CN116686703B - 一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，包括以下步骤：（1）父本选择；（2）澳洲坚果父本前处理；（3）父本花粉前处理；（4）铯‑137诱变处理；（5）授粉；（6）收获选品。先选出授粉花朵数、结果率、座果率等数据均远高于对照组的澳洲坚果父本品种，再对澳洲坚果父本进行三段光照控制、水分控制、喷施前处理液，同时对父本花粉进行前处理，可以让花粉提前适应光辐射，增强花粉对铯‑137射线辐照的适应性，降低花粉对铯‑137射线辐照的敏感性，起到增大花粉半致死辐照量的作用，从而促进澳洲坚果花粉辐照诱变，三段光照控制、铯‑137射线辐照等操作相结合，能加快澳洲坚果种子突变速度，提高突变率，获取更多澳洲坚果新品种。
Description
技术领域
本发明涉及农业种植技术领域，具体涉及一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法。
背景技术
澳洲坚果别名:昆士兰栗、澳洲胡桃、夏威夷果、昆士兰果，是一种原产于澳洲的树生坚果。澳洲坚果属常绿乔木，双子叶植物。树冠高大，叶3～4片轮生，披针形、革质，光滑，边缘有刺状锯齿。总状花序腋生，花米黄色，果圆球形，果皮革质，内果皮坚硬，种仁米黄色至浅棕色。适合生长在温和、湿润、风力小的地区。在世界上众多的干果之中，澳洲坚果的经济价值最高，素来享有“干果之王”的誉称。澳洲坚果果仁营养丰富(呈奶白色)，其外果皮青绿色，内果皮坚硬，呈褐色，单果重15-16克，含油量70%左右，蛋白质9%，含有包括人体必需的8种氨基酸在内的17种氨基酸，还富含矿物质和维生素。
澳洲坚果自花授粉容易败育，广西区内种植时，可选择适应广西区内种植的品种：桂热1号、A16、OC、695等进行混种。目前澳洲坚果通常采用杂交育种的方法进行育种，尚未见将杂交育种与铯辐射相结合的育种方式，为此本申请方法先选择出人工授粉结果最佳的父本母本组合，再调整各个杂交育种的条件，得出杂交育种与铯辐射相结合的新型可靠的育种方式。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种杂交育种与铯辐射相结合、诱变效果好的澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，包括以下步骤：
（1）父本选择：以“桂热1号”为母本，其他品种的澳洲坚果为父本，分别进行人工授粉实验，选择授粉效果好，座果率高的品种为澳洲坚果父本；
（2）澳洲坚果父本前处理：
2.1）光照控制：花穗现蕾期前3个月，于夜间进行三段光照控制；
一段光照控制：光照时间控制在3～5h，光照强度控制在15～20Lux，一段光照持续时间：20～30天；
二段光照控制：光照时间控制在6～8h，光照强度控制在25～30Lux，二段光照持续时间：20～30天；
三段光照控制：光照时间控制在4～6h，光照强度控制在40～45Lux，三段光照时间持续至初花期；
2.2）水分控制：花穗现蕾期前2个月，每星期于澳洲坚果父本根部浇水一次，同时整株喷水至父本植株的茎杆叶全部湿润；
2.3）喷施前处理液：分别于花穗现蕾期前10～15日、花穗现蕾期，整株喷前处理液至父本植株的茎杆叶全部湿润；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为45～50g/kg的尿素、浓度为20～25g/kg的硼酸和浓度为10～15g/kg的葡萄糖酸钙；
（3）父本花粉前处理：待步骤2.3）中的父本植株开花，取花粉，得到父本花粉；将步骤2.3）中的所述前处理液稀释50～70倍，得到父本花粉处理液；将父本花粉放入父本花粉处理液中，混合均匀，得到待辐射诱变的花粉；
（4）铯-137诱变处理：用137Cs-γ射线辐照处理待辐射诱变的花粉，辐照剂量率为0.75Gy/min，辐照剂量强度为5～10Gy，得到辐照处理的花粉；
（5）授粉：将辐照处理的花粉进行人工授粉，并疏花疏果；
（6）收获选品：待杂交果实发育成熟，收获杂交果实，并记录杂交果实的形状；播种杂交果实，进一步观察筛选，获得澳洲坚果新品种。
进一步地，所述步骤（1）中澳洲坚果父本的品种为695号。
进一步地，所述步骤2.1）中花穗现蕾期前3个月，于夜间进行三段光照控制；
一段光照控制：光照时间控制在4～5h，光照强度控制在18～20Lux，一段光照持续时间：25～30天；
二段光照控制：光照时间控制在7～8h，光照强度控制在27～30Lux，二段光照持续时间：27～30天；
三段光照控制：光照时间控制在4.5～6h，光照强度控制在42～45Lux，三段光照时间持续至初花期。
进一步地，所述步骤2.1）中三段光照控制中，每日的光照起始时间为晚间20时。
进一步地，所述步骤2.3）中所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为48～50g/kg的尿素、浓度为23～25g/kg的硼酸和浓度为14～15g/kg的葡萄糖酸钙。
进一步地，所述步骤2.3）中所述前处理液中还包括浓度为0.5～0.8㎎/kg的叶酸。
进一步地，所述步骤（3）中所述前处理液稀释65～70倍，得到父本花粉处理液；所述父本花粉处理液的用量为500～600ml/g花粉。
进一步地，所述步骤（4）中用137Cs-γ射线辐照处理待辐射诱变的花粉，辐照剂量率为0.75Gy/min，辐照剂量强度为8～10Gy，得到辐照处理的花粉。
进一步地，所述步骤（5）中杂交果实发育100～120天，喷施杂交果实处理液，至杂交果实的外表面完全湿润，所述杂交果实处理液以水为溶剂，含有浓度为25～30g/100kg的咪鲜胺、浓度为30～35g/kg的硫酸锌、浓度为50～65g/kg的氯化钙、浓度为10～15g/kg的钼酸铵和浓度为5～8g/kg的硫酸锰。
进一步地，所述步骤（5）中杂交果实发育110～120天，喷施杂交果实处理液，至杂交果实的外表面完全湿润，所述杂交果实处理液以水为溶剂，含有浓度为28～30g/100kg的咪鲜胺、浓度为32～35g/kg的硫酸锌、浓度为55～65g/kg的氯化钙、浓度为12～15g/kg的钼酸铵和浓度为6～8g/kg的硫酸锰。
本发明一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，以“桂热1号”为母本，其他品种的澳洲坚果为父本，分别进行人工授粉实验，选择授粉效果好，座果率高的品种为澳洲坚果父本。试验时，先用毛刷收集A16、JW、OC、695 四个品种父本花粉，其次刷下“桂热1号”母本柱头上的原来花粉，最后将各父本花粉用毛刷轻轻刷在母本柱头，授粉结果如下表1所示；
表1
由上表1的授粉实验结果可知，同花授粉基本不结果，桂热1号X695号实验组授粉结果最佳，其授粉花朵数、挂果平均值、结果率、座果率等数据均远高于对照组；由此本发明主要以“桂热1号”为母本、695号为父本进行研究。
本发明的有益效果是：本发明一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，首先选出自然人工授粉条件下，授粉花朵数、挂果平均值、结果率、座果率等数据均远高于对照组的澳洲坚果父本品种，以利于后续人工授粉实验；对澳洲坚果父本进行三段光照控制、水分控制、喷施前处理液，同时对父本花粉进行前处理，可以让花粉提前适应光辐射，增强花粉对铯-137射线辐照的适应性，降低花粉对铯-137射线辐照的敏感性，起到增大花粉半致死辐照量的作用，从而促进澳洲坚果花粉辐照诱变，另外，三段光照控制、铯-137射线辐照、喷施前处理液等操作相结合，也能进一步加快澳洲坚果种子突变速度，提高突变率，从而获取澳洲坚果新品种。
本发明一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，前处理液中还包括叶酸，叶酸可直接被雌花吸收利用，使得雌花授粉效果更佳，座果率更高；喷施杂交果实处理液，杂交果实处理液中的咪鲜胺主要防治果实病害的发生，杂交果实处理液还能为澳洲坚果植株补充锌、钙、钼、锰等元素，能避免连续高温导致的果实、根系、叶片中锌、钙、钼、锰等元素不足，避免提前落果，有益于澳洲坚果新品种的获取。
附图说明
图1为按照本发明方法进行授粉的实验图片；
图2为本发明方法授粉处理获取种子的萌发情况图片；
图3为本发明方法实验获取的种子叶片变异情况图片。
具体实施方式
下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。
实施例1
一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，包括以下步骤：
（1）父本选择：以“桂热1号”为母本，“695号”为父本；授粉地位于广西南宁市；土壤土质为粘质土，耕作层25cm，土壤含有机质1.0% ，土壤pH4.5；
（2）澳洲坚果父本前处理：
2.1）光照控制：花穗现蕾期前3个月，于夜间进行三段光照控制，每日的光照起始时间为晚间20时；
一段光照控制：光照时间控制在3h，光照强度控制在15Lux，一段光照持续时间：20天；
二段光照控制：光照时间控制在6h，光照强度控制在25Lux，二段光照持续时间：20天；
三段光照控制：光照时间控制在4h，光照强度控制在40Lux，三段光照时间持续至初花期；
2.2）水分控制：花穗现蕾期前2个月，每星期于澳洲坚果父本根部浇水一次，同时整株喷水至父本植株的茎杆叶全部湿润；
2.3）喷施前处理液：分别于花穗现蕾期前10日、花穗现蕾期，整株喷前处理液至父本植株的茎杆叶全部湿润；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为45g/kg的尿素、浓度为20g/kg的硼酸、浓度为10g/kg的葡萄糖酸钙、浓度为0.5㎎/kg的叶酸；
（3）父本花粉前处理：待步骤2.3）中的父本植株开花，用毛刷收集花粉，得到父本花粉；将步骤2.3）中的所述前处理液稀释50倍，得到父本花粉处理液；将父本花粉、父本花粉处理液一同放入指形管中，每克花粉中父本花粉处理液的用量为500ml，于指形管混合均匀，得到待辐射诱变的花粉；
（4）铯-137诱变处理：用137Cs-γ射线辐照处理待辐射诱变的花粉，辐照剂量率为0.75Gy/min，辐照剂量强度为5Gy，得到辐照处理的花粉；
（5）授粉：对母本花朵进行人工去雄，将辐照处理的花粉进行人工授粉，标号，并疏花疏果，期间对母本植株进行田间管理，及时防治病虫害，保证水分和肥力充足，保证杂交果正常发育成熟；杂交果实发育100天，喷施杂交果实处理液，至杂交果实的外表面完全湿润，所述杂交果实处理液以水为溶剂，含有浓度为25g/100kg的咪鲜胺、浓度为30g/kg的硫酸锌、浓度为50g/kg的氯化钙、浓度为10g/kg的钼酸铵和浓度为5g/kg的硫酸锰；
（6）收获选品：待杂交果实发育成熟，收获杂交果实，并记录杂交果实的形状；播种杂交果实，进一步观察筛选，获得澳洲坚果新品种。
实施例2
一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，包括以下步骤：
（1）父本选择：以“桂热1号”为母本，“695号”为父本；授粉地位于广西南宁市；土壤土质为粘质土，耕作层25cm，土壤含有机质1.0% ，土壤pH4.5；
（2）澳洲坚果父本前处理：
2.1）光照控制：花穗现蕾期前3个月，于夜间进行三段光照控制，每日的光照起始时间为晚间20时；
一段光照控制：光照时间控制在5h，光照强度控制在20Lux，一段光照持续时间：30天；
二段光照控制：光照时间控制在8h，光照强度控制在30Lux，二段光照持续时间：30天；
三段光照控制：光照时间控制在6h，光照强度控制在45Lux，三段光照时间持续至初花期；
2.2）水分控制：花穗现蕾期前2个月，每星期于澳洲坚果父本根部浇水一次，同时整株喷水至父本植株的茎杆叶全部湿润；
2.3）喷施前处理液：分别于花穗现蕾期前15日、花穗现蕾期，整株喷前处理液至父本植株的茎杆叶全部湿润；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为50g/kg的尿素、浓度为25g/kg的硼酸、浓度为15g/kg的葡萄糖酸钙、浓度为0.8㎎/kg的叶酸；
（3）父本花粉前处理：待步骤2.3）中的父本植株开花，用毛刷收集花粉，得到父本花粉；将步骤2.3）中的所述前处理液稀释70倍，得到父本花粉处理液；将父本花粉、父本花粉处理液一同放入指形管中，每克花粉中父本花粉处理液的用量为600ml，于指形管混合均匀，得到待辐射诱变的花粉；
（4）铯-137诱变处理：用137Cs-γ射线辐照处理待辐射诱变的花粉，辐照剂量率为0.75Gy/min，辐照剂量强度为10Gy，得到辐照处理的花粉；
（5）授粉：对母本花朵进行人工去雄，将辐照处理的花粉进行人工授粉，标号，并疏花疏果，期间对母本植株进行田间管理，及时防治病虫害，保证水分和肥力充足，保证杂交果正常发育成熟；杂交果实发育120天，喷施杂交果实处理液，至杂交果实的外表面完全湿润，所述杂交果实处理液以水为溶剂，含有浓度为30g/100kg的咪鲜胺、浓度为35g/kg的硫酸锌、浓度为65g/kg的氯化钙、浓度为15g/kg的钼酸铵和浓度为8g/kg的硫酸锰；
（6）收获选品：待杂交果实发育成熟，收获杂交果实，并记录杂交果实的形状；播种杂交果实，进一步观察筛选，获得澳洲坚果新品种。
实施例3
一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，包括以下步骤：
（1）父本选择：以“桂热1号”为母本，“695号”为父本；授粉地位于广西南宁市；土壤土质为粘质土，耕作层25cm，土壤含有机质1.0% ，土壤pH4.5；
（2）澳洲坚果父本前处理：
2.1）光照控制：花穗现蕾期前3个月，于夜间进行三段光照控制，每日的光照起始时间为晚间20时；
一段光照控制：光照时间控制在4h，光照强度控制在18Lux，一段光照持续时间：25天；
二段光照控制：光照时间控制在7h，光照强度控制在27Lux，二段光照持续时间：27天；
三段光照控制：光照时间控制在4.5h，光照强度控制在42Lux，三段光照时间持续至初花期；
2.2）水分控制：花穗现蕾期前2个月，每星期于澳洲坚果父本根部浇水一次，同时整株喷水至父本植株的茎杆叶全部湿润；
2.3）喷施前处理液：分别于花穗现蕾期前12日、花穗现蕾期，整株喷前处理液至父本植株的茎杆叶全部湿润；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为48g/kg的尿素、浓度为23g/kg的硼酸、浓度为14g/kg的葡萄糖酸钙、浓度为0.6㎎/kg的叶酸；
（3）父本花粉前处理：待步骤2.3）中的父本植株开花，用毛刷收集花粉，得到父本花粉；将步骤2.3）中的所述前处理液稀释60倍，得到父本花粉处理液；将父本花粉、父本花粉处理液一同放入指形管中，每克花粉中父本花粉处理液的用量为550ml，于指形管混合均匀，得到待辐射诱变的花粉；
（4）铯-137诱变处理：用137Cs-γ射线辐照处理待辐射诱变的花粉，辐照剂量率为0.75Gy/min，辐照剂量强度为8Gy，得到辐照处理的花粉；
（5）授粉：对母本花朵进行人工去雄，将辐照处理的花粉进行人工授粉，标号，并疏花疏果，期间对母本植株进行田间管理，及时防治病虫害，保证水分和肥力充足，保证杂交果正常发育成熟；杂交果实发育110天，喷施杂交果实处理液，至杂交果实的外表面完全湿润，所述杂交果实处理液以水为溶剂，含有浓度为28g/100kg的咪鲜胺、浓度为32g/kg的硫酸锌、浓度为55g/kg的氯化钙、浓度为12g/kg的钼酸铵和浓度为6g/kg的硫酸锰；
（6）收获选品：待杂交果实发育成熟，收获杂交果实，并记录杂交果实的形状；播种杂交果实，进一步观察筛选，获得澳洲坚果新品种。
实施例4
一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，包括以下步骤：
（1）父本选择：以“桂热1号”为母本，“695号”为父本；授粉地位于广西南宁市；土壤土质为粘质土，耕作层25cm，土壤含有机质1.0% ，土壤pH4.5；
（2）澳洲坚果父本前处理：
2.1）光照控制：花穗现蕾期前3个月，于夜间进行三段光照控制，每日的光照起始时间为晚间20时；
一段光照控制：光照时间控制在4h，光照强度控制在18Lux，一段光照持续时间：25天；
二段光照控制：光照时间控制在7h，光照强度控制在27Lux，二段光照持续时间：27天；
三段光照控制：光照时间控制在4.5h，光照强度控制在42Lux，三段光照时间持续至初花期；
2.2）水分控制：花穗现蕾期前2个月，每星期于澳洲坚果父本根部浇水一次，同时整株喷水至父本植株的茎杆叶全部湿润；
2.3）喷施前处理液：分别于花穗现蕾期前12日、花穗现蕾期，整株喷前处理液至父本植株的茎杆叶全部湿润；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为48g/kg的尿素、浓度为23g/kg的硼酸、浓度为14g/kg的葡萄糖酸钙；
（3）父本花粉前处理：待步骤2.3）中的父本植株开花，用毛刷收集花粉，得到父本花粉；将步骤2.3）中的所述前处理液稀释60倍，得到父本花粉处理液；将父本花粉、父本花粉处理液一同放入指形管中，每克花粉中父本花粉处理液的用量为550ml，于指形管混合均匀，得到待辐射诱变的花粉；
（4）铯-137诱变处理：用137Cs-γ射线辐照处理待辐射诱变的花粉，辐照剂量率为0.75Gy/min，辐照剂量强度为8Gy，得到辐照处理的花粉；
（5）授粉：对母本花朵进行人工去雄，将辐照处理的花粉进行人工授粉，标号，并疏花疏果，期间对母本植株进行田间管理，及时防治病虫害，保证水分和肥力充足，保证杂交果正常发育成熟；杂交果实发育110天，喷施杂交果实处理液，至杂交果实的外表面完全湿润，所述杂交果实处理液以水为溶剂，含有浓度为28g/100kg的咪鲜胺、浓度为32g/kg的硫酸锌、浓度为55g/kg的氯化钙、浓度为12g/kg的钼酸铵和浓度为6g/kg的硫酸锰；
（6）收获选品：待杂交果实发育成熟，收获杂交果实，并记录杂交果实的形状；播种杂交果实，进一步观察筛选，获得澳洲坚果新品种。
实施例5
一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，包括以下步骤：
（1）父本选择：以“桂热1号”为母本，“695号”为父本；授粉地位于广西南宁市；土壤土质为粘质土，耕作层25cm，土壤含有机质1.0% ，土壤pH4.5；
（2）澳洲坚果父本前处理：
2.1）光照控制：花穗现蕾期前3个月，于夜间进行三段光照控制，每日的光照起始时间为晚间20时；
一段光照控制：光照时间控制在4h，光照强度控制在18Lux，一段光照持续时间：25天；
二段光照控制：光照时间控制在7h，光照强度控制在27Lux，二段光照持续时间：27天；
三段光照控制：光照时间控制在4.5h，光照强度控制在42Lux，三段光照时间持续至初花期；
2.2）水分控制：花穗现蕾期前2个月，每星期于澳洲坚果父本根部浇水一次，同时整株喷水至父本植株的茎杆叶全部湿润；
2.3）喷施前处理液：分别于花穗现蕾期前12日、花穗现蕾期，整株喷前处理液至父本植株的茎杆叶全部湿润；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为48g/kg的尿素、浓度为23g/kg的硼酸、浓度为14g/kg的葡萄糖酸钙、浓度为0.6㎎/kg的叶酸；
（3）父本花粉前处理：待步骤2.3）中的父本植株开花，用毛刷收集花粉，得到父本花粉；将步骤2.3）中的所述前处理液稀释60倍，得到父本花粉处理液；将父本花粉、父本花粉处理液一同放入指形管中，每克花粉中父本花粉处理液的用量为550ml，于指形管混合均匀，得到待辐射诱变的花粉；
（4）铯-137诱变处理：用137Cs-γ射线辐照处理待辐射诱变的花粉，辐照剂量率为0.75Gy/min，辐照剂量强度为8Gy，得到辐照处理的花粉；
（5）授粉：对母本花朵进行人工去雄，将辐照处理的花粉进行人工授粉，标号，并疏花疏果，期间对母本植株进行田间管理，及时防治病虫害，保证水分和肥力充足，保证杂交果正常发育成熟；
（6）收获选品：待杂交果实发育成熟，收获杂交果实，并记录杂交果实的形状；播种杂交果实，进一步观察筛选，获得澳洲坚果新品种。
对比例1
一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，包括以下步骤：
（1）父本选择：以“桂热1号”为母本，“695号”为父本；授粉地位于广西南宁市；土壤土质为粘质土，耕作层25cm，土壤含有机质1.0% ，土壤pH4.5；
（2）澳洲坚果父本前处理：
2.1）水分控制：花穗现蕾期前2个月，每星期于澳洲坚果父本根部浇水一次，同时整株喷水至父本植株的茎杆叶全部湿润；
2.2）喷施前处理液：分别于花穗现蕾期前12日、花穗现蕾期，整株喷前处理液至父本植株的茎杆叶全部湿润；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为48g/kg的尿素、浓度为23g/kg的硼酸、浓度为14g/kg的葡萄糖酸钙、浓度为0.6㎎/kg的叶酸；
（3）父本花粉前处理：待步骤2.2）中的父本植株开花，用毛刷收集花粉，得到父本花粉；将步骤2.2）中的所述前处理液稀释60倍，得到父本花粉处理液；将父本花粉、父本花粉处理液一同放入指形管中，每克花粉中父本花粉处理液的用量为550ml，于指形管混合均匀，得到待辐射诱变的花粉；
（4）铯-137诱变处理：用137Cs-γ射线辐照处理待辐射诱变的花粉，辐照剂量率为0.75Gy/min，辐照剂量强度为8Gy，得到辐照处理的花粉；
（5）授粉：对母本花朵进行人工去雄，将辐照处理的花粉进行人工授粉，标号，并疏花疏果，期间对母本植株进行田间管理，及时防治病虫害，保证水分和肥力充足，保证杂交果正常发育成熟；杂交果实发育110天，喷施杂交果实处理液，至杂交果实的外表面完全湿润，所述杂交果实处理液以水为溶剂，含有浓度为28g/100kg的咪鲜胺、浓度为32g/kg的硫酸锌、浓度为55g/kg的氯化钙、浓度为12g/kg的钼酸铵和浓度为6g/kg的硫酸锰；
（6）收获选品：待杂交果实发育成熟，收获杂交果实，并记录杂交果实的形状；播种杂交果实，进一步观察筛选，获得澳洲坚果新品种。
对比例2
一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，包括以下步骤：
（1）父本选择：以“桂热1号”为母本，“695号”为父本；授粉地位于广西南宁市；土壤土质为粘质土，耕作层25cm，土壤含有机质1.0% ，土壤pH4.5；
（2）澳洲坚果父本前处理：
2.1）光照控制：花穗现蕾期前3个月，于夜间进行三段光照控制，每日的光照起始时间为晚间20时；
一段光照控制：光照时间控制在4h，光照强度控制在18Lux，一段光照持续时间：25天；
二段光照控制：光照时间控制在7h，光照强度控制在27Lux，二段光照持续时间：27天；
三段光照控制：光照时间控制在4.5h，光照强度控制在42Lux，三段光照时间持续至初花期；
2.2）水分控制：花穗现蕾期前2个月，每星期于澳洲坚果父本根部浇水一次，同时整株喷水至父本植株的茎杆叶全部湿润；
（3）父本花粉前处理：待父本植株开花，用毛刷收集花粉，得到父本花粉；将父本花粉放入指形管中，得到待辐射诱变的花粉；
（4）铯-137诱变处理：用137Cs-γ射线辐照处理待辐射诱变的花粉，辐照剂量率为0.75Gy/min，辐照剂量强度为8Gy，得到辐照处理的花粉；
（5）授粉：对母本花朵进行人工去雄，将辐照处理的花粉进行人工授粉，标号，并疏花疏果，期间对母本植株进行田间管理，及时防治病虫害，保证水分和肥力充足，保证杂交果正常发育成熟；杂交果实发育110天，喷施杂交果实处理液，至杂交果实的外表面完全湿润，所述杂交果实处理液以水为溶剂，含有浓度为28g/100kg的咪鲜胺、浓度为32g/kg的硫酸锌、浓度为55g/kg的氯化钙、浓度为12g/kg的钼酸铵和浓度为6g/kg的硫酸锰；
（6）收获选品：待杂交果实发育成熟，收获杂交果实，并记录杂交果实的形状；播种杂交果实，进一步观察筛选，获得澳洲坚果新品种。
对比例3
一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，包括以下步骤：
（1）父本选择：以“桂热1号”为母本，“695号”为父本；授粉地位于广西南宁市；土壤土质为粘质土，耕作层25cm，土壤含有机质1.0% ，土壤pH4.5；
（2）父本花粉前处理：待父本植株开花，用毛刷收集花粉，得到父本花粉；将父本花粉放入指形管中，得到待辐射诱变的花粉；
（3）铯-137诱变处理：用137Cs-γ射线辐照处理待辐射诱变的花粉，辐照剂量率为0.75Gy/min，辐照剂量强度为8Gy，得到辐照处理的花粉；
（4）授粉：对母本花朵进行人工去雄，将辐照处理的花粉进行人工授粉，标号，并疏花疏果，期间对母本植株进行田间管理，及时防治病虫害，保证水分和肥力充足，保证杂交果正常发育成熟；杂交果实发育110天，喷施杂交果实处理液，至杂交果实的外表面完全湿润，所述杂交果实处理液以水为溶剂，含有浓度为28g/100kg的咪鲜胺、浓度为32g/kg的硫酸锌、浓度为55g/kg的氯化钙、浓度为12g/kg的钼酸铵和浓度为6g/kg的硫酸锰；
（5）收获选品：待杂交果实发育成熟，收获杂交果实，并记录杂交果实的形状；播种杂交果实，进一步观察筛选，获得澳洲坚果新品种。
实施例1-5及对比例1-3中的杂交育种实验结果如下表2所示：
表2
对实施例1-5及对比例1-3处理得到的杂交果实进行选品实验：
一、发芽试验：
1）将种子放到催芽床上，覆盖薄土，每日淋水，等待种子发芽，计算发芽率，发芽率（%）=（正常发芽数/实验种子数）x100%；
2）5周左右，种子出芽齐整之后，选择阴天进行幼苗的移植，将幼苗移植到18cm*18cm的育苗杯中，在移植苗的上方覆盖遮阳网；育苗杯中的营养土的配方为按体积比为5:1:2:1的比例混合的土、有机肥、腐熟猪粪、河沙；
3）对幼苗的形态进行观察，观察时间为2月至12月的实生苗，观察特殊性状，特殊性状具体为植株枝干颜色变异、叶片畸形、幼树树形变异，统计特殊性状的数据，计算畸变率；
下表1给出实施例1-5及对比例1-3中的杂交果实取种后种子的发芽率结果及选品结果统计如下表3所示；
表3
由上述实验结果可知，本发明一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，首先选出自然人工授粉条件下，授粉花朵数、挂果平均值、结果率、座果率等数据均远高于对照组的澳洲坚果父本品种，以利于后续人工授粉实验；对澳洲坚果父本进行三段光照控制、水分控制、喷施前处理液，同时对父本花粉进行前处理，可以让花粉提前适应光辐射，增强花粉对铯-137射线辐照的适应性，降低花粉对铯-137射线辐照的敏感性，起到增大花粉半致死辐照量的作用，从而促进澳洲坚果花粉辐照诱变，另外，三段光照控制、铯-137射线辐照、喷施前处理液等操作相结合，也能进一步加快澳洲坚果种子突变速度，提高突变率，从而获取澳洲坚果新品种；前处理液中还包括叶酸，叶酸可直接被雌花吸收利用，使得雌花授粉效果更佳，座果率更高；喷施杂交果实处理液，杂交果实处理液中的咪鲜胺主要防治果实病害的发生，杂交果实处理液还能为澳洲坚果植株补充锌、钙、钼、锰等元素，能避免连续高温导致的果实、根系、叶片中锌、钙、钼、锰等元素不足，避免提前落果，有益于澳洲坚果新品种的获取。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）父本选择：以“桂热1号”为母本，其他品种的澳洲坚果为父本，分别进行人工授粉实验，选择授粉效果好，座果率高的品种为澳洲坚果父本；
（2）澳洲坚果父本前处理：
2.1）光照控制：花穗现蕾期前3个月，于夜间进行三段光照控制；
一段光照控制：光照时间控制在3～5h，光照强度控制在15～20Lux，一段光照持续时间：20～30天；
二段光照控制：光照时间控制在6～8h，光照强度控制在25～30Lux，二段光照持续时间：20～30天；
三段光照控制：光照时间控制在4～6h，光照强度控制在40～45Lux，三段光照时间持续至初花期；
2.2）水分控制：花穗现蕾期前2个月，每星期于澳洲坚果父本根部浇水一次，同时整株喷水至父本植株的茎杆叶全部湿润；
2.3）喷施前处理液：分别于花穗现蕾期前10～15日、花穗现蕾期，整株喷前处理液至父本植株的茎杆叶全部湿润；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为45～50g/kg的尿素、浓度为20～25g/kg的硼酸和浓度为10～15g/kg的葡萄糖酸钙；
（3）父本花粉前处理：待步骤2.3）中的父本植株开花，取花粉，得到父本花粉；将步骤2.3）中的所述前处理液稀释50～70倍，得到父本花粉处理液；将父本花粉放入父本花粉处理液中，混合均匀，得到待辐射诱变的花粉；
（4）铯-137诱变处理：用137Cs-γ射线辐照处理待辐射诱变的花粉，辐照剂量率为0.75Gy/min，辐照剂量强度为5～10Gy，得到辐照处理的花粉；
（5）授粉：将辐照处理的花粉进行人工授粉，并疏花疏果；
（6）收获选品：待杂交果实发育成熟，收获杂交果实，并记录杂交果实的形状；播种杂交果实，进一步观察筛选，获得澳洲坚果新品种。
2.根据权利要求1所述的一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，其特征在于，所述步骤（1）中澳洲坚果父本的品种为695号。
3.根据权利要求1所述的一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，其特征在于，所述步骤2.1）中花穗现蕾期前3个月，于夜间进行三段光照控制；
一段光照控制：光照时间控制在4～5h，光照强度控制在18～20Lux，一段光照持续时间：25～30天；
二段光照控制：光照时间控制在7～8h，光照强度控制在27～30Lux，二段光照持续时间：27～30天；
三段光照控制：光照时间控制在4.5～6h，光照强度控制在42～45Lux，三段光照时间持续至初花期。
4.根据权利要求1所述的一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，其特征在于，所述步骤2.1）中三段光照控制中，每日的光照起始时间为晚间20时。
5.根据权利要求1所述的一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，其特征在于，所述步骤2.3）中所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为48～50g/kg的尿素、浓度为23～25g/kg的硼酸和浓度为14～15g/kg的葡萄糖酸钙。
6.根据权利要求1所述的一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，其特征在于，所述步骤2.3）中所述前处理液中还包括浓度为0.5～0.8mg/kg的叶酸。
7.根据权利要求1所述的一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，其特征在于，所述步骤（3）中所述前处理液稀释65～70倍，得到父本花粉处理液；所述父本花粉处理液的用量为500～600ml/g花粉。
8.根据权利要求1所述的一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，其特征在于，所述步骤（4）中用137Cs-γ射线辐照处理待辐射诱变的花粉，辐照剂量率为0.75Gy/min，辐照剂量强度为8～10Gy，得到辐照处理的花粉。
9.根据权利要求1所述的一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，其特征在于，所述步骤（5）中杂交果实发育100～120天，喷施杂交果实处理液，至杂交果实的外表面完全湿润，所述杂交果实处理液以水为溶剂，含有浓度为25～30g/100kg的咪鲜胺、浓度为30～35g/kg的硫酸锌、浓度为50～65g/kg的氯化钙、浓度为10～15g/kg的钼酸铵和浓度为5～8g/kg的硫酸锰。
10.根据权利要求9所述的一种澳洲坚果杂交与铯辐射创制新种质的方法，其特征在于，所述步骤（5）中杂交果实发育110～120天，喷施杂交果实处理液，至杂交果实的外表面完全湿润，所述杂交果实处理液以水为溶剂，含有浓度为28～30g/100kg的咪鲜胺、浓度为32～35g/kg的硫酸锌、浓度为55～65g/kg的氯化钙、浓度为12～15g/kg的钼酸铵和浓度为6～8g/kg的硫酸锰。
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