CN116685327A - 用于治疗胰腺炎、胶质母细胞瘤、肌肉减少症和中风的孤儿核受体调节剂 - Google Patents

Abstract

用于调节视黄酸受体样孤儿受体(ROR)的化合物、组合物和方法，以增加FGF21水平，以及治疗和预防与FGF21相关的病症，例如胰腺炎、肌肉减少症、中风和创伤性脑损伤，并增加miR‑122水平，以及治疗和预防病症，例如胶质母细胞瘤。

Description

用于治疗胰腺炎、胶质母细胞瘤、肌肉减少症和中风的孤儿核 受体调节剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年10月30日提交的题为“用于治疗胰腺炎、胶质母细胞瘤、肌肉减少症、中风和创伤性脑损伤的孤儿核受体调节剂”的美国临时专利申请号63/108,054的第8条PCT下的优先权权益。上述申请的内容通过引用的方式并入本文，如同在本文完全阐述了其全部内容。

技术领域

本申请涉及视黄酸受体相关孤儿受体(ROR)如RORα、RORβ或RORγ的小分子调节剂，用于治疗与FGF21和/或miR122相关的病症如胰腺炎、肌肉减少症、中风、胶质母细胞瘤和创伤性脑损伤。

背景技术

胰腺炎是胃肠道最常见和最使人虚弱的疾病之一，导致相当高的发病率和死亡率。胰腺炎是由胰腺本身的消化酶过早激活引起的，这会导致组织损伤和炎症。胰腺炎的常见原因包括酗酒和胆结石。大约三分之一的人类胰腺炎病例是由酒精引起的，其发病率最高。5-10％接受内窥镜逆行胰胆管造影术(ERCP)的患者也会发生胰腺炎，ERCP是一种用于检查胰腺和胆管以及胆囊的手术。

对于这种严重的临床疾病，没有特定的疗法。胰腺炎的治疗通常是支持性的。因此，迫切需要新的疗法。

胰腺炎始于胰腺中消化酶的激活，这导致组织损伤和炎症。胰腺炎的常见原因包括酗酒、高脂血症和胆结石移出胆道系统。胰腺炎也是医源性的，在5-10％接受内窥镜逆行胰胆管造影术(ERCP)的患者中发生。总的来说，胰腺炎是一种未得到满足的治疗需求。

胰腺炎是一种成纤维细胞生长因子21(FGF21)缺乏的状态，可以通过增加FGF21水平来纠正。胰腺炎和FGF21之间的关系讨论如下。

成纤维细胞生长因子21(FGF21)是一种由肝脏分泌的激素，以响应各种代谢应激，包括饥饿和酒精或单糖的消耗。FGF21作用于一种异聚体细胞表面受体复合物，该复合物由一种传统的FGF受体FGFR1c和一种专性协同受体β-klotho(7–9)组成。FGF21也在外分泌胰腺中高度表达，在那里它以自分泌/旁分泌的方式直接作用于腺泡细胞，以刺激消化酶的分泌。这可以防止蛋白质超载，缓解内质网(ER)压力。缺乏FGF21的小鼠对胆囊收缩素(CCK)类似物天蓝色素诱导的胰腺炎特别敏感。相反，FGF21的基因过表达在该模型中提供了保护。同样，预防性施用FGF21可减少l-精氨酸诱导的慢性胰腺炎小鼠模型中的纤维发生。

外分泌胰腺在体内表达最高浓度的FGF21，以此维持腺泡细胞蛋白质稳态。正如在小鼠和人类模型中所显示的，由于整合应激反应(ISR)途径的激活，急性和慢性胰腺炎与FGF21表达的缺失相关。从机制上讲，培养的腺泡细胞和小鼠胰腺中ISR的激活诱导ATF3的表达(一种转录抑制因子)直接结合Fgf21启动子上的特定位点，导致FGF21表达的丧失。这些ATF3结合位点在人FGF21启动子中是保守的。

与小鼠研究一致，在人类胰腺炎患者的胰腺中观察到ATF3和FGF21的相互表达。FGF21的药物替代减轻了ISR并解决了胰腺炎。同样，用PKR样内质网激酶(PERK)抑制剂抑制ISR也恢复了FGF21的表达并减轻了胰腺炎。这些发现强调了FGF21在保护胰腺外分泌功能中的重要性。

血清FGF21水平与肌肉减少症呈正相关(参见Tezze等人.Age-associated lossof OPA1 in muscle impacts muscle mass,metabolic homeostasis,systemicinflammation,and Epithelial Senescence.Cell Metab 2017；25:1374–1389e6)。

FGF21还具有治疗创伤性脑损伤和中风的作用(参见，例如，Jiang等人,“AbstractWMP81:FGF21 Reduces Post-Stroke Blood Brain Barrier Damage in Diabetic db/dbMale Mice,”Stroke,Vol 51,Issue Suppl_1(2020年2月))。Jiang公开了重组人成纤维细胞生长因子21(rFGF21)通过脑微血管内皮的PPARγ激活来保护中风后BBB损伤。另见Chen等人,“FGF21 Protects the Blood–Brain Barrier by Upregulating PPARγvia FGFR1/β-klotho after Traumatic Brain Injury,”Journal of Neurotrauma,Vol.35,No.17(2018))。

血脑屏障(BBB)破坏和功能障碍导致脑水肿，这是造成严重创伤性脑损伤(TBI)后半数以上死亡的原因。Chen公开了成纤维细胞生长因子21(FGF21)在大脑中具有潜在的神经保护功能。在用肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)建立的TBI小鼠模型和体外BBB破坏模型中，研究了重组人FGF21(rhFGF21)对BBB完整性以及紧密连接(TJ)和粘附连接(AJ)蛋白的影响。通过体外β-klotho小干扰RNA(siRNA)转染和FGFR1免疫共沉淀，证实了rhFGF21形成FGF21/FGFR1/β-klotho复合物的能力。在TBI后的小鼠模型中，rhFGF21显著降低神经功能行为缺陷和脑水肿程度，保持BBB的完整性，并减少脑组织丢失和神经元细胞凋亡。在体内和体外，rhFGF21上调TJ和AJ蛋白，从而保护BBB。此外，rhFGF21通过形成FGF21/FGFR1/β-klotho复合物激活TNF-α诱导的HBMECs中的PPARγ。rhFGF21通过FGF21/FGFR1/β-klotho复合物的形成和PPARγ的激活，上调TJ和AJ蛋白，从而保护BBB。因此，FGF21可用于治疗创伤性脑损伤和由BBB破坏、脑脓肿、体外疾病、HIV脑炎、脑膜炎、多发性硬化症和视神经脊髓炎引起的其他疾病。

FGF21通过注射施用，因此出于患者依从性的原因，提供可口服施用以治疗或预防胰腺炎、肌肉减少症、中风、胶质母细胞瘤或创伤性脑损伤，或降低对这些病症的易感性、降低其严重性或延缓其进展的化合物将是有利的。本发明提供了这样的化合物，以及使用该化合物的方法。

发明内容

在一个实施方案中，公开了RORα激动剂化合物、包含这些化合物的组合物以及用于治疗或预防胰腺炎、肌肉减少症、中风、胶质母细胞瘤、创伤性脑损伤或降低这些病症的易感性、降低其严重性或延缓其进展的方法。在其他实施方案中，所述化合物用于与FGF21缺乏相关的其他病症，或者可以受益于高于正常的FGF21水平和/或miR122的其他病症。

成纤维细胞生长因子21(FGF21)是一种由肝脏分泌的激素，对各种代谢应激作出响应。FGF21在外分泌胰腺中表达，以刺激消化酶分泌。FGF21敲除(KO)小鼠特别容易患胰腺炎。FGF21的过表达提供了避免胰腺炎的保护。预防性施用FGF21减少胰腺炎小鼠模型中的纤维发生。FGF21的丢失是胰腺炎的驱动因素。使用FGF21治疗性逆转先前存在的胰腺炎。

由于本文所述的RORα激动剂增加内源性FGF21的表达，因此RORα激动剂可用于治疗、预防胰腺炎、降低其易感性、减轻其严重性或延缓其进展。

在该实施方案的一些方面，提供了以增加受试者内源性FGF21水平的方式调节受试者ROR生物活性的方法。增加FGF21水平治疗、预防、降低对FGF21缺乏相关病症的易感性、降低其严重性或延缓其进展，所述病症例如胰腺炎或肌肉减少症，并且还提供神经保护作用以帮助患有中风、创伤性脑损伤等的患者。

在该实施方案的其他方面，提供了以增加受试者内源性miR122水平的方式调节受试者ROR生物活性的方法。增加miR122水平治疗、预防、降低对miR122相关病症的易感性、降低其严重性或延缓其进展，所述病症例如涉及脂滴形成的病症，例如成胶质母细胞瘤等。

该方法包括使ROR与有效量的如下所示的通式(A)化合物接触，其中该化合物是RORA(本文也称为RORα)的激动剂或活化剂。

在另一个实施方案中，该化合物具有以下通式:

及其药学上可接受的盐和前药，其中R²和u如本文别处关于通式A的定义。

一种代表性化合物具有以下通式:

及其药学上可接受的盐和前药，其中R²和u如本文别处关于通式A的定义。

在另一个实施方案中，所述化合物是苯并二氮杂卓，其以相对高的亲和力与RORA受体结合，是RORA受体的激动剂，并且不穿过血脑屏障和/或不以高的亲和力与GABA受体(如GABA-A受体)结合。在该实施方案中，该化合物可用于治疗多种病症，包括与FGF21相关的胰腺炎和肌肉减少症。

在另一个实施方案中，所述化合物是苯并二氮杂卓，其以相对高的亲和力与RORA受体结合，是RORA受体的激动剂，并且确实穿过血脑屏障，但不以高的亲和力与GABA受体(如GABA-A受体)结合。在该实施方案中，该化合物可用于治疗多种与FGF21相关的神经失调，包括中风和创伤性脑损伤。

在一些实施方案中，苯并二氮杂卓替代用于治疗脂肪性肝病，例如NASH，以及由脂肪性肝病进展引起的肝硬化。

本文所述的化合物可以是立体异构体、多晶型物、盐形式和前药形式。

在各种实施方案中，提供了含有通式(A)-(H)的有效化合物的药物组合物和制剂，以治疗、预防与FGF21缺乏相关的病症，如胰腺炎、肌肉减少症、中风和创伤性脑损伤，降低其易感性，降低其严重性，或延缓其进展。该组合物可以包括通式(A)-(H)的化合物和药学上可接受的载体或赋形剂，并且可以任选地包括一种或多种额外的活性剂。

在各种实施方案中，提供了含有通式(B)-(H)的有效化合物的药物组合物和制剂，以治疗、预防与FGF21缺乏相关的病症，如胰腺炎、肌肉减少症、中风和创伤性脑损伤，降低其易感性，降低其严重性，或延缓其进展。该组合物可以包括通式(B)-(H)的化合物和药学上可接受的载体或赋形剂，并且可以任选地包括一种或多种额外的活性剂。具体列出的通式A的R¹变量也可用于通式(B)-(H)中的任何一个。

参考以下详细描述，将更好地理解本发明。

附图说明

图1是显示化合物1如何诱导具有WT RORE的RORα调节的荧光素酶的表达，但是当RORE突变时不具有活性的图。数据以相对萤光素酶活性对浓度的形式表示，误差线＝SD。与DMSO相比*P<0.05。

图2是显示化合物1如何特异性增加来自Huh-7细胞的miR-122分泌的图，以Huh7培养基中相对DMSO对照和化合物1(1μM)的相对microRNA水平的形式表示。数据以误差线＝SD表示。**P<0.01。

图3A-B是显示化合物1如何调节人外周单核细胞(PBMC)中的Th17群体的图。图3A显示了如何通过LIVE/DEAD可固定的水溶性死细胞染色来确定CD4+T细胞的活力，以在整个CD4+Th17细胞群体中的％活力表示。图3B显示了通过在CD3+/CD4+/CD45RA-/CXCR3-/CCR4+CXCR5-/CCR6+细胞上门控确定的CD4+Th17的总百分比组成(以％Th17细胞表示)。这些结果表明，化合物1在刺激条件下选择性降低了CD4+Th17群体。

图4A-E是显示化合物1如何增加小鼠(n＝3)中RORα靶基因表达–miR-122和Gpase6的图。图4A显示了在7天内测得的miR-122水平的血浆水平，而图4B显示了其肝脏水平。图4C显示了在7天内测量miR-122和RORα靶基因(分别为Aldoa和Gpase6)和miR-122前体的mRNA水平。数据显示，分泌的miR-122进入周围组织。图4D和4E显示了在7天内测量骨骼肌(4D)和白色脂肪组织(“WAT”)(4E)中的miR-122水平。数据显示，用化合物1处理后，miR-18和miR-126不受影响。数据以误差线＝SD表示。相比于生理盐水，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。白色柱为对照(生理盐水)，红色柱为第1天的结果，粉红色柱为第3天的结果，紫色柱为第7天的结果。

图5A-C是显示在高脂喂养的C57BL/6小鼠中，化合物1(Cmpd1)治疗降低体重并通过miR-l22活性增加能量消耗的图。图5A显示了治疗3周之前(蓝色)和之后(红色)的体重(g)变化。图5B显示了在最终时间点血浆中相对miR-l22水平的qRT-PCR分析。图5C是显示治疗3周后β-羟基丁酸酯血浆水平(以nM计)的比色定量的图。图5D是通过肝脏切片的H&E染色可视化的代表性脂质蓄积的照片。N＝5。数据以误差线＝SD表示。*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。

图6A-B是显示在Sgp130FC小鼠(n＝3)中施用化合物1增加miR-122表达并降低肝脏和肌肉甘油三酯水平的图。向Sgp130FC小鼠注射(ip)化合物1四周(7.5mg/kg，每周两次)。图6A-6B显示了用生理盐水(作为对照)和化合物1处理4周后血浆(6A)和肝脏(6B)中miR-122水平的qRT-PCR分析。MicroRNA-18用作阴性对照，在用化合物1处理后，其血浆和肝脏水平未受影响。与在miR-122上看到的显著效果相比，在图6A中对该microRNA看到的效果不显著。

图7A和图7B分别显示了在用化合物1或生理盐水处理的小鼠中从血浆和肝脏提取的miR-122的qRT-PCR分析的结果。图7C显示了从小鼠肝脏提取的FGF21和G6pc以及RORα靶基因pri-miR-122和pre-miR-122mRNA的qRT-PCR分析。图7D是显示了对施用生理盐水或化合物1的小鼠的肝脏甘油三酯(TG)水平(mg/dL)的定量的图。

图8A-D是显示了C57BL/6小鼠的肝损伤的各种标记物的图，所述C57BL/6小鼠喂食致动脉粥样化的饮食3周(诱导纤维化)并每周3次注射15mg/kg化合物1(或生理盐水+DMSO)3.5周(n＝8)。从血浆(图8A)和肝脏(图8B)提取的miR-122的qRT-PCR分析，用于未处理(灰色柱)和已处理(黑色柱)分组。将miR-93和miR-18分别用作血浆和肝脏中的阴性对照。图8C是显示实验结束时测得的ALT和AST血浆水平的图。图8D是显示从小鼠肝脏提取的纤维化中涉及的基因和RORα靶基因(FGF21)的mRNA的qRT-PCR分析的图。将血浆中的microRNA水平标准化为尖刺秀丽隐杆线虫(C.elegans)miR-39；将组织中的microRNA水平标准化为RNU6。mRNA水平标准化为HPRT。数据以误差线＝SD表示。*P<.05,**P<.01。***P<.001,****P<0.0001。

图9A显示了从生理盐水或经化合物1处理的小鼠获取的H&E、CD3和F4/80染色的肝脏的代表性显微照片；比例尺代表10μm。图9B是显示了使用ImageJ对阳性染色的F4/80区域进行定量的图。

图10A和10C是取自生理盐水或经化合物1处理的小鼠的Masson三色(M.T.)染色和α-SMA染色的肝脏的显微照片；比例尺代表10μm。图10B和D是显示了使用ImageJ(％)对阳性染色区域进行定量的图。M.T.染色显示在图10B中，而SMA染色显示在图10D中。

图11显示了在NASH患者肝脏中RORα、RORα和MIR122靶基因的表达水平。使用从NCBI GEO数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)获得的人类公共数据集进行基于数据库的基因表达分析，处理为测量正常和脂肪性肝炎患者肝脏mRNA水平的中值标准化信号强度值。在NASH患者的肝脏中，pre-MIR122和RORα靶基因(FGF21)表达水平呈正相关。通过Pearson相关检验计算正相关系数(r2)。对于GEO:GSE89632，n＝25(正常)和n＝14(NASH)。

图12-13显示RORα激动剂化合物1通过增加HFD喂养的小鼠中MIR122的表达来减少脂肪变性。该图显示了肝脏和肌肉中MIR122(Agpat1和Dgat1)和RORα(FGF21)靶基因的水平。图13显示了从肝组织提取的RNA的RNA-seq分析，显示了pri-MIR122和FGF21(RORα靶基因)mRNA表达之间的正相关性。血浆中的microRNA水平被标准化为尖刺秀丽隐杆线虫miR-39；组织中的microRNA水平被标准化为RNU6。mRNA水平被标准化为HPRT。数据表示为平均值±S.D。N＝6。*P<0.05，**P<0.01。***P<0.001，***P<0.0001。

图14显示了从小鼠肝脏提取的RORα靶基因和pri-MIR122和pre-MIR122mRNA的qRT-PCR分析的结果。数据显示，RORα激动剂化合物1增加了MIR122的水平。

图15显示了化合物1的抗炎和抗纤维发生作用。参与纤维化的基因和从小鼠肝脏中提取的RORα靶基因(FGF21)的mRNA的qRT-PCR分析，其中血浆中的microRNA水平标准化为尖刺秀丽隐杆线虫miR-39，组织中的microRNA水平标准化为RNU6。mRNA水平被标准化为HPRT。数据表示为平均值±S.D。*P<0.05，**P<0.01。***P<0.001。

图16是显示了基于不同浓度的SR1078(μM)的相对FGF21表达的图。

图17是RORA受体的配体结合结构域的示意图，化合物停靠在该结构域内。

图18A和B是RORA受体的推定激动剂与miR-122启动子结合的示意图，显示了当激动剂与受体结合时，如何可以测量萤光素酶活性，以及当化合物不是激动剂时，没有萤光素酶活性。

图19是显示不同浓度的化合物68对野生型和突变型RORα的相对萤光素酶活性的图表。

具体实施方式

本文所述的式(A)-(H)的化合物调节ROR靶基因在肝细胞(特别是与miR-122产生和随后的FGF21产生有关的肝细胞)中的表达。

FGF21产量的增加可用于治疗多种病症，包括与FGF21相关的胰腺炎、肌肉减少症、中风和创伤性脑损伤。

miR-122产量的增加也减少了脂滴的形成，作为避免脂毒性的一种方式，胶质母细胞瘤(GBM)细胞形成脂滴。因此，对受试者施用本文所述的化合物增加了受试者的内源性miR122水平，从而治疗、预防、降低对miR-122相关病症的易感性、降低其严重性或延缓其进展，所述病症例如涉及脂滴形成的病症，例如胶质母细胞瘤(GBM)等。

还公开了药物制剂，其包含一种或多种本文所述的化合物，以及药学上可接受的载体或赋形剂。在一个实施方案中，该制剂包括至少一种本文所述的化合物和至少一种进一步的治疗剂。

参考以下定义将更好地理解本发明。

I.定义

术语“独立地”在本文中用于表示独立应用的变量因应用情况而独立变化。因此，在诸如R”XY”的化合物中，其中R”“独立地是碳或氮”，则两个R”可以都是碳，两个R”可以都是氮，或者一个R”可以是碳并且另一个R”是氮。

术语“调节剂”包括拮抗剂、变构抑制剂、激动剂和部分激动剂。某些调节剂可以关闭ROR表达(直接拮抗剂和变构抑制剂，以及以剂量依赖性方式的部分激动剂)，而其他调节剂(激动剂和部分激动剂，后者以剂量依赖性方式)可以增加ROR表达。

如本文所用，术语“对映异构体纯的”是指包含至少约95％，优选约97％、98％、99％或100％的该化合物的单一对映异构体的化合物组成。

如本文所用，术语“基本上不含”或“基本上不存在”是指包含至少85％至90％重量，优选95％至98％重量，甚至更优选地，99％至100％重量的该化合物的指定对映异构体的化合物组成。在一个优选的实施方案中，本文所述的化合物基本上不含对映异构体。

类似地，术语“分离的”是指这样的化合物组合物，其包含至少85％至90％重量，优选95％至98％重量，甚至更优选地，99％至100％重量的该化合物，其余包含其他化学物质或对映异构体。

除非另有说明，否则本文所用的术语“烷基”是指饱和的直链、支链或环状、伯、仲或叔烃类化合物，包括取代和未取代的烷基。烷基可以任选地被不另外干扰反应或在过程中提供改进的任意部分取代，包括但不限于卤素、卤代烷基、羟基、羧基、酰基、芳基、酰氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫醇、亚胺、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、氨磺酰基、酯、羧酸、酰胺、膦酰基、氧膦基、磷酰基、膦、硫酯、硫醚、酰卤、酸酐、肟、肼、氨基甲酸酯、膦酸、膦酸酯，其是未受保护的或视需要受到保护的，如本领域技术人员已知的，例如如Greene等人，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley and Sons，第二版，1991所讲解的，在此通过引用的方式并入。具体包括CF₃和CH₂CF₃。当烷基部分在两个末端都被取代时，它是“亚烷基”部分，例如亚甲基部分，并且其意在包含在本文中。

在本文中，每当使用术语C(烷基范围)时，该术语独立地包括该类的每个成员，如同具体地、单独地列出一样。术语“烷基”包括C_1-22烷基部分，术语“低级烷基”包括C_1-6烷基部分。本领域普通技术人员应理解，相关的烷基基团通过用后缀“-基(-yl)”代替后缀“-烷烃(-ane)”来命名。

如本文所用，“桥连烷基(bridged alkyl)”是指双环或三环烷烃，例如，2:1:1双环己烷。

如本文所用，“螺烷基(spiro alkyl)”是指连接在单个(季)碳原子上的两个环。

术语“烯基”是指不饱和的烃基，为直链或支链，只要它含有一个或多个双键即可。本文公开的烯基基团可以任选地被对反应过程无不利影响的任意部分取代，包括但不限于对烷基部分上的取代基所描述的那些。烯基基团的非限制性实例包括乙烯、甲基乙烯、异亚丙基、1,2-乙烷-二基、1,1-乙烷-二基、1,3-丙烷-二基、1,2-丙烷-二基、1,3-丁烷-二基和1,4-丁烷-二基。

术语“炔基”是指不饱和的无环烃基，为直链或支链，只要它含有一个或多个三键即可。炔基基团可以任选地被对反应过程无不利影响的任意部分取代，包括但不限于上述对烷基部分描述的那些。合适的炔基基团的非限制性实例包括乙炔基、丙炔基、羟丙炔基、丁炔-1-基、丁炔-2-基、戊炔-1-基、戊炔-2-基、4-甲氧基戊炔-2-基、3-甲基丁炔-1-基、己炔-1-基、己炔-2-基和己炔-3-基、3,3-二甲基丁炔-1-基。

术语“烷基氨基”或“芳基氨基”分别指具有一个或两个烷基或芳基取代基的氨基。

如本文所用，术语“脂肪醇”是指在链中具有4至26个碳，优选在链中具有8至26个碳，最优选在链中具有10至22个碳的直链伯醇。精确的链长随来源而变化。代表性的脂肪醇包括月桂基醇、硬脂基醇和油烯基醇。它们是无色油状液体(对于较小的碳数)或蜡状固体，但是不纯的样品可能会显示黄色。脂肪醇通常具有偶数个碳原子，并且在末端碳上连接有一个醇基(-OH)。有些是不饱和的，有些是支链的。它们在工业中被广泛使用。与脂肪酸一样，它们通常用分子中的碳原子数来表示，例如“C₁₂醇”，即具有12个碳的醇，例如十二烷醇。

除非另外定义，否则本文所用的术语“受保护的”是指加到氧、氮或磷原子以防止其进一步反应或用于其它目的的基团。多种氧和氮保护基团是有机合成领域技术人员已知的，描述于例如Greene等人，Protective Groups in Organic Synthesis，同上。

单独或组合使用的术语“芳基”是指含有一个、两个或三个环的碳环芳族体系，其中这些环可以以悬垂方式连接在一起或者可以稠合。芳基的非限制性实例包括苯基、联苯基或萘基，或从芳环除去氢后保留的其它芳族基团。术语芳基包括取代和未取代的部分。芳基基团可以任选地被对过程无不利影响的任意部分取代，包括但不限于上述对烷基部分所描述的那些。取代的芳基的非限制性实例包括杂芳基氨基、N-芳基-N-烷基氨基、N-杂芳基氨基-N-烷基氨基、杂芳烷氧基、芳基氨基、芳烷基氨基、芳硫基、单芳基酰氨磺酰基、芳基亚磺酰氨基、二芳基酰氨磺酰基、单芳基酰氨基磺酰基、芳基亚磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基硫基、杂芳基亚磺酰基、杂芳基磺酰基、芳酰基、杂芳酰基、芳烷酰基、杂芳烷酰基、羟基芳烷基、羟基杂芳烷基、卤代烷氧基烷基、芳基、芳烷基、芳氧基、芳烷氧基(arylkoxy)、芳氧基烷基、饱和杂环基、部分饱和的杂环基、杂芳基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基、芳烷基、杂芳基烷基、芳基烯基和杂芳基烯基、芳烷氧羰基(carboaralkoxy)。

术语“烷芳基”或“烷基芳基”是指具有芳基取代基的烷基。术语“芳烷基”或“芳基烷基”是指具有烷基取代基的芳基。

本文所用的术语“卤素”包括氯、溴、碘和氟。

术语“酰基”是指一种羧酸酯，其中酯基团的非羰基部分选自由以下组成的组：直链、支链或环状烷基或低级烷基，烷氧基烷基(包括但不限于甲氧基甲基)，芳烷基(包括但不限于苄基)，芳氧基烷基(如苯氧基甲基)，芳基(包括但不限于苯基)，其任选地被以下取代：卤素(F、Cl、Br或I)，烷基(包括但不限于C₁、C₂、C₃和C₄)或烷氧基(包括但不限于C₁、C₂、C₃和C₄)，磺酸酯(如烷基或芳烷基磺酰基，包括但不限于甲磺酰基)，单、二或三磷酸酯，三苯甲基或单甲氧基三苯甲基，取代的苄基，三烷基甲硅烷基(例如二甲基-叔丁基甲硅烷基)或二苯基甲基甲硅烷基。酯中的芳基基团最佳地包含苯基基团。术语“低级酰基”是指其中非羰基部分是低级烷基的一种酰基基团。

术语“烷氧基”和“烷氧基烷基”包括具有烷基部分的直链或支链含氧基团，例如甲氧基。术语“烷氧基烷基”还包括具有一个或多个与烷基连接的烷氧基的烷基，即，形成单烷氧基烷基和二烷氧基烷基。“烷氧基”基团可以进一步被一个或多个卤原子取代，例如氟、氯或溴，以提供“卤代烷氧基”基团。这些基团的实例包括氟甲氧基、氯甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟乙氧基、氟乙氧基、四氟乙氧基、五氟乙氧基和氟丙氧基。

术语“烷基氨基”表示分别含有一个或两个与氨基连接的烷基的“单烷基氨基”和“二烷基氨基”。术语芳基氨基表示分别含有一个或两个与氨基基团连接的芳基基团的“单芳基氨基”和“二芳基氨基”。术语“芳烷基氨基”包括与氨基基团连接的芳烷基基团。术语芳烷基氨基表示分别含有一个或两个与氨基连接的芳烷基的“单芳烷基氨基”和“二芳烷基氨基”。术语芳烷基氨基还表示含有与氨基基团连接的一个芳烷基基团和一个烷基基团的“单芳烷基单烷基氨基”。

如本文所用的术语“杂原子”是指氧、硫、氮和磷。

如本文所用的术语“杂芳基”或“杂芳族”是指芳环中包含至少一个硫、氧、氮或磷的芳族化合物。

术语“杂环”、“杂环基”和环杂烷基是指非芳族环状基团，其中在环中存在至少一个杂原子，例如氧、硫、氮或磷。

杂芳基和杂环基团的非限制性实例包括呋喃基(furyl)、呋喃基(furanyl)、吡啶基、嘧啶基、噻吩基、异噻唑基、咪唑基、四唑基、吡嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻吩基、异苯并呋喃基、吡唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并咪唑基、嘌呤基、咔唑基、噁唑基、噻唑基、异噻唑基、1,2,4-噻二唑基、异噁唑基、吡咯基、喹唑啉基、噌啉基(cinnolinyl)、酞嗪基、黄嘌呤基(xanthinyl)、次黄嘌呤基(hypoxanthinyl)、噻吩、呋喃、吡咯、异吡咯、吡唑、咪唑、1,2,3-三唑、1,2,4-三唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、嘧啶或哒嗪和蝶啶基、氮丙啶、噻唑、异噻唑、1,2,3-噁二唑、噻嗪、吡啶、吡嗪、哌嗪、吡咯烷、氧氮杂环丙烷(oxazirane)、吩嗪、吩噻嗪、吗啉基、吡唑基、哒嗪基、吡嗪基、喹喔啉基、黄嘌呤基、次黄嘌呤基、蝶啶基、5-氮杂胞苷基(5-azacytidinyl)、5-氮杂尿嘧啶基(5-azauracilyl)、三唑并吡啶基、咪唑并吡啶基、吡咯并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、腺嘌呤、N⁶-烷基嘌呤、N⁶-苄基嘌呤、N⁶-卤代嘌呤、N⁶-乙烯基嘌呤(vinypurine)、N⁶-乙酰基嘌呤、N⁶-酰基嘌呤、N⁶-羟烷基嘌呤、N⁶-硫代烷基嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、6-氮杂嘧啶、2-巯基嘧啶、尿嘧啶、N⁵-烷基嘧啶、N⁵-苄基嘧啶、N⁵-卤代嘧啶、N⁵-乙烯基嘧啶、N⁵-乙酰基嘧啶、N⁵-酰基嘧啶、N⁵-羟烷基嘌呤和N⁶-硫代烷基嘌呤和异噁唑基。杂芳族基团可以任选地被取代，如以上对于芳基所述。杂环或杂芳族基团可任选地被一个或多个选自由卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、羧基衍生物、酰氨基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基组成的组的取代基取代。杂芳族化合物可根据需要部分或完全氢化。作为非限制性实例，可以使用二氢吡啶代替吡啶。可以根据需要或期望保护杂环或杂芳基上的官能氧和氮基团。合适的保护基团是本领域技术人员熟知的，包括三甲基甲硅烷基、二甲基己基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基和叔丁基二苯基甲硅烷基、三苯甲基或取代的三苯甲基、烷基、酰基如乙酰基和丙酰基、甲磺酰基和对甲苯磺酰基。杂环或杂芳族基团可以被对反应无不利影响的任意部分取代，包括但不限于上述对于芳基所描述的那些。

如本文所用的术语“宿主”是指对其施用该化合物的单细胞或多细胞生物体，包括但不限于细胞系和动物，并且优选是人。术语宿主特指灵长类动物(包括但不限于黑猩猩)和人类。在本发明的大多数动物应用中，宿主是人类。然而，在某些适应症中，本发明清楚地考虑兽医应用(例如用于治疗黑猩猩)。

术语“肽”是指含有2至100个氨基酸的天然或合成化合物，这些氨基酸通过一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基连接。

在整个说明书中使用术语“药学上可接受的盐或前药”来描述化合物的任意药学上可接受的形式(例如酯)，根据向患者的施用，提供该化合物。药学上可接受的盐包括衍生自药学上可接受的无机碱和无机酸或有机碱和有机酸的盐。合适的盐包括衍生自碱金属如钾和钠、碱土金属如钙和镁以及制药领域熟知的许多其它酸的盐。

药学上可接受的前药是指在宿主中被代谢(例如被水解或氧化)以形成本发明化合物的化合物。前药的典型实例包括在活性化合物的功能部分上具有生物学上不稳定的保护基团的化合物。前药包括可被氧化、还原、胺化、脱氨基、羟基化、脱羟基化、水解、脱水、烷基化、脱烷基化、酰化、脱酰化、磷酸化或脱磷酸化以产生活性化合物的化合物。本发明化合物的前药形式可以具有抗病毒活性，可以被代谢以形成表现出这种活性的化合物，或二者兼具。

以下参考文献中描述了磷酸酯/膦酸酯前药的非限制性实例：Ho,D.H.W.(1973)"Distribution of Kinase and deaminase of 1-beta-D-arabinofuranosylcytosine intissues of man and muse."Cancer Res.33,2816-2820；Holy,A.(1993)Isopolarphosphorous-modified nucleotide analogues,"In:De Clercq(Ed.),Advances inAntiviral Drug Design,Vol.I,JAIPress,pp.179-231；Hong,C.I.,Nechaev,A.和West,C.R.(1979a)"Synthesis and antitumor activity of1-beta-D-arabino-furanosylcytosine conjugates of cortisol and cortisone."Bicohem.Biophys.Rs.Commun.88,1223-1229；Hong,C.I.,Nechaev,A.,Kirisits,A.J.Buchheit,D.J.和West,C.R.(1980)"Nucleoside conjugates as potentialantitumor agents.3.Synthesis and antitumor activity of1-(beta-D-arabinofuranosyl)cytosine conjugates of corticosteroids and selectedlipophilic alcohols."J.Med.Chem.28,171-177；Hosteller,K.Y.,Stuhmiller,L.M.,Lenting,H.B.M.van den Bosch,H.和Richman J.Biol.Chem.265,6112-6117；Hosteller,K.Y.,Carson,D.A.和Richman,D.D.(1991)；"Phosphatidylazidothymidine:mechanism ofantiretroviral action in CEM cells."J.Biol Chem.266,11714-11717；Hosteller,K.Y.,Korba,B.Sridhar,C.,Gardener,M.(1994a)"Antiviral activity ofphosphatidyl-dideoxycytidine in hepatitis B-infected cells and enhancedhepatic uptake in mice."Antiviral Res.24,59-67；Hosteller,K.Y.,Richman,D.D.,Sridhar.C.N.Felgner,P.L.Felgner,J.,Ricci,J.,Gardener,M.F.Selleseth,D.W.和Ellis,M.N.(1994b)"Phosphatidylazidothymidine and phosphatidyl-ddC:Assessmentof uptake in mouse lymphoid tissues and antiviral activities in humanimmunodeficiency virus-infected cells and in rauscher leukemia virus-infectedmice."Antimicrobial Agents Chemother.38,2792-2797；Hunston,R.N.,Jones,A.A.McGuigan,C.,Walker,R.T.,Balzarini,J.和DeClercq,E.(1984)"Synthesis andbiological properties of some cyclic phosphotriesters derived from2'-deoxy-5-flourouridine."J.Med.Chem.27,440-444；Ji,Y.H.,Moog,C.,Schmitt,G.,Bischoff,P.和Luu,B.(1990)；"Monophosphoric acid esters of7-.beta.-hydroxycholesterol and ofpyrimidine nucleoside as potential antitumor agents:synthesis and preliminaryevaluation of antitumor activity."J.Med.Chem.332264-2270；Jones,A.S.,McGuigan,C.,Walker,R.T.,Balzarini,J.和DeClercq,E.(1984)"Synthesis,properties,andbiological activity of some nucleoside cyclic phosphoramidates."J.Chem.Soc.Perkin Trans.I,1471-1474；Juodka,B.A.和Smrt,J.(1974)"Synthesis ofdiribonucleoside phosph(P.fwdarw.N)amino acid derivatives."Coll.Czech.Chem.Comm.39,363-968；Kataoka,S.,Imai,J.,Yamaji,N.,Kato,M.,Saito,M.,Kawada,T.和Imai,S.(1989)"Alkylated cAMP derivatives；selective synthesisand biological activities."Nucleic Acids Res.Sym.Ser.21,1-2；Kataoka,S.,Uchida,"(cAMP)benzyl and methyl triesters."Heterocycles 32,1351-1356；Kinchington,D.,Harvey,J.J.,O'Connor,T.J.,Jones,B.C.N.M.,Devine,K.G.,Taylor-Robinson D.,Jeffries,D.J.和McGuigan,C.(1992)"Comparison of antiviral effectsof zidovudine phosphoramidate an dphosphorodiamidate derivates against HIVand ULV in vitro."Antiviral Chem.Chemother.3,107-112；Kodama,K.,Morozumi,M.,Saithoh,K.I.,Kuninaka,H.,Yosino,H.和Saneyoshi,M.(1989)"Antitumor activity andpharmacology of1-.beta.-D-arabinofuranosylcytosine-5'-stearylphosphate；anorally active derivative of 1-.beta.-D-arabinofuranosylcytosine."Jpn.J.CancerRes.80,679-685；Korty,M.和Engels,J.(1979)"The effects of adenosine-andguanosine 3',5'phosphoric and acid benzyl esters on guinea-pig ventricularmyocardium."Naunyn-Schmiedeberg'sArch.Pharmacol.310,103-111；Kumar,A.,Goe,P.L.,Jones,A.S.Walker,R.T.Balzarini,J.和DeClercq,E.(1990)"Synthesis andbiological evaluation of some cyclic phosphoramidate nucleoside derivatives."J.Med.Chem,33,2368-2375；LeBec,C.和Huynh-Dinh,T.(1991)"Synthesis of lipophilicphosphate triester derivatives of 5-fluorouridine an arabinocytidine asanticancer prodrugs."Tetrahedron Lett.32,6553-6556；Lichtenstein,J.,Barner,H.D.和Cohen,S.S.(1960)"The metabolism of exogenously supplied nucleotides byEscherichia coli.,"J.Biol.Chem.235,457-465；Lucthy,J.,Von Daeniken,A.,Friederich,J.Manthey,B.,Zweifel,J.,Schlatter,C.和Benn,M.H.(1981)"Synthesisand toxicological properties of three naturally occurringcyanoepithioalkanes".Mitt.Geg.Lebensmittelunters.Hyg.72,131-133(Chem.Abstr.95,127093)；McGigan,C.Tollerfield,S.M.和Riley,P.a.(1989)"Synthesisand biological evaluation of some phosphate triester derivatives of theantiviral drug Ara."Nucleic Acids Res.17,6065-6075；McGuigan,C.,Devine,K.G.,O'Connor,T.J.,Galpin,S.A.,Jeffries,D.J.和Kinchington,D.(1990a)"Synthesis andevaluation of some novel phosphoramidate derivatives of 3'-azido-3'-deoxythymidine(AZT)as anti-HIV compounds."Antiviral Chem.Chemother.1 107-113；McGuigan,C.,O'Connor,T.J.,Nicholls,S.R.Nickson,C.和Kinchington,D.(1990b)"Synthesis and anti-HIV activity of some novel substituted dialkyl phosphatederivatives of AZT and ddCyd."Antiviral Chem.Chemother.1,355-360；McGuigan,C.,Nicholls,S.R.,O'Connor,T.J.和Kinchington,D.(1990c)"Synthesis of some noveldialkyl phosphate derivative of 3'-modified nucleosides as potential anti-AIDS drugs."Antiviral Chem.Chemother.1,25-33；McGuigan,C.,Devin,K.G.,O'Connor,T.J.和Kinchington,D.(1991)"Synthesis and anti-HIV activity of some haloalkylphosphoramidate derivatives of 3'-azido-3'-deoxythylmidine(AZT)；potentactivity of the trichloroethyl methoxyalaninyl compound."Antiviral Res.15,255-263；McGuigan,C.,Pathirana,R.N.,Balzarini,J.和DeClercq,E.(1993b)"Intracellular delivery of bioactive AZT nucleotides by aryl phosphatederivatives of AZT."J.Med.Chem.36,1048-1052。

II.活性化合物在一个实施方案中，所述化合物具有以下通式：

或其药学上可接受的盐或前药。

在该通式中：

X和Z中之一选自由以下组成的组：-NH-、-N(NH₂)-、-NH(OH)-、N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-、-O-、-CH₂-、-CH(C_1-10烷基)-、C(C_1-10烷基)₂-、-CH(C_3-10环烷基)-、-CH(C_2-10烯基、-CH(C_2-10炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O-C_1-10烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NH-C_1-10烷基)-和-CH(C(O)NH₂)-，

而X和Z中的另一个选自由以下组成的组：-C(O)-、-SO₂-、-N(C(O)-、-CH₂-、-CH(C_1-10烷基)-、C(C_1-10烷基)₂-、-CH(C_3-10环烷基)-、-CH(C_2-10烯基、-CH(C_2-10炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NHC_1-10烷基)-和-CH(C(O)NH₂)-，

Y选自由以下组成的组：-NH、-N(NH₂)-、-NH(OH)-、N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-、-O-、-CH₂-、-CH(C_1-10烷基)-、-CH(C_3-10环烷基)-、-CH(C_2-10烯基、-CH(C_2-10炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-C(C_1-10烷基)₂-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O-C_1-10烷基)-、-C(O)-、-SO₂-、-N(C(O)-C_1-10烷基)-、-N(C(O)O-C_1-10烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NH-C_1-10烷基)-和-CH(C(O)NH₂)-，

A和B独立地是苯基、含有一个、两个或三个氮、氧或硫原子的五元杂芳族环或含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳族环；

u和v独立地为0、1、2、3或4；条件是u和v中的至少一个为1、2、3或4；

每个R¹和R²独立地为R³、OH、OR³、SR³、S(O)R³、SO₂R³、C(O)R³、C(O)OR³、OC(O)R³、OC(O)OR³、NH₂、NHR³、NHC(O)R³、NR³C(O)R³、NHS(O)₂R³、NR³S(O)₂R³、NHC(O)OR³、NR³C(O)OR³、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR³、NHC(O)N(R³)₂、NR³C(O)N(R³)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR³、C(O)N(R³)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR³、C(O)NHSO₂R³、C(O)NR³SO₂R³、SO₂NH₂、SO₂NHR³、SO₂N(R³)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR³、C(N)N(R³)₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、-CH₂-膦酸酯、-CH₂O-磷酸酯、CH₂P(O)(OH)₂、CH₂P(O)(OR³)₂、CH₂P(O)(OR³)(NR³)、CH₂P(O)(NR³)₂、CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)或CH₂-cycloSal单磷酸酯前药，

其中术语磷酸酯包括单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯和稳定化的磷酸酯前药，术语膦酸酯包括磷酸酯前药中存在的相同的前药，

并且当R¹和R²在相邻的碳上时，它们可以一起形成饱和或不饱和的烷基、芳族或杂芳族环；

每个R³独立地为芳基、杂芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：R⁴、OH、OR⁴、SR⁴、S(O)R⁴、SO₂R⁴、C(O)R⁴、C(O)OR⁴、OC(O)R⁴、OC(O)OR⁴、NH₂、NHR⁴、NHC(O)R⁴、NR⁴C(O)R⁴、NHS(O)₂R⁴、NR⁴S(O)₂R⁴、NHC(O)OR⁴、NR⁴C(O)OR⁴、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR⁴、NHC(O)N(R⁴)₂、NR⁴C(O)N(R⁴)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR⁴、C(O)N(R⁴)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR⁴、C(O)NHSO₂R⁴、C(O)NR⁴SO₂R⁴、SO₂NH₂、SO₂NHR⁴、SO₂N(R⁴)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR⁴、C(N)N(R⁴)₂、C(N)OH、C(N)OCH⁴、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)、cycloSal单磷酸酯前药、CH₂P(O)(OH)₂、CH₂P(O)(OR⁴)₂、CH₂P(O)(OR⁴)(NR⁴)、CH₂P(O)(NR⁴)₂、CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和CH₂-cycloSal单磷酸酯前药，

每个R⁴独立地选自芳基、杂芳基、芳基烷基、烷基芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：R⁵、OH、OR⁵、SR⁵、S(O)R⁵、SO₂R⁵、C(O)R⁵、C(O)OR⁵、OC(O)R⁵、OC(O)OR⁵、NH₂、NHR⁵、NHC(O)R⁵、NR⁵C(O)R⁵、NHS(O)₂R⁵、NR⁵S(O)₂R⁵、NHC(O)OR⁵、NR⁵C(O)OR⁵、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR⁵、NHC(O)N(R⁵)₂、NR⁵C(O)N(R⁵)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR⁵、C(O)N(R⁵)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR⁵、C(O)NHSO₂R⁵、C(O)NR⁵SO₂R⁵、SO₂NH₂、SO₂NHR⁵、SO₂N(R⁵)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR⁵、C(N)N(R⁵)₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和cycloSal单磷酸酯前药，

每个R⁵独立地为芳基、杂芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：R⁶、OH、OR⁶、SR⁶、S(O)R⁶、SO₂R⁶、C(O)R⁶、C(O)OR⁶、OC(O)R⁶、OC(O)OR⁶、NH₂、NHR⁶、NHC(O)R⁶、NR⁶C(O)R⁶、NHS(O)₂R⁶、NR⁶S(O)₂R⁶、NHC(O)OR⁶、NR⁶C(O)OR⁶、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR⁶、NHC(O)N(R⁶)₂、NR⁶C(O)N(R⁶)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR⁶、C(O)N(R⁶)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR⁶、C(O)NHSO₂R⁶、C(O)NR⁶SO₂R⁶、SO₂NH₂、SO₂NHR⁶、SO₂N(R⁶)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR⁶、C(N)N(R⁶)₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、F、Cl、Br、I、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和cycloSal单磷酸酯前药，

每个R⁶独立地为芳基、杂芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、OH、NH₂、C(O)NH₂、C(O)NHOH、SO₂NH_2、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和cycloSal单磷酸酯前药。

这些化合物的药学上可接受的盐和前药也旨在在本发明的范围内。

代表性的R²结构部分如下所示：

代表性的R³结构部分如下所示：

在一个实施方案中，X和Z中之一为-C(O)-、-SO₂-或-NC(O)-，并且另一个为-NH-、-N(NH₂)-、-NH(OH)-、-N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-或-O-。

在另一个实施方案中，X和Z中之一为-C(O)-、-SO₂-或-N(C(O)-，并且另一个为-CH₂-、-CH(C_1-6烷基)-、C(烷基)₂-、-CH(C_3-8环烷基)-、-CH(C_2-6烯基、-CH(C_2-6炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NH烷基)-或-CH(C(O)NH₂)-。

在另一个实施方案中，X和Z中之一为-NH-、-N(NH₂)-、-NH(OH)-、-N(烷基)-或-O-，并且另一个为-CH₂-、-CH(C_1-6烷基)-、C(烷基)₂-、-CH(C_3-8环烷基)-、-CH(C_2-6烯基、-CH(C_2-6炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NH烷基)-或-CH(C(O)NH₂)-。

在第三个实施方案中，X和Z中之一为-NH-、-N(NH₂)-、-NH(OH)-、-N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-，并且另一个为-C(O)-或-SO₂-。

在第四个实施方案中，Y为-NH、-N(NH₂)-、-NH(OH)-、-N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-或-O-。

在第五个实施方案中，Y为-NH、-N(NH₂)-、-NH(OH)-、-N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-，

在第六个实施方案中，R¹和R²之一是H、-CH₂-膦酸酯、-CH₂O-磷酸酯，其中术语磷酸酯包括单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯和稳定化的磷酸酯前药，术语膦酸酯包括磷酸酯前药中存在的相同的前药。

在第七个实施方案中，R¹和R²之一为H、-CH₂P(O)(OH)₂、-CH₂P(O)(OH)(OR⁶)、-CH₂P(O)(OR⁶)₂、-CH₂P(O)(OR⁶)(NR⁶)、-CH₂P(O)(NR⁶)₂、-CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)或-CH₂-cycloSal单磷酸酯前药。

在该实施方案的一个方面，R¹和R²之一是膦酸酯、氨基磷酸酯、cycloSal单磷酸酯前药，或具有以下通式-CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)。

在一个优选的实施方案中，R¹和R²之一为-C(O)NHR⁴、-C(O)N(R⁴)₂，

其中R⁴为C_1-10烷基、C_3-10环烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、芳基烷基、烷基芳基、C_1-10卤代烷基、C_1-10烷基-芳基或C_1-10卤代烷基-芳基，m为0、1或2。在特定的实施方案中，R⁴是C_1-10烷基-芳基，并且苄基是特别优选的R⁴取代基。

在另一个实施方案中，R¹和R²之一为-C(O)-C_1-10烷基、-C(O)-烷基芳基、-C(O)-杂环基-烷基芳基、-C(O)-杂环基-CH₂-芳基、-C(O)-杂环基-CF₂-芳基、-C(O)-环烷基-烷基芳基、-C(O)NHC_1-10烷基、-C(O)NH-烷基芳基、-C(O)NH-杂环基-烷基芳基、-C(O)NH-杂环基-CF₂-芳基、-C(O)NH-环烷基-烷基芳基、-SO₂-C_1-10烷基、-SO₂-烷基芳基、-SO₂-杂环基-烷基芳基、-SO₂-杂环基-CF₂-芳基或-SO_2-环烷基-烷基芳基。

上面显示的具体变量也可以与通式B至H中的任何一个相关联使用，下面将详细讨论。

代表性的化合物包括以下：

或其药学上可接受的盐或前药。特别优选的化合物具有以下通式：

或其药学上可接受的盐或前药。

在其他实施方案中，所述化合物具有以下通式之一：

和其药学上可接受的盐和前药，其中R²和u如上文对于通式A所定义，例外的是u可以是0。

一个代表性的化合物具有以下通式：

和其药学上可接受的盐和前药，其中R²和u如上文对于通式A所定义，例外的是u可以是0。

在另一个实施方案中，所述化合物具有以下通式之一：

和其药学上可接受的盐或前药，其中R²和u如上文对于通式A所定义，例外的是u可以是0，且n是0、1或2。

III.立体异构现象和多晶型现象

本文所述的化合物可具有不对称中心，可以以外消旋体、外消旋混合物、单独的非对映异构体或对映异构体存在，所有异构形式均包括在本发明中。具有手性中心的本发明化合物可以以光学活性和外消旋形式存在和分离。一些化合物可以表现出多晶型。本发明包括具有本文所述的有用性质的本发明化合物的外消旋、光学活性、多晶型或立体异构形式或其混合物。光学活性形式可以通过例如以下方式来制备：通过重结晶技术拆分外消旋形式、通过从光学活性起始材料合成、通过手性合成或通过使用手性固定相的色谱分离或通过酶促拆分。可以纯化相应的化合物，然后衍生该化合物以形成本文所述的化合物，或纯化化合物本身。

化合物的光学活性形式可以使用本领域已知的任意方法制备，包括但不限于通过重结晶技术拆分外消旋形式、通过从光学活性起始材料合成、通过手性合成或通过使用手性固定相的色谱分离。

获得光学活性材料的方法的实例包括至少下列方法：

i)晶体物理分离法：手动分离各个对映异构体的宏观晶体的技术。如果存在单独的对映异构体的晶体，即原料是聚集物(conglomerate)且所述晶体是视觉上可区分的，则可采用该技术；

ii)同时结晶法：从外消旋体的溶液中分别结晶出各个对映异构体的技术，可能只有当外消旋体是固态的聚集物时才可行；

iii)酶促拆分法：借助对映异构体与酶反应的不同速率，部分或完全分离外消旋体的技术；

iv)酶促不对称合成法：至少一个合成步骤采用酶促反应以获得所需对映异构体的对映异构体纯的或富集的合成前体的合成技术；

v)化学不对称合成法：在产物中产生不对称(即手性)的条件下从非手性前体合成所需对映异构体的合成技术，其可使用手性催化剂或手性助剂来完成；

vi)非对映异构体分离法：使外消旋化合物与对映异构体纯试剂(手性助剂)反应，将各个对映异构体转化为非对映异构体的技术。然后所得非对映异构体借助其现在更明显的结构差异，通过色谱法或结晶法分离，随后除去手性助剂以获得所需的对映异构体；

vii)一级和二级不对称转化法：该技术通过平衡来自外消旋体的非对映异构体，使其在来自所需对映异构体的非对映异构体的溶液中占优势，或者来自所需对映异构体的非对映异构体的优先结晶化破坏了这种平衡，致使所有材料最终几乎都被转化为来自所需对映异构体的结晶型非对映异构体。然后从所述非对映异构体中释放出所需对映异构体；

viii)动力学拆分法：该技术是指借助对映异构体与手性、非消旋试剂或催化剂在动力学条件下的不同反应速率，实现对外消旋体的部分或完全拆分(或者对部分拆分的化合物进一步拆分)；

ix)从非外消旋前体进行对映异构体专一性合成：从非手性原料获得所需对映异构体且在合成过程中没有或仅最小量地破坏立体化学完整性的合成技术；

x)手性液相色谱法：借助于外消旋体的对映异构体与固定相的相互作用不同而在液体流动相中分离出外消旋体的对映异构体的技术(包括但不限于通过手性HPLC)。所述固定相可由手性材料制得，或者所述流动相可包含引起不同相互作用的额外的手性材料；

xi)手性气相色谱法：通过使外消旋体挥发，并借助于对映异构体在气态流动相中与含有固定的非外消旋手性吸附相的柱子的不同相互作用而分离出对映异构体的技术；

xii)用手性溶剂萃取：借助一种对映异构体优先溶解于特定手性溶剂中而分离出对映异构体的技术；

xiii)跨手性膜转运法：使外消旋体与薄膜屏障接触的技术。该屏障通常分离出两种可混溶液体，其中一种含有外消旋体，驱动力如浓度差或压力差导致优先跨膜屏障转运。该膜的非外消旋手性性质仅允许外消旋体中的一种对映异构体通过，从而实现了分离。

在一个实施方案中使用手性色谱法，包括但不限于模拟移动床色谱法。各种手性固定相可商购获得。

IV.盐或前药制剂

在化合物具有足够的碱性或酸性以形成稳定的无毒酸盐或碱盐的情况下，将化合物以药学上可接受的盐施用可能是合适的。药学上可接受的盐的实例是与酸形成的有机酸加成盐，其形成生理学上可接受的阴离子，例如甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐和α-甘油磷酸盐。还可以形成合适的无机盐，包括但不限于硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐。对于某些透皮应用，可优选使用本文所述化合物的脂肪酸盐。脂肪酸盐可以帮助渗透角质层。合适的盐的实例包括化合物与硬脂酸、油酸、亚油酸、棕榈酸、辛酸和癸酸的盐。

药学上可接受的盐可以使用本领域熟知的标准方法获得，例如通过使足够碱性的化合物如胺与合适的酸(提供生理学上可接受的阴离子)反应。在化合物包括多个胺基的那些情况下，可以与任意数量的胺基形成盐。还可以制备羧酸的碱金属(例如钠、钾或锂)盐或碱土金属(例如钙)盐。

前药是一种药理学物质，其以无活性(或显著较低的活性)形式施用，并随后在体内代谢为活性代谢物。以较低剂量使更多药物到达所需靶标通常是使用前药背后的基本原理并且这通常归因于更好的吸收、分布、代谢和/或排泄(ADME)性质。前药通常设计成用于改善口服生物利用度，因为胃肠道吸收不良通常是限制因素。另外，使用前药策略可以增加药物对其预期靶标的选择性，从而降低脱靶效应的可能性。

V.治疗方法

可以通过向患者施用任选地在药学上可接受的载体或稀释剂的存在下的有效量的活性化合物或其药学上可接受的前药或盐来治疗宿主。活性物质可以通过任意合适的途径施用，例如以液体或固体形式口服、胃肠外、静脉内、皮内、透皮、皮下或局部施用。在药物组合物中提供了施用的细节。

所述化合物可用于治疗、预防与FGF21相关的胰腺炎、肌肉减少症、中风和创伤性脑损伤，以及与miR-122相关的胶质母细胞瘤和其他病症，降低其易感性，降低其严重性，或延缓其进展。在一些实施方案中，化合物与用于治疗这些病症的其他药剂一起施用。

胶质母细胞瘤的治疗

胶质母细胞瘤(GBM)是一种几乎致命的脑肿瘤，它需要大量的游离脂肪酸(FAs)来促进细胞生长。虽然高水平的FAs通常会导致脂毒性，但研究表明GBM通过上调二酰基甘油-酰基转移酶1(DGAT1)以甘油三酯和脂滴的形式储存过量的FAs来避免脂毒性(Cheng等人,2020,Cell Metabolism 32,229–242(2020年8月4日))。

Cheng将抑制DGAT1视为破坏脂质体内平衡的一种方式，并指出抑制DGAT1会导致过量的FAs进入线粒体进行氧化。这导致了高水平活性氧(ROS)的产生、线粒体损伤、细胞色素c释放和肿瘤细胞凋亡。在GBM的动物模型中，Cheng表明靶向DGAT1阻断脂滴形成，诱导肿瘤细胞凋亡，并显著抑制GBM的生长，并表明靶向DGAT1可能是一种有前途的GBM治疗方法。然而，DGAT1抑制剂伴随有胃肠道不良事件，例如恶心、腹泻和呕吐(DeVita and Pinto,“Current status of the research and development of diacylglycerol O-acyltransferase 1(DGAT1)inhibitors,”J Med Chem.56(24):9820-5(2013)，和Cheng所评估的DGAT1抑制剂(DGAT1抑制剂A-922500)不能穿过血脑屏障，因此将不能治疗GBM。因此，提供DGAT1抑制剂的替代物作为抑制脂滴形成的方法，从而治疗GBM将是有利的。

miR-122与脂滴形成之间存在关联(Wu等人,“MicroRNA-122Inhibits LipidDroplet Formation and Hepatic Triglyceride Accumulation via Yin Yang 1,”CellPhysiol Biochem.,44(4):1651-1664(2017))。Wu公开了细胞内脂滴形成和肝脏甘油三酯(TG)含量的增加可导致非酒精性脂肪性肝病，miR-122在游离脂肪酸(FFA)诱导的脂肪变性肝细胞中下调，以及链脲佐菌素和高脂饮食(STZ-HFD)诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。在FFA诱导前用miR-122模拟物转染肝细胞抑制了体外脂滴形成和TG积聚。

本文所述的ROR-α激动剂化合物增加了循环的miR-122水平。由于miR-122可以穿过血脑屏障，施用这些化合物增加了大脑中miR-122的水平。因此，该化合物可以阻断脂滴形成，诱导肿瘤细胞凋亡，并抑制GBM生长。

VI.组合或交替疗法

在一个实施方案中，式(A)的化合物或其药学上可接受的衍生物可以单独使用，与一种或多种式(A)的化合物或其药学上可接受的衍生物组合使用，或与至少一种其他用于治疗与ROR相关病症的药剂组合使用。

在某些实施方案中，用于治疗胰腺炎的通式(A)化合物与药剂组合，所述药剂例如但不限于镇痛药(例如对乙酰氨基酚布洛芬、氢可酮、曲马多或萘普生)帮助消化的酶丸、维生素(例如维生素A、B12、D、E和/或K(如果患者患有吸收障碍))和/或STAT3(信号转导子和转录激活子)抑制剂(例如氯硝柳胺、WP1066(WPD制药)、OPB-51602(medko Biosciences))以及STAT蛋白家族其他成员的抑制剂(包括STAT1、STAT2、STAT4、STAT5(STAT5A和STAT5B)和STAT6)。

治疗进程可以跟踪，例如，血液测试以寻找升高的胰酶水平，慢性胰腺炎中的粪便测试以测量可能暗示患者的消化系统没有充分吸收营养的脂肪水平，计算机断层扫描(CT)扫描以寻找胆结石并评估胰腺炎症的程度，腹部超声以寻找胆结石和胰腺炎症，内窥镜超声以寻找胰腺导管或胆管中的炎症和堵塞，和/或磁共振成像(MRI)以寻找胆囊、胰腺和导管中的异常。

当用于治疗肌肉减少症时，所述化合物可以与尿皮质素II、激素(如睾酮或生长激素)、STAT3抑制剂(如氯硝柳胺、WP1066(WPD制药)、OPB-51602(medko Biosciences)和S3I-201(Santa Cruz Biotechnology))以及STAT蛋白家族其他成员的抑制剂(包括STAT1、STAT2、STAT4、STAT5(STAT5A和STAT5B)和STAT6)以及用于治疗代谢综合征(包括胰岛素抵抗、肥胖和高血压)的药物(二甲双胍和其他AMPK激动剂)共同施用。

当用于治疗胶质母细胞瘤时，该化合物可以与用于胶质母细胞瘤的其他治疗一起施用。一种或多种下述的其它活性药物，以任意组合，可施用于积极治疗GBM。

由于几个复杂的因素，治疗胶质母细胞瘤在过去一直非常困难。肿瘤细胞对传统疗法具有很强的抵抗力，大脑容易受到传统疗法的损伤，自我修复能力非常有限，许多药物无法穿过血脑屏障作用于肿瘤。

替莫唑胺(TMZ)是可用于治疗多形性胶质母细胞瘤的药物的一个例子。它可以口服或静脉注射施用。

大麻素(无论是四氢大麻酚(THC)、合成类似物纳比隆(nabilone)、CBD、CBG或其他大麻素的形式)可以共同施用。这些化合物可以对抗化疗引起的恶心和呕吐，刺激食欲，减轻痛苦和疼痛，并抑制恶性神经胶质瘤的生长和血管生成。大麻素可以攻击胶质母细胞瘤的肿瘤干细胞，诱导其分化为更成熟(因此更“可治疗”)的细胞。

小檗碱，一种异喹啉生物碱，是可以共同施用的化合物的一个例子。小檗碱对胶质母细胞瘤细胞的抗肿瘤作用被认为涉及诱导细胞衰老、抑制RAF-MEK-ERK信号传导通路和/或下调EGFR。

可以使用直接鼻-脑药物递送来实现本文所述化合物以及本文所述其它活性剂在脑中更高并且希望更有效的药物浓度。天然化合物紫苏醇可以通过鼻内施用，例如作为气雾剂施用。

GBM肿瘤包含显示缺氧的组织区域，其对放射治疗具有高度抗性。放射增敏剂可以与放射疗法共同施用。氧扩散增强化合物如反式西红花酸钠是放射增敏剂的例子。硼中子俘获疗法已被测试为胶质母细胞瘤的替代疗法。

抗惊厥药(如苯妥英钠)可以共同施用，特别是在癫痫发作后。皮质类固醇(通常是地塞米松)可以减少癌周水肿(通过血脑屏障的重排)，减少质量效应，降低颅内压，减少头痛或嗜睡。

本文所述的化合物也可以与嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法组合。使用CLTX作为靶向结构域的CAR T细胞(CLTX-CAR T细胞)介导有效的抗GBM活性，并有效靶向缺乏其他GBM相关抗原表达的肿瘤(Wang等人,“Chlorotoxin-directed CAR T cells for specificand effective targeting of glioblastoma,”Science Translational Medicine,Vol.12,Issue 533,eaaw2672(2020年3月))。也可以使用使用IL13Rα2、Her2/CMV、EGFRvIII、CSPG4、NKG2DL、CD19和CD133作为靶向结构域的CAR T细胞疗法。代表性疗法包括Novartis的Kymriah和Gilead Sciences的Yescarta。

MP-Pt(IV)是用于治疗胶质母细胞瘤的MAOB敏感性线粒体特异性前药，其也可以与本文所述的化合物组合。

RIPGBM(N-[1,4-二氢-1,4-二氧代-3-[(苯基甲基)氨基]-2-萘基]-N-[(4-氟苯基)甲基]乙酰胺)是一种RIPK2调节剂，并且是cRIPGM的前药。该化合物在多形性胶质母细胞瘤癌症干细胞系中选择性诱导细胞凋亡，并且是口服生物可利用的和脑渗透的。结构如下所示:

(Ribociclib)，细胞周期蛋白D1/CDK4和CDK6的抑制剂，是另一种可以与本文所述化合物组合的抗癌药物。

鉴于GBM的侵袭特性，预期这些活性剂中的一种或多种可与本文所述的化合物组合，以通过多种生物途径攻击GBM。

当用于治疗创伤性脑损伤时，该化合物可以与氨甲环酸(在损伤后不久施用)、镇静剂、止痛剂和麻痹剂共同施用，同时控制颅内压(ICP)、抗癫痫药物，例如苯妥英和左乙拉西坦(leviteracetam)，和去甲肾上腺素或帮助维持脑灌注的类似药物、鼻内胰岛素(如美国专利号10,314,911中所述)和VLA-1(极迟激活抗原-I)拮抗剂。

当用于治疗中风时，所述化合物可与抑制血凝块形成的化合物(例如血液稀释剂)或分解现有血凝块的化合物(例如组织纤溶酶原激活剂(TPA)、依替巴肽(eptifibatide)、阿昔单抗(ReoPro)或替罗非班(Aggrastat))共同施用。

血液稀释剂防止血凝块形成，并防止现有的血凝块变大。有两种主要的血液稀释剂。抗凝剂(如肝素或华法林(也称为香豆素))可以减缓产生血凝块的生物过程，抗血小板聚集药物(如波立维、阿司匹林)可以防止称为血小板的血细胞聚集在一起形成血凝块。

举例来说，通常以180mcg/kg的剂量在诊断后尽快静脉推注施用，以2mcg/kg/min连续输注(在初始推注后)长达96小时的治疗。

代表性的血小板聚集抑制剂包括糖蛋白IIB/IIIA抑制剂、磷酸二酯酶抑制剂、腺苷再摄取抑制剂和腺苷二磷酸(ADP)受体抑制剂。这些可以任选地与抗凝血剂组合施用。

代表性的抗凝剂包括香豆素类(维生素K拮抗剂)、肝素及其衍生物(包括普通肝素(UFH)、低分子量肝素(LMWH)和超低分子量肝素(ULMWH))、Xa因子的合成戊糖抑制剂(包括磺达肝素(Fondaparinux)、依达肝素(Idraparinux)和Idrabiotaparinux)、直接作用的口服抗凝剂(DAOCs)(例如达比加群、利伐沙班、阿哌沙班、依多沙班和贝曲沙班)以及抗凝血酶蛋白治疗剂/凝血酶抑制剂(例如二价药物水蛭素、重组水蛭素和比伐卢定和一价阿加曲班)。

代表性的血小板聚集抑制剂包括普伐他汀、Plavix(硫酸氢氯吡格雷)、Pletal(西洛他唑)、Effient(普拉格雷)、Aggrenox(阿司匹林和双嘧达莫)、Brilinta(替格瑞洛)、卡拉西单抗(caplacizumab)、Kengreal(坎格雷洛)、潘生丁(双嘧达莫)、噻氯匹定(噻氯匹定)、Yosprala(阿司匹林和奥美拉唑)。

所述化合物还可以与神经保护剂(例如溶血栓剂)、红细胞生成刺激剂(例如促红细胞生成素、达贝泊汀和促红细胞生成素α)、ET_B受体激动剂(例如IRL-1620)、ET_A受体激动剂(例如磺酰异噁唑、克拉生坦、阿曲生坦、替唑生坦、波生坦、西他生坦、恩拉生坦、BMS207940、BMS193884、BMS182874、J 104132、VML 588/Ro 61 1790、T-0115、TAK 044、BQ788、TBC2576、TBC3214、PD180988、ABT 546、SB247083、RPR118031A和BQ123)，以及阿加曲班、alfimeprase、替奈普酶、安克洛酶、西地那非、胰岛素、胰岛素生长因子、硫酸镁、人血清白蛋白、咖啡因醇、微磷脂酶、他汀、依替巴肽、依那卡丁、胞磷胆碱、依达拉奉、西洛他唑及其混合物共同施用。

联合使用的用于ROR相关病况的其他药物包括但不限于以下：胆固醇生物合成抑制剂(HMG CoA还原酶抑制剂，例如洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、尼伐他汀和利伐他汀)；角鲨烯环氧酶抑制剂(例如特比萘芬)；血浆HDL升高剂(例如CETP抑制剂，例如安塞曲匹、R1658)；人过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ激动剂(例如噻唑烷二酮，例如罗格列酮、曲格列酮和吡格列酮)；PPARα激动剂(例如，氯贝丁酯(clofibrate)、非诺贝特和吉非贝尼)；PPAR双α/γ激动剂(例如莫格列扎(muraglitazar)、阿格列扎(aleglitazar)、培格列扎(peliglitazar)、elafibranor)；法呢类X受体(FXR)调节剂(例如奥贝胆酸(obeticholic acid)、LMB763、LJN45等)；胆汁酸螯合剂(例如，阴离子交换树脂或季胺(例如，消胆胺或考来替泊(colestipol)))；胆汁酸转运抑制剂(BATi)；烟酸、烟酰胺；胆固醇吸收抑制剂(例如依折麦布(ezetimibe))；酰基辅酶A:胆固醇O-酰基转移酶(ACAT)抑制剂(例如阿伐麦布(avasimibe))；选择性雌激素受体调节剂(例如雷洛昔芬或他莫昔芬)；LXRα或β激动剂、拮抗剂或部分激动剂(例如22(R)-羟基胆固醇、24(S)-羟基胆固醇、T0901317或GW3965)；微粒体甘油三酸酯转移蛋白(MTP)抑制剂、抗糖尿病药例如胰岛素和胰岛素类似物(例如LysPro胰岛素、包含胰岛素的吸入制剂；磺酰脲类和类似物(例如甲苯磺酰胺、氯丙酰脲、格列吡嗪(glipizide)、格列美脲、格列本脲(glyburide)、格列本脲(glibenclamide)、甲苯磺丁脲、醋磺环已脲、格列吡嗪(glypizide))、双胍(例如二甲双胍或二甲双胍盐酸盐、苯乙双胍、丁双胍)α2拮抗剂和咪唑啉(例如咪格列唑(midaglizole)、伊格列醇(isaglidole)、德格列哚(deriglidole)、咪唑克生(idazoxan)、依法克生(efaroxan)、氟洛克生(fluparoxan))、噻唑烷二酮(例如吡格列酮盐酸盐、罗格列酮马来酸酯、西格列酮、曲格列酮或巴格列酮)、α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如米格列醇、阿卡波糖、依帕司他或伏格列波糖)、美格列奈(例如瑞格列奈或那格列奈)、DPP-4抑制剂(例如磷酸西他列汀、沙格列汀、维达列汀、阿格列汀或地格列汀(denagliptin))、肠降血糖素(例如胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂(例如艾塞那肽)(Byetta^TM)、NN2211(利拉鲁肽)、GLP-1(7-36)酰胺及其类似物、GLP-1(7-37)及其类似物、AVE-0010(ZP-10)、R1583(他司鲁泰(Taspoglutide))、GSK-716155(阿比鲁泰，GSK/人类基因组科学)、BRX-0585(辉瑞/Biorexis)和CJC-1134-PC(Exendin-4:PC-DAC^TM和葡萄糖依赖性促胰岛素肽(GIP))；胰岛淀粉样多肽激动剂(例如普兰林肽、AC-137)；胰岛素促泌剂(例如利诺格列(linogliride)、那格列奈、瑞格列奈、米格列奈钙水合物(mitiglinide calcium hydrate)或美格列奈)；SGLT-2抑制剂(例如达格列净(BMS)、舍格列净(Kissei)、AVE 2268(Sanofi-Aventis)；葡糖激酶激活剂，例如WO 00/58293A1中公开的化合物；抗肥胖药，例如神经生长因子激动剂(例如，阿索开(axokine))、生长激素激动剂(例如AOD-9604)、肾上腺素摄取抑制剂(例如GW-320659)、5-HT(血清素)再摄取/转运抑制剂(例如氟西汀(Prozac))、5-HT/NA(血清素/去甲肾上腺素)再摄取抑制剂(例如西布曲明)、DA(多巴胺)再摄取抑制剂(例如安非他酮)、5-HT、NA和DA再摄取阻滞剂、甾体植物提取物(例如P57)、NPY1或5(神经肽Y Y1或Y5)拮抗剂、NPY2(神经肽Y Y2)激动剂、MC4(黑皮质素4)激动剂、CCK-A(胆囊收缩素A)激动剂、GHSR1a(生长激素促分泌素受体)拮抗剂/反向激动剂、生长素肽抗体、MCH1R(黑色素浓缩激素1R)拮抗剂(例如SNAP 7941)、MCH2R(黑色素浓缩激素2R)激动剂/拮抗剂、H3(组胺受体3)反向激动剂或拮抗剂、H1(组胺1受体)激动剂、FAS(脂肪酸合酶)抑制剂、ACC-1(乙酰辅酶A羧化酶-1)抑制剂、β3(β肾上腺素能受体3)激动剂、DGAT-2(二酰甘油酰基转移酶2)抑制剂、DGAT-1(二甘油甘油酰基转移酶1)抑制剂、CRF(促肾上腺皮质激素释放因子)激动剂、甘丙肽拮抗剂、UCP-1(解偶联蛋白-1)、2或3激活剂、瘦蛋白或瘦蛋白衍生物、阿片样物质拮抗剂、食欲素拮抗剂、BRS3激动剂，GLP-1(胰高血糖素样肽1)激动剂、IL-6激动剂、α-MSH激动剂、AgRP拮抗剂、BRS3(铃蟾肽受体亚型3)激动剂、5-HT1B激动剂、POMC拮抗剂、CNTF(纤毛神经营养因子或CNTF衍生物)、NN2211、托吡酯、糖皮质激素拮抗剂、艾塞那肽-4激动剂、5-HT2C(血清素受体2C)激动剂(例如氯卡色林(Lorcaserin))、PDE(磷酸二酯酶)抑制剂、脂肪酸转运蛋白抑制剂、二羧酸酯转运蛋白抑制剂、葡萄糖转运蛋白抑制剂、CB-1(大麻素1受体)反向激动剂或拮抗剂(例如SR141716)、脂肪酶抑制剂(例如奥利司他)；环氧合酶-2(COX-2)抑制剂(例如罗非考昔和塞来昔布)；凝血酶抑制剂(例如肝素、阿加曲班、美拉加群、达比加群)；血小板凝集抑制剂(例如糖蛋白IIb/IIIa纤维蛋白原受体拮抗剂或阿司匹林)；维生素B6及其药学上可接受的盐；维生素B12；维生素E；叶酸或其药学上可接受的盐或酯；抗氧化剂维生素，例如C、E和β-胡萝卜素；β阻滞剂(例如血管紧张素II受体拮抗剂，如氯沙坦、厄贝沙坦或缬沙坦；血管紧张素转化酶抑制剂，例如依那普利和卡托普利；钙通道阻滞剂，例如硝苯地平和地尔硫卓；内皮拮抗剂；阿司匹林；脂肪酸/胆汁酸复合物(Aramchol)；半胱天冬酶抑制剂(emricasan)；免疫调节剂(Cenicriviroc等)；甲状腺激素受体调节剂(MB07811、MGL-3196等)；除LXR配体以外的可增强ATP结合盒式转运蛋白-Al基因表达的药剂；以及双膦酸盐化合物(例如阿仑膦酸钠)。

在某些实施方案中，通式(A)的化合物与至少一种其他修饰宿主代谢的剂组合，例如但不限于克拉霉素、可比司他(cobicistat)、茚地那韦、伊曲康唑、酮康唑、奈法唑酮、利托那韦、沙奎那韦、舒倍生(suboxone)、泰利霉素(telithromycin)、阿瑞匹坦、红霉素、氟康唑、维拉帕米、地尔硫卓、西咪替丁、胺碘酮、博普瑞韦(boceprevir)、氯霉素、环丙沙星、地拉韦啶、二乙基-二硫代氨基甲酸酯、氟伏沙明、孕二烯酮、伊马替尼、米贝地尔、米非司酮、诺氟沙星、诺氟西汀、特拉普韦和伏立康唑。

VII.药物组合物

可以通过向患者施用在药学上可接受的载体或稀释剂的存在下的有效量的活性化合物或其药学上可接受的前药或盐来治疗宿主，包括但不限于患有胰腺炎、中风、脑外伤或肌肉减少症的人类。活性物质可以通过任意合适的途径施用，例如以液体或固体形式口服、胃肠外、静脉内、皮内、皮下或局部施用。

优选的化合物剂量范围为每天约0.01至约10mg/kg之间，更通常为约0.1至5mg/kg之间，优选约0.5至约2mg/kg接收者的体重之间。药学上可接受的盐和前药的有效剂量范围可以基于待递送的母体化合物的重量来计算。如果盐或前药本身表现出活性，则可以使用盐或前药的重量如上估算有效剂量，或通过本领域技术人员已知的其他方法估算有效剂量。

化合物可方便地以任意合适的剂型单位施用，包括但不限于每单位剂型含有7至600mg，优选70至600mg活性成分的剂型。5-400mg的口服剂量通常是方便的。

药物组合物中活性化合物的浓度将取决于药物的吸收、失活和排泄速率以及本领域技术人员已知的其他因素。应注意，剂量值也将随待减轻的病况的严重程度而变化。还应理解的是，对于任意特定受试者，应根据个体需要和施用或监督组合物施用的人的专业判断随时间调整具体的剂量方案，并且本文所述的浓度范围仅是示例性的，并非旨在限制要求保护的组合物的范围或实践。活性成分可以一次施用，或者可以分成许多较小的剂量，以不同的时间间隔施用。

活性化合物的优选施用方式是口服。口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用载体。可以将它们封装在明胶胶囊中或压制成片剂。为了治疗性口服施用的目的，可以将活性化合物与赋形剂合并，并以片剂、锭剂或胶囊的形式使用。可以包含药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的一部分。

片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可以含有任意下列成分或类似性质的化合物：粘合剂如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖，崩解剂如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂如胶体二氧化硅；甜味剂如蔗糖或糖精；或调味剂如薄荷、水杨酸甲酯或橙味调味剂。当剂量单位形式是胶囊时，除了上述类型的材料外，它还可以含有液体载体如脂肪油。另外，单位剂型可含有改变剂量单位的物理形式的各种其他物质，例如糖、虫胶或其他肠溶剂的包衣。

化合物可以作为酏剂、悬浮液、糖浆、薄片剂(wafer)、咀嚼片等的组分施用。除活性化合物外，糖浆还可含有作为甜味剂的蔗糖和某些防腐剂、染料和着色剂和调味剂。

化合物或其药学上可接受的前药或盐也可以与不损害所需作用的其它活性物质混合，或与补充所需作用的物质混合，例如抗生素、抗真菌剂、抗炎剂或其它抗病毒化合物。用于肠胃外、皮内、皮下或局部施用的溶液或悬浮液可包括以下组分：无菌稀释剂如注射用水、盐溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及调节张力的试剂，如氯化钠或右旋糖。可以将肠胃外制剂封装在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。

如果静脉内施用，则优选的载体是生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。

透皮制剂

在一些实施方案中，组合物以透皮制剂的形式存在，例如在FDA批准的激动剂罗替戈汀(rotigitine)透皮贴剂(Neupro贴剂)中使用的制剂。另一种合适的制剂描述于题为“Transdermal Therapeutic System for Treating Parkinsonism”的美国公开号20080050424中。该制剂包括基于硅氧烷或丙烯酸酯的粘合剂，并且可包括增加活性物质的溶解度的添加剂，其量能有效增加基质对活性物质的溶解能力。

透皮制剂可以是单相基质(matrices)，其包括背衬层、含活性物质的自粘基质和在使用前要除去的保护膜。更复杂的实施方案包括还可以含有非粘性层和控制膜的多层基质。如果使用聚丙烯酸酯粘合剂，它可以与多价金属离子(如锌、钙、铝或钛离子)交联，例如乙酰丙酮铝和乙酰丙酮钛。

当使用有机硅粘合剂时，它们通常是聚二甲基硅氧烷。然而，原则上可能存在其他有机残基，例如乙基或苯基，而不是甲基。因为活性化合物是胺，所以使用耐胺粘合剂可能是有利的。代表性的耐胺粘合剂描述于例如EP 0 180 377中。

代表性的基于丙烯酸酯的聚合物粘合剂包括丙烯酸、丙烯酰胺、丙烯酸己酯、丙烯酸2-乙基己酯、丙烯酸羟乙酯、丙烯酸辛酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸甲酯、丙烯酸缩水甘油酯、甲基丙烯酸、甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸己酯、甲基丙烯酸2-乙基己酯、甲基丙烯酸辛酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸缩水甘油酯、乙酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮及其组合。

粘合剂必须具有适合于活性物质的溶解能力，并且活性物质必须能够在基质内移动，并且能够穿过接触表面到达皮肤。本领域技术人员可以容易地配制具有活性物质的适当透皮转运的透皮制剂。

某些药学上可接受的盐倾向于更优选用于透皮制剂，因为它们可以帮助活性物质通过角质层的屏障。实例包括脂肪酸盐，例如硬脂酸盐和油酸盐。油酸盐和硬脂酸盐是相对亲脂性的，甚至可以作为皮肤中的渗透增强剂。

也可以使用渗透增强剂。代表性的渗透增强剂包括脂肪醇、脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪酸酰胺、甘油或其脂肪酸酯、N-甲基吡咯烷酮、萜烯(如柠檬烯、α-蒎烯(pinene)、α-萜品醇、香芹酮、香芹醇、柠檬烯氧化物、蒎烯氧化物和1,8-桉叶油素)。

贴剂通常可以通过将活性剂溶解或悬浮在乙醇或另一种合适的有机溶剂中，然后在搅拌下加入粘合剂溶液来制备。可以向粘合剂溶液、活性物质溶液或向含活性物质的粘合剂溶液中添加额外的辅助物质。然后可以将溶液涂覆到合适的片材上，除去溶剂，将背衬层层压到基质层上，并从整个层压材料中冲出贴剂。

纳米颗粒组合物

本文所述的化合物还可以以纳米颗粒组合物的形式施用。在一个实施方案中，控释纳米颗粒制剂包含待施用的纳米颗粒活性剂和使药剂在施用后的释放延长的速率控制聚合物。在该实施方案中，组合物可在施用后持续约2至约24小时或多达30天或更长的时间释放活性剂。包含纳米颗粒形式的活性剂的代表性控释制剂描述于例如美国专利号8,293,277中。

纳米颗粒组合物可以包含本文所述活性剂的颗粒，其具有吸附在其表面上或与其表面结合的非交联表面稳定剂。

纳米颗粒的平均粒度通常小于约800nm，更通常小于约600nm，更通常小于约400nm，小于约300nm，小于约250nm，小于约100nm，或小于约50nm。在该实施方案的一个方面，当通过光散射技术测量时，至少50％的活性剂颗粒的平均粒度分别小于约800、600、400、300、250、100或50nm。

多种表面稳定剂通常与纳米颗粒组合物一起使用，以防止颗粒结块或聚集。代表性的表面稳定剂选自由以下组成的组：明胶、卵磷脂、葡聚糖、阿拉伯树胶、胆固醇、黄蓍胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、十八十六醇、聚西托醇(cetomacrogol)乳化蜡、脱水山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚乙二醇、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶体二氧化硅、磷酸酯、十二烷基硫酸钠、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、非结晶纤维素、硅酸铝镁、三乙醇胺、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、泰洛沙泊(tyloxapol)、泊洛沙姆(poloxamer)、泊洛沙胺(poloxamine)、泊洛沙胺908、磺基琥珀酸钠二烷基酯、月桂基硫酸钠、烷基芳基聚醚磺酸酯、蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的混合物、对异壬基苯氧基聚-(缩水甘油)、SA9OHCO、癸酰基-N-甲基葡糖酰胺、正癸基-D-吡喃葡萄糖苷、正癸基-D-吡喃麦芽糖苷、正十二烷基-D-吡喃葡萄糖苷、正十二烷基-D-麦芽糖苷、庚酰基-N-甲基葡糖酰胺、正庚基-D-吡喃葡萄糖苷、正庚基-D-硫代葡萄糖苷、正己基-D-吡喃葡糖苷、壬酰基-N-甲基葡糖酰胺、正壬基-D-吡喃葡萄糖苷、辛酰基-N-甲基葡糖酰胺、正辛基-D-吡喃葡萄糖苷和辛基-D-硫代吡喃葡萄糖苷。溶菌酶也可用作纳米颗粒组合物的表面稳定剂。已知某些纳米颗粒如聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)-纳米颗粒在通过静脉内(IV)或皮下(SQ)给药时靶向肝脏。

可以将纳米颗粒配制到其中的代表性速率控制聚合物包括壳聚糖、聚环氧乙烷(PEO)、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯、阿拉伯树胶、琼脂、瓜尔胶、谷物胶、葡聚糖、酪蛋白、明胶、果胶、角叉菜胶、蜡、虫胶、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素(HPC)、羟乙基纤维素(HEC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(CMC)、聚(乙烯)氧化物、烷基纤维素、乙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、亲水性纤维素衍生物、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、乙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、乙酸偏苯三酸纤维素、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、乙酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、聚乙烯醇缩乙醛二乙氨基乙酸酯、聚(甲基丙烯酸烷基酯)、聚(乙酸乙烯酯)、衍生自丙烯酸或甲基丙烯酸及其各自的酯的聚合物和衍生自丙烯酸或甲基丙烯酸及其各自的酯的共聚物。

制备纳米颗粒组合物的方法描述于例如美国专利号5,518,187和5,862,999，均关于“Method of Grinding Pharmaceutical Substances”；美国专利号5,718,388，关于“Continuous Method of Grinding Pharmaceutical Substances”；和美国专利号5,510,118，关于“Process of Preparing Therapeutic Compositions ContainingNanoparticles”。

纳米颗粒组合物还描述于例如美国专利号5,298,262关于“Use of Ionic CloudPoint Modifiers to Prevent Particle Aggregation During Sterilization”；美国专利号5,302,401关于“Method to Reduce Particle Size Growth DuringLyophilization”；美国专利号5,318,767关于“X-Ray Contrast Compositions Useful inMedical Imaging”；美国专利号5,326,552关于“Novel Formulation ForNanoparticulate X-Ray Blood Pool Contrast Agents Using High Molecular WeightNon-ionic Surfactants”；美国专利号5,328,404关于“Method of X-Ray Imaging UsingIodinated Aromatic Propanedioates”；美国专利号5,336,507关于“Use of ChargedPhospholipids to Reduce Nanoparticle Aggregation”；美国专利号5,340,564关于“Formulations Comprising Olin 10-G to Prevent Particle Aggregation andIncrease Stability”；美国专利号5,346,702关于“Use of Non-Ionic Cloud PointModifiers to Minimize Nanoparticulate Aggregation During Sterilization”；美国专利号5,349,957关于“Preparation and Magnetic Properties of Very SmallMagnetic-Dextran Particles”；美国专利号5,352,459关于“Use of Purified SurfaceModifiers to Prevent Particle Aggregation During Sterilization”；美国专利号5,399,363和5,494,683，均关于“Surface Modified Anticancer Nanoparticles”；美国专利号5,401,492关于“Water Insoluble Non-Magnetic Manganese Particles as MagneticResonance Enhancement Agents”；美国专利号5,429,824关于“Use of Tyloxapol as aNanoparticulate Stabilizer”；美国专利号5,447,710关于“Method for MakingNanoparticulate X-Ray Blood Pool Contrast Agents Using High Molecular WeightNon-ionic Surfactants”；美国专利号5,451,393关于“X-Ray Contrast CompositionsUseful in Medical Imaging”；美国专利号5,466,440关于“Formulations of OralGastrointestinal Diagnostic X-Ray Contrast Agents in Combination withPharmaceutically Acceptable Clays”；美国专利号5,470,583关于“Method ofPreparing Nanoparticle Compositions Containing Charged Phospholipids toReduce Aggregation”；美国专利号5,472,683关于“Nanoparticulate Diagnostic MixedCarbamic Anhydrides as X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and LymphaticSystem Imaging”；美国专利号5,500,204关于“Nanoparticulate Diagnostic Dimers asX-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging”；美国专利号5,518,738关于“Nanoparticulate NSAID Formulations”；美国专利号5,521,218关于“Nanoparticulate Iododipamide Derivatives for Use as X-Ray Contrast Agents”；美国专利号5,525,328关于“Nanoparticulate Diagnostic Diatrizoxy Ester X-RayContrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging”；美国专利号5,543,133关于“Process of Preparing X-Ray Contrast Compositions ContainingNanoparticles”；美国专利号5,552,160关于“Surface Modified NSAID Nanoparticles”；美国专利号5,560,931关于“Formulations of Compounds as NanoparticulateDispersions in Digestible Oils or Fatty Acids”；美国专利号5,565,188关于“Polyalkylene Block Copolymers as Surface Modifiers for Nanoparticles”；美国专利号5,569,448关于“Sulfated Non-ionic Block Copolymer Surfactant as StabilizerCoatings for Nanoparticle Compositions”；美国专利号5,571,536关于“Formulationsof Compounds as Nanoparticulate Dispersions in Digestible Oils or FattyAcids”；美国专利号5,573,749关于“Nanoparticulate Diagnostic Mixed CarboxylicAnhydrides as X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic SystemImaging”；美国专利号5,573,750关于“Diagnostic Imaging X-Ray Contrast Agents”；美国专利号5,573,783关于“Redispersible Nanoparticulate Film Matrices WithProtective Overcoats”；美国专利号5,580,579关于“Site-specific Adhesion Withinthe GI Tract Using Nanoparticles Stabilized by High Molecular Weight,LinearPoly(ethylene Oxide)Polymers”；美国专利号5,585,108关于“Formulations of OralGastrointestinal Therapeutic Agents in Combination with PharmaceuticallyAcceptable Clays”；美国专利号5,587,143关于“Butylene Oxide-Ethylene Oxide BlockCopolymers Surfactants as Stabilizer Coatings for NanoparticulateCompositions”；美国专利号5,591,456关于“Milled Naproxen with HydroxypropylCellulose as Dispersion Stabilizer”；美国专利号5,593,657关于“Novel Barium SaltFormulations Stabilized by Non-ionic and Anionic Stabilizers”；美国专利号5,622,938关于“Sugar Based Surfactant for Nanocrystals”；美国专利号5,628,981关于“Improved Formulations of Oral Gastrointestinal Diagnostic X-Ray ContrastAgents and Oral Gastrointestinal Therapeutic Agents”；美国专利号5,643,552关于“Nanoparticulate Diagnostic Mixed Carbonic Anhydrides as X-Ray ContrastAgents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging”；美国专利号5,718,388关于“Continuous Method of Grinding Pharmaceutical Substances”；美国专利号5,718,919关于“Nanoparticles Containing the R(-)Enantiomer of Ibuprofen”；美国专利号5,747,001关于“Aerosols Containing Beclomethasone Nanoparticle Dispersions”；美国专利号5,834,025关于“Reduction of Intravenously Administered NanoparticulateFormulation Induced Adverse Physiological Reactions”；美国专利号6,045,829“Nanocrystalline Formulations of Human Immunodeficiency Virus(HIV)ProteaseInhibitors Using Cellulosic Surface Stabilizers”；美国专利号6,068,858关于“Methods of Making Nanocrystalline Formulations of Human ImmunodeficiencyVirus(HIV)Protease Inhibitors Using Cellulosic Surface Stabilizers”；美国专利号6,153,225关于“Injectable Formulations of Nanoparticulate Naproxen”；美国专利号6,165,506关于“New Solid Dose Form of Nanoparticulate Naproxen”；美国专利号6,221,400关于“Methods of Treating Mammals Using Nanocrystalline Formulations ofHuman Immunodeficiency Virus(HIV)Protease Inhibitors”；美国专利号6,264,922关于“Nebulized Aerosols Containing Nanoparticle Dispersions”；美国专利号6,267,989关于“Methods for Preventing Crystal Growth and Particle Aggregation inNanoparticle Compositions”；美国专利号6,270,806关于“Use of PEG-DerivatizedLipids as Surface Stabilizers for Nanoparticulate Compositions”；美国专利号6,316,029关于“Rapidly Disintegrating Solid Oral Dosage Form”，美国专利号6,375,986关于“Solid Dose Nanoparticulate Compositions Comprising a SynergisticCombination of a Polymeric Surface Stabilizer and Dioctyl SodiumSulfosuccinate”；美国专利号6,428,814关于“Bioadhesive nanoparticulatecompositions having cationic surface stabilizers”；美国专利号6,431,478关于“Small Scale Mill”；和美国专利号6,432,381关于“Methods for targeting drugdelivery to the upper and/or lower gastrointestinal tract”，所有这些都通过引用具体并入。此外，于2002年1月31日公开的美国专利申请号20020012675A1，关于“Controlled Release Nanoparticulate Compositions”，描述了纳米颗粒组合物，并且其通过引用具体并入。

无定形小颗粒组合物描述于例如美国专利号4,783,484关于“ParticulateComposition and Use Thereof as Antimicrobial Agent”；美国专利号4,826,689关于“Method for Making Uniformly Sized Particles from Water-Insoluble OrganicCompounds”；美国专利号4,997,454关于“Method for Making Uniformly-SizedParticles From Insoluble Compounds”；美国专利号5,741,522关于“Ultrasmall,Non-aggregated Porous Particles of Uniform Size for Entrapping Gas Bubbles Withinand Methods”；和美国专利号5,776,496，关于“Ultrasmall Porous Particles forEnhancing Ultrasound Back Scatter”。

某些纳米制剂可以通过以受控方式将药物释放到肠腔中来增强药物的吸收，从而减少溶解性问题。肠壁旨在吸收营养物并充当病原体和大分子的屏障。小的两亲性和亲脂性分子可以通过分隔到脂质双层中并通过被动扩散穿过肠上皮细胞而被吸收，而由于肠壁的内在性质，纳米制剂的吸收可能更复杂。纳米颗粒口服吸收的第一个物理障碍是覆盖肠和结肠腔表面的粘液屏障。粘液屏障包含不同的层，主要由被称为粘蛋白的高度糖基化的蛋白质组成，这些蛋白质可能会阻止某些纳米制剂的吸收。可以进行修饰以得到粘液渗透性增加的纳米制剂(Ensign等人，“Mucus penetrating nanoparticles:biophysical tooland method of drug and gene delivery,”Adv Mater 24:3887–3894(2012))。

穿过粘液层后，可以通过几个步骤来调节纳米制剂跨肠道上皮细胞的运输，包括细胞表面结合、内吞作用、细胞内运输和胞吐作用，从而实现可能涉及多个亚细胞结构的转胞吞作用(transcytosis)(跨细胞内部运输)。此外，纳米制剂还可以通过开放的紧密连接在细胞之间运输，这被定义为胞吞作用(paracytosis)。非吞噬途径包括网格蛋白(clathrin)介导的和小窝(caveolae)介导的内吞作用和巨胞饮作用，是通过口服途径吸收纳米制剂的最常见机制。

非口服施用可以提供多种益处，例如直接靶向到所需的作用部位和药物作用时间延长。已经针对纳米制剂对透皮施用进行了优化，例如固体脂质纳米颗粒(SLN)和NE，其特点是具有良好的生物相容性、较低的细胞毒性和理想的药物释放调节作用(Cappel和Kreuter,“Effect of nanoparticles on transdermal drug delivery.J Microencapsul8:369–374(1991))。鼻腔施用纳米制剂使它们能够通过内吞作用经由透粘膜途径或经由载体或受体介导的转运过程穿透鼻粘膜(Illum,“Nanoparticulate systems for nasaldelivery of drugs:a real improvement over simple systems？”J.Pharm.Sci 96:473–483(2007))，其中一个实例是鼻腔施用替扎尼定(tizanidine)的壳聚糖纳米颗粒，以提高小鼠的脑部渗透和药物功效(Patel等人,“Improved transnasal transport and brainuptake of tizanidine HCl-loaded thiolated chitosan nanoparticles foralleviation of pain,”J.Pharm.Sci101:690–706(2012))。肺部施用可以提供较大的表面积并相对容易进入。粘液屏障、气管支气管区域中的代谢酶和肺泡中的巨噬细胞通常是药物渗透的主要屏障。颗粒大小是决定纳米制剂在支气管树中扩散的主要因素，纳米级区域中的颗粒更可能到达肺泡区域，直径在1至5μm之间的颗粒有望在细支气管中沉积(Musante等人,“Factors affecting the deposition of inhaled porous drug particles,”JPharm Sci 91:1590–1600(2002))。对于较大的颗粒，已经显示出吸收受限，这可能是由于无法穿过空气-血液屏障。颗粒可以逐渐释放药物，从而药物可以渗透到血流中，或者颗粒可以被肺泡巨噬细胞吞噬(Bailey和Berkland,“Nanoparticle formulations inpulmonary drug delivery,”Med.Res.Rev.,29:196–212(2009))。

某些纳米制剂在吸收部位通过生物膜的渗透极小，对于这些纳米制剂，静脉注射施用可能是在体内获得有效分布的优选途径(Wacker,“Nanocarriers for intravenousinjection–The long hard road to the market,”Int.J.Pharm.,457:50–62.,2013)。

纳米制剂的分布可以根据所使用的递送系统、纳米制剂的特性、个体之间的变异性以及纳米制剂的药物流失率而变化很大。某些纳米颗粒，例如固体药物纳米颗粒(SDN)，能够改善药物吸收，这不需要它们完好无损地到达系统循环中。其他纳米颗粒在吸收过程中幸存，从而改变了所含药物的分布和清除率。

具有一定大小和组成的纳米制剂可以通过特征明确的过程(例如增强的渗透性和保留效应)在组织中扩散，而其他纳米制剂则在特定的细胞群中聚积，这使得一种纳米制剂可以靶向特定的器官。复杂的生物屏障可以保护器官免受外源性化合物的侵害，而血脑屏障(BBB)则是许多治疗剂的障碍。BBB中存在许多不同类型的细胞，包括内皮细胞、小胶质细胞、周细胞和星形胶质细胞，BBB表现出极为严格的紧密连接，以及高活性的外排机制，从而限制了大多数药物的渗透。通过BBB运输通常仅限于由特定转运蛋白携带的小的亲脂性分子和营养物质。调节纳米制剂向脑内扩散的最重要机制之一是通过脑毛细血管内皮细胞的内吞作用。

最近的研究已经将颗粒性质与纳米制剂的进入途径和在人类BBB内皮屏障中的加工过程相关联，表明未被包覆的纳米颗粒通过BBB的渗透有限，并且表面修饰会影响内吞作用的效率和机制(Lee等人,“Targeting rat anti-mouse transferrin receptormonoclonal antibodies through blood-brain barrier in mouse,”J.Pharmacol.Exp.Ther.292:1048-1052(2000))。因此，穿过BBB并递送本文所述的一种或多种化合物的表面修饰的纳米颗粒在本发明的范围内。

肝脏中的巨噬细胞是体内巨噬细胞总数的主要来源。肝脏中的枯否(Kupffer)细胞具有许多用于选择性吞噬被调理过的颗粒的受体(补体蛋白的受体和IgG片段可结晶部分的受体)。吞噬作用可以提供靶向巨噬细胞，并提供本文所述化合物的局部递送(即，在巨噬细胞内部的递送)的机制。

与聚乙二醇(PEG)相连的纳米颗粒与受体的相互作用极小，从而抑制了单核吞噬系统的吞噬(Bazile等人,“Stealth Me.PEG-PLA nanoparticles avoid uptake by themononuclear phagocytes system,”J.Pharm.Sci.84:493-498(1995))。

代表性的纳米制剂包括无机纳米颗粒、SDN、SLN、NE、脂质体、聚合物纳米颗粒和树枝状聚合物。本文所述的化合物可以包含在纳米制剂内部，或者在无机纳米颗粒和树枝状聚合物的一些情况下，化合物附着在表面上。也可以使用包含多于一种纳米制剂类别的元素的杂合纳米制剂。

SDN是不含脂质的纳米颗粒，它可以改善口服生物利用度和水溶性差的药物的暴露性(Chan,“Nanodrug particles and nanoformulations for drug delivery,”Adv.Drug.Deliv.Rev.63:405(2011))。SDN包含药物和稳定剂，它们是使用“自上而下(top-down)”(高压均质和湿磨)或自下而上(bottom-up)(溶剂蒸发和沉淀)方法生产的。

SLN由在室温下为固体的一种或多种脂质、乳化剂和水组成。使用的脂质包括但不限于甘油三酯、偏甘油酯、脂肪酸、类固醇和蜡。SLN最适合用于递送高度亲脂性药物。

在不混溶的液体中散布的小于1000nm的液滴被分类为NE。NE既用作疏水剂的载体又用作亲水剂的载体，并且可以口服、透皮、静脉内、鼻内和眼内施用。对于慢性疗法，口服施用可能是优选的，NE可以有效增强小分子、肽和蛋白质的口服生物利用度。

聚合纳米颗粒是固体颗粒，通常大小约为200-800nm，可以包括合成和/或天然聚合物，可以任选地将其聚乙二醇化以使吞噬作用减少到最低限度。与传统制剂相比，聚合纳米颗粒可以提高药物和其他物质的生物利用度。它们的清除率取决于几个因素，包括聚合物的选择(包括聚合物大小、聚合物电荷和靶向配体)，大于100nm的带正电的纳米颗粒主要通过肝脏清除(Alexis等人,Factors affecting the clearance and biodistributionof polymeric nanoparticles.Mol Pharm 5:505-515(2008))。

树枝状聚合物是树状的纳米结构聚合物，直径通常为10–20nm。

脂质体是包括磷脂双层的球形囊泡。可以利用多种脂质，以一定程度控制降解水平。除口服施用外，脂质体还可以通过多种方式施用，包括静脉内施用(McCaskill等人,2013)、透皮施用(Pierre和Dos Santos Miranda Costa,2011)、玻璃体内施用(Honda等人,2013)以及通过肺施用(Chattopadhyay,2013)。脂质体可以与合成聚合物结合，以形成脂质-聚合物杂合纳米颗粒，从而延伸其靶向体内特定部位的能力。脂质体包裹的药物的清除率取决于药物的释放和脂质体的破坏(吞噬细胞免疫细胞摄取脂质体、聚集、pH敏感性分解等)(Ishida等人,“Liposome clearance,”Biosci Rep 22:197-224(2002))。

这些纳米颗粒制剂中的一种或多种可以用于跨血脑屏障和适当的其他位置将本文所述的活性剂递送至巨噬细胞。

控释制剂

在一个优选的实施方案中，活性化合物与载体一起制备，所述载体将保护化合物免于从体内快速消除，例如控释制剂，包括但不限于植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。例如，肠溶包衣的化合物可用于保护胃酸的裂解。制备这种制剂的方法对于本领域技术人员来说是显而易见的。合适的材料也可以商购获得。

脂质体悬浮液(包括但不限于用针对病毒抗原的单克隆抗体靶向感染细胞的脂质体)也是优选的药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法制备，例如，如美国专利号4,522,811(通过引用并入)所述。例如，脂质体制剂可以通过如下方法制备：将适当的脂质(例如硬脂酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰磷脂酰胆碱、花生四烯酰磷脂酰胆碱(arachadoyl phosphatidyl choline)和胆固醇)溶解在无机溶剂中，然后蒸发无机溶剂，在容器的表面上留下干燥的脂质薄膜。然后将活性化合物的水溶液引入容器中。然后用手旋转容器以从容器的侧面释放脂质材料并分散脂质聚集体，从而形成脂质体悬浮液。

用于描述本发明的术语是本领域技术人员通常使用和已知的。如本文所用，以下缩写具有所指示的含义：

DCM 二氯甲烷

DIPEA N,N-二异丙基乙基胺

DME 二甲氧基乙烷

DMF 二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

EDCI N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐

EtOAc 乙酸乙酯

HATU 1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4，5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐

HOBt 羟基苯并三唑

MeOH 甲醇

THF 四氢呋喃

X-phos 2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯

VIII.制备活性化合物的一般方法

容易地制备活性化合物的方法是本领域已知的，并且是由已知方法的选择性组合得到的。本文公开的化合物可以如下文详细描述或通过本领域技术人员已知的其他方法来制备。本领域的普通技术人员将理解，可以在不脱离本发明的实质的情况下进行细节的变化，并且决不限制本发明的范围。

各种反应方案总结如下。

方案1化合物5的合成方法。

方案2中间体4的替代合成方法。

方案3化合物8和10的合成方法。

方案4化合物8和10的替代合成方法。

方案5通式15的化合物的合成方法。

方案6通式16的化合物的合成方法。

方案7通式17的化合物的合成方法。

方案8通式22的化合物的合成方法。

方案9通式22的化合物的替代合成方法。

通式A的化合物可以由本领域普通技术人员使用以下文献中概述的方法完成：(a)Wang,L.；Sullivan,G.M.；Hexamer,L.A.；Hasvold,L.A.；Thalji,R.；Przytulinska,M.；Tao,Z.F.；Li,G.；Chen,Z.；Xiao,Z.；Gu,W.Z,；Xue,J.；Bui,M.H.；Merta,P.；Kovar,P.；Bouska,J.J.；Zhang,H.；Park,C.；Stewart,K.D.；Sham,H.L.；Sowin,T.J.；Rosenberg,S.H.；Lin,N.H.J.Med.Chem.,2007,50(17),4162–4176；b)Hasvold LA1,Wang L,Przytulinska M,Xiao Z,Chen Z,Gu WZ,Merta PJ,Xue J,Kovar P,Zhang H,Park C,Sowin TJ,Rosenberg SH,Lin NH.Bioorg.Med.Chem.Lett.2008,18,2311-2315；c)Giannotti,D.；Viti,G.；Sbraci,P.；Pestellini,V.；Volterra,G.；Borsini,F.；Lecci,A.；Meli,A.；Dapporto,P.；Paoli,P.J.Med.Chem.,1991,34,1356–1362；c)Ramírez-Martínez,J.F.；González-Chávez,R.；Guerrero-Alba,R.；Reyes-Gutiérrez,P.E.；Martínez,R.；Miranda-Morales,M.；Espinosa-Luna,R.；González-Chávez,M.M.；Barajas-López,C.Molecules,2013,18,894-913并通过通用方案1-9完成。

在本文描述的方案中，如果中间体包括在某些步骤中可能干扰、分解或以其他方式转化的官能团，则可以使用合适的保护基团来保护此类官能团。这些步骤之后，可以对受保护的官能团(如果有的话)进行脱保护。

方案1化合物5的合成方法。

化合物5可以例如通过方案1中所述的化学方法获得。通式1的化合物与通式2的适当取代的硝基苯胺在Cu和无机碱(例如K₂CO₃、Na₂CO₃或Cs₂CO₃)的存在下反应可以提供中间体3。在醇溶剂体系中在氢气存在下例如使用Pt/C还原硝基或在EtOAc中使用SnCl₂还原硝基可得到通式4的化合物。化合物4可以在酸(例如HCl或对甲苯磺酸)的存在下环化(路线B)。可选地，可以在碱性条件下用例如LiOH在水和THF的混合物中处理化合物4，得到酸中间体，然后可以在经典的肽条件下使用偶联剂(例如HATU)在有机碱(例如Et₃N)存在下将其环化(路线A)。

方案2中间体4的替代合成方法。

通式4的化合物也可以通过使通式1的化合物与通式6的二胺在Cu和无机碱(例如K₂CO₃、Na₂CO₃或Cs₂CO₃)的存在下反应来制备。

方案3化合物8和10的合成方法。

通式8和10的化合物可以通过炔烃、烷基、烯烃、有机硼烷或有机锡烷衍生物在经典钯催化的Sonogashira、Heck、Suzuki或Stille偶联条件下的偶联反应从通式7或9的化合物获得，其中X是离去基团，例如卤素、三氟甲磺酸酯、甲磺酸酯或甲苯磺酸酯。

方案4化合物8和10的替代合成方法。

可选地，通式8和10的化合物可以通过通式7或9的化合物的硼化反应来制备，其中X是离去基团，例如卤素、三氟甲磺酸酯、甲磺酸酯或甲苯磺酸酯。然后，在经典的钯催化的Suzuki偶联条件下，中间体11和12可以与含有离去基团(如卤素、三氟甲磺酸酯、甲磺酸酯或甲苯磺酸酯)的芳基、杂芳基、烯烃、炔烃反应。

在一个实施方案中，R²和R³结合形成杂环，其可以包括五至七元环。

方案5通式15的化合物的合成方法。

通式15的化合物可以通过在碱性条件下用例如LiOH在水和THF的混合物中处理从由上述化学方法制得的通式的酯制备，得到酸中间体，然后可以在经典的肽条件下使用偶联剂(例如HATU)在有机碱(例如Et₃N)存在下与胺偶联。

方案6通式16的化合物的合成方法。

通式16的化合物可通过在碱的存在下用胺化剂如O-(2,4-二硝基苯基)羟基胺处理而获得。

方案7通式17的化合物的合成方法。

通式17的化合物可以通过用氧化剂(例如mCPBA)处理而获得。

方案8通式22的化合物的合成方法。

通式22的化合物可以通过方案8中所述的化学方法获得。通式18的化合物与通式19的适当取代的苯胺在有机碱(例如吡啶或三甲基胺)的存在下反应可以提供中间体20。在醇溶剂体系中在氢气存在下例如使用Pt/C还原硝基或在EtOAc中使用SnCl₂还原硝基可得到通式21的化合物。化合物21可以在Cu和无机碱(例如K₂CO₃、Na₂CO₃或Cs₂CO₃)存在下进行环化。

方案9通式22的化合物的替代合成方法。

可选地，通式22的化合物可以通过方案9中所述的化学反应获得。通式18的化合物与通式23的适当取代的苯胺在有机碱(例如吡啶或三乙基胺)的存在下反应可以提供中间体24。在醇溶剂体系中在氢气存在下例如使用Pt/C还原硝基或在EtOAc中使用SnCl₂还原硝基可得到通式25的化合物。可以使用例如NaNO₂、CF₃COOH和NaN₃进行25的叠氮化，以得到通式26的化合物。可以在高沸点溶剂(例如二己醚)中在高温下环化化合物26。

芳族环的取代反应

在以上所示的各种反应方案中，所述芳族环被各种R¹和R²取代基取代。本领域已知如何在芳族环上提供取代基。例如，在期望在一个或两个芳族环上提供取代的情况下，亲电子芳族取代可用于提供期望的官能度。例如，可以使用Friedel-Crafts烷基化/芳基化/酰化反应添加烷基、芳基、杂芳基、烷芳基、芳基烷基、烯基、炔基和酰基。可以使用其他亲电芳族取代反应，例如以提供卤素，例如通过原位形成氯鎓或溴鎓离子并使它们与芳族环反应，或通过形成锍或硝鎓离子以提供磺酰基或硝基。

使用适当的卤代烷基结构部分和路易斯酸进行Friedel Crafts烷基化反应。所述烷基结构部分形成碳正离子，来自芳基环的电子与碳正离子形成键，从而在芳基环上带正电荷。然后，芳基环失去质子。以此方式可以添加烷基和烷芳基结构部分(例如苄基结构部分)。

Friedel Crafts的酰化作用相似，但使用酰卤(例如酰氯)将酮结构部分置于环上。所述酰卤可以是烷基酸(例如乙酸、丙酸、丁酸等)或者可以是芳族酸(例如苯甲酸、对甲苯甲酸等)。

Friedel Crafts芳基化反应(也称为Scholl反应)是路易斯酸催化的带有两个芳基环的偶联反应。在偶联反应过程中失去的质子用作另外的催化剂。典型的试剂是二氯甲烷中的氯化铁(III)，二氯甲烷中的氯化铜(II)、PIFA和三氟化硼醚化物，在乙腈中的氯化钼(V)和四乙酸铅与BF₃。

取代反应通常发生在胺基的邻位或对位以及硝基的间位位置。因此，取决于所需的官能度和位置，可能期望从胺基开始并放置取代基。因此，通常使用该化学反应将位置3、6和8官能化。可以通过将胺基氧化成硝基，从而导致间位取代，进行萘环在胺基的间位(即位置2和7)的取代。然后可以将硝基还原回胺基。

方案10通式72、73和74的化合物的合成方法。

通式72、73和74的化合物可以通过方案10中所述的化学反应获得。磷酸酯中间体69、70和71可由68通过与卤素甲基磷酸酯在碱(例如但不限于NaH或Cs₂CO₃)的存在下反应形成。替代地，磷酸酯中间体69、70和71可以通过68与氯碘甲烷在碱例如但不限于NaH或Cs₂CO₃的存在下反应，然后与磷酸酯二酯盐反应来制备，其中盐可以是但不限于Na⁺、K⁺或四烷基铵。磷酸酯中间体69、70和71也可以通过使68首先与(卤素甲基)(4-氯苯基)硫烷反应，然后与氯反应，再将得到的N-氯甲基中间体与磷酸酯二酯盐取代而制成。最后，磷酸酯69、70和71当R₃＝tBu时可以在酸性条件下(例如但不限于在二恶烷中的HCl，在甲苯中的TFA，在水和乙腈中的AcOH)脱保护，或者当R₃＝Bn时，可以通过氢化反应脱保护。

掺入氘：

预期在ROR调节剂的代谢位点用氘单次或多次置换氢(碳-氢键变为碳-氘键)会减慢代谢速率。这可以提供相对较长的半衰期，以及较慢的从身体清除的速率。预计治疗性ROR调节剂的缓慢代谢会为治疗候选物增加额外的优势，而其他物理或生化特性不会受到影响。

将氘掺入到有机衍生物中的方法是本领域技术人员众所周知的。代表性方法公开于Angew.Chem.Int.Ed.Engl.2007,46,7744-7765。因此，使用这些技术，可以在本文所述的ROR调节剂中提供一个或多个氘原子。

参考以下非限制性实施例将更好地理解本发明。

实施例1

化合物1和化合物34-46的合成。

4-氟-3-硝基苯甲酸甲酯(28)

将4-氟-3-硝基苯甲酸27(10g，54mmol)在室温下溶解在甲醇(200mL)和浓H₂SO₄(1mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌过夜。反应完成后，将溶剂减压蒸发。将粗混合物用H₂O(200ml)稀释，并用NaHCO₃饱和溶液碱化。过滤沉淀的固体，用水(2x 100mL)洗涤，并在真空下干燥，得到化合物28，为白色固体(10.75g，84％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.54(dd,J＝7.3,2.3Hz,1H),8.31(ddd,J＝8.8,4.3,2.3Hz,1H),7.73(dd,J＝11.1,8.7Hz,1H),3.90(s,3H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆):158.7,156.0,136.9,136.8(d,J＝10.8Hz),127.1(d,J＝1.6Hz),126.7(d,J＝3.9Hz),119.4(d,J＝21.7Hz),52.9；¹⁹F NMR(377MHz,DMSO)δ-111.97。

4-((2-(甲氧基羰基)苯基)氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(30)

在室温下，在惰性气氛下向4-氟-3-硝基苯甲酸甲酯28(1g，6.61mmol)在NMP(20mL)中的溶液中添加DIPEA(0.76ml，19.83mmol)和4-氟-3-硝基苯甲酸甲酯29(1.5g，9.92mmol)。将混合物在120℃搅拌14h，反应完成后，将混合物冷却至室温，用乙醚(20ml)稀释并搅拌1h。过滤获得的固体，用EtOAc(20mL)洗涤，并在真空下干燥，得到化合物30，为黄色固体(996mg，45％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.15(s,1H),8.66(d,J＝2.1Hz,1H),8.09–7.96(m,2H),7.71–7.61(m,2H),7.59(d,J＝9.0Hz,1H),7.29(ddd,J＝8.2,5.9,2.1Hz,1H),3.87(s,6H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO):δ166.6,164.5,142.7,139.7,135.4,134.7,133.9,131.5,128.0,124.2,121.9,120.4,120.0,117.8,52.5,52.3。

3-氨基-4-((2-(甲氧基羰基)苯基)氨基)-苯甲酸甲酯(31)

将4-((2-(甲氧基羰基)苯基)氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯30(2.5g，7.5mmol)和10％Pd/C(1.25g，50％湿)的MeOH溶液在室温下在氢气气氛中搅拌16小时。反应完成后，将混合物通过硅藻土过滤并用20％ MeOH/DCM(250mL)洗涤。将滤液浓缩，并将粗残余物通过快速柱色谱法纯化(AcOEt/己烷3/7)，得到化合物31，为黄色固体(1.4g，62％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.93(s,1H),7.91(d,J＝8.4Hz,1H),7.52–7.36(m,2H),7.21(s,2H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),6.88–6.72(m,1H),5.19(s,2H),3.85(s,3H),3.80(s.3H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ167.9,166.3,146.7,142.2,134.3,131.2,130.6,125.5,121.9,118.1,117.7,116.2,114.9,112.3,51.9,51.8。

3-氨基-4-((2-羧基苯基)氨基)苯甲酸(32)

在室温下，向3-氨基-4-(((2-(甲氧基羰基)苯基)氨基)苯甲酸甲酯31(1.4g，4.66mmol)在THF：H₂O(2.5/1，105ml)的混合物中的溶液中添加一水合氢氧化锂(1.75g，41.9mmol)。将反应混合物在65℃下搅拌5小时，随后在真空下除去挥发物。用2N HCl将残余物的pH酸化至4。过滤沉淀的固体，用水(10mL)洗涤，并在真空下干燥，得到化合物32，为白色固体(1g，80％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.64(s,2H),9.20(s,1H),7.89(d,J＝7.9Hz,1H),7.44–7.31(m,2H),7.18(s,2H),6.91(d,J＝8.5Hz,1H),6.76(t,J＝7.5Hz,1H),5.06(s,2H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ169.8,167.4,147.3,142.1,134.0,131.7,130.4,126.6,121.9,118.4,117.3,116.5,114.5,112.8。

11-氧-10,11-二氢-5H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-8-甲酸(33)

将化合物32(1g，3.67mmol)和CDI(2.39g，14.6mmol)的THF(40mL)溶液在室温下在惰性气氛下搅拌24h。反应完成后，在真空下除去挥发物。用2N HCl将残余物的pH调节至2。过滤沉淀的固体，用戊烷(10mL)洗涤，并在真空下干燥，得到化合物33，为淡绿色固体(746g，80％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)12.66(s,1H),9.93(s,1H),8.28(s,1H),7.70(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.57–7.49(m,2H),7.36(td,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.02(dd,J＝17.0,8.1Hz,2H),6.91(t,J＝7.4Hz,1H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ167.4,166.7,148.8,143.8,133.5,132.3,129.2,126.0,125.0,122.5,122.2,121.1,119.4,119.2,SM(IS):m/z:255.4[M+1]。

通用步骤I

在0℃下，在惰性气体下向化合物33(100mg，0.393mmol)的DMF(5ml)溶液中加入EDCI、HCl(121mg，0.629mmol)、HOBt(85mg，6.29mmol)、胺(0.511mmol)和DIPEA(205ml,0.117mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌16-24h。反应完成后，加入水。过滤粗固体，并用水洗涤。粗残余物通过硅胶色谱法(DCM/甲醇)纯化，得到所需化合物。

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-10,11a-二氢-4aH-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11(5H)-酮(化合物1)

按照通用步骤I，由4-苄基哌啶(91ml，0.511mmol)制备化合物1。柱色谱法：DCM/甲醇(95:5)；淡黄色固体(111mg,68％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.91(s,1H),8.06(s,1H),7.68(d,J＝7.8Hz,1H),7.34(t,J＝7.8Hz,1H),7.27(t,J＝7.8Hz,2H),7.16(d,J＝7.8Hz,3H),7.05-6.99(m,4H),6.89(d,J＝7.8Hz,1H),4.34(s,1H),3.67(s,1H),2.78(s,2H),2.52(s,2H),1.75(s,1H),1.56(s,2H),1.17–1.02(m,2H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ168.2,167.6,149.6,140.7,140.0,133.4,132.2,130.6,129.3,129.0,128.1,125.8,123.4,122.5,120.9,120.0,119.4,119.1,42.1,37.5,31.6；SM(IS):412.5m/z:[M+1]；对于C₂₆H₂₆N₃O₂的HRMS(ESI)[M+H]⁺计算值:412.1947,实测值:412.2018。

8-(4-苯基哌嗪-1-羰基)-5H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11(10H)-酮(34)

按照通用程序I，由4-苯基哌嗪(77ml，0.511mmol)制备化合物34。柱色谱法：DCM/甲醇(95:5)；米色固体(100mg,64％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.94(s,1H),8.12(s,1H),7.70(d,J＝7.7Hz,1H),7.37(t,J＝7.6Hz,1H),7.23(t,J＝7.9Hz,2H),7.06(d,J＝2.6Hz,3H),7.01(d,J＝8.0Hz,1H),6.97-6.93(m,3H),6.82(t,J＝7.2Hz,1H),3.72–3.52(m,4H),3.15(s,4H)；¹³CNMR(101MHz,DMSO-d₆)δ168.4,167.6,150.8,149.5,141.0,133.4,132.2,129.8,129.4,129.0,123.8,122.4,120.9,120.4,119.4,119.4,119.1,115.9,48.2；SM(IS):399.5m/z:[M+1]；C₂₄H₂₃N₄O₂的HRMS(ESI)[M+H]⁺计算值：399.1810，实测值399.1812

N-壬基-11-氧-10,11-二氢-5H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-8-甲酰胺(35)

按照通用步骤I，由壬胺(93μl，0.511mmol)制备化合物35。将反应混合物用水淬灭，并用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥并减压浓缩，最后通过柱色谱法纯化，用DCM/甲醇(99:1至95/5)洗脱；黄色固体(70mg，47％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.91(s,1H),8.24(t,J＝5.4Hz,1H),8.13(s,1H),7.69(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),7.47–7.39(m,2H),7.39–7.32(m,1H),7.00(dd,J＝7.9,5.4Hz,2H),6.91(t,J＝7.9Hz,1H),3.20(q,J＝6.6Hz,2H),1.49(d,J＝8.0Hz,2H),1.30–1.22(m,12H),0.85(t,J＝6.6Hz,3H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ167.5,165.3,149.4,142.4,133.4,132.2,129.5,129.2,123.2,122.4,121.0,120.9,119.1,119.0,31.3,29.1,29.0,28.8,28.7,26.5,22.1,14.0；SM(IS):380.2m/z:[M+1]；C₂₃H₃₀N₃O₂的HRMS(ESI)[M+H]⁺计算值：380.2327,实测值：380.2332。

8-(4-苄基哌嗪-1-羰基)-5H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11(10H)-酮(36)

按照通用步骤I，由1-苄基哌嗪(89ml，0.511mmol)制备化合物36。柱色谱法：DCM/甲醇(99:1to 95/5)；黄色固体(42mg,26％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)9.92(s,1H),8.09(s,1H),7.69(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.40–7.27(m,5H),7.25(td,J＝5.9,2.5Hz,1H),7.08–6.93(m,4H),6.91(t,J＝7.9Hz,1H),3.50(s,4H),3.36(s,2H),2.36(s,4H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)168.3,167.6,149.5,141.0,137.8,133.4,132.2,130.0,129.3,128.9,128.2,127.0,123.7,122.4,120.9,120.3,119.4,119.1,61.9,52.6；SM(IS):413.5m/z:[M+1]；C₂₅H₂₅N₄O₂的HRMS(ESI)[M+H]⁺计算值：413.1899，实测值：413.1970。

8-(4-(4-氟苄基)哌啶-1-羰基)-5H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11(10H)-酮(37)

按照通用步骤I，由4-(4-氟苄基)哌啶(99mg，0.511mmol)制备化合物37。柱色谱法：DCM:MeOH(99/1至95/5)；黄色固体(74mg,43％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.92(s,1H),8.07(s,1H),7.69(dd,J＝8.0,1.7Hz,1H),7.36(ddd,J＝8.0,7.2,1.7Hz,1H),7.24–7.19(m,2H),7.13–7.07(m,2H),7.04–6.95(m,4H),6.91(ddd,J＝8.0,7.2,1.7Hz,1H),4.36(s,1H),3.68(s,1H),2.86(s,2H),2.52(s,2H),1.75(s,1H),1.56(s,2H),1.11(qd,J＝12.3,4.2Hz,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆):δ133.4,132.2,130.7(d,J＝7.8Hz),123.4,120.9,120.0,119.3,119.1,114.8(d,J＝20.9Hz),41.1,37.5.¹⁹F NMR(377MHz,DMSO-d₆):δ-117.51(s).SM(IS):430.5m/z:[M+1]；C₂₆H₂₅FN₃O₂的HRMS(ESI)[M+H]⁺计算值：430.1853，实测值：430.1926。

8-(4-吗啉-4-羰基)-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(38)

按照通用步骤I，由吗啉(44ml，0.511mmol)制备化合物38。16小时后，将反应用水淬灭，并用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥并减压浓缩，通过柱色谱法纯化，用DCM/甲醇(99:1至95/5)洗脱；黄色固体(54mg，43％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.92(s,1H),8.10(s,1H),7.70(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),7.36(ddd,J＝8.6,7.9,1.7Hz,1H),7.06–6.94(m,4H),6.96–6.87(m,1H),3.58(d,J＝5.0Hz,4H),3.47(s,4H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆):δ168.5,167.6,149.5,141.1,133.4,132.2,129.6,129.4,123.8,122.4,120.9,120.5 119.4,119.1,66.2,40.1.SM(IS):324.5m/z:[M+1]；C₁₈H₁₈N₃O的HRMS(ESI)[M+H]⁺计算值：324.1270,实测值：324.1341

N-(3-(1H-咪唑-1-基)丙基)-11-氧-10,11-二氢-5H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-8-甲酰胺(39)

按照通用步骤I，由3-(1H-咪唑-1-基)丙烷-1-胺(0.511mmol)制备化合物39。16h后，加入30ml水，并将混合物用20ml乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤并在真空下蒸发。粗固体通过柱色谱法纯化，用DCM/甲醇(99:1至95/5)洗脱；黄色固体(40mg，28％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.92(s,1H),8.34(t,J＝5.6Hz,1H),8.15(s,1H),7.70(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.65(d,J＝1.3Hz,1H),7.53–7.41(m,2H),7.36(ddd,J＝8.7,7.2,1.7Hz,1H),7.21(d,J＝1.3Hz,1H),7.08–6.97(m,2H),6.93–6.87(m,2H),4.00(t,J＝6.9Hz,2H),3.19(q,J＝6.9Hz,2H),1.93(p,J＝6.9Hz,2H),¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆):δ167.5,165.7,149.3,142.5,137.3,133.4,132.2,129.3,129.2,128.4,123.3,122.4,121.0,121.0,119.3,119.1,119.0,43.7,36.4,30.8.SM(IS):362.4m/z:[M+1]；C₂₀H₂₀N₅O₂HRMS(ESI)[M+H]⁺计算值：362.1539,实测值：362.1609

8-(4-(2氟苄基)哌啶-1-羰基)-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(40)

按照通用步骤I，由4-(2-氟苄基)哌啶(99mg，0.511mmol)制备化合物40。柱色谱法：DCM:MeOH(99/1至95/5)；黄色固体(135mg,80％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ9.92(s,1H),8.08(s,1H),7.70(d,J＝7.8Hz,1H),7.36(t,J＝7.6Hz,1H),7.27(d,J＝8.6Hz,2H),7.14(q,J＝7.3Hz,2H),7.00(t,J＝5.9Hz,4H),6.92(t,J＝7.4Hz,1H),4.35(s,1H),3.69(s,1H),2.75(s,2H),2.58(d,J＝7.0Hz,2H),1.79(s,1H),1.58(s,2H),1.15(q,J＝12.5Hz,2H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ168.3,167.6,161.8,159.4,149.6,140.8,133.4,132.2,131.7(d,J＝5.1Hz),130.6,129.3,128.1(d,J＝8.3Hz),126.6(d,J＝15.9Hz),124.2(d,J＝3.3Hz),123.4,122.5,120.9,120.0,119.4,119.1,115.1(d,J＝22.3Hz),36.6,35.0,31.7.¹⁹F NMR(377MHz,DMSO-d₆)δ-118.26.,SM(IS):430.1m/z:[M+1]；C₂₆H₂₄FN₃O₂的HRMS(ESI)[M+H]⁺计算值：430.1853，实测值：430.1927。

8-(哌啶-1-羰基)-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(41)

按照通用步骤I，由哌啶(58ml，0.511mmol)制备化合物41。24h后，加入30ml水，并将混合物用20ml乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤并在真空下浓缩。粗固体通过柱色谱法纯化，用DCM/甲醇(99:1至95/5)洗脱；黄色固体(20mg，16％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.92(s,1H),8.07(s,1H),7.69(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.40–7.33(m,1H),7.05–6.96(m,4H),6.95–6.88(m,1H),3.42 -3.31(m,4H),1.60(q,J＝5.6Hz,2H),1.54–1.41(m,4H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ168.2,167.7,149.6,140.7,133.4,132.2,130.7,129.4,123.4,122.5,120.9,120.0,119.4,119.1,25.7,24.7；C₁₉H₂₀FN₃O₂的HRMS(ESI)[M+H]⁺计算值：322.1477，实测值：322.1548。

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-2-溴-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(42)

按照通用步骤I，由4-苯基哌啶(82mg，0.511mmol)制备化合物42。柱色谱法：DCM:MeOH(99/1至95/5)；黄色固体(67mg,43％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.94(s,1H),8.09(s,1H),7.70(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.38–7.32(m,1H),7.32–7.26(m,4H),7.21(d,J＝7.0Hz,1H),7.08–7.02(m,3H),7.00(dd,J＝8.1,1.1Hz,1H),6.94–6.88(m,1H),4.71–4.39(m,1H),3.95–3.66(m,1H),3.11–2.98(s,1H),2.80(t,J＝12.0Hz,2H),1.98–1.73(m,2H),1.61(td,J＝12.6,4.1Hz,2H).SM(IS):398.2m/z:[M+1]。

8-(4-苯乙基哌啶-1-羰基)5,10-二氢-11H-二苯并[b，e][1,4]二氮杂卓-11-酮(43)

按照通用步骤I，由4-苯乙基哌啶(96mg，0.511mmol)制备化合物43。柱色谱法：DCM/甲醇(99/1至95/5)；黄色固体(67mg,40％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆ 9.92(s,1H),8.07(s,1H),7.69(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.36(ddd,J＝8.5,7.9,1.7Hz,1H),7.28(t,J＝7.9Hz,2H),7.23–7.14(m,3H),7.03-6.97(d,J＝7.0Hz,4H),6.95–6.89(m,1H),4.38(s,1H),3.69(s,1H),2.90(s,2H),2.60(t,J＝7.5Hz,3H),1.73(s,2H),1.52(d,J＝7.4Hz,3H),1.22–0.99(m,H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)168.6,168.11,150.0,142.7,141.2,133.9,132.6,131.1,129.8,128.7,128.7,126.1,123.8,122.9,121.4,120.5,119.8,119.6,4,38.3,35.4,32.6.SM(IS):426.2m/z:[M+1]。

N-(1-苄基哌啶-4-基)-11-氧-10,11-二氢-5H-二苯并[b，e][1,4]二氮杂卓-8-甲酰胺(44)

按照通用步骤I，由1-苄基-4-氨基哌啶(104ml，0.511mmol)制备化合物44。柱色谱法：DCM/甲醇(99/1至95/5)；黄色固体(60mg,35％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)9.89(s,1H),8.14(s,1H),8.06(d,J＝7.6Hz,1H),7.69(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),7.45(d,J＝7.0Hz,2H),7.39–7.28(m,5H),7.27-7.23(m,1H),7.00(t,J＝7.9Hz,1H),6.95–6.85(m,1H),3.73(d,J＝7.0Hz,1H),3.46(s,2H),2.81(d,J＝9.8Hz,2H),2.01(s,2H),1.75(d,J＝12.4Hz,2H),1.56(td,J＝11.8,3.6Hz,2H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆):168.0,165.3,149.8,142.9,139.1,133.8,132.7,129.9,129.6,129.2,128.6,127.3,123.9,122.8,121.5,121.4,119.6,119.4,62.6,52.7,47.3,32.0.SM(IS):427.3m/z:[M+1]。

8-(4-苯甲酰基哌啶-1-羰基)-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(45)

按照通用步骤I，由4-苄甲酰基哌啶(89ml，0.511mmol)制备化合物45。柱色谱法：DCM/甲醇(99/1至95/5)；黄色固体(114mg,68％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)9.93(s,1H),8.09(s,1H),8.01(d,J＝7.7Hz,2H),7.74–7.61(m,2H),7.55(t,J＝7.5Hz,2H),7.42–7.31(m,1H),7.02(d,J＝7.4Hz,4H),6.91(t,J＝7.5Hz,1H),4.40(s,1H),3.86–3.65(m,1H),3.08(s,4H),1.82(s,2H),1.52(d,J＝13.8Hz,3H),¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆):δ201.7,168.4,167.6,149.5,140.8,135.4,133.4,133.26,132.2,130.3,129.3,128.8,128.2,123.5,122.4,120.9,120.0,119.4,119.1,42.4,28.5；SM(IS):426.2m/z:[M+1]。

8-(4-(3-氟苄基)哌啶-1-羰基)-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(46)

按照通用步骤I，用4-(3-氟苄基)哌啶盐酸盐(115mg，0.511mmol)制备化合物46。柱色谱法：DCM:MeOH(99/1to 95/5)；黄色固体(90mg,53％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.92(s,1H),8.07(s,1H),7.69(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.38–7.27(m,2H),7.03–6.96(m,7H),6.93–6.88(m,1H),4.35(s,1H),3.73(s,1H),2.78(s,2H),2.54(d,J＝7.1Hz,2H),1.87(s,1H),1.55(s,2H),1.11(qd,J＝12.1,4.1Hz,2H),¹⁹F NMR(377MHz,DMSO-d₆)δ-113.89(s),SM(IS):430.1m/z:[M+1]。

方案11化合物47-49的合成。

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-10-溴-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(47)

将化合物1(100mg，0.243mmol)溶解在1ml的DMF中，然后在室温下加入Cs₂CO₃(158mg，0.486mg)，接着加入MeI(16ml，0.267mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后用H₂O(20ml)稀释。过滤获得的固体，用5ml的H₂O洗涤，然后通过硅胶的柱色谱法(DCM/甲醇(99:1))纯化，得到化合物47，为白色固体(80mg，78％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.13(s,1H),7.67(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.40–7.33(m,1H),7.32–7.25(m,3H),7.20–7.12(m,4H),7.12–7.06(m,2H),7.00–6.95(m,1H),4.50–4.27(m,1H),3.80–3.56(m,1H),3.61(s,3H),3.10–2.82(m,1H),2.72-2.70(m,1H),2.53(s,2H),1.80–1.74(m,1H),1.67–1.47(m,2H),1.25–1.02(m,2H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ168.1,167.5,151.2,144.8,140.0,134.6,132.6,132.3,131.5,129.0,128.2,125.8,124.3,123.8,122.0,121.5,119.9,118.8,42.1,40.15,37.7,37.5,31.5.SM(IS):426.2m/z:[M+1]；C₂₇H₂₈N₃O₂HRMS(ESI)[M+H]⁺计算值：426.2103,实测值：426.2176。

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-10-丁基-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(48)

将化合物1(40mg，0.097mmol)溶解在0.5ml的DMF中，然后在室温下加入NaH(5mg，0.194mg)，接着加入BuI(12ml，0.106mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用H₂O(20ml)稀释。过滤获得的固体，用5ml的H₂O洗涤，并通过硅胶的柱色谱法(DCM/甲醇(99:1))纯化，得到化合物48，为白色固体(22.5mg，50％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.09(s,1H),7.68(dd,J＝7.8,1.7Hz,1H),7.43–7.37(m,2H),7.37–7.31(m,2H),7.24(ddd,J＝8.3,5.9,1.9Hz,4H),7.14(ddd,J＝16.2,8.2,1.5Hz,2H),7.03(ddd,J＝8.1,7.3,1.2Hz,1H),4.57–4.36(m,1H),4.08(s,2H),3.80–3.56(m,1H)3.10–2.86(m,2H),2.59(s,2H),1.88–1.77(m,1H),1.72–1.55(m,2H),1.50(dt,J＝14.2,6.8Hz,2H),1.32(dq,J＝14.2,7.3Hz,2H),1.26–1.15(m,2H),0.86(t,J＝7.3Hz,3H).SM(IS):468.1m/z:[M+1]。

10-苄基-8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(49)

将化合物1(40mg，0.097mmol)溶解在0.5ml的DMF中，然后在室温下加入Cs₂CO₃(63mg，0.191mmol)，接着加入苄基溴(13ml，0.106mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后用H₂O(20ml)稀释。过滤获得的固体，用5ml的H₂O洗涤，并通过硅胶上的柱色谱法(DCM/甲醇(99:1))纯化，得到化合物49，为白色固体(38mg，80％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.13(s,1H),7.69(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.39(ddd,J＝8.5,7.3,1.6Hz,1H),7.35–7.24(m,7H),7.22–7.13(m,4H),7.16–7.07(m,2H),7.05–6.96(m,2H),5.27(s,2H),4.54–4.06(m,1H),2.94–2.50(m,1H),2.48(d,J＝6.7Hz,1H),1.77–1.65(m,1H),1.61–1.38(m,2H),1.27–1.23(m,1H),1.04–0.97(m,1H),0.90–0.84(m,1H).SM(IS):502.6m/z:[M+1]。

化合物51和52的合成。

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-5-甲基-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(51)

按照通用步骤I，由化合物50(120mg，0.447mmol，WO2015138895)和4-苄基哌啶(104ml，0.581mmol)制备化合物51。柱色谱法：DCM/甲醇(99:1)；白色固体(113mg,59％)；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.30(s,1H),7.64(dd,J＝7.7,2.0Hz,1H),7.50(ddd,J＝8.2,7.3,1.8Hz,1H),7.27(dd,J＝8.3,6.5Hz,2H),7.24–7.14(m,5H),7.13–7.07(m,2H),7.04(d,J＝2.0Hz,1H),4.45-4.40(m,1H),3.66-3.6(m,1H),3.28(s,3H),2.99–2.82(m,1H),2.76–2.63(m,2H),2.52(s,1H),1.82–1.71(m,1H),1.69–1.45(m,2H),1.20–1.03(m,2H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ:168.2,168.0,152.4,145.0,140.0,132.9,132.1,131.7,131.0,129.0,128.1,126.7,125.8,123.3,122.8,119.8,119.0,117.7,42.1,40.15,39.94,,37.8,37.5,31.9；SM(IS):426.1m/z:[M+1]。

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-5,10-二甲基-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓

-11-酮(52)

将化合物51(50mg，0.117mmol)溶解在1ml的DMF中，然后在室温下加入Cs₂CO₃(76mg，0.235mg)，接着加入MeI(14ml，0.235mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h，然后用H₂O(20ml)稀释。过滤获得的固体，用5ml的H₂O洗涤，并通过硅胶的柱色谱法(DCM/甲醇(99:1))纯化，得到化合物52，为白色固体(33mg，65％)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.62(dd,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.46(ddd,J＝8.7,7.7,1.9Hz,1H),7.33(d,J＝1.9Hz,1H),7.31–7.24(m,3H),7.20–7.14(m,5H),7.09(td,J＝7.5,1.0Hz,1H),4.53–4.23(m,1H),3.60–3.57(m,1H),3.43(s,3H),3.35(s,3H),2.99–2.93(m,1H),2.72–2.63(m,1H),2.52(s,2H),1.85–1.69(m,1H),1.68–1.43(m,2H),1.20–1.05(m,2H)；¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ167.8,167.5,153.0,147.9,140.0,136.5,132.4,131.5,129.0,128.1,126.6,125.8,124.2,122.8,121.7,118.7,116.6,42.0,,37.4,37.4,37.0,31.9；SM(IS):m/z:440.5[M+1]。

化合物58的合成。

2-((2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基)氨基)-5-溴苯甲酸甲酯(55)

向3,4-二氨基苯甲酸甲酯54(2.051g，6.01mmol)在氯苯(20mL)中的溶液中加入5-溴-2-碘苯甲酸甲酯53(1g，6.01mmol)、K₂CO₃(0.87g，6.30mmol)和Cu(0.382g，6.01mmol)。将所述混合物加热回流18小时。趁热，将混合物通过硅藻土薄层过滤，并将滤饼用二氯甲烷洗涤。浓缩滤液，并将粗产物通过硅胶快速色谱纯化，用10％至100％CH₂Cl₂/己烷梯度洗脱，得到标题化合物55(1.1g，50％)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.14(bs,1H),8.09(d,J＝2.4Hz,1H),7.49(s,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,1H),7.38(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.21(d,J＝8.2Hz,1H),6.72(d,J＝9.0Hz,1H),3.93(s,3H),3.90(s,3H).C₁₆H₁₅BrN₂O₄的LR-MS计算值378.02，实测值379.3,381.3。

2-溴-11-氧-10,11-二氢-5H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-8-甲酸甲酯(56)

向在甲醇(35mL)中的化合物55(0.72g，1.9mmol)中加入浓HCl(7mL)，并将混合物加热至回流过夜。冷却至室温后，将反应混合物过滤并将滤饼用水洗涤以产生标题化合物56(0.63g，96％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.09(s,1H),8.52(s,1H),7.78(d,J＝2.5Hz,1H),7.59–7.52(m,3H),7.05(d,J＝8.2Hz,1H),6.96(d,J＝8.6Hz,1H),3.80(s,3H).C₁₅H₁₁BrN₂O₃的LR-MS计算值345.99，实测值347.0,349.0。

2-溴-11-氧-10,11-二氢-5H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-8-甲酸(57)

在室温下，向化合物4(0.6g，1.7mmol)在THF:H₂O(7:3，45mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化锂一水合物(0.435g，10.4mmol)。将所得溶液在65℃搅拌4h。通过TLC监测反应，反应完成后，真空除去挥发物。用2N HCl将残余物的pH酸化至约4。过滤沉淀的固体，用水(20mL)洗涤，并在真空下干燥，得到化合物5(0.570g，99％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.65(s,1H),10.00(s,1H),8.62(s,1H),7.70(d,J＝2.5Hz,1H),7.50–7.43(m,3H),7.04(d,J＝8.3Hz,1H),6.99(d,J＝8.7Hz,1H).C₁₉H₉BrN₂O₃的LR-MS计算值331.97，实测值333.3,335.3。

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-2-溴-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(58)

向化合物57(0.3g，0.90mmol)在5ml的DMF中的溶液中添加N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(0.276g，1.44mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBt)(0.194g，1.44mmol)、4-苄基哌啶(0.205mL，1.17mmol)，然后加入DIPEA(0.470mL，2.70mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时，用水淬灭，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并在真空下浓缩。然后将残余物悬浮在3mL乙酸乙酯中，之后添加30mL己烷。过滤沉淀物并用己烷(10mL)洗涤，得到标题化合物58(0.430g，97％)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ7.85(d,J＝2.4Hz,1H),7.44(dd,J＝8.6,2.5Hz,1H),7.28–7.23(m,2H),7.18–7.14(m,3H),7.06–6.97(m,3H),6.85(d,J＝8.6Hz,1H),4.63–4.44(m,1H),3.88–3.63(m,1H),3.11–2.92(m,1H),2.91–2.08(m,1H),2.86–2.69(m,1H),2.56(d,J＝5.7Hz,2H),1.91–1.54(m,3H),1.29–1.11(m,2H)。C₂₆H₂₄BrN₃O₂的LR-MS计算值：489.10,实测值：490.0,491.9。

化合物59的合成

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-2-乙烯基-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(59)

将化合物58(0.1g，0.204mmol)和乙烯基三氟硼酸钾(36mg，0.265mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(0.030，0.04mmol)和K₃PO₄·3H₂O(0.143g，0.674mmol)的混合物在DME:H₂O(2:1，4mL)中加热至回流16小时。冷却后，将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。乙酸乙酯层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶快速柱色谱法纯化，使用CH₂Cl₂:MeOH洗脱，得到标题化合物59(50mg，50％)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ7.82(d,J＝2.2Hz,1H),7.47(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),7.29-7.24(m,2H),7.19–7.15(m,3H),7.06–6.98(m,3H),6.91(d,J＝8.4Hz,1H),6.65(dd,J＝17.6,11.0Hz,1H),5.68(dd,J＝17.6,0.9Hz,1H),5.16(dd,J＝10.9,0.9Hz,1H),4.62-4.45(m,1H),3.85-3.70(m,1H),3.12–2.94(m,1H),2.86-2.69(m,1H),2.58(d,J＝7.1Hz,2H),1.88–1.55(m,3H),1.29–1.11(m,2H).C₂₈H₂₇N₃O₂的LR-MS计算值437.21，实测值438.5。

化合物60-66的合成。

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-2-(哌啶-3-基)-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(60)

将化合物58(0.025g，0.051mmol)和3-吡啶硼酸1,3-丙二醇酯(0.013，0.076mmol)、Pd₂(dba)₃CHCl₃(5.2mg，0.005mmol)、X-Phos(14.6mg，0.030mmol)和K₃PO₄ 3H₂O(0.035g，0.168mmol)的混合物在DME:H₂O(2:1，4mL)中加热至回流48小时。反应冷却至室温后，将混合物在乙酸乙酯和水之间分配。乙酸乙酯层用盐水洗涤，在硫酸镁上干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶快速柱色谱法纯化，使用CH₂Cl₂:MeOH洗脱，得到标题化合物59(19mg，78％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.04(s,1H),8.83(d,J＝2.6Hz,1H),8.53(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.32(s,1H),8.03–7.99(m,2H),7.76(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),7.48–7.44(m,1H),7.30–7.27(m,2H),7.20–7.12(m,4H),7.05–6.99(m,3H),4.50–4.18(m,1H),3.85–3.50(m,1H),3.05–2.58(m,2H),2.53(d,J＝7.7Hz,2H),1.84–1.71(m,1H),1.70–1.41(m,2H),1.18–1.06(m,2H)。C₃₁H₂₈N₄O₂的LR-MS计算值488.22，实测值489.2。

4-(8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-11-氧-10,11-二氢-5H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-2-基)苯甲酰胺(61)

通过用4-氨基羰基苯基硼酸代替3-吡啶硼酸1,3-丙二醇酯，按照制备化合物60所用的化学反应合成化合物61(63％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.03(s,1H),8.31(s,1H),8.09–7.91(m,4H),7.77(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.69(d,J＝8.5Hz,2H),7.38(s,1H),7.32–7.25(m,2H),7.22–7.09(m,4H),7.07–6.97(m,3H),4.58–4.14(m,1H),3.85–3.54(m,1H),3.05–2.53(m,4H),1.87–1.69(m,1H),1.68–1.43(s,2H),1.19–1.06(m,2H)。C₃₃H₃₀N₄O₃的LR-MS计算值530.23，实测值531.2。

4-(8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-11-氧-10,11-二氢-5H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-2-基)苯甲酸甲酯(62)

通过用4-甲氧基羰基苯基硼酸代替3-吡啶硼酸1,3-丙二醇酯，按照制备化合物60所用的化学反应合成化合物62(23％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.04(s,1H),8.36(s,1H),8.15–7.95(m,3H),7.88–7.71(m,3H),7.41–7.22(m,2H),7.23–7.09(m,4H),7.07–6.97(m,3H),4.54–4.17(m,1H),3.87(s,3H),3.79–3.52(m,1H),3.08–2.54(m,4H),1.84–1.71(m,1H),1.67–1.45(m,2H),1.18–1.03(m,2H).C₃₄H₃₁N₃O₄的LR-MS计算值545.23，实测值546.0。

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-2-(4-(甲基磺酰基)苯基)-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(63)

通过用4-(甲烷磺酰基)苯基硼酸代替3-吡啶硼酸1,3-丙二醇酯，按照制备化合物60所用的化学反应合成化合物63(85％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.05(d,J＝2.1Hz,1H),8.38(s,1H),8.07(d,J＝2.4Hz,1H),7.99–7.94(m,2H),7.92–7.86(m,2H),7.79(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.33–7.24(m,2H),7.21–7.11(m,4H),7.06–6.97(m,3H),4.55–4.16(m,1H),3.75–3.53(m,1H),3.24(s,3H),3.05–2.53(m,4H),1.83–1.68(m,1H),1.67–1.45(m,2H),1.18–1.03(m,2H)。C₃₃H₃₁N₃O₄S的LR-MS计算值565.20，实测值566.1。

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-2-(4-(三氟甲氧基)苯基)-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(64)

通过用4-(三氟甲氧基)苯基硼酸代替3-吡啶硼酸1,3-丙二醇酯，按照制备化合物60所用的化学反应合成化合物12(63％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.04(s,1H),8.30(s,1H),7.98(d,J＝2.4Hz,1H),7.75–7.64(m,3H),7.49–7.35(m,2H),7.27(dd,J＝8.3,6.4Hz,2H),7.21–7.08(m,4H),7.08–6.93(m,3H),4.58–4.17(m,1H),3.83–3.48(m,1H),3.07–2.53(m,4H),1.83–1.68(m,1H),1.67–1.40(m,2H),1.17–1.05(m,2H)。C₃₃H₂₈F₃N₃O₃的LR-MS计算值571.20，实测值572.2。

2-(苯并呋喃-2-基)-8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(65)

通过用2-苯并呋喃基硼酸代替3-吡啶硼酸1,3-丙二醇酯，按照制备化合物60所用的化学反应合成化合物65(52％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.07(s,1H),8.44(s,1H),8.25(d,J＝2.2Hz,1H),7.91(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),7.65–7.56(m,2H),7.38–7.22(m,5H),7.22–7.09(m,4H),7.07–6.94(m,3H),4.61–4.11(m,1H),3.87–3.51(m,1H),3.05–2.53(m,4H),1.84–1.69(m,1H),1.68–1.44(m,2H),1.26–1.00(m,2H)。C₃₄H₂₉N₃O₃的LR-MS计算值527.22，实测值528.2。

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-2-(1H-吡唑-4-基)-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(66)

通过用1H-吡唑--4-硼酸代替3-吡啶硼酸1,3-丙二醇酯，按照制备化合物60所用的化学反应合成化合物66(62％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.90(s,1H),9.98(s,1H),8.06(s,2H),7.87(d,J＝2.3Hz,2H),7.61(dd,J＝8.3,2.3Hz,1H),7.31–7.25(m,2H),7.21–7.15(m,3H),7.05–6.96(m,4H),4.68–4.17(m,1H),3.89–3.51(m,1H),3.03–2.53(m,4H),1.87–1.70(m,1H),1.67–1.37(m,2H),1.20–1.01(m,2H)。C₂₉H₂₇N₅O₂的LR-MS计算值477.21，实测值478.2。

化合物67的合成。

8-(4-苄基哌啶-1-羰基)-2-乙炔基-5,10-二氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂卓-11-酮(67)

将化合物58(0.100g，0.204mmol)、Pd(PPh₃)Cl₂(7.1mg，0.01mmol)、CuI(1.9mg，0.01mmol)、三苯膦(10.7mg，0.04mmol)、三甲基甲硅烷基乙炔(31L，0.224mmol)和二乙胺(0.29mL，2.76mmol)的混合物在二甲基甲酰胺(1mL)中在微波辐射下于120℃加热40min。过滤反应混合物，并用二氯甲烷洗涤。在减压下浓缩滤液并且残余物通过在硅胶上快速色谱进行纯化，得到63mg三甲基甲硅烷基保护的中间体。然后将该中间体用在甲醇(3mL)中的碳酸钾(68mg，4mmol)处理，并将反应混合物在室温搅拌1h。将反应混合物过滤，并将滤液减压浓缩，得到残余物，将其通过硅胶快速色谱纯化，得到标题化合物67(46mg，53％，分两个步骤)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.99(s,1H),8.39(s,1H),7.75(d,J＝2.1Hz,1H),7.42(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),7.33–7.23(m,2H),7.21–7.09(m,3H),7.04–6.65(m,4H),4.50–4.17(m,1H),4.07(s,1H),3.83–3.48(m,1H),3.08–2.53(m,4H),1.87–1.68(m,1H),1.67–1.43(m,2H),1.19–1.01(m,2H)。C₂₈H₂₅N₃O₂的LR-MS计算值435.19，实测值436.3。

实施例2

细胞毒性测定

如前所述，在人PBM、CEM(人淋巴母细胞)和Huh-7细胞中评估了化合物的毒性(参见Schinazi R.F.,Sommadossi J.-P.,Saalmann V.,Cannon D.L.,Xie M.-Y.,Hart G.C.,Smith G.A.&Hahn E.F.Antimicrob.Agents Chemother.1990,34,1061-67)。包括环己酰亚胺作为阳性细胞毒性对照，也包括未处理的暴露于溶剂的细胞作为阴性对照。使用先前描述的中值有效方法从浓度-反应曲线获得细胞毒性IC₅₀(参见Chou T.-C.&TalalayP.Adv.Enzyme Regul.1984,22,27-55；Belen’kii M.S.&Schinazi R.F.AntiviralRes.1994,25,1-11)。结果示于下表1中：

表1

实施例3

荧光素酶报告的RORα活性

用含有完整野生型(WT)RORα响应元件(RORE)或突变的RORE(mut)的miR-122启动子(从转录起始位点延伸到-900)的荧光素酶报告质粒转染Huh-7细胞。转染后一天(24小时)以指定浓度用化合物1处理细胞。处理24小时后测量荧光素酶表达，并将其标准化为由共转染的pRL质粒表达的海肾荧光素酶活性。提供海肾荧光素酶的构成性表达的pRL载体与萤火虫荧光素酶载体结合使用，以共转染细胞。海肾荧光素酶的表达提供了一个内部对照值，实验萤火虫荧光素酶报告基因的表达可被标准化为该对照值。

结果显示，使用WT RORE，化合物1的荧光素酶表达呈剂量依赖性增加。突变RORE使化合物1的活性无效。如图1所示，这些结果表明化合物1作为激动剂的RORα活性。

该测定法可用于评估本文所述的其他化合物。在化合物增加萤光素酶表达的情况下，它们是RORα激动剂，而在化合物减少萤光素酶表达的情况下，它们是RORα拮抗剂(或部分激动剂或变构抑制剂)。

实施例4

RORα调节的microRNA的表达。

将Huh-7细胞用1μM化合物1或载体(DMSO)处理24小时。通过qRT-PCR分析Huh-7细胞培养基中的分泌的microRNA水平，并针对尖刺秀丽隐杆线虫miR-39进行标准化。miR-18和miR-93用作分泌的microRNA的对照，加入化合物1后不受影响。结果示于图2中。

实施例5

Th17群体的调节

从四个健康供体中分离出人外周血单核细胞(PBMC)。进行了四个实验，并在三天的测试内通过流式细胞仪进行了分析。对照组没有药物处理，第二组用10μM化合物1处理，第三组未经处理用PHA/IL-2刺激，第四组用PHA/IL-2刺激并与10μM化合物1孵育。在图3A中所示的这些结果表明，即使在PHA/IL-2刺激下，化合物1也对CD4⁺T细胞的总活力没有影响。此外，在没有PHA/IL-2刺激的情况下，化合物1对Th17群体没有影响。如图3B所示，在PHA/IL-2刺激存在下相对于载体对照，化合物1减少了PBM细胞中的Th17总种群。

实施例6

C57BL/6小鼠中RORα调节的基因的调控。

用7.5mg/kg化合物1或生理盐水对照腹腔注射健康的C57BL/6小鼠一次。在注射后第1、2和7天的时间点处死小鼠。通过qRT-PCR确定每个时间点的miR-122和Gpase 6mRNA水平。MicroRNA水平标准化为RNU6；将血浆miR-122标准化为尖刺秀丽隐杆线虫miR-39；并且将mRNA水平标准化为HPRT。

这些结果显示在图4A-E中，表明在施用化合物1之后，血浆和肝脏中的miR-122水平在注射后多至7天增加。此外，RORα调节的基因Gpase6在注射化合物1后多至7天被显著上调。

实施例7

RORα调节导致C57BL/6小鼠Mir-122分泌增加

持续四周给C57BL/6小鼠喂食50％高脂饮食(HFD)。对照组群在三周内接受了3次流体动力的5μg antagomiR-对照的尾静脉注射和6次生理盐水的腹腔注射。第二组群是在三周内流体动力的尾静脉注射了5μg antagomiR-122(抑制miR-122活性的反向补体)三次，并腹腔注射生理盐水六次。第三组群在3周内每周两次腹腔注射化合物1(7.5mg/kg)，和每周一次腹腔注射antagomiR-对照。最后一个组群在3周内每周两次腹腔注射化合物1(7.5mg/kg)，和每周一次腹腔注射antagomiR-122。

如图5A-D所示，当用化合物1处理时，miR-122的分泌增强，与antagomir-122的共同施用可将其降低至基线水平。

详细方法

细胞培养。HCC衍生的人类细胞系：Huh7在补充有10％胎牛血清(FCS)、1％青霉素/链霉素的DMEM中培养。

质粒。如前所述，产生了相对于转录起始位点(TSS)跨越-900bp区域的人miR-122启动子片段(质粒PmiR-122-900)(1)。如前所述，通过PCR使用引物P1和P2对启动子区域中的RORα位点进行突变(2)。表2描述了用于产生质粒的所有引物。

萤光素酶测定。对于萤光素酶测定，使用TransIT-LT1(Mirus)转染试剂(MIR2300，Madison，WI)将萤光素酶报告质粒(50ng)和1ng海肾萤光素酶载体(PRL，Promega)共转染在24孔板上生长的细胞。萤火虫和海肾荧光素酶活性使用双重荧光素酶报告检测系统(Promega)进行了评估。在Mithras LB 940发光计(Berthold Technologies)上三次进行读数。

RNA提取和定量实时PCR分析。使用进行了2个小修改的miRNeasy微型试剂盒(Qiagen,Valencia,CA,美国)，从200μL血浆或培养基样品分离出总RNA(包括小RNA)。首先，用1ml的Qiazol溶液裂解200μl血浆或培养基。其次，添加50pmol/l的合成单链秀丽隐杆线虫miRNA(cel-miR-39)作为加标(spike-in)对照，以监测提取效率。其余的RNA提取按照制造商的说明进行。用30μl无RNase的水洗脱miRNA。使用TRIzol试剂(Invitrogen，Carlsbad，CA，美国)从细胞或组织中分离出总RNA，包括miRNA。使用Quanta BiosciencesqScript^TMcDNA合成试剂盒(95047-100)合成cDNA，用于mRNA分析，并使用qScript^TMmicroRNA cDNA合成试剂盒(95107-100)合成cDNA，用于进行miRNA分析。分别使用ABI 7900HT实时PCR系统和SYBR Green PCR Kit：Quanta Cat.#84018和#84071对miRNA和mRNA进行qRT-PCR。使用2-ΔΔCt方法计算折叠表达和统计学显著性。所有实验均进行三次。

高脂饮食喂养的小鼠。给C57BL/6雄性小鼠喂食50％高脂饮食8天(Envigo，DIETTD150235)。在12h的光/暗周期下，将所有小鼠保持在无病原体的设施中。希伯来大学动物保护与伦理委员会批准了对小鼠的研究。

向小鼠注射化合物1和AntagomiR。对7-8周大的C57BL/6雄性小鼠或9个月大的Sgp130FC雄性小鼠腹腔注射溶于生理盐水和3％DMSO中的7.5mg/kg化合物1。注射生理盐水作为对照。给小鼠流体动力的尾静脉注射antagomiR-122或antagomiR对照(阴性对照)(在1.5ml生理盐水中5μg/小鼠)。根据描述实验结果的图例处死小鼠，并将肝脏、白色脂肪和骨骼肌组织冷冻在液氮中或OCT嵌入式冷冻块中，以进行进一步的RNA和组织学分析。从SigmaAldrich获得antagomiR，请参见表3。

表2质粒构建体的引物。

表3合成的小RNA

下标‘m’表示2'-O Me修饰的核苷酸；下标‘s’表示硫代磷酸酯键；‘Chol’表示通过羟脯氨醇键连接的胆固醇。

引言

microRNA-122(miR-122)与FGF21的表达有关。miR-122的表达依赖于炎症信号传导，这也说明它从肝脏分泌出来对其他器官有远端的影响。此外，miR-122还受活化肝细胞RORα介导的游离脂肪酸(FFA)的调控。肝细胞中miR-122通过FFA-RORα机制增加，导致FGF21上调。

开发了一组RORα激动剂，并基于其对miR-122启动子的激活作用选择了一种化合物。这种激活导致内源性FGF21水平的有益增加，从而可以治疗胰腺炎。

结果

RORα激活

RORα调节miR-122在小鼠中的表达，这是通过FFA介导的(Chai,Gastroenterology,Volume 153,Issue 5,November 2017,Pages 1404-1415)。RFD的水平在HFD时降低，而在用RORα激活剂化合物1激活后增加。

在miR-122降低的人类中，miR-122靶基因的表达增加。miR-122靶基因也与RORα表达负相关。FGF21的表达与pre-miR-122正相关。

FGF21是RORα的已知靶标(Wang,J Biol Chem.2010May21；285(21):15668-73)。最近显示，冷暴露后肝脏中的FGF21上调(Ameka,Sci Rep.2019Jan 24；9(1):630)。尽管不希望受特定理论的束缚，但是据信这可能是由于寒冷时RORα的增加所致。为了评估该假设，将HUH7人HCC细胞用RORα报告系统转染，其中荧光素酶从具有RORα结合位点的miR-122启动子表达。primiR-122和miR-122水平的增加与miR-122靶基因(Aldo A和Dgat1)的减少有关。根据RORα与其在miR-122启动子中的共有序列的结合，miR-122的表达对冷敏感。为了确定RORα-miR-122机制是否与人类相关，还进行了一项人类研究(Hadassah University HospitalIRB approval#HMO-0025-18)。在这项研究中，人类使用心肺机和全身冷却来进行大血管心血管外科手术。测量了miR-122的表达，发现降低温度后血浆miR-122显著增加。

这些结果表明，RORα活性的增加和miR-122启动子活性的增加可以增加FGF21的水平，后者反过来对胰腺炎具有有益作用。为此，产生了一组RORα激动剂。

RORα由与共激活蛋白相互作用的N末端激活功能1(AF-1)和随后的包含两个锌指基序、柔性铰链区和包含激素反应性激活功能2(AF-2)的C末端配体结合域(LBD)的DNA结合域组成。激动剂与RORα-LBD的结合诱导构象变化，使辅激活蛋白能够与AF-2结合。与RORα-LBD配合溶解的最有效的激动剂是硫酸胆固醇(PDBID 1S0X)。通过高通量虚拟筛选靶向该晶体结构的该配体结合口袋，以鉴定新的RORα激动剂。使用Schrodinger Maestro GlideHTVS工作流程评估了类似药物的300,000种化合物的专有文库的结合能力。使用PrimeMMGBSA(允许的灵活性)进一步对前200种化合物进行了评分。目视检查前100种化合物，并在miR-122启动子区域使用荧光素酶测定法选择十二种进行评估。

RORα的肝脏和全身作用通过miR-122介导

为了确定RORα代谢和生化作用是否通过miR-122介导，进行了以下实验。化合物1的激活是通过使miR-122启动子中的该位点突变而经过RORαDNA与miR-122启动子的结合/激活来实现的。将HuH7细胞对化合物1暴露16h后，miR-122的细胞水平未发生变化，但培养基中分泌了显著的miR-122(通过LDH释放测定对细胞无明显毒性，数据未显示))。但是，将化合物1对小鼠施用数周后，在肝脏和血浆中miR-122水平均升高。这与Pre-miR-122和Pri-miR-122二者的肝前体水平增加，以及AldoA(miR-122的已知靶标)降低以及G6Pase(已知RORα靶基因)升高有关(Chauvet,PLoS One.2011；6(7):e22545)。miR-122到达远端组织。为了评估化合物1对这种miR-122远端效应的作用，在心肌组织中测量了miR-122，其显示出成熟的miR-122水平升高，而三个miR-122靶基因却相互下调。施用化合物1后，在其他器官中也将成熟的miR-122鉴定为WAT和肌肉(未检测到肌肉组织中pri-miR-122的水平，这表明从miR-122启动子未表达肌肉中成熟的miR-122)。

为了确定miR-122和化合物1的作用机理是否在同一途径上一致，设计了一个实验，其中将两种分子一起以及分别施用。在这项研究中，给小鼠喂食50％的HFD，并在动物饮食后4周开始处理，以在处理前建立NASH。4周后开始处理(由于半衰期延长，每周一次给予antagomiR，并且由于血浆t_1/2为2.7小时，每周给予两次RS)，并持续3周。从第3周开始对小鼠称重，并在一周后开始处理。对照小鼠(每周一次antagomiR-对照，每周两次在生理盐水中稀释的DMSO)体重稳定增加。施用antagomir-122的小鼠体重增加最大。那些用RORα激动剂化合物1处理过的动物，体重稳定下降并减轻了体重。施用antagomir-122和化合物1的小鼠，其体重完全恢复到对照动物的体重。这一现象表明，miR-122和化合物1可能彼此拮抗。

当施用antagomiR-122时观察到肝脏和血浆中miR-122减少以及当施用化合物1时观察到肝脏和血浆二者中miR-122增加。miR-122的增加也对其靶基因(包括Agpat1、Dgat1和FGF21)有影响。肝脏antagomiR-122和化合物1也对肌肉产生了与肝脏相似模式的作用，可能是通过miR-122分泌作用。

肝脏中FGF21信息的水平与pri-miR-122的水平相关，表明存在共同调节作用。这些观察结果加强了我们的假设，即通过antagomiR-122降低肝脏的miR-122的水平或通过化合物1升高肝脏的miR-122的水平来控制miR-122水平具有肝/中枢和远端/外周的作用。化合物1的总体效果最终导致FGF21水平的提高，这有利于治疗、预防胰腺炎、降低胰腺炎的易感性、减轻胰腺炎的严重性和/或延缓胰腺炎的进展。

激活RORα-miR-122-甘油三酯循环的作用

在证明化合物1是具有有益的生化作用的临床相关miR-122激活剂后，接下来的研究旨在确定其对mir-122前体的影响。对患有确定的NASH的小鼠施用化合物1。激活剂增加小鼠肝脏和血浆中的miR-122水平。RORα激活剂/激动剂化合物1化合物的施用导致miR-122前体以及RORα靶标的增加。这些结果表明，激活剂在模型中确实起作用。

用化合物1激活RORα-miR-122-甘油三酯循环的抗炎和抗纤维发生作用

一旦观察到RORα激活剂化合物1具有有益的代谢特性，就可以确定化合物1对肝脏炎症和纤维化的作用。在小鼠致动脉粥样化饮食模型中评估了化合物1对肝脏炎症和纤维化的作用(Anavi,Lab Invest.2015Aug；95(8):914-24)。在饮食的第3周出现肝脏炎症和纤维化之后，动物开始接受化合物1。在另外3.5周后，其中动物每周接受3次化合物1，评估了动物的许多终点。化合物1显著改善了肝酶。证实了在施用化合物1后，成熟的miR-122在组织和血浆中均增加。化合物1显著改善了肝脏炎症。炎症的这种改善与肝纤维化的显著减少有关，这可通过两种方法进行评估，即Masson三色染色和αSMA染色。如这些小鼠肝脏的CD34染色所示(数据未显示)，化合物1对肝脏血管没有作用。RORα激活剂化合物1的作用对纤维化驱动基因也很明显。FGF21还与胰腺中的炎症和纤维化相关，因此化合物1对FGF21水平的作用，以及由此产生的对肝脏炎症和纤维化的作用，可以推断为胰腺炎的治疗及其预防，降低胰腺炎的易感性，降低胰腺炎的严重性，或延缓胰腺炎的进展。

讨论

激活RORα对胰腺炎有主要的有益作用。RORα对胰腺炎的有益作用是通过成熟的miR-122介导的，尽管其他RORα活性可能会有助于这些有益作用。miR-122的作用是通过靶向TG生物合成中的中心酶的表达。根据证据，表明RORα激活了miR-122的表达并增加其向血浆中的分泌，到达WAT、肌肉和心肌，加快其远端作用，我们解释为RORα激活的作用在肝脏和全身都有。

为了控制RORα的激活并增强其潜在的有益作用，开发了一种筛选系统来鉴定增强RORα对miR-122表达的活性的化合物。我们已经鉴定出一种在增强FGF21水平中具有潜在治疗作用的化合物(化合物1)。有趣的是，增加miR-122表达和分泌的化合物1也显示出显著的代谢作用，进一步证明了其在治疗由代谢紊乱引起的胰腺炎亚群中的有效性。

以前的许多报告以及我们的报告都指出肝脏中“劫持”miR-122作为抗脂毒性效应物的机制作用的可能性。在肝脏中产生miR-122的机制很强大。每个肝细胞存储250,000拷贝的miR-122和miR-122*(Simerzin,Hepatology.2016Nov；64(5):1623-1636)。miR-122的有效远端活性取决于miR-122的高产量和分泌，以产生高血浆水平。如此高的生产率表明miR-122可以转译为有效的治疗化合物。但是，与其开发将合成的miR-122(mimic-miR-122)进行合成、制成药物并将其注射到多年的NASH患者的系统，将优选开发一种可诱导肝内源性miR-122的表达并且可以每天给予患者的小药物。miR-122也通过TNFα信号传导表达和分泌。但是，注射TNFα与NASH的临床环境无关。miR-122还具有其他治疗特性，包括增加FGF21的表达。

该报告中显示的数据表明，RORα激活具有显著的活性，所述RORα激活在肝脏和其他器官(包括胰腺)中均增加miR-122的表达并达到其他器官。因此，RORα活化剂被提议作为有前景的待开发化合物，并评估其对患者胰腺炎的临床有益作用。

材料和方法

细胞培养

在补充有10％胎牛血清(FCS)、1％青霉素/链霉素(Thermo Scientific,Waltham,MA,美国)的DMEM中培养人肝癌细胞系-Huh7。将细胞在37℃下在含有5％CO₂的潮湿环境中培养，除了如本文表明将细胞置于32℃的实验以外。

RNA提取和定量的实时RT-PCR

使用进行了2个小修改的miRNeasy微型试剂盒(Qiagen,Valencia,CA,美国)，从200μL血浆或培养基样品分离出总RNA(包括小RNA)。首先，用1ml的Qiazol溶液裂解200μl血浆或培养基。其次，添加50pmol/l的合成单链秀丽隐杆线虫miRNA(cel-miR-39)作为加标(spike-in)对照，以监测提取效率。按照制造商的说明进行其余的RNA提取。用30μl无RNase的水洗脱miRNA。使用TRIzol试剂(Invitrogen，Carlsbad，CA，美国)从细胞或组织中分离出总RNA，包括miRNA。使用Quanta Biosciences qScript^TMcDNA合成试剂盒(95047-100)合成cDNA，用于mRNA分析，并使用qScript^TMmicroRNA cDNA合成试剂盒(95107-100)合成cDNA，用于进行miRNA分析。分别使用ABI 7900HT实时PCR系统和SYBR Green PCR Kit：QuantaCat.#84018和#84071对miRNA和mRNA进行qRT-PCR。使用2-ΔΔCt方法计算折叠表达和统计学显著性。所有实验均进行三次。用于qRT-PCR的引物示于表4。

质粒

如前面所述，产生了相对于转录起始位点(TSS)跨越-900bp区域并使RORα结合位点突变的人miR-122启动子片段(分别为质粒PmiR-122-900和PmiR-122-RORαmut)。

转染

对于萤光素酶测定，使用脂质体LTX(Invitrogen)转染试剂将萤光素酶报告质粒(50ng)和1ng海肾萤光素酶载体(PRL，Promega)共转染在24孔板上生长的细胞。对于所有实验，使用无血清培养基进行转染(Opti-MEM；Cat#31985070；Thermo Scientific)。

萤光素酶活性测定

转染后，将细胞用被动裂解缓冲液(Cat#E1941；Promega)裂解，在室温下震荡20min，然后转移到合适的96孔板中。使用双重荧光素酶报告测定系统(Cat#E1910；Promega)在光度计Mithras 2000(Centro XZ,LB960,Berthold Technologies,BadWildbad,德国)上评估萤火虫和海肾荧光素酶的活性。将所述荧光素酶活性标准化为海肾荧光素酶活性。进行三次读数。

RORα激动剂处理

通过溶解在DMSO(1mg/ml)中来制备商业RORα激动剂SR1078(Cayman Chemical)和RORα化合物储备液。将Huh7细胞用5μM SR1078或1μM的所有其他受测试化合物处理过夜。单独使用DMSO(0.2％)作为对照。RORα激动剂，化合物1溶于生理盐水和至多5％DMSO中，并根据文本剂量经腹腔注射给小鼠。定量化甘油三酯、游离脂肪酸和β-羟基丁酸酯。

为了确定肝脏和肌肉的脂质含量，将肌肉和肝脏组织(40-80mg)在0.5ml的氯仿:Tris溶液(v/v，1:1)中匀化，将匀化物转移到1ml氯仿:甲醇溶液(v/v，2:1)中，以3000g(在-2℃)速度离心10min(Heraeus Megafuge 16R离心机)。将有机相与在氯仿中的5％TritonX100混合，干燥并重新溶解在水中。提取脂质后，根据制造商的说明使用甘油三酯定量试剂盒(BioVision)测量样品中的甘油三酯(TG)浓度。使用商业比色试剂盒(BioVision)直接从血浆样品中测定血浆游离脂肪酸和β-羟基丁酸酯。

动物研究

7-8周大的雄性C57BL/6小鼠购自Harlan Laboratories(耶路撒冷，以色列)。在12h的光/暗周期下，将所有小鼠保持在无病原体的设施中。根据由美国国家科学院编写并由美国国立卫生研究院出版的“实验动物的护理和使用指南”中概述的标准对小鼠进行处理。希伯来大学动物保护与伦理委员会批准了对小鼠的研究；伦理编号MD-15-14423-3。

对高脂饮食(HFD)喂养的小鼠的antagomiR-122处理

持续4周给7-8周大的C57BL/6小鼠喂食由50％脂肪、20％蔗糖、10％果糖、1.25％胆固醇(Envigo，TD.150235)组成的饲料或50％HFD。在通过antagomiR抑制miR-122的实验中，持续4周每周一次给小鼠流体动力的尾静脉注射antagomiR-122或antagomiR-对照(1.5mL生理盐水中5μg/小鼠)，并且仍喂养HFD或饲料。注射4周后，处死小鼠，将肝脏、白色脂肪和骨骼肌组织在液氮中或在最佳切割温度下嵌入的冷冻块中冷冻，以进行进一步的RNA和组织学分析。antagomiR购自Sigma-Aldrich(St Louis,MO)；参见表5。

对喂养HFD或致动脉粥样硬化饮食的小鼠的化合物1和antoagomiR-122处理

将7-8周大的雄性C57BL/6J小鼠随机饲养在标准笼中，并喂以HFD或致动脉粥样化饮食(由1％的胆固醇和0.5％的胆酸组成，另见表6)。在实验期间，所有小鼠均可自由饮水。在喂养期间，每3天监测一次体重。在HFD实验中，在4或6周后，将生成的肥胖小鼠用antagomiR-122(5μg/小鼠，每周一次，持续3周)处理，或腹腔注射化合物1(RORα激动剂，每周两次，每次7.5mg/kg，持续3周；或每周3次，每次15mg/kg，持续3周)。肥胖对照(HFD)组仅施用生理盐水、DMSO和antagomiR对照。处理3周后，处死小鼠，取出肝脏用于RNA-seq分析。将肝脏、白色脂肪和骨骼肌组织在液氮中或在最佳切割温度下嵌入的冷冻块中冷冻，以进行进一步的RNA和组织学分析。在致动脉粥样化饮食实验中，饮食3周后用15mg/kg化合物1处理小鼠。处理3.5周后，处死小鼠，将肝脏在液氮中或在最佳切割温度下嵌入的冷冻块体中冷冻。从动脉粥样化饮食喂养的小鼠中收集血浆，并保存在-20℃中，以使用分析仪和测试条(Roche)进行ALT和AST分析。

多参数代谢评估

通过使用Promethion高清晰度行为表型系统(Sable Instruments,Inc.,LasVegas,NV,美国)测量小鼠的代谢和活动状况，该系统是一种多参数评估，其中包含在一个最大限度地减少胁迫的常规家用笼中的用于开路间接量热法、进食、进水、活动、跑轮和体重测量的子系统。使用MetaScreen软件2.2.18.0版进行数据采集和仪器控制，并使用ExpeData 1.8.4版使用详细描述数据转换各个方面的分析脚本对获得的原始数据进行处理。将C57BL/6小鼠用HFD喂养6周，然后用15mg/kg化合物1处理，每周3次，持续2周，接着将其放置在代谢室中，自由进食和饮水，并接受标准12h暗/12h暗周期，其中包括24h的驯化期和接着48h的采样持续时间。通过使用GA-3气体分析仪((Sable Systems Inc.,Las Vegas,NV,美国)使用拉模式负压系统测量呼吸气体。由FR-8(Sable Systems Inc.,Las Vegas,NV,美国)测量和控制气流，设定流速为2000mL/min。连续测量水蒸气，并通过数学补偿其对O₂和CO₂的稀释作用。通过ANCOVA分析计算有效质量。呼吸商(RQ)计算为VCO₂/VO₂之比。总能量消耗(TEE)计算为VO₂ x(3.815+1.232x RQ)，标准化为有效体重，并表示为kcal/h/kgeff.质量。脂肪氧化(FO)和碳水化合物氧化(CHO)计算为：FO＝1.69x VO₂–1.69x VCO₂和CHO＝4.57x VCO₂–3.23x VO₂并表示为g/d/kgeff.质量。使用XYZ光束阵列并以0.25cm的光束间距监控动态活动和位置，并同时收集量热数据。

油红O染色

将肝组织包埋在最佳切割温度凝胶中，并切成10μm冷冻切片。对于油红O染色，准备了油红O(Sigma-Aldrich)(1g/10mL在丙二醇中)的储备溶液、过滤并避光保护。将冷冻切片浸入福尔马林中，用油红O染色15min，然后用苏木精复染30秒钟。

人体血液样本和肝素消除

为了测量miR-122，对使用心肺机和全身冷却从进行了大血管心血管手术的患者采集的血液样本进行了FFA和人FGF21(abcam)分析。这是在Hadassah医院IRB委员会批准编号0025-18-HMO的批准下进行的。所有受试者均获得使用生物材料进行研究的知情同意和许可。2号管表示手术期间为患者降温之前的时间，3号管表示手术期间体温最低的时间。根据先前描述的方案^3,4，从患者血浆样品中分离的RNA溶液中去除肝素，简短地，将5μL的RNA样品在水中与5μL的肝素酶工作溶液(0.085IU/mL的肝素I(Sigma-Aldrich；产品目录号H2519)、2000单位/mL的RiboLock RNase抑制剂(Life Technologies；产品目录号EO0381)、10mmol/L Tris HCl pH 7.5、2mmol/L CaCl₂、25mmol/L NaCl)混合并在25℃保持3小时。反应后，样品直接用作RNA模板用于反向转录反应。

组织的组织学和免疫组织化学

将肝脏和脂肪样品置于4％的缓冲甲醛中24小时，然后置于80％的乙醇中，然后包埋在石蜡块中。将肝脏和脂肪组织切成5mm的切片，用二甲苯脱蜡并通过分级乙醇进行水合。对于H&E染色，组织切片用苏木精(Emmonya Biotech Ltd.)和曙红(Leica，Surgipath)染色。肝巨噬细胞先用大鼠抗小鼠F4/80抗原(Serotec)染色，再用抗大鼠HRP(Histofine)染色，并用DAB试剂盒(Zymed)显影。对肝脏切片进行Masson三色(Sigma)的染色。肝脏CD3+T细胞先用大鼠抗人CD3抗体(Bio-Rad)染色，再用抗大鼠HRP(Histofine)染色，并用AEC(Invitrogen)显影。使用小鼠抗人类平滑肌肌动蛋白抗体(Dako)染色α-SMA阳性细胞，然后使用抗小鼠HRP(Dako)染色并用DAB显影。通过ImageJ软件在5-10个随机视野中计算每个高倍视野阳性染色区域的百分比。

统计分析

使用Excel软件包(Microsoft,Redmond,WA)或GraphPad Prism6(GraphPadSoftware Inc.,La Jolla,CA)，对数据进行统计分析。使用双尾Student t检验以及Pearson和Spearman相关系数确定两组之间的差异。数据以平均值±SD给出，并显示为所有实验的误差线。差异在P＜0.05时被认为是显著的。从至少3个生物学重复中获得报告的数据。

表4.用于实时PCR的引物

表5.研究中使用的antagomiR序列。所有寡核苷酸均由IDT(IDT，Coralville，IA，美国)合成。反义寡核苷酸的化学修饰：下标‘m’表示2'-OMe修饰的核苷酸；下标‘s’表示硫代磷酸酯键；‘Chol’表示通过羟脯氨醇键连接的胆固醇。

表6.正常饮食和致动脉粥样硬化饮食组合物。

参考文献：

1.Chai,C.et al.Metabolic Circuit Involving Free Fatty Acids,microRNA122,and Triglyceride Synthesis in Liver and Muscle Tissues.Gastroenterology153,1404–1415(2017).

2.Rivkin,M.et al.Inflammation-Induced Expression and Secretion ofMicroRNA 122Leads to Reduced Blood Levels of Kidney-derived Erythropoietinand Anemia.Gastroenterology(2016).doi:10.1053/j.gastro.2016.07.031

3.Kondratov,K.et al.Heparinase treatment of heparin-contaminatedplasma from coronary artery bypass grafting patients enables reliablequantification of microRNAs.Biomol.Detect.Quantif.8,9–14(2016).

4.Izraeli,S.,Pfleiderer,C.&Lion,T.Detection of gene expression by PCRamplification of RNA derived from frozen heparinized whole blood.NucleicAcids Res.19,6051(1991).

实施例8

证明化合物1作为有效的RORα激动剂并增加FGF21表达

实验设计：持续6周用高脂饮食(HFD)喂养C57BL/6小鼠，每周3次注射15mg/kg化合物1(或生理盐水+DMSO)，注射3周(n＝6)。

图7A和图7B分别示出了在用化合物1或生理盐水处理的小鼠中从血浆和肝脏提取的miR-122的qRT-PCR分析的结果。图7C显示了从小鼠肝脏提取的RORα靶基因pri-miR-122和pre-miR-122mRNA的qRT-PCR分析。

用化合物1处理诱导miR-122和前体在血浆和肝脏中的表达和分泌。另外，用化合物1处理显著诱导了RORα调节的基因FGF21和Gpase6的表达。

实施例9

RORα激动剂化合物1改善纤维化饮食小鼠模型中肝损伤和纤维化的标志物。

实验设计：持续3周用致动脉粥样化的饮食(诱发纤维化)喂养C57BL/6小鼠，且每周3次注射15mg/kg化合物1(或生理盐水+DMSO)，持续3.5周(n＝8)。

结果示于图8A-D。对于未经处理(灰色柱)和经处理(黑色柱)的组，从8A)血浆和8B)肝脏中提取的miR-122的qRT-PCR分析。将miR-93和miR-18分别用作血浆和肝脏中的阴性对照。8C)实验结束时测得的ALT和AST血浆水平。8D)从小鼠肝脏提取的纤维化中涉及的基因和RORα靶基因(FGF21)的mRNA的qRT-PCR分析。将血浆中的microRNA水平标准化为尖刺秀丽隐杆线虫miR-39；将组织中的microRNA水平标准化为RNU6。mRNA水平标准化为HPRT。数据以误差线＝SD表示。*P<.05,**P<.01。***P<.001,****P<0.0001。

测定了化合物1对肝脏炎症和纤维化的作用。已经评估了化合物1对小鼠致动脉粥样硬化饮食模型中肝脏炎症和纤维化的作用。在饮食的第3周出现肝脏炎症和纤维化之后，动物开始接受化合物1。在另外3.5周后，其中动物每周接受3次化合物1，评估了动物的许多终点。我们确认了在施用化合物1后，成熟的miR-122在组织和血浆中均增加。用化合物1进行的处理，除了减少炎症(Tgfb2和TgfbR2)和纤维化(Acta1，Col1A1和Col3A1)的生物标志物外，还显著改善了肝损伤的生物标志物(AST和ALT)。

实施例10

RORα激动剂化合物1改善纤维化饮食小鼠模型中肝脏炎症性特征。

实验设计：持续3周用致动脉粥样化的饮食(诱发纤维化)喂养C57BL/6小鼠，且每周3次注射15mg/kg化合物1(或生理盐水+DMSO)，持续3.5周(n＝8)。图9A显示了从生理盐水或经化合物1处理的小鼠获取的H&E、CD3和F4/80染色的肝脏的代表性显微照片，其中比例尺代表10μm。图9B中示出的图表表明使用ImageJ对阳性染色的F4/80区域进行定量。

经化合物1处理的小鼠，通过H&E染色显示免疫浸润减少，通过CD3染色显示T细胞密度降低，通过F4/80染色显示髓样浸润水平降低。这些结果证明化合物1表现出抗炎症作用。

实施例11

RORα激动剂化合物1降低纤维化饮食小鼠模型中肝纤维化。

实验设计：持续3周用致动脉粥样化的饮食(诱发纤维化)喂养C57BL/6小鼠，且每周3次注射15mg/kg化合物1(或生理盐水+DMSO)，持续3.5周(n＝8)。结果示于图10A-D。

图10A和C是取自生理盐水或经化合物1处理的小鼠的Masson三色(M.T.)染色和α-SMA染色的肝脏的代表性显微照片，其中比例尺代表10μm。图10B和10D是显示使用ImageJ对阳性染色区域进行定量的图。

实验设计：持续3周用致动脉粥样化的饮食(诱发纤维化)喂养C57BL/6小鼠，且每周3次注射15mg/kg化合物1(或生理盐水+DMSO)，持续3.5周(n＝8)。结果示于图10A-D。

利用两种染色评价化合物1对肝纤维化的作用(Masson三色和α-SMA)。使用两种染色方法，未处理的组显示出较大的阳性面积，而用化合物1处理使纤维化区域显著降低了5倍(M.T)和7倍(α-SMA)。这些观察结果强烈证实化合物1在该小鼠模型中表现出抗纤维化活性。

实施例12

RORα激动剂增加启动子microRNA 122(MIR122)活性和成纤维细胞生长因子21(FGF 21)表达。

进行以下实施例以显示经鉴定的RORA(ROR-α)激动剂增加MIR122启动子活性的表达和FGF21的表达。FGF21本身可用于治疗胰腺炎(Hernandez等人,Sci.Transl.Med.12,eaay5186(2020))。然而，FGF21是通过注射施用的，因此需要鉴定可以口服施用的小分子，并增加FGF21的内源性水平，而不是依赖于注射FGF21，特别是对于长期施用。

如本实施例中所讨论的，已经鉴定出是RORα激动剂的化合物，并且这些化合物增加MIR122的表达以及FGF21的表达。因此，该化合物增加了FGF21的内源性生成，并可用于治疗胰腺炎。

方法:筛选化学文库以鉴定RORα激动剂。在人肝细胞癌细胞系(Huh7)上评价了这些化合物的作用。给C57BL/6小鼠喂食食物或高脂肪饮食4周以诱导脂肪肝。在仍处于HFD或食物饮食的同时，对小鼠每周一次流体动力尾静脉注射MIR122拮抗剂(antagomiR-122)或对照antagomiR，持续3周，或腹膜内注射RORα激动剂化合物1或载体，每周两次，持续3周。收集肝脏、性腺白色脂肪和骨骼肌，并通过RT-PCR、组织学和免疫组织化学进行分析。

给另一组小鼠喂食致动脉粥样化饮食，注射或不注射化合物1，持续3周。化合物1具有以下通式:

通过免疫组织化学分析肝脏，并分析血浆中氨基转移酶的水平。我们分析了RNAseq数据库GSE33814和GSE89632中NASH患者的肝组织数据。

结果:注射antagomiR-122的小鼠显著降低了血浆、肝脏和白色脂肪组织中MIR122的水平。

化合物1被鉴定为RORα激动剂，并发现增加了Huh7细胞中MIR122启动子活性的表达。在喂食HFD或致动脉粥样化饮食的小鼠中，注射化合物1通过降低生物合成酶的表达，增加了MIR122前体的肝脏水平，并降低了甘油三酯的肝脏合成。

与手术前相比，接受心血管手术的患者的血浆MIR122水平增加；血浆MIR122表达增加与RORα水平增加相关。

结论:化合物1是RORα的激动剂，其增加了MIR122在细胞系和小鼠肝脏中的表达。可以开发RORα激动剂用于治疗胰腺炎以及FGF21介导的其他病症。

引言

肝脏特异性microRNA-122(MIR122)与肝脏脂质代谢相关。MIR122是由游离脂肪酸(FFAs)诱导的，这种诱导是由肝脏RORα的激活介导的。通过FFA-RORα机制增加肝脏MIR122，由于靶向和降低MIR1228参与甘油三酯生物合成的酶的水平，导致甘油三酯(TG)的抑制。

由MIR122增加引起的这些和其他效应导致确定激活RORα是否有其他有益的效应。为此，我们设计了一组新的RORα激动剂，并根据其激活MIR122启动子的显著效果选择了一种化合物。这种激活对小鼠模型的肝脏产生了有益的影响，包括逆转纤维化。

材料和方法

细胞培养

在补充10％胎牛血清(FCS)，1％青霉素/链霉素(Thermo Scientific，Waltham，ma，美国)的DMEM培养人肝细胞癌细胞系Huh7。将细胞在37℃下在含有5％CO₂的潮湿环境中培养，除了如本文表明将细胞置于32℃的实验以外。

质粒

人MIR122启动子片段跨越相对于转录起始位点(TSS)-900bp的区域，并使RORα结合位点突变(分别为质粒pMIR122-900和pMIR122-RORαmut)，如前所述产生(Chai C.等人Metabolic Circuit Involving Free Fatty Acids,microRNA 122,and TriglycerideSynthesis in Liver and Muscle Tissues.Gastroenterology 153,1404-1415(2017)和Rivkin M.等人Inflammation-Induced Expression and Secretion of MicroRNA122Leads to Reduced Blood Levels of Kidney-Derived Erythropoietin andAnemia.Gastroenterology 151,999-1010e3(2016))。

转染

对于萤光素酶测定，使用脂质体LTX(Invitrogen)转染试剂将萤光素酶报告质粒(50ng)和1ng海肾萤光素酶载体(PRL，Promega)共转染在24孔板上生长的细胞。对于所有实验，使用无血清培养基进行转染(Opti-MEM；Cat#31985070；Thermo Scientific)。

萤光素酶活性测定

转染后，将细胞用被动裂解缓冲液(Cat#E1941；Promega)裂解，在室温(RT)下震荡20min，然后转移到合适的96孔板中。使用双重荧光素酶报告测定系统(Cat#E1910；Promega)在光度计Mithras 2000(Centro XZ,LB960,Berthold Technologies,BadWildbad,德国)上评估萤火虫和海肾荧光素酶的活性。将所述荧光素酶活性标准化为海肾荧光素酶活性。读数一式三份。

RORα激动剂处理

通过溶解在DMSO(1mg/ml)中来制备商业RORα激动剂SR1078(Cayman Chemical)和我们新合成的RORα化合物储备液。将Huh7细胞用10μM SR1078或1μM的所有其他受测试化合物处理过夜。单独使用DMSO(0.2％)作为对照。RORα激动剂化合物1溶于生理盐水和至多5％DMSO中，并根据文本剂量经腹腔注射给小鼠。

RNA提取和定量的实时RT-PCR(qRT-PCR)

使用进行了2个小修改的miRNeasy微型试剂盒(Qiagen,Valencia,CA,美国)，从200μL血浆或培养基样品分离出总RNA(包括小RNA)。首先，用1ml的Qiazol溶液裂解200μl血浆或培养基。其次，添加50pmol/L的合成单链秀丽隐杆线虫miRNA(C.Elegans miR-39)作为加标(spike-in)对照，以监测提取效率。按照制造商的说明进行其余的RNA提取。用30μl无RNase的水洗脱miRNA。

使用TRIzol试剂(Invitrogen，Carlsbad，CA，美国)从细胞或组织中分离出总RNA，包括miRNA。使用Quanta Biosciences qScript^TMcDNA合成试剂盒(95047-100)合成cDNA，用于mRNA分析，并使用qScript^TMmicroRNA cDNA合成试剂盒(95107-100)合成cDNA，用于进行miRNA分析。分别使用ABI 7900HT实时PCR系统和SYBR Green PCR Kit：Quanta Cat.#84018和#84071对miRNA和mRNA进行qRT-PCR。使用2-ΔΔCt方法计算折叠表达和统计学显著性。一个实验的所有样品均进行三次。

动物研究

7-8周大的雄性C57BL/6小鼠购自Harlan Laboratories(耶路撒冷，以色列)。在12h的光/暗周期下，将所有小鼠保持在无病原体的设施中。根据由美国国家科学院编写并由美国国立卫生研究院出版的“实验动物的护理和使用指南”中概述的标准对小鼠进行处理。希伯来大学动物保护与伦理委员会批准了对小鼠的研究；伦理编号MD-15-14423-3。

对高脂饮食(HFD)喂养的小鼠的antagomiR-122处理

给7-8周大的C57BL/6小鼠喂食由50％脂肪、20％蔗糖、10％果糖、1.25％胆固醇(Envigo，TD.150235)组成的饲料或50％HFD，持续4周。在通过antagomiR抑制miR-122的实验中，每周一次给小鼠流体动力尾静脉注射antagomiR-122或antagomiR-对照(在1.5mL生理盐水中的5μg/小鼠)，持续3周，并且仍喂养HFD或饲料。注射3周后，处死小鼠，将肝脏、性腺白色脂肪和骨骼肌组织在液氮中或在最佳切割温度下嵌入的冷冻块中冷冻，以进行进一步的RNA和组织学分析。AntagomiR购自Sigma-Aldrich(St Louis,MO)。

对喂养HFD或致动脉粥样硬化饮食的小鼠的化合物1和antoagoMIR122处理

将7-8周大的雄性C57BL/6J小鼠随机饲养在标准笼中，并喂以HFD或致动脉粥样化饮食(由1％的胆固醇和0.5％的胆酸组成)。在实验期间，所有小鼠均可自由饮水。在喂养期间，每3天监测一次体重。

在HFD实验中，在4或6周后，将生成的肥胖小鼠用antagoMIR122(5μg/小鼠，每周一次，持续3周)处理，或腹腔注射化合物1(RORα激动剂，每周两次，每次7.5mg/kg，持续3周；或每周3次，每次15mg/kg，持续3周)。肥胖对照(HFD)组仅施用生理盐水、DMSO和antagomiR对照。

处理3周后，处死小鼠，取出肝脏用于RNA-seq分析。将肝脏、性腺白色脂肪和骨骼肌组织在液氮中或在最佳切割温度下嵌入的冷冻块中冷冻，以进行进一步的RNA和组织学分析。在致动脉粥样化饮食实验中，饮食3周后用15mg/kg化合物1处理小鼠。治疗3.5周后，处死小鼠，将肝脏在液氮中或在最佳切割温度下嵌入的冷冻块体中冷冻。从动脉粥样化饮食喂养的小鼠中收集血浆，并储存在-20℃下，以使用分析仪和测试条(Roche)进行ALT和AST分析。

统计分析

使用Excel软件包(Microsoft,Redmond,WA)或GraphPad Prism6(GraphPadSoftware Inc.,La Jolla,CA)，对数据进行统计分析。使用双尾Student t检验以及Pearson和Spearman相关系数确定两组之间的差异。数据以平均值±SD给出，并显示为所有实验的误差线。差异在P＜0.05时被认为是显著的。从至少3个生物学重复中获得报告的数据。

结果

miR-122对高脂饮食(HFD)饲养的小鼠脂质代谢的影响

最初，我们感兴趣的是研究导致脂毒性的HFD小鼠肝脏中MIR122的功能，因为在人类中，NASH肝脏中的MIR122水平明显较低。

MIR122通过靶向TG生物合成途径中的AGPAT1和DGAT1酶来减少TG积累。为了测试减少HFD喂养的小鼠肝脏中MIR122的效果，我们通过流体动力尾静脉注射向肝脏施用antagoMIR122，其阻断并降解肝细胞中的MIR122。这种注射导致用正常饮食(ND)喂养的小鼠和HFD小鼠肝脏中成熟MIR122水平的降低。MIR122前体pri-和pre-MIR122的水平也降低了。此外，与未受影响的miR-93相比，antagoMIR122注射显著降低了MIR122的血浆水平。antagoMIR122注射也降低了远端白色脂肪组织(WAT)中的MIR122水平。与MIR122相反，与ND相比，HFD小鼠WAT中miR-126的水平降低，antagoMIR122降低MIR122的水平导致miR-126水平少量、不显著的增加。

WAT和肌肉中成熟MIR122水平降低是肝细胞分泌MIR122减少的结果，而不是由于非肝组织中MIR122表达减少。注射antagoMIR122后血浆MIR122水平的降低与肝脏脂肪滴和总TG肝脏含量的增加以及肌肉TG水平的增加有关。肝脏MIR122减少的生物化学效应表现为氧化作用的降低(β-羟基丁酸的血浆水平降低)，以及肝脏Cpt1α水平(肉碱棕榈酰转移酶1A)，α-氧化途径中的一种重要酶的降低和游离脂肪酸(FFA)的血浆水平的降低。

所有这些都是组织中TG储存增加和能量消耗减少的已知迹象。antagoMIR122对MIR122的阻断对HFD小鼠的体重有显著增加的总体影响。肝脏重量以及肝脏对体重指数也增加了。减少肝脏和全身远端组织中MIR122的作用导致肝脏脂质增加，β-氧化和能量消耗减少，并具有模拟代谢综合征所有特征的全身性影响。

RORα的一个已知靶点FGF21(成纤维细胞生长因子21)的表达与pre-MIR122水平呈正相关

在小鼠中，RORα调节MIR122的表达，这是通过FFAs8介导的(数据未显示)。为了研究与人类代谢和NASH的潜在相关性，我们最初研究了人类NASH数据集(分别为GSE33814和GSE89632)。如上所述，在NASH患者中RORα减少。此外，RORα靶基因(ArgI和CD36)在这些样品中减少，并且它们的表达与RORα正相关。另一方面，参与FFA生物合成途径并与脂肪肝相关的基因(Fasn和Srebf1)的表达与RORα呈负相关。

类似地，MIR122靶基因(AldoA、ADAM17和Agpat1)也与RORα表达负相关，并且它们在人类肝脏中的水平随着RORα水平的降低而增加。

重要的是，已知的RORα靶标FGF21(成纤维细胞生长因子21)的表达与前MIR122水平正相关，表明共同调节(图14)。

肝脏FGF21在冷暴露时也上调。虽然不希望被特定的理论所束缚，但这可能是由于寒冷中RORα水平的增加。为了评估这一假设，我们用RORα报告质粒转染Huh7人HCC细胞，该质粒表达来自MIR122启动子的荧光素酶，该启动子含有一个RORα结合位点。

当温度降至32℃时，MIR122的表达增加(数据未显示)。当MIR122启动子中的RORα共有结合序列突变时，MIR122表达的增加消失。此外，MIR122水平及其对靶基因的活性在对Huh7细胞的冷暴露的响应中增加。

为了进一步研究人类中的RORα-MIR122循环，进行了一项人类研究(Hadassah大学医院IRB批准号HMO-0025-18)，其中在使用心肺机和全身降温进行大血管心血管手术的人中测量了MIR122血浆水平(数据未显示)。

在温度降低时，观察到血浆MIR122水平显著增加，这与血浆FFAs水平增加正相关。

新鉴定的RORα激动剂化合物1对小鼠肝脏和全身MIR122水平的影响

上面显示的结果验证了FFAs-MIR122-TGs代谢循环。因此，增加RORα活性将导致肝脏MIR122表达增加，这进一步导致FGF21表达增加。为此，我们试图鉴定新的RORα激动剂。

利用靶向虚拟筛选来鉴定新的RORα激动剂。将一组300,000种类似药物的市售化合物对接并记录到与胆固醇硫酸盐复合的RORα配体结合结构域的晶体结构中。选择最后一组10种化合物进行活性测试。使用荧光素酶启动子报告质粒分析这组化合物对MIR122启动子的诱导(图3A)。值得注意的是，化合物1在诱导MIR122启动子方面最有效，比商业合成的RORα激动剂SR1078更有效。SR1078具有以下结构:

使用一组细胞系来确定化合物1的毒性特征。与环己酰亚胺(+对照)相比，化合物1在CEM和Huh-7中仅具有中等毒性(CC₅₀分别为11.0和10.4μM)(数据未显示)。通过再合成证实了该试剂的化学特性。

在后续试验中进一步测试化合物1，其中MIR122启动子中的RORαDNA响应元件被突变。与RORα特异性活性一致，与野生型启动子相反，化合物1没有表现出对突变的MIR122启动子的诱导。当Huh7细胞暴露于化合物1 16小时时，细胞MIR122水平没有变化，但是大量的MIR122被分泌到培养基中。此外，通过LDH释放测量，对细胞没有明显的毒性(数据未显示)。重要的是，用化合物1治疗增加了小鼠中MIR122启动子的活性，并且它是由RORα介导的，因为与野生型(wt)启动子相比，在RORα结合位点携带突变的MIR122报告质粒表现出降低的启动子活性。

为了进一步证明化合物1在小鼠中是有效的诱导剂，在单次施用该化合物后，随时间推移监测小鼠中MIR122的水平。MIR122在肝脏和血浆中的水平增加，并与肝脏MIR122前体(pri-MIR122和pre-MIR122)的水平增加，以及MIR122的已知靶标AldoA的减少和已知RORα靶标基因G6Pase的增加相关(Chauvet C.等人Control of gene expression by theretinoic acid-related orphan receptor alpha in HepG2 human hepatomacells.PLoS One 6,e22545(2011))。

化合物1单次施用后，WAT、肌肉和心脏组织中成熟MIR122水平显著增加。此外，在心脏组织中，三个MIR122靶基因显著下调。这些数据证明化合物1是小鼠中MIR122的有效诱导物。

化合物1通过增加HFD喂养的小鼠中MIR122的表达来减轻体重和脂肪变性。

人类脂肪性肝炎与RORα水平降低相关。相应地，喂食HFD的小鼠肝脏RORα水平有一个时间上的逐步降低。有趣的是，化合物1激动剂的添加将RORα水平增加至其在正常饮食喂养的小鼠中的水平。

根据我们的发现，化合物1增加MIR122水平，我们进一步研究了MIR122和化合物1对NAFLD的作用机制，以了解它们是否在相同的途径上一致。因此，我们设计了一个实验，其中将化合物1与MIR122抑制剂antagoMIR122一起注射给患有NAFLD的小鼠。

用50％的HFD喂养小鼠，4周后，当脂肪肝已经形成时，用化合物1、antagoMIR122或两种化合物一起处理小鼠额外3周。antagoMIR122每周给药一次，因为半衰期延长，化合物1每周给药两次，因为血浆t_1/2为2.7小时。在第3周，即开始治疗前一周，开始对小鼠称重。对照小鼠(每周一次antagomiR-对照和每周两次用生理盐水稀释的DMSO)体重稳定增加，然而，施用antagoMIR122的小鼠体重增加最多。相反，用RORα激动剂化合物1治疗的小鼠显示出体重显著下降。施用antagoMIR122和化合物1的小鼠的体重完全恢复到对照动物的体重。在实验停止时，antagoMIR122处理的动物的体重显著增加，表明肝脏中MIR122的减少与全身效应相关，而化合物1的施用显著减少了小鼠体重。小鼠的肝脏重量与其体重一致。进一步分析肝脏以评估脂毒性，并且在化合物1处理的小鼠中肝脏脂滴和TG含量减少，并且这种减少在注射antagoMIR122的小鼠中完全消除，这表明化合物1对脂肪变性的有益作用是由MIR122活性介导的。

我们还测量了能量消耗的替代标记物β-羟基丁酸盐，并发现MIR122水平降低时能量消耗降低，用化合物1治疗时能量消耗增加。这些作用与施用antagoMIR122时肝脏、血浆和肌肉组织中成熟MIR122水平降低有关，而施用化合物1时MIR122水平增加，如在血浆和肌肉中所见。

在肌肉组织中没有检测到Pri-MIR122，表明成熟的MIR122不是由内源性MIR122启动子表达的。对肌肉MIR122水平的影响与在血浆中看到的非常相似，并且可能是通过MIR122分泌效应。化合物1施用后，肝脏中成熟MIR122的水平没有增加，这可能是由于其分泌到血浆中，因为化合物1施用后，肝脏中MIR122前体RNA pri-和pre-MIR122显著增加。

重要的是，化合物1处理后，肝脏中MIR122靶基因Dgat1减少，而RORα靶基因FGF21增加(图12)。

肌肉中的MIR122靶基因AldoA和Agpat1也以各自的方式受到影响。此外，在化合物1的存在下，肌肉TG水平降低。化合物1施用后，肝脏FGF21 mRNA水平与pri-MIR122水平相关，表明共调节作用(图13)。这些观察结果支持了我们的假设，即控制MIR122水平，或者通过antagoMIR122降低其肝脏水平，或者通过化合物1增加其肝脏水平，两者都可以刺激FGF21的内源性产生。因此，化合物1和其他RORα激动剂可用于治疗与FGF21水平相关的病症，如胰腺炎。

化合物1通过增加HFD喂养的小鼠中MIR122的表达来减少脂肪变性。

由于化合物1是一种有效的MIR122激活剂，表现出有益的生化作用，因此确定了其对脂毒性和代谢的作用。将化合物1施用于已建立NAFLD的小鼠(在HFD喂养后)，其导致肝脏和血浆成熟MIR122水平增加，以及肝脏中MIR122前体和RORα靶增加(图14)，类似于其对正常饮食喂养的小鼠的作用。

化合物1激活RORα-MIR122-甘油三酯循环的抗炎和抗纤维化作用

在我们发现RORα激活剂化合物1显示出显著的代谢益处后，我们想研究它对肝脏炎症和纤维化的作用。为此，我们使用了小鼠致动脉粥样硬化饮食模型。在致动脉粥样化饮食3周后，当肝脏炎症和纤维化已经发展时，我们开始用化合物1处理额外3.5周，每周注射3次。然后评估动物对化合物1在大量过程中的作用。化合物1改善肝酶，显著降低AST和ALT水平。施用化合物1后，肝脏和血浆中的成熟MIR122水平增加。H&E、CD3和F4/80染色显示化合物1显著改善肝脏炎症。通过Masson三色(M.T.)和平滑肌肌动蛋白(αSMA)染色这两种方法评估，炎症的改善与肝脏纤维化的显著减少相关。已知NK细胞靶向活化的肝脏星状细胞。纤维化的消退与化合物1处理的小鼠肝脏中NK细胞的显著减少相关。

如图12所示，RORα激活剂化合物1对纤维化驱动基因的作用也很明显。这些结果强烈支持RORα激动剂可能通过上调MIR122减少肝脏炎症和纤维化的概念。尽管不希望受特定理论的束缚，但由于胰腺炎患者存在高度的纤维化，据信RORα激动剂可通过减少和/或逆转纤维化来治疗胰腺炎。

讨论

在这份报告中，我们表明激活RORα可以带来显著的健康益处。这种RORα活性是通过诱导肝脏MIR122水平来介导的，尽管额外的RORα活性可能有助于这些有益的作用。MIR122反过来增加FGF21的表达。RORα激活还导致肝脏MIR122向血浆的分泌增加，导致其在远端组织如WAT、肌肉和心肌中的水平增加，其中MIR122也影响其靶基因。因此，激活RORα对肝脏和全身都有影响。

我们在许多化合物中鉴定了合成的RORα激活剂，化合物1，通过其对MIR122启动子活性的强烈增强。通过在几个小鼠模型中测试化合物1的效果，我们发现该化合物对增加FGF21水平具有显著的有益效果，因此可用于治疗胰腺炎。

胰腺炎的治疗具有高度优先性，因为除了姑息治疗外，目前还没有一种被批准用于胰腺炎的药物。因此，胰腺炎患者仍然没有治疗选择。许多化合物正处于药物开发阶段，有些显示出有趣的前景，有些则未能达到重要的终点。我们决定研究MIR122的潜在治疗作用，因为它具有类似激素的特性。也就是说，MIR122像许多其他microRNA一样，在一个组织(肝脏)中产生，然后分泌到血液中，从血液中到达远端的组织。我们已经证明MIR122在肝脏和远端组织中发挥其抗血脂作用。

肝细胞产生大量的MIR122，每个细胞达到250,000个拷贝。MIR122的有效远端活性与其高产量和分泌相关，以产生高血浆水平。因此，诱导MIR122的高生产率可以转化为有效的治疗化合物。然而，我们并没有开发一种合成MIR122(mimic-MIR122)的系统，而是将其作为药物并注射给NASH患者多年，我们优选开发一种诱导肝脏MIR122内源性表达的小药物，并随后诱导FGF21的内源性表达，并可以长期给予患者。

在本报告中，我们证明了化合物1特异性激活RORα，从而增加肝脏中MIR122的水平，并导致FGF21表达增加。基于我们的研究结果，我们认为RORα激活剂是一种很有前途的化合物，有待开发和评估其对胰腺炎患者的临床有益作用。

实施例13

RORα激活可通过FGF21激活逆转胰腺炎

胰腺炎是一种常见的使人虚弱的临床疾病，它会导致很高的发病率和死亡率。对于这种严重的临床状况，没有特定的疗法。胰腺炎的治疗非常有限，通常只是支持性的。胰腺炎始于胰腺中消化酶的激活，这导致组织损伤和炎症。胰腺炎的常见原因包括酗酒、高脂血症和胆结石移出胆道系统。胰腺炎也是医源性的，在接受内窥镜逆行胰胆管造影术(ERCP)的患者中有5-10％发生。总的来说，胰腺炎是一种未得到满足的治疗需求。

成纤维细胞生长因子21(FGF21)是一种由肝脏分泌的激素，对各种代谢胁迫作出响应。FGF21在外分泌胰腺中表达，以刺激消化酶分泌。FGF21 KO小鼠特别容易患胰腺炎。FGF21的过表达提供了对胰腺炎的保护。预防性施用FGF21减少胰腺炎小鼠模型中的纤维发生。FGF21的丢失是胰腺炎的驱动因素。使用FGF21治疗性逆转先前存在的胰腺炎。

我们已经表明，FGF21可以在用RORα激动剂化合物1处理细胞时被激活，如下文直接和间接所示(参见图11-15))。因此，我们激活RORα的化合物具有独特的抗胰腺炎治疗潜力。

实施例15

胰腺炎筛查分析

为了评估本文所述RORA激动剂化合物治疗、预防胰腺炎、降低胰腺炎易感性、减轻胰腺炎严重性或延缓胰腺炎进展的能力，使用胰腺炎动物模型将是有益的。

虽然长期酗酒是慢性胰腺炎的主要原因，但许多其他病因(包括毒素、梗阻性病变和遗传疾病)也可导致慢性胰腺炎。

在传统的急性胰腺炎模型中，急性胰腺炎的反复发作会导致纤维化。这种模型的一个例子是通过反复注射雨蛙肽诱导慢性胰腺炎。感觉性急性胰腺炎事件(SAPE)模型提出，起始事件(如急性胰腺炎发作)激活免疫系统，允许危险因素驱动促纤维化、抗炎通路，导致慢性胰腺炎。乙醇致敏模型(如乙醇/脂多糖模型)符合这一假设。两种胰腺炎模型都会导致最终胰腺损伤的相似严重程度。

除自身免疫模型外，所有慢性胰腺炎动物模型都有相同的组织学终点(即纤维化、胰管异常和细胞变化)，无论是由化学暴露、饮食变化、感染因子、基因修饰还是机械性障碍引起的。可用于这些模型的动物实例包括猫、狗、白鼬、小鼠、大鼠、猪、兔和斑马鱼。

这些包括以下特征中的一些或全部:慢性炎症、星状细胞增殖/活化、腺泡细胞脱落、导管扩张、导管内钙化和神经增大。

一种动物模型包括反复腹膜内注射胆囊收缩素(CCK)类似物，雨蛙肽，其可与脂多糖(LPS)、慢性乙醇、环孢菌素A或二氯化二丁基锡(DBTC)结合。另一种动物模型包括长期施用乙醇和LPS。另一种模型包括施用相对大剂量的精氨酸。还有一种模型包括施用缺乏胆碱、补充乙硫氨酸(CDE)的饮食。另一种模型包括施用三硝基苯磺酸(TNBS)。

其中，反复施用雨蛙肽，有时在存在敏化剂的情况下，是最常用的慢性胰腺炎模型。这些和其他有毒化合物可以全身性、腹膜内或通过逆行输注到胰管中施用。

在广泛使用的急性胰腺炎动物模型中，使用超生理剂量的雨蛙肽进行治疗。在低剂量下，雨蛙肽为CCK受体提供生理刺激，并增强腺泡细胞的分泌。然而，用高剂量雨蛙肽(10-100×生理剂量；20-50μg/kg，静脉内或腹膜内)发展为轻度至中度急性间质性胰腺炎。急性胰腺炎的雨蛙肽模型的特征是腺泡细胞中酶原激活异常、分泌抑制、炎症增加和细胞损伤。然而，在这种胰腺炎模型中，胰腺外分泌结构和功能在24至48小时内恢复。

慢性胰腺炎的雨蛙肽模型需要随着时间的推移反复注射雨蛙肽，是最常用的、可重复的慢性胰腺炎模型。有许多方案在雨蛙肽注射的剂量、间隔和持续时间方面有所不同(Feng等人,Int J Biol Sci 8:249-257,2012；Neuschwander-Tetri et al.,Dig Dis Sci45:665-674,2000；Yadav等人,Am J Gastroenterol 106:2192-2199,2011)，然而可以使用这些方案中的任何一个。雨蛙肽模型产生了与人类慢性胰腺炎相一致的形态学发现，包括纤维化、慢性炎症、萎缩、腺泡分化转移为导管样细胞和导管扩张。

慢性胰腺炎的雨蛙肽模型是研究其他药物敏化作用的基础。脂多糖(LPS)是一种细菌内毒素，是一种特别相关的物质，因为长期饮酒会导致肠道渗透性增加，容易诱发细菌移位和血清LPS水平增加。已经证明LPS通过激活toll样受体4(TLR4)和核因子κB(NFκB)激活胰腺星状细胞并刺激炎症性细胞因子。在反复注射雨蛙肽的模型中加入LPS加速了疾病的发展并恶化了其严重性，通过腺泡细胞萎缩、纤维化和管状复合体的发展来衡量(Ohashi等人,Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 290:G772-G781,2006.)。

环孢菌素A(CsA)也被用作雨蛙肽诱导的慢性胰腺炎的敏化剂。在该模型中，大鼠在15天的腹腔CsA处理中仅接受两次剂量的雨蛙肽腹腔注射。仅用雨蛙肽处理的大鼠从急性雨蛙肽胰腺炎中完全恢复，而用环孢菌素共处理的大鼠表现出慢性胰腺炎，伴有萎缩、单核炎症性浸润和增强的胶原沉积(Vaquero等,Gut 45:269-277,1999)。

饲喂缺乏胆碱的补充乙硫氨酸(CDE)的饮食诱导小鼠急性出血性胰腺炎(Gilliland L和M.L.Steer,Am J Physiol 239:G418-G426,1980)。CDE引起胰腺损伤的机制尚不清楚。间歇性地长期施用CDE饮食超过24周会导致与慢性胰腺炎一致的组织学变化，包括腺泡萎缩、纤维化和管状复合体的形成。此外，在该模型中观察到EGFR、SPINK3和TGF-α的表达增加，这些都与从慢性胰腺炎到胰腺癌的发病机制有关。然而，即使在CDE喂养54周后，也没有形成恶性病变。

L-精氨酸，一种必需氨基酸，以高剂量腹膜内施用，已显示在动物模型中引起严重的坏死性急性胰腺炎(Mizunuma等，J Nutr 114:467-471，1984)。在数周内重复注射导致严重急性疾病的较低剂量的L-精氨酸在大鼠中产生坏死，随后产生慢性炎症和纤维化，伴有葡萄糖耐受受损。

静脉内或腹膜内注射二氯化二丁基锡(DBTC)，一种用于生产聚氯乙烯的化合物，通过对腺泡细胞的直接毒性和通过在远端胆总管中形成梗阻性栓塞引起慢性胆道梗阻，导致急性间质性胰腺炎(Merkord J和Hennighausen G,Exp Pathol36:59-62,1989)。当重复注射施用DBTC时，大鼠出现慢性炎症和纤维化。然而，这种模型不是高度可复制的，因为只有三分之一的动物表现出与慢性胰腺炎一致的组织学变化。

毒性物质的逆向输注

已经尝试了几种涉及毒性物质逆向输注的模型。这些模型仅将毒素递送至胰腺，不同于上述需要全身性施用毒素的模型。将三硝基苯磺酸输注到胰管中在48小时时导致急性坏死性胰腺炎，并在随后的时间点导致与慢性胰腺炎一致的纤维化、炎症和萎缩(Puig-Divi等人,Pancreas 13:417-424,1996)。胆汁酸的逆行输注提供了研究急性胰腺炎的值得考虑的模型，因为胆结石梗阻是急性胰腺炎的常见原因(Perides等人,Gastroenterology138:715-725,2010)。这种方法被认为是通过胆汁酸受体Gpbar1介导的对腺泡细胞的直接毒性作用引发胰腺炎。

这些模型中的任何一种都可以用来判断本文所述化合物单独或与其他活性剂组合在治疗胰腺炎、预防胰腺炎、降低胰腺炎易感性、减轻胰腺炎严重性或延缓胰腺炎进展中的有效性。

例如，一只或多只对照动物可以根据上述方案之一施用雨蛙肽，一只或多只试验动物施用雨蛙肽，同时也用本文所述的RORA激动剂化合物处理。可以在试验和对照动物中监测胰腺炎的进展。因此可以监测胰腺炎的预防或易感性降低、严重性降低或进展延迟。

或者，可以等到施用导致胰腺炎发展的化合物的那些动物实际上发展成胰腺炎，然后评价本文所述的RORA激动剂化合物在治疗胰腺炎、减轻其严重性或延缓其进展中的有效性。

药剂和RORA激动剂的组合

有(至少)七类药物与急性胰腺炎相关:他汀类药物、ACE抑制剂、口服避孕药/激素替代疗法(HRT)、利尿剂、抗逆转录病毒疗法、丙戊酸和口服降糖药。虽然这些药物引起胰腺炎的机制尚不确切，但据信他汀类药物对胰腺有直接毒性作用，或通过毒性代谢物的长期累积产生毒性作用。同时，ACE抑制剂通过缓激肽的积聚引起胰腺血管性水肿。避孕药和HRT通过脂肪堆积导致胰腺动脉血栓形成(高甘油三酯血症)。利尿剂如呋塞米对胰腺有直接的毒性作用。同时，噻嗪类利尿剂引起高甘油三酯血症和高钙血症，后者是胰腺结石的危险因素。

艾滋病毒感染本身会导致一个人更容易患胰腺炎，而抗逆转录病毒药物可能会导致代谢紊乱，如高血糖症和高胆固醇血症，这些都容易导致胰腺炎。

丙戊酸可能对胰腺有直接毒性作用。有多种口服降糖药，如二甲双胍，可导致胰腺炎。非典型抗精神病药物如氯氮平、利培酮和奥氮平也可导致胰腺炎。

当与上述可引起胰腺炎的活性剂之一组合时，上述任何模型可用于判断本文所述化合物在治疗、预防由这些其它活性剂引起的胰腺炎、降低其易感性、减轻其严重性或延缓其进展方面的有效性。

例如，可以任选地以高于正常剂量的剂量对一只或多只对照动物施用他汀类药物、ACE抑制剂、口服避孕药/激素替代疗法(HRT)、利尿剂、抗逆转录病毒疗法、丙戊酸或口服降糖药(如二甲双胍)，以加速胰腺炎的发展，并且可以对处理动物共同施用这种活性剂与RORA激动剂的组合，以确定RORA激动剂在预防由这些其它活性剂引起的胰腺炎、降低其易感性、减轻其严重性或延缓其发展中的有效性。因此可以监测胰腺炎的预防或易感性降低、严重性降低或进展延缓。

包含RORA激动剂和选自他汀类药物、ACE抑制剂、口服避孕药/激素替代疗法(HRT)、利尿剂、抗逆转录病毒疗法、丙戊酸和口服降糖药(如二甲双胍)的化合物的药物组合物在本文所述实施方案的范围内。

实施例16

中风动物模型

中风的动物模型可用于评估本文所述的RORA化合物在治疗、预防中风、降低中风的易感性、降低中风的严重性或延缓中风进展中的有效性。

中风的动物模型是众所周知的，并且已经用于在临床前环境中测试再分析、神经保护、神经再生或抗炎药物。

一种这样的动物模型包括大鼠大脑中动脉(MCA)的远端闭塞。还开发了诱导大脑局部和整体缺血的不同技术和方法。特定的模型模拟不同类型的中风、局部缺血和整体缺血。

脑缺血模型可分为局部缺血模型和整体缺血模型。局灶性缺血的特点是大脑某一特定区域的脑血流量减少，而在全脑缺血中，血流量的减少会影响整个大脑或前脑(Traystman RJ.Animal models of focal and global cerebral ischemia.ILARjournal/National Research Council,Institute of Laboratory AnimalResources.2003；44(2):85–95).在局灶性脑缺血中，动脉或静脉被机械性闭塞或被脑血栓栓塞闭塞。

由急性脑血管闭塞引起的中风可以通过不同的技术来复制，即通过近端大脑中动脉(pMCAo)(大血管闭塞)或远端MCA(dMCAo)(小血管闭塞)的机械闭塞，或通过将血凝块或凝血酶注射到MCA中的血栓闭塞，或通过静脉注射孟加拉红后的光栓疗法。

pMCAo模型常用于中风研究。pMCAo通常由直接机械性闭塞诱发，最常见的是通过将硅涂层尼龙缝合线插入颈内动脉，随后推进到Willis环以在其起点闭塞MCA。缺血性损伤的严重程度可以通过在移除缝合线以允许组织再灌注之前将缝合线暂时留在原位一段可变的时间(时间通常在30-120min之间)来模拟。在永久性pMCAo的情况下，缝线留在原位，不允许再灌注。持续时间短的pMCAo导致损伤侧纹状体中的选择性神经元死亡、热休克蛋白的表达、即刻早期基因表达和上覆皮层中细胞凋亡信号通路的诱导。相反，较长时间的闭塞会导致涉及纹状体和皮质的脑梗塞，并且在形成水肿的情况下可能与一些动物死亡有关。

人类中风最常由脑血栓栓塞引起。因此，已经开发了许多动物模型，这些模型非常接近地模拟了脑血管的栓塞闭塞。通过将大尺寸的合成微球(直径300-400μm)或小尺寸的微球(小于50μm)注射到颈内动脉中，可以在动物中诱发栓塞性中风。在第一种情况下，诱导了类似于由MCA永久闭塞产生的大面积梗塞。在后一种情况下，可发生较小的多发性梗塞(Gerriets等人,J Neurosci Methods.2003；122(2):201–11；Miyake et al.,Stroke.1993；24(3):415–20)。

这些模型可用于评价本文所述的RORA激动剂在治疗中风、预防中风、降低中风的易感性、减轻中风的严重性或延缓中风进展中的有效性。为了测试治疗效果或延缓中风的发展，可以在机械性诱发中风后施用这些化合物。为了测试预防中风、降低对中风的易感性或降低中风的严重性，可以在机械性诱发中风之前施用化合物。当使用治疗动物和对照动物的组合时，可以将化合物的有效性与对照进行比较。

一种不同类型的模型用于研究血栓溶解疗法。使用直接注射到颈内动脉的自体血凝块来诱导血管闭塞(Kilic等人,Neuroreport.1998；9(13):2967–70)。这种类型的动物模型可用于评价使用本文所述的RORA激动剂化合物与溶解血凝块的药剂(如tPA)组合的联合疗法。包含RORA激动剂化合物和溶解或去除血凝块的化合物的组合物是本文描述的本发明的另一个实施方案。

实施例17

肌肉减少症动物模型

大约40-50％的80岁以上人口患有肌肉减少症，这使得这种疾病成为一种主要的老年临床疾病和健康老龄化的关键挑战。肌肉减少症的标志症状是肌肉量和力量的丧失，与健康个体相比，肌肉减少症患者可能具有更差的临床结果和更高的死亡率。

设计用于研究肌肉减少症的动物模型包括后肢去负荷、去神经和通过使用石膏或金属丝策略以及使用老年啮齿动物的活动受限。

老年啮齿动物通常用于肌肉减少症的动物模型。例如，雌性C57BL/6J小鼠在24个月时出现肌减少症，股四头肌量显著丧失，这在27至29个月时更明显，此时出现去神经和肌纤维的神经肌肉接头(NMJ)形态发生改变(Shavlakadze T和Grounds M,Bioessays.2006；28:994–1009；Chai等人,PLoS One.2011；6:e28090)。老年小鼠的步态特征也发生了变化。与年轻小鼠(3个月大)相比，老年小鼠(24个月大)表现出明显降低的步频、增加的步幅时间可变性和改变的脚步模式。老年大鼠模型也显示出类似于老年小鼠模型的肌肉减少模式。

因为已知高热量摄入会加速肌肉减少症的形成，所以一些动物研究可能涉及给动物提供高脂肪饮食。

其他动物模型包括诱导肌肉萎缩，例如通过使用后肢活动受限方法。其中包括单后肢支撑的头低位悬吊、胶带牵引的尾部悬吊、后肢承重的全身悬吊和后肢石膏尾悬吊。这些“减重”模型会导致肌肉流失。

去神经是老年神经肌肉接头(NMJs)的常见现象。一些常用的啮齿动物模型使用胫骨或坐骨神经横断来诱导去神经。胫骨神经是啮齿动物后肢中的混合运动感觉外周神经，并且是坐骨神经的3个末端分支之一。横断胫神经会使腓肠肌、比目鱼肌和跖肌肌肉切除神经。

如果需要后肢功能评估，可以在不同的时间间隔进行行走轨迹分析。这包括将动物的脚浸在墨水中，并让动物走过底部有纸的围场。印迹的特征可以被可靠地测量和评分，以指示神经肌肉残疾和步态损害的程度，因为足迹特征反映了功能性肌肉群。

这些动物模型可用于评估本文所述的RORA激动剂化合物在治疗、预防肌肉减少症、降低其易感性、降低其严重性或延缓其进展方面的能力，尤其是当与未接受任何治疗的对照动物联合使用时。

实施例18

创伤性脑损伤动物模型

创伤性脑损伤的动物模型(TBI)用于确定发育和成人大脑的潜在神经保护疗法。

创伤性脑损伤是一个复杂的过程，由四个相互重叠的阶段组成，包括原发性损伤、原发性损伤的演变、继发性或附加性损伤以及再生。大脑的原发性损伤可由多种机制诱发。一种机制包括从颅骨直接脑挫伤。另一种机制涉及由撞击颅骨粗糙内表面的运动引起的脑挫伤，和/或与撞击侧相对的间接(contracoup)脑挫伤。另一种机制涉及由脑结构相对于颅骨和彼此的运动引起的脑组织的剪切和拉伸。另一种机制涉及对冲击的血管反应，包括由位于脑和硬脑膜之间的桥接血管破裂产生的硬膜下血肿、由于颅内压增加或梗塞引起的血流减少以及由脑血管渗透性增加引起的脑水肿。

弥漫性轴突损伤被认为是钝性头部创伤的主要后果之一；其特征是遍及大脑和脑干的轴突的形态和功能损伤，并导致脑白质的弥漫性变性。继发性损伤机制包括复杂的生化和生理过程，这些过程由原发性损伤引发，并在数小时至数天内表现出来。

动物模型试图在实验动物中复制临床创伤的某些病理成分或阶段，然后允许人们评估假定的治疗。啮齿动物模型通常用于神经创伤研究。它们相对较小的尺寸允许需要相对大量动物的形态学、生物化学、细胞和行为参数的重复测量。动物通常遭受两种主要类型的实验性脑损伤，即加速脑震荡和撞击脑震荡。

机械力造成动态或静态脑损伤，取决于其振幅、持续时间、速度和加速度。静态模型中的机械力具有确定的振幅和持续时间，但没有速度或加速度。本质上，静态模型通常关注损伤中涉及的形态和功能过程。静态损伤模型的一个例子包括用镊子挤压脑神经一段限定的时间。

动态脑损伤可以通过施加具有良好表征的振幅、持续时间、速度和/或加速度的机械力来诱发。动态脑损伤可进一步细分为直接损伤和间接损伤。在间接动态脑损伤的情况下，机械力通常指向整个身体，其振荡压力波的动能穿过身体，对脑组织施加影响。

头部穿透伤和其他直接的脑变形模型是由冲击能量引起的，冲击能量通过投掷物或开颅手术穿透的颅骨传递到脑实质。已经建立了使用这些模型来评估TBI的药物治疗(Faden等人,Science,1989May 19；244(4906):798-800)。

侧向流体冲击模型提供了一种损伤，其复制了没有颅骨骨折的临床挫伤，并且显示了大多数病理变化和损伤严重程度之间的直接关系。它被广泛用于神经创伤研究中的机制研究和药物筛选。

其他模型使用受控的皮质撞击在大鼠中造成创伤性脑损伤(Dixon等人,JNeurosci Methods.1991Oct；39(3):253-62)。

这些和其它动物模型可用于评估本文所述的RORA激动剂化合物在治疗TBI、减轻其严重性或持续时间、或减缓其进展方面的有效性，尤其是当可在处理动物和对照动物之间进行比较时。该化合物可以在脑损伤诱导之前、同时或之后施用，任选地与用于治疗创伤性脑损伤的其他活性剂组合施用。包含RORA激动剂化合物和附加活性剂的药物组合物在本文描述的本发明的范围内。

实施例19

胰腺炎是胰腺炎症的一个例子。胰腺炎最常见的原因包括胆结石(40％)、酗酒(33％)、自发性(15-25％)和内窥镜逆行胰胆管造影术(ERCP)后(5-10％)。胰腺炎的治疗是有限的，通常是支持性的。急性胰腺炎的总死亡率为10-15％。因此，迫切需要找到胰腺炎的治疗方法。

根据最近的一些论文，FGF21可以作为胰腺炎的一种治疗方法(Hernandez,G.等人,Pancreatitis is an FGF21-deficient state that is corrected by replacementtherapy.Science Translational Medicine 12,(2020))。ROR-α是调节FGF21的转录因子之一(Luo,Y.等人,Oncogenic KRAS Reduces Expression of FGF21 in Acinar Cells toPromote Pancreatic Tumorigenesis in Mice on a High-Fat Diet.Gastroenterology157,1413-1428.e11(2019))。

ROR-α激动剂如RS2982和本文所述的化合物可使用诱导胰腺炎的模型，例如本文所述的两种不同小鼠模型，来评估其对胰腺炎的治疗作用。

在第一个模型中，雨蛙肽诱导胰腺炎(CIP)(参见，例如，Hyun,J.J.&Lee,H.S.Experimental models of pancreatitis.Clinical Endoscopy 47,212–216(2014))，对6-10周龄的小鼠每小时腹腔注射七次雨蛙肽(50ug/kg)。对照组注射生理盐水。第一次注射后24小时，给小鼠注射RS2982(2.5-25mg/kg)或DMSO，一天后检查小鼠胰腺炎。

在第二个模型中，酒精诱导的胰腺炎(AIP)，6-10周龄的小鼠在1小时内腹膜内注射乙醇(1.3g/kg)和POA(150mg/kg)两次(Huang,W.等人,Fatty acid ethyl estersynthase inhibition ameliorates ethanol-induced Ca2+-dependent mitochondrialdysfunction and acute pancreatitis.Gut 63,1313–1324(2014))。第一次注射后24小时，给小鼠注射RS2982(2.5-25mg/kg)或DMSO，一天后检查小鼠胰腺炎。

使用这些模型之一，在DMSO/不同剂量的SR1078(商业ROR-α激动剂)处理6小时后，在266-6鼠腺泡细胞中进行FFG21 mRNA表达的RT-qPCR分析。相对于DMSO计算统计显著性，并通过Student t检验(双尾)确定。图中的值是平均值±SD。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，***p<0.0001。

图16中显示的数据表明SR1078增加了腺泡细胞中Fgf21的表达。在10微摩尔(μM)浓度下观察到最佳效果，随着剂量增加到20然后到40微摩尔(μM)，效果降低。

实施例20:鉴定有效的RORα(RORA)激动剂的分析

化合物与RORA受体结合的能力、与该受体结合时具有激动剂活性的能力以及不穿过血脑屏障和/或不与GABA受体结合的能力是本文所述方法中有用的化合物的重要考虑因素。

激动剂、反向激动剂、拮抗剂结合在RORA LBD(配体结合结构域)的相同结合口袋中。图17显示了结合结构域，以及嵌入该结构域内的化合物。

已知许多化合物是RORA受体的激动剂和反向激动剂:

RORA激动剂

胆固醇

RORA反向激动剂

因此，重要的不仅是鉴定以相对高的亲和力结合RORA受体的化合物，而且是鉴定是激动剂而不是拮抗剂、反向激动剂等的化合物。

RORα激动剂可用于增加肝脏microRNA122(MIR122)表达水平，进而可用于治疗胰腺炎、肌肉减少症、中风、胶质母细胞瘤和创伤性脑损伤，以及脂肪肝疾病，包括脂肪肝(NASH)和相关疾病。小鼠肝脏中RORA表达的增加增加了MIR122的表达并降低了脂毒性。

Chai等人公开的试验(Chai等人,“Agonist of RORA Attenuates NonalcoholicFatty Liver Progression in Mice via Up-regulation of MicroRNA122,”Gastroenterology.2020；159(3):999-1014.e9)，是可用于鉴定RORA激动剂的试验的一个例子。该试验用于筛选化合物库和鉴定RORα激动剂。

材料与方法

细胞培养

人肝细胞癌细胞系Huh7在补充有10％胎牛血清、1％青霉素/链霉素(ThermoFisher Scientific，Waltham，MA)的Dulbecco氏改良Eagle培养基中培养。将细胞在37℃下在含有5％CO₂的潮湿环境中培养，除了如本文表明将细胞置于32℃的实验以外。

质粒

如前所述产生跨越相对于转录起始位点的-900个碱基对的区域并突变RORA结合位点(分别为质粒pMIR122-900和pMIR122-RORAmut)的人MIR122启动子片段。

转染

对于萤光素酶测定，使用脂质体LTX(Invitrogen,Waltham,MA)转染试剂将萤光素酶报告质粒(50ng)和1ng海肾萤光素酶载体(PRL，Promega)共转染在24孔板上生长的细胞。对于所有实验，使用无血清培养基进行转染(Opti-MEM；Cat#31985070；ThermoScientific)。

萤光素酶活性测定

转染后，将细胞用被动裂解缓冲液(目录号E1941；Promega)裂解，在室温下震荡20min，然后转移到合适的96孔板中。使用双重荧光素酶报告测定系统(Cat#E1910；Promega)在光度计Mithras 2000(Centro XZ,LB960,Berthold Technologies,BadWildbad,德国)上评估萤火虫和海肾荧光素酶的活性。将所述荧光素酶活性标准化为海肾荧光素酶活性。读数一式三份。

可以靶向虚拟筛选来鉴定新的RORA激动剂。可以将商业上可获得的化合物库对接并记录到与胆固醇硫酸盐复合的RORA配体结合结构域的晶体结构模型中。

一旦鉴定了先导化合物，就可以对它们进行活性测试筛选，例如，通过使用如上所述的荧光素酶启动子报告质粒分析它们对MIR122启动子的诱导。如图18A和B所示，与合适的miR-122启动子位点结合的化合物，一旦结合，显示激动剂活性，将诱导荧光素酶活性(图18A)，因此被鉴定为RORA激动剂。如果该化合物没有结合到适当的位点，和/或没有诱导荧光素酶活性(图18B)，那么它将不会被鉴定为RORA激动剂。因此，该筛选试验可用于鉴定潜在的RORA激动剂。

使用该筛选试验，化合物68被鉴定为有效的MIR122启动子，比商业合成的RORA激动剂SR1078更有效。图19显示了野生型和突变型RORA在0.5、1和5μM浓度下的筛选试验结果。

化合物68具有下式:

由于一个或多个芳基环上的取代或杂环大小的变化预计不会显著改变化合物对RORA受体的亲和力，或改变活性，或改变化合物穿过血脑屏障和/或与GABA受体结合的能力，这些化合物的通式如下所示，并且这些化合物在本文所述化合物的范围内:

及其药学上可接受的盐和前药，其中R²和u如以上关于通式A所定义，除了u也可以是0，并且n是0、1或2。

因为化合物68具有苯二氮卓核心:

其他苯并二氮杂卓也潜在地具有RORA活性，并且可以使用上述针对该活性的试验进行筛选。

已知具有药理活性的代表性苯二氮卓类药物(BDZs)，尽管不知道其与RORA受体结合，如下所示:

BDZ药物通常用于治疗焦虑、癫痫发作和失眠，并提供镇静作用，它们在中枢神经系统中的活性模式通常与其在脑中与GABA受体(如GABA-A受体)的结合有关。为了与GABA-A受体结合，药物必须穿过血脑屏障(BBB)。

在某些实施方案中，所述化合物穿过血脑屏障，并且还表现出RORA激动剂活性，并且在这些实施方案中，它们可用于治疗创伤性脑损伤。在这些实施方案中，还必须考虑化合物对GABA-A受体的作用，但是当在治疗创伤性脑损伤患者的同时利用这些作用是可接受的或理想的时，这些化合物在这种治疗中是有效的。

在其他实施方案中，所述化合物不穿过血脑屏障，或者以可感知的浓度不穿过血脑屏障，因此对大脑中的GABA受体具有最小的影响或没有影响。因此，它们将不会具有传统上与BDZ药物相关的作用，即不会引起镇静作用，并且可用于治疗本文讨论的除创伤性脑损伤以外的疾病。

存在用于确定化合物是否具有CNS活性的预测模型，例如在Gourdeau,H.,McAlpine,J.B.,Ranger,M.等人,Identification,characterization and potentantitumor activity of ECO-4601,a novel peripheral benzodiazepine receptorligand.Cancer Chemother Pharmacol 61,911–921(2008)中公开的试验。使用这种试验，预测化合物地西泮没有CNS活性，这种预测后来被实验证明。因此，该试验是BDZ和本文所述其它化合物的CNS活性的合理预测器。简而言之，该试验包括筛选化合物结合两种不同受体的能力，即外周和中枢苯二氮卓受体。当化合物结合外周苯并二氮卓受体但不结合中枢苯并二氮卓受体，或对外周苯并二氮卓受体表现出明显高于中枢苯并二氮卓受体的结合亲和力(即，5/1或更高、10/1或更高、20/1或更高、或最优选50/1或更高的比率)时，预期化合物不会表现出明显的CNS副作用，即使它们穿过血脑屏障。用于筛选化合物对各种受体(例如外周和中枢苯二氮卓受体)的结合亲和力的试验是本领域技术人员众所周知的，在此无需更详细地讨论。

使用该试验，筛选了一系列BDZ化合物，结果如下表所示。

药物分子	CNS	QPlogBB	QPlogS
				化合物68	-1	-0.991	-6.808
奥氮平	2	0.758	-4.230
				氯氮平	2	0.895	-4.240
洛沙平	2	0.991	-3.870
				哌仑扎平	1	0.158	-1.003
地西泮霉素	-2	-2.097	-7.326
				Sintamil	0	-0.854	-1.456

在上表中，“CNS”一列显示了预测的中枢神经系统活性，范围为-2(不活跃)至+2(活跃)。“QlogBB”一列显示了预测的脑/血液分配系数。药物避免BBB的理想qLogBB范围是-3.0–1.2。该值越正，化合物越有可能通过BBB。QlogS一列显示了预测的水溶性，log S，其中S以mol/dm^-3表示，是与结晶固体平衡的饱和溶液中溶质的浓度。本文所述化合物的QlogS的理想范围是-6.5–0.5，该值越负，化合物的溶解性越差。使用这些预测模型，据信化合物68不可能是CNS活性的。

这些模型也可用于筛选其它苯二氮卓衍生物，包括本文所述的化合物。

溴结构域抑制剂(BDZ衍生物)

化合物(+)-JQ1、(+)-MS417和I-BET是苯二氮卓衍生物，也已知是溴结构域抑制剂，并且是非CNS活性的(Smith等人,“Privileged Diazepine Compounds and TheirEmergence as Bromodomain Inhibitors,”Chemistry&Biology,Volume 21,Issue 5,Pages 573-583(2014))。它们的结构如下所示:

正如对上表中的化合物所做的那样，也评估了这三种化合物穿过血脑屏障的可能性。结果如下表所示:

基于此信息，预测这些和其他溴结构域抑制剂的中枢神经系统活性低于列表中的其他BDZ药物。

传统的BDZ药物通过与GABA-A受体结合表现出CNS活性。为了进一步确定这些化合物在穿过血脑屏障时是否具有CNS活性，可以进行一项研究来确定它们与GABA-A受体的结合。

可以用GABA-A受体的pdb结构进行分子对接，例如，使用GABA-A受体的一种或多种蛋白质数据库结构，如6X3X(与GABA加地西泮复合的人GABAA受体α1-β2-γ2亚型)、6X3U(与GABA加氟马西尼复合的人GABAA受体α1-β2-γ2亚型)。对具有GABA-A受体的两种pdb结构(蛋白质数据库(pdb)id 6X3X和6X3U)的化合物68进行了代表性的计算机分子对接研究。基于停靠评分，化合物68与GABA-A受体的结合亲和力低于已知的BDZ药物，因此即使其穿过血脑屏障，预计也几乎不显示CNS活性。

虚拟筛选已被证明是一种非常成功的方法，用于在基于结构的药物发现项目中寻找配体命中和辅助先导物优化。通过将大的化合物库对接到靶受体的一个或多个高分辨率结构中，通常需要通过实验筛选较少的化合物来鉴定预期的先导化合物优化候选物。

除了识别可能与蛋白质靶结合良好的小分子，对接方法还用于多种情况，如多肽和大环的姿态预测，预测蛋白质-配体复合物的几何结构，以及用自由能微扰或MM-GBSA等方法制备用于结合亲和力预测的同源序列。该方法包括平均气相能量(MM)和由广义玻恩模型(GB/SA)确定的溶剂化自由能(参见，例如，Gohlke和Case,Computational Chemistry,Volume 25,Issue 2,Pages 238-250(2004))。超越了基于结构的虚拟筛选中常见的刚性受体近似，诱导契合对接方案预测了配体对接对蛋白质结构的影响。

Glide对接和评分方法

Glide HTVS、SP和XP对接方法是众所周知的。Glide HTVS和SP使用一系列分级过滤器来寻找配体在受体结合位点区域的可能位置。受体的形状和性质在网格上由不同组的域来表示，这些域提供了配体位置的逐渐更精确的评分。配体扭转的详尽列举产生了在对接过程中检查的配体构象的集合。给定这些配体构象，在配体可用的整个相空间上确定性地进行初始筛选，以定位有希望的配体位置。从通过初始筛选选择的姿态，使用具有距离依赖性介电模型的OPLS34(Glide SP&XP)或OPLS2005(GLIDE HTVS)在受体域中的扭转空间中精制配体。最后，在具有完全配体灵活性的受体域内，少量的姿态可以被最小化(对接后最小化或PDM)。

结合泊松-玻尔兹曼或广义玻恩和表面积连续溶剂化(MM/PBSA和MM/GBSA)方法的分子力学能量可用于估计小配体与生物大分子结合的自由能(Genheden S,Ryde U.TheMM/PBSAand MM/GBSAmethods to estimate ligand-binding affinities.Expert OpinDrug Discov.2015；10(5):449-461)。

使用这些方法鉴定的先导化合物可以通过在体内、体外或计算机方式中评估它们的吸附、分布、代谢和排泄(统称为ADME)以及毒性来评估它们作为潜在治疗剂的有效性。对吸附、分布、代谢和排泄(统称为ADME)进行计算机评估的一种代表性方法是QikProp(Schrodinger)。QikProp预测了广泛的预测特性，包括辛醇/水和水/气log Ps、log S、logBB、总CNS活性、Caco-2和MDCK细胞渗透性、人血清白蛋白结合的log Khsa和HERG K+通道阻塞的log IC₅₀。这允许确定分子作为潜在治疗剂的适合性。QikProp的预测基于完整的3D分子结构，因此可以提供准确的结果来预测具有新型支架的分子以及知名药物类似物的特性。QikProp快速筛选化合物库以获得有用的匹配结果，识别具有超出已知药物正常范围的计算属性的分子，从而轻松筛选出具有不合适ADME属性的候选分子。

电子毒性评估的一种代表性方法是Derek Nexus。Derek Nexus预测了大多数毒理学终点的潜在毒性，包括致癌性、诱变性、遗传毒性、皮肤致敏性、致畸性、刺激性、呼吸致敏性和生殖毒性。

因此，可以使用对接-Glide SP/XP MM-GBSA(或者可以使用MM-PBSA)，与RORB/C&RORA反向激动剂结构对接，来评估化合物结合各种受体的计算机能力。使用这种方法，对苯二氮卓类分子文库进行潜在CNS活性的筛选。确定了以下先导化合物。

虽然不希望受特定理论的束缚，但据信芳环上的取代不会显著改变化合物作为RORA激动剂或GABA-A激动剂的活性，或其穿过血脑屏障的能力。因此，预期以下通式的化合物表现出对RORA受体的结合亲和力、结合后的激动剂活性、对RORA的选择性优于GABA-A和/或不能或很少能穿过血脑屏障:

及其药学上可接受的盐和前药，其中R²和u如以上关于通式A所定义，不同之处在于u可以是0，并且n是0、1或2。

基于使用本实施例中讨论的筛选试验获得的信息，认为式B-H的化合物将是RORA受体的激动剂，将以高亲和力与RORA受体结合，不会以高亲和力与GABA受体如GABA-A受体结合，并且不会穿过血脑屏障。使用本实施例中描述的筛选分析，可以测试单个化合物以确认这些特性。

本发明的范围不受这里描述的具体实施方式的限制。实际上，根据前面的描述和附图，除了所描述的那些之外，本发明的各种修改对于本领域技术人员来说将变得显而易见。这种修改旨在落入所附权利要求的范围内。

本文引用了各种出版物，其公开内容通过引用整体并入本文。

Claims (68)

1.一种用于治疗、预防选自由胰腺炎、肌肉减少症、中风、胶质母细胞瘤和创伤性脑损伤组成的组的病症、降低其易感性、降低其严重性或延缓其进展的方法，包括向有此需要的患者施用有效量的通式(A)化合物:

或其药学上可接受的盐或前药，其中：

其中X和Z中之一选自由-NH-、-N(NH₂)-、-N(OH)-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-、-O-、-CH₂-、-CH(C_1-10烷基)-、C(C_1-10烷基)₂-、-CH(C_3-10环烷基)-、-CH(C_2-10烯基、-CH(C_2-10炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O-C_1-10烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NH-C_1-10烷基)-和-CH(C(O)NH₂)-组成的组，

而X和Z中的另一个选自由-C(O)-、-SO₂-、-N(C(O)-、-CH₂-、-CH(C_1-10烷基)-、C(C_1-10烷基)₂-、-CH(C_3-10环烷基)-、-CH(C_2-10烯基、-CH(C_2-10炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NHC_1-10烷基)-和-CH(C(O)NH₂)-组成的组，

Y选自由-NH、-N(NH₂)-、-N(OH)-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-、or-N(杂芳基)-、-O-、-CH₂-、-CH(C_1-10烷基)-、-CH(C_3-10环烷基)-、-CH(C_2-10烯基、-CH(C_2-10炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-C(C_1-10烷基)₂-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O-C_1-10烷基)-、-C(O)-、-SO₂-、-N(C(O)-C_1-10烷基)-、-N(C(O)O-C_1-10烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NH-C_1-10烷基)-和-CH(C(O)NH₂)-组成的组，

A和B独立地是苯基、含有一个、两个或三个氮、氧或硫原子的五元杂芳族环或含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳族环；

u和v独立地为0、1、2、3或4；条件是u和v中的至少一个为1、2、3或4；

每个R¹和R²独立地为R³、OH、OR³、SR³、S(O)R³、SO₂R³、C(O)R³、C(O)OR³、OC(O)R³、OC(O)OR³、NH₂、NHR³、NHC(O)R³、NR³C(O)R³、NHS(O)₂R³、NR³S(O)₂R³、NHC(O)OR³、NR³C(O)OR³、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR³、NHC(O)N(R³)₂、NR³C(O)N(R³)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR³、C(O)N(R³)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR³、C(O)NHSO₂R³、C(O)NR³SO₂R³、SO₂NH₂、SO₂NHR³、SO₂N(R³)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR³、C(N)N(R³)₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、-CH₂-膦酸酯、-CH₂O-磷酸酯、CH₂P(O)(OH)₂、CH₂P(O)(OR³)₂、CH₂P(O)(OR³)(NR³)、CH₂P(O)(NR³)₂、CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)或CH₂-cycloSal单磷酸酯前药，

其中术语磷酸酯包括单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯和稳定化的磷酸酯前药，术语膦酸酯包括磷酸酯前药中存在的相同的前药，

并且当R¹和R²在相邻的碳上时，它们可以一起形成饱和或不饱和的烷基、芳族或杂芳族环，

每个R³独立地为芳基、杂芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其每个未被取代或独立地被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：R⁴、OH、OR⁴、SR⁴、S(O)R⁴、SO₂R⁴、C(O)R⁴、C(O)OR⁴、OC(O)R⁴、OC(O)OR⁴、NH₂、NHR⁴、NHC(O)R⁴、NR⁴C(O)R⁴、NHS(O)₂R⁴、NR⁴S(O)₂R⁴、NHC(O)OR⁴、NR⁴C(O)OR⁴、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR⁴、NHC(O)N(R⁴)₂、NR⁴C(O)N(R⁴)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR⁴、C(O)N(R⁴)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR⁴、C(O)NHSO₂R⁴、C(O)NR⁴SO₂R⁴、SO₂NH₂、SO₂NHR⁴、SO₂N(R⁴)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR⁴、C(N)N(R⁴)₂、C(N)OH、C(N)OCH⁴、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)、cycloSal单磷酸酯前药、CH₂P(O)(OH)₂、CH₂P(O)(OR⁴)₂、CH₂P(O)(OR⁴)(NR⁴)、CH₂P(O)(NR⁴)₂、CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和CH₂-cycloSal单磷酸酯前药，

每个R⁴独立地选自芳基、杂芳基、芳基烷基、烷基芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：R⁵、OH、OR⁵、SR⁵、S(O)R⁵、SO₂R⁵、C(O)R⁵、C(O)OR⁵、OC(O)R⁵、OC(O)OR⁵、NH₂、NHR⁵、NHC(O)R⁵、NR⁵C(O)R⁵、NHS(O)₂R⁵、NR⁵S(O)₂R⁵、NHC(O)OR⁵、NR⁵C(O)OR⁵、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR⁵、NHC(O)N(R⁵)₂、NR⁵C(O)N(R⁵)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR⁵、C(O)N(R⁵)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR⁵、C(O)NHSO₂R⁵、C(O)NR⁵SO₂R⁵、SO₂NH₂、SO₂NHR⁵、SO₂N(R⁵)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR⁵、C(N)N(R⁵)₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和cycloSal单磷酸酯前药，

每个R⁵独立地为芳基、杂芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：R⁶、OH、OR⁶、SR⁶、S(O)R⁶、SO₂R⁶、C(O)R⁶、C(O)OR⁶、OC(O)R⁶、OC(O)OR⁶、NH₂、NHR⁶、NHC(O)R⁶、NR⁶C(O)R⁶、NHS(O)₂R⁶、NR⁶S(O)₂R⁶、NHC(O)OR⁶、NR⁶C(O)OR⁶、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR⁶、NHC(O)N(R⁶)₂、NR⁶C(O)N(R⁶)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR⁶、C(O)N(R⁶)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR⁶、C(O)NHSO₂R⁶、C(O)NR⁶SO₂R⁶、SO₂NH₂、SO₂NHR⁶、SO₂N(R⁶)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR⁶、C(N)N(R⁶)₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、F、Cl、Br、I、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和cycloSal单磷酸酯前药，

每个R⁶独立地为芳基、杂芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、OH、NH₂、C(O)NH_2、C(O)NHOH、SO₂NH_2、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和cycloSal单磷酸酯前药，

或其药学上可接受的盐或前药。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物是视黄酸受体样孤儿受体(ROR)α激动剂。

3.根据权利要求1所述的方法，其中X和Z中之一为-C(O)-、-SO₂-或-NC(O)-，并且另一个为-NH-、-N(NH₂)-、-N(OH)-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；-N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-或-O-。

4.根据权利要求1所述的方法，其中X和Z中之一为-C(O)-、-SO₂-或-N(C(O)-，并且另一个为-CH₂-、-CH(C_1-6烷基)-、C(烷基)₂-、-CH(C_3-8环烷基)-、-CH(C_2-6烯基、-CH(C_2-6炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NH烷基)-或-CH(C(O)NH₂)-。

5.根据权利要求1所述的方法，其中X和Z中之一为-NH-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；-N(NH₂)-、-N(OH)-、-N(烷基)-或-O-，并且另一个为-CH₂-、-CH(C_1-6烷基)-、C(烷基)₂-、-CH(C_3-8环烷基)-、-CH(C_2-6烯基、-CH(C_2-6炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NH烷基)-或-CH(C(O)NH₂)-。

6.根据权利要求1所述的方法，其中X和Z中之一为-NH-、-N(NH₂)-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；-N(OH)-、-N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-，并且另一个为-C(O)-或-SO₂-。

7.根据权利要求1所述的方法，其中Y为-NH、-N(NH₂)-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；-NH(OH)-、-N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-或-O-。

8.根据权利要求6所述的方法，其中Y为-NH、-N(NH₂)-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；-N(OH)-、-N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-，

9.根据权利要求1所述的方法，其中R¹和R²之一是H、-CH₂-膦酸酯、-CH₂O-磷酸酯，其中术语磷酸酯包括单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯和稳定化的磷酸酯前药，术语膦酸酯包括磷酸酯前药中存在的相同的前药。

10.根据权利要求1所述的方法，其中R¹和R²之一为H、-CH₂P(O)(OH)₂、-CH₂P(O)(OH)(OR⁶)、-CH₂P(O)(OR⁶)₂、-CH₂P(O)(OR⁶)(NR⁶)、-CH₂P(O)(NR⁶)₂、-CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)或-CH₂-cycloSal单磷酸酯前药。

11.根据权利要求9所述的方法，其中R¹和R²之一是膦酸酯、氨基磷酸酯、cycloSal单磷酸酯前药，或具有下式-CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)。

12.根据权利要求1所述的方法，其中R¹和R²之一为C(O)NHR⁴、C(O)(NR⁴)₂，

成-C(O)R⁴.

其中R⁴为C_1-10烷基、C_3-10环烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_1-10卤代烷基、C_1-10烷基-芳基或C_1-10卤代烷基-芳基，并且m为0、1或2。

13.根据权利要求1所述的方法，其中R¹和R²之一为-C(O)-C_1-10烷基、-C(O)-烷基芳基、-C(O)-杂环基-烷基芳基、-C(O)-杂环基-CH₂-芳基、-C(O)-杂环基-CF₂-芳基、-C(O)-环烷基-烷基芳基、-C(O)NHC_1-10烷基、-C(O)NH-烷基芳基、-C(O)NH-杂环基-烷基芳基、-C(O)NH-杂环基-CF₂-芳基、-C(O)NH-环烷基-烷基芳基、-SO₂-C_1-10烷基、-SO₂-烷基芳基、-SO₂-杂环基-烷基芳基、-SO₂-杂环基-CF₂-芳基或-SO_2-环烷基-烷基芳基。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有以下通式之一：

或其药学上可接受的盐或前药。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有通式：

或其药学上可接受的盐或前药。

16.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述化合物在组合物中施用，其中所述组合物包括药学上可接受的载体或赋形剂。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述组合物是透皮组合物或纳米颗粒组合物。

18.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其进一步包含施用来自通式(A)的第二视黄酸受体样孤儿受体(ROR)调节剂。

19.根据权利要求1至14中任一权利要求所述的方法，其进一步包含施用用于治疗胰腺炎、肌肉减少症、中风或创伤性脑损伤的一种或多种额外的活性剂。

20.根据权利要求15所述的方法，还包括施用一种或多种活性剂，所述活性剂选自由用于治疗胰腺炎、肌肉减少症、中风或创伤性脑损伤的药剂组成的组。

21.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述胰腺炎为高甘油三酯血症诱导的胰腺炎、由医源性疾病引起的胰腺炎(鉴于ERCP手术的胰腺炎)、由胆结石引起的胰腺炎或由饮酒引起的胰腺炎。

22.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中在与胰腺炎风险增加相关的治疗和/或手术之前、同时或之后施用通式(A)化合物。

23.一种药物组合物，其包含权利要求1至14中任一项所述的化合物和一种或多种活性剂，所述活性剂选自由他汀类药物、ACE抑制剂、口服避孕药/激素替代疗法(HRT)、利尿剂、抗逆转录病毒疗法、丙戊酸、口服降糖药及其组合组成的组。

24.一种药物组合物，其包含权利要求1至14中任一项所述的化合物和一种或多种活性剂，所述活性剂选自由血液稀释剂、分解存在的血凝块的化合物、血小板聚集抑制剂、抗凝剂、神经保护剂、阿加曲班、alfimeprase、替奈普酶、安克洛酶、西地那非、胰岛素、胰岛素生长因子、硫酸镁、人血清白蛋白、咖啡因醇、微纤溶酶、他汀、依替巴肽、亭扎肝素、依那卡丁、胞磷胆碱、依达拉奉、西洛他唑及其组合物组成的组。

25.一种药物组合物，其包含权利要求1至14中任一项的化合物和一种或多种活性剂，所述活性剂选自由氨甲环酸、镇静剂、镇痛剂、麻痹剂、抗癫痫药物、去甲肾上腺素、胰岛素和VLA-1(极晚期激活抗原-I)拮抗剂组成的组。

26.一种药物组合物，其包含权利要求1至14中任一项的化合物和一种或多种活性剂，所述活性剂选自由替莫唑胺、大麻素、小檗碱、紫苏醇、放射增敏剂、硼中子俘获剂、抗惊厥药、皮质类固醇、使用CLTX、IL13Rα2、Her2/CMV、EGFRvIII、CSPG4、NKG2DL、CD19或CD133作为靶向结构域的嵌合抗原受体(CAR)T细胞、MP-Pt(IV)、RIPGBM和(Ribociclib)组成的组。

27.通式A化合物在制备用于治疗、预防选自由胰腺炎、肌肉减少症、中风、胶质母细胞瘤和创伤性脑损伤组成的组的病症、降低其易感性、降低其严重性或延缓其进展的药物中的用途，其中通式(A)具有以下结构:

或其药学上可接受的盐或前药，其中：

其中X和Z中之一选自由-NH-、-N(NH₂)-、-N(OH)-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-、-O-、-CH₂-、-CH(C_1-10烷基)-、C(C_1-10烷基)₂-、-CH(C_3-10环烷基)-、-CH(C_2-10烯基、-CH(C_2-10炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O-C_1-10烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NH-C_1-10烷基)-和-CH(C(O)NH₂)-组成的组，

而X和Z中的另一个选自由-C(O)-、-SO₂-、-N(C(O)-、-CH₂-、-CH(C_1-10烷基)-、C(C_1-10烷基)₂-、-CH(C_3-10环烷基)-、-CH(C_2-10烯基、-CH(C_2-10炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NHC_1-10烷基)-和-CH(C(O)NH₂)-组成的组，

Y选自由-NH、-N(NH₂)-、-N(OH)-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-、或-N(杂芳基)-、-O-、-CH₂-、-CH(C_1-10烷基)-、-CH(C_3-10环烷基)-、-CH(C_2-10烯基、-CH(C_2-10炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-C(C_1-10烷基)₂-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O-C_1-10烷基)-、-C(O)-、-SO2-、-N(C(O)-C_1-10烷基)-、-N(C(O)O-C_1-10烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NH-C_1-10烷基)-和-CH(C(O)NH₂)-组成的组，

A和B独立地是苯基、含有一个、两个或三个氮、氧或硫原子的五元杂芳族环或含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳族环；

u和v独立地为0、1、2、3或4；条件是u和v中的至少一个为1、2、3或4；

每个R¹和R²独立地为R³、OH、OR³、SR³、S(O)R³、SO₂R³、C(O)R³、C(O)OR³、OC(O)R³、OC(O)OR³、NH₂、NHR³、NHC(O)R³、NR³C(O)R³、NHS(O)₂R³、NR³S(O)₂R³、NHC(O)OR³、NR³C(O)OR³、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR³、NHC(O)N(R³)₂、NR³C(O)N(R³)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR³、C(O)N(R³)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR³、C(O)NHSO₂R³、C(O)NR³SO₂R³、SO₂NH₂、SO₂NHR³、SO₂N(R³)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR³、C(N)N(R³)₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、-CH₂-膦酸酯、-CH₂O-磷酸酯、CH₂P(O)(OH)₂、CH₂P(O)(OR³)₂、CH₂P(O)(OR³)(NR³)、CH₂P(O)(NR³)₂、CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)或CH₂-cycloSal单磷酸酯前药，

其中术语磷酸酯包括单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯和稳定化的磷酸酯前药，术语膦酸酯包括磷酸酯前药中存在的相同的前药，

并且当R¹和R²在相邻的碳上时，它们可以一起形成饱和或不饱和的烷基、芳族或杂芳族环，

每个R³独立地为芳基、杂芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其每个未被取代或独立地被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：R⁴、OH、OR⁴、SR⁴、S(O)R⁴、SO₂R⁴、C(O)R⁴、C(O)OR⁴、OC(O)R⁴、OC(O)OR⁴、NH₂、NHR⁴、NHC(O)R⁴、NR⁴C(O)R⁴、NHS(O)₂R⁴、NR⁴S(O)₂R⁴、NHC(O)OR⁴、NR⁴C(O)OR⁴、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR⁴、NHC(O)N(R⁴)₂、NR⁴C(O)N(R⁴)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR⁴、C(O)N(R⁴)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR⁴、C(O)NHSO₂R⁴、C(O)NR⁴SO₂R⁴、SO₂NH₂、SO₂NHR⁴、SO₂N(R⁴)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR⁴、C(N)N(R⁴)₂、C(N)OH、C(N)OCH⁴、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)、cycloSal单磷酸酯前药、CH₂P(O)(OH)₂、CH₂P(O)(OR⁴)₂、CH₂P(O)(OR⁴)(NR⁴)、CH₂P(O)(NR⁴)₂、CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和CH₂-cycloSal单磷酸酯前药，

每个R⁴独立地选自芳基、杂芳基、芳基烷基、烷基芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：R⁵、OH、OR⁵、SR⁵、S(O)R⁵、SO₂R⁵、C(O)R⁵、C(O)OR⁵、OC(O)R⁵、OC(O)OR⁵、NH₂、NHR⁵、NHC(O)R⁵、NR⁵C(O)R⁵、NHS(O)₂R⁵、NR⁵S(O)₂R⁵、NHC(O)OR⁵、NR⁵C(O)OR⁵、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR⁵、NHC(O)N(R⁵)₂、NR⁵C(O)N(R⁵)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR⁵、C(O)N(R⁵)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR⁵、C(O)NHSO₂R⁵、C(O)NR⁵SO₂R⁵、SO₂NH₂、SO₂NHR⁵、SO₂N(R⁵)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR⁵、C(N)N(R⁵)₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和cycloSal单磷酸酯前药，

每个R⁵独立地为芳基、杂芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：R⁶、OH、OR⁶、SR⁶、S(O)R⁶、SO₂R⁶、C(O)R⁶、C(O)OR⁶、OC(O)R⁶、OC(O)OR⁶、NH₂、NHR⁶、NHC(O)R⁶、NR⁶C(O)R⁶、NHS(O)₂R⁶、NR⁶S(O)₂R⁶、NHC(O)OR⁶、NR⁶C(O)OR⁶、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR⁶、NHC(O)N(R⁶)₂、NR⁶C(O)N(R⁶)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR⁶、C(O)N(R⁶)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR⁶、C(O)NHSO₂R⁶、C(O)NR⁶SO₂R⁶、SO₂NH₂、SO₂NHR⁶、SO₂N(R⁶)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR⁶、C(N)N(R⁶)₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、F、Cl、Br、I、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和cycloSal单磷酸酯前药，

每个R⁶独立地为芳基、杂芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、OH、NH₂、C(O)NH_2、C(O)NHOH、SO₂NH_2、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和cycloSal单磷酸酯前药，

或其药学上可接受的盐或前药。

28.根据权利要求26所述的用途，其中所述化合物是视黄酸受体样孤儿受体(ROR)α激动剂。

29.根据权利要求26所述的用途，其中X和Z中之一为-C(O)-、-SO₂-或-NC(O)-，并且另一个为-NH-、-N(NH₂)-、-N(OH)-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；-N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-，或-O-。

30.根据权利要求26所述的用途，其中X和Z中之一为-C(O)-、-SO₂-或-N(C(O)-，并且另一个为-CH₂-、-CH(C_1-6烷基)-、C(烷基)₂-、-CH(C_3-8环烷基)-、-CH(C_2-6烯基、-CH(C_2-6炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NH烷基)-或-CH(C(O)NH₂)-。

31.根据权利要求26所述的用途，其中X和Z中之一为-NH-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；-N(NH₂)-、-N(OH)-、-N(烷基)-或-O-，和另一个为-CH₂-、-CH(C_1-6烷基)-、C(烷基)₂-、-CH(C_3-8环烷基)-、-CH(C_2-6烯基、-CH(C_2-6炔基)-、-CH(芳基)-、-CH(杂芳基)-、-CF₂-、-CCl₂-、-CH(CF₃)-、-CH(OH)-、-CH(O烷基)-、-CH(NH₂)-、-CH(NH烷基)-或-CH(C(O)NH₂)-。

32.根据权利要求26所述的用途，其中X和Z中之一为-NH-、-N(NH₂)-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；-N(OH)-、-N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-，并且另一个为-C(O)-或-SO₂-。

33.根据权利要求26所述的用途，其中Y为-NH、-N(NH₂)-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；-NH(OH)-、-N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-或-O-。

34.根据权利要求26所述的用途，其中Y为-NH、-N(NH₂)-、-N(CH₂-O-P(O)(OH)₂)-；-N(OH)-、-N(C_1-10烷基)-、-N(C_3-10环烷基)-、-N(C_2-10烯基)-、-N(C_2-10炔基)-、-N(芳基)-或-N(杂芳基)-。

35.根据权利要求26所述的用途，其中R¹和R²之一是H、-CH₂-膦酸酯、-CH₂O-磷酸酯，其中术语磷酸酯包括单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯和稳定化的磷酸酯前药，术语膦酸酯包括磷酸酯前药中存在的相同的前药。

36.根据权利要求26所述的用途，其中R¹和R²之一为H、-CH₂P(O)(OH)₂、-CH₂P(O)(OH)(OR⁶)、-CH₂P(O)(OR⁶)₂、-CH₂P(O)(OR⁶)(NR⁶)、-CH₂P(O)(NR⁶)₂、-CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)或-CH₂-cycloSal单磷酸酯前药。

37.根据权利要求35所述的用途，其中R¹和R²之一是膦酸酯、氨基磷酸酯、cycloSal单磷酸酯前药，或具有通式-CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)。

38.根据权利要求26所述的用途，其中R¹和R²之一为C(O)NHR⁴、C(O)(NR⁴)₂、

或-C(O)R⁴.

其中R⁴为C_1-10烷基、C_3-10环烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_1-10卤代烷基、C_1-10烷基-芳基或C_1-10卤代烷基-芳基，并且m为0、1或2。

39.根据权利要求26所述的用途，其中R¹和R²之一为-C(O)-C_1-10烷基、-C(O)-烷基芳基、-C(O)-杂环基-烷基芳基、-C(O)-杂环基-CH₂-芳基、-C(O)-杂环基-CF₂-芳基、-C(O)-环烷基-烷基芳基、-C(O)NHC_1-10烷基、-C(O)NH-烷基芳基、-C(O)NH-杂环基-烷基芳基、-C(O)NH-杂环基-CF₂-芳基、-C(O)NH-环烷基-烷基芳基、-SO₂-C_1-10烷基、-SO₂-烷基芳基、-SO₂-杂环基-烷基芳基、-SO₂-杂环基-CF₂-芳基或-SO_2-环烷基-烷基芳基。

40.根据权利要求26所述的用途，其中所述化合物具有以下通式之一：

或其药学上可接受的盐或前药。

41.根据权利要求26所述的用途，其中所述化合物具有通式：

或其药学上可接受的盐或前药。

42.根据权利要求26至40中任一项所述的用途，其中所述化合物在组合物中施用，其中所述组合物包括药学上可接受的载体或赋形剂。

43.根据权利要求41所述的用途，其中所述组合物是透皮组合物或纳米颗粒组合物。

44.根据权利要求26至40中任一项所述的用途，其进一步包含施用来自通式(A)的第二视黄酸受体样孤儿受体(ROR)调节剂。

45.根据权利要求26至40中任一项所述的用途，其进一步包含施用用于治疗胰腺炎、肌肉减少症、中风或创伤性脑损伤的一种或多种额外的活性剂。

46.根据权利要求41所述的用途，其进一步包括施用一种或多种活性剂，所述活性剂选自由用于治疗胰腺炎、肌肉减少症、中风或创伤性脑损伤的药剂组成的组。

47.根据权利要求26至40中任一项所述的用途，其中所述胰腺炎为高甘油三酯血症诱导的胰腺炎、由医源性疾病引起的胰腺炎(鉴于ERCP手术的胰腺炎)、由胆结石引起的胰腺炎或由饮酒引起的胰腺炎。

48.根据权利要求26至40中任一项所述的方法，其中在与胰腺炎风险增加相关的治疗和/或手术之前、同时或之后施用通式(A)化合物。

49.一种用于治疗、预防选自由胰腺炎、肌肉减少症、中风、胶质母细胞瘤和创伤性脑损伤组成的组的病症、降低其易感性、降低其严重性或延缓其进展的方法，包括向有此需要的患者施用有效量的通式(B)-(H)化合物:

u独立地是0、1、2、3或4；

n独立地是0、1或2，

每个R²独立地为R³、OH、OR³、SR³、S(O)R³、SO₂R³、C(O)R³、C(O)OR³、OC(O)R³、OC(O)OR³、NH₂、NHR³、NHC(O)R³、NR³C(O)R³、NHS(O)₂R³、NR³S(O)₂R³、NHC(O)OR³、NR³C(O)OR³、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR³、NHC(O)N(R³)₂、NR³C(O)N(R³)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR³、C(O)N(R³)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR³、C(O)NHSO₂R³、C(O)NR³SO₂R³、SO₂NH₂、SO₂NHR³、SO₂N(R³)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR³、C(N)N(R³)₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、-CH₂-膦酸酯、-CH₂O-磷酸酯、CH₂P(O)(OH)₂、CH₂P(O)(OR³)₂、CH₂P(O)(OR³)(NR³)、CH₂P(O)(NR³)₂、CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)或CH₂-cycloSal单磷酸酯前药，

其中术语磷酸酯包括单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯和稳定化的磷酸酯前药，术语膦酸酯包括磷酸酯前药中存在的相同的前药，

每个R³独立地为芳基、杂芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其每个未被取代或独立地被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：R⁴、OH、OR⁴、SR⁴、S(O)R⁴、SO₂R⁴、C(O)R⁴、C(O)OR⁴、OC(O)R⁴、OC(O)OR⁴、NH₂、NHR⁴、NHC(O)R⁴、NR⁴C(O)R⁴、NHS(O)₂R⁴、NR⁴S(O)₂R⁴、NHC(O)OR⁴、NR⁴C(O)OR⁴、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR⁴、NHC(O)N(R⁴)₂、NR⁴C(O)N(R⁴)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR⁴、C(O)N(R⁴)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR⁴、C(O)NHSO₂R⁴、C(O)NR⁴SO₂R⁴、SO₂NH₂、SO₂NHR⁴、SO₂N(R⁴)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR⁴、C(N)N(R⁴)₂、C(N)OH、C(N)OCH⁴、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)、cycloSal单磷酸酯前药、CH₂P(O)(OH)₂、CH₂P(O)(OR⁴)₂、CH₂P(O)(OR⁴)(NR⁴)、CH₂P(O)(NR⁴)₂、CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和CH₂-cycloSal单磷酸酯前药，

每个R⁴独立地选自芳基、杂芳基、芳基烷基、烷基芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：R⁵、OH、OR⁵、SR⁵、S(O)R⁵、SO₂R⁵、C(O)R⁵、C(O)OR⁵、OC(O)R⁵、OC(O)OR⁵、NH₂、NHR⁵、NHC(O)R⁵、NR⁵C(O)R⁵、NHS(O)₂R⁵、NR⁵S(O)₂R⁵、NHC(O)OR⁵、NR⁵C(O)OR⁵、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR⁵、NHC(O)N(R⁵)₂、NR⁵C(O)N(R⁵)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR⁵、C(O)N(R⁵)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR⁵、C(O)NHSO₂R⁵、C(O)NR⁵SO₂R⁵、SO₂NH₂、SO₂NHR⁵、SO₂N(R⁵)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR⁵、C(N)N(R⁵)₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和cycloSal单磷酸酯前药，

每个R⁵独立地为芳基、杂芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：R⁶、OH、OR⁶、SR⁶、S(O)R⁶、SO₂R⁶、C(O)R⁶、C(O)OR⁶、OC(O)R⁶、OC(O)OR⁶、NH₂、NHR⁶、NHC(O)R⁶、NR⁶C(O)R⁶、NHS(O)₂R⁶、NR⁶S(O)₂R⁶、NHC(O)OR⁶、NR⁶C(O)OR⁶、NHC(O)NH₂、NHC(O)NHR⁶、NHC(O)N(R⁶)₂、NR⁶C(O)N(R⁶)₂、C(O)NH₂、C(O)NHR⁶、C(O)N(R⁶)₂、C(O)NHOH、C(O)NHOR⁶、C(O)NHSO₂R⁶、C(O)NR⁶SO₂R⁶、SO₂NH₂、SO₂NHR⁶、SO₂N(R⁶)₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)NHR⁶、C(N)N(R⁶)₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、F、Cl、Br、I、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和cycloSal单磷酸酯前药，

每个R⁶独立地为芳基、杂芳基、C_3-10环烷基、C_3-10环烯基、杂环烷基、杂环烯基、C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，其中每一个是未取代的或独立地被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、OH、NH₂、C(O)NH₂、C(O)NHOH、SO₂NH₂、COOH、C(O)H、C(N)NH₂、C(N)OH、C(N)OCH₃、CN、N₃、NO₂、CF₃、CF₂CF₃、OCF₃、OCF₂CF₃、卤素(F、Cl、Br或I)、P(O)(OH)₂、P(O)(OR⁴)₂、P(O)(OR⁴)(NR⁴)、P(O)(NR⁴)₂、P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)和cycloSal单磷酸酯前药，

或其药学上可接受的盐或前药。

50.根据权利要求48所述的方法，其中所述化合物是视黄酸受体样孤儿受体(ROR)α激动剂。

51.根据权利要求48所述的方法，其中R¹之一是H、-CH₂-膦酸酯、-CH₂O-磷酸酯，其中术语磷酸酯包括单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯和稳定化的磷酸酯前药，术语膦酸酯包括磷酸酯前药中存在的相同的前药。

52.根据权利要求48所述的方法，其中R¹之一为H、-CH₂P(O)(OH)₂、-CH₂P(O)(OH)(OR⁶)、-CH₂P(O)(OR⁶)₂、-CH₂P(O)(OR⁶)(NR⁶)、-CH₂P(O)(NR⁶)₂、-CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)或-CH₂-cycloSal单磷酸酯前药。

53.根据权利要求51所述的方法，其中R¹和R²之一是膦酸酯、氨基磷酸酯、cycloSal单磷酸酯前药，或具有下式-CH₂P(O)(OH)(OC_1-10烷基-O-C_1-20烷基)。

54.根据权利要求48所述的方法，其中R¹之一为C(O)NHR⁴、C(O)(NR⁴)₂、

或-C(O)R⁴.

其中R⁴为C_1-10烷基、C_3-10环烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_1-10卤代烷基、C_1-10烷基-芳基或C_1-10卤代烷基-芳基和m为0、1或2。

55.根据权利要求48所述的方法，其中R¹之一为-C(O)-C_1-10烷基、-C(O)-烷基芳基、-C(O)-杂环基-烷基芳基、-C(O)-杂环基-CH₂-芳基、-C(O)-杂环基-CF₂-芳基、-C(O)-环烷基-烷基芳基、-C(O)NHC_1-10烷基、-C(O)NH-烷基芳基、-C(O)NH-杂环基-烷基芳基、-C(O)NH-杂环基-CF₂-芳基、-C(O)NH-环烷基-烷基芳基、-SO₂-C_1-10烷基、-SO₂-烷基芳基、-SO₂-杂环基-烷基芳基、-SO₂-杂环基-CF₂-芳基或-SO_2-环烷基-烷基芳基。

56.根据权利要求48所述的方法，其中所述化合物具有通式：

或其药学上可接受的盐或前药。

57.根据权利要求48至55中任一项所述的方法，其中所述化合物在组合物中施用，其中所述组合物包括药学上可接受的载体或赋形剂。

58.根据权利要求56所述的方法，其中所述组合物是透皮组合物或纳米颗粒组合物。

59.根据权利要求48至55中任一项所述的方法，其进一步包含施用来自通式(A)的第二视黄酸受体样孤儿受体(ROR)调节剂。

60.根据权利要求48至55中任一项所述的方法，其进一步包含施用用于治疗胰腺炎、肌肉减少症、中风或创伤性脑损伤的一种或多种额外活性剂。

61.根据权利要求59所述的方法，其进一步包括施用一种或多种活性剂，所述活性剂选自由用于治疗胰腺炎、肌肉减少症、中风或创伤性脑损伤的药剂组成的组。

62.根据权利要求48至55中任一项所述的方法，其中所述胰腺炎为高甘油三酯血症诱导的胰腺炎、由医源性疾病引起的胰腺炎(鉴于ERCP手术的胰腺炎)、由胆结石引起的胰腺炎或由饮酒引起的胰腺炎。

63.根据权利要求48至55中任一项所述的方法，其中在与胰腺炎风险增加相关的治疗和/或手术之前、同时或之后施用通式(B)-(H)的化合物。

64.一种药物组合物，其包含根据权利要求48至55中任一项所述的化合物和一种或多种活性剂，所述活性剂选自由他汀类药物、ACE抑制剂、口服避孕药/激素替代疗法(HRT)、利尿剂、抗逆转录病毒疗法、丙戊酸、口服降糖药及其组合物组成的组。

65.一种药物组合物，其包含权利要求48至55中任一项所述的化合物和一种或多种活性剂，所述活性剂选自由血液稀释剂、分解现有血凝块的化合物、血小板聚集抑制剂、抗凝剂、神经保护剂、阿加曲班、alfimeprase、替奈普酶、安克洛酶、西地那非、胰岛素、胰岛素生长因子、硫酸镁、人血清白蛋白、咖啡因醇、微纤溶酶、他汀、依替巴肽、亭扎肝素、依那卡丁、胞磷胆碱、依达拉奉、西洛他唑及其组合物组成的组。

66.一种药物组合物，其包含根据权利要求48至55中任一项所述的化合物和一种或多种活性剂，所述活性剂选自由氨甲环酸、镇静剂、镇痛剂、麻痹剂、抗癫痫药、去甲肾上腺素、胰岛素和VLA-1(极晚期激活抗原-I)拮抗剂组成的组。

67.一种药物组合物，其包含权利要求48至55中任一项的化合物和一种或多种活性剂，所述活性剂选自由替莫唑胺、大麻素、小檗碱、紫苏醇、放射增敏剂、硼中子俘获剂、抗惊厥药、皮质类固醇、使用CLTX、IL13Rα2、Her2/CMV、EGFRvIII、CSPG4、NKG2DL、CD19或CD133作为靶向结构域的嵌合抗原受体(CAR)T细胞、MP-Pt(IV)、RIPGBM和(Ribociclib)组成的组。

68.通式(B)-(H)的化合物在制备用于治疗、预防选自由胰腺炎、肌肉减少症、中风、胶质母细胞瘤和创伤性脑损伤组成的组的病症、降低其易感性、降低其严重性或延缓其进展的药物中的用途。