CN116712665A - 一种光热-化疗联合治疗剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种光热‑化疗联合治疗剂及其制备方法和应用，光热‑化疗联合治疗剂包括明胶背衬层、以及多个彼此间隔地分布设置于明胶背衬层表面的微针，微针包括光热剂‑载体材料表层、开设于光热剂‑载体材料表层靠近明胶背衬层的端面上的空穴、以及嵌设于空穴内的药物填充层。本发明的光热‑化疗联合治疗剂通过缓释的方式将药物原位递送至关节处，而光热剂在激光照射下发挥光热转化实现热疗，从而实现光热疗法与药物疗法的协同作用，具有减少给药次数、提高微针机械性能、控制药物释放行为、提高治疗效果和使用安全性的优点。

Description

一种光热-化疗联合治疗剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及药物制剂的技术领域，尤其是涉及一种光热-化疗联合治疗剂及其制备方法和应用。

背景技术

类风湿关节炎（RA）是一种病因未明的慢性、以炎性滑膜炎为主的系统性疾病，其特征是手、足小关节的多关节、对称性、侵袭性关节炎症，经常伴有关节外器官受累及血清类风湿因子阳性，可以导致关节畸形及功能丧失。在遗传因素和环境因素的双重作用下，类风湿关节炎患者体内的白细胞介素-6、肿瘤坏死因子等多种促炎细胞因子表达上升，造成滑膜软骨等组织器官出现病理改变。

类风湿关节炎治疗的主要目的在于减轻关节炎症反应，抑制病变发展及不可逆骨质破坏，尽可能保护关节和肌肉的功能，最终达到病情完全缓解或降低疾病活动度的目标，其治疗原则包括患者教育、早期治疗、联合用药、个体化治疗方案以及功能锻炼。目前，药物治疗仍是类风湿关节炎的主要治疗手段，药物治疗主要包括非甾类抗炎药、慢作用抗风湿药、免疫抑制剂、免疫和生物制剂、以及植物药等。然而由于类风湿关节炎的治疗周期长，且易反复发作，长期高剂量和频繁用药将带来严重的不良副作用和经济负担。药物长期使用的安全性问题也备受人们关注，口服生物利用度较差且容易导致胃肠道不良反应，而注射给药则可能作用于多个器官或组织导致系统毒副作用。

近年来，随着RA药物的早期联合应用，对关节外病变的治疗以及新疗法的不断出现，使类风湿关节炎的预后已有明显改善。目前，光热疗法作为类风湿关节炎的新疗法具有广阔的临床发展前景。光热疗法通过光热剂将近红外能量转化成热量从而产生高温引起炎症细胞的凋亡或坏死，可在空间和时间上控制仅照射关节而使其对正常组织或器官几乎无损害作用，并且可降低药物的剂量以减少毒副作用，光热疗法因其非侵入性而被认为是治疗类风湿关节炎的安全方法。

授权公告号为CN103816538B的中国专利公开了一种在类风湿性关节炎的光动力疗法与光热疗法中应用的一种卟啉衍生物纳米复合物制剂及其应用，该复合试剂能应用到离体滑膜细胞的光动力疗法与光热疗法中，该复合试剂由卟啉衍生物与纳米材料组成，利用卟啉衍生物作为光动力疗法中的光敏剂，同时利用纳米材料的富集作用和光热作用，实现双重选择性与多模式治疗；其中所述的卟啉衍生物为四-对-磺酸基-苯基卟啉；所述的纳米材料为TiO₂晶须或颗粒、纳米ZnO、Pt纳米簇、Au纳米簇和Ag纳米簇中的一种或两种。关节内注射和静脉注射是上述复合制剂用于治疗类风湿关节炎常用的给药途径，其中，静脉注射将导致纳米材料等光热剂遍布全身造成严重的毒副作用，甚至难以识别病变部位，虽然关节内注射可增加光热剂在关节内的积累，但将给患者带来极大的痛苦，患者顺应性低。因此，基于光热剂的光热疗法，其局部给药比全身给药更有利，因为光热作用仅在局部治疗区域发挥疗效，可避免全身毒副作用。

透皮递送系统不仅可以提高药物的利用效率，还可以提高患者的依从性和整体治疗效果。微针（MN）在近几年作为一种物理增强经皮药物递送技术已得到广泛研究，具有快速、微痛微创等特点。可溶性微针一般由水溶性聚合物或可降解材料制备得到，药物包载在针体中，微针刺入体内后，药物随着针体的溶解而释放。可溶性微针在皮肤上产生可快速愈合的药物递送通道，能够避开大量神经末梢和毛细血管，减少疼痛与感染。基于微针的诸多优点，在类风湿关节炎治疗领域的应用也已初现。

授权公告号为CN109528695B的中国专利公开了一种治疗类风湿性关节炎的微针透皮给药贴片：所述微针透皮给药贴片包括扁平状的基层、垂直固定在基层表面且相互间隔布置的多个微针，微针包括基底部及尖刺部，微针通过基底部固定于基层表面，所述基层的制备材料包括生物相容性高分子成分及溶剂，微针的制备材料包括可溶性生物相容性成分、活性药物成分和溶剂。与口服给药系统和注射给药系统相比，微针给药是可以直接穿透皮肤的角质层实现药物的传输，并避免肝脏的首过效应，但是一方面采取单纯的药物治疗需要频繁给药才能达到有效的治疗效果，另一方面上述微针透皮给药贴片通过将活性药物成分以游离形式包载于微针上，药物在微针溶解后快速大量释放，且释放药物的速度难以控制，存在药物倾泻的风险。

因此，设计一种将药物和光热剂共载的光热-化疗联合治疗剂，通过微针治疗的手段实现类风湿关节炎的局部治疗，直接将药物和光热剂原位递送至关节处，减少了药物到达非病灶部位，降低了药物和光热剂的全身毒副作用，并且极大地提高了药物经皮递送治疗类风湿关节炎的效率，对于减少给药次数、控制药物释放行为、提高治疗效果和使用安全性具有重要意义。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的第一个目的在于提供一种光热-化疗联合治疗剂，其可通过缓释的方式将药物原位递送至关节处，而光热剂在激光照射下发挥光热转化实现热疗，从而实现光热疗法与药物疗法的协同作用，具有减少给药次数、提高微针机械性能、控制药物释放行为、提高治疗效果和使用安全性的优点。

本发明的第二个目的在于提供一种光热-化疗联合治疗剂的制备方法，其具有制备简单、制得的微针机械性能良好且刺入表皮层后不易造成脆裂、明胶背衬层柔软更贴合关节处给药的优点。

本发明的第三个目的在于提供一种光热-化疗联合治疗剂的应用，其具有减少了药物到达非病灶部位、降低了药物和光热剂的全身毒副作用的优点。

为实现上述第一个目的，本发明提供了如下技术方案：

一种光热-化疗联合治疗剂，包括明胶背衬层、以及多个彼此间隔地分布设置于所述明胶背衬层表面的微针，所述微针包括光热剂-载体材料表层、开设于所述光热剂-载体材料表层靠近明胶背衬层的端面上的空穴、以及嵌设于所述空穴内的药物填充层。

进一步地，所述微针的纵截面呈凸台形、横截面呈圆形，所述微针的高度为400~600μm、顶端直径为10~15μm、底端直径为120~140μm。

更进一步地，所述明胶背衬层的面积为0.1~10cm²，且每1cm²面积的所述明胶背衬层上的微针数量为25~49个。

进一步地，所述光热剂-载体材料表层的光热剂为纳米金棒、普鲁士蓝纳米粒、氧化铁纳米粒、吲哚菁绿和钯纳米粒中的一种或几种的组合物。

进一步地，所述光热剂-载体材料表层的载体材料为硫酸软骨素、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、丝素蛋白、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、透明质酸、聚乙烯吡咯烷酮、壳聚糖、麦芽糖和明胶中的一种或几种的组合物。

进一步地，所述药物填充层的药物为非甾体类抗炎药、软骨保护剂、慢作用抗风湿药、细胞毒药物、肾上腺皮质激素和抗生素的一种或几种的组合物。

更进一步地，所述药物填充层的药物为塞来昔布、美洛昔康、甲氨蝶呤、他克莫司、蜂毒肽、地塞米松、来氟米特和依那西普中的一种或几种的组合物。

为实现上述第二个目的，本发明提供了如下技术方案：

一种光热-化疗联合治疗剂的制备方法，包括以下步骤，

S1按照所述明胶背衬层和微针的形状和数量定制阴膜，所述阴膜内有相互连通的明胶背衬层腔和微针腔，所述阴模的材质为聚二甲基硅氧烷；

S2先将所述光热剂和载体材料配置成的表层液采用真空法置入所述S1的阴膜的微针腔中，干燥至表层液凝固，再在真空环境中利用负压形成所述空穴，然后采用离心法将所述药物置入所述空穴内，得到微针；

S3将明胶配置成的背衬液采用真空法置入所述S1的阴膜的明胶背衬层腔中，干燥至背衬液凝固，形成明胶背衬层；

S4脱模，得到光热-化疗联合治疗剂。

进一步地，在所述S2中，控制光热剂和载体材料在表层液中的浓度分别为3~12μg/mL和5~20μg/mL。

更进一步地，在所述S2中，控制真空法的真空度为-0.06~-0.08MPa、抽真空时间为20~40min。

更进一步地，在所述S2中，控制真空环境的真空度为-0.06~-0.08MPa、抽真空时间为100~150min。

更进一步地，在所述S2中，控制离心法的转速为2500~3500rpm、离心时间为5~15min。

进一步地，在所述S3中，控制明胶在背衬液中的浓度为5.0~10.0mg/mL。

更进一步地，在所述S3中，控制真空法的真空度为-0.06~-0.08MPa、抽真空时间为5~15min。

为实现上述第三个目的，本发明提供了如下技术方案：

一种光热-化疗联合治疗剂在制备治疗关节炎的药物中的应用。

进一步地，所述关节炎包括风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、痛风性关节炎、强制性脊椎炎、反应性关节炎、感染性关节炎、创伤性关节炎、银屑病关节炎、肠病性关节炎、以及自身免疫病关节炎。

综上所述，本发明的有益技术效果为：

本发明的光热-化疗联合治疗剂通过可溶性微针透皮给药治疗类风湿关节炎，克服了传统透皮贴剂难以突破角质层等缺点，同时避免了口服药物引起的胃肠道副作用和肝脏首过效应，避免了注射药物引起的疼痛、患者依从性差、频繁给药等问题，并且具有一定的可控性，一旦有不良反应可立即停药，提高了用药的安全性；

本发明的微针中的药物以干粉的形式进行包载，制备过程中条件温和，可以保证药物的稳定性，并且效率的提高避免了药物的浪费，同时可以包载多个药物或有效成分，实现治疗的协同作用；

本发明的光热-化疗联合治疗剂既可以避免口服药物引起的胃肠道不良影响和首过效应，又可以保留注射给药中针体打破皮肤屏障的优势，柔性的明胶背衬层易于贴合弯曲的关节部位给药，另外，还要提供一种可以实现在同一片微针贴片中同时包载药物和光热剂的制备方法，要求该制备方法操作简便、可重复性强，同时实现协同给药治疗；

本发明的光热-化疗联合治疗剂通过可溶性微针将治疗类风湿关节炎的药物与光热疗法相结合，将光热剂均匀混合于微针针体材料中，同时利用真空形成的空穴进行药物负载，通过微针有效穿透角质层将药物与光热剂输送至有效部位。随着微针针体的溶解，药物将缓慢释放到病灶部位发挥药效，而光热剂在激光照射下发挥光热转化实现热疗，从而实现光热疗法与药物疗法的协同作用；

本发明的制备方法通过真空法制备可溶性微针，节省制备时间，微针制作过程简单，同时对微针的制备材料进行选择，制得的微针机械性能良好、针头硬度好、可有效刺入皮内、不易造成脆裂，明胶背衬层柔软更贴合关节处给药，适于类风湿关节炎的透皮给药；

本发明的光热-化疗联合治疗剂通过微针治疗的手段，应用于类风湿关节炎等关节炎的局部治疗中，直接将药物和光热剂原位递送至关节处，减少了药物到达非病灶部位，降低了药物和光热剂的全身毒副作用，并且极大地提高了药物经皮递送治疗类风湿关节炎的效率。

附图说明

图1是本发明实施例1的光热-化疗联合治疗剂的结构示意图。

图2是本发明实施例2光热-化疗联合治疗剂的力-位移曲线图。

图3是本发明实施例2光热-化疗联合治疗剂的可溶性测试图。

图4是本发明实施例2光热-化疗联合治疗剂的刺入皮肤性能考察图。

图5是本发明实施例2光热-化疗联合治疗剂的体外透皮释放图。

图6是本发明实施例2、对比例1~3制得的光热-化疗联合治疗剂的体外药效外观形态图。

图7是本发明实施例2、对比例1~3制得的光热-化疗联合治疗剂的体外药效足趾厚度的变化情况。

图8是本发明实施例2、对比例1~3制得的光热-化疗联合治疗剂的体外药效关节炎指数评分情况。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与作用更加清楚及易于了解，下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步阐述。

实施例

实施例1：参照图1，为本发明公开的一种光热-化疗联合治疗剂，包括明胶背衬层、以及多个彼此间隔地分布设置于明胶背衬层表面的微针，微针包括光热剂-载体材料表层、开设于光热剂-载体材料表层靠近明胶背衬层的端面上的空穴、以及嵌设于空穴内的药物填充层。

其中，明胶背衬层的面积为1cm²，形状为正方形，且每1cm²面积的明胶背衬层上的微针数量为36个，这些微针按照6×6的方式阵列布置。在每个微针中，微针的纵截面呈凸台形、横截面呈圆形，微针的高度为500μm、顶端直径为12μm、底端直径为130μm。

另外，光热剂-载体材料表层的光热剂为纳米金棒、普鲁士蓝纳米粒、氧化铁纳米粒、吲哚菁绿和钯纳米粒中的一种或几种的组合物。本实施例优选采用纳米金棒作为光热剂-载体材料表层的光热剂。

光热剂-载体材料表层的载体材料为硫酸软骨素、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、丝素蛋白、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、透明质酸、聚乙烯吡咯烷酮、壳聚糖、麦芽糖和明胶中的一种或几种的组合物。本实施例优选采用明胶作为光热剂-载体材料表层的载体材料。

药物填充层的药物为非甾体类抗炎药、软骨保护剂、慢作用抗风湿药、细胞毒药物、肾上腺皮质激素和抗生素的一种或几种的组合物。具体地，药物填充层的药物为塞来昔布、美洛昔康、甲氨蝶呤、他克莫司、蜂毒肽、地塞米松、来氟米特和依那西普中的一种或几种的组合物。本实施例优选采用他克莫司（TAC）作为药物填充层的药物。

实施例2：为本发明公开的一种光热-化疗联合治疗剂的制备方法，与实施例1的不同之处在于，包括以下步骤，

S1按照明胶背衬层和微针的形状和数量定制阴膜，阴膜内有相互连通的明胶背衬层腔和微针腔，阴模的材质为聚二甲基硅氧烷；

S2先取200μL的光热剂和载体材料配置成的表层液注入S1的阴膜的微针腔中，控制光热剂和载体材料在表层液中的浓度分别为6μg/mL和10μg/mL，并将其放入40℃的真空干燥箱中，在-0.07MPa下保持30min，以使表层液进入微针腔中，真空结束后刮去表面多余的表层液回收利用，并得到微针的针尖，再在-0.07MPa抽真空120min，从而使微针的底面在真空环境中的负压作用下形成凹陷的空穴，然后用平头药匙将药物的粉末填入阴膜中，在3000rpm下离心10min，以使药物填充至空穴内，得到微针；

S3取150μL的明胶配置成的背衬液注入S1的阴膜的明胶背衬层腔中，控制明胶在背衬液中的浓度为7.5mg/mL，在-0.07MPa下保持10min，再将其放入恒温恒湿干燥箱中干燥12h，形成明胶背衬层；

S4脱模，得到如图1所示的光热-化疗联合治疗剂。

实施例3：为本发明公开的一种光热-化疗联合治疗剂的制备方法，与实施例1的不同之处在于，包括以下步骤，

S1按照明胶背衬层和微针的形状和数量定制阴膜，阴膜内有相互连通的明胶背衬层腔和微针腔，阴模的材质为聚二甲基硅氧烷；

S2先取200μL的光热剂和载体材料配置成的表层液注入S1的阴膜的微针腔中，控制光热剂和载体材料在表层液中的浓度分别为3μg/mL和5μg/mL，并将其放入40℃的真空干燥箱中，在-0.06MPa下保持20min，以使表层液进入微针腔中，真空结束后刮去表面多余的表层液回收利用，并得到微针的针尖，再在-0.06MPa抽真空100min，从而使微针的底面在真空环境中的负压作用下形成凹陷的空穴，然后用平头药匙将药物的粉末填入阴膜中，在2500rpm下离心5min，以使药物填充至空穴内，得到微针；

S3取150μL的明胶配置成的背衬液注入S1的阴膜的明胶背衬层腔中，控制明胶在背衬液中的浓度为5.0mg/mL，在-0.06MPa下保持5min，再将其放入恒温恒湿干燥箱中干燥12h，形成明胶背衬层；

S4脱模，得到光热-化疗联合治疗剂。

实施例4：为本发明公开的一种光热-化疗联合治疗剂的制备方法，与实施例1的不同之处在于，包括以下步骤，

S1按照明胶背衬层和微针的形状和数量定制阴膜，阴膜内有相互连通的明胶背衬层腔和微针腔，阴模的材质为聚二甲基硅氧烷；

S2先取200μL的光热剂和载体材料配置成的表层液注入S1的阴膜的微针腔中，控制光热剂和载体材料在表层液中的浓度分别为12μg/mL和20μg/mL，并将其放入40℃的真空干燥箱中，在-0.08MPa下保持40min，以使表层液进入微针腔中，真空结束后刮去表面多余的表层液回收利用，并得到微针的针尖，再在-0.08MPa抽真空150min，从而使微针的底面在真空环境中的负压作用下形成凹陷的空穴，然后用平头药匙将药物的粉末填入阴膜中，在3500rpm下离心15min，以使药物填充至空穴内，得到微针；

S3取150μL的明胶配置成的背衬液注入S1的阴膜的明胶背衬层腔中，控制明胶在背衬液中的浓度为10.0mg/mL，在-0.08MPa下保持15min，再将其放入恒温恒湿干燥箱中干燥12h，形成明胶背衬层；

S4脱模，得到光热-化疗联合治疗剂。

实施例5：为本发明公开的一种光热-化疗联合治疗剂的应用，与实施例1的不同之处在于，上述光热-化疗联合治疗剂在制备治疗关节炎的药物中的应用。

具体地，关节炎包括风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、痛风性关节炎、强制性脊椎炎、反应性关节炎、感染性关节炎、创伤性关节炎、银屑病关节炎、肠病性关节炎、以及自身免疫病关节炎。本实施例中优选应用于类风湿性关节炎。

对比例

对比例1：为本发明公开的一种光热-化疗联合治疗剂的制备方法，与实施例2的不同之处在于，在S2中，先取200μL的载体材料配置成的表层液注入S1的阴膜的微针腔中，并将其放入40℃的真空干燥箱中，在-0.07MPa下保持30min，以使表层液进入微针腔中，真空结束后刮去表面多余的表层液回收利用，并得到空白微针（Blank-MN）。

对比例2：为本发明公开的一种光热-化疗联合治疗剂的制备方法，与实施例2的不同之处在于，在S2中，先取200μL的载体材料配置成的表层液注入S1的阴膜的微针腔中，并将其放入40℃的真空干燥箱中，在-0.07MPa下保持30min，以使表层液进入微针腔中，真空结束后刮去表面多余的表层液回收利用，并得到微针的针尖，再在-0.07MPa抽真空120min，从而使微针的底面在真空环境中的负压作用下形成凹陷的空穴，然后用平头药匙将药物的粉末填入阴膜中，在3000rpm下离心10min，以使药物填充至空穴内，得到载药微针（TAC-MN）。

对比例3：为本发明公开的一种光热-化疗联合治疗剂的制备方法，与实施例2的不同之处在于，在S2中，先取200μL的光热剂和载体材料配置成的表层液注入S1的阴膜的微针腔中，并将其放入40℃的真空干燥箱中，在-0.07MPa下保持30min，以使表层液进入微针腔中，真空结束后刮去表面多余的表层液回收利用，得到金棒微针（AuNRs-MN）。

性能检测试验

1.可溶性微针的表征

（1）力学性能测试

将实施例2制得的微针切成2×2阵列，针尖朝上水平放置在质构仪的铝制底座上，选择P6探头，设定目标模式为500um的位移，数据采集率为50%，触发力为0.049N，保持探头与微针垂直，以0.1mm/s的恒定速度对微针进行压缩实验，通过质构仪测试过程中记录的时间与力的关系，得到微针发生断裂的临界力，结果如图2所示，每根针所能承受的屈曲力为0.375N，而穿透皮肤所需的力为3.596×10^-4N，故所制备的可溶性微针针尖机械强度良好，足以刺入皮肤。

（2）微针溶解性实验

将实施例2制得的微针倒置在保鲜膜上，使针尖完全暴露于PBS缓冲液（PH=5.0）中进行溶解性实验，每隔一定时间用显微镜观察其溶胀和溶解情况。每隔一段时间将微针取出，用滤纸吸干微针表面水分，用显微镜观察微针的溶解情况并拍照记录，结果如图3所示。

（3）微针穿刺率实验

将实施例2制得的微针刺入小鼠背部皮肤，按压1min，随后保留5min后小心用镊子揭下背衬。将1%亚甲基蓝覆盖在皮肤表面约3~5min，进行离体皮肤染色，完成后用酒精擦去多余的亚甲基蓝溶液。如图4所示，观察微针和皮肤的情况，计算穿刺率。穿刺率的计算公式如下：

穿刺率＝(孔洞数/可溶性微针针体数)*100％。

力学性能测试结果显示微针不仅在皮肤上形成了凹痕，并有效刺穿了皮肤。通过对染色针孔进行计算可得微针的有效刺穿率为97.2%。另外，倒置显微镜下，微针刺入皮肤前针尖完整，刺入皮肤5min后，针体均溶解。表明所制备的微针可有效刺入皮肤并逐渐溶解进行药物有效释放。

2.载药可溶性微针的体外透皮情况

用经典的Franz扩散池进行体外经皮渗透试验。试验分2组：联合微针给药组、药物软膏组，每组试验重复3次。取出SD大鼠离体皮肤，在室温下于生理盐水中浸泡1h，并用滤纸吸干表面多余液体。

将实施例2制得的光热-化疗联合治疗剂刺入大鼠离体皮肤并用胶带覆盖，皮肤固定在扩散池中，记为联合微针给药组。

另设一相同药物的药物软膏组，将TAC乳膏贴于皮肤表面，并放置在扩散池中，记为药物软膏组。

接收池加入新鲜制备的25%无水乙醇，仪器设定温度为37±1.0℃。分别于0.5、1、2、4、6、9、12、16、20、24、32和48h收集1mL的释放介质，并用1mL新鲜介质补充。

皮肤滞留量测定：试验结束时，取下皮肤后撕去微针贴片，并在显微镜下观察微针的溶解情况，药物软膏组则用25%乙醇擦除皮肤表面剩余的软膏，随后按扩散的有效面积剪取皮肤并称重，剪细捣碎，并用乙腈提取皮肤中保留的药物。所有样品中药物的含量均采用HPLC进行测定。结果如图5所示，联合微针给药组在前期经皮渗透较为迅速，在微针刺入皮肤后的0.5h内药物会存在突释，可能是由于针尖在前期快速溶解，药物的渗透量与药物软膏组相比具有显著增加，说明微针在短时间内可显著提高药物的经皮渗透量。32h时联合微针给药组和软膏组药物的经皮渗透量分别为17.621±1.25、10.162±1.13ug/cm²，皮肤中药物的滞留量分别为0.783±0.07、0.414±0.06ug/mg。和药物软膏组相比，联合微针给药组在相同时间内的药物经皮渗透量和皮肤滞留量均显著增加。

3.可溶性微针对类风湿关节炎的体外治疗效果

将SD大鼠随机分为8组，每组6只。适应性喂养一周后，使用酒精棉球对足部皮肤消毒后，于大鼠右后足趾部位皮内注射100uL的弗氏完全佐剂（CFA），注射后按住注射部位5s以上，以防止佐剂从注射部位流出，七天后在原部位再次皮下注射40uL的CFA，进行二次加强免疫以成功建立佐剂型关节炎大鼠模型。当造模完成后即可开始按照组别分别进行给药，之后每隔1天给药1次。其中，各个微针给药组和药物口服组给药组的给药量为15μg/次，药物软膏组则以药物软膏的常规用量进行涂抹。分组情况如下：

（1）正常对照组（Normal）

（2）模型组（Model）

（3）空白微针给药组（对比例1，Blank-MN）

（4）载药微针给药组（对比例2，TAC-MN）

（5）金棒微针给药组（对比例3，AuNRs-MN）

（6）联合微针给药组（实施例2，TAC/AuNRs-MN）

（7）药物软膏组（TACOint）

（8）药物口服组（TACig.）

为评价联合载药微针对佐剂型关节炎大鼠模型在外观肿胀程度方面的药效，以宏观观察、足趾厚度和关节炎指数监测大鼠外观的红肿程度。同时对后足进行关节炎指数评分，分数范围为0~4，根据其评分及足趾厚度确定造模是否完成。其中，0分表示无关节炎、无肿胀和红斑；1分表示注射部位出现轻微肿胀；2分表示踝关节出现中度红肿现象；3分表示明显肿胀，涉及到指关节；4分表示关节严重肿胀并蔓延至整只足爪。

图6显示的是各组大鼠的造模足爪（右后足）在给药结束后的外观形态。结果表明，（1）模型组和正常组相比，其右后足的关节处、足趾处均出现最明显的肿胀，并在给药进程中肿胀并未消失；（2）微针给药的三组（TAC-MN、AuNRs-MN和AuNRs/TAC-MN）和Blank-MN组相比，肿胀程度有下降的趋势，特别是AuNRs/TAC-MN组的踝关节处，肿胀有明显消退；（3）TAC的口服给药和软膏给药组与模型组相比，肿胀程度也有所好转。

图7显示的是各组大鼠的造模足爪（右后足）足趾厚度的变化情况。结果表明（1）经各分组治疗后的大鼠足趾厚度不同程度的减小，肿胀程度呈现降低的趋势；（2）经TAC/AuNRs-MN治疗后的大鼠，其足趾厚度从10.90±0.55mm下降到6.65±0.35mm，给药结束后的肿胀程度显著小于模型组，且小于单独载药的TAC-MN组和AuNRs-MN组；（3）给药期间，TAC的不同给药途径均有一定的治疗效果，TAC-MN组与同剂量的口服组相比，其足趾厚度显著减小，与常规剂量涂抹的软膏组相比，其药效相当。而常规涂抹的软膏中TAC的含量是TAC-MN中的5倍，由此可见微针相对于软膏优越的透皮效率。TAC/AuNRs-MN可通过微针实现药物在关节部位的蓄积，再结合光热疗法，发挥了较其余组别更优异的缓解大鼠关节肿胀的作用。

图8显示的是各组大鼠的造模足爪（右后足）治疗期间关节炎指数评分的总和。结果显示：（1）经各分组治疗后的大鼠足趾关节炎评分均有不同程度的减小，表明大鼠的肿胀程度得到一定的抑制；（2）经TAC/AuNRs-MN治疗后的大鼠，在治疗期间其足趾关节炎评分总和为40.92±3.2mm，显著小于模型组（55.10±3.4mm）和Blank-MN（49.60±3.8mm）；（3）TAC-MN组（47.00±2.37mm）和含有五倍TAC的软膏组（47.60±2.82mm）无显著性差异，关节炎指数评分的最终结果与足趾厚度的结果相一致。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种光热-化疗联合治疗剂，其特征在于：包括明胶背衬层、以及多个彼此间隔地分布设置于所述明胶背衬层表面的微针，所述微针包括光热剂-载体材料表层、开设于所述光热剂-载体材料表层靠近明胶背衬层的端面上的空穴、以及嵌设于所述空穴内的药物填充层。

2.根据权利要求1所述的一种光热-化疗联合治疗剂，其特征在于：所述微针的纵截面呈凸台形、横截面呈圆形，所述微针的高度为400~600μm、顶端直径为10~15μm、底端直径为120~140μm。

3.根据权利要求2所述的一种光热-化疗联合治疗剂，其特征在于：所述明胶背衬层的面积为0.1~10cm²，且每1cm²面积的所述明胶背衬层上的微针数量为25~49个。

4.根据权利要求1所述的一种光热-化疗联合治疗剂，其特征在于：所述光热剂-载体材料表层的光热剂为纳米金棒、普鲁士蓝纳米粒、氧化铁纳米粒、吲哚菁绿和钯纳米粒中的一种或几种的组合物。

5.根据权利要求1所述的一种光热-化疗联合治疗剂，其特征在于：所述光热剂-载体材料表层的载体材料为硫酸软骨素、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、丝素蛋白、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、透明质酸、聚乙烯吡咯烷酮、壳聚糖、麦芽糖和明胶中的一种或几种的组合物。

6.根据权利要求1所述的一种光热-化疗联合治疗剂，其特征在于：所述药物填充层的药物为非甾体类抗炎药、软骨保护剂、慢作用抗风湿药、细胞毒药物、肾上腺皮质激素和抗生素的一种或几种的组合物。

7.根据权利要求1~6任一所述的一种光热-化疗联合治疗剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，

S1按照所述明胶背衬层和微针的形状和数量定制阴膜，所述阴膜内有相互连通的明胶背衬层腔和微针腔，所述阴模的材质为聚二甲基硅氧烷；

S2先将所述光热剂和载体材料配置成的表层液采用真空法置入所述S1的阴膜的微针腔中，干燥至表层液凝固，再在真空环境中利用负压形成所述空穴，然后采用离心法将所述药物置入所述空穴内，得到微针；

S3将明胶配置成的背衬液采用真空法置入所述S1的阴膜的明胶背衬层腔中，干燥至背衬液凝固，形成明胶背衬层；

S4脱模，得到光热-化疗联合治疗剂。

8.根据权利要求7所述的一种光热-化疗联合治疗剂的制备方法，其特征在于：在所述S2中，控制光热剂和载体材料在表层液中的浓度分别为3~12μg/mL和5~20μg/mL。

9.根据权利要求7所述的一种光热-化疗联合治疗剂的制备方法，其特征在于：控制明胶在背衬液中的浓度为5.0~10.0mg/mL。

10.根据权利要求1~6任一所述的一种光热-化疗联合治疗剂在制备治疗关节炎的药物中的应用。