CN116670278A - 用于降低z-aat蛋白水平的方法 - Google Patents

Abstract

描述了通过使用包含AAT RNAi剂的药物组合物来降低具有α‑1抗胰蛋白酶(AAT)的PiZZ基因型的人受试者中的肝脏Z‑AAT蛋白水平的方法。本文所公开的包含AAT RNAi剂的所述药物组合物在施用于具有PiZZ突变的人受试者时引起肝脏Z‑AAT蛋白水平降低，包括可溶性Z‑AAT蛋白和不溶性Z‑AAT蛋白两者。此类降低能够导致治疗与AAT缺乏相关的肝脏疾病，诸如慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌风险增加、转氨酶升高、胆汁淤积、纤维化、暴发性肝衰竭和其它肝脏相关疾病。

Description

用于降低Z-AAT蛋白水平的方法

相关申请的交叉引用

本PCT申请要求2020年9月15日提交的美国临时申请第63/078,658号和2021年4月27日提交的美国临时申请第63/180,487号的优先权权益，所述美国临时申请两者均以引用的方式整体并入本文。

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技术领域

本文公开了使用药物组合物降低具有α-1抗胰蛋白酶缺乏(AATD)的Z突变的人受试者中的肝脏Z-AAT蛋白水平的方法，所述药物组合物包含抑制α-1抗胰蛋白酶基因表达的RNA干扰(RNAi)剂。

背景技术

α-1抗胰蛋白酶(AAT、α1-抗胰蛋白酶或A1AT)为在人中由SERPINA1基因编码的属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族的蛋白酶抑制剂。正常AAT蛋白为在肝脏中主要由肝细胞合成且分泌至血液中的循环糖蛋白蛋白酶抑制剂。AAT的已知生理功能为抑制嗜中性粒细胞蛋白酶，其用于保护宿主组织免于炎症时段期间的非特异性损伤。

AATD为常染色体共显性遗传病症，其导致低AAT循环水平且引起成人早期肺病以及儿童和成人肝脏疾病。AATD的流行范围为每1,500至5,000个体中约1人，并且最通常侵袭具有欧洲血统的人。

AATD的临床上最显著且最严重的形式由Z突变(称为PiZZ基因型)的纯合性引起，其中编码谷氨酸的单核苷酸多态性被成熟蛋白质的位置342处的赖氨酸取代(Glu342Lys)。Z突变体等位基因经由单一点突变使得突变体Z型AAT蛋白(“Z-AAT蛋白”)易于异常折叠，从而导致肝细胞的内质网(ER)中的细胞内保留。其它较罕见突变也在肝细胞中产生错误折叠的累积蛋白质。突变体Z-AAT蛋白单体能够集合成聚合物聚集体，有时称为“小球”。聚合Z-AAT对ER产生应力并且触发连续肝细胞损伤和愈合周期，从而导致纤维化、肝硬化和肝细胞癌风险增加。另外，循环抗蛋白酶活性缺乏使得肺易患嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的损伤，尤其在肺炎症的环境下，导致发展呼吸系统并发症(诸如肺气肿或其它肺病)。

具有纯合PiZZ基因型的个体具有功能性AAT的重度缺乏。每周使用AAT强化疗法、使用经纯化的人AAT有助于预防受侵袭个体的肺损伤。此类目前出售的产品包括例如-C、GLASSIA^TM、NP知然而，尽管施用经纯化的AAT可改善或帮助预防由内源分泌性AAT的不存在或低水平引起的肺损伤，但AATD患者(具有引起聚合物形成的AAT-突变)仍易患由过度异常折叠的AAT蛋白的沉积和累积引起的内质网肝脏贮积病。肝细胞中呈“小球”构象的累积的Z-AAT蛋白为AATD肝脏疾病的熟知组织学特征并且认为导致患有AATD的个体的蛋白毒性效应，所述蛋白毒性效应负责诱导肝脏损伤，包括肝脏细胞损坏和死亡以及慢性肝脏损伤(参见例如D.Lindblad等人，Hepatology 2007，46：1228-1235)。据报告，不产生AAT的空/空患者发展重度肺病，但具有正常肝脏形态，从而提供突变体AAT累积且非缺乏循环AAT导致肝病的证据(Feldman，G.等人，The Ultrastructure of Hepatocytes in alpha-1 antitrypsindeficiency with genotype Pi_，Gut.1975；16：796-799)。

AATD使个体易患儿童和成人肝脏疾病和成人早期发作型肺气肿。患有AATD的患者通常发展肝脏疾病，其可为重度或致死的，甚至在婴儿中也如此。尽管一些患有AATD的患者最初避开检测，但最终纤维化累积且导致临床上明显的肝脏疾病。肝脏损伤的临床呈现包括慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌风险增加、转氨酶升高(transaminitis)、胆汁淤积、纤维化和甚至暴发性肝衰竭。

肝细胞中的Z-AAT蛋白累积已清楚地鉴别为AATD患者中进行性肝脏疾病的病因。消除肝细胞中的突变体蛋白累积可阻止肝脏疾病的进展。去除突变体蛋白损伤也可使已存在的纤维化消退。目前无临床上批准的治疗来预防由AATD引起的肝脏疾病的发作，减缓其进展或以其它方式来治疗。

RNAi剂已成为治疗AATD患者的有希望的途径。给药策略为用RNAi剂治疗AATD的重要考虑因素。较不频繁的给药为患者所看重，可增加顺从性，并且较小给药量在药物的总体安全性特征中可能有利。因此，需要低剂量、不频繁的治疗AATD的方法。

发明内容

本文描述了降低具有AATD的Z突变的人受试者中的肝脏Z-AAT蛋白水平的方法。在一个方面中，所述方法包括向人受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含表2中所述的组合物(即AAT RNAi原料药，在本文中也称为ADS-001或其盐)，AAT RNAi原料药(例如ADS-001或其盐)的剂量介于约5mg与约300mg之间，其中药物组合物为例如皮下施用且剂量之间间隔例如约一个月或约四周。在一些实施方案中，用于本文所公开的方法中的药物组合物包含如表3.1中所述的经配制的AAT RNAi原料药(在本文中也称为ADS-001-1或其盐)或表3.2的制剂(在本文中也称为ADS-001-2)，由其组成或基本上由其组成。如本文所用且取决于上下文，术语“约”或“大约”意指在给定值或范围的5％内，例如在5％内、在4％内、在3％内、在2％内或在1％内。

另外，本文描述了降低具有AATD的Z突变的人受试者中的Z-AAT肝脏蛋白水平的方法，所述方法包括向人受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含剂量介于约5mg与约200mg之间的如表2中所述的AAT RNAi原料药(例如ADS-001或其盐)，其中药物组合物为例如皮下施用且在剂量施用之间间隔例如至少约一个月(即约每月给药)。

本文进一步描述了治疗有需要的人受试者的AATD的方法，所述方法包括向人受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含剂量介于约5mg与约300mg之间的如表2中所述的AAT RNAi原料药(例如ADS-001或其盐)，其中药物组合物为例如皮下施用且在剂量施用之间间隔例如约三个月(即每季度给药)。

本文还描述了治疗有需要的人受试者的AATD的方法，所述方法包括向人受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含剂量介于约5mg与约200mg之间的如表2中所述的AATRNAi原料药(例如ADS-001或其盐)，其中药物组合物为例如皮下施用且在剂量施用之间间隔例如约三个月(即每季度给药)。

本文描述了治疗有需要的人受试者的AATD的方法，所述方法包括向人受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含剂量介于约5mg与约300mg之间的如表2中所述的AATRNAi原料药(例如ADS-001或其盐)，其中药物组合物为例如皮下施用，并且其中初始剂量之后为例如约四周或约一个月后的第二剂量，并且此后对于后续剂量，在剂量施用之间间隔例如约三个月。

本文描述了治疗有需要的人受试者的AATD的方法，所述方法包括向人受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含剂量介于约5mg与约200mg之间的如表2中所述的AATRNAi原料药(例如ADS-001或其盐)，其中药物组合物为例如皮下施用，并且其中初始剂量之后为例如约一个月后的第二剂量，并且此后对于后续剂量，在剂量施用之间间隔例如约三个月。

在一些实施方案中，在每一剂量中施用的AAT RNAi原料药(例如ADS-001或其盐)的剂量介于例如约25mg与约200mg之间。在一些实施方案中，在每一剂量中施用的AAT RNAi原料药(例如ADS-001或其盐)的剂量介于约100mg与约200mg之间。在一些实施方案中，在每一剂量中施用的AAT RNAi原料药(例如ADS-001或其盐)的剂量为约100mg。在一些实施方案中，在每一剂量中施用的AAT RNAi原料药(例如ADS-001或其盐)的剂量为约200mg。在一些实施方案中，在每一剂量中施用的AAT RNAi原料药的剂量不大于200mg。

本文所公开的治疗方法可减缓或阻止患有AATD的人受试者的肝脏疾病进展，其可允许纤维变性组织修复。在一些实施方案中，本文所公开的方法可治疗AATD肝脏疾病，包括纤维化、肝硬化、肝细胞癌风险增加、慢性肝炎、转氨酶升高、胆汁淤积、暴发性肝衰竭和由AATD引起的其它肝脏相关疾患和疾病。在一些方面中，本文所公开的方法可预防本文所公开的AATD肝脏疾病的症状、并发症和/或后遗症、延迟其发作或改善所述症状、并发症和/或后遗症。

可将包含本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的药物组合物施用于人受试者以抑制受试者中α-1抗胰蛋白酶基因的表达。在一些实施方案中，受试者为先前已经诊断患有AATD的人。

本发明的另一方面提供表2中所述的AAT RNAi原料药(例如ADS-001或其盐)用于治疗有需要的人受试者的α-1抗胰蛋白酶缺乏(AATD)的用途，其中所述用途包括向受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含表2中所述的AAT RNAi原料药(例如ADS-001或其盐)，AAT RNAi原料药的剂量介于约5mg至约300mg之间，其中药物组合物每月一次例如通过皮下注射施用。

本发明的另一方面提供表2中所述的AAT RNAi原料药(例如ADS-001或其盐)用户于治疗有需要的人受试者的α-1抗胰蛋白酶缺乏(AATD)的用途，其中所述用途包括向受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含表2中所述的AAT RNAi原料药(例如ADS-001或其盐)，AAT RNAi原料药的剂量介于约5mg至约300mg之间，其中药物组合物每三个月一次例如通过皮下注射施用。

在一些方面中，本公开提供一种降低具有α-1抗胰蛋白酶的PiZZ基因型的人受试者中的肝脏Z-AAT蛋白水平的方法，所述方法包括(i)向受试者施用初始剂量的药物组合物，所述药物组合物包含表2中所述的AAT RNAi原料药，AAT RNAi原料药的剂量介于约5mg至约300mg之间，(ii)在初始剂量后约四周或约一个月向受试者施用第二剂量的药物组合物，和(iii)在第二剂量后约12周或约三个月向受试者施用第三剂量的药物组合物，其中剂量通过皮下注射来施用。

在一些方面中，AAT RNAi原料药的剂量介于约25mg与约300mg之间。在一些方面中，AAT RNAi原料药的剂量介于约25mg与约200mg之间。在一些方面中，AAT RNAi原料药的剂量介于约100mg与约200mg之间。在一些方面中，AAT RNAi原料药的剂量为约100mg。在一些方面中，AAT RNAi原料药的剂量为约200mg。在一些方面中，AAT RNAi原料药的剂量为约200mg或更少。在一些方面中，可溶性肝脏Z-AAT蛋白水平降低。在一些方面中，不溶性肝脏Z-AAT蛋白水平降低。在一些方面中，不溶性肝脏Z-AAT蛋白水平和可溶性肝脏Z-AAT蛋白水平两者均降低。

在一些方面中，所述方法还包括在第三剂量后施用额外剂量，其中额外剂量在此后约每12周或约每三个月施用。在一些方面中，肝脏Z-AAT蛋白水平在距初始剂量六个月内降低。在一些方面中，肝脏Z-AAT蛋白水平在距初始剂量约一年内降低。在一些方面中，Z-AAT蛋白水平在施用仅三个剂量的AAT RNAi原料药后降低。在一些方面中，肝脏不显示纤维化的恶化或改善。在一些方面中，肝酶ALT(丙氨酸氨基转移酶)、GGT(γ-谷氨酰转移酶)或两者减少。在一些方面中，纤维发生标志物Pro-C3减少。在一些方面中，门静脉肝脏炎症减轻。在一些方面中，通过瞬时弹性成像对肝脏硬度的非侵入性测量有所改善。

在一些方面中，向受试者进一步施用用于治疗AATD的另一治疗剂。在一些方面中，向受试者进一步施用用于治疗肺损伤、肺气肿或由内源分泌性AAT蛋白缺乏引起的其它肺疾病或病症的治疗剂。在一些方面中，另一治疗剂包含人AAT蛋白、经纯化的人α-1蛋白酶抑制剂或重组AAT蛋白。

在一些方面中，包含表2中所述的AAT RNAi原料药的药物组合物包装于药盒、容器、包、分配器、预填充注射器或小瓶中。在一些方面中，药物组合物包含表3.1或表3.2中所述的经配制的AAT RNAi原料药，由其组成或基本上由其组成。在一些方面中，施用一个或多个剂量的药物组合物由受试者实施。在一些方面中，施用一个或多个剂量的药物组合物由医疗专业人员实施。在一些方面中，受试者为成人。

本公开还提供一种治疗具有α-1抗胰蛋白酶的PiZZ基因型的人受试者的AATD的方法，所述方法包括(i)向受试者施用初始剂量的药物组合物，所述药物组合物包含表2中所述的AAT RNAi原料药，AAT RNAi原料药的剂量介于约5mg至约300mg之间，(ii)在初始剂量后约四周或约一个月向受试者施用第二剂量的药物组合物，和(iii)在第二剂量后约12周或约三个月向受试者施用第三剂量的药物组合物，其中剂量通过皮下注射来施用。在一些方面中，由AATD引起的疾患或疾病为肝脏疾病。在一些方面中，肝脏疾病为慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌风险增加、转氨酶升高、胆汁淤积、纤维化或暴发性肝衰竭。在一些方面中，AATRNAi原料药的剂量介于约100mg与约200mg之间。在一些方面中，AAT RNAi原料药的剂量为约200mg或更少。

在本文所公开的方法的一些方面中，单体(可溶性)肝脏Z-AAT蛋白水平降低。在一些方面中，不溶性肝脏Z-AAT蛋白水平降低。在一些方面中，不溶性肝脏Z-AAT蛋白水平和可溶性肝脏Z-AAT蛋白水平两者均降低。在本文所公开的治疗具有α-1抗胰蛋白酶的PiZZ基因型的人受试者的AATD的方法的一些方面中，所述方法还包括在第三剂量后施用额外剂量，其中额外剂量在此后约每12周或约每三个月施用。在一些方面中，肝脏Z-AAT蛋白水平在初始剂量的约六个月内降低。在一些方面中，肝脏Z-AAT蛋白水平在初始剂量的约一年内降低。在一些方面中，Z-AAT蛋白水平在施用仅三个剂量的AAT RNAi原料药后降低。

在本文所公开的方法的一些方面中，向人受试者施用包含表2中所述的AAT RNAi原料药(ADS-001)的药物组合物引起(i)纤维化减轻；(ii)门静脉周围肝细胞的水平降低；(iii)血清Z-AAT减少；(iv)总肝脏Z-AAT减少；(v)可溶性肝脏Z-AAT减少；(vi)不溶性肝脏Z-AAT减少；(vii)ALT减少；(viii)GGT减少；(ix)Pro-C3减少；(x)脂肪变性的组织学改善，或(xi)其组合。

在一些方面中，血清Z-AAT的减少为至少约70％。在一些方面中，血清Z-AAT的减少介于约70％与约100％之间。在一些实施方案中，血清Z-AAT的减少为约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约97％或约99％。在一些方面中，总肝脏Z-AAT的减少为至少约70％。在一些方面中，总肝脏Z-AAT的减少介于约70％与约100％之间。在一些实施方案中，总肝脏Z-AAT的减少为约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约97％或约99％。在一些方面中，可溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约50％。在一些方面中，可溶性肝脏Z-AAT的减少介于约50％与约97％之间。在一些实施方案中，可溶性肝脏Z-AAT的减少为约55％、约60％、约65％、约70％、约80％、约85％、约90％或约95％。在一些方面中，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约40％。在一些方面中，不溶性肝脏Z-AAT的减少介于约40％与约97％之间。在一些实施方案中，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％。在一些方面中，ALT减少为至少约30％。在一些方面中，ALT的减少介于约30％与约75％之间。在一些实施方案中，ALT的减少为约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％或约70％。在一些方面中，GGT的减少为至少约25％。在一些方面中，GGT的减少介于约25％与约85％之间。在一些实施方案中，GGT的减少为约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或约80％。在一些方面中，纤维化的减轻为至少约15％，如通过所测量。在一些方面中，纤维化的减轻介于约15％与约90％之间，如通过所测量。在一些实施方案中，纤维化的减轻为约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％或约85％，如通过所测量。在一些方面中，Pro-C3的减少为至少约15％。在一些方面中，Pro-C3的减少介于约15％与约90％之间。在一些方面中，人受试者具有脂肪变性的组织学改善。在一些实施方案中，Pro-C3的减少为约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％或约85％。在一些方面中，向人受试者施用包含表2中所述的AAT RNAi原料药(ADS-001)的药物组合物可改善纤维化、门静脉炎症、界面性肝炎、整体门静脉道累及、PAS+D区域定位、1区“小球”门静脉周围累及或其任何组合。

上述所有变化是相对于预定阈值、相对于在施用AAT RNAi原料药之前受试者中的水平、相对于未接受AAT RNAi原料药的受试者中的水平或相对于在群体中测定的对照水平。纤维化；门静脉周围肝细胞；血清Z-AAT；肝脏Z-AAT；可溶性肝脏Z-AAT；不溶性肝脏Z-AAT；ALT；GGT；Pro-C3；或脂肪变性的测量如本公开中所述或使用本领域已知的方法进行。

根据以下详细描述、附图和权利要求，本发明的其它目标、特征、方面和优点将显而易见。

附图说明

图1A至图1E.表2中所述的AAT RNAi原料药(在本文中称为ADS-001；即在有义链的5’末端缀合至三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向基团的AAT RNAi剂)的化学结构表示，以钠盐形式显示。

图2A至图2E.表2中所述的AAT RNAi原料药的化学结构表示，以游离酸形式显示。

图3.表2中所述的AAT RNAi原料药(在本文中称为ADS-001；即在有义链的5’末端缀合至三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向基团的AAT RNAi剂)的经修饰有义链和反义链的示意图。在图3中使用以下缩写：a、c、g和u为2’-O-甲基修饰的核苷酸；Af、Cf、Gf和Uf为2’-氟(在本领域中也称为2’-脱氧-2’-氟)修饰的核苷酸；o为磷酸二酯键联；s为硫代磷酸酯键联；invAb为反向无碱基残基或亚基；并且(NAG37)s为具有以下化学结构的三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体：

(以钠盐形式显示)，或

(以游离酸形式显示)。

图4.实施例2中所述的I期临床研究的最终I期研究设计和剂量递增时间表。

图5.显示来自实施例2中所述的I期临床研究的施用安慰剂(所有群组)或35mgAAT RNAi原料药(群组1)的正常健康人志愿者(NHV)中的血清AAT水平的图。如图5至图11中所显示，“活性剂”是指表2中所述的AAT RNAi原料药(作为如表3.1中所述的经配制的AATRNAi原料药施用)。

图6.显示来自实施例2中所述的I期临床研究的施用安慰剂(所有群组)或单一100mg剂量的AAT RNAi原料药(群组2b)的NHV中的血清AAT水平的图。

图7.显示来自实施例2中所述的I期临床研究的施用安慰剂(所有群组)或单一200mg剂量的AAT RNAi原料药(群组3b)的NHV中的血清AAT水平的图。

图8.显示来自实施例2中所述的I期临床研究的施用安慰剂(所有群组)或单一300mg剂量的AAT RNAi原料药(群组4b)的NHV中的血清AAT水平的图。

图9.显示来自实施例2中所述的I期临床研究的施用安慰剂(所有群组)或每月施用的三个100mg剂量的AAT RNAi原料药(群组2)的NHV中的血清AAT水平的图。

图10.显示来自实施例2中所述的I期临床研究的施用安慰剂(所有群组)或每月施用的三个200mg剂量的AAT RNAi原料药(群组3)的NHV中的血清AAT水平的图。

图11.显示来自实施例2中所述的I期临床研究的施用安慰剂(所有群组)或每月施用的三个300mg剂量的AAT RNAi原料药(群组4)的NHV中的血清AAT水平的图。

图12.实施例3中所述的II期临床研究的II期研究设计和剂量递增时间表。

图13.显示来自实施例3中所述的II期临床研究的施用三个200mg剂量的AAT RNAi原料药(群组1)的PiZZ基因型受试者中的血清Z-AAT水平的图。x轴上指向下方的箭头指示施用时间。LLOQ：定量下限。

图14.显示来自实施例3中所述的II期临床研究的施用三个100mg剂量的AAT RNAi原料药(群组2)的PiZZ基因型受试者中的血清Z-AAT水平的图。x轴上指向下方的箭头指示施用时间。LLOQ：定量下限。

具体实施方式

RNAi剂

本文所述的方法包括向人受试者施用药物组合物，其中药物组合物包含含有能够抑制AAT基因表达的RNAi剂(在本文和本领域中称为RNAi剂或RNAi触发物)的组合物，例如ADS-001或其盐。在一些实施方案中，本文所述的方法包括向人受试者施用药物组合物，其中药物组合物包含表2中所述的AAT RNAi原料药(也称为ADS-001或其药学上可接受的盐)。在本公开的上下文中，术语“其盐”和“其药学上可接受的盐”视为等效和可互换的。如本文所用，术语“包括”和“包含”为可互换的。

适用于本文所公开的方法中的组合物包含抑制人受试者中的AAT基因表达的RNAi剂，和靶向部分或靶向基团。在一些实施方案中，RNAi剂包括表1.1和表1.2中所提供的核苷酸序列，例如SEQ ID NO：2的反义寡核苷酸和SEQ ID NO：4的有义寡核苷酸，其中RNAi剂的有义链(例如SEQ ID NO：4的有义寡核苷酸)进一步连接或缀合至包含三个N-乙酰基-半乳糖胺靶向部分的靶向基团(参见例如表B)。抑制人受试者中的AAT基因表达的RNAi剂称为“AAT RNAi剂”。术语“连接”和“缀合”是指两个部分(例如SEQ ID NO：4的有义寡核苷酸和靶向部分(例如去唾液酸糖蛋白受体靶向部分，如N-乙酰基-半乳糖胺(例如NAG37)))之间的共价连接。在一些实施方案中，“连接”或“缀合”是指靶向部分与寡核苷酸序列的连接，作为例如使用包含一个或多个N-乙酰基-半乳糖胺部分的亚磷酰胺化合物的固相合成方法(SPSS)的步骤。在一些实施方案中，“连接”或“缀合”是指SEQ ID NO：4的有义寡核苷酸和靶向部分(例如去唾液酸糖蛋白受体靶向部分，如N-乙酰基-半乳糖胺(例如NAG37))的共价连接，作为例如通过使用双功能试剂的SPSS后的单独步骤。如本文所用，术语“连接”和“缀合”可互换使用。

一般而言，AAT RNAi剂包含有义链(也称为过客链)和反义链(也称为引导链)，其退火形成双链体。本文所公开的AAT RNAi剂包括能够以序列特异性方式降解或抑制AATmRNA的信使RNA(mRNA)转录物的翻译的RNA或RNA样(例如经化学修饰的RNA)寡核苷酸分子。本文所公开的AAT RNAi剂可经由RNA干扰机制(即经由与哺乳动物细胞的RNA干扰途径机构(RNA诱导的沉默复合物或RISC)相互作用来诱导RNA干扰)或通过任何替代机制或途径起作用。尽管认为如本文所用，术语AAT RNAi剂主要经由RNA干扰机制起作用，但所公开的RNAi剂并不受任一特定途径或作用机制约束或限制。RNAi剂一般而言包含长度各自为16至49个核苷酸的有义链和反义链，并且包括但不限于：短或小干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微小RNA(miRNA)、短发夹RNA(shRNA)和dicer底物。

AAT RNAi剂有义链的长度通常为16至49个核苷酸，并且AAT RNAi剂反义链的长度通常为18至49个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为17至26个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为21至26个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为21至24个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和/或反义链的长度独立地为16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个或30个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度均为21个核苷酸。有义链和反义链可为相同的长度或不同的长度。有义链和反义链也可在AAT RNAi剂的一端或两端形成突出核苷酸。

AAT RNAi剂抑制、沉默或敲低AAT基因表达。如本文所用，术语“沉默”、“降低”、“抑制”、“下调”或“敲低”在提及AAT表达时意指，如通过其中使基因转录的细胞、细胞的组、组织、器官或受试者中从基因转录的RNA水平或从mRNA翻译的多肽、蛋白质或蛋白质亚基的水平所测量，当用RNAi剂处理细胞、细胞的组、组织、器官或受试者时，与尚未经如此处理的第二细胞、细胞的组、组织、器官或受试者相比，基因的表达减少。在一些情况下，基因表达的减少通过比较人受试者中在施用包含AAT RNAi剂的组合物之前的基线AAT mRNA或AAT蛋白水平与施用治疗剂后的AAT mRNA或AAT蛋白水平来测量。

AAT基因抑制、沉默或敲低可通过本领域中已知的任何适当测定或方法来测量。本文所示的非限制性实例以及国际专利申请公布第WO 2018/132432号(其以引用的方式整体并入本文)中所示的实施例提供适于测量AAT基因表达抑制的测定的某些实例。正常野生型人的参考AAT mRNA基因转录物(SERPINA1)(称为转录物变体1；GenBank NM_000295.4)可参见SEQ ID NO：1。

适用于本文所公开的方法中的AAT RNAi剂可共价连接或缀合至包含一个或多个N-乙酰基-半乳糖胺部分的靶向基团，例如包含去唾液酸糖蛋白受体靶向部分(例如N-乙酰基-半乳糖胺)的肝脏靶向基团。在实施方案中，适用于本文所公开的方法中的AAT RNAi剂共价连接或缀合至包含一个或多个N-乙酰基-半乳糖胺部分的靶向基团，由此形成表2中所述的AAT RNAi原料药，即包含SEQ ID NO：6的有义链和SEQ ID NO：2的反义链的双链体RNA(双链RNA)。

在一些实施方案中，本文所述的方法包括施用表2中所述的AAT RNAi原料药，即包含SEQ ID NO：6的有义链和SEQ ID NO：2的反义链的双链体RNA(双链RNA)。表2中所述的AATRNAi原料药包含表1.1(SEQ ID NO：2的反义链)和表1.2(SEQ ID NO：4的有义链)中所显示的AAT RNAi剂。N-乙酰基-半乳糖胺部分有助于AAT RNAi剂靶向容易存在于肝细胞表面上的去唾液酸糖蛋白受体(ASGPr)，其通过胞吞作用或其它方式使AAT RNAi剂内化。

可适用于本文所公开的方法中的AAT RNAi剂包含与AAT mRNA的至少一部分(即AAT mRNA靶序列)具有互补区的反义链。适用于所公开方法中的AAT RNAi剂和AAT RNAi原料药描述于国际专利申请公布第WO 2018/132432号中，所述国际专利申请公布如先前所述以引用的方式整体并入本文。

如本文所用，术语“序列”和“核苷酸序列”意指使用标准命名法用一连串字母描述的一连串或一系列核碱基或核苷酸。除非另外指明，否则核苷酸序列以5’至3’取向从左至右书写。如本文所用，术语“核碱基”和“核苷酸”具有与本领域中所通常理解相同的含义。因此，如本文所用，术语“核苷酸”是指包含糖部分、碱基部分和共价连接基团(键联基团，如磷酸酯或硫代磷酸酯核苷间键联基团)的糖苷，并且涵盖天然存在的核苷酸(如DNA或RNA)和包含经修饰的糖和/或碱基部分的非天然存在的核苷酸两者，所述非天然存在的核苷酸在本文中也称为核苷酸类似物。在本文中，单核苷酸可被称为单体或单元。

如本文所用，术语“互补”在用于描述与第二核苷酸序列(例如RNAi剂有义链或靶向mRNA序列)相关的第一核苷酸序列(例如RNAi剂反义链)时意指，包含第一核苷酸序列的寡核苷酸与包含第二核苷酸序列的寡核苷酸杂交(在哺乳动物生理条件(或其它合适条件)下形成碱基对氢键和在某些标准条件下形成双链体或双螺旋结构)的能力。本领域的普通技术人员将能够选择最适于杂交测试的条件的集合。互补序列包括沃森-克里克碱基对(Watson-Crick base pair)或非沃森-克里克碱基对并且包括天然或经修饰的核苷酸或核苷酸模拟物，其程度至少满足上述杂交要求。序列同一性或互补性与修饰无关。举例而言，出于确定同一性或互补性的目的，如本文所定义的a和Af与U(或T)互补且与A同一。

如本文所用，“完全互补”或“全部互补”意指，第一寡核苷酸的连续序列中的所有(100％)碱基将与第二寡核苷酸的连续序列中的相同数量的核苷酸杂交。连续序列可包含第一核苷酸序列或第二核苷酸序列的全部或一部分。

如本文所用，“部分互补”意指，在核苷酸序列的杂交对中，第一寡核苷酸的连续序列中的至少70％而非所有碱基将与第二多核苷酸的连续序列中的相同数量的碱基杂交。

如本文所用，“实质上互补”意指，在核苷酸序列的杂交对中，第一寡核苷酸的连续序列中的至少85％而非所有碱基将与第二多核苷酸的连续序列中的相同数量的碱基杂交。术语“互补”、“全部互补”、“部分互补”和“实质上互补”在本文中关于RNAi剂的有义链与反义链之间或RNAi剂的反义链与AAT mRNA的序列之间的核苷酸匹配使用。

如本文所用，术语“实质上同一”或“实质上同一性”在应用于核酸序列时意指，核酸序列包含与参考序列相比具有至少约85％序列同一性或更大、例如至少90％、至少95％或至少99％同一性的序列。序列同一性百分比通过在比较窗口内比较两个最佳比对序列来确定。百分比通过以下方式来计算：确定在两个序列中出现同一核酸碱基的位置数以获得匹配位置数，用匹配位置数除以比较窗口中的总位置数且将结果乘以100，以获得序列同一性百分比。本文所公开的发明涵盖实质上与本文所公开的那些核苷酸序列同一的核苷酸序列。

本文所述的化合物可含有若干不对称中心并且可以光学纯对映异构体、对映异构体的混合物(诸如例如外消旋物)、非对映异构体的混合物、非对映异构外消旋物或非对映异构外消旋物的混合物形式存在。在一些实施方案中，不对称中心可为不对称碳原子。

术语“同一”或“同一性”百分比在两个或更多个核酸的上下文中是指，在比较并比对(如果需要，引入空位)以获得最大对应性时，两个或更多个序列相同或具有指定百分比的相同核苷酸，不将任何保守取代视为序列同一性的一部分。同一性百分比可使用序列比较软件或算法或通过视觉检查来测量。本领域中已知可用于获得核苷酸序列比对的多种算法和软件。

序列比对可使用本领域中已知的方法(如MAFFT、Clustal(ClustalW、Clustal X或Clustal Omega)、MUSCLE等)来进行。

与多核苷酸参考序列比对的单一多核苷酸靶序列内的不同区域可各自具有其自身序列同一性百分比。应注意，序列同一性百分比值舍入至十分位。举例而言，80.11、80.12、80.13和80.14向下舍入至80.1，而80.15、80.16、80.17、80.18和80.19向上舍入至80.2。还应注意，长度值始终为整数。

在某些实施方案中，同一性百分比(ID％)或第一核酸序列与第二核酸序列的同一性百分比计算为ID％＝100×(Y/Z)，其中Y为在第一序列和第二序列的比对中(如通过视觉检查或特定序列比对程序所比对)评分为同一匹配的核碱基数，并且Z为第二序列中的总残基数。如果第一序列的长度长于第二序列，则第一序列与第二序列的同一性百分比将高于第二序列与第一序列的同一性百分比。

单位、前缀和符号以其国际单位制(Système International de Unites，SI)接受的形式表示。数字范围包括限定范围的数字。当列举值的范围时应理解，还特定公开介于所述范围的所列举上限与下限之间的每一中间整数值及其每一分数以及此类值之间的每一子范围。任一范围的上限和下限可独立地包括或不包括在所述范围中，并且包括任一限值、不包括任一限值或包括两个限值的每一范围也涵盖于本公开内。因此，本文所列举的范围应理解为所述范围内的所有值的简写，包括所列举终点。举例而言，1至10的范围应理解为包括由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组的任一数字、数字的组合或子范围。

当明确列举值时应理解，与所列举值大约相同的数量或量的值也在本公开的范围内。当公开组合时，还特定公开所述组合的要素的每一子组合，并且在本公开的范围内。相反，当单独地公开不同要素或要素的组时，还公开其组合。当公开的任一要素公开为具有复数个替代时，在此也公开本公开的实施例，其中每一替代经单一地排除或以与其它替代的任何组合的方式排除；公开的多于一个要素可具有此类排除，并且在此公开具有此类排除的要素的所有组合。

经修饰的核苷酸和经修饰的核苷间键联

本文所公开的AAT RNAi剂(例如靶向AAT mRNA转录物的dsRNA)可包含经修饰的核苷酸，其可保持RNAi剂的活性，同时增加血清稳定性，以及最小化激活人中的干扰素活性的可能性。如本文所用的“经修饰的核苷酸”为除核糖核苷酸(2’-羟基核苷酸)外的核苷酸。在一些实施方案中，至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％的核苷酸为经修饰的核苷酸。在一些实施方案中，约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约97％、约98％、约99％或约100％的核苷酸为经修饰的核苷酸。在一些实施方案中，约50％至约60％、约60％至约70％、约70％至约80％、约80％至约90％、约90％至约95％或约95％至约100％的核苷酸为经修饰的核苷酸。如本文所用，经修饰的核苷酸包括本领域中已知的任何已知的经修饰的核苷酸，包括但不限于脱氧核糖核苷酸、核苷酸模拟物、2’-经修饰的核苷酸、反向核苷酸、包含经修饰的核碱基的核苷酸、桥接核苷酸、肽核酸(PNA)、2’，3’-开环核苷酸模拟物(解锁核碱基类似物)、锁核苷酸、3’-O-甲氧基(2’核苷间连接的)核苷酸、2’-F-阿糖核苷酸、5’Me，2’-氟核苷酸、吗啉代核苷酸、含膦酸乙烯酯的核苷酸和含膦酸环丙基酯的核苷酸。在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的经修饰的核苷酸为2’-经修饰的核苷酸(即，在5元糖环的2’位置具有除羟基外的基团的核苷酸)。2’-经修饰的核苷酸包括但不限于2’-O-甲基核苷酸、2’-脱氧-2’-氟核苷酸(通常简称为2’-氟核苷酸)、2’-脱氧核苷酸、2’-甲氧基乙基(2’-O-2-甲氧基乙基)核苷酸、2’-氨基核苷酸和2’-烷基核苷酸。其它2’-经修饰的核苷酸为本领域中已知。给定RNAi剂中的所有核苷酸不必均一地经修饰。另外，可将多于一种修饰并入单一AAT RNAi剂中或甚至并入其单核苷酸中。AAT RNAi剂有义链和反义链可通过本领域中已知的方法合成和/或修饰。一个核苷酸处的修饰独立于另一核苷酸处的修饰。

在一些实施方案中，核碱基(通常简称为“碱基”)可经修饰。如本领域中通常使用，天然核碱基包括主要嘌呤碱基腺嘌呤和鸟嘌呤，和主要嘧啶碱基胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶。核碱基可经修饰以包括但不限于通用碱基、疏水碱基、混杂碱基、大小扩展碱基和氟化碱基。参见例如Modified Nucleosides in Biochemistry，Biotechnology and Medicine，Herdewijn，P.编辑，Wiley-VCH，2008。此类经修饰的核碱基(包括包含经修饰的核碱基的亚磷酰胺化合物)的合成为本领域中已知。

经修饰的核碱基包括例如5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶和N-2、N-6和O-6取代的嘌呤(例如2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶或5-丙炔基胞嘧啶)、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羟甲基胞嘧啶、肌苷、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-烷基(例如6-甲基、6-乙基、6-异丙基或6-正丁基)衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-烷基(例如2-甲基、2-乙基、2-异丙基或2-正丁基)和其它烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶、2-硫胞嘧啶、5-卤基尿嘧啶、胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶、6-偶氮胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-卤基、8-氨基、8-巯基、8-硫烷基、8-羟基和其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、5-卤基(例如5-溴)、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤、8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤、7-脱氮腺嘌呤、3-脱氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌呤。

在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的所有或实质上所有的核苷酸为经修饰的核苷酸。如本文所用，RNAi剂(其中所存在的实质上所有的核苷酸为经修饰的核苷酸)为在有义链和反义链两者中具有四个或更少(即0个、1个、2个、3个或4个)作为核糖核苷酸(即未经修饰)的核苷酸的RNAi剂。如本文所用，有义链(其中所存在的实质上所有的核苷酸为经修饰的核苷酸)为在有义链中具有两个或更少(即0个、1个或2个)作为核糖核苷酸的核苷酸的有义链。如本文所用，反义有义链(其中所存在的实质上所有的核苷酸为经修饰的核苷酸)为在有义链中具有两个或更少(即0个、1个或2个)作为核糖核苷酸的核苷酸的反义链。

在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的一个或多个核苷酸通过非标准键联或主链(即经修饰的核苷间键联或经修饰的主链)连接。经修饰的核苷间键联或主链包括但不限于硫代磷酸酯基团、手性硫代磷酸酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基-磷酸三酯、烷基膦酸酯(例如甲基膦酸酯或3’-亚烷基膦酸酯)、手性膦酸酯、次膦酸酯、氨基磷酸酯(例如3’-氨基氨基磷酸酯、氨基烷基氨基磷酸酯或硫羰氨基磷酸酯)、硫羰烷基-膦酸酯、硫羰烷基磷酸三酯、吗啉代键联、具有正常3’-5’键联的硼代磷酸酯、硼代磷酸酯的2’-5’连接类似物或具有反向极性的硼代磷酸酯，其中相邻核苷单元对的连接由3’-5’变成5’-3’或由2’-5’变成5’-2’。在一些实施方案中，经修饰的核苷间键联或主链缺少磷原子。缺少磷原子的经修饰的核苷间键联包括但不限于短链烷基或环烷基糖间键联、混合杂原子和烷基或环烷基糖间键联或一个或多个短链杂原子或杂环糖间键联。在一些实施方案中，经修饰的核苷间主链包括但不限于硅氧烷主链、硫化物主链、亚砜主链、砜主链、甲酰基和硫代甲酰基主链、亚甲基甲酰基和硫代甲酰基主链、含烯烃的主链、氨基磺酸酯主链、亚甲基亚氨基和亚甲基肼基主链、磺酸酯和磺酰胺主链、酰胺主链以及具有混合N、O、S和CH₂组分的其它主链。

在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的有义链可含有1个、2个、3个、4个、5个或6个硫代磷酸酯键联，AAT RNAi剂的反义链可含有1个、2个、3个、4个、5个或6个硫代磷酸酯键联，或有义链和反义链两者可独立地含有1个、2个、3个、4个、5个或6个硫代磷酸酯键联。在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的有义链可含有1个、2个、3个或4个硫代磷酸酯键联，本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的反义链可含有1个、2个、3个或4个硫代磷酸酯键联，或有义链和反义链两者可独立地含有1个、2个、3个或4个硫代磷酸酯键联。

在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的有义链含有至少两个硫代磷酸酯核苷间键联。在一些实施方案中，至少两个硫代磷酸酯核苷间键联位于有义链的3’端的位置1-3处的核苷酸之间。在一些实施方案中，至少两个硫代磷酸酯核苷间键联位于有义链的5’端的位置1-3、2-4、3-5、4-6、4-5或6-8处的核苷酸之间。在一些实施方案中，硫代磷酸酯核苷间键联用于连接有义链中的末端核苷酸与存在于核苷酸序列的5’端、3’端或5’端和3’端的加帽残基。在一些实施方案中，硫代磷酸酯核苷间键联用于连接靶向基团与有义链。

在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的反义链含有三个或四个硫代磷酸酯核苷间键联。在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的反义链含有三个硫代磷酸酯核苷间键联。在一些实施方案中，三个硫代磷酸酯核苷间键联位于反义链的5’端的位置1-3处的核苷酸之间和5’端的位置19-21、20-22、21-23、22-24、23-25或24-26处的核苷酸之间。在一些实施方案中，本文所公开的AATRNAi剂(例如ADS-001或其盐)在有义链中含有至少两个硫代磷酸酯核苷间键联并且在反义链中含有三个或四个硫代磷酸酯核苷间键联。

在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)含有一个或多个经修饰的核苷酸和一个或多个经修饰的核苷间键联。在一些实施方案中，2’-经修饰核苷与经修饰的核苷间键联组合。

加帽残基或部分

在一些实施方案中，有义链可包含一个或多个加帽残基或部分，在本领域中有时称为“帽”、“端帽”或“加帽残基”。如本文所用，“加帽残基”为可并入本文所公开的RNAi剂的核苷酸序列的一个或多个末端的非核苷酸化合物或其它部分。在一些情况下，加帽残基可提供具有某些有益性质(诸如例如防止核酸外切酶降解)的RNAi剂。在一些实施方案中，添加反向无碱基残基(invAb)(在本领域中也称为“反向无碱基位点”)作为加帽残基(参见表A)。(参见例如F.Czaudema，Nucleic Acids Res.，2003，31(11)，2705-16)。加帽残基可包括例如反向无碱基残基以及碳链，诸如末端C₃H₇(丙基)、C₆H₁₃(己基)或C₁₂H₂₅(十二烷基)。在一些实施方案中，加帽残基存在于本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的有义链的5’末端、3’末端或5’末端和3’末端两者。在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的有义链的5’端和/或3’端可包含多于一个反向无碱基脱氧核糖部分作为加帽残基。

在一些实施方案中，一个或多个反向无碱基残基(invAb)添加至本文所公开的AATRNAi剂(例如ADS-001或其盐)的有义链的3’端。在一些实施方案中，一个或多个反向无碱基残基(invAb)添加至本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的有义链的5’端。在一些实施方案中，一个或多个反向无碱基残基或反向无碱基位点插入本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的靶向配体与有义链的核苷酸序列之间。在一些实施方案中，在本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的有义链的一个或多个末端处或附近并入一个或多个反向无碱基残基或反向无碱基位点可增强RNAi剂的活性或其它所需性质。

在一些实施方案中，一个或多个反向无碱基残基(invAb)添加至本文所公开的AATRNAi剂(例如ADS-001或其盐)的有义链的5’端。在一些实施方案中，一个或多个反向无碱基残基可插入本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的靶向配体与有义链的核苷酸序列之间。在一些实施方案中，反向无碱基残基可经由磷酸酯、硫代磷酸酯(例如在本文中显示为(invAb)s))或其它核苷间键联来连接。反向无碱基脱氧核糖残基的化学结构显示于下表A中以及图1A至图1E和图2A至图2E中所显示的化学结构中。

表A.反向无碱基(脱氧核糖)化学结构

靶向部分和基团

本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)可包含缀合至一个或多个非核苷酸基团的寡核苷酸序列，例如SEQ ID NO：4的有义序列，所述一个或多个非核苷酸基团包括但不限于靶向部分或靶向基团。靶向部分或靶向基团可增强RNAi剂的靶向或递送。在一些实施方案中，靶向部分或靶向基团包含例如肝脏靶向部分。在一些实施方案中，肝脏靶向部分可特异性结合至去唾液酸糖蛋白受体。在一些实施方案中，去唾液酸糖蛋白受体结合部分包含N-乙酰基半乳糖胺(NAG或GalNAc)。在一些实施方案中，NAG为NAG37。用于本文表2中所述的AAT RNAi原料药中的(NAG37)s靶向基团(其包括本文所公开的三个N-乙酰基-半乳糖胺靶向部分)的具体实例提供于表B中。靶向部分或靶向基团可共价连接至有义链(例如SEQ ID NO：4的AAT RNAi剂有义链)和/或反义链(例如SEQ ID NO：2的AAT RNAi剂反义链)的3’端和/或5’端。在一些实施方案中，AAT RNAi剂含有连接至有义链(例如SEQ ID NO：4的AAT RNAi剂有义链)的3’端和/或5’端的靶向基团。在一些实施方案中，靶向基团连接至AATRNAi剂有义链(例如SEQ ID NO：4的AAT RNAi剂有义链)的5’端。在一些实施方案中，靶向基团包含结构(NAG37)s、基本上由其组成或由其组成，并且连接至AAT RNAi剂有义链(例如SEQ ID NO：4的AAT RNAi剂有义链)的5’端。靶向基团可直接连接至RNAi剂，或经由接头/连接基团间接连接至RNAi剂。在一些实施方案中，靶向基团经由不稳定、可裂解或可逆键或接头连接至RNAi剂。在一些实施方案中，靶向基团连接至有义链的5’端的反向无碱基残基。

靶向基团或靶向部分可增强其所连接的缀合物或RNAi剂的药物动力学或生物分布性质，以改善缀合物或RNAi剂的细胞特异性分布和细胞特异性摄取。在一些实施方案中，靶向基团增强RNAi剂的胞吞作用。靶向基团可为单价、二价、三价、四价，或对其所针对的靶标具有更高化合价。代表性靶向基团包括但不限于对细胞表面分子具有亲和力的化合物、细胞受体配体、半抗原、抗体、单克隆抗体、抗体片段和对细胞表面分子具有亲和力的抗体模拟物。

在一些实施方案中，靶向基团包含去唾液酸糖蛋白受体配体。在一些实施方案中，去唾液酸糖蛋白受体配体包括一种或多种半乳糖衍生物或由其组成。如本文所用，术语半乳糖衍生物包括半乳糖和对去唾液酸糖蛋白受体的亲和力等于或大于半乳糖的亲和力的半乳糖衍生物。半乳糖衍生物包括但不限于：半乳糖、半乳糖胺、N-甲酰基半乳糖胺、N-乙酰基-半乳糖胺、N-丙酰基-半乳糖胺、N-正丁酰基-半乳糖胺和N-异丁酰基-半乳糖胺(参见例如：S.T.Iobst和K.Drickamer，J.B.C.，1996，271，6686)。可用于使寡核苷酸和其它分子体内靶向肝脏的半乳糖衍生物和半乳糖衍生物簇为本领域中已知(参见例如Baenziger和Fiete，1980，Cell，22，611-620；Connolly等人，1982，J.Biol.Chem.，257，939-945)。

半乳糖衍生物已用于经由其结合至在肝细胞表面上表达的去唾液酸糖蛋白受体使分子体内靶向肝细胞。去唾液酸糖蛋白受体配体与去唾液酸糖蛋白受体的结合促进细胞特异性靶向肝细胞和分子胞吞至肝细胞中。去唾液酸糖蛋白受体配体可为单体(例如具有单一半乳糖衍生物)或多聚体(例如具有多种半乳糖衍生物)。半乳糖衍生物或半乳糖衍生物“簇”可使用本领域中已知的方法连接至本文所公开的RNAi剂的有义链或反义链的3’端或5’端。

在一些实施方案中，靶向基团包含半乳糖衍生物簇。如本文所用，半乳糖衍生物簇包含具有两个至四个末端半乳糖衍生物的分子。末端半乳糖衍生物经由其C-1碳连接至分子。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇为半乳糖衍生物三聚体(也称为三触角半乳糖衍生物或三价半乳糖衍生物)。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇包含N-乙酰基-半乳糖胺。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇包含三个N-乙酰基-半乳糖胺。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇为半乳糖衍生物四聚体(也称为四触角半乳糖衍生物或四价半乳糖衍生物)。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇包含四个N-乙酰基-半乳糖胺。

如本文所用，半乳糖衍生物三聚体含有三个半乳糖衍生物，其各自连接至中心分支点。如本文所用，半乳糖衍生物四聚体含有四个半乳糖衍生物，其各自连接至中心分支点。半乳糖衍生物可经由糖的C-1碳连接至中心分支点。在一些实施方案中，半乳糖衍生物经由接头或间隔区连接至分支点。在一些实施方案中，接头或间隔区为柔性亲水性间隔区，如PEG基团(参见例如美国专利第5,885,968号；Biessen等人，J.Med.Chem.1995，第39卷，第1538-1546页)。分支点可为允许连接三种半乳糖衍生物且进一步允许分支点连接至RNAi剂的任何小分子。分支点基团的实例为二赖氨酸或二谷氨酸。分支点与RNAi剂的连接可经由接头或间隔区来进行。在一些实施方案中，接头或间隔区包含柔性亲水性间隔区，如但不限于PEG间隔区。在一些实施方案中，接头包含刚性接头，如环状基团。在一些实施方案中，半乳糖衍生物包含N-乙酰基-半乳糖胺或由其组成。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇包含半乳糖衍生物四聚体，其可为例如N-乙酰基-半乳糖胺四聚体。

靶向基团(如包括N-乙酰基-半乳糖胺的半乳糖衍生物簇)的制备描述于例如国际专利申请公布第WO 2018/044350号(专利申请第PCT/US2017/021147号)和国际专利申请公布第WO 2017/156012号(专利申请第PCT/US2017/021175号)中，所述两个国际专利申请公布的内容以引用的方式整体并入本文。

举例而言，缀合至表1.1和表1.2中所述的AAT RNAi剂，即包含(i)包含SEQ ID NO：2、由其组成或基本上由其组成的反义链和(ii)包含SEQ ID NO：4、由其组成或基本上由其组成的有义链的dsRNA的靶向配体具有(NAG37)s的化学结构，如下表B中所显示。

表B.(NAG37)s的化学结构。

AAT RNAi剂和AAT RNAi原料药(ADS-001)

在一些实施方案中，用于本文所公开的方法中的AAT RNAi剂具有表2中所显示的AAT RNAi原料药(ADS-001)或其盐的核苷酸序列。在AAT RNAi原料药中发现的AAT RNAi剂的核苷酸序列包括如呈现于下表1.1中的SEQ ID NO：2中所示的反义链核苷酸序列，和如呈现于下表1.2中的SEQ ID NO：4中所示的有义链核苷酸序列。

表1.1.AAT RNAi剂反义链序列

表1.2.AAT RNAi剂有义链核苷酸序列(显示为AAT RNAi原料药中不含反向无碱基残基或NAG靶向基团的经修饰形式)

如本文表1.1、表1.2和表2中所用，使用以下注释来指示经修饰的核苷酸、靶向基团和连接基团：A、G、C和U分别表示腺苷、胞苷、鸟苷和尿苷；a、c、g和u分别表示2’-O-甲基腺苷、2’-O-甲基胞苷、2’-O-甲基鸟苷和2’-O-甲基尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别表示2’-氟腺苷、2’-氟胞苷、2’-氟鸟苷和2’-氟尿苷；s表示硫代磷酸酯键联；(invAb)表示反向无碱基脱氧核糖残基(参见表A)；并且(NAG37)s表示上表B中所显示的结构。

如本领域普通技术人员将容易地理解，除非序列(例如硫代磷酸酯键联‘s”)另外指明，否则当存在于有义链或反义链中时，核苷酸单体通过5’-3’-磷酸二酯键互相连接。如本领域普通技术人员将清楚地理解，并入如本文所公开的经修饰的核苷酸序列中所显示的硫代磷酸酯键联替代通常存在于寡核苷酸中的磷酸二酯键联。另外，本领域普通技术人员将容易地理解，给定寡核苷酸序列3’端的末端核苷酸通常将在给定单体的相应3’位置具有羟基(-OH)，而非离体磷酸酯部分。另外，对于本文所公开的实施方案，当观察相应链5’→3’时，插入反向无碱基残基，使得脱氧核糖的3’位置连接在相应链上的前面单体的3’端。另外，如本领域普通技术人员将容易地理解和了解，尽管本文所描绘的硫代磷酸酯化学结构通常显示硫原子的阴离子，但本文所公开的发明涵盖所有硫代磷酸酯互变异构体(例如，其中硫原子具有双键并且阴离子处于氧原子上)。除非本文另外明确指明，否则在描述AATRNAi剂和包含本文所公开的AAT RNAi剂的组合物时，使用本领域普通技术人员的此类理解。

每一有义链和/或反义链可具有上文所列的任何靶向基团或连接基团，以及缀合至有义链和/或反义链寡核苷酸序列的5’端和/或3’端的其它靶向或连接基团。

本文所公开的AAT RNAi剂的反义链序列(例如SEQ ID NO：2的反义链)经设计以靶向正常AAT基因和突变体AAT基因两者的AAT mRNA转录物，由此使用患有AATD的人受试者的RNA干扰机制来沉默突变体Z-AAT蛋白的翻译。

在一些实施方案中，本文所公开的方法使用下表2中所示的AATRNAi原料药。因此，在一些实施方案中，AAT RNAi原料药包含含有SEQ ID NO：6的有义链的双链RNA(dsRNA)。在一些实施方案中，AAT RNAi原料药包含含有SEQ ID NO：2的反义链的dsRNA。在一些实施方案中，AAT RNAi原料药包含含有SEQ ID NO：6的有义链和SEQ ID NO：2的反义链的dsRNA。因此，在一些实施方案中，AAT RNAi原料药包含含有由SEQ ID NO：6组成的有义链的双链RNA(dsRNA)。在一些实施方案中，AAT RNAi原料药包含含有由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA。在一些实施方案中，AAT RNAi原料药包含含有由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQID NO：2组成的反义链的dsRNA。

AAT RNAi原料药(ADS-001)的示意性表示显示于图3中，并且完整化学结构表示显示于图1A至图1E(钠盐形式)和图2A至图2E(游离酸形式)中。在一些实施方案中，AAT RNAi原料药(例如ADS-001)以盐、混合盐或游离酸形式制备或提供。在一些实施方案中，AATRNAi原料药(例如ADS-001)以钠盐形式制备或提供。

药物组合物和制剂

适用于本文所公开的方法中的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)可制备为药物组合物或制剂来施用于人受试者。药物组合物可用于治疗患有将受益于AAT mRNA表达的抑制或AAT蛋白水平的降低的疾病或病症的受试者，例如患有AATD的人受试者。在一些实施方案中，所述方法包括向需要治疗的受试者施用连接至如本文所述的靶向基团或靶向配体(例如肝脏靶向NAG部分)的AAT RNAi剂。在一些实施方案中，将一种或多种药学上可接受的赋形剂(包括媒介物、载体、稀释剂和/或递送聚合物)添加至包含本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的药物组合物中，由此形成适于体内递送至人受试者的药物制剂。

包含本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的药物组合物在使用本文所公开的方法施用于人受试者时降低受试者中AAT mRNA的水平。

在一些实施方案中，包含本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的所述药物组合物用于治疗或控制患有AATD的受试者的临床呈现，例如慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌风险增加、转氨酶升高、胆汁淤积、纤维化和甚至暴发性肝衰竭。在一些实施方案中，将治疗或预防有效量的包含本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的一种或多种药物组合物施用于需要所述治疗的受试者。在一些实施方案中，施用本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)可用于降低受试者的疾病症状的数量、严重程度和/或频率。

如本文所用，“有效量”意欲包括，在施用于患者用于治疗患有AATD的受试者时，足以实现疾病的治疗(例如通过减少、改善或维持现有疾病或疾病或其相关合并症的一种或多种症状)的剂或组合物的量。“有效量”可取决于剂或组合物、其施用方式、疾病及其严重程度和病史、年龄、体重、家族史、遗传组成、由AATD介导的病理过程的阶段、先前或伴随治疗(如果有)的类型和待治疗患者的其它个体特征而变化。

包含本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的所述药物组合物可用于治疗患有将受益于AAT mRNA表达减少或抑制的疾病或病症的受试者的至少一种症状。在一些实施方案中，向受试者施用治疗有效量的包含本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)的一种或多种药物组合物，由此治疗症状。在其它实施方案中，向受试者施用预防有效量的一种或多种本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)，由此预防至少一种症状。

本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)可经由任何适合途径以针对特定途径适当定制的制剂来施用。因此，本文所述的药物组合物可通过注射(例如静脉内或皮下注射)来施用。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物经由皮下注射来施用。

如本文所用，药物组合物或药物包含药理有效量的至少一种本文所公开的AATRNAi剂(例如ADS-001或其盐)和一种或多种药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂(赋形剂)为有意包含于药物递送系统中的除活性药物成分(API，治疗性产品，例如AATRNAi剂)外的物质。赋形剂在预期剂量下并不发挥或不欲发挥治疗效应。赋形剂可用于a)帮助在制造期间加工药物递送系统，b)保护、支持或增强API的稳定性、生物利用度或患者可接受性，c)有助于产品鉴别，和/或d)增强API在储存或使用期间递送的总体安全性、有效性的任何其它属性。药学上可接受的赋形剂可为或可不为惰性物质。

赋形剂可包括但不限于：吸收增强剂、抗粘着剂、抗起泡剂、抗氧化剂、粘合剂、缓冲剂、载体、包衣剂、着色剂、递送增强剂、递送聚合物、葡聚糖、右旋糖、稀释剂、崩解剂、乳化剂、增量剂、填充剂、调味剂、助流剂、保湿剂、润滑剂、油、聚合物、防腐剂、盐水、盐、溶剂、糖、悬浮剂、持续释放基质、甜味剂、增稠剂、张力剂、媒介物、防水剂和润湿剂。

适合于可注射用途的药物组合物包含无菌水溶液(如果为水溶性)。对于皮下或静脉内施用，适合载体可包括生理盐水、抑菌水、ELTM(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。其在制造和储存条件下应为稳定的且应防止微生物(例如细菌和真菌)的污染作用。载体可为含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)及其适合混合物的溶剂或分散介质。

无菌可注射溶液可通过将所需量的活性化合物与上文所列举的一种成分或成分的组合(根据需要)一起并入适当溶剂中、然后过滤灭菌来制备。通常，分散液通过将活性化合物并入含有基本分散介质和来自上文所列举成分的所需其它成分的无菌媒介物中来制备。

在一些实施方案中，适用于本文所公开的方法中的药物组合物包含下表3.1或下表3.2中所提供的经配制AAT RNAi原料药中所鉴别的组分。

本文所公开的AAT RNAi剂(例如ADS-001或其盐)可以剂量单位形式配制于组合物中以便于施用和剂量均匀性。剂量单位形式是指适宜作为单位剂量用于待治疗受试者的物理离散单位；每一单位含有经计算以与所需药物载体一起产生所需治疗效应的预定量的活性化合物。

在一些实施方案中，剂量单位为介于约5mg与约300mg之间的AAT RNAi原料药，例如表3.1或表3.2中所提供的经配制的AAT RNAi原料药。在一些实施方案中，剂量单位为介于约25mg与约200mg之间的AAT RNAi原料药，例如表3.1或表3.2中所提供的经配制的AATRNAi原料药。在一些实施方案中，剂量单位为介于约100mg与约200mg之间的AAT RNAi原料药，例如表3.1或表3.2中所提供的经配制的AAT RNAi原料药。在一些实施方案中，剂量单位为约100mg的AAT RNAi原料药，例如表3.1或表3.2中所提供的经配制的AAT RNAi原料药。在一些实施方案中，剂量单位为约200mg的AAT RNAi原料药，例如表3.1或表3.2中所提供的经配制的AAT RNAi原料药。在一些实施方案中，剂量单位为至少约5mg、至少约10mg、至少约15mg、至少约20mg、至少约25mg、至少约30mg、至少约35mg、至少约40mg、至少约45mg、至少约50mg、至少约55mg、至少约60mg、至少约65mg、至少约70mg、至少约75mg、至少约80mg、至少约85mg、至少约90mg、至少约95mg、至少约100mg、至少约110mg、至少约120mg、至少约130mg、至少约140mg、至少约150mg、至少约160mg、至少约170mg、至少约180mg、至少约190mg或至少约200mg的AAT RNAi原料药，例如表3.1或表3.2中所提供的经配制的AAT RNAi原料药。在一些实施方案中，剂量单位为约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg或约200mg的AAT RNAi原料药，例如表3.1或表3.2中所提供的经配制的AAT RNAi原料药。在一些实施方案中，剂量单位为约5mg至约10mg、约10mg至约15mg、约15mg至约20mg、约20mg至约25mg、约25mg至约30mg、约30mg至约35mg、约35mg至约40mg、约40mg至约45mg、约45mg至约50mg、约50mg至约55mg、约55mg至约60mg、约60mg至约65mg、约65mg至约70mg、约70mg至约75mg、约75mg至约80mg、约80mg至约85mg、约85mg至约90mg、约90mg至约95mg、约95mg至约100mg、约100mg至约110mg、约110mg至约120mg、约120mg至约130mg、约130mg至约140mg、约140mg至约150mg、约150mg至约160mg、约160mg至约170mg、约170mg至约180mg、约180mg至约190mg或约190mg至约200mg的AAT RNAi原料药，例如表3.1或表3.2中所提供的经配制的AAT RNAi原料药。

药物组合物可含有通常在药物组合物中发现的其它额外组分。此类额外组分包括但不限于：抗搔痒药、收敛剂、局部麻醉剂或抗炎剂(例如抗组织胺、苯海拉明(diphenhydramine)等)。

如本文所用，“药理有效量”、“治疗有效量”或简单地“有效量”是指产生药理、治疗或预防结果的RNAi剂的量。

所述药学上可接受的制剂可包装至药盒、容器、包或分配器中。本文所述的药物组合物可包装于预填充注射器或小瓶中。

经配制的AAT RNAi原料药

在一些实施方案中，将如表2中所提供的AAT RNAi原料药(例如ADS-001或其盐)与一种或多种药学上可接受的赋形剂一起配制以形成适于施用至人受试者的药物组合物。

在一些实施方案中，表2中所述的AAT RNAi原料药以230mg/mL配制于水性磷酸钠缓冲液(0.5mM磷酸二氢钠、0.5mM磷酸氢二钠)中，形成表3.1中所显示的经配制的AAT RNAi原料药(ADS-001-1)：

表3.1.每1.0mL经配制的AAT RNAi原料药的组成

在一些实施方案中，表2中所述的AAT RNAi原料药以200mg/mL配制于水性磷酸钠缓冲液(0.5mM磷酸二氢钠、0.5mM磷酸氢二钠)中，形成表3.2中所显示的经配制的AAT RNAi原料药(ADS-001-2)：

表3.2.每1.0mL经配制的AAT RNAi原料药的组成

组分	功能	质量/等级	浓度
				ADS-001	活性成分	内部	200mg
磷酸二氢钠单水合物	悬浮剂	USP，Ph.Eur	约0.061mg
				无水磷酸氢二钠	悬浮剂	USP，Ph.Eur	约0.063mg
注射用水(WFI)	媒介物	USP，Ph.Eur	约891mg

在一些实施方案中，本公开的经配制的AAT RNAi原料药包含每1mL介于150mg与250mg之间的本文所公开AAT RNAi原料药，例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐。在一些实施方案中，本公开的经配制的AAT RNAi原料药包含每1mL至少约150mg、至少约160mg、至少约170mg、至少约180mg、至少约190mg、至少约200mg、至少约210mg、至少约220mg、至少约230mg、至少约240mg或至少约250mg的本文所公开AAT RNAi原料药，例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ IDNO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐。在一些实施方案中，本公开的经配制的AAT RNAi原料药包含每1mL约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg或约250mg的本文所公开AAT RNAi原料药，例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐。在一些实施方案中，本公开的经配制的AAT RNAi原料药包含每1mL介于约150mg与约160mg之间、介于约160mg与约170mg之间、介于约170mg与约180mg之间、介于约180mg与约190mg之间、介于约190mg与约200mg之间、介于约200mg与约210mg之间、介于约210mg与约220mg之间、介于约220mg与约230mg之间、介于约230mg与约240mg之间或介于约240mg与约250mg之间的本文所公开AAT RNAi原料药，例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐。

在一些实施方案中，本公开的经配制的AAT RNAi原料药包含每1mL约0.120mg的悬浮剂。在一些实施方案中，悬浮剂包含磷酸盐或其组合。在一些实施方案中，悬浮剂包含磷酸钠或其组合。在一些实施方案中，悬浮剂包含磷酸二氢钠。在一些实施方案中，悬浮剂包含磷酸氢二钠。在一些实施方案中，悬浮剂包含磷酸二氢钠和磷酸氢二钠。在一些实施方案中，磷酸二氢钠为磷酸二氢钠单水合物。在一些实施方案中，磷酸氢二钠为无水磷酸氢二钠。在一些实施方案中，本公开的经配制的AAT RNAi原料药包含大约等效量的磷酸二氢钠单水合物和无水磷酸氢二钠。在一些实施方案中，本公开的经配制的AAT RNAi原料药包含每1mL大约0.061mg的磷酸二氢钠单水合物。在一些实施方案中，本公开的经配制的AATRNAi原料药包含每1mL大约0.062mg无水磷酸氢二钠。在一些实施方案中，本公开的经配制的AAT RNAi原料药包含每1mL大约0.061mg的磷酸二氢钠单水合物和大约0.062mg无水磷酸氢二钠。

表3.1和表3.2的经配制的AAT RNAi原料药制备为无菌制剂。在一些实施方案中，经配制的AAT RNAi原料药包装于容器(例如玻璃小瓶)中。在一些实施方案中，经配制的AATRNAi原料药包装于填充体积为约1.1mL的玻璃小瓶中，并且所需施用体积可基于待施用的所需剂量水平来计算。

在一些实施方案中，表3.1和表3.2中所示的经配制的AAT RNAi原料药使用本文所公开方法施用于人受试者。

药盒

药盒中可包含本文所述的任何组合物，例如AAT RNAi剂、AAT RNAi原料药(ADS-001)或其盐、AAT RNAi剂或AAT RNAi原料药(ADS-001)或其盐的药物组合物和制剂、或经配制的AAT RNAi原料药(ADS-001)。在非限制性实例中，药盒包含AAT RNAi原料药(ADS-001)或其盐。

药盒还接包括用于在受试者中使用本文所述的组合物的试剂或说明书。其也可包括一种或多种缓冲剂。

在一些实施方案中，药盒还可包括有效量的用于治疗AATD的另一治疗剂。

药盒的组分可包装于水性介质中或以冻干形式包装。药盒的容器构件通常将包括至少一个小瓶、试管、烧瓶、瓶、注射器或其它容器构件，组分可置于其中且优选地适当等分。当药盒中存在多于一种组分(标记试剂和标记可包装在一起)时，药盒通常还将含有第二、第三或其它额外容器，额外组分可单独置于其中。药盒也可包含含有药学上可接受的无菌缓冲剂和/或其它稀释剂的第二容器构件。然而，小瓶中可包含组分的各种组合。本发明的药盒通常还将包括含有本发明组合物(例如AAT RNAi原料药(ADS-001)或其盐)的构件和用于商业销售的密闭的任何其它试剂容器。

当药盒的组分提供于一种和/或多种液体溶液中时，液体溶液为水溶液，并且无菌水溶液为特别优选的。然而，药盒的组分可以干燥粉末提供。当试剂和/或组分以干燥粉末提供时，粉末可通过添加适合溶剂来复原。设想溶剂也可提供于另一容器构件中。

预填充注射器

本文所述的任何组合物(例如AAT RNAi剂、AAT RNAi原料药(ADS-001)或其盐、AATRNAi剂或AAT RNAi原料药(ADS-001)或其盐的药物组合物和制剂、或经配制的AAT RNAi原料药(ADS-001))可包装于注射器中。在非限制性实例中，预填充注射器包含AAT RNAi原料药(ADδ-001)或其盐。在一些实施方案中，预填充注射器包含呈剂量单位(例如约100mg或约200mg)的AAT RNAi原料药(ADS-001)。

患有AATD和经诊断患有AATD的人受试者

本文所公开的方法包括使用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐，例如包含表2中所述的AAT RNAi原料药的药物组合物)治疗有需要的人受试者的α-1抗胰蛋白酶缺乏(AATD)，包括治疗人受试者的由AATD引起的症状和疾病。在一些实施方案中，药物组合物包含表3.1或表3.2中所示的经配制的AAT RNAi原料药。

在一些实施方案中，人受试者在施用之前经诊断患有AATD。如本文所述，AATD为由引起AAT蛋白的突变体形式的翻译的基因转录物的突变引起的遗传病症，易于异常折叠的一些突变体形式导致肝细胞中的细胞内保留。尽管已鉴别出SERPINA1基因的多种突变，但AATD的最常见且严重的形式PiZZ基因型由单碱基对取代引起。在具有PiZZ基因型的受试者中，循环AAT水平通常报告为水平小于正常人的15％。在许多情况下，受试者最初经诊断患有COPD、气喘或其它肺疾病而未鉴别出潜在病因。随时间推移，肝脏疾病(例如纤维化和肝硬化)可因错误折叠(“Z-AAT”)的蛋白质的细胞间保留和无法正确地从肝脏细胞分泌蛋白质而发展。小儿受试者通常呈现肝脏疾病的临床症状，其可包括无症状性慢性肝炎、成长迟缓、进食较差或肝肿大和脾肿大。AATD可经由来自受试者的血液样品的标准基因分型来诊断和确认。

给药和AAT基因表达的抑制

通常，施用于有需要的受试者的本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的有效量将在约0.1mg/kg至约10mg/kg体重/剂量、例如约0.25mg/kg至约5mg/kg体重/剂量的范围内。

在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的有效量将在约0.5mg/kg至约4mg/kg体重/剂量的范围内。

在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的有效量为至少约0.2mg/kg、至少约0.4mg/kg、至少约0.6mg/kg、至少约0.8mg/kg、至少约1mg/kg、至少约1.2mg/kg、至少约1.4mg/kg、至少约1.6mg/kg、至少约1.8mg/kg、至少约2mg/kg、至少约2.2mg/kg、至少约2.4mg/kg、至少约2.6mg/kg、至少约2.8mg/kg、至少约3mg/kg、至少约3.2mg/kg、至少约3.4mg/kg、至少约3.6mg/kg、至少约3.8mg/kg、至少约4mg/kg、至少约4.2mg/kg、至少约4.4mg/kg、至少约4.6mg/kg、至少约4.8mg/kg、至少约5mg/kg、至少约5.2mg/kg、至少约5.4mg/kg、至少约5.6mg/kg、至少约5.8mg/kg、至少约6mg/kg、至少约6.2mg/kg、至少约6.4mg/kg、至少约6.6mg/kg、至少约6.8mg/kg、至少约7mg/kg、至少约7.2mg/kg、至少约7.4mg/kg、至少约7.6mg/kg、至少约7.8mg/kg、至少约8mg/kg、至少约8.2mg/kg、至少约8.4mg/kg、至少约8.6mg/kg、至少约8.8mg/kg、至少约9mg/kg、至少约9.2mg/kg、至少约9.4mg/kg、至少约9.6mg/kg、至少约9.8mg/kg、至少约10mg/kg体重/剂量。

在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的有效量为约0.2mg/kg、约0.4mg/kg、约0.6mg/kg、约0.8mg/kg、约1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.4mg/kg、约1.6mg/kg、约1.8mg/kg、约2mg/kg、约2.2mg/kg、约2.4mg/kg、约2.6mg/kg、约2.8mg/kg、约3mg/kg、约3.2mg/kg、约3.4mg/kg、约3.6mg/kg、约3.8mg/kg、约4mg/kg、约4.2mg/kg、约4.4mg/kg、约4.6mg/kg、约4.8mg/kg、约5mg/kg、约5.2mg/kg、约5.4mg/kg、约5.6mg/kg、约5.8mg/kg、约6mg/kg、约6.2mg/kg、约6.4mg/kg、约6.6mg/kg、约6.8mg/kg、约7mg/kg、约7.2mg/kg、约7.4mg/kg、约7.6mg/kg、约7.8mg/kg、约8mg/kg、约8.2mg/kg、约8.4mg/kg、约8.6mg/kg、约8.8mg/kg、约9mg/kg、约9.2mg/kg、约9.4mg/kg、约9.6mg/kg、约9.8mg/kg、约10mg/kg体重/剂量。

在一些实施方案中，本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的有效量为约1mg/kg至约2mg/kg、约2mg/kg至约3mg/kg、约3mg/kg至约4mg/kg、约4mg/kg至约5mg/kg、约5mg/kg至约6mg/kg、约6mg/kg至约7mg/kg、约7mg/kg至约8mg/kg、约8mg/kg至约9mg/kg和约9mg/kg至约10mg/kg体重/剂量。

在一些实施方案中，有效量为固定剂量。在一些实施方案中，介于5mg至300mg之间的本文所公开AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的固定剂量为有效剂量。在一些实施方案中，介于25mg至200mg之间的本文所公开AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的固定剂量为有效剂量。所施用量将可能取决于诸如以下的变量：受试者的总体年龄和健康状况、所递送化合物的相对生物效力、药物的制剂、制剂中赋形剂的存在和类型以及施用途径。在一些实施方案中，约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约120mg、约140mg、约160mg、约180mg、约200mg、约220mg、约240mg、约260mg或约280mg至约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约120mg、约140mg、约160mg、约180mg、约200mg、约220mg、约240mg、约260mg、约280mg或约300mg的本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的固定剂量为有效剂量。在一些实施方案中，约25mg的本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的固定剂量为有效剂量。在一些实施方案中，约50mg的本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的固定剂量为有效剂量。在一些实施方案中，约75mg的本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的固定剂量为有效剂量。在一些实施方案中，约100mg的本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的固定剂量为有效剂量。在一些实施方案中，约125mg的本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的固定剂量为有效剂量。在一些实施方案中，约150mg的本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的固定剂量为有效剂量。在一些实施方案中，约175mg的本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的固定剂量为有效剂量。在一些实施方案中，约200mg的本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ IDNO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的固定剂量为有效剂量。

另外，应理解，所施用的初始剂量在一些情况下可增加超过上述上限水平以快速实现所需血液水平或组织水平，或初始剂量在一些情况下可小于最佳剂量。举例而言，在一些实施方案中，施用约25mg至约200mg、例如约25mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg或约200mg的本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的初始剂量，然后在大约四周或1个月后施用约25mg至200mg的第二剂量，并且此后约每12周或约每三个月一次(即约每季度一次)施用额外剂量(概念类似于“维持剂量”)。

为治疗疾病或为形成治疗疾病的药物或组合物，包含本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的本文所述药物组合物可与赋形剂或与第二治疗剂或治疗组合，包括但不限于：第二RNAi剂或其它RNAi剂、小分子药物、抗体、抗体片段、肽和/或适体。

在本文所公开方法的一些方面中，向有需要的人受试者施用包含本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的药物组合物可引起(i)纤维化减轻；(ii)门静脉周围肝细胞的水平降低；(iii)血清Z-AAT减少；(iv)总肝脏Z-AAT减少；(v)可溶性肝脏Z-AAT减少；(vi)不溶性肝脏Z-AAT减少；(vii)ALT减少；(viii)GGT减少；(ix)Pro-C3减少；或(x)其组合。

在一些实施方案中，向有需要的人受试者施用包含本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的药物组合物可改善纤维化、门静脉炎症、界面性肝炎、整体门静脉道累及、PAS+D区域定位、1区“小球”门静脉周围累及或其任何组合。

在一些实施方案中，施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的受试者中AAT基因的基因表达水平和/或mRNA水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或大于99％。受试者中的基因表达水平和/或mRNA水平在受试者的细胞、细胞的组和/或组织中有所降低。在一些实施方案中，受试者中的基因表达水平和/或mRNA水平在受试者的肝脏细胞(例如肝细胞、肝星形细胞、肝脏细胞的组和/或肝脏)中有所降低。

在一些实施方案中，施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的受试者中AAT基因的基因表达水平和/或mRNA水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或大于99％。

在一些实施方案中，施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的受试者中AAT基因的基因表达水平和/或mRNA水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低约5％至约10％、约10％至约15％、约15％至约20％、约20％至约25％、约25％至约30％、约30％至约35％、约35％至约40％、约40％至约45％、约45％至约50％、约50％至约55％、约55％至约60％、约60％至约65％、约65％至约70％、约70％至约75％、约75％至约80％、约80％至约85％、约85％至约90％或约95％至100％。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的受试者中AAT的蛋白水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或大于约99％。受试者中的蛋白水平在受试者的细胞、细胞的组、组织、血液和/或其它流体中有所降低。在一些实施方案中，受试者中的蛋白水平在受试者的肝脏细胞(例如肝细胞、肝星形细胞、肝脏细胞的组和/或肝脏)中有所降低。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的受试者中AAT的蛋白水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或大于约99％。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的受试者中AAT的蛋白水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低约5％至约10％、约10％至约15％、约15％至约20％、约20％至约25％、约25％至约30％、约30％至约35％、约35％至约40％、约40％至约45％、约45％至约50％、约50％至约55％、约55％至约60％、约60％至约65％、约65％至约70％、约70％至约75％、约75％至约80％、约80％至约85％、约85％至约90％或约95％至100％。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的患有AATD的受试者中的肝脏Z-AAT蛋白水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或大于99％。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的患有AATD的受试者中的肝脏Z-AAT蛋白水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或大于99％。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的患有AATD的受试者中的肝脏Z-AAT蛋白水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低约5％至约10％、约10％至约15％、约15％至约20％、约20％至约25％、约25％至约30％、约30％至约35％、约35％至约40％、约40％至约45％、约45％至约50％、约50％至约55％、约55％至约60％、约60％至约65％、约65％至约70％、约70％至约75％、约75％至约80％、约80％至约85％、约85％至约90％或约95％至100％。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的患有AATD的受试者中的肝脏Z-AAT可溶性或单体蛋白水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或大于约99％。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的患有AATD的受试者中的肝脏Z-AAT可溶性或单体蛋白水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或大于约99％。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的患有AATD的受试者中的肝脏Z-AAT可溶性或单体蛋白水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低约5％至约10％、约10％至约15％、约15％至约20％、约20％至约25％、约25％至约30％、约30％至约35％、约35％至约40％、约40％至约45％、约45％至约50％、约50％至约55％、约55％至约60％、约60％至约65％、约65％至约70％、约70％至约75％、约75％至约80％、约80％至约85％、约85％至约90％或约95％至100％。

在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约50％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为约50％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约55％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为约55％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约60％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为约60％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约65％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为约65％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约70％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为约70％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约75％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为约75％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约80％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为约80％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约85％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为约85％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约90％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为约90％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约95％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，可溶性肝脏Z-AAT的减少为约95％。在一些实施方案中，可溶性肝脏Z-AAT的减少介于约50％与约97％之间。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的受试者中的肝脏Z-AAT不溶性或聚合物蛋白水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或大于约99％。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的受试者中的肝脏Z-AAT不溶性或聚合物蛋白水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或大于约99％。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的受试者中的肝脏Z-AAT不溶性或聚合物蛋白水平相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低约5％至约10％、约10％至约15％、约15％至约20％、约20％至约25％、约25％至约30％、约30％至约35％、约35％至约40％、约40％至约45％、约45％至约50％、约50％至约55％、约55％至约60％、约60％至约65％、约65％至约70％、约70％至约75％、约75％至约80％、约80％至约85％、约85％至约90％或约95％至100％。

在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约40％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约40％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约45％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约45％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约50％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约50％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约55％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约55％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约60％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约60％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约65％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约65％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约70％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约70％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约75％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约75％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约80％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约80％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约85％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约85％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约90％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约90％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为至少约95％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少为约95％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，不溶性肝脏Z-AAT的减少介于约40％与约97％之间。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的受试者中的肝脏Z-AAT不溶性或聚合物蛋白水平和Z-AAT可溶性或单体蛋白水平两者相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或大于约99％。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的受试者中的肝脏Z-AAT不溶性或聚合物蛋白水平和Z-AAT可溶性或单体蛋白水平两者相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或大于约99％。

在一些实施方案中，已施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ IDNO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)的受试者中的肝脏Z-AAT不溶性或聚合物蛋白水平和Z-AAT可溶性或单体蛋白水平两者相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者降低约5％至约10％、约10％至约15％、约15％至约20％、约20％至约25％、约25％至约30％、约30％至约35％、约35％至约40％、约40％至约45％、约45％至约50％、约50％至约55％、约55％至约60％、约60％至约65％、约65％至约70％、约70％至约75％、约75％至约80％、约80％至约85％、约85％至约90％或约95％至100％。

在一些实施方案中，向有需要的受试者施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者产生至少约70％的血清Z-AAT减少。

在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为至少约70％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为约70％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为至少约75％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为约75％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为至少约80％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为约80％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为至少约85％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为约85％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为至少约90％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为约90％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为至少约95％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为约95％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少为约100％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，血清Z-AAT的减少介于约70％与约100％之间。

在一些实施方案中，向有需要的受试者施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者产生至少约70％的总肝脏Z-AAT减少。

在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为至少约70％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为约70％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为至少约75％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为约75％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为至少约80％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为约80％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为至少约85％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为约85％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为至少约90％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为约90％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为至少约95％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为约95％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少为约100％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，总肝脏Z-AAT的减少介于约70％与约100％之间。

在一些实施方案中，向有需要的受试者施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者产生至少约30％的ALT减少。

在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，ALT的减少为至少约30％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，ALT的减少为约30％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，ALT的减少为至少约35％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，ALT的减少为约35％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，ALT的减少为至少约40％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，ALT的减少为约40％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，ALT的减少为至少约45％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，ALT的减少为约45％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，ALT的减少为至少约50％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，ALT的减少为约50％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，ALT的减少介于约30％与约50％之间。

在一些实施方案中，向有需要的受试者施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者产生至少约25％的GGT减少。

在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，GGT的减少为至少约25％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，GGT的减少为约25％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，GGT的减少为至少约30％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，GGT的减少为约30％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，GGT的减少为至少约35％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，GGT的减少为约35％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，GGT的减少为至少约40％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，GGT的减少为约40％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，GGT的减少为至少约45％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，GGT的减少为约45％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，GGT的减少介于约25％与约45％之间。

在一些实施方案中，向有需要的受试者施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者产生至少约15％的Pro-C3减少。

在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约15％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约15％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约20％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约20％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约25％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约25％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约30％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约30％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约35％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约35％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约40％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约40％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约45％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约45％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约50％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约50％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约55％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约55％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约60％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约60％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约65％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约65％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约70％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约70％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约75％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约75％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约80％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约80％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约85％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约85％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为至少约90％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少为约90％。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，Pro-C3的减少介于约15％与约90％之间。

在一些实施方案中，向有需要的受试者施用本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，例如ADS-001或其盐)相对于施用AAT RNAi原料药之前的受试者或未接受AAT RNAi原料药的受试者产生至少约15％的纤维化减轻，如通过所测量。

在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约15％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约15％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约20％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约20％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约25％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约25％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约30％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约30％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约35％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约35％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约40％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约40％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约45％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约45％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约50％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约50％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约55％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约55％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约60％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约60％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约65％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约65％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约70％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约70％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约75％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约75％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约80％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约80％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约85％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约85％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为至少约90％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻为约90％，如通过所测量。在一些实施方案中，在向有需要的受试者施用ADS-001或其盐后，纤维化的减轻介于约15％与约90％之间，如通过所测量。

AAT基因表达(包括PiZZ基因型)、AAT mRNA(包括PiZZ基因型)或AAT蛋白水平(包括Z-AAT蛋白)的降低可通过本领域中已知的一般方法来评估和定量。本文所公开的实施例阐释用于评估AAT基因表达的抑制和AAT蛋白水平降低的众所周知的方法。AAT mRNA水平和/或蛋白水平(包括Z-AAT可溶性蛋白水平和Z-AAT不溶性蛋白水平)的降低或减少在本文中统称为AAT的降低或减少或者抑制或降低AAT的表达。

上述所有变化，例如，门静脉周围肝细胞、血清Z-AAT；肝脏Z-AAT；可溶性肝脏Z-AAT；不溶性肝脏Z-AAT；ALT；GGT；Pro-C3；或脂肪变性的变化是相对于预定阈值、相对于在施用AAT RNAi原料药之前受试者中的水平、相对于未接受AAT RNAi原料药的受试者中的水平或相对于在群体中测定的对照水平。例如，纤维化；门静脉周围肝细胞；血清Z-AAT；肝脏Z-AAT；可溶性肝脏Z-AAT；不溶性肝脏Z-AAT；ALT；GGT；Pro-C3；或脂肪变性的所有上述测量如本公开中所述或使用本领域已知的方法进行。

如本文所用，术语“肝脏Z-AAT蛋白的量”、“肝脏Z-AAT蛋白水平”、“肝脏Z-AAT蛋白负荷”是指在人受试者的肝脏中测量的Z-AAT蛋白的数量，并且除非另外明确指明，否则此类术语在本文中可互换使用。如本文的非限制性实施例中更全面公开，可从受试者获得肝脏活检物，并且可将那些样品均质化且然后评估所存在的Z-AAT蛋白的总量。可以类似方式定量所存在的可溶性Z-AAT蛋白(主要为单体形式的Z-AAT蛋白)的量，并且然后可通过从总量减去可溶性数量来计算所存在的不溶性(聚合物)Z-AAT蛋白的水平。

如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”等意指用于提供受试者的疾病的一种或多种症状的数量、严重程度和/或频率的缓解或缓和的方法或步骤。如本文所用，“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”可包括预防、控制、预防性治疗和/或抑制受试者的疾病的一种或多种症状的数量、严重程度和/或频率。

如本文所用，“每月给药”或“每月”施用意指每28天。如本文所用的“每季度给药”或“每季度施用”意指每84天。术语“约”在结合每月给药使用时意指每月给药+/-3天。术语“约”在结合每季度给药使用时意指每季度给药+/-9天。术语“约”在结合多周给药使用时意指+/-1周。

如本文所用，短语“引入细胞中”在提及本文所公开的AAT RNAi原料药(例如包含由SEQ ID NO：6组成的有义链和由SEQ ID NO：2组成的反义链的dsRNA，如ADS-001或其盐)时意指将RNAi剂功能性递送至细胞中。短语“功能性递送”意指将RNAi剂以使得RNAi剂能够具有预期生物活性(例如序列特异性基因表达抑制)的方式递送至细胞。

除非另有说明，否则使用符号如本文所用意指，根据本文所述的发明的范围的任何一个或多个基团可与其连接。

如本文所用，除非在结构中特别鉴别为具有特定构象，否则对于其中存在不对称中心且因此产生对映异构体、非对映异构体或其它立体异构构型的每一结构，本文所公开的每一结构意欲表示所有此类可能的异构体，包括其光学纯形式和外消旋形式。举例而言，本文所公开的结构意欲涵盖非对映异构体的混合物以及单一立体异构体。

如本文权利要求书中所用，短语“由……组成”不包括权利要求书中未指定的任何要素、步骤或成分。当用于本文的权利要求书中时，短语“基本上由……组成”将权利要求书的范围限于指定材料或步骤和实质上不影响所要求保护的发明的基本和新颖特征的那些材料或步骤。

本领域普通技术人员将容易地理解并了解，本文所公开的化合物和组合物可具有呈质子化或去质子化状态的某些原子(例如N、O或S原子)，这取决于化合物或组合物所处的环境而定。因此，如本文所用，本文所公开的结构设想，某些官能团(诸如例如OH、SH或NH)可质子化或去质子化。本文的公开意欲涵盖所公开的化合物和组合物，而与其基于环境(如pH)的质子化状态无关，如本领域普通技术人员将容易地理解。

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员所通常理解相同的含义。尽管类似或等效于本文所述的方法和材料的方法和材料可用于实践或测试本发明，但适合方法和材料描述于下文中。本文所提及的所有公布、专利申请、专利和其它参考文献以引用的方式整体并入。如果出现冲突，则以本说明书(包括定义)为准。另外，材料、方法和实施例仅具有说明性且不欲具有限制性。

在标题为Methods For The Treatment Of Alpha-1 Antitrypsin Deficiency(AATD)的国际专利申请第PCT/US20/36359号中，申请者描述正常健康志愿者(HBV)的1期AAT RNAi原料药(ADS-001)研究的数据。为完整起见，所述信息阐释于实施例2及其图4-图11中。在本申请中，申请者阐释经诊断患有AATD的人受试者的开放标记2期研究的初始数据。惊人地且出人意料的是，仅在6个月和三个剂量的AAT RNAi原料药(ADS-001)后，肝脏Z-AAT蛋白水平明显降低。

现使用以下非限制性实例说明上文所提供的实施方案和项目。

实施例

实施例1.AATRNAi原料药(ADS-001)的合成和配制

适用于本文所公开的方法中的AAT RNAi原料药可使用如本领域中已知的基于固相寡核苷酸合成的标准亚磷酰胺技术来合成。可使用市售寡核苷酸合成仪(例如(Bioautomation)或(Bioautomation))。合成可在由受控孔玻璃(CPG， 或从Prime Synthesis，Aston，PA，USA获得)制成的固体支撑体上实施。定位于相应链的3’端的单体可连接至固体支撑体作为合成起点。所有RNA、2’修饰的RNA亚磷酰胺和反向无碱基亚磷酰胺可在商购。可合成适于添加至有义链的5’端的含靶向基团的亚磷酰胺。可使用如本领域中已知的标准裂解、去保护、纯化和退火步骤。关于AAT RNAi剂合成的其它描述可参见例如国际专利申请公布第WO 2018/132432号(申请第PCT/US2018/013102号)和国际专利申请公布第WO 2018/044350号(PCT/US2017/021147)，其各自以引用的方式整体并入本文。AAT RNAi原料药然后可通过溶解于本领域中众所周知的标准药学上可接受的赋形剂中来配制。举例而言，表3.1和表3.2显示适用于本文所公开的方法中的经配制的AAT RNAi原料药。

实施例2.正常健康人志愿者(NHV0中的AAT RNAi原料药(ADS-001)的I期临床试验。

以下实施例先前呈现于标题为Methods For The Treatment Of Alpha-1Antitrypsin Deficiency(AATD)的国际专利申请第PCT/US20/36359号中，并且申请者为完整起见希望在此重申所述信息。

在健康志愿者(NHV)中进行1期、单剂量和多剂量递增剂量研究以评估AAT RNAi原料药(ADS-001)的安全性、耐受性、药物动力学和对血清AAT水平的效应。研究受试者群体包括BMI介于19.0与35.0kg/m²之间的18-52岁的健康成年男性和女性。

将NHV受试者分成总共7个群组。将群组1至4随机化以接受以皮下注射施用的35mg(群组1)的单一递增剂量和100mg(群组2)、200mg(群组3)和300mg(群组4)的多个递增剂量的AAT RNAi原料药或安慰剂(4个活性剂：4个安慰剂)。使群组1至4双盲化。群组2b、3b和4b为由接受100mg、200mg和300mg单剂量的AAT RNAi原料药的4个受试者组成的开放标记。总共44个受试者完成研究。图4显示I期临床试验的最终研究设计。研究参数汇总于下表4中。

表4.I期临床研究参数

来自研究的血清AAT减少结果显示，施用剂量为35mg至300mg的AAT RNAi原料药使得血清AAT与安慰剂相比深度减少。最初，建议以400mg的AAT RNAi原料药/剂量进行群组研究作为临床试验方案的一部分。然而，鉴于35mg、100mg、200mg和300mg剂量下的出人意料的功效，从研究方案去除400mg群组。35mg、100mg和200mg的剂量产生实质性血清AAT减少，并且在I期研究中100mg和200mg在多个剂量后达到大约90％的平均血清AAT减少。图5至图11报告I期研究中的多个群组的血清AAT减少。

在所有剂量水平下无明显的剂量依赖性反应，这是因为惊人地且出人意料的是，100mg和200mg的剂量水平产生实质性(达到大约90％)且与300mg更高剂量相似的敲低。尽管35mg的最低剂量仍很有活性，但其不如以单剂量施用的100mg有活性，这指示一定程度的剂量反应。

从35mg单剂量开始，血清AAT减少(>58％)的持续时间长于最初预期的持续时间，持续至剂量施用后16周且随后返回至基线。举例而言，在35mg单剂量后的三十四周，一个受试者的血清AAT水平已返回至90mg/dL以上，而第二受试者的血清AAT水平保持在40mg/dL(从基线降低60.4％)。100mg至300mg单剂量的AAT RNAi原料药的反应持续时间无显著差异，在单剂量后8周与16周之间开始返回至基线。

一般而言，多剂量的AAT RNAi原料药维持血清AAT深度减少的持续时间长于单一剂量。这些数据表明，在第29天(即距初始剂量一个月后)接受的第二剂量可进一步降低血清AAT水平或维持降低，并且可每12周(即每季度)施用后续剂量以维持最大血清AAT降低。

在I期研究中无死亡，无严重不良事件(SAE)且无评定为强度为重度的不良事件(AE)。在接受AAT RNAi原料药的受试者中，两个受试者报告中等强度的三起AE(上呼吸道感染、鼻漏、一般性胸痛)。在接受安慰剂的受试者中，三个受试者报告中等强度的三起AE(2-胃肠炎、左侧肌肉骨骼胸痛)。所有其它AE已报告为轻度。大多数受试者报告不与研究治疗相关的AE。在接受AAT的受试者中发生一起AE，导致疗法提前中断，但受试者继续进行研究随访。在接受至少单剂量的经配制的AAT RNAi原料药的28个受试者中报告九十四起AE。在接受安慰剂的17个受试者中报告四十六起AE。无AE频率或强度随着剂量递增而增加的明显模式。

在所有经配制的AAT RNAi原料药群组中，在6个受试者中在注射位点发生六起AE，其均在接受药物的受试者中发生。在安慰剂受试者中无注射位点AE。所报告的注射位点反应包括注射位点淤血、红斑和疼痛。21.4％的接受经配制的AAT RNAi原料药的受试者报告这些组合注射位点AE。经配制的AAT RNAi原料药的50次注射中的6次或12％产生注射位点AE。在单一受试者中未报告一次以上的注射位点AE。所有注射位点AE的强度已视为轻度。

实施例3.患有AAT相关的肝脏疾病的患者中的AAT RNAi原料药(ADS-001)的II期临床试验。

在患有α-1抗胰蛋白酶缺乏相关的肝脏疾病(AATD)的患者中进行先导开放标记、多剂量、2期研究以评估·ARO-AAT的安全性和效力。研究受试者群体包括18-75岁的PiZZ患者(基于基线处完成的基因型或来自来源可验证文件)AAT受试者。

将PiZZ受试者分成总共三个群组。要求所有受试者在初始剂量之前进行肝脏活检。图12显示II期临床试验的研究设计。

群组1和群组1b由接受以皮下注射施用的200mg(群组1)或100mg(群组1b)的总共三个剂量的AAT RNAi原料药的至多4个受试者组成。剂量在第1天、初始剂量后4周和第二剂量后12周施用。在第三剂量后二十四(24)周(在初始剂量后约40周或约6个月)，获取第二活检物。

群组2将由接受以皮下注射施用的200mg的总共五个剂量的AAT RNAi原料药的至多8个受试者组成。剂量在第1天、初始剂量后4周和第二剂量后12周、第三剂量后12周和第四剂量后12周(即第1天和第4周、第16周、第28周和第40周)施用。在第三剂量后四十八(48)周(在初始剂量后约88周或约1年)，获取第二活检物。

研究参数汇总于下表5中。

表5.II期临床研究参数

群组1

对于群组1，血清Z-AAT减少结果显示，施用200mg剂量的AAT RNAi原料药产生血清Z-AAT蛋白水平和总肝脏Z-AAT蛋白水平两者的深度降低。(参见例如图13)。

使用UHPLC-MS/MS经由包括Z-AAT突变的胰蛋白酶肽定量地测量血清Z-AAT。还使用UHPLC-MS/MS经由包括Z-AAT突变的胰蛋白酶肽定量地测量总肝脏Z-AAT蛋白和可溶性肝脏Z-AAT蛋白。将肝脏组织均质化后，使用UHPLC-MS/MS测定总Z-AAT蛋白水平。然后对单独等分试样实施离心以分离可溶性级分和不溶性级分。分离后，使用UHPLC-MS/MS评价可溶性级分的Z-AAT蛋白水平。通过从所测定的肝脏Z-AAT蛋白的总量减去所测量的可溶性级分来导出未测量的级分(不溶性)。

替代地，可使用诸如蛋白质印迹(Western blot)或半定量免疫组织化学的方法通过使用对Z-AAT蛋白具有特异性的探针或抗体定量或半定量地测定Z-AAT蛋白。此类方法为众所周知且试剂和工具可商购获得或以其它方式为本领域普通技术人员已知。

下表6尤其显示总肝脏(即肝内)Z-AAT蛋白水平、单体(可溶性)肝脏Z-AAT蛋白水平、聚合物(不溶性)肝脏Z-AAT蛋白水平、ALT酶水平和GGT酶水平。对每一受试者的剂量前和第24周的肝脏活检物进行评估，并且在第52周时对每一受试者进行额外评估，其结果也显示于表6中。

表6.来自群组1的受试者中从基线至第24周或第52周的相对变化。

*nmol/总蛋白质

如上表6中所显示，每一受试者获得大于70％的总肝脏Z-AAT蛋白水平降低(Δ％)和大于80％的单体(可溶性)肝脏Z-AAT蛋白水平降低。另外，除一个外的所有受试者显示聚合物(不溶性)肝脏Z-AAT蛋白水平降低，并且4个受试者中的3个展示68％-97％范围内的Z-AAT聚合物(不溶性)蛋白水平降低。

肝脏Z-AAT蛋白水平降低还产生临床相关生物标志物的改善，包括在第24周时与基线相比，所有受试者显示36％-66％范围内的ALT减少，并且所有受试者显示43％-58％范围内的GGT减少。

所有受试者进一步显示评分的改善，并且4个受试者中的3个在第24周时展示与基线相比大于20％的减小。另外，4名患者中的3名展示在第24周时31％-51％范围内的纤维生成生物标志物Pro-C3减少。

在基线和第24周时由两位病理学家实施肝脏活检物的组织学评价，并且第三位病理学家用作任何评估偏差事件的裁定者。在第24周时，所有受试者显示至少一个组织学参数与其基线活检物相比的改善，例如门静脉炎症、小叶炎症、界面性肝炎、肝细胞死亡和纤维化(Metavir)。两个受试者具有纤维化改善且两个受试者无纤维化恶化。所有受试者不显示门静脉炎症的恶化或改善。另外，所有受试者显示Z-AAT负荷的改善，其通过如下表7中所显示的PAS+D(过碘酸希夫(Periodic acid-Schiff)+淀粉酶)染色来评估。

取自第52周时的群组1受试者的血清样品显示，ALT、GGT和血清Z-AAT水平从基线的下降仍维持与第24周时表6中所显示的那些水平下降相似。

群组2

对于群组2，五名患者截至第16周的初步血清Z-AAT减少结果显示于图14中，其显示Z-AAT蛋白水平降低与第24周时群组1的Z-AAT蛋白水平降低相似。

在第48周时，下表8尤其显示，达到48周时间点的群组2中之前5个受试者的总肝脏(即肝内)Z-AAT蛋白水平、单体(可溶性)肝脏Z-AAT蛋白水平、聚合物(不溶性)肝脏Z-AAT蛋白水平、ALT酶水平和GGT酶水平。对每一受试者的剂量前和第48周的肝脏活检物进行评估，其结果也显示于表8中。

表8.来自群组2的受试者中从基线至第48周的相对变化。

*nmol/总蛋白质

**第40周测量值

NM-未测量

如上表8中所显示，每一所报告受试者获得大于75％的总肝脏Z-AAT蛋白水平降低(Δ％)和单体(可溶性)肝脏Z-AAT蛋白水平降低。另外，所有受试者显示聚合物(不溶性)肝脏Z-AAT蛋白水平降低，并且5个所报告受试者中的4个展示80％-97％范围内的Z-AAT聚合物(不溶性)蛋白水平降低，并且一个受试者展示42.4％的降低。

肝脏Z-AAT蛋白水平降低也产生临床相关生物标志物的改善，包括在第48周时与基线相比，所有受试者显示34％-61％范围内的ALT减少，并且所有受试者显示26％-44％范围内的GGT减少。

所有所报告受试者显示得分的改善，并且分别降低17.7％、17.0％、67.8％和35.6％(仅测量5个受试者中的4个)。另外，所有5名患者展示在第48周时18％-37％范围内的纤维生成生物标志物Pro-C3减少。

在第48周时，5个受试者中的4个显示纤维化(METAVIR)改善至少1分，并且在第5个受试者中未见纤维化恶化。5个受试者中的3个具有门静脉炎症改善，并且其它2个受试者未显示恶化。另外，所有受试者具有Z-AAT负荷的改善，其通过PAS+D(过碘酸希夫+淀粉酶)染色来评估。

群组1和群组2的组织学评估

以盲化方式(对于患者和时间点)由两位独立的病理学家实施第24周(对于群组1)和第48周(对于群组2)时肝脏活检物的组织学评估，并且第三位病理学家在前两位病理学家之间的评估出现分歧时参与。通过METAVIR对纤维化阶段进行评分，并且对以下中的每一者，Z-AAT小球负荷基于阳性PAS+D染色评分为0-3(3为最重度或最大的负荷)：含有小球的门静脉道的范围、含有小球的门静脉周围肝细胞的范围和区域定位。改善大于或等于1分的关键组织学特征报告于下表9中：

表9.肝脏组织学相对于基线的改善(肝脏组织学特征改善≥1分的受试者的百分比)。

***不包括在基线处无证据的受试者

可从群组1和群组2获得的数据证实，ARO-AAT治疗引起肝内Z-AAT蛋白(Z-AAT单体和Z-AAT聚合物两者)的一致和实质性减少；组织学小球负荷的一致降低；纤维化的改善；和肝脏健康的其它相关生物标志物的改善。另外，在患有基线脂肪变性肝脏疾病的受试者中可见脂肪变性的组织学改善。

研究安全性汇总

在II期研究中，截至2021年3月15日的数据提取日，16个受试者已接受总共71个剂量(59个200mg剂量和12个100mg剂量)且没有因不良事件所致的死亡和退出。在长达1年的治疗后，ARO-AAT总体耐受良好。无治疗紧急不良事件(TEAE)相关的研究药物中断、剂量间断或提前退出研究。在200mg群组中报告三起严重不良事件(SAE)，病毒性心肌炎、憩室炎和呼吸困难。所有不良事件的严重程度均为中度且均已消退。病毒性心肌炎与EBV感染相关，憩室炎发生在具有风险因子的受试者(具有PiZZ基因型和阑尾切除史的63岁受试者)中，并且呼吸困难发生在具有非阻塞性肺气肿病史和延迟肺部护理的受试者中。AAT RNAi原料药已耐受良好且无任何明确的安全性信号，包括从基线至第48周未观察到临床上有意义的ppFEV1减少(预测的一秒中用力呼气量百分比)。

截至2021年8月30日的数据提取日，群组1、2和1b的更新的经编译数据汇总

如上文所述，总共16个纯合PiZZ受试者参与2期临床试验。群组1和群组1b由接受以皮下注射施用的200mg(群组1)或100mg(群组1b)的总共三个剂量的AAT RNAi原料药的4个受试者组成，并且剂量在第1天、初始剂量后4周和第二剂量后12周施用。群组2由接受以皮下注射施用的200mg的总共五个剂量的AAT RNAi原料药的8个受试者组成，并且剂量在第1天、初始剂量后4周和第二剂量后12周、第三剂量后12周和第四剂量后12周(即第1天和第4周、第16周、第28周和第40周)施用。平均年龄为52岁(范围为20-66岁)，并且16个受试者中的14个为男性。

在基线和基线后(对于组1和组2为第24周和第48周，并且对于组1b为第24周)收集成对活检物，并且截至2021年8月30日的截止数据提取日，可获得16个受试者中的14个的成对活检物。由对于受试者和时间点盲化的3位病理学家来评价和裁定组织学。关键终点包括METAVIR纤维化、肝脏Z-AAT水平和总小球负荷(针对门静脉道和1区门静脉周围肝细胞累及范围以及区域定位的PAS+D染色的和)。

对于具有成对活检物的14个受试者，11个在基线处具有大于或等于F2的METAVIR纤维化阶段。ARO-AAT在第一剂量后实质上减少所有患者中的血清Z-AAT蛋白，这在整个观察期间持续存在。在第24周或第48周时，平均总肝脏Z-AAT蛋白减少百分比在80％至89％范围内。所有患者具有减小的小球负荷(在基线处平均得分为7.3(最大值为9)，其在第24周或第48周时减小至平均得分2.5)。在施用200mg AAT RNAi原料药的11名患者(即来自群组1和群组2的受试者)中的6名中实现纤维化的改善(≥1阶段)，而施用100mg剂量(群组1b)的三名患者均不显示改善。尽管群组2中的两名患者从基线至第48周显示纤维化恶化(两者均来自F2至F3)，但两个受试者的小球负荷却明显降低(基线处的得分分别为9和4，至第48周时两者的得分为0)，并且在治疗后ALT和GGT水平正常化。

所有组显示ALT和GGT的正常化。平均ALT减少百分比在42％至56％范围内，并且在第28周与第72周之间在33％至54％范围内。

ARO-AAT耐受良好，并且无持续的临床上有意义的ppFEV1从基线的变化且无导致研究或研究药物中断的不良事件。报告四起SAE：EBV相关的心肌炎、憩室炎、呼吸困难和前庭神经原炎。

某些汇总数据提供于下表10中：

表10.截至2021年8月31日数据截止的组合群组汇总数据

NA＝不适用；在第24周时收集组1和组1b的肝脏活检物，并且在第48周时收集组2的肝脏活检物。

*在数据截止时，组2中的一个受试者尚未到达第48周且未纳入分析中

**组1b中的一个受试者具有无法评估METAVIR纤维化的基线活检。

总之，ARO-AAT减少所有患者中的血清和肝脏Z-AAT和小球负荷。这些数据证实，在AATD肝脏疾病中去除病因因素Z-AAT改善疾病活动度，并且可改善纤维化。

其它实施方案

应理解，尽管已结合其详细描述描述了本发明，但前述描述意欲说明且不限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求书的范围来定义。其它方面、优点和修改在所附权利要求书的范围内。

序列表

<110> 箭头药业股份有限公司(ARROWHEAD PHARMACEUTICALS, INC.)

<120> 用于降低Z-AAT蛋白水平的方法

<130> 3817.084PC02

<150> US 63/078,658

<151> 2020-09-15

<150> US 63/180,487

<151> 2021-04-27

<160> 6

<210> 1

<211> 3220

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<223> 智人丝氨酸蛋白酶抑制剂家族A成员1 (SERPINA1)，

基因转录物变体1 (NM_000295.4)

<400> 1

acaatgactc ctttcggtaa gtgcagtgga agctgtacac tgcccaggca aagcgtccgg 60

gcagcgtagg cgggcgactc agatcccagc cagtggactt agcccctgtt tgctcctccg 120

ataactgggg tgaccttggt taatattcac cagcagcctc ccccgttgcc cctctggatc 180

cactgcttaa atacggacga ggacagggcc ctgtctcctc agcttcaggc accaccactg 240

acctgggaca gtgaatcgac aatgccgtct tctgtctcgt ggggcatcct cctgctggca 300

ggcctgtgct gcctggtccc tgtctccctg gctgaggatc cccagggaga tgctgcccag 360

aagacagata catcccacca tgatcaggat cacccaacct tcaacaagat cacccccaac 420

ctggctgagt tcgccttcag cctataccgc cagctggcac accagtccaa cagcaccaat 480

atcttcttct ccccagtgag catcgctaca gcctttgcaa tgctctccct ggggaccaag 540

gctgacactc acgatgaaat cctggagggc ctgaatttca acctcacgga gattccggag 600

gctcagatcc atgaaggctt ccaggaactc ctccgtaccc tcaaccagcc agacagccag 660

ctccagctga ccaccggcaa tggcctgttc ctcagcgagg gcctgaagct agtggataag 720

tttttggagg atgttaaaaa gttgtaccac tcagaagcct tcactgtcaa cttcggggac 780

accgaagagg ccaagaaaca gatcaacgat tacgtggaga agggtactca agggaaaatt 840

gtggatttgg tcaaggagct tgacagagac acagtttttg ctctggtgaa ttacatcttc 900

tttaaaggca aatgggagag accctttgaa gtcaaggaca ccgaggaaga ggacttccac 960

gtggaccagg tgaccaccgt gaaggtgcct atgatgaagc gtttaggcat gtttaacatc 1020

cagcactgta agaagctgtc cagctgggtg ctgctgatga aatacctggg caatgccacc 1080

gccatcttct tcctgcctga tgaggggaaa ctacagcacc tggaaaatga actcacccac 1140

gatatcatca ccaagttcct ggaaaatgaa gacagaaggt ctgccagctt acatttaccc 1200

aaactgtcca ttactggaac ctatgatctg aagagcgtcc tgggtcaact gggcatcact 1260

aaggtcttca gcaatggggc tgacctctcc ggggtcacag aggaggcacc cctgaagctc 1320

tccaaggccg tgcataaggc tgtgctgacc atcgacgaga aagggactga agctgctggg 1380

gccatgtttt tagaggccat acccatgtct atcccccccg aggtcaagtt caacaaaccc 1440

tttgtcttct taatgattga acaaaatacc aagtctcccc tcttcatggg aaaagtggtg 1500

aatcccaccc aaaaataact gcctctcgct cctcaacccc tcccctccat ccctggcccc 1560

ctccctggat gacattaaag aagggttgag ctggtccctg cctgcatgtg actgtaaatc 1620

cctcccatgt tttctctgag tctccctttg cctgctgagg ctgtatgtgg gctccaggta 1680

acagtgctgt cttcgggccc cctgaactgt gttcatggag catctggctg ggtaggcaca 1740

tgctgggctt gaatccaggg gggactgaat cctcagctta cggacctggg cccatctgtt 1800

tctggagggc tccagtcttc cttgtcctgt cttggagtcc ccaagaagga atcacagggg 1860

aggaaccaga taccagccat gaccccaggc tccaccaagc atcttcatgt ccccctgctc 1920

atcccccact cccccccacc cagagttgct catcctgcca gggctggctg tgcccacccc 1980

aaggctgccc tcctgggggc cccagaactg cctgatcgtg ccgtggccca gttttgtggc 2040

atctgcagca acacaagaga gaggacaatg tcctcctctt gacccgctgt cacctaacca 2100

gactcgggcc ctgcacctct caggcacttc tggaaaatga ctgaggcaga ttcttcctga 2160

agcccattct ccatggggca acaaggacac ctattctgtc cttgtccttc catcgctgcc 2220

ccagaaagcc tcacatatct ccgtttagaa tcaggtccct tctccccaga tgaagaggag 2280

ggtctctgct ttgttttctc tatctcctcc tcagacttga ccaggcccag caggccccag 2340

aagaccatta ccctatatcc cttctcctcc ctagtcacat ggccataggc ctgctgatgg 2400

ctcaggaagg ccattgcaag gactcctcag ctatgggaga ggaagcacat cacccattga 2460

cccccgcaac ccctcccttt cctcctctga gtcccgactg gggccacatg cagcctgact 2520

tctttgtgcc tgttgctgtc cctgcagtct tcagagggcc accgcagctc cagtgccacg 2580

gcaggaggct gttcctgaat agcccctgtg gtaagggcca ggagagtcct tccatcctcc 2640

aaggccctgc taaaggacac agcagccagg aagtcccctg ggcccctagc tgaaggacag 2700

cctgctccct ccgtctctac caggaatggc cttgtcctat ggaaggcact gccccatccc 2760

aaactaatct aggaatcact gtctaaccac tcactgtcat gaatgtgtac ttaaaggatg 2820

aggttgagtc ataccaaata gtgatttcga tagttcaaaa tggtgaaatt agcaattcta 2880

catgattcag tctaatcaat ggataccgac tgtttcccac acaagtctcc tgttctctta 2940

agcttactca ctgacagcct ttcactctcc acaaatacat taaagatatg gccatcacca 3000

agccccctag gatgacacca gacctgagag tctgaagacc tggatccaag ttctgacttt 3060

tccccctgac agctgtgtga ccttcgtgaa gtcgccaaac ctctctgagc cccagtcatt 3120

gctagtaaga cctgcctttg agttggtatg atgttcaagt tagataacaa aatgtttata 3180

cccattagaa cagagaataa atagaactac atttcttgca 3220

<210> 2

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> AAT RNAi 剂反义链经修饰的序列

<400> 2

uguuaaacau gccuaaacgc u 21

<210> 3

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> AAT RNAi剂反义链基础碱基序列

<400> 3

uguuaaacau gccuaaacgc u 21

<210> 4

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> AAT RNAi剂有义链经修饰的序列

<400> 4

agcguuuagg cauguuuaac a 21

<210> 5

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> AAT RNAi剂有义链基础碱基序列

<400> 5

agaugcugcc cagaagacac a 21

<210> 6

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> AAT RNAi剂有义链经修饰的序列

<400> 6

agcguuuagg cauguuuaac a 21

Claims (58)

1.一种降低具有α-1抗胰蛋白酶的PiZZ基因型的人受试者中的肝脏Z-AAT蛋白水平的方法，所述方法包括：

a.向所述受试者施用初始剂量的药物组合物，所述药物组合物包含表2中描述的AATRNAi原料药，所述AAT RNAi原料药的剂量介于约5mg至约300mg之间，

b.在所述初始剂量后约四周或约一个月，向所述受试者施用第二剂量的所述药物组合物，和

c.在所述第二剂量后约12周或约三个月，向所述受试者施用第三剂量的所述药物组合物，

其中所述剂量通过皮下注射来施用。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述AAT RNAi原料药的所述剂量介于约25mg与约300mg之间。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述AAT RNAi原料药的所述剂量介于约25mg与约200mg之间。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述AAT RNAi原料药的所述剂量介于约100mg与约200mg之间。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述AAT RNAi原料药的所述剂量为约100mg。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述AAT RNAi原料药的所述剂量为约200mg。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述AAT RNAi原料药的所述剂量为约200mg或更少。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中可溶性肝脏Z-AAT蛋白水平降低。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中不溶性肝脏Z-AAT蛋白水平降低。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中不溶性肝脏Z-AAT蛋白水平和可溶性肝脏Z-AAT蛋白水平均降低。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，所述方法还包括在所述第三剂量后施用额外剂量，其中所述额外剂量在此后约每12周或约每三个月施用。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述肝脏Z-AAT蛋白水平在距所述初始剂量六个月内降低。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述肝脏Z-AAT蛋白水平在距所述初始剂量约一年内降低。

14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述Z-AAT蛋白水平在施用仅三个剂量的AAT RNAi原料药后降低。

15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述肝脏不显示纤维化的恶化或改善。

16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中肝酶ALT、GGT或两者减少。

17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中纤维发生标志物Pro-C3减少。

18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中门静脉肝脏炎症减轻。

19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中通过瞬时弹性成像对肝脏硬度的非侵入性测量有所改善。

20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，其中向所述受试者进一步施用用于治疗AATD的另一治疗剂。

21.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中向所述受试者进一步施用用于治疗肺损伤、肺气肿或由内源分泌性AAT蛋白缺乏引起的其它肺疾病或病症的治疗剂。

22.如权利要求21所述的方法，其中所述另一治疗剂包含人AAT蛋白、经纯化的人α-1蛋白酶抑制剂或重组AAT蛋白。

23.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述药物组合物包装于药盒、容器、包、分配器、预填充注射器或小瓶中。

24.如权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述药物组合物包含表3.1或表3.2中描述的经配制的AAT RNAi原料药，由其组成或基本上由其组成。

25.如权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述药物组合物的一个或多个剂量的所述施用由所述受试者实施。

26.如权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述药物组合物的一个或多个剂量的所述施用由医疗专业人员实施。

27.如权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述受试者为成人。

28.一种治疗具有α-1抗胰蛋白酶的PiZZ基因型的人受试者的AATD的方法，所述方法包括：

a.向所述受试者施用初始剂量的药物组合物，所述药物组合物包含表2中描述的AATRNAi原料药，所述AAT RNAi原料药的剂量介于约5mg至约300mg之间，

b.在所述初始剂量后约四周或约一个月，向所述受试者施用第二剂量的所述药物组合物，和

c.在所述第二剂量后约12周或约三个月，向所述受试者施用第三剂量的所述药物组合物，

其中所述剂量通过皮下注射来施用。

29.如权利要求28所述的方法，其中由AATD引起的疾患或疾病为肝脏疾病。

30.如权利要求29所述的方法，其中所述肝脏疾病为慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌风险增加、转氨酶升高、胆汁淤积、纤维化或暴发性肝衰竭。

31.如权利要求28-30中任一项所述的方法，其中所述AAT RNAi原料药的剂量介于约100mg与约200mg之间。

32.如权利要求28-30中任一项所述的方法，其中所述AAT RNAi原料药的剂量为约200mg或更少。

33.如权利要求28-32中任一项所述的方法，其中单体(可溶性)肝脏Z-AAT蛋白水平降低。

34.如权利要求28-33中任一项所述的方法，其中不溶性肝脏Z-AAT蛋白水平降低。

35.如权利要求28-34中任一项所述的方法，其中不溶性肝脏Z-AAT蛋白水平和可溶性肝脏Z-AAT蛋白水平两者均降低。

36.如权利要求28-35中任一项所述的方法，所述方法还包括在所述第三剂量后施用额外剂量，其中所述额外剂量在此后约每12周或约每三个月施用。

37.如权利要求28-36中任一项所述的方法，其中所述肝脏Z-AAT蛋白水平在所述初始剂量的约六个月内降低。

38.如权利要求28-36中任一项所述的方法，其中所述肝脏Z-AAT蛋白水平在所述初始剂量的约一年内降低。

39.如权利要求28-38中任一项所述的方法，其中所述Z-AAT蛋白水平在施用仅三个剂量的AAT RNAi原料药后降低。

40.如权利要求1至39中任一项所述的方法，其中向所述人受试者施用包含表2中描述的所述AAT RNAi原料药(ADS-001)的所述药物组合物引起

(i)纤维化减轻；

(ii)门静脉周围肝细胞的水平降低；

(iii)血清Z-AAT减少；

(iv)总肝脏Z-AAT减少；

(v)可溶性肝脏Z-AAT减少；

(vi)不溶性肝脏Z-AAT减少；

(vii)ALT减少；

(viii)GGT减少；

(ix)Pro-C3减少；

(x)脂肪变性的组织学改善，或

(xi)其组合。

41.如权利要求40所述的方法，其中血清Z-AAT的所述减少为至少约70％。

42.如权利要求40所述的方法，其中血清Z-AAT的所述减少介于约70％与约100％之间。

43.如权利要求40所述的方法，其中总肝脏Z-AAT的所述减少为至少约70％。

44.如权利要求40所述的方法，其中总肝脏Z-AAT的所述减少介于约70％与约100％之间。

45.如权利要求40所述的方法，其中可溶性肝脏Z-AAT的所述减少为至少约50％。

46.如权利要求40所述的方法，其中可溶性肝脏Z-AAT的所述减少介于约50％与约97％之间。

47.如权利要求40所述的方法，其中不溶性肝脏Z-AAT的所述减少为至少约40％。

48.如权利要求40所述的方法，其中不溶性肝脏Z-AAT的所述减少介于约40％与约97％之间。

49.如权利要求40所述的方法，其中ALT的所述减少为至少约30％。

50.如权利要求40所述的方法，其中ALT的所述减少介于约30％与约75％之间。

51.如权利要求40所述的方法，其中GGT的所述减少为至少约25％。

52.如权利要求40所述的方法，其中GGT的所述减少介于约25％与约85％之间。

53.如权利要求40所述的方法，其中纤维化的所述减轻为至少约15％，如通过所测量。

54.如权利要求40所述的方法，其中纤维化的所述减轻介于约15％与约90％之间，如通过所测量。

55.如权利要求40所述的方法，其中Pro-C3的所述减少为至少约15％。

56.如权利要求40所述的方法，其中Pro-C3的所述减少介于约15％与约90％之间。

57.如权利要求40所述的方法，其中所述人受试者具有脂肪变性的组织学改善。

58.如权利要求1至57中任一项所述的方法，其中向所述人受试者施用包含表2中描述的所述AAT RNAi原料药(ADS-001)的所述药物组合物引起纤维化、门静脉炎症、界面性肝炎、整体门静脉道累及、PAS+D区域定位、1区“小球”门静脉周围累及或其任何组合的改善。