CN116670170A - Lepr激动剂用于疼痛的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于减少患者的疼痛、阿片类药物的使用和住院治疗的方法，所述患者患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状，如脂肪代谢障碍等。本发明可以在涉及中枢神经系统对疼痛的集中化或超敏感化的其它形式的慢性疼痛中具有作用。

Description

LEPR激动剂用于疼痛的用途

本申请要求于2020年9月15日提交的美国临时专利申请第63/078,687号的权益，所述美国临时专利申请通过引用整体并入本文。

本申请的序列表以ASCII格式的序列表的形式以电子方式提交，文件名为“10823WO01_Sequence_Listing_ST25”，创建日期为2021年9月15日，并且大小为48KB。提交的此序列表是说明书的一部分，并通过引用整体并入本文。

技术领域

本发明涉及用于通过施用LEPR激动剂来治疗或预防与脂肪代谢障碍和其它瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状相关的疼痛的方法。

背景技术

瘦素是一种控制能量平衡以及代谢和神经内分泌功能的脂肪组织激素。在能量不足的状态下，低循环瘦素水平驱动适应性应答，包括通过调节神经内分泌通路增加饥饿和能量保存。瘦素通过接合瘦素受体(LEPR)(I类细胞因子受体家族3的成员)来调节能量和代谢平衡。LEPR由单个基因编码并且替代性剪接产生多种LEPR剪接同种型，所述剪接同种型在其C末端序列处不同。在这些剪接同种型中，LEPR-b是介导瘦素作用的主要同种型，并且是刺激JAK-STAT信号传导的唯一同种型。

瘦素治疗可逆转由于Lep基因的基因功能丧失突变导致的瘦素缺乏症导致小鼠的食欲过盛、肥胖症、胰岛素抵抗、血脂异常和神经内分泌功能受损。在临床上，瘦素类似物美曲普汀(metreleptin)可以逆转患有由瘦素缺乏症引起的单基因肥胖症的患者的肥胖症以及代谢和生殖功能障碍。与原发性瘦素缺乏症类似，继发性低瘦素血症的疾病状态与葡萄糖和脂质代谢功能障碍有关，所述功能障碍可以通过瘦素治疗逆转。先天性和获得性全身性脂肪代谢障碍综合征是罕见但严重的疾病，其特征在于脂肪组织贮库几乎完全丧失。这些患者中非常低的循环瘦素水平导致了食欲过盛、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、肝脂肪变性、胰岛素抵抗和糖尿病的状态。

疼痛与一些瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状，如脂肪代谢障碍(例如，PLD)有关。例如，一些个体可能经历极度高甘油三酯血症和乳糜微粒血症(一种特征在于血浆中称为乳糜微粒的脂肪液滴的积聚的病状)。在一些情况下，这可能导致胰腺的急性炎症(胰腺炎)的发作。胰腺炎可以与腹痛、寒战、黄疸、虚弱、出汗、呕吐和体重减轻相关。患有脂膜炎相关的AGL(获得性全身性脂肪代谢障碍)的患者有时会遭受皮下脂肪的疼痛性炎症。脂膜炎相关的AGL中的脂肪减少可能局限于身体的特定部位。Ajluni等人,与部分性脂肪代谢障碍(PL)相关的疾病的图谱：来自一项试验队列的经验(Spectrum of Disease Associated withPartial Lipodystrophy(PL):Lessons from a Trial Cohort),《临床内分泌学(Clin.Endocrinol.)》(牛津(Oxf)).86(5):698-707(2017)。

患有脂肪代谢障碍的患者也有集中性慢性疼痛综合征的特征。

对于出现几乎完全丧失脂肪贮库的全身性脂肪代谢障碍特性的Tg-aP2-nSrebp1c小鼠，瘦素治疗降低了所述小鼠的食欲过盛，并且改善了所述小鼠的血脂异常、肝脂肪变性和血糖控制。这些发现在临床上解释为美曲普汀减轻了患有全身性脂肪代谢障碍的患者的代谢功能障碍。目前，美曲普汀在美国被批准用于治疗患有全身性脂肪代谢障碍的患者以及在日本和欧盟被批准用于患有全身性或部分性脂肪代谢障碍的患者的瘦素缺乏症的并发症。然而，据报告，美曲普汀疗法会引起免疫原性，并且中和抗美曲普汀抗体与内源性瘦素交叉反应的可能性尚不清楚。虽然罕见，但这种免疫原应答的出现与美曲普汀功效降低有关，并且美曲普汀治疗带有黑框警告。

发明内容

本发明提供了一种用于减轻或预防患者的疼痛(例如，腹痛(例如，伴有恶心和/或呕吐)、肝痛和/或由胰腺炎引起的疼痛)、相关的焦虑和/或抑郁(例如，其是瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状(例如，部分性脂肪代谢障碍))的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的LEPR激动剂(例如，REGN4461)。在本发明的一实施方式中，这种疼痛、焦虑和/或抑郁在所述LEPR激动剂的第一次施用的少于1天、1天、2天、3天、4天或5天内减轻。

本发明还提供了一种用于减少例如患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状的患者的以下各项或者维持对所述患者的以下各项的减少的方法：止痛药(例如，阿片类药物)的使用(例如，长期使用)、抗焦虑药的使用、抗抑郁药的使用、止痛药(例如，阿片类药物)寻求行为、痛觉缺失(例如，阿片类药物)的按需或根据需要使用、止痛药(例如，阿片类药物)过量和/或由于滥用止痛药(例如，阿片类药物)导致的死亡，所述方法包括向所述患者施用有效量的LEPR激动剂。在本发明的一实施方式中，在第一次施用所述LEPR激动剂的同时或之前减少止痛药、抗焦虑药和/或抗抑郁药的使用。例如，在本发明的一实施方式中，治疗医师已经指示停止止痛药(如阿片类药物)的常规使用，同时开始用LEPR激动剂(例如，REGN4461)进行治疗，并且除了止痛药的偶发性使用之外，维持这种停止。在本发明的一实施方式中，这种止痛药的使用、寻求、过量或由于滥用止痛药导致的死亡的减少是指阿片类药物，但不一定是非阿片类药物如扑热息痛(paracetamol)的减少。

在本发明的一实施方式中，所述止痛药是阿片类药物、非阿片类药物、降钙素基因相关肽(CGRP)抑制剂、环氧酶-2抑制剂、吉泮(gepant)、抗CGRP单克隆抗体、非甾体抗炎剂、水杨酸盐、对乙酰氨基酚(acetaminophen)、乙酰水杨酸(acetylsalicylic acid)、阿芬太尼(alfentanil)、阿司匹林(aspirin)和柠檬酸(citric acid)和碳酸氢钠(sodiumbicarbonate)、溴芬酸(bromfenac)、塞来昔布(celecoxib)、水杨酸胆碱(cholinesalicylate)和水杨酸镁(magnesium salicylate)、可待因(codeine)、罂粟杆浓缩物、右马拉胺(dextromoramide)、右旋丙氧芬(dextropropoxyphene)、双氯芬酸(diclofenac)、双氯芬酸和米索前列醇(misoprostol)、二氟尼柳(diflunisal)、二氟尼柳、二氢可待因(dihydrocodeine)、二氢唉托啡(dihydroetorphine)、地芬诺酯(diphenoxylate)、依普奈珠单抗(eptinezumab)、厄瑞努单抗(erenumab)、埃索美拉唑(esomeprazole)和萘普生(naproxen)、乙基吗啡(ethylmorphine)、依托度酸(etodolac)、埃托啡(etorphine)、法莫替丁(famotidine)和布洛芬(ibuprofen)、非诺洛芬(fenoprofen)、芬太尼(fentanyl)、氟比洛芬(flurbiprofen)、瑞玛奈珠单抗(fremanezumab)、加巴喷丁(gabapentin)、伽奈珠单抗(galcanezumab)、海洛因(heroin)、氢可酮(hydrocodone)、氢吗啡酮(hydromorphone)、布洛芬、吲哚美辛(indomethacin)、克他命(ketamin)、凯托米酮(ketobemidone)、酮洛芬(ketoprofen)、酮咯酸(ketorolac)、左啡诺(levorphanol)、水杨酸镁(magnesiumsalicylate)、甲氯芬那酸盐(meclofenamat)、甲芬那酸(mefenamic acid)、美洛昔康(meloxicam)、美沙酮(methadone)、美沙酮、吗啡(morphine)、吗啡-n-氧化物(morphine-n-oxide)、萘丁美酮(nabumetone)、萘普生、尼可吗啡(nicomorphine)、去甲可待因(norcodeine)、鸦片(opium)、奥列巴文(oripavine)、奥沙普嗪(oxaprozin)、羟考酮(oxycodone)、羟吗啡酮(oxymorphone)、哌替啶(pethidine)、哌替啶中间体、苯基丁氮酮(phenylbutazone)、福尔可定(pholcodine)、哌腈米特(piritramide)、吡罗昔康(piroxicam)、瑞芬太尼(remifentanil)、瑞美吉泮硫酸盐(rimegepant sulfate)、双水杨酸酯(salsalate)、舒芬太尼(sufentanil)、舒林酸(sulindac)、蒂巴因(thebaine)或替利定(tilidine)、托美丁(tolmetin)、乌布吉泮(ubrogepant)或伐地考昔(valdecoxib)。

在本发明的一实施方式中，所述抗焦虑药是苯二氮卓类药物、三环抗抑郁药、阿普唑仑(alprazolam)、阿普唑仑、褪黑素受体的激动剂、麻醉剂、抗组胺剂、SNRI、SSRI、丁螺环酮(buspirone)、氯硝西泮(clonazepam)、地西泮(diazepam)、艾司唑仑(estazolam)、艾司佐匹克隆(eszopiclone)、氟西泮(flurazepam)、劳拉西泮(lorazepam)、夸西泮(quazepam)、替马西泮(temazepam)、三唑仑(triazolam)、扎来普隆(zaleplon)、唑吡坦(zolpidem)或佐匹克隆(zopiclone)。

在本发明的一实施方式中，所述抗抑郁药是单胺氧化酶抑制剂、选择性血清素再摄取抑制剂(SSRI)、血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)、三环抗抑郁药、阿米替林(amitriptyline)、非典型抗抑郁药、安非他酮(bupropion)、西酞普兰(citalopram)、地昔帕明(desipramine)、地文拉法辛(desvenlafaxine)和左旋体米那普仑(levomilnacipran)、多虑平(doxepin)、度洛西汀(duloxetine)、依他普仑(escitalopram)、氟西汀(fluoxetine)、丙咪嗪(imipramine)、异卡波肼(isocarboxazid)、米氮平(mirtazapine)、去甲替林(nortriptyline)、帕罗西汀(paroxetine)、苯乙肼(phenelzine)、司来吉兰(selegiline)、舍曲林(sertraline)、强内心百乐明(tranylcypromine)、曲唑酮(trazodone)、文拉法辛(venlafaxine)、维拉佐酮(vilazodone)或沃替西汀(vortioxetine)。

本发明提供了一种减少患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状的患者因疼痛(例如，腹痛(例如，伴有恶心和/或呕吐)、肝痛和/或由胰腺炎引起的疼痛)、焦虑和/或抑郁而住院治疗的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的LEPR激动剂。

在本发明的一实施方式中，所述瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状为单基因肥胖症、肥胖症、代谢综合征、饮食诱导的食物渴求、功能性下丘脑性闭经、1型糖尿病、2型糖尿病、胰岛素抵抗、拥有中和抗瘦素自身抗体、严重胰岛素抵抗，包括由于胰岛素受体突变引起的严重胰岛素抵抗、不是由胰岛素受体突变引起的严重胰岛素抵抗、由下游信号传导通路突变引起的或由其它原因诱导的严重胰岛素抵抗、非酒精性和酒精性脂肪肝病、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、瘦素缺乏症、瘦素抵抗、脂肪代谢障碍(例如，先天性全身性脂肪代谢障碍、获得性全身性脂肪代谢障碍、家族性部分性脂肪代谢障碍、获得性部分性脂肪代谢障碍、离心性腹部脂肪代谢障碍、环状脂肪萎缩、局部脂肪代谢障碍和HIV相关脂肪代谢障碍)、矮怪病/多诺霍综合征(Leprechaunism/Donohue syndrome)或罗伯森-门登霍尔综合征(Rabson-Mendenhall syndrome)。

在本发明的一实施方式中，所述LEPR激动剂是与LEPR特异性结合的分离的抗体或抗原结合片段，例如，所述分离的抗体或抗原结合片段包括：(i)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列；(ii)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列；(iii)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列；(iv)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列；(v)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列；(vi)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQID NO:50中所示的氨基酸序列；(vii)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQID NO:58中所示的氨基酸序列；(viii)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQID NO:66中所示的氨基酸序列；(ix)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQID NO:74中所示的氨基酸序列；(x)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；(xi)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列；或者(xii)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列。在本发明的一实施方式中，所述与LEPR特异性结合的分离的抗体或抗原结合片段包括：(i)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列；(ii)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列；(iii)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列；(iv)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列；(v)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列；(vi)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列；(vii)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列；(viii)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；(ix)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括SEQID NO:74中所示的氨基酸序列；(x)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；(xi)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列；或者(xii)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列；以及重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列。

在本发明的一实施方式中，LEPR激动剂的所述有效量是约5mg/kg的一个或多个静脉内剂量以及此后每周一次约250mg至300mg的一个或多个皮下剂量。

在本发明的一实施方式中，还向所述患者施用另外的治疗剂，例如人瘦素、美曲普汀、PCSK9抑制剂、抗PCSK9拮抗剂抗体、阿利库单抗(alirocumab)、依洛尤单抗(evolocumab)、伯考赛珠单抗(bococizumab)、洛迪赛珠单抗(lodelcizumab)、雷泮赛珠单抗(ralpancizumab)、HMG-CoA还原酶抑制剂、阿托伐他汀(atorvastatin)、瑞舒伐他汀(rosuvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、普伐他汀(pravastatin)、依折麦布(ezetimibe)、胰岛素、胰岛素变体、胰岛素促分泌素(insulinsecretagogue)、二甲双胍(metformin)、磺酰脲、钠葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂、达格列净(dapaglifozin)、卡格列净(canaglifozin)、恩格列净(empagliflozin)、MC₄受体的选择性激动剂、赛美拉肽(setmelanotide)、GLP-1激动剂或类似物、extendin-4、艾塞那肽(exenatide)、利拉鲁肽(liraglutide)、利西拉肽(lixisenatide)、阿必鲁肽(albiglutide)、度拉鲁肽(dulaglutide)、胰高血糖素(GCG)抑制剂、抗GCG抗体、胰高血糖素受体(GCGR)抑制剂、抗GCGR抗体、小分子GCGR拮抗剂、GCGR特异性反义寡核苷酸、抗GCGR适体、血管生成素样蛋白(ANGPTL)抑制剂、抗ANGPTL3抗体、抗ANGPTL4抗体、抗ANGPTL8抗体、苯丁胺(phentermine)、奥利司他(orlistat)、托吡酯(topiramate)、安非他酮、托吡酯和苯丁胺、安非他酮和纳曲酮(naltrexone)、安非他酮和唑尼沙胺(zonisamide)、普兰林肽(pramlintide)和美曲普汀、洛卡色林(lorcaserin)、西替司他(cetilistat)、特索芬辛(tesofensine)或韦利贝特(velneperit)。

附图说明

图1.部分性脂肪代谢障碍(PLD)患者的疾病随时间(年龄，以年为单位)的进程以及不同治疗干预期间的代谢参数的总结。

图2.PLD患者随时间的体态，其中通过肝脏跨度的身体检查，患者的肝脏大小相对于基线明显减小。

图3.PLD患者随时间推移的静息能量消耗(REE)。REE占总能量消耗的约60％，并且从基线时的2599kcal减少至1799kcal。

图4.PLD患者随时间推移的呼吸商(RQ)。RQ从基线时的0.92减少至第12周的0.81和第25周的0.82。

图5.PLD患者随时间推移的PHQ-9评分。评分越高指示抑郁症状越多。

图6.PLD患者随时间推移的SF-36评分。更高的评分与所指示项目的改善相对应。

图7.患者的主要疼痛发作和药物使用的总结。反映了表1-3中所示的一些数据。PRN羟考酮使用(在REGN4461开始之前)为至少2至3个剂量，每周至少3天，持续至少12个月。两个弯曲线指示时间线未按比例缩放。

具体实施方式

本发明包括用于治疗与脂肪代谢障碍相关的疼痛的方法。患有脂肪代谢障碍病状的患者通常遭受各种类型的身体疼痛，这些疼痛是由伴随其病状的身体变化，例如胰腺炎、肝脏肿大引起的。虽然减轻这些身体变化可以反过来减少它们引起的疼痛，但是已经观察到本文所述的抗LEPR抗体引起身体疼痛非常快速的减少。出乎意料的是，观察到这种减少发生在任何显著的身体变化发生之前。大脑中的LEPR通路可能以该通路可能涉及大脑的疼痛感知的多少涉及更广泛的慢性疼痛综合征；因此，使得本文讨论的抗LEPR抗体可用于调节这种通路和/或治疗或预防这种病状。

LEPR激动剂

本发明包括使用LEPR激动剂治疗疼痛、焦虑和/或抑郁的方法，例如，所述疼痛、焦虑和/或抑郁与瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状(例如，部分性脂肪代谢障碍)有关。LEPR激动剂是指激活LEPR信号传导(通常由表达LEPR的细胞中瘦素与LEPR的相互作用引起的细胞内效应的刺激)的分子或物质。在某些实施方式中，LEPR信号传导的激活是指STAT3的转录激活，其可以使用能够直接或间接测量或鉴定STAT3活性的任何方法来检测，例如，使用在报告细胞系中表达的STAT3的标记的版本。例如，本发明包括使用LEPR激动剂，所述LEPR激动剂在细胞水平报告基因测定(例如使用WO2017/66204中所述实施例7中定义的细胞水平测定形式)或基本上类似的测定中激活LEPR信号传导。如WO2017/66204中实施例7中所述的检测LEPR激活的细胞水平报告基因测定，可以产生可检测的信号，所述信号可以用EC₅₀值(即，产生半最大信号传导所需的激动剂浓度)和/或在瘦素存在的情况下观察到的最大信号传导的百分比来表示。在本发明的某些示例性实施方式中，提供了LEPR激动剂，其在例如使用WO2017/66204中所示的实施例7中定义的测定形式的基于细胞的报告基因测定或基本上类似的测定中以小于约12.0nM的EC₅₀值激活LEPR信号传导。在本发明的某些示例性实施方式中，在细胞水平报告基因测定(例如使用WO2017/66204中所述实施例7中定义的细胞水平测定形式)或基本上类似的测定中，LEPR激动剂以相对于瘦素信号传导大于约65％的最大激活百分比激活LEPR信号传导。LEPR激动剂包括与LEPR特异性结合的抗体和其抗原结合片段以及小分子。

如本文所使用的，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子，其包括四个多肽链，即通过二硫键互连的两个重链(HC)和两个轻链(LC)(例如，“IgG”)-REGN4461。在本发明的一实施方式中，每条抗体重链(HC)包括重链可变区(“HCVR”或“V_H”)(例如，SEQ ID NO:2、18、26、34、42、50、58、66、74、82、98或106或其变体)和重链恒定区；并且每条抗体轻链(LC)包括轻链可变区(“LCVR”或“V_L”)(例如，SEQ ID NO:10或90其变体)和轻链恒定区(CL)。V_H区和V_L区可以进一步细分为被称作互补决定区(CDR)的超变区，所述超变区散布有更保守的被称作构架区(FR)的区。每个V_H和V_L包括三个CDR。

在本发明的一实施方式中，每个框架或CDR结构域的氨基酸分配根据Kabat、Chothia或Abm中的定义：参见例如，“具有免疫学意义的蛋白质的序列(Sequences ofProteins of Immunological Interest)”,Kabat等人；马里兰州贝塞斯达的美国国立卫生研究院(National Institutes of Health,Bethesda,Md.)；第5版；NIH出版号：91-3242(1991)；Kabat,“抗体互补的结构基础(The Structural Basis for AntibodyComplementary)”,《蛋白质化学进展(Adv.Prot.Chem.)》32:1-75(1978)；Kabat等人,“免疫球蛋白的重链和轻链的互补决定(高变)片段中氨基酸的异常分布和其在抗体结合位点特异性中的可能作用(Unusual distributions of amino acids in complementarity-determining(hypervariable)segments of heavy and light chains ofimmunoglobulins and their possible roles in specificity of antibody-combiningsites)”,《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》252:6609-6616(1977)；Chothia等人,“免疫球蛋白高变区的规范结构(Canonical structures for the hypervariable regions ofimmunoglobulins)”,《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》196:901-917(1987)或Chothia等人,“免疫球蛋白高变区的构象(Conformations of immunoglobulin hypervariableregions)”,《自然(Nature)》342:877-883(1989)。因此，本发明包括抗体和抗原结合片段，其包括V_H的CDR和V_L的CDR，所述V_H和V_L包括本文所述的氨基酸序列(或其变体)，其中所述CDR如根据Kabat和/或Chothia所定义。还参见Al-Lazikani等人,《分子生物学杂志》,“免疫球蛋白规范结构的标准构象(Standard conformations for the canonical structuresof immunoglobulins)”.273:927-48(1997)；Martin等人,“对抗体高变环进行建模：一种组合算法(Modeling antibody hypervariable loops:a combined algorithm)”,《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》86:9268-9272(1989)；Martin等人,“抗体结合位点的分子建模(Molecular modeling of antibody combining sites)”,《酶学方法(Methods Enzymol.)》,203:121-153(1991)；Pedersen等人,“抗体建模：超越同源性(Antibody modeling:Beyond homology)”,《免疫方法(Immunomethods)》1(2):126-136(1992)；和Rees等人,In Sternberg M.J.E.(编辑),《蛋白质结构预测(Protein StructurePrediction)》牛津大学出版社(Oxford University Press),牛津(Oxford),141-172(1996)。

在本发明的一实施方式中，抗LEPR抗体或抗原结合片段包括例如IgA型(例如，IgA1或IgA2)、IgD型、IgE型、IgG型(例如，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4(例如，包括S228P和/或S108P突变))或IgM型的重链恒定结构域。在本发明的一实施方式中，抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)包括例如如本文所示的例如κ或λ型或其变体的轻链恒定结构域。本发明包括抗体和抗原结合片段，其包括与例如如本文所示的重链和/或轻链恒定结构域连接的本文所示的可变结构域。

“分离的”抗体或其抗原结合片段、多肽、多核苷酸和载体等至少部分不含来自产生其的细胞或细胞培养物中的其它生物分子。此类生物分子包括核酸、蛋白质、其它抗体或抗原结合片段、脂质、碳水化合物或其它物质，如细胞碎片和生长培养基。分离的抗原结合蛋白可以进一步至少部分地不含表达系统组分，如来自宿主细胞或其生长培养基的生物分子。通常，术语“分离的”并不旨在是指完全不存在此类生物分子(例如，可能会残留少量或不显著量的杂质)，也不是指不存在水、缓冲液或盐或指包含抗体或抗原结合片段的药物调配物的组分。

抗LEPR抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')₂片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；以及(vii)由模拟抗体的高变区的氨基酸残基组成的最小识别单位(例如，分离的互补决定区(CDR)，如CDR3肽)或受约束的FR3-CDR3-FR4肽。其它工程化分子，如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR嫁接抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微抗体、纳米抗体(例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等)，小型模块化免疫药物(SMIP)和鲨鱼变异IgNAR结构域也涵盖在本文所使用的表述“抗原结合片段”内。

抗体的抗LEPR抗原结合片段通常将包括至少一个可变结构域。可变结构域可以具有任何尺寸或氨基酸组成并且通常将包括与一个或多个框架序列相邻或符合读框的至少一个CDR。在具有与V_L结构域相关联的V_H结构域的抗原结合片段中，V_H结构域和V_L结构域可以以任何合适的布置相对于彼此定位。例如，可变区可以是二聚体并含有V_H-V_H、V_H-V_L或V_L-V_L二聚体。可替代地，抗体的抗原结合片段可以含有单体V_H或V_L结构域。

在某些实施方式中，抗体的抗原结合片段可以含有与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可以在本发明的抗体的抗原结合片段内发现的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性构型包括：(i)V_H-C_H1；(ii)V_H-C_H2；(iii)V_H-C_H3；(iv)V_H-C_H1-C_H2；(v)V_H-C_H1-C_H2-C_H3；(vi)V_H-C_H2-C_H3；(vii)V_H-C_L；(viii)VL-C_H1；(ix)V_L-C_H2；(x)V_L-C_H3；(xi)V_L-C_H1-C_H2；(xii)V_L-C_H1-C_H2-C_H3；(xiii)V_L-C_H2-C_H3；和(xiv)V_L-C_L。在可变结构域和恒定结构域的任何构型(包括上文所列的任何示例性构型)中，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或可以通过完整或部分铰链区或接头区连接。铰链区可以由至少2个(例如，5个、10个、15个、20个、40个、60个或更多个)氨基酸组成，其导致单个多肽分子中相邻可变结构域和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连结。此外，本发明的抗体的抗原结合片段可以包括上文所列出的任何可变结构域和恒定结构域构型的同二聚体或异二聚体(或其它多聚体)，其彼此非共价缔合和/或与一个或多个单体V_H或V_L结构域共价缔合(例如，通过一个或多个二硫键)。

与LEPR特异性结合的抗体和抗原结合片段可被称为“抗LEPR”。如果抗体或片段与单体人LEPR结合，则所述抗体或片段与LEPR特异性结合，其中这种结合的特征在于在25℃或37℃下通过表面等离子体共振测量的K_D小于约150nM。

表A-1：编码抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的核苷酸序列

表A-2：抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的氨基酸序列

参见国际专利申请第PCT/US2016/056465号；公布第WO2017/066204号。

示例性抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的重链和轻链可变区如下所示。

H4H16650P2

HCVR(V_H)

LCVR(V_L)

H4H16679P2

HCVR

LCVR

H4H17319P2

HCVR

LCVR

H4H17321P2

HCVR

LCVR

H4H18417P2

HCVR

LCVR

H4H18438P2

HCVR

LCVR

H4H18445P2

HCVR

LCVR

H4H18446P2

HCVR

LCVR

H4H18449P2

HCVR

LCVR

H4H18482P2

HCVR

LCVR

H4H18487P2

HCVR

LCVR

H4H18492P2

HCVR

LCVR

在本发明的一实施方式中，所述LEPR激动剂是米巴瓦德单抗(mibavademab)。《世界卫生组织药物信息(WHO Drug Information)》,第34卷,第4期,2020；建议的INN:列表124。

“H4H16650P2”、“H4H16679P2”、“H4H17319P2”、“H4H17321P2”、“H4H18417P2”、“H4H18438P2”、“H4H18445P2”、“H4H18446P2”、“H4H18449P2”、“H4H18482P2”、“H4H18487P2”和“H4H18492P2”指抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段(包括多特异性抗原结合蛋白)，所述抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段包括SEQ ID NO:2、18、26、34、42、50、58、66、74、82、98或106的免疫球蛋白重链或其可变区(V_H)(或其变体)；和10或90的免疫球蛋白轻链或其可变区(V_L)(或其变体)，如上表A所述；或者其包括重链或V_H和/或其轻链或V_L，所述重链或V_H包括其CDR(CDR-H1(或其变体)、CDR-H2(或其变体)和CDR-H3(或其变体))，所述轻链或V_L包括其CDR(CDR-L1(或其变体)、CDR-L2(或其变体)和CDR-L3(或其变体))，例如，其中免疫球蛋白链、可变区和/或CDR包括下述特定氨基酸序列。本发明的一实施方式中，V_H与IgG恒定重链结构域(例如，IgG1或IgG4或其变体)连接和/或V_L与λ或κ恒定轻链结构域(或其变体)连接。

多肽的“变体”，如免疫球蛋白链(例如，H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和H4H18492P2 V_H、V_L、HC或LC)，包括多肽，所述多肽包括与本文所示(例如，SEQID NO:2、10、18、26、34、42、50、58、66、74、82、90、98或106中的任一个)的参考氨基酸序列至少约70％-99.9％(例如，70％、72％、74％、75％、76％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％)相同或相似的氨基酸序列；当通过BLAST算法执行比较时，其中算法的参数被选择成在相应参考序列的整个长度内给出相应序列之间的最大匹配(例如，预期阈值：10；字号：3；查询范围内的最大匹配数：0；BLOSUM 62矩阵；空位罚分：存在11，扩展1；条件组成评分矩阵调节)。变体可以包括与本文所示(例如，SEQ ID NO:2、10、18、26、34、42、50、58、66、74、82、90、98或106中的任一个)的参考氨基酸序列相同或相似但是具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个突变的多肽。突变可以包括保守或非保守氨基酸的点突变、取代、插入或缺失。

以下参考文献涉及通常用于序列分析的BLAST算法：BLAST算法：Altschul等人(2005)《欧洲联合生化学会杂志(FEBS J.)》272(20):5101-5109；Altschul,S.F.等人,(1990)《分子生物学杂志》215:403-410；Gish,W.等人,(1993)《自然遗传学(NatureGenet.)》3:266-272；Madden,T.L.等人,(1996)《酶学方法》266:131-141；Altschul,S.F.等人,(1997)《核酸研究(Nucleic Acids Res.)》25:3389-3402；Zhang,J.等人,(1997)《基因组研究(Genome Res.)》7:649-656；Wootton,J.C.等人,(1993)《计算化学(Comput.Chem.)》17:149-163；Hancock,J.M.等人,(1994)《计算机应用生物科学(Comput.Appl.Biosci.)》10:67-70；比对评分系统：Dayhoff,M.O.等人,《蛋白质序列和结构图谱学(Atlas ofProtein Sequence and Structure)》中的“蛋白质演化变化的模型(A model ofevolutionary change in proteins.)”(1978)第5卷,增刊3.M.O.Dayhoff(编辑),第345-352页,美国国家生物医学研究基金会(Natl.Biomed.Res.Found.),华盛顿特区(Washington,D.C.)；Schwartz,R.M.等人,《蛋白质序列和结构图谱学》中的“用于检测距离关系的基质(Matrices for detecting distant relationships.)”(1978)第5卷,增刊3.M.O.Dayhoff(编辑),第353-358页,美国国家生物医学研究基金会,华盛顿特区；Altschul,S.F.,(1991)《分子生物学杂志》219:555-565；States,D.J.等人,(1991)《方法(Methods)》3:66-70；Henikoff,S.等人,(1992)《美国国家科学院院刊》89:10915-10919；Altschul,S.F.等人,(1993)《分子进化杂志(J.Mol.Evol.)》36:290-300；比对统计：Karlin,S.等人,(1990)《美国国家科学院院刊》87:2264-2268；Karlin,S.等人,(1993)《美国国家科学院院刊》90:5873-5877；Dembo,A.等人,(1994)《概率年报(Ann.Prob.)》22:2022-2039；以及Altschul,S.F.,《基因组研究中的理论和计算方法(Theoretical andComputational Methods in Genome Research)》中的“评估多个不同的局部比对的统计显著性(Evaluating the statistical significance of multiple distinct localalignments)”(S.Suhai编辑),(1997),第1-14页,纽约普莱南出版公司(Plenum,N.Y.)。

用于本发明的方法的示例性抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段列于本文表A中。表A列出了示例性抗LEPR激动剂抗体和抗原结合片段的重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识符。

本发明提供了使用包括HCVR的抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述HCVR包括选自表A中列出的HCVR氨基酸序列中的任一个的氨基酸序列；或其变体。

本发明还提供了使用包括LCVR的抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述LCVR包括选自表A中列出的LCVR氨基酸序列中的任一个的氨基酸序列；或其变体。

本发明还提供了使用抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述抗体和其抗原结合片段包括HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR/LCVR)，所述氨基酸序列对包括配对的表A中列出的HCVR氨基酸序列中的任一个或其变体与表A中列出的LCVR氨基酸序列中的任一个或其变体。根据某些实施方式，本发明提供了抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段，其包括表A中所列的任何示例性抗体和片段内包括的HCVR/LCVR氨基酸序列对；或其变体。在某些实施方式中，HCVR/LCVR氨基酸序列对选自由以下组成的组：SEQ ID NO:2/10；18/10；26/10；34/10；42/10；50/10；58/10；66/10；74/10；82/90；98/90；和106/90。

本发明还提供了使用包括重链CDR1(HCDR1)的抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述HCDR1包括选自表A中列出的HCDR1氨基酸序列中的任一个的氨基酸序列；或其变体。

本发明还提供了使用包括重链CDR2(HCDR2)的抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述HCDR2包括选自表A中列出的HCDR2氨基酸序列中的任一个的氨基酸序列；或其变体。

本发明还提供了使用包括重链CDR3(HCDR3)的抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述HCDR3包括选自表A中列出的HCDR3氨基酸序列中的任一个的氨基酸序列；或其变体。

本发明还提供了使用包括轻链CDR1(LCDR1)的抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述LCDR1包括选自表A中列出的LCDR1氨基酸序列中的任一个的氨基酸序列；或其变体。

本发明还提供了使用包括轻链CDR2(LCDR2)的抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述LCDR2包括选自表A中列出的LCDR2氨基酸序列中的任一个的氨基酸序列；或其变体。

本发明还提供了使用包括轻链CDR3(LCDR3)的抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述LCDR3包括选自表A中列出的LCDR3氨基酸序列中的任一个的氨基酸序列；或其变体。

本发明还提供了使用抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述抗体和其抗原结合片段包括HCDR3和LCDR3氨基酸序列对(HCDR3/LCDR3)，所述氨基酸序列对包括配对的表A中列出的HCDR3氨基酸序列中的任一个或其变体与表A中列出的LCDR3氨基酸序列中的任一个或其变体。

本发明还提供了使用抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述抗体和其抗原结合片段包括一组六个CDR(即，HCVR的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCVR的LCDR1、LCDR2和LCDR3)，所述CDR包含在表A中列出的任何示例性抗LEPR抗体中；或其变体。在某些实施方式中，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列集选自由以下组成的组：SEQID NO:4/6/8/12/14/16；20/22/24/12/14/16；28/30/32/12/14/16；36/38/40/12/14/16；44/46/48/12/14/16；52/54/56/12/14/16；60/62/64/12/14/16；68/70/72/12/14/16；76/78/80/12/14/16；84/86/88/92/94/96；100/102/104/92/94/96；和108/110/112/92/94/96。

在相关的实施方式中，本发明提供了使用抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述抗体和其抗原结合片段包括一组六个CDR(即，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3)，所述CDR包含在由表A中列出的任何示例性抗体和片段定义的HCVR/LCVR氨基酸序列对中；或其变体。例如，本发明包括使用抗LEPR激动剂抗体和其抗原结合片段的方法，所述抗体和其抗原结合片段包括HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列集，所述氨基酸序列集包含在选自由以下组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对中：SEQ ID NO:2/10；18/10；26/10；34/10；42/10；50/10；58/10；66/10；74/10；82/90；98/90和106/90。用于鉴定HCVR和LCVR氨基酸序列内的CDR的方法和技术是本领域熟知的，并且可以用于鉴定本文公开的特定HCVR和/或LCVR氨基酸序列内的CDR。可以用于鉴定CDR的边界的示例性规约包括例如，Kabat定义、Chothia定义和AbM定义(本文所论述)。

本发明包括使用抗体或抗原结合片段的方法，所述抗体或抗原结合片段与本文具体所示的抗体或片段(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)与相同的表位结合。参见国际专利申请公开第WO2017/66204号。

本发明还包括使用抗体和抗原结合片段的方法，所述抗体和抗原结合片段与本文具体所示的抗体或抗原结合片段(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)竞争与LEPR结合。如本文所使用的，术语“竞争物”是指与抗原(例如，LEPR)结合并抑制或阻断另一种抗体或抗原结合片段与抗原结合的抗体或抗原结合片段。所述术语还包括两个朝向上的两种抗体或抗原结合片段之间的竞争，例如，结合并且阻断第二抗体结合的第一抗体，反之亦然。在某些实施方式中，第一抗体或片段和第二抗体或片段可以与相同的表位结合。可替代地，第一和第二抗体或片段可以与不同但例如重叠的表位片段结合，其中一个的结合例如通过空间位阻抑制或阻断第二抗体或片段的结合。抗体或片段之间的竞争可以通过本领域已知的方法来测量，例如通过实时无标记生物层干涉法测定来测量。而且，可以在Octet RED384生物传感器(颇尔富迪生物公司(PallForteBio Corp.))上使用实时无标记生物层干涉法测定来测定抗LEPR抗体或片段之间的结合竞争。参见国际专利申请公开第WO2017/66204号。

包括Fc变体的抗LEPR抗体

根据本发明的某些实施方式，提供了使用抗LEPR抗体和抗原结合片段的方法，其中所述抗体或片段包括Fc结构域，所述Fc结构域包括例如在与中性pH相比的酸性pH下增强或减弱与FcRn受体的结合的一个或多个突变。例如，本发明包括在Fc结构域的C_H2区或C_H3区中包括突变的抗LEPR抗体，其中一个或多个突变增加Fc结构域在酸性环境中(例如，在pH范围为约5.5至约6.0的核内体中)对FcRn的亲和力。当施用于动物时，此类突变可以导致抗体的血清半衰期增加。此类Fc修饰的非限制性实例包括，例如，位置250(例如，E或Q)处的修饰；250和428(例如，L或F)处的修饰；252(例如，L/Y/F/W或T)、254(例如，S或T)和256(例如，S/R/Q/E/D或T)处的修饰；或位置428和433(例如，H/L/R/S/P/Q或K)和/或434(例如，H/F或Y)处的修饰；或位置250和/或428处的修饰；或位置307或308(例如，308F、V308F)和434处的修饰。在一个实施方式中，修饰包括428L(例如，M428L)和434S(例如，N434S)修饰；428L、259I(例如，V259I)和308F(例如，V308F)修饰；433K(例如，H433K)和434(例如，434Y)修饰；252、254和256(例如，252Y、254T和256E)修饰；250Q和428L修饰(例如，T250Q和M428L)；以及307和/或308修饰(例如，308F或308P)。

例如，本发明包括使用包括Fc结构域的抗LEPR抗体和抗原结合片段的方法，所述Fc结构域包括选自由以下组成的组的一个或多个突变对或突变组：250Q和248L(例如，T250Q和M248L)；252Y、254T和256E(例如，M252Y、S254T和T256E)；428L和434S(例如，M428L和N434S)；以及433K和434F(例如，H433K和N434F)。在本发明的范围内设想了前述Fc结构域突变的所有可能的组合和本文公开的抗体可变结构域内的其它突变。

可用于本发明方法的抗LEPR抗体和抗原结合片段可包括具有降低的效应子功能的经修饰的Fc结构域。如本文所使用的，“具有降低的效应子功能的经修饰的Fc结构域”是指已经相对于野生型天然存在的Fc结构域被修饰、突变、截短等的免疫球蛋白的任何Fc部分，使得包括经修饰的Fc的分子相对于包括野生型天然存在形式的Fc部分的比较分子，展现出选自由以下组成的组的至少一种效应的严重性或程度的降低：细胞杀伤(例如，ADCC和/或CDC)、补体激活、吞噬作用和调理作用。在某些实施方式中，“具有降低的效应子功能的经修饰的Fc结构域”是与Fc受体(例如，FcγR)结合减少或减弱的Fc结构域。

在本发明的某些实施方式中，经修饰的Fc结构域是在铰链区包括取代的变体IgG1Fc或变体IgG4 Fc。例如，用于本发明的上下文中的经修饰的Fc可包括变体IgG1 Fc，其中IgG1 Fc铰链区的至少一个氨基酸被来自IgG2 Fc铰链区的对应氨基酸替代。可替代地，用于本发明的上下文中的经修饰的Fc可包括变体IgG4 Fc，其中IgG4 Fc铰链区的至少一个氨基酸被来自IgG2 Fc铰链区的对应氨基酸替代。美国专利申请公开第2014/0243504号中列出了可用于本发明上下文的非限制性的示例性经修饰的Fc区。

可用于本发明上下文中的其它经修饰的Fc结构域以及Fc修饰包括如以下中所示的修饰中的任一者：US 2014/0171623；US 8,697,396；US 2014/0134162；WO 2014/043361。构建包括本文所述的经修饰的Fc结构域的抗体或其它抗原结合融合蛋白的方法是本领域已知的。

人抗体的制备

可用于本发明方法的抗LEPR抗体和抗原结合片段可以是完全人抗体。产生单克隆抗体，包括全人单克隆抗体的方法是本领域已知的。任何此类已知方法可以在本发明的上下文中用于制备与人LEPR特异性结合的人抗体。

例如，使用VELOCIMMUNE^TM技术，或任何其它类似的用于产生完全人单克隆抗体的已知方法，最初分离出具有人可变区和小鼠恒定区的LEPR高亲和力嵌合抗体。如下文实验部分，对抗体进行表征并针对期望特性进行选择，所述特性包括亲和力、配体阻断活性、选择性、表位等。如果需要，用期望人恒定区，例如野生型或经修饰的IgG1或IgG4替代小鼠恒定区，以产生完全人抗LEPR抗体。虽然所选择的恒定区可以根据具体用途而变化，但高亲和力抗原结合和靶特异性特性存在于可变区中。在某些情况下，完全人抗LEPR抗体直接从抗原阳性B细胞中分离。

参见国际专利申请公开第WO2017/066204号。

组合和药物组合物

本发明提供了使用包含抗LEPR抗体和抗原结合片段以及一种或多种成分的组合物的方法。

为了制备抗LEPR抗体和其抗原结合片段(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)的药物组合物，将抗体或片段与药学上可接受的载体或赋形剂混合。参见例如，《雷明顿药物科学(Remington'sPharmaceutical Sciences)》和《美国药典：国家处方集(U.S.Pharmacopeia:NationalFormulary)》,宾夕法尼亚州伊斯顿的麦克出版公司(Mack Publishing Company,Easton,Pa.)(1984)；Hardman等人(2001),《古德曼和吉尔曼治疗学的药理学基础(Goodman andGilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics)》,纽约州纽约市的麦格劳希尔出版公司(McGraw-Hill,New York,N.Y.)；Gennaro(2000),《雷明顿：药学的科学与实践(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)》,纽约州纽约市的利平科特·威廉斯·威尔金斯出版公司(Lippincott,Williams,and Wilkins,New York,N.Y.)；Avis等人(编辑)(1993),《药物剂型：胃肠外药物(Pharmaceutical Dosage Forms:ParenteralMedications)》,纽约马塞尔德克尔公司(Marcel Dekker,NY)；Lieberman等人(编辑)(1990),《药物剂型：片剂(Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets)》,纽约马塞尔德克尔公司；Lieberman等人(编辑)(1990),《药物剂型：分散系统(Pharmaceutical DosageForms:Disperse Systems)》,纽约马塞尔德克尔公司；Weiner和Kotkoskie(2000)《赋形剂毒性和安全性(Excipient Toxicity and Safety)》,纽约州纽约市的马塞尔德克尔公司。在本发明的一实施方式中，药物组合物是无菌的。此类组合物的使用是本发明的一部分。

用于本发明的方法的药物组合物包含药学上可接受的载剂、稀释剂、赋形剂和/或稳定剂，例如，水、缓冲剂、稳定剂、防腐剂、等渗剂、非离子型去污剂、抗氧化剂和/或其它杂添加剂。

本发明的范围包括使用干燥的(例如，冻干的)组合物的方法，所述组合物包含抗LEPR抗原结合蛋白，例如，抗体或其抗原结合片段(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)或其药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的载体但基本上不含水。例如，这种干燥的组合物可以例如用水重构，并且然后施用于患者。

在本发明的另外的实施方式中，将另外的治疗剂与本文公开的抗LEPR抗体或其抗原结合片段(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)联合施用于患者，所述治疗剂按照《医生桌上参考手册(Physicians'Desk Reference)》2003(汤姆森医疗保健(Thomson Healthcare)；第57版(2002年11月1日))施用于患者。

抗体或其抗原结合片段或其组合物的施用方式可以变化。施用途径包括经口服、直肠、经粘膜、肠道、肠胃外；肌内、皮下、真皮内、髓内、鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内、眼内、吸入、吹入、局部、皮肤、透皮或动脉内。本发明的方法包括通过任何此类途径向患者施用LEPR激动剂的用途。

本发明提供了使用方法，包括向患者施用抗LEPR激动剂抗体或其抗原结合片段(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)的步骤，包括将抗体或片段或药物组合物或其组合引入患者体内。例如，在本发明的一实施方式中，所述方法包括例如，用注射器的针头刺穿患者的身体，并将抗原结合蛋白或药物组合物或其组合注射到患者体内，例如，注射到患者的静脉、动脉、肿瘤、肌肉组织或皮下组织中。

本发明包括使用包括抗LEPR激动剂抗体或其抗原结合片段(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)与一种或多种另外的治疗剂的组合的方法。LEPR激动剂(例如，抗LEPR激动剂抗体和抗原结合片段)和另外的治疗剂可以在单一组合物中或在分开的组合物中。例如，在本发明的一实施方式中，另外的治疗剂是人瘦素、美曲普汀、PCSK9抑制剂(例如，抗PCSK9抗体，例如阿利库单抗、依洛尤单抗、伯考赛珠单抗、洛迪赛珠单抗或雷泮赛珠单抗)、HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，阿托伐他汀、瑞舒伐他汀、西立伐他汀、匹伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀、洛伐他汀或普伐他汀)、依折麦布、胰岛素、胰岛素变体、胰岛素促分泌素、二甲双胍、磺酰脲、钠葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂(例如，达格列净、卡格列净或恩格列净)、MC₄受体的选择性激动剂(例如，赛美拉肽)、GLP-1激动剂或类似物(例如，extendin-4、艾塞那肽、利拉鲁肽、利西拉肽、阿必鲁肽或度拉鲁肽)、胰高血糖素(GCG)抑制剂(例如，抗GCG抗体)、胰高血糖素受体(GCGR)抑制剂(例如，抗GCGR抗体、小分子GCGR拮抗剂、GCGR特异性反义寡核苷酸)、抗GCGR适体(例如，镜像异构体(spiegelmer))、血管生成素样蛋白(ANGPTL)抑制剂(例如，抗ANGPTL3抗体、抗ANGPTL4抗体、抗ANGPTL8抗体)、苯丁胺、奥利司他、托吡酯、安非他酮、托吡酯和苯丁胺、安非他酮和纳曲酮、安非他酮和唑尼沙胺、普兰林肽和美曲普汀、洛卡色林、西替司他、特索芬辛或韦利贝特。在本发明的一实施方式中，另外的治疗剂是镇痛药，例如非甾体抗炎药(NSAID)、阿司匹林、对乙酰氨基酚、布洛芬、萘普生、皮质类固醇、肌肉松弛剂、COX2抑制剂、止痛药、非阿片类药物、抗抑郁药、抗焦虑药、对乙酰氨基酚、阿片类药物或双氯芬酸(diclofinac)。

术语“与……联合”指示可以将本发明的组分、抗LEPR激动剂抗体或其抗原结合片段连同如美曲普汀等另一种药剂一起调配成单个组合物，例如以用于同时递送或单独地调配成两种或两种以上的组合物(例如，包括用于同时递送的每种组分的试剂盒)。每种组分可以在与施用另一种组分不同的时间施用于患者；例如，每次施用可以在给定的时间段内以一定的间隔非同时(例如，分别或依次)给予。此外，不同的组分可以通过相同或不同的途径施用于患者。

治疗和施用

LEPR激动剂(例如，本文所示的抗LEPR激动剂抗体和抗原结合片段)可用于快速减轻患者的疼痛和/或减少止痛药如阿片类药物的使用，例如，所述疼痛和/或使用与瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状(例如，脂肪代谢障碍或肥胖症)有关。这种疼痛的减轻可以引起生活质量的改善以及包括阿片类药物在内的止痛药的使用减少。

本发明包括用于治疗或预防患者的疼痛的方法，所述患者例如患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状，例如脂肪代谢障碍或肥胖症的患者，所述方法包括向患者施用有效量的LEPR激动剂，如抗LEPR激动剂抗体或其抗原结合片段(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)。

施用于患者的LEPR激动剂的有效量或剂量可以根据患者的年龄和体型、目标疾病、病情、施用途径等而变化。可以根据体重或体表面积计算优选的剂量。在成年患者中，以约0.01mg/kg体重至约20mg/kg体重的单剂量静脉内施用LEPR激动剂(例如，抗LEPR激动剂抗体或抗原结合片段)可能是有利的。根据病症的严重程度，可以调整治疗的频率和持续时间。可以凭经验确定施用LEPR激动剂的有效剂量和时间表；例如，可以通过定期评估来监测患者进展，并相应地调整剂量。此外，可以使用本领域众所周知的方法进行剂量的种间缩放(例如，Mordenti等人,“五种治疗性蛋白质的清除率和分布数据量的种间缩放(Interspecies Scaling of Clearance and Volume of Distribution Data for FiveTherapeutic Proteins)”,《药学研究(Pharmaceutical Res.)》8:1351-1359(1991))。

在本发明的一实施方式中，在患者中观察到的疼痛、焦虑和/或抑郁的减轻发生在LEPR激动剂(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)的第一有效剂量的少于1天、1天、2天、3天、4天或5天(或更短)内，例如约5mg/ml的静脉内施用和此后300mg的皮下施用。

本发明还提供了用于通过施用有效量的LEPR激动剂如REGN4461来减少患者的以下各项或维持对患者的以下各项的减少的方法：止痛药(例如，阿片类药物，例如，羟考酮或加巴喷丁)的使用、抗焦虑药的使用、抗抑郁药的使用、镇痛寻求行为、痛觉缺失的按需使用、痛觉缺失过量和/或由于滥用痛觉缺失导致的死亡，所述患者例如患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状的患者。例如，在本发明的一实施方式中，在非常接近LEPR激动剂治疗开始的时间点；例如，同时或在1-2天内，患者停止或治疗医师指示停止止痛药(例如，阿片类药物，例如，羟考酮或加巴喷丁)的常规使用。在本发明的另一实施方式中，在非常接近LEPR激动剂治疗开始的时间点；例如，同时或在1-2天内，患者减少止痛药(例如，阿片类药物，例如，羟考酮或加巴喷丁)的使用(例如，减少剂量和/或给药频率)或治疗医师指示减少止痛药的使用(例如，减少剂量和/或给药频率)。在这种情况下，其中止痛药(例如，阿片类药物，例如，羟考酮或加巴喷丁)的使用被减少或停止，或被指示减少或停止，这种减少或停止被维持(例如，持续6个月或1年或11/2年或2年或更长时间)，但当需要治疗特别疼痛的医学问题(例如，腹部、肝或胰腺疼痛)时，止痛药的偶发性使用(例如1天、2天或3天或更少；或1-3天)除外。当止痛药(例如，阿片类药物，例如，羟考酮或加巴喷丁)的使用减少时(或医师如此指示)，随着时间的推移，可能会出现进一步减少(例如，最终导致停药)或指示进一步减少。例如，在本发明的一实施方式中，止痛药是阿片类药物，如羟考酮，但是允许患者根据需要继续使用非阿片类止痛药(例如，扑热息痛)。

本发明进一步提供了用于通过施用有效量的LEPR激动剂(例如，REGN4461)来减少例如患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状(例如，脂肪代谢障碍如PLD)的患者由于疼痛(例如，由于胰腺炎)、腹痛、胰腺炎、焦虑和/或抑郁(例如，与所述病状相关)而住院治疗、急诊室使用或紧急医疗治疗或医生出诊的需要或医疗护理的需要的方法。

本发明还提供了用于治疗或预防中枢性疼痛或中枢疼痛综合征(例如，慢性中枢性疼痛)的方法。中枢疼痛综合征是一种由中枢神经系统(CNS)损伤或功能障碍引起的神经系统病状，所述CNS包括大脑、脑干和脊髓。这种综合征可能由中风、多发性硬化、肿瘤、癫痫、脑或脊髓损伤或帕金氏森病(Parkinson's disease)引起。与这种综合征相关的疼痛的特征在个体之间差异很大，部分原因是潜在原因的多样性。中枢疼痛综合征可能影响身体的大部分，或者可能更局限于特定区域，如手或脚。疼痛的程度通常与CNS损伤或损害的原因有关。疼痛可以是持续的，强度可以是中度到重度，并且通常由于触摸、运动、情绪和温度变化(例如，寒冷温度)而变得更严重。个体经历一种或多种类型的痛觉，最突出的是烧灼感。伴随着烧灼感的可能是“发麻”的感觉、压迫、撕裂或疼痛；和短暂的、无法忍受的突发剧痛，类似于牙齿探针在暴露的神经上引起的疼痛。个体在受疼痛影响的区域可能会出现麻木。烧灼感和触觉丧失通常在身体的远端部位如脚或手最严重。中枢疼痛综合征通常在引起性损伤或损害后不久开始，但可能会延迟数月甚至数年，特别是如果其与中风后疼痛有关。因此，本发明包括用于治疗或预防患者(例如，患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状(例如，脂肪代谢障碍或肥胖症)的患者)的中枢性疼痛、慢性中枢性疼痛、涉及中枢神经系统对疼痛的集中化和/或超敏感化的疼痛形式或中枢性疼痛综合征的方法，所述方法包括向患者施用有效量的抗LEPR激动剂抗体或其抗原结合片段(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)。

在本发明的一实施方式中，LEPR激动剂(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)的有效量使得所述激动剂的血液浓度为约100mg/l(或更高)。

在本发明的一实施方式中，LEPR激动剂(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)的有效量是约5mg/kg的一个或多个静脉内(IV)剂量和此后每周一次约250mg-300mg的一个或多个皮下(SC)剂量(例如，其中在第1天给予一个IV剂量，在第5天开始SC给药，并且此后每周继续)。

瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状包括，例如，单基因肥胖症、肥胖症、甲状腺功能受损、早发性肥胖症、血脂异常、性腺机能减退、生殖功能障碍、食欲过盛和饱腹感受损、免疫功能受损(例如，CD4⁺计数)、代谢功能障碍、无月经或月经不规律、代谢综合征、饮食诱导的食物渴求、功能性下丘脑性闭经、1型糖尿病、2型糖尿病、胰岛素抵抗、包括由于胰岛素受体突变引起的严重胰岛素抵抗在内的严重胰岛素抵抗、不是由胰岛素受体突变引起的严重胰岛素抵抗、由下游信号传导通路中的突变引起的或由其它原因诱导的严重胰岛素抵抗、非酒精性和酒精性脂肪肝病、阿尔茨海默病、瘦素缺乏症、瘦素抵抗、脂肪代谢障碍、矮怪病/多诺霍综合征和罗伯森-门登霍尔综合征。

另一种瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状包括拥有中和抗瘦素自身抗体。

另一种瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状包括低瘦素血症、女性不孕症、闭经、激素周期异常、免疫功能受损或甲状腺功能减退。

脂肪代谢障碍包括例如，部分性脂肪代谢障碍(PLD)、先天性全身性脂肪代谢障碍、获得性全身性脂肪代谢障碍、家族性部分性脂肪代谢障碍、获得性部分性脂肪代谢障碍、离心性腹部脂肪代谢障碍、环状脂肪萎缩、局部脂肪代谢障碍和HIV相关的脂肪代谢障碍。

在本发明的一实施方式中，患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状的患者具有以LEPR突变体为特征的基因型，所述突变体在瘦素存在的情况下不展现信号传导(信号传导缺陷型LEPR突变体)。示例性信号传导缺陷型LEPR突变是LEPR-A409X，例如，LEPR-A409E(Farooqi等人,“瘦素受体先天性缺乏症的临床和分子遗传学谱(Clinical and Molecular GeneticSpectrum of Congenital Deficiency of the Leptin Receptor)”,《新英格兰医学期刊(NEngl J Med.)》356(3):237-247(2007))。在本发明的一实施方式中，患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状的患者具有以LEPR突变体为特征的基因型，所述突变体在瘦素存在的情况下展现出信号传导减少(与野生型LEPR相比)，其可被称为“信号传导受损的LEPR突变体”。示例性信号传导受损的LEPR突变是LEPR-P316X，例如，LEPR-P316T(Mazen等人,“两名患有严重早发性肥胖症的埃及近亲中瘦素受体基因(P316T)新型错义突变的纯合性(Homozygosity for a novel missense mutation in the leptin receptor gene(P316T)in two Egyptian cousins with severe early onset obesity)”,《分子遗传学与代谢(Mol Genet Metab)》102(4):461-464(2011))。在本发明的一实施方式中，LEPR突变是LEPR-L372X，例如，LEPR-L372A。

在本发明的一实施方式中，患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状，如脂肪代谢障碍(例如，PLD)的患者所遭受的疼痛为急性疼痛、慢性疼痛、腹痛、肝痛、与获得性全身性脂膜炎种类(1型)的脂肪代谢障碍相关的疼痛性皮下结节或斑丘疹性病变、与脂肪代谢障碍患者身体部位的过量脂肪沉积累积相关(例如，背部、肩部、手臂和/或颈部)的局部疼痛。例如，在一些患有脂肪代谢障碍的患者中，疼痛的“水牛峰”或颈部的背颈脂肪垫可能是疼痛的来源(例如，在颈部以及背部和肩部)。在本发明的一实施方式中，疼痛的来源是神经病变、关节炎、慢性背痛、纤维肌痛或肌病。因此，本发明包括用于治疗或预防任何此类疼痛，例如，如本文所示肌病疼痛(例如，在患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状的患者中)的方法。

在本发明的一实施方式中，腹痛是右季胁痛。

在本发明的一实施方式中，患有腹部和/或背部疼痛(例如，辐射到背部的腹部疼痛或反之亦然)的患者患有水肿性胰腺、坏死性胰腺组织、回肠炎、胃肠炎、肾部疼痛(左侧和/或右侧)、胰腺炎(例如，急性胰腺炎)、胆源性疼痛、嗜酸性粒细胞增多症、乳糜微粒血症、急性胆囊炎、肝脏炎症、肝硬化、肝衰竭、消化不良、肝痛、肝炎、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和/或肝脂肪变性。

在本发明的一实施方式中，接受根据本发明的LEPR激动剂(例如，用于减轻疼痛)的患者还表现出：

●肝脂肪变性减少(例如，通过磁共振成像质子密度脂肪分数(PDFF)估计的)；

●血液中肝酶水平降低；

●肝脏大小减小(例如，通过身体检查估计的)，例如，从最上面的右半膈到右叶的下尖的颅尾方向测量的纵向直径；

●肝硬度降低(例如，通过肝脏弹性成像测量)；和/或

●脾大小减小。

通过向患者施用有效量的LEPR激动剂在患者(例如，患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状的患者)中实现任何这种减少的方法是本发明的一部分。

“受试者”的“患者”是哺乳动物(例如，猴、非人灵长类动物、小鼠、大鼠或兔)，优选地人。在本发明的一实施方式中，患者患有脂肪代谢障碍、部分性脂肪代谢障碍和/或肥胖症。在本发明的一实施方式中，患者或受试者具有下列特性或其病史中的任何一者或多者：

●阳性抗GAD65滴度；

●生长激素分泌异常；

●约3.2ng/ml的瘦素血液水平；

●肥胖；

●肾上腺功能初现；

●丙氨酸氨基转移酶(ALT)血清水平为约80IU/升-120IU/升；

●天冬氨酸氨基转移酶(AST)血清水平为约80IU/升-160IU/升；

●血糖为约200mg/dl-500(200、300、400或500)mg/dl；

●生长迟缓；

●青春期生长突增延迟；

●血脂异常；

●HbA1c升高；

●雌二醇水平低于约20pg/ml(例如，在雌性患者中)；

●卵泡刺激激素(FSH)水平为约1mU/ml-2mU/ml(例如，在雌性患者中)；

●HbA1c百分比为约9-10；

●肝脂肪含量(质子密度脂肪分数(PDFF))为约30％(例如，如通过Dixon方法所测量的(Dixon,“简单质子光谱成像(Simple proton spectroscopic imaging)”《放射学(Radiology)》1984；153:189-194)；

●肝肿大；

●高胆固醇血症；

●高血糖症；

●高胰岛素血症；

●食欲过盛；

●高甘油三酯血症(例如，约1200mg/dl的血液水平)；

●胰岛素抵抗；

●使用胰岛素，例如，以约400-1600(400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500或1600)单位的日剂量；

●乳房发育不足；

●骨矿物质含量低；

●骨矿物质密度低(或骨质量低)；

●低瘦体重；

●促黄体激素(LH)水平为约0.1pg/ml(例如，在雌性患者中)；

●针对美曲普汀的中和抗体；

●非酒精性脂肪肝炎(NASH)；

●肥胖症；

●胰腺炎；

●血浆置换；

●拥有抗瘦素或抗美曲普汀中和抗体；

●睾酮水平低于约0.05ng/ml(例如，在雌性患者中)；

●使用加巴喷丁、羟考酮、文拉法辛、丁螺环酮、扑热息痛、克他命、酮咯酸、劳拉西泮和/或吗啡；和/或

●使用美曲普汀和/或赛美拉肽或停止这种使用；

止痛药

止痛药是用来减轻疼痛的药剂。当用LEPR激动剂如REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2治疗时，患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状，如脂肪代谢障碍的患者可以停止或减少止痛药，例如阿片类药物和非阿片类药物，如CGRP抑制剂、COX-2抑制剂、水杨酸盐、对乙酰氨基酚(扑热息痛)和NSAID的使用。

在本发明的一实施方式中，患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状的患者所遭受的疼痛是“慢性的”，并且已经通过长期使用止痛药如阿片类药物进行了治疗。慢性疼痛或疗法(如止痛药)的长期使用是指复发或持续的疼痛或疗法(例如，止痛药)使用情况持续较长时间段(例如，一年或更长时间)，并且没有确定的终点。

偶发性疼痛或疗法(如止痛药)的偶发性使用是指疼痛发生或治疗性(例如，止痛药)使用发生在持续一天至几天并具有预期的明确终点的单一离散事件中。患者可能遭受多次疼痛发作，并在给定的时间段内进行多次治疗性(例如，止痛药)使用。

在本发明的一实施方式中，疼痛是局部疼痛、局部腹痛、全身性疼痛或全身性腹痛。全身性腹痛是指患者感到超过一半的腹部疼痛。

阿片类药物寻求行为和阿片类药物的使用与例如脂肪代谢障碍病状引起的疼痛有关。使用阿片类药物会导致过度使用、过量和死亡。患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状的患者疼痛的减轻可引起这种阿片类药物寻求行为和使用的减少，从而使得用药过量和死亡减少。因此，本发明包括用于减少阿片类药物寻求行为和/或阿片类药物的使用、阿片类药物的过度使用、阿片类药物的过量使用、阿片类药物成瘾和/或由阿片类药物使用引起的死亡，包括治疗或预防患者(例如，患有脂肪代谢障碍或肥胖症)的疼痛的方法，所述方法包括向患者施用有效量的LEPR激动剂(例如，REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)。

阿片类药物的化学结构可细分为基于以下的化学结构：(i)4,5-环氧吗啡烷环，如吗啡可待因、羟吗啡酮、羟考酮、丁丙诺啡(buprenorphine)、氢吗啡酮和氢可酮；(ii)苯基哌啶，如阿芬太尼、芬太尼和舒芬太尼；以及(iii)二苯基庚胺，如美沙酮参见例如，Drewes,《英国临床药理学杂志(Br.J.Clin.Pharmacol.)》75(1):60-78(2012)。尽管这些化合物在化学结构、物理化学性质和药代动力学方面不同，但它们具有一个共同的特征，即它们与作为主要靶标的mu(μ)阿片类药物受体相互作用。在本发明的一实施方式中，阿片类药物为阿芬太尼、可待因、罂粟杆浓缩物、右马拉胺、右旋丙氧芬、二氢可待因、二氢唉托啡、地芬诺酯、乙基吗啡、埃托啡、芬太尼、海洛因、氢可酮、氢吗啡酮、凯托米酮、左啡诺、美沙酮、吗啡、吗啡-n-氧化物、尼可吗啡、去甲可待因、鸦片、奥列巴文、羟考酮、羟吗啡酮、哌替啶、哌替啶中间体、福尔可定、哌腈米特、瑞芬太尼、舒芬太尼、蒂巴因或替利定。

降钙素基因相关肽(CGRP)抑制剂阻断CGRP的作用，CGRP是一种在供应头部和颈部的感觉神经中高度流行的小蛋白。CGRP与疼痛传递有关，并且在偏头痛发作时水平会升高。它也可能在诱发偏头痛发作中发挥致病作用。CGRP抑制剂用于治疗偏头痛。两种类型的CGRP抑制剂包括单克隆抗体(例如，依普奈珠单抗、伽奈珠单抗、厄瑞努单抗和瑞玛奈珠单抗)和CGRP受体拮抗剂(吉泮)。吉泮是阻断CGRP受体并且对缓解和预防偏头痛均有效的小分子药物。吉泮包括乌布吉泮和瑞美吉泮硫酸盐。

环氧酶-2(COX-2)抑制剂是一种可特异性阻断COX-2酶的非甾体抗炎药(NSAID)。COX-2抑制剂包括伐地考昔和塞来昔布。

水杨酸盐是水杨酸的盐或酯。水杨酸盐天然存在于一些植物中(如白柳树皮和冬青叶)，并且被认为可以保护植物免受虫害和疾病。阿司匹林是水杨酸的衍生物，并且也被称为乙酰水杨酸。水杨酸盐包括水杨酸镁、阿司匹林、水杨酸胆碱和水杨酸镁、二氟尼柳、双水杨酸酯和阿司匹林和柠檬酸和碳酸氢钠。

非甾体抗炎药(通常缩写为NSAID)是一组缓解疼痛和发热并减少炎症的药物。NSAID包括甲氯芬那酸盐、酮洛芬、非诺洛芬、托美丁、双氯芬酸和米索前列醇、吡罗昔康、吲哚美辛、双氯芬酸、依托度酸、布洛芬、氟比洛芬、舒林酸、酮咯酸、萘普生、二氟尼柳、法莫替丁和布洛芬、美洛昔康、奥沙普嗪、埃索美拉唑和萘普生、萘丁美酮、甲芬那酸、甲芬那酸和苯基丁氮酮。其它止痛药包括对乙酰氨基酚。

抗抑郁药

当用LEPR激动剂(如REGN4461、H4H16650P2、H4H16679P2、H4H17319P2、H4H17321P2、H4H18417P2、H4H18438P2、H4H18445P2、H4H18446P2、H4H18449P2、H4H18482P2、H4H18487P2和/或H4H18492P2)治疗时，患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状，如脂肪代谢障碍的患者可以停止或减少使用抗抑郁药，例如SSRI、SNRI、非典型抗抑郁药、TCA和MAOI。

选择性血清素再摄取抑制剂(SSRI)抑制血清素重吸收回神经细胞(称为再摄取)。这种机制导致大脑中活性血清素水平更高。SSRI包括氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、西酞普兰和依他普仑。

血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)是一类主要用于治疗抑郁症的药物，尽管某些SNRI也表明用于治疗与糖尿病神经病变和纤维肌痛相关的焦虑和慢性疼痛。SNRI的工作原理是阻止血清素和去甲肾上腺素重新吸收(或再摄取)到释放它们的神经细胞中，从而增加大脑中活性神经递质的水平。SNRI药物的实例包括度洛西汀、文拉法辛、地文拉法辛和左旋体米那普仑。

非典型抗抑郁药不完全符合其它抗抑郁药类别中的任一者。这些抗抑郁药包括例如，曲唑酮、米氮平、沃替西汀、维拉佐酮和安非他酮。

三环抗抑郁药(TCA)的特征在于核心三环化学结构。通常，个体TCA在其中心环和胺链上的基中的碳或氮的取代不同。TCA包括丙咪嗪、去甲替林、阿米替林、多虑平和地昔帕明。

单胺氧化酶抑制剂(MAOI)通过影响用于脑细胞之间通讯的化学信使(神经递质)来缓解抑郁。一种称为单胺氧化酶的酶参与清除大脑中的神经递质去甲肾上腺素、血清素和多巴胺。MAOI可阻止这种情况的发生，这使得更多的这些大脑化学物质能够影响受到抑郁症影响的细胞和回路的变化。MAOI包括司来吉兰、强内心百乐明、苯乙肼和异卡波肼。

抗焦虑药

抗焦虑药是作用于中枢神经系统以缓解焦虑、帮助睡眠或具有镇静作用的药物。一些苯二氮卓类药物和其衍生物可用于治疗焦虑。苯二氮卓类药物包括阿普唑仑、氯硝西泮、地西泮和劳拉西泮、艾司唑仑、氟西泮、夸西泮、替马西泮、三唑仑和阿普唑仑。所有苯二氮卓类药物都被认为是通过增强γ-氨基丁酸(GABA)的抑制作用而起作用的。其它被认为对缓解焦虑有效的药物类别包括SSRI、SNRI、三环抗抑郁药和丁螺环酮。可用于治疗焦虑的具有镇静效果的其它药物类别包括第一代抗组胺药、褪黑素受体的激动剂、麻醉剂、艾司佐匹克隆、扎来普隆、唑吡坦、佐匹克隆和若干其它药物。

实施例

提出以下实施例，以向本领域的普通技术人员提供关于如何制备和使用本发明的方法和组合物的完整公开和描述，并且不旨在限制发明人认为是其发明的范围。

实施例1：LEPR激动剂mAb治疗与患有部分性脂肪代谢障碍的患者的疼痛缓解、体重减轻、血清甘油三酯和肝脂肪变性减轻相关。

此实施例总结了患有部分性脂肪代谢障碍(PLD)的患者的情况。所述患者是一名羟考酮常规按需(PRN)使用者，在开始REGN4461治疗后停用了所述药物。PRN羟考酮使用(在REGN4461开始之前)为至少2至3个剂量，每周至少3天，持续至少12个月。但是对于周期性疼痛发作，成功地停止了常规使用羟考酮。此外，在REGN4461治疗前两天，用于治疗疼痛的加巴喷丁的剂量减少。患者设法在6天后减少加巴喷丁剂量，并在第7天再次减少剂量，并维持这种减少。图7所示为患者阿片类药物使用的简要总结。

寻求用LEPR激动剂REGN4461对患有非典型部分性脂肪代谢障碍和复杂病程的患者进行体恤治疗。简而言之，此患者患有非典型表现的部分性脂肪代谢障碍。非典型特征包括1型糖尿病、伴有4期纤维化的早发性严重脂肪肝炎以及后来出现的另外的自身免疫特征的存在。13岁时，作为临床研究方案(NCT01679197)的一部分，患者接受了为期12个月的美曲普汀。当时没有发现严重不良事件。如先前所报告的，由于感知到临床益处，患者在扩展方案(NCT02654977)中继续使用美曲普汀。在大约18个月的疗法中，患者的临床状况急剧恶化，并且进一步测试证实存在针对美曲普汀的中和抗体。无法纠正代谢并发症和患者的严重疾病使得需要寻找一种替代性治疗策略，这种策略有可能不依赖于瘦素的作用而发挥其作用。此研究中首次尝试使用了赛美拉肽(第一种MC4R激动剂)，但没有产生任何代谢益处。

由于患者的病情持续恶化，并且患者因胰腺炎和疼痛(部分原因是潜在的严重难治性高甘油三酯血症和大面积肝肿大)而反复住院，因此在研究者发起的IND下寻求使用LEPR激动剂mAb REGN4461进行体恤治疗。

REGN4461包括以下所示的重链和轻链免疫球蛋白：

REGN4461重链

REGN4461轻链

患者的初始血液化学值如下表1-1所示。

表1-1：初始评估周期的实验室测试

患者在第1周的第1天接受了REGN4461的首次静脉输注，并从第1周的第5天开始每周持续皮下注射。治疗由5mg/kg静脉输注，随后每周皮下注射300mg LEPR激动剂REGN4461组成。在第82周，该方案中给予的SC剂量增加到450mg，并在第83周给予另外的IV负荷剂量。结果测量、评估和事件详细时间表的详细描述可见于表1-2中。

表1-2：治疗周期1(A)、治疗周期2(B)和延长治疗周期(B)至第52周的评估时间表。

(A)

(B)

患者在REGN4461治疗前的第1周和REGN4461治疗开始后的第2周接受了两次血浆置换。此后，临床上不再需要定期血浆置换。从第4周开始，患者的甘油三酯水平相对于基线下降，并在第6周测量时降至500mg/dL以下。此后，在第94周的不同时间测量的甘油三酯水平平均为约522mg/dL。在具有此非典型部分性脂肪代谢障碍和中和瘦素抗体的患者中，使用REGN4461治疗与甘油三酯从基线的1288mg/dL降至第12周的426mg/dL(66.93％下降)和第25周的231mg/dL(82.07％下降)相关。在第25周，患者达到了预先确定的主要终点，即在不需要进行血浆置换的情况下达到了<500mg/dL的空腹甘油三酯水平。

伴随着REGN4461治疗，患者在前8周相对于基线减轻了4.2千克，并在观察期的其余时间保持较低的体重(在第25周相对于基线减轻了4.5kg)。体重在第68周增加了0.2千克，并且在第94周增加了0.9千克。

在体重减轻的同时，观察到腰围从基线至第25周从99cm减少至90.5cm。

LEPR激动剂治疗也与因疼痛和胰腺炎住院的减少相关。在开始LEPR激动剂mAb治疗前的12个月中，患者总共入院22次并且在365天中住院64天。治疗开始后，除了本文讨论的两次因SAE入院外，患者不需要任何住院治疗，并且仅出现一次需要急诊室评估的腹痛。患者还停止了用于疼痛的常规阿片类药物。图1总结了随着时间的推移疾病的早期过程和患者在不同治疗干预期间的代谢参数。

肝脏相关参数被评估为治疗计划的一部分。通过磁共振成像质子密度脂肪分数(PDFF)估计的肝脂肪变性从基线的29.89％(SD：7.85，ROI：14594mm²)下降到第12周的16.63％(SD：1.89，ROI：2807mm²)，在第25周进一步下降到12.52％(SD：2.01，ROI：2046mm²)。随着时间的推移，观察到肝酶略有减少。通过肝脏跨度的身体检查，患者的肝脏大小相对于基线明显减小(图2)。相应地，从最上面的右半膈到右叶下尖的颅尾方向测量的肝脏的纵向直径从基线的352mm减少至第12周的294mm和第25周的270mm。肝硬度从第12周的8.62kPa(SD：3.09)下降至第25周的6.57kPa(SD：1.90)。对于肝硬度的测量，无法与基线状态进行比较，因为患者在基线时出现严重腹痛导致无法屏气和获得适当的线圈定位，因此无法完成肝脏弹性成像。肝硬度在第52周保持稳定(5.9kPa-7.7kPa)。第79周的初步肝硬度为7.11±3.12(计划外就诊)。患者的脾脏大小也从15.8cm减小至第12周的14.1cm和第25周的13.5cm。

关于血糖控制，REGN4461治疗与患者的HbA1c水平略有下降相关，从基线时的9.5％降至第12周的9.1％和第25周的9.0％。HbA1c水平从第25周至第79周下降，在第82周和第84周再次上升至约10％。

患者的平均葡萄糖水平和每日总胰岛素需求也出现了平行下降。第-2周至第0周的血糖为255mg/dL，并且直到第94周测量结果平均为约122.9mg/dL。基于连续血糖监测(CGM)读数调整胰岛素剂量。患者在REGN4461治疗期间出现低血糖，因此需要减少胰岛素剂量以防止低血糖事件。然而，总体而言，这位患有脂肪代谢障碍和1型糖尿病的复杂患者的血糖控制仍不理想。

由于脂肪代谢障碍患者中的瘦素替代减少了REGN4461的餐后状态关联中自我报告的饥饿，因此探索了饥饿治疗。饥饿评分在治疗的前四周示出轻微的暂时增加，并且然后回到基线水平。根据全球饥饿问卷，患者在基线时描述为中度饥饿，并且在第12周和第25周描述为轻度饥饿。主观上，与基线相比，患者在第12周感觉“不太饿”，并且与前几周相比，在第25周感觉“稍微不太饿”。

静息能量消耗(REE)占总能量消耗的约60％，从基线时的2599kcal降至第25周的1799kcal(图3)，并在第25周保持不变。这可能代表了与焦虑和疼痛改善相关的总食物摄入量的减少或能量消耗的变化。此外，呼吸商(RQ)从基线时的0.92下降到第12周的0.81和第25周的0.82(图4)，这可能是由于碳水化合物摄入减少、脂肪酸氧化增加或新脂肪生成减少引起的。

由于患者出现低促性腺素性功能减退症，因此在使用LEPR激动剂REGN4461治疗期间，对患者的青春期发育进行了监测。在最初的25周治疗周期期间，患者的坦纳氏期从IV发展到V(生殖器)和III发展到IV(乳房发育)。在第25周，观察到以下相对于基线增加：患者的卵泡刺激激素(FSH；从1.4mIU/mL至3.9mIU/mL和4.4mIU/mL)、促黄体激素(LH；从0.2mIU/mL至4.8mIU/mL和4.4mIU/mL)、雌二醇(从<20pg/mL至29pg/mL和64pg/mL)和睾酮(从<0.05ng/mL至0.16ng/mL和0.40ng/mL)。在第25周，患者还没有开始月经。值得注意的是，患者的垂体MRI是正常的。

患者情绪和参与日常活动能力的实质性改善与REGN4461治疗相关。生活质量的主观指标也显示出改善。PHQ-9(患者健康问卷-9)评分是一种用于筛选、诊断、监测和测量抑郁症严重程度的多用途工具，从基线时的13分(指示中度抑郁症)下降至第4周的4分、第16周的4分，并且然后下降至第25周的2分(指示没有抑郁症；图5)。此外，在第25周，观察到SF-36评分的所有组成部分都有所改善：身体功能从85％增加至100％，由身体健康引起的角色限制从25％增加至100％，由情绪问题引起的角色限制从67％增加至100％，精力/疲劳从0％增加至50％，情绪健康从24％增加至68％，社会功能从50％增加至100％，疼痛从37.5％增加至75％，总体健康从25％增加至30％，并且健康变化从25％增加至100％(图6)。值得注意的是，在治疗期间患者的文拉法辛和丁螺环酮剂量分别从150mg减少至75mg和从15mg减少至2.5mg。

SF-36健康问卷是一个多用途的简短健康调查，只有36个问题。它产生了一个8级的功能健康和幸福评分，以及基于心理测量学的身体和精神健康总结措施和基于偏好的健康效用指数。这是一种通用的量度，而不是针对特定年龄、疾病或治疗组的量度。

总体而言，REGN4461耐受性良好。除了注射部位少量出血外，未报告注射部位反应。早期不良事件包括尿路感染、上呼吸道感染、腹痛、腹泻、呕吐、恶心、低血糖和高血糖。这些不良事件被认为与药物无关。记录了两起SAE。低血糖和高血糖的发作可能分别与REGN4461治疗和外源性胰岛素处方剂量减少后的胰岛素敏感性变化有关。

表1-3：疼痛和抑郁症的药物使用记录(第0天给予第一剂REGN4461)。

^从首次IV给药的日期(第0天)开始测量

*治疗医师未正式停用，但无需进一步定期给药。患者使用羟考酮的其它情况与肾/肝活检和端口移除以及尿路感染有关。

SAE＝严重不良事件

PO＝经口

PRN＝按需或根据需要

PRN羟考酮使用(在REGN4461开始之前)为至少2至3个剂量，每周至少3天，持续至少12个月。

第339天至第704天期间(从首次SC给药之日起并包括该日，包括不良事件(AE)日期)的AE总结如下：

●非严重不良事件：第432天，鼻窦感染

●非严重不良事件：第507天，尿路感染

●严重不良事件(SAE)：在第536天，患者开始感到腹痛，这在第二天恶化，并导致患者第二天到当地急诊科就诊。实验室工作显示1103mg/dL的升高的甘油三酯以及58IU/L的AST和61IU/L的ALT。对患者的腹部和骨盆进行了对比CT扫描，未发现急性胰腺炎。患者接受了用于疼痛控制的羟考酮、IV酮咯酸(Toradol)和IV克他命。患者因高甘油三酯血症和腹痛而入院，并置于IV胰岛素滴注以降低甘油三酯。第537天晚上的重复甘油三酯为586mg/dL，并且第538天早上为477mg/dL。在第538天，患者接受了两个剂量的IV吗啡以控制疼痛。患者的病情继续改善，并在第539天出院。

●严重不良事件(SAE)：在第628天，患者开始感到腹痛和相关的恶心，这在第二天恶化，并导致患者在第629天到当地急诊科就诊。实验室工作显示332mg/dL的轻度升高的甘油三酯、40IU/L的AST和55IU/L的ALT。患者在第629天的脂肪酶水平是13，并且在正常范围内。患者接受了用于疼痛控制的羟考酮、IV酮咯酸和IV克他命。患者因高甘油三酯血症和腹痛而入院。第630天的腹部超声显示胰腺正常，并且第629天的x射线显示肠气体模式，涉及肠梗阻或肠胃炎和大量粪便。第630天晚上的重复甘油三酯为475mg/dL。患者仍然报告有严重的腹痛，并接受了用于疼痛控制的罗西酮(Roxicodone)和用于炎症控制的酮咯酸。患者的病状有所改善，并于第632天出院。然后，在第635天，研究医生在诊所对患者进行了检查，此时腹痛已完全缓解。

由于患者的病史，这两起SAE都在意料之中，并且与REGN4461无关。

*****

本文引用的所有参考文献均通过引用并入，达到如同每个单独的出版物、数据库条目(例如，Genbank序列或GeneID条目)、专利申请或专利被专门且单独地指示通过引用并入的相同程度。申请人意图通过引用并入本声明以涉及每个单独的出版物、数据库条目(例如，Genbank序列或GeneID条目)、专利申请或专利，所述文献中的每一个明确鉴定，即使这样的引用不直接与通过引用并入的专用声明相邻。在说明书中包含通过引用并入的专有说明(如果有的话)并不以任何方式削弱通过引用并入的此一般性声明。本文引用参考文献并非旨在承认所述参考文献是相关的现有技术，也不构成对这些出版物或文献的内容或日期的任何承认。

序列表

<110> 瑞泽恩制药公司(Regeneron Pharmaceuticals, Inc.)

E·A·奥拉(ORAL, ELIF A.)

B·阿金奇(AKINCI, BARIS)

M·C·弗雷塔斯福斯(FOSS DE FREITAS, MARIA C.)

<120> LEPR激动剂用于疼痛的用途

<130> 10823WO01

<140> TBD

<141> 2021-09-15

<150> 63/078,687

<151> 2020-09-15

<160> 114

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

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ccaggcaagg ggctggaatg ggtggcagtt atttattatg atggaaatta tcaatactat 180

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ctgcaaatga acagcctgag agtcgacgac acggctgtat atttctgtgc gcgtctcaac 300

tgggattact ggtatctcga tctctggggc cgtggcaccc tggtcactgt ctcctca 357

<210> 2

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<212> PRT

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<220>

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Ala Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Ala Val Ile Tyr Tyr Asp Gly Asn Tyr Gln Tyr Tyr Glu Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Asn Thr Leu Asp

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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

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Ala Arg Leu Asn Trp Asp Tyr Trp Tyr Leu Asp Leu Trp Gly Arg Gly

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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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<213> 人工序列

<220>

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<210> 5

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<212> DNA

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<223> 合成的

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<212> PRT

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<212> PRT

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1 5 10

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<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 17

caggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtacag cgtctggatt caccttcagt agttatgcca tgtactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtgtcagtt atatactatg atggaagtta taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatgg acagcctgag agccgaggac acggctgtct attactgtgc gagttataac 300

tggaactact ggtacttcga tttctggggc cgtggcaccc tggtcactgt ctcctca 357

<210> 18

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 18

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Tyr Asn Trp Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Arg Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 19

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 19

ggattcacct tcagtagtta tgcc 24

<210> 20

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 20

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

<210> 21

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 21

atatactatg atggaagtta taaa 24

<210> 22

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 22

Ile Tyr Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys

1 5

<210> 23

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 23

gcgagttata actggaacta ctggtacttc gatttc 36

<210> 24

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 24

Ala Ser Tyr Asn Trp Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Phe

1 5 10

<210> 25

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 25

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaagc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt acatatgcca tgtactgggt ccgccagact 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggctgtt ttatactctg atggaagtaa taaatactat 180

atagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca cttccacgaa cactctgtat 240

ctgcaaatga gcagcctgcg agccgacgac tcggctctat attactgtgc gcgtctcaac 300

tgggattact ggtacttcga tctctggggc cgtggcaccc tggtcactgt ctcctca 357

<210> 26

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 26

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ser Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Tyr Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Leu Tyr Ser Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ile Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Thr Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Asp Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Asn Trp Asp Tyr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 27

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 27

ggattcacct tcagtacata tgcc 24

<210> 28

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 28

Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala

1 5

<210> 29

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 29

ttatactctg atggaagtaa taaa 24

<210> 30

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 30

Leu Tyr Ser Asp Gly Ser Asn Lys

1 5

<210> 31

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 31

gcgcgtctca actgggatta ctggtacttc gatctc 36

<210> 32

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 32

Ala Arg Leu Asn Trp Asp Tyr Trp Tyr Phe Asp Leu

1 5 10

<210> 33

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 33

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgaag cgtctggatt cagcagcagt gacaatgcca tgtactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtgtcagtt atatatcatg atggaagtta taaatactat 180

gaagactccg tgaagggccg attcaccatc gccagagaca attccaagaa cacgctttat 240

ttgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtat attactgtgc gaggtataac 300

tggaaccact ggtacttcga tgtctggggc cgtggcaccc tggtcactgt ctcctca 357

<210> 34

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 34

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Ser Ser Ser Asp Asn

20 25 30

Ala Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr His Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Glu Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Trp Asn His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Arg Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 35

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 35

ggattcagca gcagtgacaa tgcc 24

<210> 36

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 36

Gly Phe Ser Ser Ser Asp Asn Ala

1 5

<210> 37

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 37

atatatcatg atggaagtta taaa 24

<210> 38

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 38

Ile Tyr His Asp Gly Ser Tyr Lys

1 5

<210> 39

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 39

gcgaggtata actggaacca ctggtacttc gatgtc 36

<210> 40

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 40

Ala Arg Tyr Asn Trp Asn His Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 41

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 41

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtgtcagtt atatcatatg acgaaagtaa taagtactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatt tctagagaca attccaagaa cgcgctgtat 240

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ccttttggat tggttaccgg atggttcgac ccctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 42

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 42

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Ser Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ala Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asn Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Arg Pro Phe Gly Leu Val Thr Gly Trp Phe Asp Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 43

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 43

ggattcacct tcagtaccta tggc 24

<210> 44

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 44

Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Gly

1 5

<210> 45

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 45

atatcatatg acgaaagtaa taag 24

<210> 46

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 46

Ile Ser Tyr Asp Glu Ser Asn Lys

1 5

<210> 47

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 47

gcgagagatc ggccttttgg attggttacc ggatggttcg acccc 45

<210> 48

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 48

Ala Arg Asp Arg Pro Phe Gly Leu Val Thr Gly Trp Phe Asp Pro

1 5 10 15

<210> 49

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 49

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cgtctggatt cagtttcaat acctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtgacaatt atatggtatg atggaagtat taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attattgtgc gagaggtgga 300

tatagtggct acctctactt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360

<210> 50

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 50

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Ile Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Ser Gly Tyr Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 51

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 51

ggattcagtt tcaataccta tggc 24

<210> 52

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 52

Gly Phe Ser Phe Asn Thr Tyr Gly

1 5

<210> 53

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 53

atatggtatg atggaagtat taaa 24

<210> 54

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 54

Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Ile Lys

1 5

<210> 55

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 55

gcgagaggtg gatatagtgg ctacctctac tttgactac 39

<210> 56

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 56

Ala Arg Gly Gly Tyr Ser Gly Tyr Leu Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 57

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 57

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60

acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agcggtggtg actactggag ctggatccgc 120

cagctcccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct attacagtgg gagcgcctac 180

tataatccgt ccctcaagag tcgaggtacc atatcaatag acacgtctaa gaaccagttc 240

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cgatttttgg agtggttctt ggggggctgg ttcggcccct ggggccaggg aaccctggtc 360

accgtctcct ca 372

<210> 58

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 58

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Gly Asp Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Leu Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Gly Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe

85 90 95

Cys Val Lys Leu Arg Phe Leu Glu Trp Phe Leu Gly Gly Trp Phe Gly

100 105 110

Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 59

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 59

ggtggctcca tcagcagcgg tggtgactac 30

<210> 60

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 60

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr

1 5 10

<210> 61

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 61

atctattaca gtgggagcgc c 21

<210> 62

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 62

Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala

1 5

<210> 63

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 63

gtgaaattac gatttttgga gtggttcttg gggggctggt tcggcccc 48

<210> 64

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 64

Val Lys Leu Arg Phe Leu Glu Trp Phe Leu Gly Gly Trp Phe Gly Pro

1 5 10 15

<210> 65

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 65

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc aactatggca tgacctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg gcctggaatg ggtctcagct attactggtg gtggtggtag cacatactac 180

tcaaactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacggtgtat 240

ctgcgaatga acagtgtgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaatataag 300

tggaacttcg tggacgactg gggccaggga accacggtca ccgtctcctc a 351

<210> 66

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 66

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Asn Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Arg Met Asn Ser Val Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Tyr Lys Trp Asn Phe Val Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 67

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 67

ggattcacct ttagcaacta tggc 24

<210> 68

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 68

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly

1 5

<210> 69

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 69

attactggtg gtggtggtag caca 24

<210> 70

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 70

Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 71

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 71

gcgaaatata agtggaactt cgtggacgac 30

<210> 72

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 72

Ala Lys Tyr Lys Trp Asn Phe Val Asp Asp

1 5 10

<210> 73

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 73

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgttg cctctggatt caccttcaat aaatacgaca tgcactgggt ccgccaaact 120

actggaaaag gtctagagtg ggtctcaggt attgatactg atggtgacac atactatcca 180

ggctccgtga agggccgatt caccatctcc agagaaaatg ccgagaactc cctgtatctt 240

caaatgaacg gcctgagagt cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag atggccttgg 300

agtggtttct atggtgcttt tgatatctgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcttca 360

<210> 74

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 74

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr

20 25 30

Asp Met His Trp Val Arg Gln Thr Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Asp Thr Asp Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Glu Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Gly Leu Arg Val Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Trp Pro Trp Ser Gly Phe Tyr Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 75

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 75

ggattcacct tcaataaata cgac 24

<210> 76

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 76

Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Asp

1 5

<210> 77

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 77

attgatactg atggtgacac a 21

<210> 78

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 78

Ile Asp Thr Asp Gly Asp Thr

1 5

<210> 79

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 79

gcaagatggc cttggagtgg tttctatggt gcttttgata tc 42

<210> 80

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 80

Ala Arg Trp Pro Trp Ser Gly Phe Tyr Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 81

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 81

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60

acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtaatt actactggaa ctggatccgc 120

caacagccag gagagggcct ggagtggatt gcttacatct atcacaatgg ggtcaccaac 180

ttcaatccgt ccctcaagag tcgacttact atatcagtag acacgtctaa gactcagttc 240

tccctgaagt tgaggtctgt gactgccgcg gacacggccg tttattactg tgcgagatca 300

ggcagctggt tcgagaactg gtacttcgat ctctggggcc gtggcaccct ggtcactgtc 360

tcctca 366

<210> 82

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 82

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Asn Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Gln Pro Gly Glu Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Ala Tyr Ile Tyr His Asn Gly Val Thr Asn Phe Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Thr Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Ser Gly Ser Trp Phe Glu Asn Trp Tyr Phe Asp Leu Trp

100 105 110

Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 83

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 83

ggtggctcca tcagcagtgg taattactac 30

<210> 84

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 84

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Asn Tyr Tyr

1 5 10

<210> 85

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 85

atctatcaca atggggtcac c 21

<210> 86

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 86

Ile Tyr His Asn Gly Val Thr

1 5

<210> 87

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 87

gcgagatcag gcagctggtt cgagaactgg tacttcgatc tc 42

<210> 88

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 88

Ala Arg Ser Gly Ser Trp Phe Glu Asn Trp Tyr Phe Asp Leu

1 5 10

<210> 89

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 89

gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180

gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240

cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccttg gacgttcggc 300

caagggacca aggtggaaat caaa 324

<210> 90

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 90

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 91

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 91

cagagtgtta gcagcagcta c 21

<210> 92

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 92

Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr

1 5

<210> 93

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 93

ggtgcatcc 9

<210> 94

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 94

Gly Ala Ser

1

<210> 95

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 95

cagcagtatg gtagctcacc ttggacg 27

<210> 96

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 96

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr

1 5

<210> 97

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 97

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt aattcctact ggagctggat ccggcagccc 120

ccagggaagg gactggagtg gattggatat gtctattccc gtgggaacac caagtacaac 180

ccctccctca cgagtcgagt caccatgtca tttgacacgt ccaagaacca gttctccctg 240

aaactgaggt ctgtgaccgc cgcagacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagcagcagc 300

tggtacgagg actggtactt cgatctctgg ggccgtggca ccctggtcac tgtctcctca 360

<210> 98

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 98

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Ser

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Val Tyr Ser Arg Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Thr

50 55 60

Ser Arg Val Thr Met Ser Phe Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ser Ser Ser Trp Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 99

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 99

ggtggctcca tcagtaattc ctac 24

<210> 100

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 100

Gly Gly Ser Ile Ser Asn Ser Tyr

1 5

<210> 101

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 101

gtctattccc gtgggaacac c 21

<210> 102

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 102

Val Tyr Ser Arg Gly Asn Thr

1 5

<210> 103

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 103

gcgagaagca gcagctggta cgaggactgg tacttcgatc tc 42

<210> 104

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 104

Ala Arg Ser Ser Ser Trp Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe Asp Leu

1 5 10

<210> 105

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 105

caggtgcagc tacagcagtg gggcgcaggg ctgtttaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcgatg tctatggtgg gtccttcaga ggttattatt ggagttggat ccgccagccc 120

ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcagttata gtggtttcac caattacaac 180

ccgtccctca agagtcgagt catcatatca atagatacgt ccaagaacca gttctccctg 240

aagatgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtttatt actgtgcgag agttacctat 300

ggttatggga cctttgatta ttggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354

<210> 106

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 106

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Phe Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Asp Val Tyr Gly Gly Ser Phe Arg Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Ser Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Ile Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Met Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Val Thr Tyr Gly Tyr Gly Thr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 107

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 107

ggtgggtcct tcagaggtta ttat 24

<210> 108

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 108

Gly Gly Ser Phe Arg Gly Tyr Tyr

1 5

<210> 109

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 109

atcagttata gtggtttcac c 21

<210> 110

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 110

Ile Ser Tyr Ser Gly Phe Thr

1 5

<210> 111

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 111

gcgagagtta cctatggtta tgggaccttt gattat 36

<210> 112

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 112

Ala Arg Val Thr Tyr Gly Tyr Gly Thr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 113

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 113

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ser Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Tyr Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Leu Tyr Ser Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ile Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Thr Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Asp Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Asn Trp Asp Tyr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 114

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 114

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

Claims (34)

1.一种用于减少或预防有需要的患者的疼痛、焦虑和/或抑郁的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的LEPR激动剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述患者实现了以下中的一项或多项：

-减轻疼痛；

-减少止痛药的使用；

-减少抗焦虑药的使用；

-减少抗抑郁药的使用；

-减少止痛药寻求行为；

-减少止痛药的按需使用；

-减少止痛药过量的发生率；和/或

-减少因为滥用止痛药而导致的死亡的发生率。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述止痛药是羟考酮。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述疼痛、焦虑和/或抑郁与瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状相关。

5.一种用于减少有需要的患者的以下各项或者维持对所述患者的以下各项的减少的方法，所述患者遭受疼痛和/或患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状：

-疼痛；

-止痛药的使用；

-抗焦虑药的使用；

-抗抑郁药的使用；

-止痛药寻求行为；

-止痛药的按需使用；

-止痛药过量；和/或

-因为滥用止痛药而导致的死亡的发生率；

所述方法包括向所述患者施用有效量的LEPR激动剂。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述减少在所述LEPR激动剂的第一次施用或第二次施用的少于1天、1天、2天、3天、4天或5天内实现。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述疼痛是全身性疼痛、腹痛、肾痛、肝痛和/或由于肝肿大、肝坚硬和/或胰腺炎引起的疼痛。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述腹痛伴有恶心和/或呕吐。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述疼痛是神经病变疼痛、关节炎疼痛、慢性背痛、纤维肌痛疼痛、肌病疼痛、中枢性疼痛、慢性中枢性疼痛、由中枢神经系统对疼痛的集中化和/或超敏感化引起的疼痛和/或中枢性疼痛综合征疼痛。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中在第一次施用所述LEPR激动剂的同时或之前减少所述止痛药、抗焦虑药和/或抗抑郁药的使用。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述患者继续止痛药的偶发性使用。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述疼痛，所述止痛药、抗焦虑药和/或抗抑郁药的使用是长期的。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中疼痛、焦虑和/或抑郁的减少通过PHQ-9和/或SF-36评分来测量。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中减少止痛药的按需使用不包括止痛药的偶发性使用。

15.根据权利要求14所述的方法，其中止痛药的偶发性使用包括使用止痛药至多5天、6天、7天或8天。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述止痛药是阿片类药物、非阿片类药物、降钙素基因相关肽(CGRP)抑制剂、环氧酶-2抑制剂、吉泮、抗CGRP单克隆抗体、非甾体抗炎药、水杨酸盐、对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸、阿芬太尼、阿司匹林和柠檬酸和碳酸氢钠、溴芬酸、塞来昔布、水杨酸胆碱和水杨酸镁、可待因、罂粟杆浓缩物、右马拉胺、右旋丙氧芬、双氯芬酸、双氯芬酸和米索前列醇、二氟尼柳、二氟尼柳、二氢可待因、二氢唉托啡、地芬诺酯、依普奈珠单抗、厄瑞努单抗、埃索美拉唑和萘普生、乙基吗啡、依托度酸、埃托啡、法莫替丁和布洛芬、非诺洛芬、芬太尼、氟比洛芬、瑞玛奈珠单抗、加巴喷丁、伽奈珠单抗、海洛因、氢可酮、氢吗啡酮、布洛芬、吲哚美辛、克他命、凯托米酮、酮洛芬、酮咯酸、左啡诺、水杨酸镁、甲氯芬那酸盐、甲芬那酸、美洛昔康、美沙酮、美沙酮、吗啡、吗啡-n-氧化物、萘丁美酮、萘普生、尼可吗啡、去甲可待因、鸦片、奥列巴文、奥沙普嗪、羟考酮、羟吗啡酮、哌替啶、哌替啶中间体、苯基丁氮酮、福尔可定、哌腈米特、吡罗昔康、瑞芬太尼、瑞美吉泮硫酸盐、双水杨酸酯、舒芬太尼、舒林酸、蒂巴因或替利定、托美丁、乌布吉泮或伐地考昔。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述止痛药是阿片类药物。

18.根据权利要求16所述的方法，其中所述止痛药不是非阿片类药物。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述抗焦虑药是苯二氮卓类药物、三环抗抑郁药、阿普唑仑、阿普唑仑、褪黑素受体的激动剂、麻醉剂、抗组胺剂、SNRI、SSRI、丁螺环酮、氯硝西泮、地西泮、艾司唑仑、艾司佐匹克隆、氟西泮、劳拉西泮、夸西泮、替马西泮、三唑仑、扎来普隆、唑吡坦或佐匹克隆。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述抗抑郁药是单胺氧化酶抑制剂、选择性血清素再摄取抑制剂(SSRI)、血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)、三环抗抑郁药、阿米替林、非典型抗抑郁药、安非他酮、西酞普兰、地昔帕明、地文拉法辛和左旋体米那普仑、多虑平、度洛西汀、依他普仑、氟西汀、丙咪嗪、异卡波肼、米氮平、去甲替林、帕罗西汀、苯乙肼、司来吉兰、舍曲林、强内心百乐明、曲唑酮、文拉法辛、维拉佐酮或沃替西汀。

21.一种减少患者因疼痛和/或患有瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状的患者因疼痛、焦虑和/或抑郁而住院治疗或紧急医疗干预的方法，所述方法包括向有需要的所述患者施用有效量的LEPR激动剂。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状为单基因肥胖症、肥胖症、代谢综合征、饮食诱导的食物渴求、功能性下丘脑性闭经、1型糖尿病、2型糖尿病、胰岛素抵抗、拥有中和抗瘦素自身抗体、严重胰岛素抵抗，包括由于胰岛素受体突变引起的严重胰岛素抵抗、不是由胰岛素受体突变引起的严重胰岛素抵抗、由下游信号传导通路突变引起的或由其它原因诱导的严重胰岛素抵抗、非酒精性和酒精性脂肪肝病、阿尔茨海默病、瘦素缺乏症、瘦素抵抗、脂肪代谢障碍、矮怪病/多诺霍综合征或罗伯森-门登霍尔综合征。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述瘦素缺乏症或瘦素抵抗病状为脂肪代谢障碍，所述脂肪代谢障碍是先天性全身性脂肪代谢障碍、获得性全身性脂肪代谢障碍、家族性部分性脂肪代谢障碍、获得性部分性脂肪代谢障碍、离心性腹部脂肪代谢障碍、环状脂肪萎缩、局部脂肪代谢障碍和HIV相关脂肪代谢障碍。

24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述LEPR激动剂是与LEPR特异性结合的分离的激动剂抗体或抗原结合片段。

25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述LEPR激动剂是与LEPR特异性结合的分离的激动剂抗体或抗原结合片段，所述分离的激动剂抗体或抗原结合片段包括：

(i)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列；

(ii)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列；

(iii)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列；

(iv)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列；

(v)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列；

(vi)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列；

(vii)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列；

(viii)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；

(ix)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列；

(x)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；

(xi)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列；

或者

(xii)轻链可变区，所述轻链可变区包括轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链可变区包括SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列；

或者

抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段与(i)至(xii)中的任何一个或多个与相同的表位结合，和/或与(i)至(xii)中的任何一个或多个竞争与LEPR结合。

26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述LEPR激动剂是与LEPR特异性结合的分离的激动剂抗体或抗原结合片段，所述分离的激动剂抗体或抗原结合片段包括：

(i)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列；

(ii)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列；

(iii)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列；

(iv)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列；

(v)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列；

(vi)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列；

(vii)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列；

(viii)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；

(ix)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列；

(x)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；

(xi)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列；

或者

(xii)轻链可变区，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列；以及

重链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列；

或者

抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段与(i)至(xii)中的任何一个或多个与相同的表位结合，和/或与(i)至(xii)中的任何一个或多个竞争与LEPR结合。

27.根据权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述LEPR激动剂是米巴瓦德单抗。

28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中LEPR激动剂的所述有效量是约5mg/kg的一个或多个静脉内剂量以及此后每周一次约250mg至450mg的一个或多个皮下剂量。

29.根据权利要求28所述的方法，其中250mg至450mg是300mg或450mg。

30.根据权利要求28所述的方法，其中LEPR激动剂的所述有效量是约5mg/kg的一个静脉内剂量以及此后每周一次约300mg或450mg的一个或多个皮下剂量。

31.根据权利要求1至30中任一项所述的方法，其进一步包括向所述患者施用另外的治疗剂。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述另外的化疗剂是人瘦素、美曲普汀、PCSK9抑制剂、抗PCSK9抗体、阿利库单抗、依洛尤单抗、伯考赛珠单抗、洛迪赛珠单抗、雷泮赛珠单抗、HMG-CoA还原酶抑制剂、阿托伐他汀、瑞舒伐他汀、西立伐他汀、匹伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、依折麦布、胰岛素、胰岛素变体、胰岛素促分泌素、二甲双胍、磺酰脲、钠葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂、达格列净、卡格列净、恩格列净、MC₄受体的选择性激动剂、赛美拉肽、GLP-1激动剂或类似物、extendin-4、艾塞那肽、利拉鲁肽、利西拉肽、阿必鲁肽、度拉鲁肽、胰高血糖素(GCG)抑制剂、抗GCG抗体、胰高血糖素受体(GCGR)抑制剂、抗GCGR抗体、小分子GCGR拮抗剂、GCGR特异性反义寡核苷酸、抗GCGR适体、血管生成素样蛋白(ANGPTL)抑制剂、抗ANGPTL3抗体、抗ANGPTL4抗体、抗ANGPTL8抗体、苯丁胺、奥利司他、托吡酯、安非他酮、托吡酯和苯丁胺、安非他酮和纳曲酮、安非他酮和唑尼沙胺、普兰林肽和美曲普汀、洛卡色林、西替司他、特索芬辛和/或韦利贝特。

33.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述患者进一步实现了以下中的一项或多项：

-减少体重；

-减少食物摄入；

-减少肥胖；

-减少肝硬度；

-改善的血糖控制；

-改善的胰岛素敏感性；

-改善血脂异常；

-改善肝脂肪变性；

-改善肝肿大；

-减轻胰腺炎；

-降低的血清甘油三酯水平；

-降低血浆置换频率；

-降低的总胆固醇水平；和/或

-降低的血清LDL-C水平。

34.根据权利要求1至33中任一项所述的方法，其中所述患者遭受：

-肥胖症；

-食欲过盛；

-过度肥胖；

-肝坚硬；

-低血糖控制；

-糖尿病；

-胰岛素抵抗；

-血脂异常；

-肝脂肪变性；

-肝肿大；

-胰腺炎；

-升高的血清甘油三酯水平；

-升高的总胆固醇水平；和/或

-升高的血清LDL-C水平；

和/或接受定期血浆置换。