CN116949161A - 一组肺结核血清外泌体miRNA标志物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用，涉及分布式电源控制装置技术领域，包括以下内容，S1、标志物组成；S2、应用系统；S3、获取Ct值：获取样本中mi RNA标志物进行实时荧光定量反应得到的Ct值；S4、对比处理：将Ct值与内参相减并进行标准化处理，得到CT值，利用SVM模型处理CT值，分析样本的风险概率值,将风险概率值与阈值进行比较，以预测活动性肺结核患病风险。本发明采用提供的3种新的与活动性肺结核有关的mi RNA标志物进行产品的制备，可直接进行PCR检测，在检测过程中，可同时对多个mi RNA标志物进行同步分析，提高了检测速率，检测简单快速，不会造成假阳性，更有利于全面、准确用于预测活动性肺结核患病风险。
Description
技术领域
本发明涉及分子诊断技术领域，具体涉及一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用。
背景技术
肺结核是由结核分枝杆菌复合群感染引起的慢性肺部感染性疾病，严重威胁人类的健康。结核病的高发病率和死亡率，以及通过空气传播，对病人、病人所接触的事物和社会都产生了相当大的负担。因此，对结核病得早发现早诊断早控制尤为重要，也是遏制结核病流行的重要手段。确诊活动性肺结核和治疗后的活动性评价的金标准是病原学检查。但对于病原学检查阴性的活动性肺结核患者，却缺乏判断规范，需要结合临床表现、治疗史和影像等多种手段才能做出最终判断；且由于结核疫苗效果的不理想，使得很多菌阴肺结核患者特别是无特殊症状和体征的病人得不到有效治疗，延误了抗结核的最佳治疗时间，增加了社区传播的风险，结核菌素试验不能区分结核自然感染和卡介苗接种。因此需要发现一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物，为结核病的诊断与鉴别诊断提供快速、敏感、高效以及稳定的诊断方法。针对现有技术存在以下问题：
1、现有的肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用,结核有关的临床诊断方法均存在缺陷，检测的灵敏度低，且受多种因素影响；
2、现有的肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用,检测的假阳性和假阴性率均高，灵敏度以及特异性目前还有局限。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用，包括以下内容，
S1、标志物组成：外泌体mi RNA生物标志物包括has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p中的一个和多个；
S2、应用系统：mi RNA标志物为与活动性肺结核有关的mi RNA标志物，系统包括：数据获取单元：用于将样本进行基于Direct S-Poly(T)Plus的实时荧光定量反应；
S3、获取Ct值：获取样本中mi RNA标志物进行实时荧光定量反应得到的Ct值；
S4、对比处理：将Ct值与内参相减并进行标准化处理，得到CT值，利用SVM模型处理CT值，分析样本的风险概率值,将风险概率值与阈值进行比较，以预测活动性肺结核患病风险。
本发明技术方案的进一步改进在于：S2来自对象的样本中如果出现两种及以上miRNA标志物水平升高，则表示对象出现肺结核可能的风险，样本为血清样本,试剂盒，包括检测has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p中一种mi RNA的试剂。
本发明技术方案的进一步改进在于：根据mi RNA标志物设计的引物，根据提供的引物可快速检测相应的mi RNA标志物，无需提取核酸，节省样本，检测一个mi RNA最多不超过1μL样本；同时根据得到的结果进一步进行分析，得到结果。
本发明技术方案的进一步改进在于：利用定量逆转录PCR或阵列杂交来测定has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p中的水平。
本发明技术方案的进一步改进在于：提供mi RNA拮抗剂。
本发明技术方案的进一步改进在于：mi RNA拮抗剂为has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p拮抗剂中的一种。
由于采用了上述技术方案，本发明相对现有技术来说，取得的技术进步是：
1、本发明提供一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用，通过标志物组成的作用下，与活动性肺结核有关的3种新的mi RNA标志物，由于mi RNA标志物含量较稳定且在体外稳定性好，在检测过程中灵敏度更强，且提供的mi RNA标志物为活动性肺结核疾病特定的mi RNA标志物，提供的3种mi RNA标志物具有特定的表达谱并且某些mi RNA在疾病早期即可预示疾病的发生，更有利于进行早期的预测实验；在检测分析过程中，不需要筛选和制备特异性抗体，可直接进行PCR检测，在检测过程中，可同时对多个mi RNA标志物进行同步分析，提高了检测速率，检测简单快速，不会造成假阳性，更有利于全面、准确用于预测活动性肺结核患病风险，采用提供的3种新的与活动性肺结核有关的mi RNA标志物进行产品的制备，得到的产品在检测分析过程中，不需要筛选和制备特异性抗体，可直接进行PCR检测，在检测过程中，可同时对多个mi RNA标志物进行同步分析，提高了检测速率，检测简单快速，不会造成假阳性，更有利于全面、准确用于预测活动性肺结核患病风险。
2、本发明提供一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用，通过应用系统试剂盒的作用下，试剂盒，包括检测has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p中一种mi RNA的试剂，定量准确，检测结果稳定可靠，可以提高临床早期诊断的敏感性和特异性。该试剂盒结合常用的RNA提取试剂和通用的逆转录试剂，据mi RNA标志物设计的引物，根据提供的引物可快速检测相应的mi RNA标志物，无需提取核酸，简单快速、减少污染、避免丢失、成本降低、技术门槛低；节省样本，检测一个mi RNA最多不超过1μL样本；同时可根据得到的结果进一步进行分析，得到的结果更可靠，可广泛使用，实时荧光定量反应分析得到的样本的mi RNA标志物的Ct值先进行标准化处理，确保误差范围更小，结果更可靠；再利用SVM模型分析样本的风险概率值并与阈值比对，将实时荧光定量反应结合AI诊断模型，准确快速预测活动性肺结核患病风险，预测结果准确度较高，可信度较高，可广泛应用。
附图说明
图1为本发明的一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用的流程结构示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细说明：
实施例1
如图1所示，本发明提供了一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用,包括以下内容，
S1、标志物组成：外泌体mi RNA生物标志物包括has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p中的一个和多个；
S2、应用系统：mi RNA标志物为与活动性肺结核有关的mi RNA标志物，系统包括：数据获取单元：用于将样本进行基于Direct S-Poly(T)Plus的实时荧光定量反应；
S3、获取Ct值：获取样本中mi RNA标志物进行实时荧光定量反应得到的Ct值；
S4、对比处理：将Ct值与内参相减并进行标准化处理，得到CT值，利用SVM模型处理CT值，分析样本的风险概率值,将风险概率值与阈值进行比较，以预测活动性肺结核患病风险。
在本实施案例中，提供的3种mi RNA标志物具有特定的表达谱并且某些mi RNA在疾病早期即可预示疾病的发生，更有利于进行早期的预测实验；在检测分析过程中，不需要筛选和制备特异性抗体，可直接进行PCR检测，在检测过程中，可同时对多个mi RNA标志物进行同步分析，提高了检测速率，检测简单快速，不会造成假阳性，更有利于全面、准确用于预测活动性肺结核患病风险，采用提供的3种新的与活动性肺结核有关的mi RNA标志物进行产品的制备，得到的产品在检测分析过程中，不需要筛选和制备特异性抗体，可直接进行PCR检测，在检测过程中，可同时对多个mi RNA标志物进行同步分析，提高了检测速率，检测简单快速，不会造成假阳性，更有利于全面、准确用于预测活动性肺结核患病风险。
实施例2
如图1所示，在实施例1的基础上，本发明提供一种技术方案：优选的,S2来自对象的样本中如果出现两种及以上mi RNA标志物水平升高，则表示对象可能有肺结核的风险，样本为血清样本,试剂盒，包括检测has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p中一种mi RNA的试剂，根据mi RNA标志物设计的引物，根据提供的引物可快速检测相应的mi RNA标志物，无需提取核酸，节省样本，检测一个mi RNA最多不超过1μL样本；同时根据得到的结果进一步进行分析，得到结果，利用定量逆转录PCR或阵列杂交来测定has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p中的水平，提供mi RNA拮抗剂在制备用于预防或减轻对象药物中的用途，mi RNA拮抗剂为has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p拮抗剂中的一种。
在本实施案例中，可以提高临床早期诊断的敏感性和特异性。该试剂盒结合常用的RNA提取试剂和通用的逆转录试剂，据mi RNA标志物设计的引物，根据提供的引物可快速检测相应的mi RNA标志物，无需提取核酸，简单快速、减少污染、避免丢失、成本降低、技术门槛低；节省样本，检测一个mi RNA最多不超过1μL样本；同时可根据得到的结果进一步进行分析，得到的结果更可靠，可广泛使用，实时荧光定量反应分析得到的样本的mi RNA标志物的Ct值先进行标准化处理，确保误差范围更小，结果更可靠；再利用SVM模型分析样本的风险概率值并与阈值比对，将实时荧光定量反应结合AI诊断模型，准确快速预测活动性肺结核患病风险，预测结果准确度较高，可信度较高，可广泛应用。
下面具体说一下该一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用的工作原理。
如图1所示，标志物组成外泌体mi RNA生物标志物包括has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p中的一个和多个，3种mi RNA标志物具有特定的表达谱并且某些mi RNA在疾病早期即可预示疾病的发生，更有利于进行早期的预测实验；在检测分析过程中，不需要筛选和制备特异性抗体，可直接进行PCR检测，在检测过程中，可同时对多个mi RNA标志物进行同步分析，提高了检测速率，检测简单快速，不会造成假阳性，更有利于全面、准确用于预测活动性肺结核患病风险，采用提供的3种新的与活动性肺结核有关的mi RNA标志物进行产品的制备，得到的产品在检测分析过程中，不需要筛选和制备特异性抗体，可直接进行PCR检测，在检测过程中，可同时对多个mi RNA标志物进行同步分析，提高了检测速率，检测简单快速，不会造成假阳性，更有利于全面、准确用于预测活动性肺结核患病风险，mi RNA标志物为与活动性肺结核有关的mi RNA标志物，系统包括：数据获取单元：用于将样本进行基于Direct S-Poly(T)Plus的实时荧光定量反应，来自对象的样本中如果出现mi RNA标志物水平升高，则表示对象出现排斥反应或者具有出现排斥反应的风险，样本为血清样本,试剂盒，包括检测has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p中至少一种mi RNA的试剂，根据mi RNA标志物设计的引物，根据提供的引物可快速检测相应的mi RNA标志物，无需提取核酸，节省样本，检测一个mi RNA最多不超过1μL样本；同时根据得到的结果进一步进行分析，得到结果，利用定量逆转录PCR或阵列杂交来测定has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p的水平，试剂盒结合常用的RNA提取试剂和通用的逆转录试剂，据mi RNA标志物设计的引物，根据提供的引物可快速检测相应的mi RNA标志物，无需提取核酸，简单快速、减少污染、避免丢失、成本降低、技术门槛低；节省样本，检测一个mi RNA最多不超过1μL样本；同时可根据得到的结果进一步进行分析，得到的结果更可靠，可广泛使用，实时荧光定量反应分析得到的样本的mi RNA标志物的Ct值先进行标准化处理，确保误差范围更小，结果更可靠；再利用SVM模型分析样本的风险概率值并与阈值比对，将实时荧光定量反应结合AI诊断模型，准确快速预测活动性肺结核患病风险，预测结果准确度较高，可信度较高，可广泛应用，获取样本中mi RNA标志物进行实时荧光定量反应得到的Ct值，将Ct值与内参相减并进行标准化处理，得到CT值，利用SVM模型处理CT值，分析样本的风险概率值,将风险概率值与阈值进行比较，以预测活动性肺结核患病风险。
上文一般性的对本发明做了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对于技术领域的一般技术人员是显而易见的。因此，在不脱离本发明思想精神的修改或改进，均在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用，包括以下内容，其特征在于：
S1、标志物组成：外泌体mi RNA生物标志物包括has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p中的一个和多个；
S2、应用系统：mi RNA标志物为与活动性肺结核有关的mi RNA标志物，系统包括：数据获取单元：用于将样本进行基于Direct S-Poly(T)Plus的实时荧光定量反应；
S3、获取Ct值：获取样本中mi RNA标志物进行实时荧光定量反应得到的Ct值；
S4、对比处理：将Ct值与内参相减并进行标准化处理，得到CT值，利用SVM模型处理CT值，分析样本的风险概率值,将风险概率值与阈值进行比较，以预测活动性肺结核患病风险。
2.根据权利要求1所述的一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用，其特征在于：S2来自对象的样本中如果出现两种及以上mi RNA标志物水平升高，则表示对象出现肺结核的风险，样本为血清样本,试剂盒，包括检测has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p中一种mi RNA的试剂。
3.根据权利要求2所述的一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用，其特征在于：根据mi RNA标志物设计的引物，根据提供的引物可快速检测相应的mi RNA标志物，无需提取核酸，节省样本，检测一个mi RNA最多不超过1μL样本；同时根据得到的结果进一步进行分析，得到结果。
4.根据权利要求2所述的一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用，其特征在于：利用定量逆转录PCR或阵列杂交来测定has-miRNA-375-3p、has-miRNA-885-3P、has-miRNA-100-5p中的水平。
5.根据权利要求2所述的一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用，其特征在于：提供mi RNA拮抗剂。
6.根据权利要求5所述的一组肺结核血清外泌体mi RNA标志物及其应用，其特征在于：mi RNA拮抗剂为has-miRNA-375-3p拮抗剂、has-miRNA-885-3P拮抗剂、has-miRNA-100-5p拮抗剂中的一种。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117637027A (zh) * | 2024-01-26 | 2024-03-01 | 南通大学附属医院 | 外泌体circRNAs诊断早期肺腺癌的效率评估方法 |
| CN117637027B (zh) * | 2024-01-26 | 2024-03-29 | 南通大学附属医院 | 外泌体circRNAs诊断早期肺腺癌的效率评估方法 |
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