11中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的3E6的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，3E6的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，3E6的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于3E6的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于3E6的人抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了具有如表1c中所示的VLCDR3区中的1个、2个或3个突变的亲和力成熟的3E6变体。
如以下所提供的，表位定位显示3E6结合至人TIM-3的氨基酸71-82，它是人TIM-3的胞外结构域内的片段。人TIM-3的异构体1(SEQ ID NO：84)和异构体2(SEQ ID NO：85)共有相同的氨基酸1-131。照此，3E6结合至两种异构体上相同的表位。如本文所使用的，通过人TIM-3的氨基酸1-131或氨基酸71-82特异性结合至一个或多个氨基酸残基的抗体或抗原结合片段表示所述抗体或抗原结合片段结合至人TIM-3的异构体1和异构体2两者上的所列举的氨基酸残基。
具体地，3E6经由VH的CDR1-3和VL的CDR2结合人TIM-3。如下图11B和表9所示：VHCDR1的F残基(SEQ ID NO：101的氨基酸3)结合至人TIM-3的N76；VH CDR2的H残基(SEQ IDNO：109的氨基酸4)结合至人TIM-3的W78；VH CDR2的S残基(SEQ ID NO：109的氨基酸5)结合至人TIM-3的W78；VH CDR3的Y残基(SEQ ID NO：119的氨基酸2)结合至人TIM-3的D71；VHCDR3的R残基(SEQ ID NO：119的氨基酸3)结合至人TIM-3的V75、T79和Y82；VH CDR3的S残基(SEQ ID NO：119的氨基酸4)结合至人TIM-3的D74；VH CDR3的W残基(SEQ ID NO：119的氨基酸6)结合至人TIM-3的D74；VL CDR2的S残基(SEQ ID NO：94的氨基酸7)结合至人TIM-3的R73。
照此，在一些实施方式中，本文提供了在VL CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失且在VH CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的3E6的变体。在一些实施方式中，本文提供了在VL CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失且在VHCDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的亲和力成熟的3E6的变体。在一些实施方式中，本文提供了包含分别具有由SEQ ID NO：86、94、101、109和119所示的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，和具有选自SEQ ID NO：47和198-206的氨基酸序列的VL CDR3；或其在VL CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失且在VHCDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
在本文所提供的抗体或抗原结合片段的一些实施方式中，VH CDR1的F残基(SEQID NO：101的氨基酸3)、VH CDR2的H和S残基(SEQ ID NO：109的氨基酸4和5)、VH CDR3的Y、R、S和W残基(SEQ ID NO：119的氨基酸2、3、4和6)和VL CDR2的S残基(SEQ ID NO：94的氨基酸7)未突变。在一些实施方式中，3E6变体在下列位点中的至少一种中不具有突变：VH CDR1的F残基(SEQ ID NO：101的氨基酸3)、VH CDR2的H和S残基(SEQ ID NO：109的氨基酸4和5)、VH CDR3的Y、R、S和W残基(SEQ ID NO：119的氨基酸2、3、4和6)和VL CDR2的S残基(SEQ IDNO：94的氨基酸7)。在一些实施方式中，3E6变体在下列位点中的至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个或全部8个中不具有突变：VH CDR1的F残基(SEQ ID NO：101的氨基酸3)、VH CDR2的H和S残基(SEQ ID NO：109的氨基酸4和5)、VH CDR3的Y、R、S和W残基(SEQ ID NO：119的氨基酸2、3、4和6)和VL CDR2的S残基(SEQ ID NO：94的氨基酸7)。在一些实施方式中，3E6变体在VH CDR3的R残基(SEQ ID NO：119的氨基酸3)中不具有突变。
在一些实施方式中，本文提供了人源化3E6和亲和力成熟的人源化3E6。在一些实施方式中，本文所提供的人源化抗TIM-3抗体或其抗原结合片段包含具有选自SEQ ID NO：21和207-215的氨基酸序列的VL。在一些实施方式中，本文所提供的人源化抗TIM-3抗体或其抗原结合片段包含具有选自SEQ ID NO：22-29的氨基酸序列的VH。在一些实施方式中，本文所提供的人源化抗TIM-3抗体或其抗原结合片段包含具有选自SEQ ID NO：21和207-215的氨基酸序列的VL和选自SEQ ID NO：22-29的氨基酸序列的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是本文所提供的人源化3E6的变体。所述变体可以具有作为人源化3E6的VL的变体的VL，所述变体在选自SEQ ID NO：21和207-215的氨基酸序列中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。所述变体可以具有作为人源化3E6的VH的变体的VH，所述变体在选自SEQ ID NO：22-29的氨基酸序列中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方式中，人源化3E6的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。
在一些实施方式中，人源化3E6的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文提供了具有来源于3E6或3E6变体的VH和VL的IgG1抗体。在一些实施方式中，IgG1重链恒定区按照EU编号包含氨基酸替换L234A和L235A。在一些实施方式中，本文提供了具有来源于3E6或3E6变体的VH和VL的IgG2抗体。在一些实施方式中，本文提供了具有来源于3E6或3E6变体的VH和VL的IgG4抗体。出于说明性的目的，在一些实施方式中，本文提供了包含本文所描述的VL0(SEQ ID NO：21)和VH6(SEQ ID NO：28)的3E6变体。在一些实施方式中，本文提供了包含本文所描述的VL0-v5(SEQ ID NO：211)和VH6(SEQ ID NO：28)的3E6变体。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为4H2的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自4H2的VL(SEQ ID NO：2)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自4H2的VH(SEQ ID NO：12)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自4H2的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于4H2的VL(SEQ ID NO：2)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于4H2的VH(SEQID NO：12)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于4H2的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是4H2的变体。4H2变体可以具有作为在SEQ ID NO：2中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的4H2的VL的变体的VL。4H2变体可以具有作为在SEQ ID NO：12中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的4H2的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，4H2的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，4H2的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于4H2的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于4H2的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为16H1的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自16H1的VL(SEQ ID NO：3)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自16H1的VH(SEQ ID NO：13)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自16H1的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于16H1的VL(SEQ ID NO：3)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于16H1的VH(SEQ ID NO：13)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于16H1的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是16H1的变体。16H1变体可以具有作为在SEQ ID NO：3中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的16H1的VL的变体的VL。16H1变体可以具有作为在SEQ ID NO：13中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的16H1的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，16H1的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，16H1的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于16H1的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于16H1的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为18C6的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自18C6的VL(SEQ ID NO：4)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自18C6的VH(SEQ ID NO：14)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自18C6的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于18C6的VL(SEQ ID NO：4)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于18C6的VH(SEQ ID NO：14)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于18C6的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是18C6的变体。18C6变体可以具有作为在SEQ IDNO：4中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的18C6的VL的变体的VL。18C6变体可以具有作为在SEQ ID NO：14中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的18C6的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，18C6的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，18C6的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于18C6的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于18C6的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为19D11的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自19D11的VL(SEQ ID NO：5)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自19D11的VH(SEQ ID NO：15)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自19D11的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于19D11的VL(SEQ ID NO：5)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于19D11的VH(SEQ ID NO：15)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于19D11的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是19D11的变体。19D11变体可以具有作为在SEQ ID NO：5中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的19D11的VL的变体的VL。19D11变体可以具有作为在SEQ ID NO：15中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的19D11的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，19D11的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，19D11的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于19D11的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于19D11的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为CH 5#的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自CH 5#的VL(SEQ ID NO：6)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自CH 5#的VH(SEQ ID NO：16)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自CH 5#的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于CH 5#的VL(SEQ ID NO：6)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于CH5#的VH(SEQ ID NO：16)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于CH 5#的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是CH 5#的变体。CH5#变体可以具有作为在SEQ ID NO：6中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的CH 5#的VL的变体的VL。CH 5#变体可以具有作为在SEQ ID NO：16中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的CH 5#的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，CH 5#的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，CH 5#的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于CH 5#的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于CH 5#的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为CH 8#的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自CH 8#的VL(SEQ ID NO：7)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自CH 8#的VH(SEQ ID NO：17)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自CH 8#的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于CH 8#的VL(SEQ ID NO：7)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于CH8#的VH(SEQ ID NO：17)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于CH 8#的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是CH 8#的变体。CH8#变体可以具有作为在SEQ ID NO：7中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的CH 8#的VL的变体的VL。CH 8#变体可以具有作为在SEQ ID NO：17中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的CH 8#的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，CH 8#的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，CH 8#的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于CH 8#的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于CH 8#的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为CH 9#的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自CH 9#的VL(SEQ ID NO：8)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自CH 9#的VH(SEQ ID NO：18)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自CH 9#的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于CH 9#的VL(SEQ ID NO：8)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于CH9#的VH(SEQ ID NO：18)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于CH 9#的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是CH 9#的变体。CH9#变体可以具有作为在SEQ ID NO：8中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的CH 9#的VL的变体的VL。CH 9#变体可以具有作为在SEQ ID NO：18中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的CH 9#的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，CH 9#的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，CH 9#的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于CH 9#的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于CH 9#的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为CH10#的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自CH10#的VL(SEQ ID NO：9)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自CH 10#的VH(SEQ ID NO：19)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自CH 10#的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于CH 10#的VL(SEQ ID NO：9)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于CH 10#的VH(SEQ ID NO：19)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于CH 10#的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是CH 10#的变体。CH 10#变体可以具有作为在SEQ ID NO：9中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的CH 10#的VL的变体的VL。CH 10#变体可以具有作为在SEQ ID NO：19中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的CH 10#的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，CH 10#的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，CH 10#的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于CH 10#的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于CH 10#的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为CH11#的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自CH11#的VL(SEQ ID NO：10)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自CH 11#的VH(SEQ ID NO：20)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自CH 11#的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于CH 11#的VL(SEQ ID NO：10)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于CH 11#的VH(SEQ ID NO：20)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于CH 11#的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是CH 11#的变体。CH 11#变体可以具有作为在SEQ ID NO：10中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的CH 11#的VL的变体的VL。CH 11#变体可以具有作为在SEQ ID NO：20中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的CH 11#的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，CH 11#的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，CH 11#的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于CH 11#的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于CH 11#的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为3F2的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自3F2的VL(SEQ ID NO：180)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自3F2的VH(SEQ ID NO：189)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自3F2的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于3F2的VL(SEQ ID NO：180)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于3F2的VH(SEQ ID NO：189)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于3F2的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是3F2的变体。3F2变体可以具有作为在SEQ ID NO：180中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的3F2的VL的变体的VL。3F2变体可以具有作为在SEQ ID NO：189中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的3F2的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，3F2的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，3F2的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于3F2的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于3F2的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为36A2的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自36A2的VL(SEQ ID NO：181)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自36A2的VH(SEQ IDNO：190)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自36A2的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于36A2的VL(SEQ ID NO：181)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于36A2的VH(SEQ ID NO：190)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于36A2的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是36A2的变体。36A2变体可以具有作为在SEQ ID NO：181中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的36A2的VL的变体的VL。36A2变体可以具有作为在SEQ ID NO：190中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的36A2的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，36A2的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，36A2的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于36A2的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于36A2的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为36B11的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自36B11的VL(SEQ ID NO：182)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自36B11的VH(SEQ ID NO：191)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自36B11的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于36B11的VL(SEQ ID NO：182)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于36B11的VH(SEQ ID NO：191)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于36B11的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是36B11的变体。36B11变体可以具有作为在SEQ ID NO：182中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的36B11的VL的变体的VL。36B11变体可以具有作为在SEQ ID NO：191中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的36B11的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，36B11的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，36B11的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于36B11的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于36B11的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为38F8的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自38F8的VL(SEQ ID NO：183)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自38F8的VH(SEQ ID NO：192)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自38F8的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于38F8的VL(SEQ ID NO：183)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于38F8的VH(SEQ ID NO：192)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于38F8的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是38F8的变体。38F8变体可以具有作为在SEQ ID NO：183中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的38F8的VL的变体的VL。38F8变体可以具有作为在SEQ ID NO：192中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的38F8的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，38F8的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，38F8的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于38F8的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于38F8的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为38A8的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自38A8的VL(SEQ ID NO：184)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自38A8的VH(SEQ ID NO：193)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自38A8的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于38A8的VL(SEQ ID NO：184)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于38A8的VH(SEQ ID NO：193)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于38A8的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是38A8的变体。38A8变体可以具有作为在SEQ ID NO：184中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的38A8的VL的变体的VL。38A8变体可以具有作为在SEQ ID NO：193中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的38A8的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，38A8的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，38A8的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于38A8的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于38A8的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为40F11的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自40F11的VL(SEQ ID NO：185)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自40F11的VH(SEQ ID NO：194)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自40F11的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于40F11的VL(SEQ ID NO：185)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于40F11的VH(SEQ ID NO：194)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于40F11的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是40F11的变体。40F11变体可以具有作为在SEQ ID NO：185中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的40F11的VL的变体的VL。40F11变体可以具有作为在SEQ ID NO：194中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的40F11的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，40F11的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，40F11的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于40F11的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于40F11的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为50H9的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自50H9的VL(SEQ ID NO：186)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自50H9的VH(SEQ ID NO：195)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自50H9的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于50H9的VL(SEQ ID NO：186)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于50H9的VH(SEQ ID NO：195)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于50H9的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是50H9的变体。50H9变体可以具有作为在SEQ ID NO：186中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的50H9的VL的变体的VL。50H9变体可以具有作为在SEQ ID NO：195中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的50H9的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，50H9的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，50H9的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于50H9的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于50H9的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为84G10的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自84G10的VL(SEQ ID NO：187)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自84G10的VH(SEQ ID NO：196)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自84G10的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于84G10的VL(SEQ ID NO：187)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于84G10的VH(SEQ ID NO：196)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于84G10的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是84G10的变体。84G10变体可以具有作为在SEQ ID NO：187中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的84G10的VL的变体的VL。84G10变体可以具有作为在SEQ ID NO：196中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的84G10的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，84G10的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，84G10的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于84G10的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于84G10的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是命名为39D1的抗体。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自39D1的VL(SEQ ID NO：188)。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有来自39D1的VH(SEQ ID NO：197)。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有来自39D1的VL和VH两者。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VL，所述VL包含来自来源于39D1的VL(SEQ ID NO：188)的VL CDR 1、2和3。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段具有VH，所述VH包含来自来源于39D1的VH(SEQ ID NO：197)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段可以具有分别来自来源于39D1的VL和VH的包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是39D1的变体。39D1变体可以具有作为在SEQ ID NO：188中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的39D1的VL的变体的VL。39D1变体可以具有作为在SEQ ID NO：197中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的39D1的VH的变体的VH。所述氨基酸替换、添加和/或缺失可以处于VH CDR或VL CDR中。在一些实施方式中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDR中。在一些实施方式中，39D1的变体具有至多约5个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，39D1的变体具有至多3个保守氨基酸替换。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于39D1的人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体或其抗原结合片段是来源于39D1的人抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文还提供了与以上所提供的抗体或抗原结合片段竞争对于与TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。“与另一种抗体竞争对于与靶标的结合”的抗体表示(部分或完全)抑制所述另一种抗体与靶标的结合的抗体。可以使用已知的竞争实验，例如，BLI分析或表面等离子共振(SPR)分析来确定两种抗体是否彼此竞争对于与靶标的结合，即一种抗体是否抑制另一种抗体与靶标的结合以及抑制程度如何。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段与另一种抗体或抗原结合片段竞争对于TIM-3(例如，人TIM-3)的结合并且将另一种抗体或抗原结合片段与TIM-3(例如，人TIM-3)的结合抑制至少50％、60％、70％、80％、90％或100％。基于哪种抗体是“阻断抗体”(即首先与靶标培育的冷性抗体)，抑制或竞争水平可以是不同的。可以如下所述实施竞争测定，例如，如Ed Harlow and David Lane,Cold Spring Haib Protoc；2006；doi:10.1101/pdb.prot 4277或在Ed Harlow and David Lane的Using Antibodies的第11章中,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,USA 1999中所述。如果抗体双方彼此阻断至少50％，即不考虑在竞赛实验中一种抗体还是另一种抗体首先与抗原接触，则两种抗体“交叉竞争”。
用于决定两种抗体是否竞争或交叉竞争结合的竞争性结合测定包括：例如，通过流式细胞术的对于表达TIM-3的T细胞的结合的竞争，如实施例中所述。其它方法包括：生物膜干涉测量法(BLI)、SPR(例如，)、固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见Stahli等人,Methods in Enzymology9:242(1983))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见Kirkland等人,J.Immunol.137:3614(1986))；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见Harlow and Lane,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press(1988))；使用1-125标记的固相直接标记RIA(参见Morel等人,MoI.Immunol.25(1):7(1988))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung等人,Virology 176:546(1990))；和直接标记RIA(Moldenhauer等人,Scand.J.Immunol.32:77(1990))。
在一些实施方式中，本文提供了与3E6竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与4H2竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与16H1竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与18C6竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与19D11竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与CH 5#竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与CH 8#竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与CH 9#竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与CH 10#竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与CH 11#竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与3F2竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与36A2竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与36B11竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与38F8竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与38A8竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与40F11竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与50H9竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与84G10竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与39D1竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文提供了与人源化3E6竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化4H2竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化16H1竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化18C6竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化19D11竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化CH 5#竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化CH 8#竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化CH 9#竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化CH 10#竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化CH 11#竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化3F2竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化36A2竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化36B11竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化38F8竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化38A8竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化40F11竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化50H9竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化84G10竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了与人源化39D1竞争对TIM-3(例如，人TIM-3)的结合的抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文还提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与以上所提供的抗体或抗原结合片段所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与3E6或人源化3E6所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与4H2或人源化4H2所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与16H1或人源化16H1所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与18C6或人源化18C6所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与19D11或人源化19D11所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与CH 5#或人源化CH5#所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与CH 8#或人源化CH 8#所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与CH 9#或人源化CH 9#所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与CH 10#或人源化CH 10#所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与CH11#或人源化CH 11#所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与3F2或人源化3F2所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与36A2或人源化36A2所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与36B11或人源化36B11所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与38F8或人源化38F8所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与38A8或人源化38A8所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与40F11或人源化40F11所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与50H9或人源化50H9所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与84G10或人源化84G10所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。在一些实施方式中，本文提供了抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合至与39D1或人源化39D1所结合的相同的TIM-3(例如，人TIM-3)上的表位。
本发明公开还考虑了与本文所描述的重组、单克隆、嵌合、人源化和人抗体或其抗体片段基本同源的其它变体和等价形式。在一些实施方式中，期望改善抗体的结合亲和力。在一些实施方式中，期望调整抗体的生物学性质，包括(但不限于)特异性、热稳定性、表达水平、效应功能、糖基化、免疫原性和/或溶解度。本领域技术人员将理解氨基酸变化可以改变抗体的翻译后过程，如改变糖基化位点的数目或位置或者改变膜锚定特征。
变化可以是导致与天然抗体或多肽序列相比氨基酸序列改变的编码所述抗体或多肽的一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入。在一些实施方式中，氨基酸替换是由于一个氨基酸被具有类似结构和/或化学性质的另一个氨基酸替换，如亮氨酸被丝氨酸替换，例如，保守氨基酸替换的结果。插入或缺失可以在约1至5个氨基酸的范围内。在一些实施方式中，替换、缺失或插入包括相对于母体分子，小于25个氨基酸替换、小于20个氨基酸替换、小于15个氨基酸替换、小于10个氨基酸替换、小于5个氨基酸替换、小于4个氨基酸替换、小于3个氨基酸替换或者小于2个氨基酸替换。在一些实施方式中，可以通过在序列中系统产生插入、缺失或替换并与母体蛋白相比，测试所产生的变体蛋白的活性来确定生物学有用和/或相关的氨基酸序列的变化。
在本领域中已知抗体的恒定区介导一些效应功能并且这些效应功能可以基于抗体同种型改变。例如，补体的C1组分与IgG或IgM抗体的Fc区(结合至抗原)的结合激活补体系统。补体的激活在细胞病原体的调理素作用和溶胞中是重要的。补体激活还刺激炎症反应并且可以参与自体免疫超敏反应。另外，抗体的Fc区可以结合表达Fc受体(FcR)的细胞。存在一些对不同种类的抗体，包括IgG(γ受体)、IgE(ε受体)、IgA(α受体)和IgM(μ受体)特异的Fc受体。抗体对细胞表面上的Fc受体的结合引发了一些重要且多样的生物学反应，包括抗体涂覆颗粒的吞入和破坏、免疫复合物的清除、杀伤细胞对抗体涂覆的靶细胞的溶胞(称为抗体-依赖性细胞毒性或ADCC)、抗体-依赖性细胞吞噬作用(ADCP)、炎症介质的释放、胎盘转运和免疫球蛋白产生的控制。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含人IgA抗体的至少一个恒定区。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含人IgD抗体的至少一个恒定区。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含人IgE抗体的至少一个恒定区。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含人IgG抗体的至少一个恒定区。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含人IgM抗体的至少一个恒定区。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含人IgG1抗体的至少一个恒定区。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含人IgG2抗体的至少一个恒定区。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含人IgG3抗体的至少一个恒定区。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含人IgG4抗体的至少一个恒定区。
还提供了工程化和修饰的抗体，所述工程化和修饰的抗体可以使用具有本文所公开的VH和/或VL序列中的一个或多个的抗体作为起始材料制备以工程化修饰的抗体，所述修饰的抗体可以相对于起始抗体具有改变的性质。可以通过修饰可变区(即VH和/或VL)之一或两者内，例如一个或多个CDR区内和/或一个或多个框架区内的一个或多个残基来工程化抗体。另外或者作为另外一种选择，可以通过修饰恒定区内的残基来工程化抗体，例如，改变抗体的效应功能。可以实施的一类可变区工程化是CDR嫁接(CDR grafting)。抗体主要通过位于6个CDR中的氨基酸残基与靶标抗原相互作用。由于CDR序列负责大部分抗体-抗原相互作用，因此可以通过构建包括嫁接至来自具有不同性质的不同抗体的框架序列的来自特定天然存在的抗体的CDR序列的表达载体来表达模拟特定天然存在的抗体的性质的重组抗体(参见，例如，Riechmann,L.等人(1998)Nature 332:323-327；Jones,P.等人(1986)Nature 321:522-525；Queen,C.等人(1989)Proc.Natl.Acad Sci.U.S.A.86:10029-10033；Winter的美国专利No.5,225,539和Queen等人的美国专利No.5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
因此，本文所描述的一些实施方式涉及分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR1、CDR2和CDR3序列并且包含分别选自SEQ ID NO：1-10、21、180-188和207-215的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含CDR1、CDR2和CDR3序列并且包含分别选自SEQ ID NO：11-20、22-29和189-197的氨基酸序列。因此，这些抗体含有单克隆抗体3E6、4H2、16H1、18C6、19D11、CH5#、CH 8#、CH 9#、CH 10#、CH 11#、3F2、36A2、36B11、38F8、38A8、40F11、50H9、84G10或39D1的VH和VL CDR序列，还可以含有来自这些抗体的不同的框架序列。
这些框架序列可以得自包括胚系抗体基因序列的公共DNA数据库或发表的参考文献。例如，人重链和轻链可变区基因的胚系DNA序列可见于“Vbase”人胚系序列数据库(在因特网上的www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase网址处可用)以及Kabat,E.A.,等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department ofHealth and Human Services,NIH Publication No.91-3242；Tomlinson,I.M,等人(1992)Mol.Biol.227:776-798；和Cox,J.P.L.等人(1994),Eur.J.Immunol.24:827-836；以上每篇文献的内容明确作为参考并入本文。
在一些实施方式中，用于在本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段中使用的框架序列是与本文所描述的抗TIM-3抗体所使用的框架序列结构类似的那些框架序列。VHCDR1、2和3序列和VL CDR1、2和3序列可以嫁接到具有与所述框架序列所来源的胚系免疫球蛋白基因中存在的序列相同的序列的框架区，或者CDR序列可以嫁接到与胚系序列相比含有一个或多个突变的框架区。例如，已发现在某些情况下，使框架区内的残基突变以维持或提高抗体的抗原结合能力是有益的(参见，例如，Queen等人的美国专利No.5,530,101；5,585,089；5,693,762；和6,180,370)。
本文所描述的工程化的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包括其中已对VH和/或VL内的框架残基进行修饰，例如，以改善抗体性质的那些。通常，产生这些框架修饰以降低抗体的免疫原性。例如，一种方法是将一个或多个框架残基“回复突变”至相应胚系序列。更具体地，经历体细胞突变的抗体可以含有不同于抗体所来源的胚系序列的框架残基。可以通过将抗体框架序列与抗体所来源的胚系序列相比较来鉴别这些残基。为了使框架区序列回到它们的胚系构型，可以通过(例如)定点突变或PCR-介导的突变使体细胞突变“回复突变”至胚系序列。还旨在涵盖这些“回复突变的”抗体。另一类框架修饰包括使框架区内或甚至一个或多个CDR区内的一个或多个残基突变以除去T细胞表位，从而借此降低抗体的潜在免疫原性。这种方法还被称为“去免疫”并且进一步详细描述于Carr等人的美国专利公开No.20030153043。
另一类可变区修饰是使VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3区内的氨基酸残基突变以借此改善所关心的抗体的一种或多种结合性质(例如，亲和力)。可以实施定点突变或PCR-介导的突变以引入突变，并且可以在如本文所描述的和如实施例中所提供的体外或体内测定中评价对抗体结合或其它所关心的功能性质的影响。在一些实施方式中，引入保守修饰(如以上所讨论的)。所述突变可以是氨基酸替换、添加或缺失。此外，通常改变CDR区内不超过1、2、3、4或5个残基。
可以使抗体CDR中的蛋氨酸残基氧化，从而导致抗体潜在的化学降解和随后的效力降低。因此，还提供了使重链和/或轻链CDR中的一个或多个蛋氨酸残基被未经历氧化降解的氨基酸残基替换的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，抗体3E6、4H2、16H1、18C6、19D11、CH 5#、CH 8#、CH 9#、CH 10#、CH 11#、3F2、36A2、36B11、38F8、38A8、40F11、50H9、84G10或39D1的CDR中的蛋氨酸残基被未经历氧化降解的氨基酸残基替换。类似地，可以从抗TIM-3抗体或抗原结合片段，具体地CDR中除去脱酰胺位点。
可以将本文所描述的抗TIM-3可变区连接(例如，共价连接或融合)至Fc，例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc，其可以具有任何同种异型或同族同种异型(isoallotype)，例如，对于IgG1：G1m、G1m1(a)、G1m2(x)、G1m3(f)、G1m17(z)；对于IgG2：G2m、G2m23(n)；对于IgG3：G3m、G3m21(g1)、G3m28(g5)、G3m11(b0)、G3m5(b1)、G3m13(b3)、G3m14(b4)、G3m10(b5)、G3m15(s)、G3m16(t)、G3m6(c3)、G3m24(c5)、G3m26(u)、G3m27(v)；并且对于K：Km、Km1、Km2、Km3(参见，例如，Jefferies等人(2009)mAbs 1:1)。
在一些实施方式中，将本文所描述的抗TIM-3可变区连接至无效应子(effectorless)或几乎无效应子Fc，例如，IgG4。
通常，本文所述的可变区可以连接至包含一个或多个修饰的Fc，通常以改变抗体的一种或多种功能性质，如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合和/或抗原-依赖性细胞毒性。此外，可以化学修饰(例如，可以将一个或多个化学部分连接至抗体)或修饰本文所述的抗体以改变其糖基化，以改变抗体的一种或多种功能性质。以下将进一步详细描述这些实施方式中的每一个。Fc区中残基的编号是Kabat的EU指数编号。
Fc区涵盖了来源于免疫球蛋白的恒定区的结构域，包括所述恒定区的片段、类似物、变体、突变体或衍生物。适合的免疫球蛋白包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和其它类，如IgA、IgD、IgE和IgM。将免疫球蛋白的恒定区定义为与免疫球蛋白C-末端区同源的天然存在的或合成产生的多肽，并且可以分开或组合包括CH1结构域、铰链、CH2结构域、CH3结构域或CH4结构域。在一些实施方式中，在本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段中，所述恒定区中的至少一种或多种已修饰或缺失。在一些实施方式中，所述抗体包含对3个重链恒定区(CH1、CH2或CH3)中的一个或多个和/或对轻链恒定区(CL)的修饰。在一些实施方式中，所述修饰的抗体的重链恒定区包含至少一个人恒定区。在一些实施方式中，所述修饰的抗体的重链恒定区包含不止一个人恒定区。在一些实施方式中，对恒定区的修饰包括一个或多个氨基酸在一个或多个区域中的添加、缺失或替换。在一些实施方式中，从修饰抗体的恒定区部分或完全缺失一个或多个区域。在一些实施方式中，已从抗体(ΔCH2构建体)除去整个CH2结构域。在一些实施方式中，通过短氨基酸间隔臂替代缺失的恒定区，所述短氨基酸间隔臂提供了通常由不存在的恒定区所赋予的一些分子柔性。在一些实施方式中，修饰的抗体包含直接稠合至抗体铰链区的CH3结构域。在一些实施方式中，修饰的抗体包含插入在铰链区和修饰的CH2和/或CH3结构域之间的肽间隔臂。
Ig分子与多类细胞受体相互作用。例如，IgG分子与对于IgG类抗体特异的三类Fcγ受体(FcγR)，即FcγRI、FcγRII和FcγRIII相互作用。已报道对于IgG与FcγR受体的结合重要的序列位于CH2和CH3结构域。抗体的血清半衰期受该抗体结合至Fc受体(FcR)的能力的影响。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含Fc区。在一些实施方式中，经由铰链融合Fc区。所述铰链可以是IgG1铰链、IgG2铰链或IgG3铰链。人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的Fc区的氨基酸序列是本领域那些技术人员已知的。在一些情况下，已在天然抗体中识别了具有氨基酸变化的Fc区。在一些实施方式中，所述修饰的抗体(例如，修饰的Fc区)提供了改变的效应功能，其反过来影响抗体的生物学谱。例如，在一些实施方式中，当它循环时，恒定区的缺失或失活(通过点突变或其它方式)降低了修饰抗体的Fc受体结合。在一些实施方式中，所述恒定区修饰降低了抗体的免疫原性。在一些实施方式中，所述恒定区修饰提高了抗体的血清半衰期。在一些实施方式中，所述恒定区修饰降低了抗体的血清半衰期。在一些实施方式中，所述恒定区修饰降低或移除了抗体的ADCC、ADCP和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)。在一些实施方式中，具有相应IgG2或IgG4残基的人IgG1 Fc区中的特异性氨基酸替换降低了修饰抗体中的效应功能(例如，ADCC、ADCP和CDC)。在一些实施方式中，抗体不具有一种或多种效应功能(例如，“无效应因子(effectorless)”抗体)。在一些实施方式中，所述抗体没有ADCC活性和/或没有CDC活性。在一些实施方式中，所述抗体不结合Fc受体和/或补体因子。在一些实施方式中，所述抗体不具有效应功能。在一些实施方式中，所述恒定区修饰提高或增强了抗体的ADCC、ADCP和/或CDC。在一些实施方式中，修饰所述恒定区以消除二硫键或者寡糖部分。在一些实施方式中，修饰所述恒定区以添加/替换一个或多个氨基酸以提供一种或多种细胞毒素、寡糖或碳水化合物连接位点。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含与天然Fc区相比，在特定氨基酸位置处具有替换的工程化的变体Fc区。
在一些实施方式中，Fc区是变体Fc区，例如，相对于亲代Fc序列(例如，随后修饰以产生变体的未修饰的Fc多肽)已修饰(例如，通过氨基酸替换、缺失和/或插入)以提供所期望的结构特征和/或生物活性的Fc序列。通常，恒定区或其部分，例如，CH1、CL、铰链、CH2或CH3结构域的变体可以包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个突变和/或至多10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个突变或1-10或1-5个突变，或者包含与相应野生型区域或结构域(分别CH1、CL、铰链、CH2或CH3结构域)的氨基酸序列具有至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的氨基酸序列，只要包含特定变体的重链恒定区保留必需的生物活性。
例如，可以在Fc区中产生修饰以产生(a)具有升高或降低的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、(b)升高或降低的抗体-依赖性细胞-介导的吞噬(ACDP)、(c)升高或降低的补体介导的细胞毒性(CDC)、(d)对C1q具有升高或降低的亲和力和/或(e)相对于母体Fc对Fc受体具有升高或降低的亲和力的Fc变体。这些Fc区变体通常将在Fc区中包含至少一种氨基酸修饰。据认为特别期望组合氨基酸修饰。例如，变体Fc区其中可以包括在本文中所识别的特定Fc区位置的2个、3个、4个、5个等的替换。
变体Fc区还可以包含其中除去或用其它氨基酸替换参与二硫键形成的氨基酸的序列改变。这种除去可以避免与在用于生产本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的宿主细胞中存在的其它含半胱氨酸的蛋白质反应。即使当除去半胱氨酸残基时，单链Fc结构域仍可以形成以非共价键保持在一起的二聚体Fc结构域。在一些实施方式中，可以修饰Fc区以使其与所选宿主细胞更相容。例如，可以除去典型天然Fc区的N-末端附近的PA序列，该序列可以被大肠杆菌(E.coli)中的消化酶，如脯氨酸亚氨基肽酶所识别。在一些实施方式中，可以除去Fc结构域内的一个或多个糖基化位点。通常糖基化的残基(例如，天门冬酰胺)可以赋予溶胞反应。可以使这些残基缺失或用未糖基化的残基(例如，丙氨酸)替换。在一些实施方式中，可以从Fc区除去参与与补体相互作用的位点，如C1q结合位点。例如，可以使人IgG1的EKK序列缺失或被替换。在一些实施方式中，可以除去影响与Fc受体结合的位点，优选地除补救受体结合位点以外的位点。在一些实施方式中，可以修饰Fc区以除去ADCC位点。在一些实施方式中，可以修饰Fc区以除去ADCP位点。ADCC和ADCP位点在本领域中是已知的；参见，例如，有关IgG1中的ADCC位点，Molec.Immunol.29(5):633-9(1992)，有关IgG1中的ADCP位点，Herbrand,U.(2016).BioProcessing,15(1),1538-8786。例如，在WO 97/34631和WO 96/32478中公开了变体Fc结构域的具体实例。
在一些实施方式中，修饰Fc的铰链区，从而改变，例如，升高或降低铰链区中半胱氨酸残基的数目。在Bodmer等人的美国专利No.5,677,425中进一步描述了这种方法。改变Fc的铰链区中的半胱氨酸残基的数目以(例如)帮助轻链和重链的组装或者提高或降低抗体的稳定性。在一些实施方式中，使抗体的Fc铰链区突变以降低抗体的生物半衰期。更具体地，将一个或多个氨基酸突变引入Fc-铰链片段的CH2-CH3结构域界面区，从而所述抗体相对于天然Fc-铰链结构域金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)结合具有受损的SpA结合。在Ward等人的美国专利No.6,165,745中进一步详细描述了这种方法。
在一些实施方式中，通过用不同的氨基酸残基替换至少一个氨基酸残基改变Fc区以改变抗体的效应功能。例如，可以用不同的氨基酸残基替换选自氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320、322、330和/或331的一个或多个氨基酸，从而抗体对效应配体具有改变的亲和力，但是保留了亲代抗体的抗原结合能力。对其的亲和力改变的效应配体可以是(例如)Fc受体或补体的C1组分。在Winter等人的美国专利No.5,624,821和5,648,260两者中进一步详细描述了这种方法。
在另一个实例中，可以用不同的氨基酸残基替换选自氨基酸残基329、331和322的一个或多个氨基酸，从而抗体具有改变的C1q结合和/或降低或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。在Idusogie等人的美国专利No.6,194,551中进一步详细描述了这种方法。
在另一个实例中，改变氨基酸位置231和239内的一种或多种氨基酸残基以借此改变抗体固定补体的能力。在Bodmer等人的PCT专利公开WO 94/29351中进一步描述了这种方法。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含IgG1重链恒定区，所述IgG1重链恒定区包含选自下列的一个或多个氨基酸替换：按照EU编号，K214R、L234A、L235E、G237A、D356E和L358M。在一些实施方式中，所述IgG1重链恒定区包含选自下列的一个或多个氨基酸替换：按照EU编号，K214R、L234A、L234F、L235A、L235E、G236R、G237A、D265A、N297A、N297Q、N297G、E318A、L328R、P329G、A330S、P331S、D356E和L358M。在一些实施方式中，所述IgG1重链恒定区包含选自下列的一个或多个氨基酸替换：按照EU编号，K214R、C226S、C229S和P238S。在一些实施方式中，所述IgG1重链恒定区包含选自下列的一个或多个氨基酸替换：按照EU编号，K214R、D356E和L358M。在一些实施方式中，所述IgG1重链恒定区包含选自下列的一个或多个氨基酸替换：按照EU编号，S131C、K133R、G137E、G138S、Q196K、I199T、N203D、K214R、C226S、C229S和P238S。在一些实施方式中，所述IgG1重链恒定区包含选自下列的氨基酸替换：按照EU编号，N297A、N297Q和N297G。在一些实施方式中，所述IgG1重链恒定区包含氨基酸替换：按照EU编号，L234A和L235A。在一些实施方式中，所述IgG1重链恒定区包含氨基酸替换：按照EU编号，按照EU编号，G236R和L328R。在一些实施方式中，所述IgG1重链恒定区包含氨基酸替换：按照EU编号，L234F、L235E和P331S。在一些实施方式中，所述IgG1重链恒定区包含氨基酸替换：按照EU编号，L234A、L235A和P329G。在一些实施方式中，所述IgG1重链恒定区包含氨基酸替换：按照EU编号，L234F、L235E和D265A。
在一些实施方式中，可以通过修饰下列位置处的一个或多个氨基酸来修饰Fc区以降低ADCC、ADCP和/或降低对于Fcγ受体的亲和力：234、235、236、237、238、239、240、241、243、244、245、247、248、249、252、254、255、256、258、262、263、264、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、297、298、299、301、303、305、307、309、312、313、315、318、320、322、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、433、434、435、436、437、438或439。示例性替换包括234A、235A、236A、239D、239E、268D、267E、268E、268F、324T、332D、332E及其任意组合。示例性变体包括234A/235A、239D/332E、236A/332E、236A/239D/332E、268F/324T、267E/268F、267E/324T和267E/268F7324T。用于增强FcγR和补体相互作用的其它修饰包括(但不限于)替换298A、333A、334A、326A、2471、339D、339Q、280H、290S、298D、298V、243L、292P、300L、396L、3051和396L。在Strohl,2009,CurrentOpinion in Biotechnology 20:685-691中综述了这些和其它修饰。
提高对Fc受体的结合的Fc修饰包括在Fc区的氨基酸位置238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、279、280、283、285、298、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、312、315、324、327、329、330、335、337、338、340、360、373、376、379、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439的任何一个或多个处的氨基酸修饰，其中Fc区中残基的编号是EU指数编号(WO00/42072)。
可以对Fc进行的其它Fc修饰是用于降低或消除对FcγR和/或补体蛋白质的结合，借此降低或消除Fc-介导的效应功能，如ADCC、ADCP和CDC的那些。示例性修饰包括(但不限于)在位置234、235、236、237、267、269、325、328、330和/或331(例如，330和331)处的替换、插入和缺失，其中编号根据EU指数。示例性替换包括(但不限于)234A、235E、236R、237A、267R、269R、325L、328R、330S和33IS(例如，330S和33IS)，其中编号根据EU指数。Fc变体可以包含236R/328R。用于降低FcγR和补体相互作用的其它修饰包括通过突变或酶促方式或通过在不使蛋白糖基化的生物，如细菌中产生的替换297A、234A、235A、237A、318A、228P、236E、268Q、309L、330S、331S、220S、226S、229S、238S、233P和234V，以及在位置297处的糖基化的除去。在Strohl,2009,Current Opinion in Biotechnology 20:685-691中综述了这些及其它修饰。
任选地，Fc区可以在本领域技术人员已知的其它和/或替代位置包含非天然存在的氨基酸残基(参见，例如，美国专利No.5,624,821；6,277,375；6,737,056；6,194,551；7,317,091；8,101,720；PCT专利公开WO 00/42072；WO 01/58957；WO 02/06919；WO 04/016750；WO 04/029207；WO 04/035752；WO 04/074455；WO 04/099249；WO 04/063351；WO05/070963；WO 05/040217；WO 05/092925和WO 06/0201 14)。
还可以使用增强对于抑制性受体FcγRIIb的亲和力的Fc变体。这些变体可以提供具有与FcγRIIb细胞，包括(例如)B细胞和单核细胞相关的免疫调节活性的Fc融合蛋白。在一些实施方式中，Fc变体提供了相对于一种或多种激活受体对FcγRIIb选择性增强的亲和力。用于改变对FcγRIIb的结合的修饰包括根据EU指数，在选自234、235、236、237、239、266、267、268、325、326、327、328、330、331和332的位置处的一个或多个修饰。用于增强FcγRIIb亲和力的示例性替换包括(但不限于)234A、234D、234E、234F、234W、235A、235D、235E、235F、235R、235Y、236D、236N、237A、237D、237N、239D、239E、266M、267D、267E、268D、268E、327D、327E、328F、328W、328Y、330S、33IS和332E。示例性替换包括235Y、236D、239D、266M、267E、268D、268E、328F、328W和328Y。用于增强与FcγRIIb的结合的其它Fc变体包括235Y/267E、236D/267E、239D/268D、239D/267E、267E/268D、267E/268E和267E/328F。
可以通过本领域中已知的多种体外测定方法(基于生物化学或免疫学的测定)确定Fc区对于其配体的亲和力和结合性质，所述体外测定方法包括(但不限于)平衡法(例如，酶联免疫吸附测定(ELISA)、生物膜干涉测量法(BLI)或放射免疫测定(RIA))或者动力学(例如，BIACORE分析)和其它方法，如间接结合测定、竞争性抑制测定、荧光能量共振转移(FRET)、凝胶电泳和色谱法(例如，凝胶过滤)。这些和其它方法可以使用位于要检验的一种或多种组分上的标记和/或使用多种检测方法，包括(但不限于)生色、荧光、发光或同位素标记。结合亲和力和动力学的详细说明可见于Paul,W.E.主编,Fundamental immunology,第4版,Lippincott-Raven,Philadelphia(1999)，其关注抗体-免疫原相互作用。
在一些实施方式中，修饰抗体以提高其生物半衰期。多种方法是可能的。例如，这可以通过提高Fc区对FcRn的结合亲和力来完成。例如，如美国专利No.6,277,375中所述，可以使以下残基中的一个或多个突变：252、254、256、433、435、436。具体的示例性替换包括以下中的一种或多种：T252L、T254S和/或T256F。作为另外一种选择，为了提高生物半衰期，可以在CH或CL区内改变抗体以包含得自IgG的Fc区的CH2结构域的两个环的补救受体结合表位，如Presta等人的美国专利No.5,869,046和6,121,022中所述。提高对FcRn的结合和/或改善药物动力学性质的其它示例性变体包括在位置259、308、428和434的替换，包括(例如)259I、308F、428L、428M、434S、434I、434F、434Y和434X1。提高与FcRn的Fc结合的其它变体包括：250E、250Q、428L、428F、250Q/428L(Hinton等人2004,J.Biol.Chem.279(8):6213-6216、Hinton等人2006Journal of Immunology176:346-356)、256A、272A、286A、305A、307A、307Q、311A、312A、376A、378Q、380A、382A、434A(Shields等人,Journal of BiologicalChemistry,2001,276(9):6591-6604)、252F、252T、252Y、252W、254T、256S、256R、256Q、256E、256D、256T、309P、311S、433R、433S、433I、433P、433Q、434H、434F、434Y、252Y/254T/256E、433K/434F/436H、308T/309P/311S(Dali Acqua等人,Journal of Immunology,2002,169:5171-5180、Dall Acqua等人,2006,Journal of Biological Chemistry 281:23514-23524)。用于调节FcRn结合的其它修饰描述于Yeung等人,2010,J Immunol,182:7663-7671。
在一些实施方式中，可以使用具有特定生物学特性的杂交IgG同种型。例如，可以通过用两种同种型不同的位置处的来自IgG3的氨基酸替换CH2和/或CH3区中的IgGl位置来构建IgG1/IgG3杂交变体。因此，可以构建包含一个或多个替换的杂交变体IgG抗体，例如，274Q、276K、300F、339T、356E、358M、384S、392N、397M、4221、435R和436F。在本文所描述的一些实施方式中，可以通过用两种同种型不同的位置处的来自IgG1的氨基酸替换CH2和/或CH3区中的IgG2位置来构建IgG1/IgG2杂交变体。因此，可以构建包含一个或多个替换的杂交变体IgG抗体，例如，包含以下氨基酸替换中的一个或多个：233E、234L、235L、-236G(表示在位置236处的甘氨酸插入)和327A。
此外，已定位人IgG1上的FcγRI、FcγRII、FcγRIII和FcRn的结合位点并且已描述了具有改善的结合的变体(参见Shields,R.L.等人(2001)J.Biol.Chem.276:6591-6604)。已显示在位置256、290、298、333、334和339处的具体突变改善了与FcγRIII的结合。另外，下列组合突变体显示改善了FcγRIII结合：T256A/S298A、S298A/E333A、S298A/K224A和S298A/E333A/K334A，已显示其表现出增强的FcγRIIIa结合和ADCC活性(Shields等人,2001)。已鉴别了对FcγRIIIa具有强烈增强的结合的其它IgG1变体，包括具有S239D/I332E和S239D/I332E/A330L突变的变体，这些变体在食蟹猴中显示出对于FcγRIIIa的最大亲和力升高、FcγRIIb结合的降低以及强细胞毒活性(Lazar等人,2006)。三重突变向抗体，如阿仑珠单抗(CD52-特异性)、曲妥珠单抗(HER2/neu-特异性)、利妥昔单抗(CD20-特异性)和西妥昔单抗(EGFR-特异性)的引入被转化为大大增强的体外ADCC活性，并且S239D/I332E变体在猴中显示出增强的耗尽B细胞的能力(Lazar等人,2006)。另外，已鉴别了含有L235V、F243L、R292P、Y300L和P396L突变的IgG1突变体，其在B细胞恶性肿瘤和乳腺癌模型中，在表达人FcγRIIIa的转基因小鼠中显示出对FcγRIIIa增强的结合和相伴的增强的ADCC活性(Stavenhagen等人2007；Nordstrom等人2011)。可以使用的其它Fc突变体包括：S298A/E333A/L334A、S239D/I332E、S239D/I332E/A330L、L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L和M428L/N434S。
在一些实施方式中，选择对FcγR的结合降低的Fc。具有降低的FcγR结合的示例性Fc，例如，IgG1 Fc包含以下三种氨基酸替换：L234A、L235E和G237A。
在一些实施方式中，选择具有降低的补体固定的Fc。具有降低的补体固定的示例性Fc，例如，IgG1 Fc具有以下两个氨基酸替换：A330S和P331S。
在一些实施方式中，选择基本无效应功能的Fc，即它具有降低的对FcγR的结合和降低的补体固定。无效应子的示例性Fc，例如，IgG1 Fc包含以下5个突变：L234A、L235E、G237A、A330S和P331S。
当使用IgG4恒定结构域时，它可以包括替换S228P，所述替换模拟IgG1中的铰链序列并借此稳定IgG4分子。在一些实施方式中，IgG4恒定结构域包括替换S228P和L235E。
在一些实施方式中，修饰抗体的糖基化。例如，可以制备非糖基化抗体(即所述抗体缺少糖基化)。可以改变糖基化以(例如)提高抗体对抗原的亲和力。可以通过(例如)改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点来实现这些碳水化合物的修饰。例如，可以产生一个或多个氨基酸替换，所述氨基酸替换导致一个或多个可变区框架糖基化位点的除去，借此消除在该位点的糖基化。这种非糖基化可以提高抗体对抗原的亲和力。这种方法进一步详细描述于Co等人的美国专利No.5,714,350和6,350,861。
可以通过使N297残基突变为另一个残基，例如，N297A，和/或通过使相邻氨基酸，例如，298突变以借此降低N297上的糖基化，从而防止在N297上的恒定区糖基化。
另外或者作为另外一种选择，可以制备具有改变的糖基化类型的抗体，如具有减少的岩藻糖基残基的量的低岩藻糖化抗体或者具有提高的平分型GlcNac结构的抗体。已证实这些改变的糖基化模式提高抗体的ADCC和/或ADCP能力。可以通过(例如)在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达所述抗体来实现这些碳水化合物修饰。已在本领域中描述了具有改变的糖基化机制的细胞并且所述细胞可以用作其中表达本文所描述的重组抗TIM-3抗体或抗原结合片段以借此产生具有改变的糖基化的抗体的宿主细胞。例如，Hanai等人的EP 1,176,195描述了具有功能破坏的编码岩藻糖基转移酶的FUT8基因的细胞系，从而在该细胞系中表达的抗体显示出低岩藻糖基化。Presta的PCT专利公开WO 03/035835描述了变体CHO细胞系，Led 3细胞，其将岩藻糖连接至Asn(297)-连接的碳水化合物的能力降低，这也导致在该宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖基化(还参见Shields,R.L.等人(2002)J.Biol.Chem.277:26733-26740)。Umana等人的PCT专利公开WO 99/54342描述了工程化以表达糖蛋白-修饰糖基转移酶(例如，β(l,4)-N-乙酰葡糖氨基转移酶III(GnTIII))的细胞系，从而在该工程化细胞系中表达的抗体显示出提高的平分型GlcNac结构，这导致抗体的ADCC活性升高(还参见Umana等人(1999)Nat.Biotech.17:176-180)。
本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的另一种修饰是PEG化。可以使抗体PEG化以(例如)提高该抗体的生物学(例如，血清)半衰期。为了使抗体PEG化，通常在其中一个或多个PEG基团连接至抗体或抗体片段的条件下，将抗体或其片段与聚乙二醇(PEG)，如PEG的反应性酯或醛衍生物反应。在一些实施方式中，经由与反应性PEG分子(或者类似的反应性水溶性聚合物)的酰基化反应或烷基化反应来实施PEG化。如本文所使用的，术语“聚乙二醇”旨在涵盖已用于使其它蛋白衍生化的任何PEG形式，如单(CI-CIO)烷氧基-或者芳氧-聚乙二醇或者聚乙二醇-马来酰亚胺。在一些实施方式中，要PEG化的抗体是非糖基化的抗体。使蛋白PEG化的方法在本领域中是已知的并且可以应用于本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。参见，例如，Nishimura等人的EP 0 154 316和Ishikawa等人的EP 0 401384。
在一些实施方式中，变体可以包括氨基酸残基在抗体或多肽的氨基和/或羧基末端的添加。其它氨基酸残基的长度可以在1个残基至100个或更多个残基的范围内。在一些实施方式中，变体包含N末端甲硫氨酰基残基。在一些实施方式中，所述变体包含其它多肽/蛋白(例如，Fc区)以产生融合蛋白。在一些实施方式中，将变体工程化以成为可检测的并且可以包含可检测标记物和/或蛋白(例如，荧光标签或酶)。
可以使用本领域中已知的方法产生本文所描述的变体抗体或抗原结合片段，其包括(但不限于)定点突变、丙氨酸扫描突变和PCR突变。
在一些实施方式中，本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的变体可以保留以和亲代抗体或抗原结合片段类似程度、相同程度或更高程度结合TIM-3的能力。在一些实施方式中，所述变体可以与亲代抗体或抗原结合片段在氨基酸序列方面至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的相同。在某些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段的变体包含具有一个或多个保守氨基酸替换的亲代抗TIM-3抗体或抗原结合片段的氨基酸序列。保守氨基酸替换在本领域中是已知的并且包括其中具有特定物理和/或化学性质的一种氨基酸更换为具有相同或类似化学或物理性质的另一种氨基酸的氨基酸替换。
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段的变体包含具有一个或多个非保守氨基酸替换的亲代抗体或抗原结合片段的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段的变体包含具有一个或多个非保守氨基酸替换的亲代结合抗体或抗原结合片段的氨基酸序列，其中所述一个或多个非保守氨基酸替换不干扰或抑制所述变体的一种或多种生物学活性(例如，TIM-3结合)。在某些实施方式中，所述一个或多个保守氨基酸替换和/或所述一个或多个非保守氨基酸替换可以增强所述变体的生物活性，从而所述功能性变体的生物活性与亲代抗体或抗原结合片段相比提高。
在一些实施方式中，所述变体可以在抗体或抗原结合片段的CDR(例如，VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3)中具有1、2、3、4或5个氨基酸替换。
本文描述了抗体，例如，人源化抗体，其特征在于特定功能性特征或性质。例如，所述抗体特异性结合人TIM-3，并且更具体地，人TIM-3的胞外结构域内的特定结构域(例如，功能域)。在一些实施方式中，所述抗体是拮抗剂抗体，即它们抑制或压制细胞，例如，T细胞或骨髓细胞上TIM-3的抑制活性。在一些实施方式中，本文所提供的抗TIM-3抗体不与来自其它物种的TIM-3，如食蟹猴TIM-3或小鼠TIM-3交叉反应。在一些实施方式中，所述抗体特异性结合至人TIM-3的胞外区。在一些实施方式中，所述抗体以高亲和力结合至人TIM-3。
本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段显示出以下结合性质中的一种或多种：(1)阻断或抑制人TIM-3与TIM-3配体(例如，PtdSer)的结合，如(例如)在本文所描述的测定中所确定的；(2)当结合至免疫细胞，例如，CD4+、CD8+T细胞、Th1细胞、NK细胞、NKT细胞、骨髓细胞(例如，树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞或肿瘤细胞)或TIL上的TIM-3时，内化或下调表面TIM-3；(3)诱导或刺激获得性免疫应答；(4)诱导或刺激先天性免疫应答；(5)诱导或刺激免疫细胞激活，例如，CD4+、CD8+T细胞、Th1细胞、NK细胞、NKT细胞、骨髓细胞(例如，树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞或肿瘤细胞)或TIL；(6)在(例如)共培养测定中，诱导或刺激免疫细胞增殖，例如，CD4+、CD8+T细胞、Th1细胞、NK细胞、NKT细胞、骨髓细胞(例如，树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞或肿瘤细胞)或TIL；(7)诱导或刺激通过T细胞，例如，Th1细胞或TIL，如来自人肾癌肿瘤、肺癌肿瘤、胰腺癌肿瘤或乳腺癌肿瘤的TIL的细胞因子(例如，IFN-γ)的产生；(8)诱导或刺激炎性体-激活的细胞因子(例如，IL-18、可溶性CD25)、通过单核细胞/巨噬细胞激活产生的炎性细胞因子(例如，人IL-1β、IL-18、IL-6、TNFα或颗粒溶素)和/或Treg效应分子(例如，IL-10、穿孔素)的产生；(9)降低或抑制TIM-3-介导的免疫细胞抑制，例如，CD4+、CD8+T细胞、Th1细胞、NK细胞、NKT细胞、骨髓细胞(例如，树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞或肿瘤细胞)或TIL的抑制；(10)降低或抑制TIM-3-介导的炎性体激活的抑制，如(例如)使用Gayden 2018和Dixon 2021，如上中所描述的方法和测定所确定的。
本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段显示出以下结合性质中的一种或多种：(1)特异性结合至可溶性和/或膜结合的人TIM-3；(2)不与食蟹猴TIM-3或小鼠TIM-3交叉反应；和(4)与本文所描述的结合至TIM-3的抗体(例如，3E6、4H2、16H1、18C6、19D11、CH5#、CH 8#、CH 9#、CH 10#、CH 11#、3F2、36A2、36B11、38F8、38A8、40F11、50H9、84G10或39D1)竞争对人TIM-3的结合或者交叉阻断所述结合，如(例如)在实施例中所描述的测定中所确定的。
表位定位是标识抗体在此结合的靶标蛋白上的结合位点、区域或表位的方法。在本领域中，多种方法对于定位靶标蛋白上的表位是已知的。这些方法包括突变，其包括(但不限于)鸟枪法突变、定点突变和丙氨酸扫描；结构域或片段扫描；肽扫描(例如，Pepscan技术)；展示方法(例如，噬菌体展示、微生物展示和核糖体/mRNA展示)；包括蛋白水解和质谱法的方法；和结构确定(例如，X射线晶体学和NMR)。在一些实施方式中，通过以下测定鉴定了本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段，所述测定包括(但不限于)N末端测序、氨基酸分析、HPLC、质谱、离子交换色谱法和木瓜蛋白酶消化。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至通过MBG453(Novartis开发的抗TIM-3抗体；参见，例如，Borate等人Blood(2019):570-570)所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至通过TSR022(Tesaro/GSK开发的抗TIM-3抗体，参见，例如，Pollyea and Craig,Blood129.12(2017):1627-1635)所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至通过MBG453和TSR022两者所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合至通过MBG453所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合至通过TSR022所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合至通过MBG453或TSR022所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至不被MBG453所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至不被TSR022所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至不被MBG453或TSR022所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至通过MBG453所识别的人-TIM-3上的表位，和不被MBG453所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至通过TSR022所识别的人-TIM-3上的表位，和不被TSR022所识别的人-TIM-3上的表位。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不与Fab 6TXZ或Fab 7KQL中的任一个竞争对人TIM-3的结合。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至不同于通过Fab6TXZ或Fab 7KQL中的任一个所识别的表位的人TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合至通过Fab6TXZ所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合至通过Fab 7KQL所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至不被Fab 6TXZ所识别的人-TIM-3上的表位。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至不被Fab 7KQL所识别的人-TIM-3上的表位。
如以下实验部分中所提供的，将3E6表位定位至人TIM-3的以下残基：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。在一些实施方式中，本文提供了在包含人TIM-3的氨基酸71-82中的至少一种的表位处特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的抗体或抗原结合片段的表位可以包含人TIM-3的下列残基中的至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个或者全部8个：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的下列残基中的至少一个：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的D71。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的R73。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的D74。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的V75。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的N76。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的W78。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的T79。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的Y82。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的下列残基中的至少2个：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的下列残基中的至少三个：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的下列残基中的至少4个：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的下列残基中的至少5个：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的下列残基中的至少6个：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的下列残基中的至少7个：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段结合至人TIM-3的下列残基中的全部：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。
在一些实施方式中，本文还提供了将与本文所描述的抗TIM-3抗体(例如，3E6)竞争对人TIM-3的氨基酸71-82的结合的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段将竞争对人TIM-3的下列残基中的至少一种的结合：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段将竞争对人TIM-3的下列残基中的至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个或全部8个的结合：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。
不受理论束缚，除了促进获得性免疫外，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段还可以通过降低或抑制TIM-3-介导的炎性体激活的抑制来促进先天性免疫活性。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段还可以降低或抑制TIM-3-介导的骨髓细胞，如树突状细胞、巨噬细胞或单核细胞的抑制。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段至少部分通过特异性结合至人TIM-3的D71、N76或Y82或它们的任意组合促进炎性体激活或骨髓激活。已知这些残基中的一些的突变导致持续免疫激活和细胞因子产生增加(Gayden,2018)。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的D71、N76或Y82。在一些实施方式中，本文还提供了将与本文所描述的抗TIM-3抗体竞争对人TIM-3的D71、N76或Y82的结合的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合在D71、N76或Y82具有氨基酸突变的人TIM-3的变体。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合在D71、N76或Y82具有氨基酸替换的人TIM-3的变体。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合具有D71、N76或Y82缺失的人TIM-3的变体。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的Y82。在一些实施方式中，本文还提供了将与本文所描述的抗TIM-3抗体竞争对人TIM-3的Y82的结合的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合在Y82具有氨基酸突变的人TIM-3的变体。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合在Y82具有氨基酸替换的人TIM-3的变体。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合具有Y82缺失的人TIM-3的变体。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的D71。在一些实施方式中，本文还提供了将与本文所描述的抗TIM-3抗体竞争对人TIM-3的D71的结合的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合在D71具有氨基酸突变的人TIM-3的变体。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合在D71具有氨基酸替换的人TIM-3的变体。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合具有D71缺失的人TIM-3的变体。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的N76。在一些实施方式中，本文还提供了将与本文所描述的抗TIM-3抗体竞争对人TIM-3的N76的结合的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合在N76具有氨基酸突变的人TIM-3的变体。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合在N76具有氨基酸替换的人TIM-3的变体。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合具有N76缺失的人TIM-3的变体。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的D71、N76和Y82。在一些实施方式中，本文还提供了将与本文所描述的抗TIM-3抗体竞争对人TIM-3的D71、N76和Y82的结合的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不结合在D71、N76和Y82具有氨基酸突变的人TIM-3的变体。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段以高亲和力，例如，以下列KD结合至人TIM-3：10-7M或以下、10-8M或以下、5×10-9M或以下、10-9M或以下、5×10-10M或以下、10-10M或以下、5×10-11M或以下、10-11M或以下、5×10-12M或以下、10-12M或以下、10-12M至10-7M、10-11M至10-7M、10-10M至10-7M、10-9M至10-7M、10-8M至10-7M、10-10M至10-8M、10-9M至10-8M、10-11M至10-9M或10-10M至10-9M。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段以10-11M至5×10-9M的KD结合至人TIM-3。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段以高亲和力，例如，如通过BLI所确定的，以下列KD结合至可溶性人TIM-3：10-7M或以下、10-8M或以下、5×10-9M或以下、10-9M或以下、5×10-10M或以下、10- 10M或以下、5×10-11M或以下、10-11M或以下、5×10-12M或以下、10-12M或以下、10-12M至10-7M、10-11M至10-7M、10-10M至10-7M、10-9M至10-7M、10-8M至10-7、10-10M至10-8M、10-9M至10-8M、10-11M至10-9M或10-10M至10-9M。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段以10-11M至5×10-9M的KD结合至可溶性人TIM-3。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段以下列KD结合至结合的(例如，细胞膜结合的)人TIM-3，如激活的人T细胞上的结合的人TIM-3，例如，如通过流式细胞术和斯卡查德图所确定的：10-7M或以下、10- 8M或以下、5×10-9M或以下、10-9M或以下、5×10-10M或以下、10-10M或以下、5×10-11M或以下、10-11M或以下、5×10-12M或以下、10-12M或以下、10-12M至10-7M、10-11M至10-7M、10-10M至10-7M、10-9M至10-7M、10-8M至10-7、10-10M至10-8M、10-9M至10-8M、10-11M至10-9M或10-10M至10-9M。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段以下列EC50结合至结合的(例如，细胞膜结合的)人TIM-3，如激活的人T细胞上的结合的人TIM-3，例如，如通过流式细胞术所确定的：10μg/mL或以下、5μg/mL或以下、1μg/mL或以下、0.9μg/mL或以下、0.8μg/mL或以下、0.7μg/mL或以下、0.6μg/mL或以下、0.5μg/mL或以下、0.4μg/mL或以下、0.3μg/mL或以下、0.2μg/mL或以下、0.1μg/mL或以下、0.05μg/mL或以下或0.01μg/mL或以下。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段(例如)以下列KD结合至食蟹猴TIM-3：10-7M或以下、10-8M或以下、5×10-9M或以下、10-9M或以下、5×10-10M或以下、10-10M或以下、5×10-11M或以下、10-11M或以下、5×10-12M或以下、10-12M或以下、10-12M至10-7M、10-11M至10-7M、10-10M至10-7M、10-9M至10-7M、10-8M至10-7、10-10M至10-8M、10-9M至10- 8M、10-11M至10-9M或10-10M至10-9M。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段以下列KD结合至可溶性食蟹猴TIM-3，例如，如通过BLI所确定的(例如，如实施例中所述)：10-7M或以下、10-8M或以下、5×10-9M或以下、10-9M或以下、5×10-10M或以下、10-10M或以下、5×10-11M或以下、10-11M或以下、5×10-12M或以下、10-12M或以下、10-12M至10-7M、10-11M至10-7M、10-10M至10-7M、10-9M至10-7M、10-8M至10-7、10-10M至10-8M、10-9M至10-8M、10-11M至10-9M或10-10M至10- 9M。抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以(例如)以100nM或以下、10nM或以下、100nM至0.01nM、100nM至0.1nM、100nM至1nM或10nM至1nM的EC50结合至膜结合的食蟹猴TIM-3，例如，如通过流式细胞术所测量的(例如，如实施例中所述)。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段以下列KD结合至结合的(例如，细胞膜结合的)食蟹猴TIM-3，如激活的人T细胞上的结合的食蟹猴TIM-3，例如，如通过流式细胞术和斯卡查德图所确定的：10-7M或以下、10-8M或以下、5×10-9M或以下、10-9M或以下、5×10-10M或以下、10-10M或以下、5×10-11M或以下、10-11M或以下、5×10-12M或以下、10-12M或以下、10-12M至10-7M、10-11M至10-7M、10-10M至10-7M、10- 9M至10-7M、10-8M至10-7、10-10M至10-8M、10-9M至10-8M、10-11M至10-9M或10-10M至10-9M。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不能可检测地结合至食蟹猴TIM-3。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段刺激或增强获得性免疫应答。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段刺激或增强免疫应答，例如，通过激活T细胞，例如，在肿瘤中通过激活T细胞刺激或增强免疫应答。例如，抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以激活或共刺激细胞，如(例如)通过增强的细胞因子(例如，IFN-γ)分泌和/或增强的增殖所证实的，其可以由TIM-3介导的T细胞抑制活性的抑制所造成。在一些实施方式中，在存在CD3刺激的情况下发生通过TIM-3抗体或抗原结合片段的T细胞激活或共刺激。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体将IFN-γ分泌提高50％、100％(即2倍)、3倍、4倍、5倍或更多倍，任选地提高最大多至10倍、30倍、100倍，如(例如)对原代人T细胞和/或表达人TIM-3的T细胞，如TIL所测量的。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段阻断或降低TIM-3的抑制作用。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段提高表达TIM-3的T细胞(例如，Th1细胞或TIL)中的IFN-γ产生。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段提高表达TIM-3的T细胞(例如，Th1细胞或TIL)的增殖。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段在混合淋巴细胞反应(MLR)测定中刺激T细胞增殖。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段刺激或增强先天性免疫应答。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段诱导或刺激骨髓细胞，如树突状细胞、巨噬细胞或单核细胞的激活。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段降低或抑制TIM-3-介导的骨髓细胞，如树突状细胞、巨噬细胞或单核细胞的抑制。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段降低或抑制TIM-3-介导的炎性体激活的调控或抑制。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段诱导或刺激炎性体-激活的细胞因子，如IL-18和可溶性CD25的产生。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段诱导或刺激通过单核细胞/巨噬细胞激活所产生的炎性细胞因子的产生，所述炎性细胞因子如人IL-1β、IL-18、IL-6、TNFα或颗粒溶素。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段诱导或刺激Treg效应分子，如IL-10和穿孔素的产生。
在一些实施方式中，当结合至细胞上的TIM-3时，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段内化或下调细胞表面TIM-3。在一些实施方式中，当结合至免疫细胞，例如，CD4+、CD8+T细胞、Th1细胞、NK细胞、NKT细胞、骨髓细胞(例如，树突状细胞、巨噬细胞或单核细胞)或TIL上的TIM-3时，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段内化或下调细胞表面TIM-3。在一些实施方式中，当结合至T细胞上的TIM-3时，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段内化或下调细胞表面TIM-3。在一些实施方式中，当结合至NK细胞上的TIM-3时，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段内化或下调细胞表面TIM-3。在一些实施方式中，当结合至肿瘤细胞上的TIM-3时，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段内化或下调细胞表面TIM-3。在一些实施方式中，当结合至肿瘤细胞上的TIM-3时，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段不内化或下调细胞表面TIM-3。
在一些实施方式中，本文所提供的抗体或抗原结合片段结合至TIM-3配体所结合的TIM-3上的位点。在一些实施方式中，本文所提供的抗体或抗原结合片段阻断TIM-3和TIM-3配体之间的相互作用，其中所述TIM-3配体是PtdSer、HMGB1、CEACAM-1或它们的任意组合。在一些实施方式中，TIM-3配体是PtdSer，并且本文所提供的抗体或抗原结合片段结合至PtdSer所结合的TIM-3上的位点。在一些实施方式中，本文所提供的抗体或抗原结合片段阻断PtdSer与TIM-3的相互作用。在一些实施方式中，TIM-3配体是CEACAM-1，并且本文所提供的抗体或抗原结合片段结合至CEACAM-1所结合的TIM-3上的位点。在一些实施方式中，本文所提供的抗体或抗原结合片段阻断CEACAM-1与TIM-3的相互作用。在一些实施方式中，TIM-3配体是HMGB1，并且本文所提供的抗体或抗原结合片段结合至HMGB1所结合的TIM-3上的位点。在一些实施方式中，本文所提供的抗体或抗原结合片段阻断HMGB1与TIM-3的相互作用。在一些实施方式中，例如，在使用被人TIM-3转染的CHO细胞或表达TIM-3的激活的T细胞的结合测定中，本文所提供的抗体或抗原结合片段以(在本领域承认的方法，例如，FACS-基结合测定中的)下列EC50抑制TIM-3与其配体(例如，PtdSer)的结合：约1μg/mL或以下，如约0.9pg/mL或以下、约0.85pg/mL或以下、约0.8pg/mL或以下、约0.75pg/mL或以下、约0.7pg/mL或以下、约0.65pg/mL或以下、约0.6pg/mL或以下、约0.55pg/mL或以下、约0.5pg/mL或以下、约0.45pg/mL或以下、约0.4pg/mL或以下、约0.35pg/mL或以下、约0.3pg/mL或以下、约0.25pg/mL或以下、约0.2pg/mL或以下、约0.15pg/mL或以下、约0.1pg/mL或以下或约0.05pg/mL或以下。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段抑制磷脂酰丝氨酸与TIM-3的结合，例如，如通过PS-hTIM-3“串联”阻断测定所测量的。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段抑制PtdSer与细胞，例如，CHO细胞或者表达人TIM-3的激活的T细胞上的人TIM-3的结合，例如，其EC50为10pg/mL或以下、1pg/mL或以下、0.01pg/mL至10pg/mL、0.1pg/mL至10pg/mL或者0.1pg/mL至1pg/mL。
因此，如根据本领域已知的和本文所描述的方法所确定的，将理解显示出这些功能性质(例如，生物化学、免疫化学、细胞、生理学或其它生物学活性等)中的一种或多种的抗TIM-3抗体或抗原结合片段相对于在不存在所述抗体的情况下所观察到的(例如，或者当存在具有不相关的特异性的对照抗体时)结果，在特定活性中显示出统计学显著的差异。在一些实施方式中，在给定测定中，在所测量的参数(例如，T细胞增殖、细胞因子产生)中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段所引起的升高实现了所测量的参数的至少10％，例如，至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％(即2倍)、3倍、5倍或10倍的统计学显著的升高，并且在一些实施方式中，相对于在不存在所述抗体的情况下所实施的相同测定，本文所描述的抗体可以将所测量的参数提高(例如)大于92％、94％、95％、97％、98％、99％、100％(即2倍)、3倍、5倍或10倍。相反地，在给定测定中，在所测量的参数(例如，肿瘤体积、TIM-3配体与人TIM-3的结合)中，抗TIM-3抗体-所引起的降低实现了所测量的参数的至少10％，例如，至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的统计学显著的降低，并且在一些实施方式中，相对于在不存在所述抗体的情况下所实施的相同测定，本文所描述的抗体可以使所测量的参数降低(例如)大于92％、94％、95％、97％、98％或99％。
在一些实施方式中，如(例如)在CHO-OKT3-CD32：T细胞共培养实验中的抗TIM-3抗体的交联中所确定的，抗TIM-3抗体不具有激动剂活性，其中这些抗体不会将活性增强超过单独的抗TIM-3。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体阻断TIM-3与其配体的相互作用而不会促进激动剂活性。
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体增强从用脂多糖(LPS)处理的单核细胞或树突状细胞的IL-12的产生。
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体通过组合处理使共表达PD-1和TIM-3的肿瘤浸润CD8+T细胞复苏，因此避免了CD8+T细胞的耗尽。
可以通过本领域中已知的多种方法分析抗TIM-3抗体或抗原结合片段它们的物理、化学和/或生物学性质。在一些实施方式中，测试了抗TIM-3抗体其结合TIM-3(例如，人TIM-3)的能力。结合测定包括(但不限于)BLI、SPR(例如，Biacore)、ELISA、FACS、蛋白印迹和RIA。另外，可以评价抗体的溶解度、稳定性、热稳定性、粘度、表达水平、表达质量和/或纯化效率。在下文和实施例中进一步详细描述了评价抗体对TIM-3的功能性质(例如，配体结合、T细胞增殖、细胞因子产生)的影响的测定。
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体不是天然抗体或者是非天然存在的抗体。例如，抗TIM-3抗体具有不同于天然存在的抗体的那些的翻译后修饰，如具有更多、更少或不同类型的翻译后修饰。
在一些实施方式中，天然或通过干预化学修饰本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，已通过糖基化、乙酰化、PEG化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解切割和/或与细胞配体或其它蛋白键合化学修饰了抗TIM-3抗体或抗原结合片段。可以通过已知技术进行任何多种化学修饰。抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以包含氨基酸的一种或多种类似物(包括，例如，非天然氨基酸)以及本领域中已知的其它修饰。
在一些实施方式中，将抗TIM-3抗体或抗原结合片段缀合至细胞毒性剂或部分。在一些实施方式中，将抗TIM-3抗体或抗原结合片段缀合至细胞毒性剂以形成ADC(抗体-药物缀合物)。在一些实施方式中，细胞毒性部分是化疗剂，其包括(但不限于)甲氨蝶呤、阿霉素/多柔比星、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、倍癌毒素、柔红霉素、吡咯并苯二氮卓(PBD)或者其它插入剂。在一些实施方式中，所述细胞毒性部分是微管抑制剂，其包括(但不限于)奥瑞他汀、美登素(例如，DM1和DM4)和微管溶素(tubulysin)。在一些实施方式中，所述细胞毒性部分是细菌、真菌、植物或动物来源的酶促活性毒素或其片段，其包括(但不限于)白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链、篦麻毒素A链、相思豆毒蛋白A链、蒴莲素(modeccin)A链、alpha-八叠球菌素、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordica charantia)抑制剂、泻果素、巴豆毒蛋白、肥皂草(Sapaonaria officinalis)抑制剂、白树毒素、丝裂吉菌素(mitogellin)、局限曲菌素、酚霉素、伊诺霉素和单端孢霉烯。在一些实施方式中，将抗体缀合至一种或多种小分子毒素，如卡里奇霉素(calicheamicin)、美登素、单端孢霉烯(trichothenes)和CC1065。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段缀合至可检测物质或分子，这些物质或分子允许所述试剂用于诊断和/或检测。可检测物质可以包括(但不限于)酶，如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和乙酰胆碱酯酶；辅基，如生物素和黄素；荧光物质，如伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素(FITC)、罗丹明、四甲基罗丹明异硫氰酸盐(TRITC)、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯、菁(Cy3)和藻红蛋白；生物发光材料，如荧光素酶；放射性物质，如212Bi、14C、57Co、51Cr、67Cu、18F、68Ga、67Ga、153Gd、159Gd、68Ge、3H、166Ho、131I、125I、123I、121I、115In、113In、112In、111In、140La、177Lu、54Mn、99Mo、32P、103Pd、149Pm、142Pr、186Re、188Re、105Rh、97Ru、35S、47Sc、75Se、153Sm、113Sn、117Sn、85Sr、99mTc、201Ti、133Xe、90Y、69Yb、175Yb、65Zn；正电子发射金属；和磁性金属离子正电子发射金属；和磁性金属离子。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以是双重特异性分子或者多重特异性分子，如双重特异性抗体或多重特异性抗体。可以将单特异性抗TIM-3抗体或其抗原结合部分衍生化或连接至另一个结合部分，例如，另一个肽或蛋白质(例如，受体的另一个抗体或配体)以产生结合至至少两种不同结合位点或靶标分子的双重特异性分子。例如，抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以连接至特异性结合至可以用作组合治疗的潜在靶标的任何蛋白质，如本文所描述的蛋白质的抗体或scFv。所述第二靶标可以是PD-1、PD-L1、CEACAM1、CEACAM5、GITR或LAG-3。事实上，可以将本文所描述的抗体和抗原结合片段衍生化或连接至大于一种其它官能分子以产生具有大于两种不同结合位点并且结合至大于两种靶标分子的多重特异性分子。为了产生本文所描述的双重特异性分子(例如，双重特异性抗体)，本文所描述的抗体可以功能连接(例如，通过化学偶联、基因融合、非共价键结合或其它方法)至一种或多种其它结合分子，如另一种抗体、抗原结合片段、肽或结合模拟物，从而获得双重特异性分子。
因此，本文提供了双重特异性分子(例如，双重特异性抗体)，所述双重特异性分子包含至少对TIM-3的第一结合特异性和对第二靶标抗原的第二结合特异性。在一些实施方式中，本文提供了多重特异性分子(例如，多重特异性抗体)，所述多重特异性分子可以进一步包括第三结合特异性。
在一些实施方式中，本文所描述的双重特异性分子作为结合特异性包含至少一种抗体或其抗体片段，包括(例如)Fab、Fab'、F(ab')2、Fv或单链Fv(scFv)。所述抗体还可以是轻链或重链二聚体或其任何最小片段，如Fv或单链构建体，如美国专利No.4,946,778中所述。
尽管人或人源化单克隆抗体是优选的，但是可以用于本文所描述的双重特异性分子的其它抗体是鼠科和嵌合单克隆抗体。
可以使用本领域中已知的方法通过缀合组成结合特异性来制备本文所描述的双重特异性分子。例如，可以分开产生所述双重特异性分子的每种结合特异性，然后彼此缀合。当所述结合特异性是蛋白或肽时，多种偶联剂或交联剂可以用于共价缀合。交联剂的实例包括蛋白A、碳二亚胺、N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基-硫代乙酸酯(SATA)、5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、o-苯二马来酰亚胺(oPDM)、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)和硫代琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-l-羧酸酯(磺基-SMCC)(参见，例如，Karpovsky等人(1984)J.Exp.Med.160:1686；Liu,MA等人(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:8648)。其它方法包括以下中描述的那些方法：Paulus(1985)Behring Ins.Mitt.No.78,118-132；Brennan等人(1985)Science 229:81-83和Glennie等人(1987)J.Immunol.139:2367-2375。一些缀合试剂为SATA和磺基-SMCC，两者均得自Pierce Chemical Co.(Rockford,IL)。
当所述结合特异性为抗体时，它们可以经由两条重链的C-末端铰链区的巯基键合进行缀合。在一些实施方式中，在缀合前，修饰所述铰链区以包含奇数个巯基残基，优选地，一个巯基残基。
作为另外一种选择，可以在相同载体中编码两种结合特异性并在相同宿主细胞中表达和组装。当双重特异性分子为mAb×mAb、mAb×Fab、mAb×(scFv)2、Fab×F(ab')2或配体×Fab融合蛋白时，这种方法特别有用。双重特异性抗体可以包含在每条重链的C-末端包含scFv的抗体。本文所描述的双重特异性分子可以是包含一个单链抗体和结合决定簇的单链分子，或者包含两个结合决定簇的单链双重特异性分子。双重特异性分子可以包含至少两个单链分子。用于制备双重特异性分子的方法(例如)描述于美国专利号No.5,260,203；美国专利号No.5,455,030；美国专利号No.4,881,175；美国专利号No.5,132,405；美国专利号No.5,091,513；美国专利号No.5,476,786；美国专利号No.5,013,653；美国专利号No.5,258,498；和美国专利号No.5,482,858。
可以使用本领域承认的方法确认双重特异性分子对它们的特异性靶标的结合，所述方法如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、FACS分析、生物鉴定(例如，生长抑制)或者蛋白印迹测定。这些测定中的每一种通常通过使用对所关心的复合物特异的标记的试剂(例如，抗体)检测特别关心的蛋白-抗体复合物的存在。
本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以连接至固体载体。这些固体载体包括(但不限于)玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。在一些实施方式中，在免疫测定中使用固定化的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，将固定化的抗TIM-3抗体或抗原结合片段用于靶标抗原(例如，人TIM-3)的纯化。
5.3多核苷酸和载体
本文还提供了编码本文所描述的多肽(例如，抗TIM-3抗体或抗原结合片段)的多核苷酸。术语“编码多肽的多核苷酸”涵盖了仅包括多肽的编码序列的多核苷酸以及包括其它编码和/或非编码序列的多核苷酸。本发明公开的多核苷酸可以处于RNA的形式或处于DNA的形式。DNA可以是cDNA、基因组DNA或合成DNA，并且可以是双链或单链的。单链DNA可以是编码链或非编码(反义)链。本发明公开的多核苷酸可以是mRNA。
本文明确考虑了编码本文所公开的任何抗TIM-3抗体或抗原结合片段的多核苷酸。出于说明性的目的，在一些实施方式中，本文所提供的多核苷酸编码抗TIM-3抗体或抗原结合片段，所述抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包含(1)具有选自SEQ IDNO：86-93和129-137的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有选自SEQ ID NO：94-100和138-144的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有选自SEQ ID NO：47-55、145-153和198-206的氨基酸序列的VL CDR3；或其在VL CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体；和/或(b)VH，所述VH包含(1)具有选自SEQ ID NO：101-108和154-161的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自SEQ ID NO：109-118和162-170的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有选自SEQ ID NO：119-128和171-179的氨基酸序列的VH CDR3；或其在VH CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。在一些实施方式中，本文所提供的多核苷酸编码抗TIM-3抗体或抗原结合片段，所述抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包含(1)具有选自SEQ IDNO：31-38的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有选自SEQ ID NO：39-46的氨基酸序列的VLCDR2；和(3)具有选自SEQ ID NO：47-55的氨基酸序列的VL CDR3；或其在VL CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体；和/或(b)VH，所述VH包含(1)具有选自SEQ IDNO：56-63的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自SEQ ID NO：64-73的氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有选自SEQ ID NO：74-83的氨基酸序列的VH CDR3；或其在VH CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
在一些实施方式中，本文所提供的多核苷酸编码抗TIM-3抗体或抗原结合片段，所述抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含(a)VL，所述VL与选自SEQ ID NO：1-10、21、180-188和207-215的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性；和/或(b)VH，所述VH与选自SEQ ID NO：11-20、22-29和189-197的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。所述多核苷酸可以处于DNA形式。所述多核苷酸可以处于mRNA形式。
在一些实施方式中，本文所提供的多核苷酸编码本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段，所述抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VL和VH，其中VL包含VL CDR1、CDR2和CDR3并且VH包含VH CDR1、CDR2和CDR3，并且其中VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3分别具有(1)由SEQ ID NO：86、94、47、101、109和119；(2)由SEQ ID NO：87、95、48、102、110和120；(3)由SEQ ID NO：88、96、49、103、111和121；(4)由SEQ ID NO：89、97、50、104、112和122；(5)由SEQ ID NO：90、94、51、105、113和123；(6)由SEQ ID NO：91、98、52、106、114和124；(7)由SEQ ID NO：91、98、53、106、115和125；(8)由SEQ ID NO：92、99、54、107、116和126；(9)由SEQ ID NO：93、100、55、108、117和127；(10)由SEQ ID NO：91、98、52、106、118和128；(11)由SEQ ID NO：129、138、145、106、162和171；(12)由SEQ ID NO：130、139、146、154、163和172；(13)由SEQ ID NO：131、140、147、155、164和173；(14)由SEQ IDNO：132、141、148、156、165和174；(15)由SEQ ID NO：133、139、149、157、166和175；(16)由SEQ ID NO：134、142、150、158、167和176；(17)由SEQ ID NO：135、143、151、159、168和177；(18)由SEQ ID NO：136、144、152、160、169和178；(19)由SEQ ID NO：137、100、153、161、170和179；(20)由SEQ ID NO：86、94、198、101、109和119；(21)由SEQ ID NO：86、94、199、101、109和119；(22)由SEQ ID NO：86、94、200、101、109和119；(23)由SEQ ID NO：86、94、201、101、109和119；(24)由SEQ ID NO：86、94、202、101、109和119；(25)由SEQ ID NO：86、94、203、101、109和119；(26)由SEQ ID NO：86、94、204、101、109和119；(27)由SEQ ID NO：86、94、205、101、109和119；或(28)由SEQ ID NO：86、94、206、101、109和119所示的氨基酸序列；或其在CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。所述多核苷酸可以处于DNA形式。所述多核苷酸可以处于mRNA形式。
在一些实施方式中，本文所提供的多核苷酸编码本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段，所述抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VL和VH，其中VL包含VL CDR1、CDR2和CDR3并且VH包含VH CDR1、CDR2和CDR3，并且其中VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3分别具有(1)由SEQ ID NO：31、39、47、56、64和74；(2)由SEQ ID NO：32、40、48、57、65和75；(3)由SEQ ID NO：33、41、49、58、66和76；(4)由SEQ ID NO：34、42、50、59、67和77；(5)由SEQ ID NO：35、43、51、60、68和78；(6)由SEQ ID NO：36、44、52、61、69和79；(7)由SEQ ID NO：36、44、53、61、70和80；(8)由SEQ ID NO：37、45、54、62、71和81；(9)由SEQ IDNO：38、46、55、63、72和82；或(10)由SEQ ID NO：36、44、52、61、73和83所示的氨基酸序列；或其在CDR中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。所述多核苷酸可以处于DNA形式。所述多核苷酸可以处于mRNA形式。
在一些实施方式中，本文所提供的多核苷酸编码本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段，所述抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VL和VH，其中VL和VH分别具有(1)由SEQID NO：1和11；(2)由SEQ ID NO：2和12；(3)由SEQ ID NO：3和13；(4)由SEQ ID NO：4和14；(5)由SEQ ID NO：5和15；(6)由SEQ ID NO：6和16；(7)由SEQ ID NO：7和17；(8)由SEQ IDNO：8和18；(9)由SEQ ID NO：9和19；(10)由SEQ ID NO：10和20；(11)由SEQ ID NO：180和189；(12)由SEQ ID NO：181和190；(13)由SEQ ID NO：182和191；(14)由SEQ ID NO：183和192；(15)由SEQ ID NO：184和193；(16)由SEQ ID NO：185和194；(17)由SEQ ID NO：186和195；(18)由SEQ ID NO：187和196；或(19)由SEQ ID NO：188和197所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本文所提供的多核苷酸编码本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段，所述抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VL和VH，其中VL具有选自SEQ ID NO：21和207-215的氨基酸序列，且VH具有选自SEQ ID NO：22-29的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL和VH分别具有(1)由SEQ ID NO：21和28(或22、23、24、25、26、27或29)；(2)由SEQ IDNO：207和28(或22、23、24、25、26、27或29)；(3)由SEQ ID NO：208和28(或22、23、24、25、26、27或29)；(4)由SEQ ID NO：209和28(或22、23、24、25、26、27或29)；(5)由SEQ ID NO：210和28(或22、23、24、25、26、27或29)；(6)由SEQ ID NO：211和28(或22、23、24、25、26、27或29)；(7)由SEQ ID NO：212和28(或22、23、24、25、26、27或29)；(8)由SEQ ID NO：213和28(或22、23、24、25、26、27或29)；(9)由SEQ ID NO：214和28(或22、23、24、25、26、27或29)；(10)由SEQID NO：215和28(或22、23、24、25、26、27或29)所示的氨基酸序列。所述多核苷酸可以处于DNA形式。所述多核苷酸可以处于mRNA形式。
在一些实施方式中，通过连接子连接所述VL和VH。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列(GGGGS)n，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO：216)。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列(EAAAK)n，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO：217)。在一些实施方式中，所述连接子具有氨基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)。
在一些实施方式中，本文所提供的多核苷酸编码本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段，所述抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VL，所述VL与选自SEQ ID NO：1-10、21、180-188和207-215的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。还提供了杂交至具有编码本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的核苷酸序列的多核苷酸的多核苷酸，所述抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VL，所述VL与选自SEQ ID NO：1-10、21、180-188和207-215的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。在一些实施方式中，本文所提供的多核苷酸编码本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段，所述抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VH，所述VH与选自SEQ ID NO：11-20、22-29和189-197的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。还提供了杂交至具有编码本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的核苷酸序列的多核苷酸的多核苷酸，所述抗TIM-3抗体或抗原结合片段包含VH，所述VH与选自SEQ ID NO：11-20、22-29和189-197的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。在一些实施方式中，杂交处于如本领域技术人员已知的高严格性条件下。所述多核苷酸可以处于DNA形式。所述多核苷酸可以处于mRNA形式。
本发明公开还提供了本文所描述的多核苷酸的变体，其中所述变体编码(例如)本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的片段、类似物和/或衍生物。在一些实施方式中，本发明公开提供了具有与编码本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的多核苷酸序列具有至少约80％的同一性、至少约85％的同一性、至少约90％的同一性、至少约95％的同一性、至少约96％的同一性、至少约97％的同一性、至少约98％的同一性或者至少约99％的同一性的核苷酸序列的多核苷酸。在一些实施方式中，本发明公开提供了具有与编码本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的多核苷酸序列具有至少约80％的同一性、至少约85％的同一性、至少约90％的同一性、至少约95％的同一性、至少约96％的同一性、至少约97％的同一性、至少约98％的同一性或者至少约99％的同一性的核苷酸序列的多核苷酸。
如本文所使用的，短语“具有与多核苷酸序列具有至少约95％的同一性的核苷酸序列的多核苷酸”表示所述多核苷酸的核苷酸序列与参考序列相同，除了所述多核苷酸序列可以在参考核苷酸序列的每100个核苷酸中包括至多5个点突变。换言之，为了获得具有与参考核苷酸序列具有至少95％的同一性的核苷酸序列的多核苷酸，可以使所述参考序列中至多5％的核苷酸缺失或被另一种核苷酸取代，或者可以将参考序列中至多5％的总核苷酸的一些核苷酸插入所述参考序列。参考序列的这些突变可以发生在参考核苷酸序列的5'或3'末端位置或者那些末端位置之间的任何地方，单独散布在参考序列中的核苷酸中或者参考序列内的一个或多个邻接基团中。
所述多核苷酸变体可以在编码区、非编码区或两者中含有改变。在一些实施方式中，多核苷酸变体含有产生沉默替换、添加或缺失，但不改变编码多肽的性质或活性的改变。在一些实施方式中，多核苷酸变体包含导致多肽的氨基酸序列不变的沉默替换(由于遗传密码的简并度)。出于多种原因，可以产生多核苷酸变体，例如，以对于特定宿主优化密码子表达(例如，将人mRNA中的密码子改变为细菌宿主，如大肠杆菌(E.coli)优选的那些)。在一些实施方式中，多核苷酸变体包含所述序列的非编码或编码区中的至少一个沉默突变。
在一些实施方式中，产生多核苷酸变体以调节或改变所述编码多肽的表达(或表达水平)。在一些实施方式中，产生多核苷酸变体以提高编码多肽的表达。在一些实施方式中，产生多核苷酸变体以减小编码多肽的表达。在一些实施方式中，与亲代多核苷酸序列相比，多核苷酸变体具有提高的编码多肽的表达。在一些实施方式中，与亲代多核苷酸序列相比，多核苷酸变体具有减小的编码多肽的表达。
在一些实施方式中，多核苷酸包含在相同阅读框中与辅助多肽从宿主细胞表达和分泌的多核苷酸(例如，起到用于控制多肽转运的分泌序列的作用的前导序列)融合的多肽(例如，抗体)的编码序列。所述多肽可以具有通过宿主细胞切割以形成多肽的“成熟”形式的前导序列。
在一些实施方式中，多核苷酸包含在相同阅读框中与标志物或标签序列融合的多肽(例如，抗体)的编码序列。例如，在一些实施方式中，标志物序列是六组氨酸标签(HIS-标签)，其使得融合至所述标志物的多肽能够被有效纯化。在一些实施方式中，当使用哺乳动物宿主(例如，COS-7细胞)时，标志物序列是来源于流感血球凝集素蛋白的血球凝集素(HA)标签。在一些实施方式中，所述标志物序列是FLAGTM标签。在一些实施方式中，可以结合其它标志物或标签使用标志物。
在一些实施方式中，多核苷酸是分离的。在一些实施方式中，多核苷酸是基本纯的。
还提供了包含本文所描述的多核苷酸的载体和细胞。在一些实施方式中，本文提供了包含本文所提供的多核苷酸的载体。所述载体可以是表达载体。在一些实施方式中，本文所提供的载体包含编码本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的多核苷酸。在一些实施方式中，本文所提供的载体包含编码作为本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的一部分的多肽的多核苷酸。
在一些实施方式中，本文提供了重组表达载体，其可以用于扩增和表达编码本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的多核苷酸。例如，重组表达载体可以是可复制DNA构建体，其包括编码抗TIM-3抗体的多肽链的合成或cDNA-来源的DNA片段，其可操作性连接至来源于哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因的适合的转录和/或翻译调控元件。在一些实施方式中，使用病毒载体。当它们在功能上彼此相关时，DNA区是“可操作性连接的”。例如，如果它控制序列转录，则启动子可操作性连接至编码序列；或者如果它的定位使得能够翻译，则核糖体结合位点可操作性连接至编码序列。在一些实施方式中，设计用于在某些表达系统中使用的结构元件包括前导序列，其使得宿主细胞能够胞外分泌翻译的蛋白。在一些实施方式中，在其中在无前导序列或转运序列的情况下表达重组蛋白的情况下，多肽可以包括N末端蛋氨酸残基。
可以使用各式各样的表达宿主/载体组合。对于真核宿主有用的表达载体包括(例如)包含来自SV40、牛乳头状瘤病毒、腺病毒和巨细胞病毒的表达控制序列的载体。对于细菌宿主有用的表达载体包括已知的细菌质粒，如来自大肠杆菌(E.coli)的质粒，包括pCR1、pBR322、pMB9和它们的衍生物，以及更宽的宿主范围质粒，如M13及其它丝状单链DNA噬菌体。
在一些实施方式中，从一种或多种载体表达本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。适合于表达的宿主细胞包括受适当启动子控制的原核生物、酵母细胞、昆虫细胞或高等真核细胞。适合于与细菌、真菌、酵母和哺乳动物细胞宿主一起使用的克隆和表达载体以及蛋白质生产，包括抗体生产的方法在本领域中是熟知的。
适合的哺乳动物宿主细胞系的实例包括(但不限于)COS-7(猴肾-来源的)、L-929(鼠成纤维细胞-来源的)、C127(鼠乳腺肿瘤-来源的)、3T3(鼠成纤维细胞-来源的)、CHO(中国仓鼠卵巢-来源的)、HeLa(人宫颈癌-来源的)、BHK(仓鼠肾成纤维细胞-来源的)、HEK-293(人胚肾-来源的)细胞系及其变体。哺乳动物表达载体可以包含非转录元件，如复制起点、连接至要表达的基因的适合的启动子和增强子以及其它5'或3'侧接的非转录序列，和5'或3'非翻译序列，如必需的核糖体结合位点、多腺苷酸化位点、剪接供体和受体位点以及转录终止序列。重组蛋白在昆虫细胞培养系统(例如，杆状病毒)中的表达还提供了用于产生正确折叠的和具有生物学功能的蛋白的稳健方法。用于在昆虫细胞中产生异源蛋白质的杆状病毒系统是本领域技术人员熟知的。
本发明公开还提供了包含本文所描述的多肽、编码本文所描述的多肽的多核苷酸或者包含这些多核苷酸的载体的宿主细胞。在一些实施方式中，本文提供了宿主细胞，所述宿主细胞包含含有本文所公开的多核苷酸的载体。在一些实施方式中，本文所提供的宿主细胞包含载体，所述载体包含编码本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的多核苷酸。在一些实施方式中，本文所提供的宿主细胞包含载体，所述载体包含编码作为本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的一部分的多肽的多核苷酸。在一些实施方式中，本文所提供的宿主细胞包含编码本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的多核苷酸。在一些实施方式中，所述细胞产生本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。
5.4生产方法
可以使用任何本领域已知且可用的大家公认的技术制备、操纵和/或表达本文所提供的多核苷酸。可以使用多种载体。载体的实例是质粒、自主复制序列和转位因子。可以使用示例性转座子系统，如睡美人(Sleeping Beauty)和PiggyBac，其可以稳定整合到基因组中(例如，Ivics等人,Cell,91(4):501–510(1997)；等人,(2007)NucleicAcids Research.35(12):e87)。其它示例性载体无限制地包括质粒、噬粒、粘粒、人工染色体，如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1-来源的人工染色体(PAC)、噬菌体，如λ噬菌体或M13噬菌体，和动物病毒。作为载体有用的动物病毒类别的实例无限制地包括反转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺病毒相关病毒、疱疹病毒(例如，单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头状瘤病毒和乳多空病毒(例如，SV40)。表达载体的实例为用于在哺乳动物细胞中表达的pClneo载体(Promega)；用于慢病毒-介导的基因转移和在哺乳动物细胞中的表达的pLenti4/V5-DESTTM、pLenti6/V5-DESTTM和pLenti6.2/V5-GW/lacZ(Invitrogen)。
在一些实施方式中，所述载体是游离基因载体或者染色体外维持的载体。如本文所使用的，术语“游离基因的”是指能够复制，但不整合到宿主染色体DNA且不会从分裂宿主细胞中逐渐失去的载体，还表示所述载体染色体外或游离基因复制。将所述载体工程化以具有编码来自嗜淋巴细胞疱疹病毒或γ疱疹病毒、腺病毒、SV40、牛乳头状瘤病毒或酵母的DNA复制起点或“ori”，具体地对应于EBV的oriP的嗜淋巴细胞疱疹病毒或γ疱疹病毒的复制起点的序列。在一些实施方式中，所述嗜淋巴细胞疱疹病毒可以是爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)、卡波济氏肉瘤疱疹病毒(KSHV)、松鼠猴疱疹病毒(HS)或者马立克氏病病毒(MDV)。爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)和卡波济氏肉瘤疱疹病毒(KSHV)也是γ疱疹病毒的实例。通常，所述宿主细胞包含激活复制的病毒复制反式激活因子蛋白。
存在于表达载体中的“表达控制序列”、“控制元件”或“调控序列”是那些载体非翻译区——复制起点、选择盒、启动子、增强子、翻译起始信号(核糖体结合位点序列或者Kozak序列)内含子、多腺苷酸化序列、5'和3'未翻译区——它们与宿主细胞蛋白相互作用以进行转录和翻译。这些元件的强度和特异性可以不同。根据所使用的载体系统和宿主，可以使用任何数目的适合的转录和翻译元件，包括泛在启动子和诱导型启动子。
可以用于本发明公开的说明性的普遍存在的表达控制序列包括(但不限于)巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、病毒猿猴病毒40(SV40)启动子(例如，早期或晚期)、莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)LTR启动子、劳氏肉瘤病毒(RSV)LTR、单纯疱疹病毒(HSV)(胸苷激酶)启动子、H5、P7.5和来自牛痘病毒的P11启动子、延伸因子1-α(EF1a)启动子、早期生长应答1(EGR1)、铁蛋白H(FerH)、铁蛋白L(FerL)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)、热冲击70kDa蛋白5(HSPA5)、热休克蛋白90kDaβ，成员1(HSP90B1)、热休克蛋白70kDa(HSP70)、β-驱动蛋白(β-KIN)、人ROSA 26基因座(Irions等人,NatureBiotechnology 25,1477-1482(2007))、泛素C启动子(UBC)、磷酸甘油酸激酶-1(PGK)启动子、巨细胞病毒增强子/鸡β-肌动蛋白(CAG)启动子和β-肌动蛋白启动子。
诱导型启动子/系统的说明性实例包括(但不限于)类固醇-诱导型启动子，如用于编码糖皮质激素或雌激素受体的基因的启动子(通过用相应激素处理可诱导)、金属硫蛋白启动子(通过用多种重金属处理可诱导)、MX-1启动子(通过干扰素可诱导)、“GeneSwitch”米非司酮-可调控系统(Sirin等人,2003,Gene,323:67)、cumate诱导型基因开关(WO 2002/088346)、四环素依赖性调控系统等。可以通过本领域中已知的任何方法，包括化学合成和重组表达技术产生本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。除非另外说明，否则本发明的实践使用了分子生物学、微生物学、基因分析、重组DNA、有机化学、生物化学、PCR、寡核苷酸合成和修饰、核酸杂交以及本领域技术范围内的相关领域中的常规技术。在本文引用的参考文献中描述了这些技术并且它们在文献中得到了全面解释。参见，例如，Maniatis等人(1982)Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor LaboratoryPress；Sambrook等人(1989),Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第2版,ColdSpring Harbor Laboratory Press；Sambrook等人(2001)Molecular Cloning:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Ausubel等人,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons(1987以及年度更新版)；Current Protocols in Immunology,John Wiley&Sons(1987以及年度更新版)；Gait(主编)(1984)Oligonucleotide Synthesis:APractical Approach,IRL Press；Eckstein(主编)(1991)Oligonucleotides and Analogues:A Practical Approach,IRLPress；Birren等人(主编)(1999)Genome Analysis:A Laboratory Manual,Cold SpringHarbor Laboratory Press；Borrebaeck(主编)(1995)Antibody Engineering,第2版,Oxford University Press；Lo(主编)(2006)Antibody Engineering:Methods andProtocols(Methods in Molecular Biology)；第248卷,Humana Press,Inc；以上每篇文献以其全部内容作为参考并入本文。
可以使用本领域中已知的方法产生和分离本文所描述的多肽(例如，抗TIM-3抗体或抗原结合片段)。可以使用化学法完全或部分合成肽(参见，例如，Caruthers(1980)Nucleic Acids Res.Symp.Ser.215；Horn(1980)；和Banga,A.K.,Therapeutic Peptidesand Proteins,Formulation,Processing and Delivery Systems(1995)TechnomicPublishing Co.,Lancaster,PA)。可以使用多种固相技术进行肽合成(参见，例如，Roberge,Science 269:202(1995)；Merrifield,Methods.Enzymol.289:3(1997))并且，例如，根据生产商的说明，使用ABI 431A肽合成仪(Perkin Elmer)可以实现自动合成。还可以使用组合方法合成肽。可以使用本领域中已知的多种程序和方法合成这些合成的残基和多肽(参见，例如，Organic Syntheses Collective Volumes,Gilman等人(主编)John Wiley&Sons,Inc.,NY)。可以通过化学修饰方法产生修饰的肽(参见，例如，Belousov,NucleicAcids Res.25:3440(1997)；Frenkel,Free Radic.Biol.Med.19:373(1995)；和Blommers,Biochemistry 33:7886(1994))。还可以使用如寡核苷酸-介导的(定点)突变、丙氨酸扫描和PCR基突变的方法来进行肽序列改变、衍生、替换和修饰。定点突变(Carter等人,Nucl.Acids Res.,13:4331(1986)；Zoller等人,Nucl.Acids Res.10:6487(1987))、盒式诱变(Wells等人,Gene 34:315(1985))、限制选择突变(Wells等人,Philos.Trans.R.Soc.London SerA 317:415(1986))及其它技术可以实施于克隆的DNA以产生本发明的肽序列、变体、融合体和嵌合体及其改变、衍生物、替换和修饰。
可以使用本领域中已知的多种技术制备本文所描述的多肽，所述技术包括杂交瘤和重组技术的使用或它们的组合。在一些实施方式中，将重组表达载体用于表达编码本文所描述的多肽的多核苷酸。例如，重组表达载体可以是可复制DNA构建体，其包括编码多肽的合成或cDNA-来源的DNA片段，其可操作性连接至来源于哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因的适合的转录和/或翻译调控元件。在一些实施方式中，本文所公开的多肽的编码序列可以连接至这类表达载体以用于它们在哺乳动物细胞中的表达。在一些实施方式中，使用病毒载体。当它们在功能上彼此相关时，DNA区是“可操作性地连接的”。例如，如果它控制序列转录，则启动子可操作性连接至编码序列；或者如果它的定位使得能够翻译，则核糖体结合位点可操作性连接至编码序列。在一些实施方式中，设计用于在酵母表达系统中使用的结构元件包括前导序列，其使得宿主细胞能够胞外分泌翻译的蛋白。在一些实施方式中，在其中在无前导序列或转运序列的情况下表达重组蛋白的情况下，多肽可以包括N末端蛋氨酸残基。
可以使用各式各样的表达宿主/载体组合。适合于表达的宿主细胞包括受适当启动子控制的原核生物、酵母细胞、昆虫细胞或高等真核细胞。适合于与细菌、真菌、酵母和哺乳动物细胞宿主一起使用的克隆和表达载体以及蛋白质生产，包括抗体生产的方法在本领域中是熟知的。对于细菌宿主有用的表达载体包括已知的细菌质粒，如来自大肠杆菌(E.coli)的质粒，包括pCR1、pBR322、pMB9和它们的衍生物，以及更宽的宿主范围质粒，如M13及其它丝状单链DNA噬菌体。
对于真核宿主有用的表达载体包括(例如)包含来自SV40、牛乳头状瘤病毒、腺病毒和巨细胞病毒的表达控制序列的载体。适合的哺乳动物宿主细胞系的实例包括(但不限于)COS-7(猴肾-来源的)、L-929(鼠成纤维细胞-来源的)、C127(鼠乳腺肿瘤-来源的)、3T3(鼠成纤维细胞-来源的)、CHO(中国仓鼠卵巢-来源的)、HeLa(人宫颈癌-来源的)、BHK(仓鼠肾成纤维细胞-来源的)、HEK-293(人胚肾-来源的)细胞系及其变体。哺乳动物表达载体可以包含非转录元件，如复制起点、连接至要表达的基因的适合的启动子和增强子以及其它5'或3'侧接的非转录序列，和5'或3'非翻译序列，如必需的核糖体结合位点、多腺苷酸化位点、剪接供体和受体位点以及转录终止序列。重组蛋白在昆虫细胞培养系统(例如，杆状病毒)中的表达还提供了用于产生正确折叠的和具有生物学功能的蛋白的稳健方法。用于在昆虫细胞中产生异源蛋白质的杆状病毒系统是本领域技术人员熟知的。
本文提供了抗TIM-3抗体及其抗原结合片段，其包括(但不限于)单克隆抗体、多克隆抗体、合成抗体、人抗体、人源化抗体及其抗原结合片段。
抗体产生方法在本领域中是熟知的。参见，例如，在Harlow等人,Antibodies:ALaboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,第2版1988)；Hammerling等人,在Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas563 681(Elsevier,N.Y.,1981)中，以上每篇文献以其全部内容作为参考并入本文。对于抗体在人中的体内使用，可以优选地使用人抗体。完全地，人抗体对于人受试者的治疗性治疗是特别期望地。可以通过本领域中已知的多种方法，包括使用来源于人免疫球蛋白序列的抗体文库的噬菌体展示方法(包括对这些技术的改善)来制备人抗体。另外参见，美国专利No.4,444,887和4,716,111；和PCT专利公开WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741；以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。人抗体还可以是其中通过来源于人DNA的一个或多个来源的核苷酸序列编码重链和轻链的抗体。
还可以使用不能表达功能性内源免疫球蛋白，但是可以表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠产生人抗体。例如，可以将人重链和轻链免疫球蛋白基因复合体随机或通过同源重组引入小鼠胚胎干细胞。作为另外一种选择，除人重链和轻链基因之外，可以将人可变区、恒定区和多变区引入小鼠胚胎干细胞。通过同源重组引入人免疫球蛋白基因座，可以单独或同时使小鼠重链和轻链免疫球蛋白基因无功能性。例如，已描述了嵌合和种系突变体小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合缺失导致内源抗体产生的完全抑制。将修饰的胚胎干细胞扩增并微量注射到胚囊中以产生嵌合小鼠。然后，使嵌合小鼠繁殖以产生表达人抗体的纯合子代。以正常方式，通过所选的抗原，例如，本发明的多肽的全部或部分使转基因小鼠免疫。例如，使用常规杂交瘤技术，抗人TIM-3抗原的抗TIM-3抗体可以得自免疫的转基因小鼠。转基因小鼠所具有的人免疫球蛋白转基因在B细胞分化期间重排，并且随后经历类别转换和体细胞突变。因此，使用这种技术，有可能产生有治疗性用途的IgG、IgA、IgM和IgE抗体，包括(但不限于)IgG1(γ1)和IgG3。对于产生人抗体的这种技术的综述，参见，Lonberg and Huszar(Int.Rev.Immunol.,13:65-93(1995))。对于产生人抗体和人单克隆抗体的这种技术的详细讨论以及产生这些抗体的规程，参见，例如，PCT专利公开No.WO 98/24893、WO 96/34096和WO 96/33735；和美国专利No.5,413,923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318；和5,939,598，以上每项专利以其全部内容作为参考并入本文。另外，可以向公司，如Abgenix,Inc.(Freemont,Calif.)和Genpharm(SanJose,Calif.)预定以使用类似于如上所述的技术提供抗所选抗原的人抗体。对于种系突变体小鼠中人种系免疫球蛋白基因阵列的转移将在抗原攻毒时导致人抗体产生的具体讨论，参见，例如，Jakobovits等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:2551(1993)；Jakobovits等人,Nature,362:255-258(1993)；Bruggermann等人,Year in Immunol.,7:33(1993)；和Duchosal等人,Nature,355:258(1992)。
人抗体还可以来源于噬菌体展示文库(Hoogenboom等人,J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)；Vaughan等人,Nature Biotech.,14:309(1996))。噬菌体展示技术(McCafferty等人,Nature,348:552-553(1990))可以用于从来自未免疫供体的免疫球蛋白可变(V)结构域基因组库体外产生人抗体和抗体片段。根据这种技术，将抗体V结构域基因框内克隆至丝状噬菌体，如M13或fd的主要或次要外壳蛋白基因，并在噬菌体颗粒表面上展示为功能性抗体片段。由于丝状颗粒包含噬菌体基因组的单链DNA拷贝，因此基于抗体的功能性的选择还导致编码显示出那些性质的抗体的基因的选择。因此，噬菌体模拟了B细胞的一些性质。可以以多种形式进行噬菌体展示；对于它们的综述，参见，例如，Johnson and Chiswell,Current Opinion in Structural Biology3:564-571(1993)。V-基因节段的一些来源可以用于噬菌体展示。Clackson等人,Nature,352:624-628(1991)从来源于未免疫小鼠脾脏的V基因的小型随机组合文库分离得到大量不同的抗噁唑酮抗体。基本上按照以下文献中所述的技术，可以从未免疫的人供体构建V基因的组库并且可以分离抗大量不同抗原(包括自体抗原)的抗体：Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)或者Griffith等人,EMBO J.,12:725-734(1993)。还参见美国专利No.5,565,332和5,573,905，以上每项专利以其全部内容作为参考并入本文。
还可以通过体外激活的B细胞产生人抗体(参见，美国专利No.5,567,610和5,229,275，每项专利以其全部内容作为参考并入本文)。还可以使用杂交瘤技术，如(但不限于)Roder等人(Methods Enzymol.,121:140-167(1986))所述的，体外产生人抗体。
作为另外一种选择，在一些实施方式中，将非人抗体人源化，其中修饰抗体的具体序列或区域以提高对人中天然产生的抗体的相似性。在一些实施方式中，将抗原结合结构域部分人源化。
可以使用本领域中已知的多种技术产生人源化抗体，其包括(但不限于)CDR-移植(参见，例如，欧洲专利No.EP 239,400；国际专利公开No.WO 91/09967；和美国专利No.5,225,539、5,530,101和5,585,089，以上每项专利以其全部内容作为参考并入本文)、贴面化(veneering)或表面重塑(resurfacing)(参见，例如，欧洲专利No.EP 592,106和EP 519,596；Padlan,1991,Molecular Immunology,28(4/5):489-498；Studnicka等人,1994,Protein Engineering,7(6):805-814；和Roguska等人,1994,PNAS,91:969-973，以上每篇文献以其全部内容作为参考并入本文)、链改组(参见，例如，美国专利No.5,565,332，该专利以其全部内容作为参考并入本文)以及下列中公开的技术，例如，美国专利申请公开No.US2005/0042664、美国专利申请公开No.US2005/0048617、美国专利No.6,407,213、美国专利No.5,766,886、国际专利公开No.WO 9317105、Tan等人,J.Immunol.,169:1119-25(2002)、Caldas等人,Protein Eng.,13(5):353-60(2000)、Morea等人,Methods,20(3):267-79(2000)、Baca等人,J.Biol.Chem.,272(16):10678-84(1997)、Roguska等人,ProteinEng.,9(10):895-904(1996)、Couto等人,Cancer Res.,55(23Supp):5973s-5977s(1995)、Couto等人,Cancer Res.,55(8):1717-22(1995)、Sandhu J S,Gene,150(2):409-10(1994)和Pedersen等人,J.Mol.Biol.,235(3):959-73(1994)，以上每篇文献以其全部内容作为参考并入本文。通常，可以用来自CDR供体抗体的相应残基替换框架区中的框架残基以改变，优选地改善，抗原结合。通过本领域熟知的方法来识别这些框架替换，例如，通过CDR和框架残基的相互作用的建模来识别对于抗原结合重要的框架残基并且通过序列比较来识别特定位置处不常见的框架残基。(参见，例如，Queen等人,美国专利No.5,585,089；和Riechmann等人,1988,Nature,332:323，以上文献以其全部内容作为参考并入本文)。
人源化抗体具有来自非人类的来源的引入其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称为“输入”残基，其通常采集自“输入”可变域。因此，人源化抗体包含来自非人免疫球蛋白分子的一个或多个CDR和来自人的框架区。抗体的人源化在本领域中是熟知的并且可以基本上按照Winter及其同事的方法(Jones等人,Nature,321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature,332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science,239:1534-1536(1988))，通过将啮齿类CDR或CDR序列替换为相应人抗体序列，即CDR-移植来进行(EP239,400；PCT专利公开No.WO 91/09967；和美国专利No.4,816,567；6,331,415；5,225,539；5,530,101；5,585,089；6,548,640，以上专利的内容以其全部作为参考并入本文)。在这些人源化嵌合抗体中，已通过来自非人物种的相应序列替换了基本不太完整的人可变域。实际上，人源化抗体通常是其中一些CDR残基和可能的一些FR残基被来自啮齿类抗体中的类似位点的残基替换的人抗体。还可以通过贴面化(veneering)或表面重塑(resurfacing)(EP 592,106；EP 519,596；Padlan,1991,Molecular Immunology,28(4/5):489-498；Studnicka等人,Protein Engineering,7(6):805-814(1994)；和Roguska等人,PNAS,91:969-973(1994))或者链改组(美国专利No.5,565,332)实现抗体人源化，以上文献的内容以其全部作为参考并入本文。
用于制备人源化抗体的人可变域(轻链和重链两者)的选择将降低抗原性。根据所谓的“最适(best-fit)”法，将啮齿类抗体的可变域序列对已知的人可变域序列的整个文库进行筛选。然后，将最接近啮齿类的人序列当作人源化抗体的人框架(FR)(Sims等人,J.Immunol.,151:2296(1993)；Chothia等人,J.Mol.Biol.,196:901(1987)，以上文献的内容以其全部作为参考并入本文)。另一种方法使用来源于轻链或重链的特定亚群的所有人抗体的共有序列的特定框架。相同框架可以用于几种不同的人源化抗体(Carter等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；Presta等人,J.Immunol.,151:2623(1993)，以上文献的内容以其全部作为参考并入本文)。
可以使抗体人源化同时保留对靶标抗原的高亲和力及其它有利的生物学性质。例如，可以通过亲代序列分析方法以及使用亲代和人源化序列的三维模型的多种概念性人源化产品，制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型是通常可用的并且是本领域技术人员熟悉的。说明和显示所选候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构的计算机程序是可用的。对这些展示的检查允许分析残基在候选免疫球蛋白序列中发挥功能的可能作用，即影响候选免疫球蛋白结合靶标抗原的能力的残基的分析。以这种方式，可以从受体和输入序列选择FR残基并组合，从而实现所期望的抗体特征，如对靶标抗原提高的亲和力。通常，CDR残基直接并且最显著地参与影响抗原结合。
人源化抗体保留了与原始抗体类似的抗原特异性，例如，结合人TIM-3抗原的能力。然而，使用某些人源化方法，可以使用如Wu等人,J.Mol.Biol.,294:151(1999)所述的“定向进化”方法提高抗体对特定抗原结合的亲和力和/或特异性，以上文献的内容以其全部作为参考并入本文。
5.5药物组合物
本文还提供了包含本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的药物组合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含治疗有效量的本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段和药物可用的载体。在一些实施方式中，所述药物组合物在免疫疗法中有用。在一些实施方式中，所述药物组合物在免疫肿瘤学中有用。在一些实施方式中，所述药物组合物在抑制受试者(例如，人患者)中的肿瘤生长中有用。在一些实施方式中，所述药物组合物在治疗受试者(例如，人患者)中的癌症中有用。
在一些实施方式中，本文所提供的药物组合物包含本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以以多种浓度存在。在一些实施方式中，本文所提供的药物组合物包含1-1000mg/ml的本文所提供的可溶性抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，所述药物组合物包含10-500mg/ml、10-400mg/ml、10-300mg/ml、10-200mg/ml、10-100mg/ml、20-100mg/ml或50-100mg/ml的本文所提供的可溶性抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文所提供的药物组合物包含约10mg/ml、约20mg/ml、约30mg/ml、约40mg/ml、约50mg/ml、约60mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml、约100mg/ml、约120mg/ml、约150mg/ml、约180mg/ml、约200mg/ml、约300mg/ml、约500mg/ml、约800mg/ml或约1000mg/ml的本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。本领域技术人员可以容易地调整剂量；例如，纯度降低可能需要剂量增加。
本文还提供了用于制备具有本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的药物组合物的试剂盒。在一些实施方式中，所述试剂盒包含处于一个或多个容器中的本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段和药物可用的载体。在另一个实施方式中，所述试剂盒可以包含用于向受试者施用的本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在具体的实施方式中，所述试剂盒包含有关抗TIM-3抗体或抗原结合片段的制备和/或施用的说明书。
在一些实施方式中，本文提供了药物组合物，所述药物组合物包含本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或细胞，其中所述组合物适合于局部施用。在一些实施方式中，局部施用包括瘤内注射、瘤周注射、近瘤注射(juxtatumoral injection)、病灶内注射和/或向肿瘤引流淋巴结注射，或者其中抗肿瘤剂预期将渗入所靶向的实体瘤附近的原发性淋巴结的基本任何靶向肿瘤的注射。
可以在本文提供的组合物中使用的药物可用的载体包括生理学相容的任何和所有溶剂、分散媒介、涂层、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。在一些实施方式中，所述载体适合于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)。基于施用途径，可以在材料中涂覆活性成分(即本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者免疫效应细胞)以保护所述活性成分避免可以使所述活性成分失活的酸及其它自然条件的作用。
本文还提供了改善抗TIM-3抗体或抗原结合片段的稳定性以使它们能够长期储存的药物组合物或制剂。在一些实施方式中，本文所公开的药物组合物或制剂包含：(a)本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段；(b)缓冲剂；(c)稳定剂；(d)盐；(e)膨胀剂；和/或(f)表面活性剂。在一些实施方式中，所述药物组合物或制剂稳定至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少6个月、至少1年、至少2年、至少3年、至少5年或更长时间。在一些实施方式中，当在4℃、25℃或40℃储存时，所述药物组合物或制剂稳定。
在本文所公开的药物组合物或制剂中有用的缓冲剂可以是用于在添加另一种酸或碱后，将溶液酸度(pH)维持在所选的值附近的弱酸或碱。适合的缓冲剂可以通过维持对制剂的pH控制来使所述药物制剂的稳定性最大化。适合的缓冲剂还可以确保生理学相容性或优化溶解度。流变学、粘度及其它性质还可以基于制剂的pH。常见的缓冲剂包括(但不限于)组氨酸、柠檬酸盐、琥珀酸盐、乙酸盐和磷酸盐。在一些实施方式中，缓冲剂包含组氨酸(例如，L-组氨酸)以及等渗性试剂并通过本领域中已知的酸或碱潜在地进行pH调节。在某些实施方式中，所述缓冲剂是L-组氨酸。在某些实施方式中，将所述制剂的pH维持在约2至约10之间，或者约4至约8之间。
将稳定剂加入至药物产品以稳定该产品。这些试剂可以以不同的方法稳定蛋白。常见的稳定剂包括(但不限于)氨基酸，如甘氨酸、丙氨酸、赖氨酸、精氨酸或苏氨酸，碳水化合物，如葡萄糖、蔗糖、海藻糖，棉子糖或麦芽糖，多元醇，如甘油、甘露糖醇、山梨糖醇、环糊精或具有任何种类和分子量的葡萄聚糖，或PEG。在一些实施方式中，选择所述稳定剂以使得冻干制剂中FIX多肽的稳定性最大化。在某些实施方式中，所述稳定剂是蔗糖和/或精氨酸。
可以将膨胀剂添加至药物组合物或制剂以增加产品的体积和质量，借此帮助准确对其进行计量和处理。常见的膨胀剂包括(但不限于)乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇、碳酸钙或硬脂酸镁。
表面活性剂是具有亲水性和疏水性基团的两亲性物质。表面活性剂可以是阴离子、阳离子、两性离子或非离子的。非离子型表面活性剂的实例包括(但不限于)烷基乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、胺乙氧基化物、聚环氧乙烷、聚环氧丙烷、脂肪醇，如鲸蜡醇或油醇、椰油酰胺MEA、椰油酰胺DEA、聚山梨醇酯或者十二烷基二甲基氧化胺。在一些实施方式中，所述表面活性剂为聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
本文所公开的药物组合物还可以包含一种或多种缓冲液系统、防腐剂、张度剂、螯合剂、稳定剂和/或表面活性剂及其不同组合。防腐剂、等张剂、螯合剂、稳定剂和表面活性剂在药物组合物中的用途是技术人员熟知的。可以参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第19版,1995。
在一些实施方式中，所述药物组合物是水性制剂。这种制剂通常是溶液或混悬液，但是还可以包括胶体、分散系、乳液和多相材料。将术语“水性制剂”定义为包含至少50％w/w的水的制剂。同样地，将术语“水性溶液”定义为包含至少50％w/w的水的溶液，并且将术语“水性混悬液”定义为包含至少50％w/w的水的混悬液。
在一些实施方式中，将本文所公开的药物组合物冷冻干燥，在使用前医师或患者向其中添加溶剂和/或稀释剂。
本文所公开的药物组合物还可以包括药物可用的抗氧化剂。药物可用的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。
可以用于本文所描述的药物组合物或制剂的适合的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其适合的混合物、植物油，如橄榄油，和可注射有机酯，如油酸乙酯。可以(例如)通过使用涂层材料，如卵磷脂，就分散系来说通过维持所需的粒径和通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。
这些组合物还可以含有佐剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过灭菌程序，如上和通过包含多种抗细菌和抗真菌剂，例如，对羟苯甲酸、氯代丁醇、苯酚、山梨酸等两者来确保对微生物存在的预防。还可以期望在所述组合物中包括等张剂，如糖、氯化钠等。另外，可以通过包含延迟吸收的试剂，如单硬脂酸铝和明胶来造成可注射药物形式的延长吸收。
药物可用的载体包括无菌水溶液或分散系以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散系的无菌粉末。这类媒介物和试剂用于药物活性物质的使用在本领域中是已知的。除了任何常规媒介物或试剂与所述活性化合物不相容以外，考虑了其在本文所描述的药物组合物中的使用。药物组合物或制剂可以包含防腐剂或者可以缺少防腐剂。可以将补充性活性化合物引入所述组合物中。
药物组合物或制剂通常必须是无菌的并且在生产和存储条件下稳定。可以将所述组合物配制为溶液、微乳剂、脂质体或者适合于高药物浓度的其它有序结构。所述载体可以是含有(例如)水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其适合的混合物的溶剂或分散媒介。可以(例如)通过使用涂层，如卵磷脂，就分散系来说通过维持所需的粒径和通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。在多数情况下，所述组合物可以在所述组合物中包括等张剂，例如，糖、多元醇，如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化钠。可以通过在所述组合物中包含延缓吸收的试剂，例如，单硬脂酸盐和明胶来导致可注射组合物的延长吸收。
可以根据需要，通过在具有以上列举的一种成分或成分组合的适合的溶剂中掺入所要求的量的活性化合物，然后微滤灭菌，制备无菌可注射溶液。通常，通过在无菌媒介物中掺入所述活性化合物来制备分散系，所述媒介物包含基础分散媒介和来自本文列举的那些的所要求的其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，一些制备方法是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，这些干燥方法从先前其无菌-过滤溶液中获得了活性成分加任何它所期望的成分的粉末。
在本文所公开的药物组合物或制剂中可以与载体材料组合的活性成分的量可以是不同的。在一些实施方式中，可以与载体材料组合的活性成分的量是产生治疗效果的量。通常，在百分之一百中，该量将在约0.01％至约99％的活性成分，约0.1％至约70％，或者约1％至约30％的活性成分结合药物可用的载体的范围内。
可以将本文所公开的药物组合物与载体一起制备，所述载体将保护所述活性成分免于快速释放，如控释制剂，包括植入物、透皮贴片和微囊化递送系统。可以使用生物可降解的、生物相容性的聚合物，如乙烯-乙酸乙烯共聚物、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备这些制剂的多种方法是专利保护的或通常是本领域技术人员已知的。参见，例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson主编,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。
在一些实施方式中，可以配制本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或免疫效应细胞(例如，T细胞)以确保适当的体内分布。例如，血脑屏障(BBB)排除了多种高亲水性化合物。为了确保本文所描述的激活的成分跨过BBB(如果需要，例如，对于脑癌)，可以(例如)在脂质体中配制它们。对于生产脂质体的方法，参见，例如，美国专利4,522,811；5,374,548；和5,399,331。所述脂质体可以包含选择性输送至特定细胞或器官的一种或多种部分，因此增强靶向药物递送(参见，例如，V.V.Ranade(1989)J.Clin.Pharmacol.29:685)。示例性的靶向部分包括叶酸或生物素(参见，例如，Low等人的美国专利5,416,016)、甘露糖苷(Umezawa等人,(1988)Biochem.Biophys.Res.Commun.153:1038)；抗体(P.G.Bloeman等人(1995)FEBS Lett.357:140；M.Owais等人(1995)Antimicrob.Agents Chemother.39:180)；表面活性剂蛋白A受体(Briscoe等人(1995)Am.J.Physiol.1233:134)；pl20(Schreier等人(1994)J.Biol.Chem.269:9090)；还参见K.Keinanen；M.L.Laukkanen(1994)FEBSLett.346:123；J.J.Killion；I.J.Fidler(1994)Immunomethods 4:273。
可以通过(例如)标准ELISA测试本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段与人TIM-3的结合。简要地，用纯化的TIM-3涂覆微量滴定板，然后用牛血清白蛋白封闭。将抗体稀释液(例如，来自TIM-3-免疫小鼠的血浆的稀释液)加入至每个孔中并培育。清洗板并与缀合至辣根过氧化物酶(HRP)的第二试剂(例如，对于人抗体、山羊-抗人IgG Fc-特异性多克隆试剂)培育。清洗后，可以使板显色并通过分光光度计分析。然后，可以对于与表达人TIM-3的细胞系结合，但不与不表达TIM-3的对照细胞系结合，通过流式细胞术进一步筛选来自免疫小鼠的血清。简要地，可以通过将表达TIM-3的CHO细胞与抗TIM-3抗体培育来评价抗TIM-3抗体的结合。可以清洗细胞，并且可以通过抗人IgG Ab检测结合。可以使用FACScan流式细胞术(Becton Dickinson,San Jose,CA)进行流式细胞术分析。显示出最高滴度的小鼠可以用于融合。
如以上所描述的ELISA测定可以用于筛选抗体，并因此筛选产生对TIM-3免疫原显示出阳性反应性的抗体的杂交瘤。然后，可以亚克隆并进一步鉴定产生对TIM-3以高亲和力结合的抗体的杂交瘤。然后，可以选择保留亲代细胞反应性(通过ELISA)的来自每个杂交瘤的一个克隆用于制备细胞库和用于抗体纯化。
为了纯化抗TIM-3抗体，可以使所选杂交瘤生长以用于单克隆抗体纯化。可以在亲和色谱法之前过滤并浓缩上清液。可以通过凝胶电泳和高效液相色谱检查洗脱的IgG以确保纯度。可以交换缓冲溶液，并且可以确定浓度。可以将单克隆抗体等分并储存。
为了确定所选抗TIM-3单克隆抗体是否结合至独特表位，可以使用可商购的试剂(Pierce,Rockford,IL)使每个抗体生物素化。可以通过抗生蛋白链菌素标记探针检测生物素化的MAb的结合。可以使用如以上所描述的TIM-3涂覆的ELISA板进行使用未标记的单克隆抗体和生物素化的单克隆抗体的竞争研究。
为了确定纯化抗体的同种型，可以使用对具有特定同种型的抗体特异的试剂进行同种型ELISA。例如，为了确定人单克隆抗体的同种型，可以在4℃用1pg/mL抗人免疫球蛋白涂覆微量滴定板的孔过夜。在用1％ BSA封闭后，将板与1fig/mL或以下的测试单克隆抗体或纯化的同种型对照在环境温度下反应1至2小时。然后，所述孔可以与人IgGl或人IgM-特异性碱性磷酸酶-缀合的探针反应。如以上所描述的，使板显色并分析。
为了测试单克隆抗体与表达TIM-3的活细胞的结合，可以使用流式细胞术，如实施例中所述。简要地，将表达膜-结合的TIM-3的细胞系(在标准生长条件下生长)与处于含有0.1％ BSA的PBS中的多种浓度的单克隆抗体在4℃混合1小时。清洗后，作为一抗染色，将细胞与荧光素标记的抗IgG抗体在相同条件下反应。可以通过FACScan仪，使用光和侧向散射性质分析样品以对单一细胞设门并确定标记抗体的结合。除流式细胞术测定之外或作为它的替代，可以使用通过荧光显微术的替代测定。可以完全如以上所描述的染色细胞并通过荧光显微术检验。该方法允许对个体细胞显像，但是可以基于抗原密度具有降低的敏感性。
可以通过免疫印迹进一步测试抗TIM-3抗体或抗原结合片段与TIM-3抗原的反应性。简要地，可以制备来自表达TIM-3的细胞的细胞提取物并进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳。在电泳后，将分离的抗原转移到硝化纤维素膜，用20％小鼠血清封闭并用要测试的单克隆抗体探测。可以使用抗IgG碱性磷酸酶检测IgG结合，并用BCIP/NBT底物片(Sigma Chem.Co.,St.Louis,MO)显色。
用于分析多种抗TIM-3抗体的结合亲和力、交叉反应性和结合动力学的方法包括本领域中已知的标准测定，例如，使用(例如)Gator系统(Probe Life)或Octet-96系统(Sartorius AG)的生物膜干涉测量法(BLI)，或者使用BIACORETM 2000 SPR仪(Biacore AB,Uppsala,Sweden)的BIACORETM表面等离子共振(SPR)分析。
多种测定可以用于鉴定抗TIM-3抗体的生物活性(所述生物活性可以用于(例如)比较不同的抗TIM-3抗体)，如本文所描述的那些：
(1)T细胞激活测定，如使用得自人供体的PBMC的纯化的T细胞的测定。可以使用总T细胞或其亚群，例如，Th1细胞、T细胞毒细胞、Treg细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞进行测定，只要它们表达TIM-3。可以通过确定某些细胞因子，例如，干扰素-g或IL-2的分泌水平或者T细胞的增殖水平来测量激活。不想受限于特定作用机制，抗TIM-3抗体与T细胞上的TIM-3的结合可以防止TIM-3与TIM-3配体(TIM-3假定配体，包括半乳凝素-9、HMGB 1、导向蛋白-4A、CEACAM-1、ILT-4和磷脂酰丝氨酸)的结合并借此防止T细胞中TIM-3介导的信号转导，借此防止TIM-3对T细胞的负调控。示例性测定，包括Th1测定、TIL测定和混合淋巴细胞反应(MLR)在本领域中是熟知的。
(2)测量巨噬细胞，例如，M1或M2巨噬细胞的刺激的测定。
(3)测量来自TIM-3阳性骨髓细胞的骨髓相关细胞因子，例如，TNFα、IL-Iβ、GM-CSF、IL-6、IL-2、IL-10、CCL2、CCL3、CCL4或CCL5的分泌的测定。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体刺激来自TIM-3阳性骨髓细胞的TNFα、IL-Iβ、GM-CSF、IL-6和IL-2的分泌和/或抑制IL-10、CCL2、CCL3、CCL4或CCL5的分泌。
通常，用于测试抑制免疫应答的试剂的生物活性的任何方法可以用于鉴定抗TIM-3抗体或抗原结合片段的生物活性，例如，与TIM-3有关的文献(包括专利和专利申请)中所描述的那些。
5.6方法和用途
本文所述的抗体或抗原结合片段、组合物和方法具有多种体外和体内应用，包括(例如)增强免疫应答，如通过抑制(或拮抗)TIM-3(例如，信号转导)增强免疫应答，或者检测TIM-3。在一些实施方式中，本文所述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段是人源化抗体或抗原结合片段。例如，本文所述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以体外或离体施用于培养中的细胞，或者(例如)体内施用于人受试者，以增强在多种疾病中的免疫性。因此，本文提供了改变受试者中免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所述的抗TIM-3抗体或其抗原结合部分，从而改变所述受试者中的免疫应答。在一些实施方式中，增强、刺激或上调所述应答。
在一些实施方式中，本文提供了诱导或刺激免疫细胞激活的方法，所述方法包括将免疫细胞与有效量的本文所述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段接触。在一些实施方式中，本文提供了诱导或刺激免疫细胞增殖的方法，所述方法包括将免疫细胞与有效量的本文所述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段接触。在一些实施方式中，本文提供了降低TIM-3介导的免疫细胞增殖抑制的方法，所述方法包括将免疫细胞与有效量的本文所述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段接触。在一些实施方式中，本文提供了抑制TIM-3与免疫细胞上的TIM-3配体(例如，磷脂酰丝氨酸)之间的相互作用的方法，所述方法包括将所述免疫细胞与有效量的本文所述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段接触。在一些实施方式中，本文提供了提高免疫细胞对细胞因子(例如，IFN-γ)的产生的方法，所述方法包括将所述免疫细胞与有效量的本文所述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段接触。
所述免疫细胞可以是(例如)T细胞，如CD4+T细胞、CD8+T细胞、T辅助(Th)细胞(例如，Th1细胞)、T细胞毒(Tc)细胞或TIL。所述免疫细胞还可以是NK细胞、NKT细胞或骨髓细胞。
适合于本发明方法的受试者包括其中将期望增强免疫应答的人患者。所述方法特别适合于治疗患有可以通过增强免疫应答(例如，T细胞介导的免疫应答，例如，抗原特异性T细胞应答)治疗的病症的人患者。在一些实施方式中，所述方法特别适合于癌症的体内治疗。为了实现免疫性的抗原-特异性增强，可以将本文所述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段与所关心的抗原一起施用，或者所述抗原可以已存在于要治疗的受试者(例如，具有肿瘤的或具有病毒的受试者)中。当与另一种试剂一起施用抗TIM-3抗体时，两种试剂可以分开或同时施用。
还涵盖了检测样品中人TIM-3抗原的存在的方法或者测量人TIM-3抗原的量的方法，其包括在允许所述抗体或抗原结合片段和人TIM-3之间形成复合物的条件下，将所述样品和对照样品与特异性结合至人TIM-3的单克隆抗体，例如，人源化单克隆抗体或其抗原结合部分接触。然后检测复合物的形成，其中与对照样品相比，样品间的差异复合物形成指示了样品中人TIM-3抗原的存在。此外，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以经由免疫亲和纯化用于纯化人TIM-3。
考虑到本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段刺激或共刺激T细胞应答，例如，抗原-特异性T细胞应答的能力，如通过抑制TIM-3的不利作用刺激或共刺激T细胞应答的能力，本文提供了使用本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段刺激、增强或上调抗原-特异性T细胞应答，例如，抗肿瘤T细胞应答的体外和体内方法。
在一些实施方式中，还提供了CD3刺激(例如，通过与表达膜CD3的细胞共培育)，可以在用抗TIM-3抗体或抗原结合片段刺激的同时、之前或之后提供这种刺激。例如，本文提供了刺激抗原-特异性T细胞应答的方法，所述方法包括将所述T细胞与本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段接触并且任选地与抗CD3抗体接触，从而刺激抗原-特异性T细胞应答。
任何适合的抗原-特异性T细胞应答的指示物可以用于测量抗原-特异性T细胞应答。这些适合的指示物的非限制性实例包括在存在所述抗体的情况下提高的T细胞增殖和/或在存在所述抗体的情况下提高的细胞因子产生。在一些实施方式中，刺激通过抗原-特异性T细胞的白介素-2和/或干扰素-γ产生。
还涵盖了刺激受试者中免疫应答(例如，抗原-特异性T细胞应答)的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段，从而在所述受试者中刺激免疫应答(例如，抗原-特异性T细胞应答)。在一些实施方式中，所述受试者是具有-肿瘤的受试者并且刺激对肿瘤的免疫应答。肿瘤可以是实体瘤或液体肿瘤，例如，血液恶性肿瘤。在一些实施方式中，肿瘤是免疫原性肿瘤。在一些实施方式中，肿瘤是非免疫原性的。在一些实施方式中，肿瘤是PD-L1阳性的。在一些实施方式中，肿瘤是PD-L1阴性的。受试者还可以是具有病毒的受试者并且刺激对病毒的免疫应答。
还提供了抑制受试者中肿瘤细胞生长的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段，从而抑制所述受试者中肿瘤的生长。还提供了治疗受试者中病毒感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所描述的抗TIM-3抗体从而治疗所述受试者中的病毒感染。
在一些实施方式中，作为辅助疗法向受试者提供抗TIM-3抗体。使用抗TIM-3抗体对患有癌症的受试者的治疗可以导致延长的存活，例如，相对于目前标准护理的长期持久应答；至少3个月、6个月、9个月、1、2、3、4、5、10年或更长时间的长期存活，或者至少3个月、6个月、9个月、1、2、3、4、5或10年或更长时间的无复发存活。在一些实施方式中，用抗TIM-3抗体或抗原结合片段对患有癌症的受试者的治疗预防癌症复发或者将癌症复发延迟(例如)3个月、6个月、9个月、1、2、3、4、5或10年或更长时间。抗TIM-3治疗可以用作一线、二线或三线治疗。
用本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段(例如，人源化3E6)对患有癌症的受试者的治疗可以导致(例如)稳定的疾病、部分应答、提高的整体存活期、提高的无病生存期或者增强的无恶化存活期。
在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体不是明显毒性的。例如，如(例如)在临床试验中所确定的，TIM-3抗体对于人器官(例如)肝、肾、脑、肺和心脏中的一个或多个不是明显毒性的。在一些实施方式中，TIM-3抗体不明显引发不希望的免疫应答，例如，自体免疫或炎症。
在一些实施方式中，用抗TIM-3拮抗剂(例如，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段)对受试者的治疗不导致免疫系统达到受试者的免疫系统然后攻击受试者本身(例如，自身免疫反应)或者导致(例如)过敏反应的程度的过度刺激。因此，在一些实施方式中，抗TIM-3抗体不引起过敏反应。
在一些实施方式中，用本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段，例如，包含3E6的CDR或可变区的抗体或其变体(例如，如本文所描述的)或者本文所描述的其它抗TIM-3抗体对受试者的治疗不引起明显的炎症反应，例如，免疫介导的肺炎、免疫介导的结肠炎、免疫介导的肝炎、免疫介导的肾炎或肾功能障碍、免疫介导的垂体炎、免疫介导的甲状腺机能减退和甲状腺机能亢进或者其它免疫介导的不良反应。在一些实施方式中，与其它抗TIM-3抗体相比，包含3E6的可变区的CDR的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或其变体(例如，如本文所描述的)导致较少炎症反应，例如，免疫介导的肺炎、免疫介导的结肠炎、免疫介导的肝炎、免疫介导的肾炎或肾功能障碍、免疫介导的垂体炎、免疫介导的甲状腺机能减退和甲状腺机能亢进、过敏反应或者其它免疫介导的不良反应。在一些实施方式中，用本文所描述的抗TIM-3抗体，例如，包含3E6的CDR或可变区的抗体或其变体(例如，如本文所描述的)或者本文所描述的其它抗TIM-3抗体对受试者的治疗不引起明显的心脏病症，例如，室性心律失常；眼病症，例如，虹膜睫状体炎；输注相关反应；升高的淀粉酶、升高的脂肪酶；神经系统病症，例如，眩晕、周围神经病和感觉神经病；皮肤和皮下组织病症，例如，皮疹、瘙痒、剥脱性皮炎、多形性红斑、白癜风或银屑病；呼吸、胸和纵隔病症，例如，咳嗽；疲劳；恶心；食欲降低；便秘；关节痛；或者腹泻。
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段与另一种癌症疗法组合提供协同抗肿瘤作用，所述另一种癌症疗法如刺激免疫系统的化合物(例如，免疫肿瘤学试剂)，例如，本文所述的化合物或者调节本文所描述的靶标的化合物。
本发明公开还提供了抗TIM-3抗体或抗原结合片段、编码这些抗TIM-3抗体或抗原结合片段的多核苷酸、包含这些多核苷酸的载体或者具有本文所公开的这些抗体或抗原结合片段的药物组合物在治疗癌症中的使用方法。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以体内特异性靶向表达TIM-3的癌细胞，借此递送它们消除、裂解和/或杀死癌细胞的治疗效果。在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以降低TIM-3信号转导通路介导的免疫抑制作用，借此促进免疫细胞在消除、裂解和/或杀死癌细胞中的活性。在一些实施方式中，所述方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，本文提供了治疗对其有需要的受试者中肿瘤或癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，本文提供了本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段在治疗肿瘤或癌症中的用途。在一些实施方式中，本文提供了本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段用于制备用于治疗肿瘤或癌症的药剂的用途。
在一些实施方式中，本文提供了治疗对其有需要的受试者中肿瘤或癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所公开的药物组合物。在一些实施方式中，本文提供了本文所公开的药物组合物在治疗肿瘤或癌症中的用途。在一些实施方式中，本文提供了本文所提供的药物组合物用于制备用于治疗肿瘤或癌症的药剂的用途。
可以改变本文所描述的药物组合物中活性成分(即抗TIM-3抗体或抗原结合片段)的真实剂量水平以获得对于特定患者、组合物和施用形式，实现所期望的治疗反应有效但对患者无毒的活性成分的量。所选剂量水平将取决于多种药物动力学因素，包括本文所述的特定组合物的活性、施用途径、施用时间、排泄率、治疗持续时间、与所使用的特定组合物组合使用的其它药物、化合物和/或材料、正在治疗的患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康情况和在先病史以及医学领域中熟知的类似因素。
可以作为缓释制剂施用抗TIM-3抗体或抗原结合片段，在这种情况下不需要频繁施用。基于抗TIM-3抗体或抗原结合片段在患者中的半衰期来改变剂量和频率。在治疗应用中，有时需要处于相对短间隔的相对高剂量直至降低或终止疾病发展并且直至患者显示出疾病症状的部分或完全改善。
可以通过本领域中已知的任何方法向受试者施用本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或药物组合物，所述方法包括(但不限于)胸膜施用、静脉内施用、皮下施用、结节内施用、肿瘤内施用、肌内施用、皮内施用、鞘内施用、胸膜内施用、腹膜内施用、颅内施用、脊柱或其它肠胃外施用途径，例如，通过注射或输注，或者直接施用至胸腺。如本文所使用的短语“胃肠外施用”表示肠内和局部施用以外的施用形式，其通常通过注射并且无限制地包括静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、被膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内(intrastemal)注射和输注。在一些实施方式中，采用皮下施用。在一些实施方式中，采用静脉内施用。在一些实施方式中，采用口服施用。在一个实施方式中，可以使用熟知的方法将本文所提供的抗体或抗原结合片段局部递送至肿瘤，所述方法包括(但不限于)肝泵或主动脉泵；四肢、肺或肝脏灌注；在门静脉中；通过静脉分流；在空腔中或者在肿瘤附近的静脉中等。在另一个实施方式中，可以全身施用本文所提供的抗体或抗原结合片段。在优选的实施方式中，在肿瘤位点局部施用抗体或抗原结合片段。还可以瘤内施用抗体或抗原结合片段，例如，通过在肿瘤位点直接注射细胞和/或将细胞直接注射到肿瘤脉管系统。例如，就恶性胸膜疾病、间皮瘤或肺癌来说，优选地通过胸膜内施用进行施用(参见Adusumilli等人,Science Translational Medicine 6(261):261ra151(2014))。本领域技术人员可以基于要治疗的癌症类型和/或肿瘤位置选择适合的施用模式。可以通过注射或导管引入抗体或抗原结合片段。在一个实施方式中，将抗体或抗原结合片段胸膜施用于有需要的受试者，例如，使用胸膜内导管。
使用本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者药物组合物治疗的癌症或肿瘤包括通常对免疫疗法起反应的那些和通常对免疫疗法不起反应的那些。可以治疗的癌症还包括TIM-3阳性癌症。在一些实施方式中，所述癌症具有高度的微卫星不稳定。在一些实施方式中，所述癌症是转移性癌症、难治性癌症或复发性癌症。
在一些实施方式中，可以用本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或药物组合物治疗的癌症或肿瘤是血液学癌症。所述血液学癌症可以是表达TIM-3的血液学癌症。在一些实施方式中，所述血液学癌症可以是白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤(MM)或者骨髓增生异常综合征(MDS)。在一些实施方式中，所述血液学癌症可以是急性白血病、急性髓细胞性白血病(AML)、B-急性淋巴细胞性白血病(B-ALL)、T-急性淋巴细胞性白血病(T-ALL)、B细胞前体急性淋巴母细胞性白血病(BCP-ALL)、母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN)、急性淋巴细胞性白血病、急性髓母细胞性白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性髓单核细胞白血病、急性单核细胞性白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性粒细胞性白血病(CML)、慢性粒细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性单核细胞性白血病(CMML)、自然杀伤细胞白血病(NK白血病)、霍奇金病、非霍奇金病、Waldenstrom氏巨球蛋白血症、淋巴细胞性淋巴瘤、原发性CNS淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、自然杀伤细胞淋巴瘤(NK淋巴瘤)、皮肤T-细胞淋巴瘤(CTCL)或者外周T细胞淋巴瘤(PTCL)。在一些实施方式中，本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者药物组合物可以用于治疗MDS。在一些实施方式中，本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者药物组合物可以用于治疗白血病。在一些实施方式中，所述白血病是AML。
在一些实施方式中，本文提供了治疗对其有需要的受试者中表达TIM-3的白血病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者药物组合物。
在一些实施方式中，可以用本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者药物组合物治疗的癌症或肿瘤是实体瘤。在一些实施方式中，所述癌症或肿瘤可以是癌瘤、肉瘤、黑素瘤(例如，皮肤或眼内恶性黑素瘤)、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、脑和脊髓瘤、生殖细胞瘤、神经内分泌瘤、类癌瘤、胃癌、食道癌、肝癌、肺癌(例如，小细胞肺癌或者非小细胞肺癌)、头颈癌、皮肤癌、鼻咽癌、肾癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、睾丸癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫癌、前列腺癌(例如，激素难治性前列腺腺癌)、膀胱癌、结肠癌、内分泌癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌、隆凸性皮肤纤维肉瘤、间皮瘤、Merkel细胞癌、骨癌、肠癌、肾癌(例如，明细胞癌)、咽喉癌、直肠癌、肛区癌、脑癌、胃癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、小肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童期实体瘤、输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)赘生物、脊柱瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波济氏肉瘤、表皮样癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨原性肉瘤、滑膜肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、鳞状细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、威尔姆氏瘤、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、许旺氏细胞瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤或者成视网膜细胞瘤。
在一些实施方式中，可以用本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者药物组合物治疗的癌症或肿瘤选自肾细胞癌(RCC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、头颈鳞状细胞癌(SCCHN)、三阴性乳腺癌(TNBC)、胃腺癌(gastric/stomach adenocarcinoma)(STAD)、胰腺腺癌(PAAD)、结肠腺癌(COAD)或者直肠腺癌(READ)。在一些实施方式中，所述癌症或肿瘤是RCC。在一些实施方式中，所述癌症或肿瘤是NSCLC。在一些实施方式中，所述癌症或肿瘤是SCCHN。在一些实施方式中，所述癌症或肿瘤是TNBC。在一些实施方式中，所述癌症或肿瘤是STAD。在一些实施方式中，所述癌症或肿瘤是PAAD。在一些实施方式中，所述癌症或肿瘤是COAD。在一些实施方式中，所述癌症或肿瘤是READ。
在癌症治疗中，可以发生受试者中癌症或肿瘤细胞的消除，但是任何临床改善构成益处。可以通过肿瘤体积减小、肿瘤细胞数目减少、转移数目减少、预期寿命增加或者与癌性病况有关的多种生理学症状的改善来显示抗肿瘤效果。还可以首先通过本文所提供的抗体或抗原结合片段或者药物组合物在预防肿瘤发生中的能力来显示抗肿瘤效果。在一些实施方式中，可以通过癌症-诱导的免疫抑制的降低来显示“抗肿瘤效果”。临床改善包括降低癌症或肿瘤发展的风险或速率或者减少癌症或肿瘤的病理后果。还应理解治疗癌症的方法可以包括改善与癌症有关的病征或症状的任何效果。这些病征或症状包括(但不限于)降低肿瘤负荷，包括抑制肿瘤生长、减缓肿瘤生长速率、减小肿瘤尺寸、减少肿瘤数目、消除肿瘤，所有这些都可以使用在本领域中熟知的常规肿瘤成像技术测量。与癌症有关的其它病征或症状包括(但不限于)疲劳、疼痛、体重减轻和与多种癌症有关的其它病征或症状。
在一些实施方式中，本文所提供的方法或用途可以降低肿瘤负荷。因此，本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者药物组合物的施用可以降低受试者中的肿瘤细胞数目、降低肿瘤尺寸和/或根除肿瘤。用于监测患者对本文所公开的药物组合物的施用的反应的方法在本领域中是已知的并且可以根据本文所公开的方法使用所述监测方法。
在一些实施方式中，在已作为单一疗法(即不与另一种治疗剂(例如，抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体)组合)施用本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的患有肿瘤或癌症的受试者中观察到抗肿瘤效果。在一些实施方式中，在已作为单一疗法(即不与另一种治疗剂(例如，抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体)组合)施用本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的患有肿瘤或癌症的受试者中降低了肿瘤负荷。
在本文所公开的方法中，向需要癌症治疗的受试者施用治疗有效量的本文所公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者药物组合物。所述受试者可以是哺乳动物。在一些实施方式中，所述受试者是人。在一些实施方式中，这些个体没有临床可测量的肿瘤。然而，怀疑他们在原始肿瘤位点附近或者通过转移处于疾病发展风险。可以将该组进一步再分成高风险和低风险个体。基于初始治疗之前或之后所观察到的特征进行再分。这些特征在临床领域是已知的并且对于不同类型的癌症进行了适当定义。高风险亚组的典型特征是其中肿瘤已侵袭邻近组织的那些或者显示涉及淋巴结的那些。
可以通过本领域中已知的医疗装置施用本文所提供的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者药物组合物。例如，在一些实施方式中，可以使用无针皮下注射装置，如下列中所公开的装置：美国专利No.5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824；或4,596,556。用于本文所描述的用途的熟知的植入物和模块的实例包括：美国专利No.4,487,603，其公开了用于以受控速率分配药物的可植入微型输液泵；美国专利No.4,486,194，其公开了通过皮肤施用药剂的治疗装置；美国专利No.4,447,233，其公开了以准确输注速率用于递送药物的药物输液泵；美国专利No.4,447,224，其公开了用于连续药物递送的可变速流可植入输注设备；美国专利No.4,439,196，其公开了具有多室隔室的渗透性药物递送系统；和美国专利No.4,475,196，其公开了渗透性药物递送系统。这些专利作为参考并入本文。多种其它这些植入物、递送系统和模块是本领域技术人员已知的。
在一些实施方式中，将抗TIM-3抗体或抗原结合片段施用于患有癌症的患者，所述癌症对在先治疗显示出不足的反应，或者经过在先治疗仍发展，所述在先治疗(例如)使用免疫肿瘤学或免疫疗法药物的在先治疗，或者将抗TIM-3抗体或抗原结合片段施用于患有癌症的患者，所述癌症是难治或耐受的，其是固有难治的或耐受的(例如，对于PD-1通路拮抗剂难治)或者其中获得了耐受或难治状态。例如，可以通过单独或者与另一种疗法(例如，与抗PD-1疗法)组合施用抗TIM-3抗体治疗在治疗，例如，抗PD-1治疗后，对第一疗法不起反应或不充分起反应的受试者或者观察到疾病发展的受试者。
在一些实施方式中，将抗TIM-3抗体或抗原结合片段施用于先前未接受免疫肿瘤学试剂，例如，PD-1通路拮抗剂(即未用免疫肿瘤学试剂治疗)的患者。
在一些实施方式中，治疗受试者中癌症的方法包括首先确定所述受试者是否是TIM-3阳性的，例如，是否具有表达TIM-3的肿瘤细胞或TIL，并且如果所述受试者具有TIM-3阳性癌症或TIL细胞，则向所述受试者施用抗TIM-3抗体，例如，本文所描述的抗TIM-3抗体。用抗TIM-3抗体治疗患有癌症的受试者的方法可以包括向具有表达TIM-3的癌细胞或TIL细胞的受试者施用治疗有效量的TIM-3抗体。本文还提供了预测受试者是否将对使用抗TIM-3抗体的治疗起反应的方法，其中所述方法包括确定所述患者的癌细胞或TIL细胞中TIM-3的水平，并且如果所述受试者的癌细胞或TIL细胞是TIM-3阳性的，则所述受试者可能对使用TIM-3抗体的治疗起反应。
在一些实施方式中，治疗受试者中癌症的方法包括首先确定所述受试者是否是PD-L1或PD-1阳性的，例如，是否具有表达PD-L1或PD-1的肿瘤细胞或TIL，并且如果所述受试者具有PD-L1或PD-1阳性癌细胞或TIL细胞，则向所述受试者施用抗TIM-3抗体或抗原结合片段(和任选地PD-1或PD-L1拮抗剂)，例如，本文所述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。用抗TIM.3抗体(和任选地PD-1或PD-L1拮抗剂)治疗患有癌症的受试者的方法可以包括向具有表达PD-L1或PD-1的癌细胞或TIL细胞的受试者施用治疗有效量的TIM-3抗体或抗原结合片段(和任选地PD-1或PD-L1拮抗剂)。本文还提供了预测受试者是否将对使用抗TIM-3抗体(和任选地PD-1或PD-L1拮抗剂)的治疗起反应的方法，其中所述方法包括确定所述患者的癌细胞或TIL细胞中PD-L1或PD-1的水平，并且如果所述受试者的癌细胞或TIL细胞是PD-L1或PD-1阳性的，则所述受试者可能对使用TIM-3抗体(和任选地PD-1或PD-L1拮抗剂)的治疗起反应。
可以与标准护理治疗一起施用抗TIM-3抗体。可以作为维持疗法，例如，旨在预防肿瘤发生或复发的疗法施用抗TIM-3抗体。
可以与另一种治疗，例如，放疗、手术或化疗一起施用抗TIM-3抗体。例如，当存在可以存在微转移的风险和/或为了降低复发风险时，可以施用抗TIM-3抗体辅助疗法。
可以作为单一疗法或者作为唯一的免疫刺激疗法施用抗TIM-3抗体或抗原结合片段。抗TIM-3抗体或抗原结合片段还可以与免疫原性剂，如癌性细胞、纯化的肿瘤抗原(包括重组蛋白、肽和碳水化合物分子)、细胞和用编码免疫刺激细胞因子的基因转染的细胞组合(He等人,(2004)J.Immunol.173:4919-28)。可以使用的肿瘤疫苗的非限制性实例包括黑素瘤抗原的肽，如gp100、MAGE抗原、Trp-2、MARTI和/或酪氨酸酶或者转染以表达细胞因子GM-CSF的肿瘤细胞(以下进一步讨论的)的肽。
在人中，一些肿瘤已显示是免疫原性的，如黑素瘤。通过降低经由TIM-3抑制的T细胞激活的阈值，可以激活宿主中肿瘤反应，从而使得能够治疗非免疫原性肿瘤或者具有有限免疫原性的那些肿瘤。
抗TIM-3抗体，例如，本文所描述的抗TIM-3抗体可以与疫苗接种规程组合。已设计了对肿瘤进行疫苗接种的多种实验策略(参见Rosenberg,S.,2000,Development ofCancer Vaccines,ASCO Educational Book Spring:60-62；Logothetis,C,2000,ASCOEducational Book Spring:300-302；Khayat,D.2000,ASCO Educational Book Spring:414-428；Foon,K.2000,ASCO Educational Book Spring:730-738；还参见Restifo,N.andSznol,M.,Cancer Vaccines,第61章,第3023-3043页，在DeVita等人(主编),1997,Cancer:Principles and Practice of Oncology,第5版中)。在这些策略之一中，使用自体同源或同种异体肿瘤细胞制备疫苗。当转导肿瘤细胞以表达GM-CSF时，这些细胞疫苗已显示是最有效的。GM-CSF已表明是用于肿瘤疫苗接种的抗原递呈的有效激活剂(Dranoff等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A.90:3539-43)。
树突状细胞(DC)是可以用于初次引起(prime)抗原-特异性应答的有效抗原递呈细胞。可以离体产生DC并将其加载到多种蛋白质和肽抗原以及肿瘤细胞提取物中(Nestle等人(1998)Nature Medicine 4:328-332)。同样，还可以通过基因方式转导DC以表达这些肿瘤抗原。出于免疫的目的，DC还已直接融合至肿瘤细胞(Kugler等人(2000)NatureMedicine 6:332-336)。作为疫苗接种的方法，DC免疫可以与TIM-3抑制有效组合以激活更有效的抗肿瘤反应。
使用具有不同作用机制的试剂的组合疗法可以导致相加或协同作用。组合疗法可以允许每种试剂的剂量低于单一疗法中所使用的剂量，借此降低本文所公开的试剂的毒副作用和/或提高其治疗指数。组合疗法可以降低将出现耐受性癌细胞的可能性。在一些实施方式中，其它疗法导致本文所描述的抗体或抗原结合片段或者药物组合物的治疗指数升高。在一些实施方式中，其它疗法导致本文所描述的抗体或抗原结合片段或者药物组合物的毒性和/或副作用降低。在一些实施方式中，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段或者药物组合物可以与其它疗法组合施用。在一些实施方式中，所述其它疗法可以是手术切除、放射疗法或化疗。
TIM-3抑制还可以与标准癌症治疗(例如，手术、放疗和化疗)组合。TIM-3抑制可以与化疗方案有效组合。在这些情况下，可以有可能降低所施用的化疗试剂的剂量(Mokyr等人(1998)Cancer Research 58:5301-5304)。这种组合的实例是抗TIM-3抗体与氨烯咪胺组合用于治疗黑素瘤。这种组合的另一种实例是抗TIM-3抗体与白介素-2(IL-2)组合用于治疗黑素瘤。TIM-3抑制和化疗的组合使用背后的科学原理是细胞死亡，即大部分化疗化合物的细胞毒作用的后果，应导致抗原递呈通路中肿瘤抗原水平的升高。可以通过细胞死亡导致与TIM-3抑制的协同作用的其它组合疗法是放疗、手术和激素剥夺。这些规程中的每一种在宿主中产生了肿瘤抗原的来源。血管生成抑制剂还可以与TIM-3抑制组合。血管生成的抑制导致肿瘤细胞死亡，其可以将肿瘤抗原注入到宿主抗原递呈通路。
本文所描述的抗TIM-3抗体还可以与将表达Fcα或Fcγ受体的效应细胞靶向肿瘤细胞的双重特异性抗体组合使用(参见，例如，美国专利No.5,922,845和5,837,243)。双重特异性抗体可以用于靶向两种不同抗原。例如，抗Fc受体/抗肿瘤抗原(例如，Her-2/neu)双重特异性抗体已用于将巨噬细胞靶向肿瘤位点。这种靶向可以更有效地激活肿瘤特异性反应。通过TIM-3抑制将增强这些反应的T细胞臂(T cell arm)。作为另外一种选择，可以通过使用结合至肿瘤抗原和树突状细胞特异性细胞表面标志物的双重特异性抗体将抗原直接递送至DC。
肿瘤通过多种机制逃避宿主免疫监视。通过使肿瘤表达的且具有免疫抑制性的蛋白质失活，可以克服这些机制中的多种机制。这些尤其包括TGF-β(Kehrl等人(1986)J.Exp.Med.163:1037-1050)、IL-10(Howard&O'Garra(1992)Immunology Today 13:198-200)和Fas配体(Hahne等人(1996)Science 274:1363-1365)。这些实体中的每一种的抗体可以与抗TIM-3抗体或抗原结合片段组合用于抵消免疫抑制剂的作用并且有利于宿主的肿瘤免疫应答。
目前，将骨髓移植用于治疗多种造血源肿瘤。当这种治疗的结果是移植物抗宿主病时，治疗益处可以得自移植物抗肿瘤应答。TIM-3抑制可以用于提高供体植入的肿瘤特异性T细胞的有效性。
还存在几种实验治疗规程，所述实验治疗规程包括抗原特异性T细胞的离体激活和扩增以及这些细胞向受体的继承性转移以刺激抗原-特异性T细胞抵抗肿瘤(Greenberg&Riddell(1999)Science 285:546-51)。这些方法还可以用于激活T细胞对感染剂，如CMV的应答。在存在抗TIM-3抗体的情况下的离体激活可以提高继承性转移的T细胞的频率和活性。
本文提供了组合疗法方法，其中将抗TIM-3抗体与在刺激免疫应答中有效的一种或多种其它试剂，例如，小分子药物、抗体或其抗原结合部分共施用，从而借此进一步增强、刺激或上调受试者中的免疫应答。
通常，抗TIM-3抗体或抗原结合片段，例如，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以与免疫细胞，如T细胞上的(i)刺激性(例如，共刺激性)分子(例如，受体或配体)的激动剂和/或(ii)抑制性信号或分子(例如，受体或配体)的拮抗剂组合，两者均导致放大免疫应答，如抗原-特异性T细胞应答。在一些实施方式中，免疫肿瘤学试剂是细胞上的(i)刺激性(包括共刺激性)分子(例如，受体或配体)的激动剂或者(ii)抑制性(包括共抑制性)分子(例如，受体或配体)的拮抗剂，所述细胞(例如)抑制T细胞激活的那些或者参与先天免疫的那些，例如，NK细胞，并且其中所述免疫肿瘤学试剂增强先天免疫。这些免疫肿瘤学试剂通常被称为免疫检查点调节剂，例如，免疫检查点抑制剂或者免疫检查点刺激剂。
在一些实施方式中，将抗TIM-3抗体或抗原结合片段与靶向作为免疫球蛋白超家族(IgSF)的成员的刺激性或抑制性分子的试剂一起施用。例如，可以将抗TIM-3抗体或抗原结合片段，例如，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段与靶向IgSF家族成员的试剂一起施用于受试者以提高免疫应答。例如，可以将抗TIM-3抗体或抗原结合片段与靶向(或特异性结合至)膜结合配体的B7家族成员的试剂一起施用，所述膜结合配体的B7家族成员包括B7-1、B7-2、B7-H1(PD-L1)、B7-DC(PD-L2)、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)和B7-H6或者特异性结合至B7家族成员的共刺激性或共抑制性受体或配体。
还可以将抗TIM-3抗体或抗原结合片段与靶向分子(配体或受体)的TNF和TNFR家族成员的试剂一起施用，所述成员如CD40和CD40L、OX-40、OX-40L、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn 14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、TACI、APRIL、BCMA、LTpR、LIGHT、DcR3、HVEM、VEGI/TL1A、TRAMP/DR3、EDA1、EDA2、TNFR1、淋巴毒素a/TNFp、TNFR2、TNF a、LTpR、淋巴毒素a 1b2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY和NGFR(参见，例如，Tansey(2009)DrugDiscovery Today 00:1)。
可以通过具有(例如)3E6、4H2、16H1、18C6、19D11、CH 5#、CH 8#、CH 9#、CH 10#、CH11#、3F2、36A2、36B11、38F8、38A8、40F11、50H9、84G10或39D1的CDR的抗TIM-3抗体或抗原结合片段与以下试剂中的一种或多种的组合来刺激T细胞应答：
(1)抑制T细胞激活的蛋白质的拮抗剂(抑制剂或阻断剂)(例如，免疫检查点抑制剂)，如CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、GITR和LAG-3、半乳凝素9、CEACAM-1、CEACAM-5、BTLA、CD69、半乳凝素-1、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、B7-H3、B7-H4、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM-1和TIM-4；和/或
(2)刺激T细胞激活的蛋白质的激动剂，如B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD 137)、4-1BBL、GITR、ICOS、ICOS-L、0X40、OX40L、CD70、CD27、CD40、DR3和CD28H。
调节以上蛋白质之一并且可以与抗TIM-3抗体，例如，本文所描述的那些抗体组合用于治疗癌症的示例性试剂包括：(普利木单抗)或替西木单抗(tremelimumab)(抗CTLA-4)、加利昔单抗(抗B7.1)、BMS-936558(抗PD-1)、MK-3475(抗PD-1)、阿特珠单抗AMP224(抗B7DC)、BMS-936559(抗B7-H1)、MPDL3280A(抗B7-H1)、MEDI-570(抗ICOS)、AMG557(抗B7H2)、MGA271(抗B7H3)、IMP321(抗LAG-3)、BMS-663513(抗CD137)、PF-05082566(抗CD137)、CDX-1127(抗CD27)、抗OX40抗体(ProvidenceHealth Services)、huMAbOX40L(抗OX40L)、阿塞西普(抗TACI)、CP-870893(抗CD40)、鲁卡木单抗(lucatumumab)(抗CD40)、达西珠单抗(dacetuzumab)(抗CD40)、莫罗单抗-CD3(抗CD3)；抗GITR抗体MK4166、TRX518、Medil873、INBRX-110、LK2-145、GWN-323、GITRL-Fc或它们的任意组合。
可以与抗TIM-3抗体或抗原结合片段组合用于治疗癌症的其它分子包括NK细胞上的抑制性受体的拮抗剂或者NK细胞上的激活受体的激动剂。例如，抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以与KIR的拮抗剂(例如，利瑞路单抗(lirilumab))组合。
还通过可溶性细胞因子调控T细胞激活，并且可以将抗TIM-3抗体或抗原结合片段与抑制T细胞激活的细胞因子的拮抗剂或者刺激T细胞激活的细胞因子的激动剂一起施用于受试者，例如，患有癌症的受试者。
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以与(i)抑制T细胞激活的IgSF家族或B7家族或TNF家族的蛋白的拮抗剂(或者抑制剂或阻断剂)或者抑制T细胞激活的细胞因子的拮抗剂(例如，IL-6、IL-10、TGF-β、VEGF；“免疫抑制性细胞因子”)和/或(ii)刺激T细胞激活的IgSF家族、B7家族或TNF家族的刺激性受体或者细胞因子的激动剂组合，用于刺激免疫应答，例如，用于治疗增殖性疾病，如癌症。
用于组合疗法的又一其它试剂包括抑制或消耗巨噬细胞或单核细胞的试剂，其包括(但不限于)CSF-1R拮抗剂，如CSF-1R拮抗剂抗体，包括RG7155(WO11/70024、WO11/107553、WO11/131407、WO13/87699、WO13/119716、WO13/132044)或FPA-008(WO11/140249；WO13169264；WO14/036357)。
抗TIM-3抗体或抗原结合片段还可以与抑制TGF-β信号转导的试剂一起施用。在一些实施方式中，所述试剂是特异性结合潜在TGF-β或GARP/TGF-β复合物的抗体。在一些实施方式中，所述试剂是特异性结合TGF-β受体的抗体。
可以与抗TIM-3抗体或抗原结合片段组合的其它试剂包括增强肿瘤抗原递呈的试剂，如树突状细胞疫苗、分泌GM-CSF的细胞疫苗、CpG寡核苷酸和咪喹莫特，或者增强肿瘤细胞的免疫原性的疗法(例如，蒽环类物)。
可以与抗TIM-3抗体或抗原结合片段组合的又一其它疗法包括消耗或阻断Treg细胞的疗法，例如，特异性结合至CD25的试剂。
可以与抗TIM-3抗体组合的另一种疗法是抑制代谢酶，如吲哚胺加双氧酶(IDO)、加双氧酶、精氨酸酶或者一氧化氮合酶的疗法。
可以与抗TIM-3抗体或抗原结合片段一起使用的另一类试剂包括抑制腺嘌呤核苷形成的试剂，例如，CD73抑制剂，或者抑制腺嘌呤核苷A2A受体的试剂。
可以与抗TIM-3抗体或抗原结合片段组合用于治疗癌症的其它疗法包括逆转/预防T细胞无能或耗尽的疗法以及在肿瘤位点引发先天免疫激活和/或炎症的疗法。
可以与抗TIM-3抗体或抗原结合片段组合用于治疗癌症的其它疗法包括阻断IL-8，例如，用HuMax-IL8阻断IL-8的疗法。
抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以与不止一种免疫肿瘤学试剂组合，并且可以(例如)与靶向免疫通路的多个元件的组合方法组合，如以下中的一种或多种：增强肿瘤抗原递呈的疗法(例如，树突状细胞疫苗、分泌GM-CSF的细胞疫苗、CpG寡核苷酸、咪喹莫特)；抑制负免疫调控的疗法，例如，通过抑制CTLA-4和/或PD1/PD-L1/PD-L2通路和/或消耗或阻断Treg或其它免疫抑制细胞；刺激正免疫调控的疗法，例如，通过刺激CD-137、OX-40和/或CD40或GITR通路和/或刺激T细胞效应功能的激动剂；全身性提高抗肿瘤T细胞频率的疗法；例如，使用CD25的拮抗剂(例如，达昔单抗(daclizumab))或者通过离体抗CD25珠消耗，消耗或抑制Treg，如肿瘤中的Treg的疗法；影响肿瘤中抑制骨髓细胞功能的疗法；增强肿瘤细胞的免疫原性的疗法(例如，蒽环类物)；过继性T细胞或NK细胞转移，包括基因修饰的细胞，例如，通过嵌合抗原受体修饰的细胞(CAR-T疗法)；抑制代谢酶，如吲哚胺加双氧酶(IDO)、加双氧酶、精氨酸酶或者一氧化氮合酶的疗法；逆转/预防T细胞无能或耗尽的疗法；在肿瘤位点引发先天免疫激活和/或炎症的疗法；免疫刺激性细胞因子的施用；或者免疫抑制性细胞因子的阻断。
本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以与下列试剂一起使用：一种或多种连接阳性共刺激受体的激动剂、通过抑制性受体削弱信号传导的阻断剂、拮抗剂和一种或多种全身性提高抗肿瘤T细胞频率的试剂，在肿瘤微环境内克服不同免疫抑制通路(例如，阻断抑制性受体接合(例如，PD-L1/PD-1相互作用)、消耗或抑制Treg(例如，使用抗CD25单克隆抗体(例如，达昔单抗(daclizumab))或者通过离体抗CD25珠消耗)、抑制代谢酶，如IDO，或者逆转/预防T细胞无能或耗尽)的试剂以及在肿瘤位点引发先天免疫激活和/或炎症的试剂。
在一些实施方式中，如果受试者是BRAF V600突变阳性的，则将抗TIM-3抗体或抗原结合片段与BRAF抑制剂一起施用于受试者。
适合于在本文所描述的组合疗法中使用的PD-1拮抗剂无限制地包括配体、抗体(例如，单克隆抗体和双重特异性抗体)和多价试剂。在一些实施方式中，PD-1拮抗剂是融合蛋白，例如，Fc融合蛋白，如AMP-244。在一些实施方式中，PD-1拮抗剂是抗PD-1或抗PD-L1抗体。
示例性抗PD-1抗体是纳武单抗(BMS-936558)或者包含WO 2006/121168中所描述的抗体17D8、2D3、4H1、5C4、7D3、5F4和4A11之一的CDR或可变区的抗体。在一些实施方式中，抗PD-1抗体是WO2012/145493中所描述的MK-3475(兰洛珠单抗)；WO 2012/145493中所描述的AMP-514；或者PDROOl。其它已知的PD-1抗体及其它PD-1抑制剂包括WO 2009/014708、WO03/099196、WO 2009/114335、WO 2011/066389、WO 2011/161699、WO 2012/145493、美国专利No.7,635,757和8,217,149和美国专利公开No.2009/0317368中所描述的那些。还可以使用WO2013/173223中所公开的抗PD-1抗体中的任一种。还可以在组合治疗中使用竞争与这些抗体之一相同的PD-1上的表位的结合和/或结合至所述相同表位的抗PD-1抗体。
在一些实施方式中，用于组合疗法的抗PD-L1抗体是BMS-936559(在WO 2007/005874和美国专利No.7,943,743中被称为12A4)或者包含PCT专利公开WO 07/005874和美国专利No.7,943,743中所描述的3G10、12A4、10A5、5F8、10H10、IB 12、7H1、11E6、12B7和13G4的CDR或可变区的抗体。在一些实施方式中，抗PD-L1抗体是MEDI4736(也称为德瓦鲁单抗和抗B7-Hl)、MPDL3280A(也称为阿特珠单抗和RG7446)、MSB0010718C(也称为阿维鲁单抗(Avelumab)；WO2013/79174)，或者rHigM12B7。还可以使用WO2013/173223、WO2011/066389、WO2012/145493、美国专利No.7,635,757和8,217,149以及美国专利公开No.2009/145493中所公开的抗PD-L1抗体中的任一种。还可以在组合治疗中使用与和这些抗体中任一种的表位相同的表位竞争和/或结合至所述相同表位的抗PD-L1抗体。
在一些实施方式中，可以与CTLA-4拮抗剂，例如，抗CTLA-4抗体一起使用本发明公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，抗CTLA-4抗体是选自下列的抗体：(普利木单抗或抗体10D1，在PCT专利公开WO 01/14424中描述)、替西木单抗(tremelimumab)(先前称为替西木单抗(ticilimumab)、CP-675,206)、在以下出版物中任一项中所描述的单克隆或抗CTLA-4抗体：WO 98/42752；WO 00/37504；美国专利No.6,207,156；Hurwitz等人(1998)Pro.Natl.Acad.Sci.USA95(17):10067-10071；Camacho等人(2004)J.Clin.Oncology 22(145):Abstract No.2505(抗体CP-675206)；和Mokyr等人(1998)Cancer Res.58:5301-5304。还可以使用WO2013/173223中所公开的抗CTLA-4抗体中的任一种。
在一些实施方式中，本发明公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段与LAG3拮抗剂组合使用。抗LAG3抗体的实例包括包含抗体25F7、26H10、25E3、8B7、11F2或17E5的CDR或可变区的抗体，以上抗体描述于美国专利公开No.US2011/0150892、W010/19570和WO2014/008218。在一些实施方式中，抗LAG-3抗体是BMS-986016。可以使用的其它领域认可的抗LAG-3抗体包括在US2011/007023、W008/132601和WO09/44273中所描述的IMP731和IMP-321。还可以在组合治疗中使用与和这些抗体中任一种的表位相同的表位竞争和/或结合至所述相同表位的抗LAG-3抗体。
在一些实施方式中，本发明公开的抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以与CD 137(4-1BB)激动剂，如激动性CD137抗体组合施用。适合的CD137抗体包括(例如)乌瑞芦单抗(urelumab)或PF-05082566(W012/32433)。
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段可以与0X40激动剂，如激动性0X40抗体组合施用。适合的0X40抗体包括(例如)MEDI-6383、MEDI-6469或MOXR0916(RG7888；WO06/029879)。
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段与CD40激动剂，如激动性CD40抗体组合施用。在一些实施方式中，所述免疫肿瘤学试剂是CD40拮抗剂，如拮抗性CD40抗体。适合的CD40抗体包括(例如)鲁卡木单抗(lucatumumab)(HCD122)、达西珠单抗(dacetuzumab)(SGN-40)、CP-870,893或Chi Lob 7/4。
在一些实施方式中，抗TIM-3抗体或抗原结合片段与CD27激动剂，如激动性CD27抗体组合施用。适合的CD27抗体包括(例如)伐立鲁单抗(varlilumab)(CDX-1127)。
在一些实施方式中，将抗TIM-3抗体或抗原结合片段与抗GITR抗体一起施用，例如，具有6C8的CDR序列的抗体，例如，具有6C8的CDR的人源化抗体，如(例如)W02006/105021中所描述的；包含WO2011/028683中所描述的抗GITR抗体的CDR的抗体；包含JP2008278814中所描述的抗GITR抗体的CDR的抗体、包含W02015/031667、WO2015/187835、WO2015/184099、WO2016/054638、WO2016/057841或WO2016/057846中所描述的抗GITR抗体的CDR的抗体或者本文中所描述或所提及的其它抗GITR抗体。
在一些实施方式中，将抗TIM-3抗体或抗原结合片段与MGA271(抗B7H3)组合施用(WOl 1/109400)。
在一些实施方式中，将抗TIM-3抗体或抗原结合片段与KIR拮抗剂，如利瑞路单抗(lirilumab)组合施用。
在一些实施方式中，将抗TIM-3抗体或抗原结合片段与IDO拮抗剂组合施用。适合的IDO拮抗剂包括(例如)INCB-024360(W02006/122150、WO07/75598、WO08/36653、WO08/36642)、indoximod、NLG-919(W009/73620、WO09/1156652、WOl l/56652、W012/142237)或F001287。
在一些实施方式中，将抗TIM-3抗体或抗原结合片段与Toll-样受体激动剂，例如，TLR2/4激动剂(例如，卡介菌(Bacillus Calmette-Guerin))；TLR7激动剂(例如，Hiltonol或咪喹莫特)；TLR7/8激动剂(例如，瑞喹莫德)；或者TLR9激动剂(例如，CpG7909)组合施用。
在一些实施方式中，将抗TIM-3抗体或抗原结合片段与TGF-β抑制剂，例如，GC1008、LY2157299、TEW7197或者lMC-TRl组合施用。
本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段和组合疗法还可以结合出于它们对于要治疗的适应症(例如，癌症)的具体有用性所选择的其它熟知的疗法使用。可以与已知的药物可用的试剂顺序使用本文所描述的抗TIM-3抗体的组合。
例如，本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段和组合疗法可以与其它治疗组合(例如，同时或分开)使用，如放疗和/或化疗，例如，使用喜树碱(CPT-11)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂、多柔比星、伊立替康、紫杉醇、吉西他滨、顺铂、紫杉醇、卡铂-紫杉醇(Taxol)、多柔比星或者喜树碱+apo21/TRAIL(6X组合))、一种或多种蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米或MG132)、一种或多种Bcl-2抑制剂(例如，BH3I-2'(bcl-xl抑制剂)、吲哚胺加双氧酶-1抑制剂(例如，INCB24360、indoximod、NLG-919或F001287)、AT-101(R-(-)-棉酚衍生物)、ABT-263(小分子)、GX-15-070(奥巴克拉(obatoclax))或MCL-1(骨髓性白血病细胞分化蛋白-1)拮抗剂)、iAP(细胞凋亡蛋白的抑制剂)拮抗剂(例如，smac7、smac4、小分子smac模拟物、合成smac肽(参见Fulda等人,Nat Med 2002；8:808-15)、ISIS23722(LY2181308)或AEG-35156(GEM-640))、HDAC(组蛋白去乙酰化酶)抑制剂、抗CD20抗体(例如，利妥昔单抗)、血管生成抑制剂(例如，贝伐单抗)、靶向VEGF和VEGFR的抗血管生成剂(例如，安维汀)、合成三萜(参见Hyer等人,Cancer Research 2005；65:4799-808)、c-FLIP(细胞FLICE抑制性蛋白)调节剂(例如，PPARy(过氧化物酶体增殖物激活受体y)、5809354或5569100的天然和合成配体)、激酶抑制剂(例如，索拉非尼)、曲妥珠单抗、西妥昔单抗、替西罗莫司、mTOR抑制剂，如雷帕霉素和替西罗莫司、硼替佐米、JAK2抑制剂、HSP90抑制剂、PI3K-AKT抑制剂、来那度胺(Lenalildomide)、GSK3P抑制剂、IAP抑制剂和/或基因毒性药物。
本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段和组合疗法可以进一步与一种或多种抗增殖性细胞毒性剂组合使用。可以用作抗增殖性细胞毒性剂的化合物种类包括(但不限于)下列：
烷化剂(无限制地包括氮芥类、氮丙啶衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯)：乌拉莫司汀、氮芥、环磷酰胺异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、曲他胺、三亚乙基硫代磷胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星、达卡巴嗪和替莫唑胺。
抗代谢物(无限制地包括叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂)：甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氮尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、氟达拉滨磷酸盐、喷司他汀(Pentostatine)和吉西他滨。
适合与抗TIM-3抗体或抗原结合片段组合的抗增殖性试剂无限制地为紫杉烷、紫杉醇(紫杉醇是可商购的，如TAXOLTM)、多西他赛、圆皮海绵内酯(discodermolide)(DDM)、dictyostatin(DCT)、Peloruside A、埃博霉素、埃博霉素A、埃博霉素B、埃博霉素C、埃博霉素D、埃博霉素E、埃博霉素F、呋喃并埃博霉素D、去氧埃博霉素Bl、去氢去氧埃博霉素B、去氢去氧埃博霉素B、C12,13-环丙基-埃博霉素A、C6-C8桥接的埃博霉素A、反式-9,10-去氢埃博霉素D、顺式-9,10-去氢埃博霉素D、16-去甲基埃博霉素B、埃博霉素BIO、圆皮海绵内酯(discoderomolide)、帕土匹隆(patupilone)(EPO-906)、KOS-862、KOS-1584、ZK-EPO、ABJ-789、XAA296A(圆皮海绵内酯(discodermolide))、TZT-1027(soblidotin)、ILX-651(tasidotin盐酸盐)、软海绵素B、甲磺酸艾日布林(E-7389)、Hemiasterlin(HTI-286)、E-7974、Cyrptophycins、LY-355703、美登素免疫缀合物(DM-1)、MKC-1、ABT-751、Tl-38067、T-900607、SB-715992(伊斯平斯)、SB-743921、MK-0731、STA-5312、艾榴塞洛素(eleutherobin)、17β-乙酰氧基-2-乙氧基-6-氧-B-均-雌甾-1,3,5(10)-三烯-3-醇、环链霉菌素(cyclostreptin)、isolaulimalide、laulimalide、4-表-7-脱羟-14,16-二去甲-(+)-圆皮海绵内酯(discodermolide)和cryptothilone 1以及其它本领域中已知的微管蛋白稳定剂。
当结合使用本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段的治疗或在所述治疗之前期望使异常增殖细胞静止时，还可以向患者施用激素和类固醇(包括合成类似物)，如17a-炔雌醇、己烯雌酚、睾酮、泼尼松、氟甲睾酮、屈他雄酮丙酸酯、睾内酪、醋酸甲地孕酮、甲泼尼龙、甲基睾酮、泼尼松龙、曲安西龙、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、醋酸甲羟孕酮、亮脯利特、氟他胺、托瑞米芬、当使用本文所描述的方法或组合物时，还可以根据需要施用在临床环境中，在调节肿瘤生长或转移中所使用的其它试剂，如抗模拟物(antimimetics)。
在一些实施方式中，可以作为单一组合物在药物可用的载体中同时施用或者作为其中抗TIM-3抗体或抗原结合片段和第二试剂在药物可用的载体中的分开的组合物同时施用本文所讨论的抗TIM-3抗体或抗原结合片段和第二试剂的组合。在一些实施方式中，可以顺序施用抗TIM-3抗体和第二试剂的组合。可以在相隔(例如)30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、3小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、3天、5天、7天或一周或多周的时间开始两种试剂的施用，或者可以在已施用第一试剂之后(例如)30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、3小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、3天、5天、7天或一周或多周开始第二试剂的施用。
在一些实施方式中，可以与抗TIM-3抗体或抗原结合片段和/或第二试剂组合的抗肿瘤抗体包括(利妥昔单抗)、(曲妥珠单抗)、(托西莫单抗)、(替伊莫单抗)、(阿仑珠单抗)、(依帕妥珠单抗(eprtuzumab))、(贝伐单抗)和(厄洛替尼)或它们的任意组合。在一些实施方式中，对于与抗TEVB抗体的组合疗法有用的第二抗体可以是抗体药物缀合物。
在一些实施方式中，与骨髓移植同时或顺序使用单独或与另一种试剂组合的抗TIM-3抗体或抗原结合片段以治疗多种造血来源的肿瘤。
本文提供了改变与使用免疫刺激剂的过度增殖性疾病(例如，癌症)的治疗有关的不良事件的方法，所述方法包括与或不与第二试剂一起向受试者施用抗TIM-3抗体或抗原结合片段。例如，本文所描述的方法提供了通过向患者施用不可吸收的类固醇来降低免疫刺激性治疗性抗体引起的结肠炎或腹泻的发病率的方法。如本文所使用的，“不可吸收的类固醇”是显示出广泛的首过代谢的糖皮质激素，从而在肝脏中代谢后，所述类固醇的生物利用度较低，即小于约20％。在本文所描述的一些实施方式中，不可吸收的类固醇是布地奈德。布地奈德是局部作用的糖皮质类固醇，其在口服施用后主要通过肝脏广泛代谢。ENTOCORT(Astra-Zeneca)是开发用于优化向回肠和在整个结肠中的药物递送的布地奈德的pH和时间依赖性口服制剂。ENTOCORT在美国批准用于治疗涉及回肠和/或升结肠的轻度至中度克罗恩氏病。在一些实施方式中，结合不可吸收的类固醇的抗TEVB抗体可以进一步与水杨酸盐组合。水杨酸盐包括5-ASA试剂，如，例如：柳氮磺吡啶(Pharmacia&Up John)；奥沙拉秦(Pharmacia&Up John)；巴柳氮(Salix Pharmaceuticals,Inc.)；和美沙胺(Procter&Gamble Pharmaceuticals；Shire US；Axcan Scandipharm,Inc.；Solvay)。
可以在施用本文所描述的抗TIM-3抗体或抗原结合片段、细胞或药物组合物之前、同时或之后施用其它疗法。组合施用可以包括在单一药物制剂或者使用不同制剂的共施用，或者以任一种顺序但通常在使得全部活性剂可以同时发挥它们的生物学活性的时间段内的连续施用。本领域技术人员可以基于要治疗的受试者的需要，容易地确定用于组合施用本文所描述的药物组合物和其它疗法的适当方案，包括在组合疗法中使用的其它试剂的时机和剂量。
6.实验
除非另作说明，否则仅出于说明的目的提供了以下实施例，它们不意欲限制。因此，本发明决不应视为受限于以下实施例，而是应视为涵盖由于本文所提供的教导内容而变得显而易见的任何和所有改变。
6.1实施例1：抗人TIM-3单克隆抗体的制备
将包含氨基酸残基(Met 1-Arg 200)的人TIM-3胞外结构域片段用作免疫原，并且通过用所述免疫原和弗氏佐剂(SIGMA)使7-周大的BALB/c小鼠免疫产生抗人TIM-3单克隆抗体。选择在血清中具有高抗体滴度的动物用于细胞融合。通过优化的PEG-介导的融合程序，通过将小鼠脾细胞与SP2/0(ATCC，CRL8287TM)融合获得杂交瘤细胞。在FACS筛选测定之后，选择阳性杂交瘤细胞用于保种和一系列亚克隆。对通过克隆3E6、4H2、16H1、18C6、19D11、3F2、36A2、36B11、38F8、38A8、40F11、50H9、84G10或39D1所产生的抗TIM-3抗体测序，并在上表1-3中提供各个抗体的序列。
6.2实施例2：生物学筛选抗TIM-3单链可变片段(scFv)
抗TIM-3 scFv噬菌体展示文库的淘选使用实施例1中所描述的方法免疫小鼠。对来自不同小鼠的血清滴定对TIM-3的反应性。处理来自高滴度小鼠的脾脏以提取总RNA。将抗体重链和轻链转录本反转录，使用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增，然后用于构建抗TIM-3scFv的噬菌体展示文库。通过在4℃，用处于4ml涂覆缓冲液中的10μg TIM-3-his涂覆每个柱过夜来制备免疫亲和柱。分别通过在37℃培育1小时，使用4％在PBS-T中的牛奶封闭免疫亲和柱和噬菌体展示文库。然后，将噬菌体展示文库添加至免疫亲和柱并在振荡下，在37℃培育1小时以使得抗TIM-3scFv与涂覆的TIM-3之间结合。通过用PBS-T清洗除去未结合的噬菌体。用0.1M甘氨酸-HCl pH 2.2洗脱柱，并用1.5M TRIS-HCl，pH 7.4将洗脱液调节至约pH 7.0。然后，将洗脱液用于感染10mL已使其生长至O.D.0.5-0.8的ER2738。使洗脱液-细菌混合物在37℃静置30分钟，然后在150rpm振荡下，在37℃培育1小时。然后，连续稀释1％细菌培养物并在板上铺板以确定得率。将剩余部分离心沉淀，再混悬并在2YTATG板上铺板并在37℃培养过夜。第二天，将集落转移到2YTATG液体培养基中并使其生长至指数生长期。然后，添加M13KO7辅助噬菌体并使其感染40分钟，然后通过离心收集培养物。用新鲜2YTAmp使沉淀颗粒再混悬并在30℃培养过夜，然后在PEG6000-NaCl中沉降纯化以用于下一轮淘选。实施总计3轮富集淘选。
抗TIM3 scFv片段的筛选。在3轮淘选后，将与其它集落良好分离的单克隆集落挑至含有2YTAmp液体培养基的96-深孔板中并使其在37℃，在220rpm振荡下生长至指数生长期，然后以220rpm，在30℃培育过夜。通过以4000rpm离心15分钟收集细菌培养物上清液并使用ELISA测量TIM-3结合亲和力。选择具有高TIM-3结合亲和力的克隆，包括克隆CH5#、CH8#、CH9#、CH10#和CH11#。以上表1-3中提供了各个抗体的序列。
6.3实施例3：抗TIM-3抗体的人源化
从IMGT数据库中选择接近于克隆3E6的种系以用作人源化的模板。对于CDR采用Kabat编号。将来自克隆3E6的CDR嫁接到相应人模板。以上表4a-4b中提供了人源化VH和VL区的序列。
为了表达人源化抗体：设计用于基因工程的引物；通过PCR获得VH和VL区并克隆至含有信号肽和编码恒定区(CH1-FC/CL)的核酸序列的表达载体中；将抗体的重链和轻链转染到293F细胞中用于表达。使用Octet-96测量亲和力。以下提供了人源化抗体的结合亲和力。
表5人源化抗体的结合亲和力
克隆 KD(M)
3E6 VH1/3E6 VL0 4.67E-07
3E6 VH2/3E6 VL0 2.21E-09
3E6 VH3/3E6 VL0 1.98E-09
3E6 VH4/3E6 VL0 1.87E-09
3E6 VH5/3E6 VL0 1.78E-09
3E6 VH6/3E6 VL0 1.46E-09
3E6 VH7/3E6 VL0 1.96E-09
6.4实施例4：亲和力成熟
亲和力成熟程序包括下列步骤：构建亲代Fab并验证其对于靶标抗原的结合；在全部6个CDR中实施残基的准确突变；选择单一克隆表达可溶性Fab以用于ELISA筛选和解离速率(off-rate)排序；选择有益突变并构建组合文库；实施ELISA筛选和解离速率排序；选择排名靠前的亲和力成熟的抗体克隆(以上表1c)；合成编码所选抗体克隆的DNA并亚克隆至表达载体；在HEK29细胞中表达所选抗体，纯化并用人TIM-3测量它们的亲和力。
表6结合亲和力和亲和力成熟的抗体。
6.5实施例5：抗体的纯化
将用抗体转染的细胞培养溶液高速离心并收集上清液。在用0.45μm滤膜过滤之后，通过亲和色谱法实施纯化的第一步。将与Fc相互作用的蛋白A或衍生填料(如GE的Mabselect)用作色谱介质。使用10倍柱体积的平衡缓冲液(1×PBS：5.6mmol/L Na2HPO4、1.06mmol/L KH2PO4、154mmol/LNaCl，pH7.2)，然后加载细胞上清液并合并。调整流速，从而使样品经过1分钟通过柱。用1×PBS清洗柱直至A280 UV吸收降低至基线，并用洗脱缓冲液(50mM PBS：50mmol/L Na2HPO4、1.06mmol/L KH2PO4、154mmol/LNaCl，pH 3.0)洗脱。根据A280紫外吸收，收集洗脱峰处的样品，用1M NaOH中和，通过超滤浓缩并用0.22μm膜过滤。通过SEC-HPLC确定抗体纯度大于95％，并通过LS-MS确认序列。
6.6实施例6：抗TIM-3抗体与人TIM-3蛋白的结合动力学
将抗TIM-3抗体偶联至HFC传感器(Probe Life)表面，并且作为流动相，以50nM的最大浓度1:2连续稀释人TIM-3重组蛋白。测量TIM-3蛋白和传感器表面上的抗体之间的结合和解离。具体地，将HFC传感器在SD缓冲液(含有0.02％ Tween-20和0.2％ BSA的PBS)中预润湿10分钟，然后在含有抗体的样品缓冲液中平衡1分钟，使抗体偶联至传感器表面。将抗体-偶联的HFC传感器在SD缓冲溶液中平衡1分钟，然后在含有不同浓度的TIM-3-his的缓冲溶液中培育120s以测量TIM-3-his蛋白与所捕获的抗体的结合。最终，将组合了抗原和抗体的传感器置于SD缓冲液中并等待300s以测量TIM-3-his蛋白从在传感器上所捕获的抗体的解离。使用1:1模型拟合数据，并计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。通过koff/kon比计算平衡解离常数(KD)。
表7：抗TIM-3抗体与TIM-3蛋白的结合动力学。
6.7实施例7：抗TIM-3抗体与小鼠或食蟹猴TIM-3的交叉反应性
简要地，将连续稀释的抗TIM-3抗体与稳定表达小鼠TIM-3或食蟹猴TIM-3的细胞系(105个细胞/孔)一起培育。然后，将PE-标记的小鼠抗人IgG抗体(Biolegend)用作检测抗体。将流式细胞仪(Canto II,BD,USA)用于测量荧光。如图1A所证实的，将抗体3E6、4H2、16H1、39D1与食蟹猴TIM-3交叉反应。如图1B所示，所测试的抗体无一与小鼠TIM-3交叉反应。测试某些人源化抗体，包括h3E6 IgG1和h3E6 IgG1 LALA(L234A/L235A突变体)。如图2所示，h3E6 IgG1和h3E6 IgG1 LALA均不与食蟹猴TIM-3交叉反应。进一步确认h3E6 IgG1和h3E6 IgG1 LALA均不与小鼠TIM-3交叉反应(数据未显示)。
6.8实施例8：抗TIM-3抗体的多种同种型与人或小鼠Fc受体的结合
使用生物分子相互作用系统Gator(Probe Life)检测不同同种型(IgG1、IgG1LALA、IgG2和IgG4)的人源化抗TIM-3抗体3E6与小鼠Fc受体(CD16、CD32B、FCRN或FCGR4)或者人Fc受体(CD32a H167、CD32a R167、CD32b、Cd16a 176F、Cd16a 176V、FCRN)的结合。将生物素化的-Fc受体偶联至SA传感器(Probe Life)表面，并且将不同同种型的人源化抗TIM-3抗体用作流动相。测量Fc受体和传感器表面上抗体之间的结合。具体地，将SA传感器在SD缓冲液(含有0.02％ Tween-20和0.2％ BSA的PBS)中预润湿10分钟，然后在含有Fc受体的样品缓冲液中平衡10分钟，使Fc受体偶联至传感器表面。将Fc受体-偶联的SA传感器在SD缓冲溶液中平衡2分钟，然后在含有抗体的缓冲溶液中培育5min以测量抗体与所捕获的Fc受体的结合。最终，将组合Fc受体和抗体的传感器置于SD缓冲液中并等待100s以测量两种蛋白之间的解离。
与受体结合的抗体的量反映为图7A-7B中的“响应(nm)”。如图7A(人Fc受体)和图7B(小鼠Fc受体)中所示，人源化3E6的多种同种型以不同水平结合至不同Fc受体。
6.9实施例9：抗TIM-3抗体阻断TIM-3与磷脂酰丝氨酸的结合
首先，使用过氧化氢诱导293T细胞凋亡。然后，将在1×膜联蛋白-V缓冲液(10mMHEPES、140mM NaCl和2.5mM CaCl2，pH调节至7.4)中连续稀释的抗TIM-3抗体或同种型对照与重组人TIM-3-Fc(Sino Biological,10390-H38H)在室温下培育30分钟。将经历细胞凋亡的293T细胞以1×105个细胞每孔的最终浓度加入至抗体：TIM-3-Fc混合物并在4℃培育1小时。在清洗细胞一次后，添加PE-标记的山羊抗小鼠IgG抗体并在4℃培育1小时。最终，用1×膜联蛋白-V缓冲液清洗样品一次并使用流式细胞仪(Canto II,BD,USA)测量荧光。如图3所示，抗TIM-3抗体3E6、4H2、16H1、CH 10#和19D11阻断TIM-3与凋亡细胞上的磷脂酰丝氨酸的结合。
6.10实施例10：抗TIM-3抗体引起TIM-3内化
将表达TIM-3的NK细胞用于测量通过抗TIM-3抗体引起的TIM-3内化。简要地，将连续稀释的抗TIM-3抗体与NK细胞(1×105)在37℃或在4℃培育18小时。使用流式细胞术，用PE-标记的山羊抗人IgGκ抗体检测TIM-3细胞表面表达。如图4所示，抗TIM-3抗体3E6、4H2和16H1均在NK细胞中引起TIM-3的内化。另外，还在内化研究中使用了T细胞和肿瘤细胞，具体地Pfeiffer细胞(人淋巴瘤)，并且据观察3E6、4H2和16H1均在T细胞中引起TIM-3的内化，但是仅4H2在Pfeiffer细胞中引起TIM-3的内化。以下总结了结果。
表8：通过抗TIM-3抗体诱导的TIM-3内化
抗-TIM-3 NK细胞 T细胞 Pfeiffer细胞
3E6 是 是 否
4H2 是 是 是
16H1 是 是 否
6.11实施例11：抗TIM-3抗体提高PBMC中IFN-γ的分泌
将通过抗CD3 mAb(OKT3)激活的T细胞用于测量抗TIM-3抗体的活性。为了制备激活的PBMC，通过在4℃培育过夜将1μg/ml OKT3用于涂覆板。第二天，弃去含有OKT3的涂覆溶液，然后将融化的PMBC加入至OKT3-涂覆的板中。将293T/OS8细胞用作靶细胞。在其N-末端，OS8包括抗人CD3 mAb OKT3 scfv，其可以直接与TCR/CD3复合物相互作用并激活T细胞。在培养三天后，将激活的PBMC与293T/OS8靶细胞以5:1的比例(激活的PBMC：293T/OS8)混合并添加连续稀释的抗TIM-3抗体。如图5A所示，在293T/OS8靶细胞和效应细胞的共培养中抗TIM-3抗体3E6、4H2、16H1、18C6、19D11、CH 10#、CH 11#、38A8、38F8、3F2和39D1均提高IFN-γ分泌(通过ELISA测量)。还使用相同程序确认了亲和力成熟的抗体的活性(图5B)。
6.12实施例12：抗TIM-3抗体增强NK细胞-介导的细胞毒性
为了验证人源化抗TIM-3抗体可以增强NK细胞-介导的细胞毒性，根据生产商的说明，使用来自Miltenyi Biotec的NK细胞分离试剂盒从健康供体的PBMC分离NK细胞。在用人IL-2(1000U/ml)刺激1天后，将NK细胞在室温下与抗TIM-3抗体培育20分钟然后，将CFSE-标记的K562细胞加入至混合物并在37℃培育2小时。然后，通过流式细胞术检测CD107a表达(其表示NK细胞激活)。如图6所示，抗TIM-3抗体3E6、4H2和16H1将通过平均荧光强度(MFI)和表达CD107a的细胞百分比两者所测量的CD107a表达提高了大于参考抗体TSR022和MBG453的程度，从而证实这些抗体能够增强NK细胞活性(细胞毒性)并且具有大于参考抗体的活性。
6.13实施例13：在小鼠模型中抗TIM-3抗体抑制肿瘤生长
对人CD34+造血干细胞-植入的NPGTM小鼠皮下植入人非小细胞肺癌细胞。在肿瘤已达到体积约75mm3的尺寸后，起始使用人源化3E6的治疗。每周测量两次肿瘤直径。根据公式lss/2计算肿瘤体积，其中“l”是其最长直径并且“s”是其最短直径。作为中值相对肿瘤体积之比(T/C)计算测试组相对于媒介物对照组中的肿瘤体积抑制。通过两次施用人源化3E6，肿瘤体积显著减小。测试了HCC827和MDA-MB-231癌细胞系两者并且观察到了类似的肿瘤尺寸减小。
按照相同程序，还测试了胰腺癌细胞系BxPC-3并且观察到了类似的肿瘤尺寸减小。测试了人源化3E6的不同同种型，包括IgG1 LALA(L234A和L235A)、IgG2和IgG4。如图8所示，与媒介物对照相比，不同同种型的人源化3E6均有效减小肿瘤体积。另外，测量了终点小鼠血清样品中的多种细胞因子(IL-4、IL-2、IL-1β、TNF-α、IL-17A、IL-6、IL-10、IFN-γ、IL-12p70和TGF-β)。如图9所示，人源化3E6 IgG1 LALA显著提高了小鼠血清样品中IL-17A、IL-6、IL-10、IFN-γ、穿孔素和颗粒溶素的水平。
另外，在皮下植入鼠科结肠腺癌细胞MC38的TIM3-人源化C57BL/6小鼠中，不同同种型的人源化3E6还抑制肿瘤生长(图10)。
照此，分别在患有肺癌、乳腺癌、胰腺癌和结肠癌的小鼠模型中证实了本文所公开的人源化抗TIM-3抗体的体内抗肿瘤效力。
6.14实施例14：表位框并
用PBS将抗体稀释至2μg/mL。将50μl抗体溶液加入至96-孔板的每个孔中，并将其在4℃培育过夜。然后，用清洗缓冲液(0.05％ Tween的PBS溶液)清洗板三次，并用5％脱脂乳在PBS中的溶液在37℃封闭2小时。将生物素化的人TIM-3和抗体在室温下预培育半小时，然后加入至板中。然后，将板在室温下培育1小时并用清洗缓冲液清洗三次。然后，在室温下将50μl抗生蛋白链菌素HRP(1:1000，BD)添加至每个孔中并培育约1小时。将50μl TMB底物加入至每个孔中，然后在1-5分钟后用50μl HCl终止反应。在450nm读取吸光值，并分析IC50值。
如表9所示，抗体3E6、4H2、16H1和CH10#以不同程度竞争性抑制参考抗体(例如，MBG453和TSR022)对人TIM-3的结合，表明它们在人TIM-3上的表位与参考抗体识别的那些表位重叠。相反，19D1和CH11#显示对参考抗体与人TIM-3的结合的抑制较小，表明它们在TIM-3上的表位与参考抗体的那些表位很少或无重叠。此外，MBG453和/或TSR022仅将抗体3E6、4H2、16H1和CH10#与人TIM-3的结合降低很少百分比(小于50％，或者小于20％)，表明这4种抗体结合至MBG453和/或TSR022不识别的人TIM-3上的至少一种其它表位。
表9抗TIM-3抗体的表位框并
6.15实施例15：结构确定
步骤1：蛋白表达和纯化：在密码子优化后，将靶标抗原(人TIM-3异构体1)的编码序列克隆到表达载体中。将纯化标签连接至抗原的N或C末端，并且在标签和蛋白质之间引入酶消化位点。在大肠杆菌(E.coli)中诱导蛋白以包含体形式表达。在LB培养基中培养细胞直至OD600达到0.6-1.0。此时，添加1mM IPTG，在37℃和120rpm培育4h以诱导蛋白表达。通过离心收集细菌。将所收集的细菌裂解并通过亲和纯化获得靶标蛋白。最终，使用SDS-PAGE、LC-MS和尺寸-排阻色谱(SEC)鉴别纯化的蛋白。
用木瓜蛋白酶或胰蛋白酶消化抗体(3E6 Fab)并将消化的抗体以13000rpm离心5min。将Superdex 200Increase 10/300GL柱用于分离组分并收集靶标样品。
步骤2：复合物形成和结晶：通过坐滴法使纯化的抗原-抗体复合物结晶。使用Hampton Research公司生产的结晶试剂盒：将15μL结晶试剂用作缓冲液并应用于96-孔结晶板中的孔中。使用Mosquito LCP蛋白结晶筛选仪添加样品：200nL蛋白+180nL结晶溶液+20nL溶菌酶晶种。将用MicroAMP光学粘合膜(Optical Adhesive membrane)密封的96-孔板置于4℃/20℃的恒温培育箱并定期观察晶体生长。
步骤3：数据收集和结构确定：在收集晶体衍射数据之前，首先将晶体转移到冷冻保护剂中，然后在Universal V1-Puck中在液氮中保存并送至同步加速辐射源用于数据收集。使用HKL3000软件处理所收集的衍射数据。
分别选择靶标抗原和Fab的同源性模型，并且使用CCP4软件包中的PHASER&Molrep程序实施分子置换以获得复合物的初始结构。然后，使用CCP4软件包中的REFMAC程序来修正模型，并且使用COOT程序手动调整模型。通过几次循环获得最终结构并且在图11A中提供该最终结构。
如图11B和表10中所提供的，我们进一步定位了人TIM-3上特异性残基和h3E6 Fab的VH CDR和VL CDR上的特异性残基之间的相互作用。如所示的，h3E6 Fab经由VH的CDR1-3和VL的CDR2结合至人TIM-3的氨基酸71-82。
表10抗TIM-3抗体的表位定位
TIM3(A)：HC
TIM3(A)：LC
另外，还结晶了与h3E6 Fab和另一种抗TIM-3抗体结合的人TIM-3的复合物并且结构如图12A-12B中所示。图12A显示了人TIM-3、h3E6 Fab和抗TIM-3Fab 6TXZ(PDB ID：6TXZ或M6903 Fab，Merck KGaA)的复合物的结构。Zhang等人,Oncoimmunology,2020；9(1):1744921。图12B显示了TIM-3、h3E6 Fab和抗TIM-3Fab 7KQL(PDB ID：7KQL)的复合物的结构。如所示的，结合至人TIM-3上表位的h3E6不同于6TXZ或7KQL所结合的表位。
6.16实施例16：抗TIM-3抗体体外激活骨髓细胞
为了确认本文所提供的抗TIM-3抗体(例如，不同同种型的h3E6)可以通过激活骨髓细胞进一步增强先天免疫，将0.5-1×105个骨髓细胞(巨噬细胞和树突状细胞平行实验)在96-圆孔板中铺板，并将细胞与连续稀释抗体培育至少2hr。用超纯LPS初免细胞几小时，然后用ATP或尼日利亚菌素(例如，3μM)刺激0.5-5h。然后，根据生产商的说明分析上清液的人IL-1β、IL-18、IL-6或TNFα水平。预期本文所提供的抗TIM-3抗体增强骨髓细胞的活性并且导致上清液中细胞因子水平升高。
将结合至人TIM-3上不同表位(例如，不包括D71、N76或Y82的表位)的抗TIM-3Fab作为对照。例如，可以使用Fab 6TXZ或Fab 7KQL。预期与h3E6相比，对照抗体在促进骨髓细胞活性中具有较低(甚至无)活性。
7.以电子方式提交的序列表参考
本发明申请作为参考与本发明申请一起作为ASCII文本文件引入了序列表，其标题为“135A002WO03_ST25.TXT”，创建于2022年4月3日，大小为96,927字节。
序列表
<110> 苏州逻晟生物医药有限公司
<120> TIM-3-靶向抗体及其用途
<130> 135A002WO03
<150> PCT/CN2021/089261
<151> 2021-04-23
<150> PCT/CN2021/120140
<151> 2021-09-24
<160> 217
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL
<400> 1
Asp Ile Ile Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 2
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VL
<400> 2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Leu Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 3
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VL
<400> 3
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Ile Glu
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ala Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Thr Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Phe Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Thr Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln His Tyr Ser Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 4
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VL
<400> 4
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Cys Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 5
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19D11 VL
<400> 5
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Val Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 6
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5# VL
<400> 6
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Val Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Ile Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Val Pro Ile Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 7
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 8# VL
<400> 7
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Ala Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Ile Ala Met Tyr Phe Cys Gln Pro Ser Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 8
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VL
<400> 8
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10# VL
<400> 9
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 10
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 11# VL
<400> 10
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Val Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Ile Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Val Pro Ile Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 11
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH
<400> 11
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ala Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Asn Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 12
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VH
<400> 12
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Thr Gly Asn His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 13
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VH
<400> 13
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gln Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Gln Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Leu Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ser Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ile Ser Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Met Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Asn
65 70 75 80
Met Gln Phe Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Gly Tyr Val Ala Trp Phe Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 14
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VH
<400> 14
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Ile Val Met Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Leu Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Asp Thr Ser Asp Ser Tyr Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Leu Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 15
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19D11 VH
<400> 15
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Tyr Phe Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 16
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5# VH
<400> 16
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asp Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Ile Leu Ser Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Glu Tyr Phe Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 17
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 8# VH
<400> 17
Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Val Tyr Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Glu Tyr Phe Asp Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 18
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VH
<400> 18
Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Arg Gly Asn His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 19
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10# VH
<400> 19
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ile Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Ser Pro Gly Arg Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ser Ile Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 11# VH
<400> 20
Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Lys Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Val Ile Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Glu Tyr Phe Asp Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 21
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL0
<400> 21
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 22
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH0
<400> 22
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 23
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH1
<400> 23
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 24
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH2
<400> 24
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 25
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH3
<400> 25
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 26
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH4
<400> 26
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 27
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH5
<400> 27
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 28
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH6
<400> 28
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 29
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH7
<400> 29
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子
<400> 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 31
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL CDR1
<400> 31
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn Val Ala Trp Tyr
1 5 10
<210> 32
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VL CDR1
<400> 32
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr
1 5 10
<210> 33
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VL CDR1
<400> 33
Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ala Ala Val Ala Trp Tyr
1 5 10
<210> 34
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VL CDR1
<400> 34
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
Trp Phe
<210> 35
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19D11 VL CDR1
<400> 35
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr
1 5 10
<210> 36
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5#、CH 8#、CH 11# VL CDR1
<400> 36
Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp
1 5 10 15
Tyr
<210> 37
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VL CDR1
<400> 37
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr
1 5 10
<210> 38
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10# VL CDR1
<400> 38
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His Trp Tyr
1 5 10
<210> 39
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL CDR2
<400> 39
Ala Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5 10
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VL CDR2
<400> 40
Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro
1 5 10
<210> 41
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VL CDR2
<400> 41
Leu Leu Ile Tyr Ser Thr Phe Tyr Arg Tyr Ile
1 5 10
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VL CDR2
<400> 42
Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5 10
<210> 43
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19D11 VL CDR2
<400> 43
Thr Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5 10
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5#、CH 8#、CH 11# VL CDR2
<400> 44
Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser
1 5 10
<210> 45
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VL CDR2
<400> 45
Pro Trp Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5 10
<210> 46
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10# VL CDR2
<400> 46
Leu Trp Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5 10
<210> 47
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL CDR3
<400> 47
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Thr
1 5
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VL CDR3
<400> 48
Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Leu Phe Thr
1 5
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VL CDR3
<400> 49
Gln Gln His Tyr Ser Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 50
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VL CDR3
<400> 50
Cys Gln Ser Thr His Val Pro Pro Leu Thr
1 5 10
<210> 51
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19D11 VL CDR3
<400> 51
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Val Thr
1 5 10
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5#、CH 11# VL CDR3
<400> 52
Gln Gln Ser Arg Lys Val Pro Ile Thr
1 5
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 8# VL CDR3
<400> 53
Gln Pro Ser Arg Lys Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VL CDR3
<400> 54
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
1 5
<210> 55
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10# VL CDR3
<400> 55
Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 56
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH CDR1
<400> 56
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Phe Ala Trp Asn
1 5 10
<210> 57
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VH CDR1
<400> 57
Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Trp Asn
1 5 10
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VH CDR1
<400> 58
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Leu Met His
1 5 10
<210> 59
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VH CDR1
<400> 59
Gly Tyr Lys Phe Thr Asp Phe Leu Met His
1 5 10
<210> 60
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19D11 VH CDR1
<400> 60
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Ser Trp His
1 5 10
<210> 61
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5#、CH 8#、CH 11# VH CDR1
<400> 61
Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His
1 5 10
<210> 62
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VH CDR1
<400> 62
Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr Gly Val His
1 5 10
<210> 63
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10# VH CDR1
<400> 63
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu
1 5 10
<210> 64
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH CDR2
<400> 64
Gly Tyr Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 65
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VH CDR2
<400> 65
Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 66
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VH CDR2
<400> 66
Gly Ser Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ile Ser Leu Asn Gln Lys Phe
1 5 10 15
Met Asp
<210> 67
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VH CDR2
<400> 67
Gly Ala Ile Asp Thr Ser Asp Ser Tyr Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 68
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19D11 VH CDR2
<400> 68
Gly Tyr Ile Tyr Phe Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 69
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5# VH CDR2
<400> 69
Gly Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asp Gln Lys Phe
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 70
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 8# VH CDR2
<400> 70
Gly Arg Val Tyr Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 71
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VH CDR2
<400> 71
Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 72
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10# VH CDR2
<400> 72
Gly Glu Ile Ser Pro Gly Arg Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 73
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 11# VH CDR2
<400> 73
Gly Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Lys Gln Lys Phe
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 74
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH CDR3
<400> 74
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Pro Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 75
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VH CDR3
<400> 75
Ala Thr Gly Asn His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 76
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VH CDR3
<400> 76
Ala Arg Asp Phe Gly Tyr Val Ala Trp Phe Val Tyr
1 5 10
<210> 77
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VH CDR3
<400> 77
Ser Arg Glu Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 78
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19D11 VH CDR3
<400> 78
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 79
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5# VH CDR3
<400> 79
Ala Arg Glu Gly Glu Tyr Phe Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 80
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 8# VH CDR3
<400> 80
Ala Arg Glu Gly Glu Tyr Phe Asp Tyr Phe Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 81
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VH CDR3
<400> 81
Ala Arg Asp Arg Gly Asn His Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 82
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10# VH CDR3
<400> 82
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ser Ile Phe Asp Val
1 5 10
<210> 83
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 11# VH CDR3
<400> 83
Ala Arg Glu Gly Glu Tyr Phe Asp Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 84
<211> 301
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人Tim-3异构体1
<400> 84
Met Phe Ser His Leu Pro Phe Asp Cys Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Thr Arg Ser Ser Glu Val Glu Tyr Arg Ala Glu Val Gly Gln
20 25 30
Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Phe Tyr Thr Pro Ala Ala Pro Gly Asn Leu
35 40 45
Val Pro Val Cys Trp Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Glu Cys Gly
50 55 60
Asn Val Val Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asp Val Asn Tyr Trp Thr Ser
65 70 75 80
Arg Tyr Trp Leu Asn Gly Asp Phe Arg Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr
85 90 95
Ile Glu Asn Val Thr Leu Ala Asp Ser Gly Ile Tyr Cys Cys Arg Ile
100 105 110
Gln Ile Pro Gly Ile Met Asn Asp Glu Lys Phe Asn Leu Lys Leu Val
115 120 125
Ile Lys Pro Ala Lys Val Thr Pro Ala Pro Thr Arg Gln Arg Asp Phe
130 135 140
Thr Ala Ala Phe Pro Arg Met Leu Thr Thr Arg Gly His Gly Pro Ala
145 150 155 160
Glu Thr Gln Thr Leu Gly Ser Leu Pro Asp Ile Asn Leu Thr Gln Ile
165 170 175
Ser Thr Leu Ala Asn Glu Leu Arg Asp Ser Arg Leu Ala Asn Asp Leu
180 185 190
Arg Asp Ser Gly Ala Thr Ile Arg Ile Gly Ile Tyr Ile Gly Ala Gly
195 200 205
Ile Cys Ala Gly Leu Ala Leu Ala Leu Ile Phe Gly Ala Leu Ile Phe
210 215 220
Lys Trp Tyr Ser His Ser Lys Glu Lys Ile Gln Asn Leu Ser Leu Ile
225 230 235 240
Ser Leu Ala Asn Leu Pro Pro Ser Gly Leu Ala Asn Ala Val Ala Glu
245 250 255
Gly Ile Arg Ser Glu Glu Asn Ile Tyr Thr Ile Glu Glu Asn Val Tyr
260 265 270
Glu Val Glu Glu Pro Asn Glu Tyr Tyr Cys Tyr Val Ser Ser Arg Gln
275 280 285
Gln Pro Ser Gln Pro Leu Gly Cys Arg Phe Ala Met Pro
290 295 300
<210> 85
<211> 142
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人Tim-3异构体2
<400> 85
Met Phe Ser His Leu Pro Phe Asp Cys Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Thr Arg Ser Ser Glu Val Glu Tyr Arg Ala Glu Val Gly Gln
20 25 30
Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Phe Tyr Thr Pro Ala Ala Pro Gly Asn Leu
35 40 45
Val Pro Val Cys Trp Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Glu Cys Gly
50 55 60
Asn Val Val Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asp Val Asn Tyr Trp Thr Ser
65 70 75 80
Arg Tyr Trp Leu Asn Gly Asp Phe Arg Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr
85 90 95
Ile Glu Asn Val Thr Leu Ala Asp Ser Gly Ile Tyr Cys Cys Arg Ile
100 105 110
Gln Ile Pro Gly Ile Met Asn Asp Glu Lys Phe Asn Leu Lys Leu Val
115 120 125
Ile Lys Pro Gly Glu Trp Thr Phe Ala Cys His Leu Tyr Glu
130 135 140
<210> 86
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL CDR1
<400> 86
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn Val Ala
1 5 10
<210> 87
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VL CDR1
<400> 87
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala
1 5 10
<210> 88
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VL CDR1
<400> 88
Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ala Ala Val Ala
1 5 10
<210> 89
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VL CDR1
<400> 89
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 90
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19D11 VL CDR1
<400> 90
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 91
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5#、CH 8#、CH 11# VL CDR1
<400> 91
Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu Met Gln
1 5 10 15
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VL CDR1
<400> 92
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His
1 5 10
<210> 93
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10# VL CDR1
<400> 93
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His
1 5 10
<210> 94
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6、19D11 VL CDR2
<400> 94
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 95
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VL CDR2
<400> 95
Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro
1 5
<210> 96
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VL CDR2
<400> 96
Ser Thr Phe Tyr Arg Tyr Ile
1 5
<210> 97
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VL CDR2
<400> 97
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 98
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5#、CH 8#、CH 11# VL CDR2
<400> 98
Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser
1 5
<210> 99
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VL CDR2
<400> 99
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 100
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10#、39D1 VL CDR2
<400> 100
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 101
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH CDR1
<400> 101
Ser Gly Phe Ala Trp Asn
1 5
<210> 102
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VH CDR1
<400> 102
Ser Gly Tyr Trp Asn
1 5
<210> 103
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VH CDR1
<400> 103
Ser Tyr Leu Met His
1 5
<210> 104
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VH CDR1
<400> 104
Asp Phe Leu Met His
1 5
<210> 105
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19D11 VH CDR1
<400> 105
Ser Gly Tyr Ser Trp His
1 5
<210> 106
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5#、CH 8#、CH 11#、3F2 VH CDR1
<400> 106
Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 107
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VH CDR1
<400> 107
Gly Tyr Gly Val His
1 5
<210> 108
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10# VH CDR1
<400> 108
Ser Tyr Trp Ile Glu
1 5
<210> 109
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH CDR2
<400> 109
Tyr Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 110
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VH CDR2
<400> 110
Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 111
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VH CDR2
<400> 111
Ser Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ile Ser Leu Asn Gln Lys Phe Met
1 5 10 15
Asp
<210> 112
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VH CDR2
<400> 112
Ala Ile Asp Thr Ser Asp Ser Tyr Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 113
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19D11 VH CDR2
<400> 113
Tyr Ile Tyr Phe Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 114
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5# VH CDR2
<400> 114
Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asp Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 115
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 8# VH CDR2
<400> 115
Arg Val Tyr Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 116
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VH CDR2
<400> 116
Met Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 117
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10# VH CDR2
<400> 117
Glu Ile Ser Pro Gly Arg Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 118
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 11# VH CDR2
<400> 118
Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Lys Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 119
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VH CDR3
<400> 119
Gly Tyr Arg Ser Pro Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 120
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4H2 VH CDR3
<400> 120
Gly Asn His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 121
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16H1 VH CDR3
<400> 121
Asp Phe Gly Tyr Val Ala Trp Phe Val Tyr
1 5 10
<210> 122
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18C6 VH CDR3
<400> 122
Glu Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 123
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19D11 VH CDR3
<400> 123
Gly Tyr Arg Ser Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 124
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 5# VH CDR3
<400> 124
Glu Gly Glu Tyr Phe Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 125
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 8# VH CDR3
<400> 125
Glu Gly Glu Tyr Phe Asp Tyr Phe Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 126
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 9# VH CDR3
<400> 126
Asp Arg Gly Asn His Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 127
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 10# VH CDR3
<400> 127
Asp Tyr Tyr Gly Ser Ile Phe Asp Val
1 5
<210> 128
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH 11# VH CDR3
<400> 128
Glu Gly Glu Tyr Phe Asp Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 129
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3F2 VL CDR1
<400> 129
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 130
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36A2 VL CDR1
<400> 130
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu His Ser Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 131
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36B11 VL CDR1
<400> 131
Ser Ala Ser Ser Gly Ile Ser Ser Ser Tyr Leu Tyr
1 5 10
<210> 132
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38F8 VL CDR1
<400> 132
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 133
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38A8 VL CDR1
<400> 133
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 134
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 40F11 VL CDR1
<400> 134
Arg Ala Ser Ser Ile Val Ser Ser Ser Tyr Leu His
1 5 10
<210> 135
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 50H9 VL CDR1
<400> 135
Gln Ala Ser Gln Gly Ser Ser Val Asn Leu Asn
1 5 10
<210> 136
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 84G10 VL CDR1
<400> 136
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asn Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 137
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 39D1 VL CDR1
<400> 137
Ser Ala Ser Ser Ser Val Arg Phe Met His
1 5 10
<210> 138
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3F2 VL CDR2
<400> 138
Trp Ala Ser Phe Arg Glu Ser
1 5
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36A2、38A8 VL CDR2
<400> 139
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 140
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36B11 VL CDR2
<400> 140
Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 141
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38F8 VL CDR2
<400> 141
His Thr Ser Arg Leu Tyr Ser
1 5
<210> 142
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 40F11 VL CDR2
<400> 142
Ser Thr Ser Asn Leu Pro Ser
1 5
<210> 143
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 50H9 VL CDR2
<400> 143
Gly Ser Asn Ile Leu Glu Asp
1 5
<210> 144
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 84G10 VL CDR2
<400> 144
His Ala Lys Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 145
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3F2 VL CDR3
<400> 145
His Gln Ser Leu Ser Ser Tyr Thr
1 5
<210> 146
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36A2 VL CDR3
<400> 146
His Gln Tyr Leu Ser Ser Leu Thr
1 5
<210> 147
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36B11 VL CDR3
<400> 147
His Gln Trp Ser Asn Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 148
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38F8 VL CDR3
<400> 148
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 149
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38A8 VL CDR3
<400> 149
Lys Gln Ser Tyr Ser Leu Leu Thr
1 5
<210> 150
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 40F11 VL CDR3
<400> 150
Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 151
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 50H9 VL CDR3
<400> 151
Leu Gln His Ser Tyr Leu Pro Tyr Thr
1 5
<210> 152
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 84G10 VL CDR3
<400> 152
Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 153
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 39D1 VL CDR3
<400> 153
Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 154
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36A2 VH CDR1
<400> 154
Ser Phe Glu Met His
1 5
<210> 155
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36B11 VH CDR1
<400> 155
Thr Ser Gly Met Gly Val Gly
1 5
<210> 156
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38F8 VH CDR1
<400> 156
Asp Tyr Ser Met Asp
1 5
<210> 157
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38A8 VH CDR1
<400> 157
Thr Tyr Asn Met His
1 5
<210> 158
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 40F11 VH CDR1
<400> 158
Thr Ala Glu Met Gln
1 5
<210> 159
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 50H9 VH CDR1
<400> 159
Thr Asn Gly Met Ser
1 5
<210> 160
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 84G10 VH CDR1
<400> 160
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 161
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 39D1 VH CDR1
<400> 161
Ser Ser Tyr Trp Ile Glu
1 5
<210> 162
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3F2 VH CDR2
<400> 162
Tyr Ile Ser Cys Tyr Asn Gly Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 163
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36A2 VH CDR2
<400> 163
Tyr Ile Ser Gly Gly Ser Thr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Met Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 164
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36B11 VH CDR2
<400> 164
His Ile Trp Trp Asp Asp Val Lys Arg Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 165
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38F8 VH CDR2
<400> 165
Asp Ile Asn Pro Asn Tyr Asp Ser Leu Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 166
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38A8 VH CDR2
<400> 166
Gly Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 167
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 40F11 VH CDR2
<400> 167
Trp Ile Asn Thr Arg Ser Gly Val Pro Lys Tyr Ala Glu Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 168
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 50H9 VH CDR2
<400> 168
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 169
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 84G10 VH CDR2
<400> 169
Gln Ile Tyr Pro Gly Glu Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 170
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 39D1 VH CDR2
<400> 170
Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Ile Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 171
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3F2 VH CDR3
<400> 171
Asp Tyr Tyr Leu Ser Val Met Asp Tyr
1 5
<210> 172
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36A2 VH CDR3
<400> 172
Ser Tyr Tyr Gly Leu Leu Asp Tyr
1 5
<210> 173
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36B11 VH CDR3
<400> 173
Thr Phe Ile Thr Thr Thr Thr Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 174
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38F8 VH CDR3
<400> 174
Arg Gly Tyr Gly Lys Asp Tyr Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 175
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38A8 VH CDR3
<400> 175
Ser Tyr Tyr Thr Phe Asp Ala Met Asp Cys
1 5 10
<210> 176
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 40F11 VH CDR3
<400> 176
Gly Thr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 177
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 50H9 VH CDR3
<400> 177
Arg Ser Glu Leu Gly Pro Phe Ala Tyr
1 5
<210> 178
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 84G10 VH CDR3
<400> 178
Gly His Phe Tyr Gly Ser Ser Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 179
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 39D1 VH CDR3
<400> 179
Ser Tyr Tyr Tyr Val Met Asp Tyr
1 5
<210> 180
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3F2 VL
<400> 180
Asn Ile Met Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Phe Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Ser Leu Ser Ser Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 181
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36A2 VL
<400> 181
Asn Ile Met Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Thr Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu His Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asn Asn Val Gln Pro Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Leu Ser Ser Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 182
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36B11 VL
<400> 182
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Gly Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Asn Tyr Pro
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 183
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38F8 VL
<400> 183
Thr Trp Gly Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 184
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38A8 VL
<400> 184
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Tyr Ser Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 185
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 40F11 VL
<400> 185
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ile Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Val Ser Ser Val Glu
65 70 75 80
Ser Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 186
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 50H9 VL
<400> 186
Asp Val Gln Met Ile Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Ile Val Thr Met Thr Cys Gln Ala Ser Gln Gly Ser Ser Val Asn
20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
His Gly Ser Asn Ile Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Asn
65 70 75 80
Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln His Ser Tyr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 187
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 84G10 VL
<400> 187
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr His Ala Lys Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Ala Arg Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 188
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 39D1 VL
<400> 188
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Met Leu Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Arg Phe Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Val Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 189
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3F2 VH
<400> 189
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Thr Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Cys Tyr Asn Gly Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Val Asp Thr Tyr Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Phe Asp Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Tyr Tyr Leu Ser Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 190
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36A2 VH
<400> 190
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Thr Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Ser Thr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Glu Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Ser Tyr Tyr Gly Leu Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 191
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36B11 VH
<400> 191
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Val Lys Arg Tyr Asn Pro Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Ser Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Ala Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Val Arg Thr Phe Ile Thr Thr Thr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 192
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38F8 VH
<400> 192
Glu Val Gln Leu Gln Gln Leu Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Glu Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Tyr Asp Ser Leu Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Tyr Gly Lys Asp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 193
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 38A8 VH
<400> 193
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Tyr Thr Phe Asp Ala Met Asp Cys Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 194
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 40F11 VH
<400> 194
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg Thr Ala
20 25 30
Glu Met Gln Trp Val Gln Lys Met Pro Gly Arg Gly Leu Lys Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Arg Ser Gly Val Pro Lys Tyr Ala Glu Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Leu Ser Leu Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Thr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 195
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 50H9 VH
<400> 195
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Asn
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ile Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ser Glu Leu Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 196
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 84G10 VH
<400> 196
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Gly Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Glu Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly His Phe Tyr Gly Ser Ser Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 197
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 39D1 VH
<400> 197
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Ile Asn Tyr Asn Glu Lys
50 55 60
Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val
65 70 75 80
Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ser Tyr Tyr Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 198
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6L-v1 VL CDR3
<400> 198
Ser Gln Val Asn Ser Tyr Asn Thr
1 5
<210> 199
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6L-v2 VL CDR3
<400> 199
Glu Gln Val Asn Ser Tyr Pro Thr
1 5
<210> 200
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6L-v3 VL CDR3
<400> 200
Ser Gln Tyr Asn Pro Tyr Asn Thr
1 5
<210> 201
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6L-v4 VL CDR3
<400> 201
Ser Gln Val Asn Pro Tyr Asn Thr
1 5
<210> 202
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6L-v5 VL CDR3
<400> 202
Glu Gln Val Asn Pro Tyr Pro Thr
1 5
<210> 203
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6L-v6 VL CDR3
<400> 203
Gln Gln Val Asn Pro Tyr Pro Thr
1 5
<210> 204
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6L-v7 VL CDR3
<400> 204
Glu Gln Tyr Asn Pro Tyr Pro Thr
1 5
<210> 205
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6L-v8 VL CDR3
<400> 205
Ser Gln Val Asn Ser Tyr Pro Thr
1 5
<210> 206
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6L-v9 VL CDR3
<400> 206
Glu Gln Val Gln Ser Tyr Pro Thr
1 5
<210> 207
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL0-v1
<400> 207
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser Gln Val Asn Ser Tyr Asn Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 208
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL0-v2
<400> 208
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Glu Gln Val Asn Ser Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 209
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL0-v3
<400> 209
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser Gln Tyr Asn Pro Tyr Asn Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 210
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL0-v4
<400> 210
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser Gln Val Asn Pro Tyr Asn Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 211
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL0-v5
<400> 211
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Glu Gln Val Asn Pro Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 212
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL0-v6
<400> 212
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Asn Pro Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 213
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL0-v7
<400> 213
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Glu Gln Tyr Asn Pro Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 214
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL0-v8
<400> 214
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser Gln Val Asn Ser Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 215
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3E6 VL0-v9
<400> 215
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ala Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Glu Gln Val Gln Ser Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 216
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子
<220>
<221> 重复
<222> (1)..(5)
<223> (GGGGS)n，n=1、2、3、4或5
<220>
<221> 重复
<222> (1)..(5)
<223> (GGGGS)n，n=1、2、3、4或5
<400> 216
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 217
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子
<220>
<221> 重复
<222> (1)..(5)
<223> (EAAAK)n，n=1、2、3、4或5
<400> 217
Glu Ala Ala Ala Lys
1 5

Claims (58)

1.特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含
(1)具有选自SEQ ID NO：86-93和129-137的氨基酸序列的轻链CDR1(VL CDR1)；
(2)具有选自SEQ ID NO：94-100和138-144的氨基酸序列的轻链CDR2(VL CDR2)；和
(3)具有选自SEQ ID NO：47-55、145-153和198-206的氨基酸序列的轻链CDR3(VLCDR3)；
或其在VL CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体；和/或
(b)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含
(1)具有选自SEQ ID NO：101-108和154-161的氨基酸序列的重链CDR1(VH CDR1)；
(2)具有选自SEQ ID NO：109-118和162-170的氨基酸序列的重链CDR2(VH CDR2)；和
(3)具有选自SEQ ID NO：119-128和171-179的氨基酸序列的重链CDR3(VH CDR3)；
或其在VH CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中
(a)所述VL CDR1、CDR2和CDR3具有
(1)分别由SEQ ID NO：86、94和47所示的氨基酸序列；
(2)分别由SEQ ID NO：87、95和48所示的氨基酸序列；
(3)分别由SEQ ID NO：88、96和49所示的氨基酸序列；
(4)分别由SEQ ID NO：89、97和50所示的氨基酸序列；
(5)分别由SEQ ID NO：90、94和51所示的氨基酸序列；
(6)分别由SEQ ID NO：91、98和52所示的氨基酸序列；
(7)分别由SEQ ID NO：91、98和53所示的氨基酸序列；
(8)分别由SEQ ID NO：92、99和54所示的氨基酸序列；
(9)分别由SEQ ID NO：93、100和55所示的氨基酸序列；
(10)分别由SEQ ID NO：129、138和145所示的氨基酸序列；
(11)分别由SEQ ID NO：130、139和146所示的氨基酸序列；
(12)分别由SEQ ID NO：131、140和147所示的氨基酸序列；
(13)分别由SEQ ID NO：132、141和148所示的氨基酸序列；
(14)分别由SEQ ID NO：133、139和149所示的氨基酸序列；
(15)分别由SEQ ID NO：134、142和150所示的氨基酸序列；
(16)分别由SEQ ID NO：135、143和151所示的氨基酸序列；
(17)分别由SEQ ID NO：136、144和152所示的氨基酸序列；
(18)分别由SEQ ID NO：137、100和153所示的氨基酸序列；
(19)分别由SEQ ID NO：86、94和198所示的氨基酸序列；
(20)分别由SEQ ID NO：86、94和199所示的氨基酸序列；
(21)分别由SEQ ID NO：86、94和200所示的氨基酸序列；
(22)分别由SEQ ID NO：86、94和201所示的氨基酸序列；
(23)分别由SEQ ID NO：86、94和202所示的氨基酸序列；
(24)分别由SEQ ID NO：86、94和203所示的氨基酸序列；
(25)分别由SEQ ID NO：86、94和204所示的氨基酸序列；
(26)分别由SEQ ID NO：86、94和205所示的氨基酸序列；或者
(27)分别由SEQ ID NO：86、94和206所示的氨基酸序列；
或其在VL CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体；和/或
(b)所述VH CDR1、CDR2和CDR3具有
(1)分别由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；
(2)分别由SEQ ID NO：102、110和120所示的氨基酸序列；
(3)分别由SEQ ID NO：103、111和121所示的氨基酸序列；
(4)分别由SEQ ID NO：104、112和122所示的氨基酸序列；
(5)分别由SEQ ID NO：105、113和123所示的氨基酸序列；
(6)分别由SEQ ID NO：106、114和124所示的氨基酸序列；
(7)分别由SEQ ID NO：106、115和125所示的氨基酸序列；
(8)分别由SEQ ID NO：107、116和126所示的氨基酸序列；
(9)分别由SEQ ID NO：108、117和127所示的氨基酸序列；
(10)分别由SEQ ID NO：106、118和128所示的氨基酸序列；
(11)分别由SEQ ID NO：106、162和171所示的氨基酸序列；
(12)分别由SEQ ID NO：154、163和172所示的氨基酸序列；
(13)分别由SEQ ID NO：155、164和173所示的氨基酸序列；
(14)分别由SEQ ID NO：156、165和174所示的氨基酸序列；
(15)分别由SEQ ID NO：157、166和175所示的氨基酸序列；
(16)分别由SEQ ID NO：158、167和176所示的氨基酸序列；
(17)分别由SEQ ID NO：159、168和177所示的氨基酸序列；
(18)分别由SEQ ID NO：160、169和178所示的氨基酸序列；或者
(19)分别由SEQ ID NO：161、170和179所示的氨基酸序列；
或其在VH CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
3.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中
(1)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和47所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；
(2)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：87、95和48所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：102、110和120所示的氨基酸序列；
(3)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：88、96和49所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：103、111和121所示的氨基酸序列；
(4)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：89、97和50所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：104、112和122所示的氨基酸序列；
(5)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：90、94和51所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：105、113和123所示的氨基酸序列；
(6)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：91、98和52所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：106、114和124所示的氨基酸序列；
(7)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：91、98和53所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：106、115和125所示的氨基酸序列；
(8)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：92、99和54所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：107、116和126所示的氨基酸序列；
(9)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：93、100和55所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：108、117和127所示的氨基酸序列；
(10)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：91、98和52所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：106、118和128所示的氨基酸序列；
(11)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：129、138和145所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：106、162和171所示的氨基酸序列；
(12)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：130、139和146所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：154、163和172所示的氨基酸序列；
(13)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：131、140和147所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：155、164和173所示的氨基酸序列；
(14)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：132、141和148所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：156、165和174所示的氨基酸序列；
(15)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：133、139和149所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：157、166和175所示的氨基酸序列；
(16)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：134、142和150所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：158、167和176所示的氨基酸序列；
(17)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：135、143和151所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：159、168和177所示的氨基酸序列；
(18)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：136、144和152所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：160、169和178所示的氨基酸序列；
(19)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：137、100和153所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：161、170和179所示的氨基酸序列；
(20)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和198所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；
(21)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和199所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；
(22)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和200所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；
(23)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和201所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；
(24)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和202所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；
(25)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和203所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；
(26)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和204所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；
(27)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和205所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列；或者
(28)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：86、94和206所示的氨基酸序列；和/或所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有由SEQ ID NO：101、109和119所示的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其包含分别具有由SEQ ID NO：86、94、101、109和119所示的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，和具有选自SEQ ID NO：47和198-206的氨基酸序列的VL CDR3；或其在VL CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失且在VH CDR中具有至多约3个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
5.根据权利要求4所述的抗体或抗原结合片段，其中VH CDR1的F残基(SEQ ID NO：101的氨基酸3)、VH CDR2的H和S残基(SEQ ID NO：109的氨基酸4和5)、VH CDR3的Y、R、S和W残基(SEQ ID NO：119的氨基酸2、3、4和6)以及VL CDR2的S残基(SEQ ID NO：94的氨基酸7)未突变。
6.根据权利要求4所述的抗体或抗原结合片段，其包含分别具有由SEQ ID NO：86、94、47、101、109和119所示的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3。
7.特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a)VL，所述VL与选自SEQ ID NO：1-10和180-188的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性；和/或
(b)VH，所述VH与选自SEQ ID NO：11-20和189-197的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。
8.根据权利要求7所述的抗体或抗原结合片段，其包含VL和VH，其中所述VL和VH分别与(1)分别由SEQ ID NO：1和11；(2)分别由SEQ ID NO：2和12；(3)分别由SEQ ID NO：3和13；(4)分别由SEQ ID NO：4和14；(5)分别由SEQ ID NO：5和15；(6)分别由SEQ ID NO：6和16；(7)分别由SEQ ID NO：7和17；(8)分别由SEQ ID NO：8和18；(9)分别由SEQ ID NO：9和19；(10)分别由SEQ ID NO：10和20；(11)分别由SEQ ID NO：180和189；(12)分别由SEQ ID NO：181和190；(13)分别由SEQ ID NO：182和191；(14)分别由SEQ ID NO：183和192；(15)分别由SEQ ID NO：184和193；(16)分别由SEQ ID NO：185和194；(17)分别由SEQ ID NO：186和195；(18)分别由SEQ ID NO：187和196；或(19)分别由SEQ ID NO：188和197所示的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。
9.根据权利要求7所述的抗体或抗原结合片段，其包含VL和VH，其中所述VL和VH分别与分别由SEQ ID NO：1和11所示的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。
10.特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a)VL，所述VL与选自SEQ ID NO：21和207-215的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性；和/或
(b)VH，所述VH与选自SEQ ID NO：22-29的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。
11.特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段，其包含
(a)VL，所述VL包含来自具有选自SEQ ID NO：1-10和180-188的氨基酸序列的VL的VLCDR1、CDR2和CDR3；和/或
(b)VH，所述VH包含来自具有选自SEQ ID NO：11-20和189-197的氨基酸序列的VH的VHCDR1、CDR2和CDR3。
12.根据权利要求11所述的抗体或其抗原结合片段，其包含
(1)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；
(2)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；
(3)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；
(4)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；
(5)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；
(6)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；
(7)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；
(8)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；
(9)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；
(10)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3；
(11)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：180所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：189所示的氨基酸序列的VH的VHCDR1、CDR2和CDR3；
(12)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：181所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：190所示的氨基酸序列的VH的VHCDR1、CDR2和CDR3；
(13)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：182所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列的VH的VHCDR1、CDR2和CDR3；
(14)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：183所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：192所示的氨基酸序列的VH的VHCDR1、CDR2和CDR3；
(15)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：184所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：193所示的氨基酸序列的VH的VHCDR1、CDR2和CDR3；
(16)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：194所示的氨基酸序列的VH的VHCDR1、CDR2和CDR3；
(17)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列的VH的VHCDR1、CDR2和CDR3；
(18)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：187所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：196所示的氨基酸序列的VH的VHCDR1、CDR2和CDR3；或者
(19)VL，所述VL包含来自具有由SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，和/或VH，所述VH包含来自具有由SEQ ID NO：197所示的氨基酸序列的VH的VHCDR1、CDR2和CDR3。
13.特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段，其包含VL和VH，其中VL包含来自具有选自SEQ ID NO：21和207-215的氨基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，且VH包含来自具有选自SEQ ID NO：22-29的氨基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。
14.抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与根据权利要求1至13中任一项所述的抗体或抗原结合片段竞争对人TIM-3的结合。
15.特异性结合人TIM-3的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段特异性结合至包含人TIM-3的氨基酸71-82中的至少一个的表位。
16.根据权利要求15所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的下列氨基酸残基中的至少一个：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。
17.根据权利要求15所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段特异性结合至人TIM-3的下列残基中的至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个或8个：D71、R73、D74、V75、N76、W78、T79和Y82。
18.根据权利要求15所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段特异性结合至至少人TIM-3的D71、N76或Y82。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段不特异性结合至人TIM-3的氨基酸71-82以外的表位。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段以5×10-8M或以下的KD结合人TIM-3。
21.根据权利要求20所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段以10-11M至5×10-9M的范围内的KD结合人TIM-3。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段阻断TIM-3和TIM-3配体之间的相互作用。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述TIM-3配体是磷脂酰丝氨酸、CEACAM1、HMGB1或它们的任意组合。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段(1)抑制TIM-3介导的T细胞抑制，(2)抑制TIM-3介导的骨髓细胞抑制，(3)抑制TIM-3介导的炎性体激活的抑制或它们的任意组合。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或抗原结合片段。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段选自IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体和IgG4抗体。
27.根据权利要求26所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段是IgG1抗体。
28.根据权利要求1至25中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、(scFv)2、单域抗体(sdAb)和重链抗体(HCAb)。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段是嵌合抗体或抗原结合片段、人源化抗体或抗原结合片段或者人抗体或抗原结合片段。
30.根据权利要求29所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段是人源化抗体或抗原结合片段。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段是双重特异性抗体或多重特异性抗体。
32.根据权利要求31所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段是进一步特异性结合PD-1、PD-L1、CEACAM1或CEACAM5的双重特异性抗体。
33.多核苷酸，所述多核苷酸编码根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或抗原结合片段。
34.载体，其包含根据权利要求33所述的多核苷酸。
35.宿主细胞，其包含根据权利要求33所述的多核苷酸，或者根据权利要求34所述的载体。
36.药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或抗原结合片段，和药物可用的载体
37.诱导或刺激免疫细胞激活和/或增殖的方法，所述方法包括将免疫细胞与有效量的根据权利要求1至32中任一项所述抗体或抗原结合片段接触。
38.降低TIM-3-介导的免疫细胞抑制的方法，所述方法包括将免疫细胞与有效量的根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或抗原结合片段接触。
39.根据权利要求37或38中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞是T细胞、NK细胞、NKT细胞或骨髓细胞。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述免疫细胞是T细胞。
41.根据权利要求39所述的方法，其中所述免疫细胞是NK细胞。
42.根据权利要求39所述的方法，其中所述免疫细胞是骨髓细胞，其中所述骨髓细胞是巨噬细胞或树突状细胞。
43.在对其有需要的受试者中刺激抗肿瘤免疫的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或抗原结合片段或者根据权利要求36所述的药物组合物。
44.在对其有需要的受试者中抑制肿瘤细胞生长的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或抗原结合片段或者根据权利要求36所述的药物组合物。
45.治疗对其有需要的受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或抗原结合片段或者根据权利要求36所述的药物组合物。
46.根据权利要求44或45所述的方法，还包括向所述受试者施用其它疗法。
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述其它疗法包括特异性结合PD-L1、PD-1、CEACAM1、CTLA4、CEACAM5、潜在TGF-β、TGF-β受体、CD70、B7H4或B7H3的抗体。
48.根据权利要求46所述的方法，其中所述其它疗法包括放疗或化疗。
49.根据权利要求43至48中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
50.根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或抗原结合片段在癌症治疗中的用途。
51.根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或抗原结合片段用于制备癌症治疗药剂的用途。
52.根据权利要求45至51中任一项所述的方法或用途，其中所述癌症是血液学癌症。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述血液学癌症是急性髓性白血病(AML)或骨髓增生异常综合征(MDS)。
54.根据权利要求45至51中任一项所述的方法或用途，其中所述癌症是实体瘤。
55.根据权利要求54所述的方法或用途，其中所述癌症是黑素瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌/宫颈癌、睾丸癌、甲状腺癌、食道癌、软组织肉瘤、肝癌、胆囊癌、宫颈癌、十二指肠癌、骨癌、神经内分泌系统癌、肠癌、皮肤癌或生殖细胞癌。
56.根据权利要求54所述的方法或用途，其中所述癌症选自肾细胞癌(RCC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、头颈鳞状细胞癌(SCCHN)、三阴性乳腺癌(TNBC)、胃腺癌(gastric/stomachadenocarcinoma，STAD)、胰腺腺癌(PAAD)、结肠腺癌(COAD)或者直肠腺癌(READ)。
57.根据权利要求45至56中任一项所述的方法或用途，其中所述癌症具有高度的微卫星不稳定。
58.根据权利要求45至57中任一项所述的方法或用途，其中所述癌症是转移性癌症、难治性癌症或复发性癌症。
CN202280037113.1A 2021-04-23 2022-04-24 Tim-3-靶向抗体及其用途 Pending CN117377692A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2021089261 2021-04-23
CNPCT/CN2021/089261 2021-04-23
CNPCT/CN2021/120140 2021-09-24
CN2021120140 2021-09-24
PCT/CN2022/088770 WO2022223048A1 (en) 2021-04-23 2022-04-24 Tim-3-targetting antibodies and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117377692A true CN117377692A (zh) 2024-01-09

Family

ID=83723574

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280037113.1A Pending CN117377692A (zh) 2021-04-23 2022-04-24 Tim-3-靶向抗体及其用途

Country Status (5)

Country Link
US (2) US12122832B2 (zh)
EP (1) EP4326773A4 (zh)
JP (1) JP2024516616A (zh)
CN (1) CN117377692A (zh)
WO (1) WO2022223048A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2025077833A1 (en) * 2023-10-11 2025-04-17 Suzhou Neologics Bioscience Co., Ltd. Antibodies targeting tim-3 and pd-1 and uses thereof

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8709412B2 (en) 2001-06-29 2014-04-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Modulation of TIM receptor activity in combination with cytoreductive therapy
JP4694128B2 (ja) 2002-01-30 2011-06-08 ザ ブライハム アンド ウイメンズ ホスピタル， インコーポレイテッド ＴＩＭ−３、Ｔｈ１特異的細胞表面分子に関連した組成物および方法
US9416165B2 (en) 2007-10-26 2016-08-16 The Regents Of The University Of California Methods of inhibiting viral replication and improving T cell function employing soluble Tim-3 inhibitors
ES2796085T3 (es) 2008-01-15 2020-11-25 Univ Leland Stanford Junior Marcadores de células madre de leucemia mieloide aguda
JP5748653B2 (ja) 2009-04-10 2015-07-15 協和発酵キリン株式会社 抗ｔｉｍ−３抗体を用いた血液腫瘍治療法
CN103079644B (zh) 2010-06-11 2017-02-15 协和发酵麒麟株式会社 抗tim‑3抗体
JOP20200096A1 (ar) * 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
WO2016071448A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-tim3 antibodies and methods of use
DK3277321T3 (da) * 2015-04-01 2024-09-02 Anaptysbio Inc Antistoffer, der er rettet mod T-celle-immunglobulin og mucin-protein 3 (TIM-3)
JO3620B1 (ar) 2015-08-05 2020-08-27 Amgen Res Munich Gmbh مثبطات نقطة فحص مناعية للاستخدام في علاج سرطانات محمولة عبر الدم
BR112018008891A8 (pt) * 2015-11-03 2019-02-26 Janssen Biotech Inc anticorpos que se ligam especificamente a pd-1 e tim-3 e seus usos
HRP20211820T1 (hr) 2016-04-12 2022-03-04 Symphogen A/S Anti-tim-3 protutijela i pripravci
AR108377A1 (es) 2016-05-06 2018-08-15 Medimmune Llc Proteínas de unión biespecíficas y sus usos
EP3463452A1 (en) 2016-05-24 2019-04-10 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of non small cell lung cancer (nsclc) that coexists with chronic obstructive pulmonary disease (copd)
KR20230091191A (ko) 2016-05-27 2023-06-22 아게누스 인코포레이티드 항-tim-3 항체 및 이의 사용 방법
SG10201911972QA (en) 2016-07-14 2020-02-27 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against tim3 and uses thereof
EP3970749A1 (en) * 2016-08-26 2022-03-23 BeiGene, Ltd. Anti-tim-3 antibodies and use thereof
EP3515494A4 (en) 2016-09-26 2020-10-07 The Brigham and Women's Hospital, Inc. REGULATORS OF B-LYMPHOCYTES MEDIA IMMUNOSUPPRESSION
TWI665216B (zh) 2016-12-29 2019-07-11 財團法人生物技術開發中心 抗人類tim-3抗體及其使用方法
TWI841209B (zh) 2017-01-09 2024-05-01 美商提薩羅有限公司 用抗tim-3抗體治療癌症之方法
WO2018153366A1 (zh) * 2017-02-27 2018-08-30 江苏恒瑞医药股份有限公司 Tim-3抗体、其抗原结合片段及医药用途
WO2019023247A1 (en) 2017-07-25 2019-01-31 Immutics, Inc. TREATMENT OF CANCER BY BLOCKING THE INTERACTION OF TIM-3 AND ITS LIGAND
EA202090401A1 (ru) * 2017-07-28 2020-05-18 Фейнз Терапьютикс, Инк. Анти-tim-3 антитела и их применение
EP3676616A1 (en) 2017-08-28 2020-07-08 Bristol-Myers Squibb Company Tim-3 antagonists for the treatment and diagnosis of cancers
CN111886255B (zh) 2018-01-12 2025-04-04 百时美施贵宝公司 抗tim3抗体及其用途
WO2019143607A1 (en) 2018-01-16 2019-07-25 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating cancer with antibodies against tim3
CN110305216B (zh) 2018-03-20 2022-09-02 无锡智康弘义生物科技有限公司 新型抗tim-3抗体
US20220017618A1 (en) 2018-08-20 2022-01-20 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Use of tim-3 antibody in preparation of medicines for treating tumors
SG11202012148RA (en) * 2018-08-21 2021-01-28 Albert Einstein College Medicine Monoclonal antibodies against human tim-3
CN109266731A (zh) 2018-08-23 2019-01-25 窦帅杰 Tim-3与NF90的相互作用在预防或治疗病毒感染产品中的应用
KR20210053294A (ko) 2018-08-28 2021-05-11 지앙수 헨그루이 메디슨 컴퍼니 리미티드 항-tim3 항체 제약 조성물 및 이의 용도
WO2020070062A1 (en) 2018-10-01 2020-04-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of tim-3 inhibitors for the treatment of exacerbations in patients suffering from severe asthma
CA3117371A1 (en) 2018-11-01 2020-05-07 Merck Patent Gmbh Methods of administering anti-tim-3 antibodies
CN110407938B (zh) * 2019-08-12 2020-03-06 北京昭衍生物技术有限公司 抗tim-3单克隆抗体、表达载体及其应用
TW202124443A (zh) 2019-09-16 2021-07-01 瑞士商諾華公司 高親和力的、配位基阻斷性、人源化的抗T細胞免疫球蛋白結構域和黏蛋白結構域3(TIM-3)IgG4抗體用於治療骨髓纖維化之用途
CN110938146B (zh) 2019-11-20 2024-04-12 华中农业大学 Tim-3单域抗体及其应用
CN112094348B (zh) * 2020-09-22 2021-11-30 首都医科大学附属北京胸科医院 抗人Tim3抗体或其功能性片段及其应用
EP4323003A4 (en) 2021-04-13 2025-04-30 MedImmune, LLC Bispecific antibody targeting pd-1 and tim-3

Also Published As

Publication number Publication date
US20250277033A1 (en) 2025-09-04
JP2024516616A (ja) 2024-04-16
EP4326773A4 (en) 2025-09-24
US12122832B2 (en) 2024-10-22
US20230365685A1 (en) 2023-11-16
EP4326773A1 (en) 2024-02-28
WO2022223048A1 (en) 2022-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2021201231B2 (en) Antibodies to tigit
JP7776448B2 (ja) Ｔｉｇｉｔに対する抗体
CN108738324B (zh) 抗糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(gitr)抗体及其用途
JP7027401B2 (ja) Ｔｉｍ３に対する抗体およびその使用
JP6797137B2 (ja) Ｏｘ４０に対する抗体およびその使用
JP6449338B2 (ja) グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体（ｇｉｔｒ）に対する抗体およびその使用
TW201831511A (zh) 能夠結合cd137和腫瘤抗原的雙特異性結合分子及其用途
EP2935332B1 (en) Anti-h7cr antibodies
CA3093407A1 (en) Antibodies against mica and/or micb and uses thereof
JP2019514844A (ja) 抗ｃｄ７３抗体を用いた併用療法
CN111886255B (zh) 抗tim3抗体及其用途
US20250277033A1 (en) Tim-3-targeting antibodies and uses thereof
HK40088961A (zh) 抗tigit抗体
HK1246308B (zh) 針對ox40的抗體和其用途
EA040561B1 (ru) Способ применения антитела к ox40 (варианты)

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40104690

Country of ref document: HK