CN117304168A - 一种马来酰亚胺修饰的羟氯喹及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药领域，具体涉及一种马来酰亚胺修饰的羟氯喹及其制备方法和应用，以进一步提升羟氯喹的药效，增强其自噬阻断的效率。本发明提供的马来酰亚胺修饰的羟氯喹，具有如下所示的结构：。该化合物是本申请的发明人首次合成，发明人将基于点击化学的巧妙设计应用于增强自噬抑制的功效，开创性地提出了利用Mal‑SH反应实现自噬捕获的全新理念，大幅度提升自噬阻断的效率。发明人对于Mal修饰的羟氯喹的首次研究，不仅提供了一种新化合物，为制备治疗各种疾病的药物提供了一种新的选择，同时也为基于点击化学的生物医学应用提供了前瞻性的思路和坚实的研究基础。

Description

一种马来酰亚胺修饰的羟氯喹及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种马来酰亚胺修饰的羟氯喹及其制备方法和应用。

背景技术

羟氯喹（hydroxychloroquine, HCQ）是一种抗疟药物，被广泛应用于治疗类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病。近年来，研究发现羟氯喹还具有抑制自噬的作用，因此被作为一种阻断自噬药物备受关注。然而，羟氯喹作为阻断自噬药物也存在诸多问题，首先，羟氯喹的副作用较大，长期使用可能会对视网膜、肝脏和肾脏等器官造成损害；其次，羟氯喹的药代动力学特征尚不明确，其血药浓度和作用时间难以控制，抑制自噬的效果仍然受到小分子抑制剂代谢快和选择性低的特性的限制，自噬抑制效果欠佳。

羟氯喹作为一种阻断自噬药物具有广泛的应用前景，尤其是在自身免疫性疾病和肿瘤治疗等领域，然而，其副作用和药代动力学特征等问题限制了其临床应用。因此，未来仍需在羟氯喹的作用机制、药代动力学特征、寻找特异性更强的药物靶点、优化用药方案等方面进行深入研究，进一步提升羟氯喹的药效，增强自噬阻断的效率，以实现更有效的治疗和更好的患者受益。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种马来酰亚胺修饰的羟氯喹，以进一步提升羟氯喹的药效，增强其自噬阻断的效率。

本发明提供的基础方案为：一种马来酰亚胺修饰的羟氯喹，该化合物具有如下所示的结构：

。

本发明的工作原理及优点在于：

发明人发现马来酰亚胺（Mal）和巯基（-SH）之间的经典点击反应是高效和特异性的，蛋白上暴露的巯基可以高灵敏度地与马来酰亚胺基团结合，因此本申请开创性地提出了一种全新的理念，即利用Mal-SH反应实现自噬捕获。具体来讲，发明人首次合成了新化合物，即Mal修饰的羟氯喹（^MHCQ），大幅度提升自噬阻断的效率，这些研究均未曾报导。发明人对于Mal修饰的羟氯喹的首次研究，不仅提供了一种新化合物，为制备治疗各种疾病的药物提供了一种新的选择，同时也为基于点击化学的生物医学应用提供了前瞻性的思路和坚实的研究基础。

本发明还提供了马来酰亚胺修饰的羟氯喹的制备方法，包括下述步骤：

将羟氯喹溶解在N,N-二甲基甲酰胺中，然后将该溶液与3-马来酰亚胺丙酸、4-二甲氨基吡啶、1-羟基苯并三唑和碳化二亚胺进行混合，再进行搅拌，旋干后得到马来酰亚胺修饰的羟氯喹^MHCQ，最后进行纯化。

优选的，搅拌时间为6-8小时。

优选的，采用高效液相色谱仪进行纯化。

优选的，羟氯喹和3-马来酰亚胺丙酸的质量比为4:2405。

本发明所述的马来酰亚胺修饰的羟氯喹作为制备治疗肿瘤药物的应用。本方案的^MHCQ，自噬阻断效率显著增强，可以进一步促进细胞凋亡，从而抑制肿瘤细胞的生长，可以作为肿瘤治疗药物进行应用。

优选的，所述肿瘤为乳腺癌。

优选的，马来酰亚胺修饰的羟氯喹负载于载体上。将^MHCQ负载于载体上进行使用，可以很好地保护药物分子，同时也有利于药物的释放和控制，进一步提升^MHCQ的生物利用度。

优选的，所述载体为锰卟啉基金属有机框架。锰卟啉基金属有机框架具有介孔结构，可以实现对^MHCQ的高效负载。

优选的，所述锰卟啉基金属有机框架为梭形。

附图说明

图1为^MHCQ的表征，其中（a）为^MHCQ的质谱结果；（b）为^MHCQ的高效液相色谱仪结果；（c）为HCQ与^MHCQ的紫外可见光谱；（d）为^MHCQ的质子核磁共振氢谱（图1d左上角为^MHCQ的化学结构式）。

图2为MnTCPP MOF的表征，其中（a）为MnTCPP MOF的透射电镜；（b）为MnTCPP MOF的扫描电镜；（c）为MnTCPP MOF的比表面积；（d）为MnTCPP MOF的孔径大小；（e）为^MHCQ的标准浓度曲线。

图3为Lip@M-^MH的表征，其中（a）为Lip@M-^MH的透射电镜；（b）为元素分析；（c）为XRD；（d）为紫外可见光谱；（e）左边为粒径，右边为电位；（f）为粒径稳定性；（g）为Lip@M-^MH和Lip@M-^MH+US的释药行为；（h）为释药后的透射电镜；（i）为采用磷酸缓冲液溶解脂质膜后，和MnTCPP搅匀后的扫描电镜。

图4为纳米反应器的声动力性能检测与细胞吞噬反应，其中（a）为加入PBS、MnTCPP和Lip@M在进行或不进行超声照射下的ESR光谱；（b）为进行或不进行超声照射时MnTCPP和Lip@M介导的亚甲基蓝降解的紫外-可见吸收光谱；（c）和（d）分别为浓度依赖性和时间依赖性下SOSG探针显示Lip@M产生的¹O₂。

图5为原位点击反应增强自噬抑制的检测，其中（a）为Mal-SH点击反应介导的原位蛋白捕获示意图；（b）为细胞碎片制备和transwell小室模拟蛋白质捕获的示意图；（c）为^MHCQ和OVA的Zeta电位，以及与HCQ和^MHCQ孵育后的OVA的Zeta电位；（d）为^MHCQ和OVA的Zeta电位，以及Lip@M-^MH和Lip@M-^MH + US孵育后的OVA的Zeta电位； （e）为不同处理后transwell上室的蛋白定量；（f）为不同处理后transwell下室的蛋白定量；（g）为Westernblot检测不同组LC3B-II/I、p62、Beclin-1的表达；（h），（i）和（j）分别为 LC3B-II/I, p62和Beclin-1的相对灰度值定量分析；（k）为不同处理后4T1细胞LC3B的免疫荧光图像；（l）为Lip@M-^MH + US处理4T1细胞的生物透射电镜图像。

图6为不同纳米反应器的生物安全性和细胞毒性检测，其中图为（a）含不同浓度MnTCPP的Lip@M-^MH与4T1和HUVEC共孵育24 小时后细胞的细胞存活率；图为（b）含不同浓度MnTCPP的MnTCPP与4T1和HUVEC共孵育24 小时后细胞的细胞存活率；（c）为不同浓度的不同反应器与4T1细胞共孵育后相对细胞存活率；（d）和（e）为流式细胞术测定不同处理后细胞凋亡的水平和相应定量分析；（f）为PI和钙黄蛋白AM分别染色不同处理后的4T1细胞的荧光图像。

图7为纳米反应器Lip@M-^MH的体内生物安全性，其中（a）为 PBS、去离子水、MnTCPP、M-MH、Lip@M-^MH处理细胞后的溶血效应评估；（b）-（d）为静脉给药Lip@M-^MH后不同时间间隔处死昆明小鼠的血液生化检查结果；（e）-（m）为静脉给药Lip@M-^MH后不同时间间隔小鼠的血常规检查结果，n = 6；（n）为静脉给药Lip@M-^MH后不同时间间隔处死小鼠心、肝、脾、肺、肾的H&E染色图片。

具体实施方式

发明人发现马来酰亚胺（Mal）和巯基（-SH）之间的经典点击反应是高效和特异性的，肿瘤来源的蛋白质在声动力治疗（sound dynamic therapy，SDT）刺激下从细胞碎片中释放出来，受损蛋白上暴露的巯基可以高灵敏度地与马来酰亚胺基团结合，因此本申请开创性地提出了一种全新的理念，即利用肿瘤原位的Mal-SH反应实现自噬捕获。具体来讲，发明人首次合成了Mal修饰的羟氯喹（^MHCQ），当实施SDT后，肿瘤细胞被杀伤产生细胞或蛋白质碎片，然后马来酰亚胺修饰的羟氯喹细胞与受损蛋白的-SH基团通过Mal-SH反应共价结合，并锚定在蛋白质碎片上。随后，由于癌细胞固有的自我保护机制，自噬过程被迅速激活。然后自噬体包裹受损的蛋白质，同时吞噬蛋白质锚定的羟氯喹，就可以让自噬体主动接触到具有抗自噬功能的羟氯喹。最后，羟氯喹消耗氢离子，改变自噬体和溶酶体融合过程中蛋白水解酶的内部pH值，从而阻断自噬通量，显著增强自噬阻断效率。

本申请的发明人首次将基于点击化学的巧妙设计应用于增强自噬抑制的功效，开创性地提出了利用肿瘤原位的Mal-SH反应实现自噬捕获的全新理念，并且首次合成了Mal修饰的羟氯喹^MHCQ，大幅度提升自噬阻断的效率。

下面通过具体实施方式进一步详细的说明：

实施例一：Mal修饰的羟氯喹^MHCQ

^MHCQ的制备方法，包括下述步骤：

将羟氯喹溶解在40ml的N,N-二甲基甲酰胺中，然后将该溶液与3-马来酰亚胺丙酸、170 g 4-二甲氨基吡啶、270 g 1-羟基苯并三唑以及5 ml碳化二亚胺进行混合（羟氯喹与3-马来酰亚胺丙酸的质量比为4:2405，本实施例中羟氯喹为0.8 g，3-马来酰亚胺丙酸为481 g），在室温下磁力搅拌6-8小时（本实施例中的搅拌时间为6小时），旋干后得到橙红色晶体的马来酰亚胺修饰的羟氯喹^MHCQ，最后用高效液相色谱仪进行纯化。

实施例二：Lip@M-^MH（本申请中所述Lip@M-^MH是lipid membrane@ MnTCPP MOF-^MHCQ的缩写，lipid membrane是脂质膜的英文名称，Lip是脂质膜的缩写，MnTCPP MOF是锰卟啉基金属有机框架的缩写，^MH是Mal修饰的羟氯喹^MHCQ的缩写）

本申请中将^MHCQ负载于载体上进行应用，本实施例以锰卟啉基金属有机框架为载体，可以实现对^MHCQ的高效负载，很好地保护^MHCQ，同时也有利于^MHCQ的释放和控制，进一步提升其生物利用度。此外，为防止^MHCQ与非靶向蛋白之间的非特异性结合，发明人在锰卟啉基金属有机框架外层表面包覆聚乙二醇基化（PEGylated）脂质膜，将^MHCQ中的Mal基团在纳米反应器暴露于肿瘤源性蛋白之前被屏蔽掉，聚乙二醇化可以在纳米反应器周围产生水合云，以减少药物与血液成分之间的相互作用。发明人用聚乙二醇化脂质膜来保护Mal基团，也未曾报道。同时，聚乙二醇化脂质膜还可以防止药物的泄露，进一步提升药物的生物利用度；此外，聚乙二醇化脂质膜使得纳米反应器具有更好的生物相容性，可以延长血液循环时间。基于此，本实施例提供一种超声响应型纳米反应器，简称Lip@M-^MH，包括锰卟啉基金属有机框架和脂质膜，所述锰卟啉基金属有机框架为载体，所述脂质膜包覆于锰卟啉基金属有机框架外层表面，锰卟啉基金属有机框架上负载有马来酰亚胺修饰的羟氯喹。

Lip@M-^MH的制备方法与实施例一的不同之处在于：上述^MHCQ的制备为Lip@M-^MH的制备步骤一，在其后面新增下述两个步骤：

步骤二：MnTCPP MOF的制备

将30 mg六水合氯化锆、0.28 g苯甲酸和10.98 mg卟啉锰溶解在14 mlN,N-二甲基甲酰胺中，90℃磁力搅拌5小时；反应结束后，将混合物冷却至室温，以15000 rpm的速度离心15分钟；得到的产物用N,N-二甲基甲酰胺和去离子水洗涤三次，然后重悬在去离子水中得到卟啉锰金属有机框架MnTCPP MOF。

步骤三：Lip@M-^MH的制备

S1：将6 mg的二棕榈酰磷脂酰胆碱、2 mg的聚二乙醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和2mg的胆固醇溶解于5 ml三氯甲烷中，然后将混合溶液转移到100 ml圆底烧瓶中，在50-55℃水浴中（本实施例中的水浴温度为55℃）旋转蒸发形成脂质膜，然后在烧杯中加入10 ml去离子水将脂质膜进行溶解；

S2:将1mg MnTCPP MOF溶解于200μl N,N-二甲基甲酰胺与800μl超纯水的混合溶液中，再将0.2 mg^MHCQ分散于该混合液中，室温下磁力搅拌12小时；

S3:然后将S1制备得到的2.5 ml脂质膜加入到S2的混合液中，搅拌3小时后，用去离子水漂洗，以15000 rpm的速度离心20分钟，最终得到纳米反应器Lip@M-^MH。

实施例三：Lip@M（本申请中所述Lip@M是lipid membrane@ MnTCPP MOF的缩写）

实施例三与实施例二的不同之处在于：省去步骤一的制备步骤，同时在步骤三S2中省去“再将0.2 mg^MHCQ分散于该混合液中”这个操作。

对比例一：HCQ

HCQ药物，购自上海麦克林生化科技股份有限公司。

对比例二：Lip@M-H（本申请中所述Lip@M-H是lipid membrane@ MnTCPP MOF-HCQ的缩写）

对比例二与实施例二的不同之处在于：省去步骤一的制备步骤，同时在步骤三S2中“再将0.2 mg^MHCQ分散于该混合液中”这个操作中的^MHCQ替换为HCQ。

一、理化性质表征

（一）^MHCQ的表征

本申请成功制备了马来酰亚胺基团修饰的羟氯喹^MHCQ。如图1a所示，质谱结果显示制备得到的终产物分子量为487.7 Da，与产物理论分子量接近。如图1b所示 ，高效液相色谱结果显示制备得到的终产物纯度为95.31%，以上均说明马来酰亚胺修饰的羟氯喹纯度较高。此外，如图1c和1d所示 ，紫外可见光谱和质子核磁共振氢谱证实了实施例一^MHCQ的化学结构和吸收最大值，表明Mal基团与HCQ成功偶联，其中实施例一^MHCQ的化学结构式如图1d左上角所示。

（二）MnTCPP MOF的表征

如图2a和2b所示，透射电镜和扫描电镜结果显示，未包裹脂质膜前的MnTCPP MOF在溶液中为梭形，分散均匀，均一性较好。如图2c和2d所示，氮气吸附分析表明，MnTCPP MOF的比表面积和平均孔径分别为1257 m²/g和1.27 nm，表明MnTCPP MOF具有介孔结构和可靠的负载效率。如图2e所示，HPLC结果显示，MnTCPP对^MHCQ的包封效率为72.2±7.5%。

（三）实施例二Lip@M-^MH的表征

发明人将聚乙二醇化脂质膜成功涂覆在MnTCPP-^MHCQ上形成最终的纳米反应器Lip@M-^MH，以暂时屏蔽纳米反应器的活性。包裹脂质膜后，如图3a所示，在透射电镜中可以看到MnTCPP外周有一层颜色较淡的薄膜，说明脂质膜已成功涂覆于MnTCPP MOF表面。如图3b所示，元素分析可见氧（O）,磷（P）, 锆（Zr）和锰（Mn）等元素在实施例二Lip@M-^MH中的分布，也进一步验证了纳米反应器的成功合成。此外，如图3c和3d所示，X射线衍射（XRD）和紫外可见光谱数据表明，MnTCPP和^MHCQ的性能在纳米反应器中得到了很好的保留。如图3e所示，马尔文粒径电位仪测得纳米反应器覆盖脂质膜后的粒径约192.93 ± 20.91 nm，电位约-16.16± 1.34 mv。此外，如图3f所示，将Lip@M-^MH重悬在去离子水、磷酸盐缓冲盐水（PBS）、培养基和生理盐水等各种生理溶液中，纳米反应器的粒径无明显改变，表现出良好的稳定性。另外，发明人研究了纳米反应器在超声辐照（US）和不辐照条件下释放^MHCQ的行为。如图3g所示，约81%的药物在超声辐照48小时后进行释放，远远高于未进行超声辐照纳米颗粒释放的48%。同时，如图3h所示，透射电镜也证实了脂质膜的破坏，说明对纳米反应器进行超声辐照，可以分解脂质体膜并促进羟氯喹的释放。（本申请的数据图片中出现的“+US”字样代表的是对其进行过超声辐照）

二、MnTCPP产生ROS的能力

为了评估纳米系统诱导SDT的效果，通过电子自旋共振验证了MnTCPP产生ROS的能力。如图4a所示，对MnTCPP和实施例三Lip@M进行超声照射后，观察到5,5-二甲基-1-吡咯啉- n -氧化物的典型1:2:2:1信号，证明有羟基自由基（•OH）被捕获。但在没有进行超声辐照的MnTCPP和实施例三Lip@M样品以及超声照射的PBS样品中没有检测到这种特征信号。此外， •OH可逐渐降解亚甲基蓝使其颜色由蓝色变为无色，具有明显的光降解特征。如图4b所示，本申请发现，仅在MnTCPP + US和实施例三Lip@M + US样品溶液中，约664 nm处的特征峰强度显著降低，这表明超声可以触发MnTCPP产生•OH。此外，用单线态氧传感器绿色（SOSG）作为探针，观察超声引发的单线态氧（¹O₂）的生成。如图4c和4d所示，随着MnTCPP浓度的增加和超声照射时间的延长，SOSG峰的荧光强度逐渐增加。这些结果表明，MnTCPP和包含MnTCPP的纳米系统是可以产生声动力效应的声敏剂。

三、^MHCQ的效果证明实验

实验一：^MHCQ的自噬抑制效率

为了验证基于点击化学的增强自噬阻断机制，评估实施例一^MHCQ的抗自噬效率，本发明进行了一系列验证实验。暴露的Mal基团可以通过与-SH的反应捕获肿瘤蛋白，因此，如图5a所示，含有游离SH基团的卵清蛋白(OVA)被用来模拟体外受损的肿瘤来源蛋白。如图5c所示，发明人发现，与实施例一^MHCQ一同孵育的OVA的zeta电位从-23.0 mV上升到-12.4mV，而与对比例一HCQ一同孵育的OVA的zeta电位变化不明显，说明孵育后实施例一的^MHCQ已经锚定在蛋白上。此外，本申请还研究了纳米反应器与OVA在超声处理前后的反应，如图5d所示，用超声处理过的实施例二Lip@M-^MH孵育的卵细胞的zeta电位与实施例一^MHCQ的趋势相似；而实施例二Lip@M-^MH未加超声组无明显变化。这是由于聚乙二醇化的涂层会在一定程度上阻止反应，但超声可以去除涂层以恢复^MHCQ的反应活性。

另外，本申请准备了细胞碎片和transwell装置来进一步验证上述理论。如图5b所示，不同的药物制剂被置入下transwell腔室，细胞碎片被置入上腔室。如图5e和5f所示，孵育24 h后，实施例一^MHCQ的下腔蛋白量大于对比例一的HCQ，而实施例一^MHCQ的上腔蛋白残留量少于对比例一的HCQ。这些结果表明，通过原位Mal-SH反应，马来酰亚胺功能化的羟氯喹^MHCQ比HCQ能结合更多的细胞碎片，基于此，本发明随后在体外评估了^MHCQ的自噬抑制效率。LC3B点与自噬体的形成有关，用CLSM显示了LC3B点的免疫荧光图像。如图5k所示，与对比例二Lip@M-H + US相比，实施例二Lip@M-^MH + US中出现了更多的绿色LC3B点状点，这是由于更多的自噬体被阻断。如图5g-j 所示，Western blotting检测还显示，自噬相关蛋白LC3B-II/I和beclin-1在实施例二Lip@M-^MH +US组中上调，表明SDT激活后开始进行自噬过程。更重要的是，与其他对比例相比，p62的含量在实施例二Lip@M-^MH + US组中急剧增加，p62是一种自噬底物，被自噬小体招募并在自噬小体中降解。这表明，即使自噬已经启动，纳米反应器也会干扰整合的自噬过程，导致自噬底物的积累。采用Bio-TEM直接观察细胞内的自噬囊泡，如图5i所示，实施例二Lip@M-^MH + US处理后，在4T1细胞中可以观察到大量包裹纳米反应器的自溶酶体。

综上所述，与对比例一的HCQ相比，由于点击化学介导的自噬捕获，上述结果证实了实施例一的^MHCQ可以更好地抑制SDT诱导的自噬过程。

实验二：体外细胞毒性研究

本申请对纳米材料的生物安全性进行了评价，如图6a所示，不同浓度的实施例二Lip@M-^MH进行孵育后，细胞存活率均高于80%。

通过细胞活力评估进一步研究SDT和自噬阻断剂的联合疗效。如图6c所示，对比例二Lip@M-H + US激活治疗显示出较好的细胞毒性，表明SDT与自噬阻断策略之间存在协同作用；与对比例二Lip@M-H + US相比，实施例二Lip@M-^MH + US的细胞活力急剧下降至20%以下，这表明自噬阻断效率显著提升，同时可以进一步增强SDT诱导的细胞凋亡，从而抑制癌细胞的生长。此外，流式细胞术细胞凋亡定量分析也证实了这些结果，如图6d和6e所示，和细胞毒性实验结果相似，与对比例二Lip@M-H + US相比，实施例二Lip@M-^MH + US处理后肿瘤细胞凋亡比例更高。本发明还采用钙黄素- am和碘化丙啶（PI）荧光染料直观观察死细胞和活细胞。如图6f所示，本实验结果显示，与对比例二Lip@M-H + US相比，实施例二Lip@M-^MH + US凋亡细胞发出的红色荧光更强，表明实施例二Lip@M-^MH + US对细胞的损伤更大。

实验三：生物安全性检测

为了确定纳米反应器的短期和长期生物安全性，本申请进行了溶血试验。如图7a所示，发明人发现对比例三MnTCPP的溶血率略高，但经过脂质膜包裹后溶血率从5%以上下降到2.82%，表明其生物相容性得到改善。随后本发明系统地评价了昆明小鼠注射实施例二Lip@M-^MH 1、3、7、14、28天后的血常规及血液生化指标。如图7b-m所示，与对照组相比，未发现明显异常，说明无明显的系统性毒性。如图7n所示，主要脏器的H&E染色显示，无论短期还是长期，均未见异常炎症反应和组织病理学改变。这些结果清楚地表明，多功能纳米反应器在体内具有良好的生物安全性，为未来实现临床转换做好了铺垫。

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体技术方案和/或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明技术方案的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种马来酰亚胺修饰的羟氯喹，其特征在于，该化合物具有如下所示的结构：

。

2.权利要求1所述马来酰亚胺修饰的羟氯喹的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

将羟氯喹溶解在N,N-二甲基甲酰胺中，然后将该溶液与3-马来酰亚胺丙酸、4-二甲氨基吡啶、1-羟基苯并三唑和碳化二亚胺进行混合，再进行搅拌，旋干后得到马来酰亚胺修饰的羟氯喹，最后进行纯化。

3.如权利要求2所述马来酰亚胺修饰的羟氯喹的制备方法，其特征在于，搅拌时间为6-8小时。

4.如权利要求3所述马来酰亚胺修饰的羟氯喹的制备方法，其特征在于，采用高效液相色谱仪进行纯化。

5.如权利要求4所述马来酰亚胺修饰的羟氯喹的制备方法，其特征在于，羟氯喹和3-马来酰亚胺丙酸的质量比为4:2405。

6.权利要求1所述马来酰亚胺修饰的羟氯喹作为制备治疗肿瘤药物的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为乳腺癌。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，马来酰亚胺修饰的羟氯喹负载于载体上。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述载体为锰卟啉基金属有机框架。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述锰卟啉基金属有机框架为梭形。