CN116670160A - Dlx2载体 - Google Patents

Abstract

本公开涉及AAV载体，涉及通过使用AAV载体中的Dlx2编码序列将神经胶质细胞转化为神经元的组合物和方法。

Description

DLX2载体

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年9月29日提交的美国临时专利申请号63/084,927和于2021年9月23日提交的美国临时专利申请号63/247,417的优先权，其内容通过引用整体并入本文。

序列表的并入

包含在名为P34836WO00_SL.txt的文件(19,859字节(在中测量))中并于2021年9月27日创建的序列表以电子方式随此提交并通过引用整体并入。

技术领域

本公开包括使用包含编码人Dlx2的核酸序列的AAV载体将神经胶质细胞转化为神经元的方法和组合物。

背景技术

在患有神经系统病症的受试者或在中枢神经系统(CNS)或周围神经系统(PNS)受伤后的受试者中，神经元常常会被杀死或损坏并且无法再生。

神经胶质细胞在CNS或PNS受伤(诸如脑损伤)或神经系统病症后变得具有反应性。

目前没有方法可用于使用腺相关病毒(AAV)在患有神经系统病症的人类受试者中再生功能性新神经元。

发明内容

在一个方面，本公开提供并包括一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，该hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中该hDlx2序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸编码序列，该hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中该编码序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；(e)具有SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含编码Dlx2蛋白的无远端同源框2(Dlx2)核酸编码序列，其中该编码序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)增强子；(c)嵌合内含子；(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)多聚腺苷酸化信号序列。

在一个方面，本公开提供并包括一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中该AAV载体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，该hDlx2序列具有SEQ ID NO:6的核酸序列，并且其中该序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号序列、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中该AAV载体包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸编码序列，该hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，并且其中该编码序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ IDNO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种用于治疗有此需要的受试者的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中该AAV载体包含可操作地连接到表达控制元件的无远端同源框2(Dlx2)序列，该表达控制元件包含：(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)增强子；(c)嵌合内含子；(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种将活人脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中该AAV包含DNA载体构建体，该DNA载体构建体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，该hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中该序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种将活人脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中该AAV包含DNA载体构建体，该DNA载体构建体包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸编码序列，该hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中该编码序列可操作地连接到表达控制元件，该表达控制元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种将有此需要的受试者的神经胶质细胞转化为神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)递送至有此需要的受试者，其中该AAV包含DNA载体构建体，该DNA载体构建体包含无远端同源框2(Dlx2)序列，该Dlx2序列可操作地连接到表达控制元件，该表达控制元件包含：(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)增强子；(c)嵌合内含子；(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)多聚腺苷酸化信号序列，其中该载体能够将该有此需要的受试者的至少一种神经胶质细胞转化为神经元。

在一个方面，本公开提供并包括一种治疗有此需要的受试者的神经系统病症的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)递送至受试者，其中给予有此需要的受试者的AAV包含DNA载体构建体，该DNA载体构建体包含可操作地连接到表达控制元件的无远端同源框2(Dlx2)序列，该表达控制元件包含：(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)增强子；(c)嵌合内含子；(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，该hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中该hDlx2序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸编码序列，该hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中所述编码序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和(c)具有SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述AAV载体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，该hDlx2序列具有SEQ ID NO:6的核酸序列，并且其中所述序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述AAV载体包含编码无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸序列，该hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸编码序列，并且其中所述编码序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号序列、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种将活人脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中所述AAV包含DNA载体构建体，该DNA载体构建体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，该hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中所述序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种将活体脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中所述AAV包含DNA载体构建体，该DNA载体构建体包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸序列，该hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸编码序列，其中所述编码序列可操作地连接到表达控制元件，所述表达控制元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ IDNO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

附图说明

图1A描绘了CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40的图。

图1B描绘了EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40的图。

图1C描绘了CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH的图。

图1D描绘了EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH的图。

图2A描绘了CE:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:SV40的图。

图2B描绘了EF-1α:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:SV40的图。

图2C描绘了CE:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:hGH的图。

图2D描绘了EF-1α:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:hGH的图。

图3A描绘了CE:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:SV40的图。

图3B描绘了EF-1α:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:SV40的图。

图3C描绘了CE:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:hGH的图。

图3D描绘了EF-1α:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:hGH的图。

图4描绘了U6:shRNA1:H1:shRNA2:7SK:shRNA3的图。

图5A描绘了U6:shRNA:CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40的图。

图5B描绘了U6:shRNA:EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40的图。

图5C描绘了U6:shRNA:CE:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:SV40的图。

图5D描绘了U6:shRNA:EF-1α:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:SV40的图。

图5E描绘了U6:shRNA:CE:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:SV40的图。

图5F描绘了U6:shRNA:EF-1α:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:SV40的图。

图6A描绘了U6:shRNA:CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH的图。

图6B描绘了U6:shRNA:EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH的图。

图6C描绘了U6:shRNA:CE:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:hGH的图。

图6D描绘了U6:shRNA:EF-1α:Gfa1.6p:Dlx2:WPRE:hGH的图。

图6E描绘了U6:shRNA:CE:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:hGH的图。

图6F描绘了U6:shRNA:EF-1α:Gfa2.2:Dlx2:WPRE:hGH的图。

图7描绘了从出生后3天的Sprague-Dawley大鼠脑中建立大鼠星形胶质细胞原代培养物。左上图呈现GFAP染色细胞的图像。右上图呈现SOX9染色细胞的图像。左下图呈现DAPI染色细胞的图像。右下图呈现GFAP、SOX9和DAPI染色细胞的合并图像。

图8描绘了Dlx2质粒效率的比较。用P44(pEF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40)、P60(pEF-1α:Gfa681:Dlx2:缩短的嵌合内含子:WPRE:SV40)和P75(CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40)转染原代大鼠星形胶质细胞。上图显示细胞的Dlx2染色，下图显示合并的细胞Dlx2和DAPI染色。

图9A和9B描绘了转导到原代大鼠星形胶质细胞中的AAV颗粒的定量分析。图9A呈现AAV9-P12(pGfa681:GFP)和AAV5-P7(pEF-1α:GFP)在MOI为5x10⁵vg/细胞、2x10⁵vg/细胞和5x10⁴vg/细胞时的转导率。图9B呈现AAV9-P12(pGfa681:GFP)在以一系列密度(2x10⁴个细胞/孔、1.5x10⁴个细胞/孔、1x10⁴个细胞/孔和5x10³个细胞/孔)接种并且用一系列量的病毒(100μl培养基中的1x10¹³vg/ml病毒的2μl、1μl、0.5μl、0.25μl、0.125μl)感染的细胞中的转导率百分比。

图10描绘了在用NXL-P104(CE-pGfa681-CGRI-Dlx2-bGHpA)或NXL-P105(CE-pGfa681-CI-Dlx2-oPRE-bGHpA)转染后24小时，用抗Dlx2抗体和DAPI(核染料)免疫染色的大鼠皮层星形胶质细胞(RCA)。

图11描绘了在用NXL-P133(EE-pGfa681-CGRI-Dlx2-oPRE-bGHpA)、NXL-P137(EE-pGfa681-CGRI-Dlx2-oPRE-bGHpA)或NXL-P131(EE-pGfa681-CI-Dlx2-oPRE-bGHpA)转染后24小时，用抗Dlx2抗体和DAPI(核染料)免疫染色的大鼠皮层星形胶质细胞(RCA)。

图12描绘了在用AAV9-P133(CE-pGfa681-CGRI-Dlx2-oPRE-bGHpA)转导后6天，用抗Dlx2抗体和DAPI(核染料)免疫染色的大鼠皮层星形胶质细胞(RCA)。

序列简述

表1中提供了核酸序列和氨基酸序列的列表。

表1.核酸和氨基酸序列

具体实施方式

除非另外定义，否则所使用的所有技术术语和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。在以单数形式提供术语的情况下，本发明的发明人还设想了以所述术语的复数形式描述的本公开的各个方面。在通过引用并入的参考文献中所使用的术语和定义存在差异的情况下，本申请中使用的术语应具有本文给出的定义。所使用的其它技术术语在其被使用的领域中具有其普通含义，如各种领域特定词典所例示的，例如“《American科学词典》)”(《美国传统词典(American HeritageDictionaries)》的编辑,2011,波士顿和纽约霍顿米夫林出版公司(Houghton MifflinHarcourt,Boston and New York))、“《麦格劳-希尔科学技术术语词典(McGraw-HillDictionary of Scientific and Technical Terms)》”(第6版,2002,纽约麦格劳-希尔出版公司(McGraw-Hill,New York))或“《牛津生物学词典(Oxford Dictionary ofBiology)》”(第6版,2008,牛津和纽约牛津大学出版社(Oxford University Press,Oxfordand New York))。

包含例如所有专利、公开的专利申请和非专利出版物的本文引用的任何参考文献以全文引用的方式并入本文中。

当呈现一组替代方案时，具体地设想了构成所述组替代方案的成员的任何和所有组合。例如，如果项选自由A、B、C和D组成的组，则发明人将单独地具体地设想每个替代方案(例如，单独的A、单独的B等)以及诸如A、B和D；A和C；B和C；等的组合。术语“和/或”在两个或更多个项目的列表中使用时是指所列项目中的任何一个本身或与任何一个或多个其它所列项目的组合。例如，表达“A和/或B”旨在意指A和B中的任一者或两者，即单独的A、单独的B或A和B的组合。表达“A、B和/或C”旨在意指单独的A、单独的B、单独的C、A和B的组合、A和C的组合、B和C的组合、或A、B和C的组合。

当本文提供数字范围时，该范围被理解为包括范围的边缘以及范围的定义边缘之间的任何数字。例如，“1与10之间”包含1与10之间的任何数字以及数字1和数字10。

当提及数字使用术语“约”时，应理解为是指加或减10％。例如，“约100”将包括从90至110。

本文所提供的任何组合物或载体被具体地设想用于本文所提供的任何方法。

在一个方面，本文提供的方法和组合物包含载体。如本文所用，术语“载体”是指与染色体DNA物理分离的环状双链DNA分子。应当注意，术语“载体”可以与术语“质粒”互换使用。

在一个方面，本文提供的载体是重组载体。如本文所用，术语“重组载体”是指包含重组核酸的载体。如本文所用，“重组核酸”是指通过基因重组的实验室方法(诸如但不限于分子克隆)形成的核酸分子。基因载体可以通过遗传重组的实验室方法(诸如但不限于分子克隆)形成。而且，本领域技术人员可以通过由单个核苷酸合成质粒或通过将来自不同预先存在的载体的核酸分子剪接在一起来从头创建重组载体，但不限于此。

腺相关病毒(AAV)是感染人类和其他灵长类物种的复制缺陷型、无包膜的依赖性细小病毒属(Dependoparvovirus)病毒。已知AAV不会引起任何物种的疾病，但它们会引起轻微的免疫反应。AAV可以感染分裂细胞和休眠细胞。AAV稳定地整合到人类基因组中19号染色体上称为AAVS1基因座(GenBank登录号AC010327.8的核苷酸7774-11429)的特异性位点，尽管在人类基因组中其他基因座的随机整合是可能的。

AAV包含具有长约4700个核苷酸的单链DNA的线性基因组。AAV的基因组还包括位于基因组每一端的145个核苷酸长的反向末端重复序列(ITR)。ITR两侧有两个病毒基因：rep(用于复制，编码非结构蛋白)和cap(用于衣壳，编码结构蛋白)。ITR含有AAV基因组拯救、复制和包装所需的所有顺式作用元件。

当用于基因治疗方法时，AAV基因组序列的rep和cap基因被移除并替换为位于两个AAV ITR之间的目的DNA。如本文所用，“AAV载体构建体”是指包含插入两个AAV ITR序列之间的所需序列的DNA分子。如本文所用，“AAV载体”是指用DNA载体构建体包装的AAV。

如本文所用，术语“AAV载体血清型”主要是指AAV载体的衣壳蛋白内的变异。

如本文所用，“vg”是指在AAV滴度确定的背景下的病毒基因组。

在一个方面，AAV载体选自由以下项组成的组：AAV载体血清型1、AAV载体血清型2、AAV载体血清型3、AAV载体血清型4、AAV载体血清型5、AAV载体血清型6、AAV载体血清型7、AAV载体血清型8、AAV载体血清型9、AAV载体血清型10、AAV载体血清型11和AAV载体血清型12。在一个方面，AAV载体选自由AAV血清型2、AAV血清型5和AAV血清型9组成的组。在一个方面，AAV载体是AAV血清型1。在一个方面，AAV载体是AAV血清型2。在一个方面，AAV载体是AAV血清型3。在一个方面，AAV载体是AAV血清型4。在一个方面，AAV载体是AAV血清型5。在一个方面，AAV载体是AAV血清型6。在一个方面，AAV载体是AAV血清型7。在一个方面，AAV载体是AAV血清型8。在一个方面，AAV载体是AAV血清型9。在一个方面，AAV载体是AAV血清型10。在一个方面，AAV载体是AAV血清型11。在一个方面，AAV载体是AAV血清型12。

在一个方面，AAV载体ITR选自由以下项组成的组：AAV血清型1ITR、AAV血清型2ITR、AAV血清型3ITR、AAV血清型4ITR、AAV血清型5ITR、AAV血清型6ITR、AAV血清型7ITR、AAV血清型8ITR、AAV血清型9ITR、AAV血清型10ITR、AAV血清型11ITR和AAV血清型12ITR。在一个方面，AAV载体ITR是AAV血清型1ITR。在一个方面，AAV载体ITR是AAV血清型2ITR。在一个方面，AAV载体ITR是AAV血清型3ITR。在一个方面，AAV载体ITR是AAV血清型4ITR。在一个方面，AAV载体ITR是AAV血清型5ITR。在一个方面，AAV载体ITR是AAV血清型6ITR。在一个方面，AAV载体ITR是AAV血清型7ITR。在一个方面，AAV载体ITR是AAV血清型8ITR。在一个方面，AAV载体ITR是AAV血清型9ITR。在一个方面，AAV载体ITR是AAV血清型10ITR。在一个方面，AAV载体ITR是AAV血清型11ITR。在一个方面，AAV载体ITR是AAV血清型12ITR。

在一个方面，至少一个AAV载体ITR核酸序列选自由以下项组成的组：SEQ ID NO:1和9。在一个方面，至少一个AAV载体ITR核酸序列是SEQ ID NO:1。在一个方面，至少一个AAV载体ITR核酸序列是SEQ ID NO:9。

在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少70％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少75％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少80％相同的序列：SEQ IDNO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少85％相同的序列：SEQID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少90％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少91％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少92％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少93％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少94％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少95％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少96％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少97％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少98％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少99％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAVITR核酸序列包含与以下至少99.5％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少99.8％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下100％相同的序列：SEQ ID NO:1，或其互补序列。

在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少70％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少75％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少80％相同的序列：SEQ IDNO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少85％相同的序列：SEQID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少90％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少91％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少92％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少93％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少94％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少95％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少96％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少97％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少98％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少99％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAVITR核酸序列包含与以下至少99.5％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少99.8％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。在一个方面，AAV ITR核酸序列包含与以下100％相同的序列：SEQ ID NO:9，或其互补序列。

如本文所用，关于两个或更多个核苷酸或氨基酸序列的术语“同一性百分比”或“相同百分比”通过以下方式计算：(i)在比较窗口(一个或多个“可比对”区域)上比较两个最佳比对的序列(核苷酸或氨基酸)，(ii)确定在两个序列中出现相同的核酸碱基(对于核苷酸序列)或氨基酸残基(对于蛋白和多肽)的位置数以产生匹配位置数，(iii)将匹配位置数除以比较窗口中总位置数，然后(iv)将该商乘以100％以产生同一性百分比。如果“同一性百分比”是在没有指定特定比较窗口的情况下相对于参考序列计算的，那么通过将比对区域上匹配位置数除以参考序列的总长度来确定同一性百分比。因此，为了本申请的目的，当将两个序列(查询和主题)最佳比对(在其比对中允许空位)时，查询序列的“同一性百分比”等于两个序列之间相同位置数除以查询序列在其长度(或比较窗口)上的总位置数，然后乘以100％。

当参照氨基酸使用序列同一性百分比时，认为不相同的的残基位置通常因保守氨基酸取代而不同，其中氨基酸残基被具有相似化学性质(例如，电荷或疏水性)的其他氨基酸残基取代，因此不改变分子的功能性质。当序列的保守取代不同时，可以向上调整序列同一性百分比以校正取代的保守性。由于此类保守取代而不同的序列被称为具有“序列相似性”或“相似性”。

为了对序列进行最佳比对以计算它们的同一性百分比，各种成对或多重序列比对算法和程序是本领域已知的，诸如可用于比较两个或更多个核苷酸或氨基酸序列之间的序列同一性或相似性的ClustalW或Basic Local Alignment Search(BLAST^TM)等。尽管其他比对和比较方法是本领域已知的，但是两个序列之间的比对和同一性百分比(包括上述同一性百分比范围)可以通过ClustalW算法确定，参见例如，Chenna等人，“Multiplesequence alignment with the Clustal series of programs,”Nucleic AcidsResearch31:3497-3500(2003)；Thompson等人，“Clustal W:Improving the sensitivityof progressive multiple sequence alignment through sequence weighting,position-specific gap penalties and weight matrix choice,”Nucleic AcidsResearch 22:4673-4680(1994)；Larkin MA等人，“Clustal W and Clustal X version2.0,”Bioinformatics 23:2947-48(2007)；和Altschul等人，“Basic local alignmentsearch tool.”J.Mol.Biol.215:403-410(1990)，其全部内容和公开通过引用并入本文。

如本文所用，关于两个核苷酸序列的术语“互补性百分比”或“互补百分比”类似于同一性百分比的概念，但是是指当查询序列和主题序列线性排列并且最佳碱基配对而没有二级折叠结构(诸如环、茎或发夹)时，与主题序列的核苷酸最佳碱基对或杂交的查询序列的核苷酸的百分比。此类互补性百分比可以在两条DNA链、两条RNA链或一条DNA链和一条RNA链之间。“互补性百分比”可以通过以下方式计算：(i)在比较窗口上以线性和完全延伸的排列(即，没有折叠或二级结构)最佳碱基配对或杂交两个核苷酸序列，(ii)在比较窗口上确定两个序列之间的碱基对位置数以产生互补的位置数，(iii)将互补的位置数除以比较窗口中总位置数，和(iv)将该商乘以100％以得到两个序列的互补性百分比。两个序列的最佳碱基配对可以基于核苷酸碱基的已知配对(诸如G-C、A-T和A-U)通过氢结合来确定。如果相对于参考序列计算“互补性百分比”而不指定特定的比较窗口，那么通过将两个线性序列之间的互补的位置数除以参考序列的总长度来确定同一性百分比。因此，为了本申请的目的，当两个序列(查询和主题)是最佳碱基配对(允许错配或非碱基配对的核苷酸)时，查询序列的“互补性百分比”等于两个序列之间碱基配对位置数除以查询序列在其长度上的总位置数，然后乘以100％。

使用术语“多核苷酸”、“核酸序列”或“核酸分子”并非旨在将本公开限制为包含脱氧核糖核酸(DNA)的多核苷酸。例如，还设想了核糖核酸(RNA)分子。本领域普通技术人员将意识到多核苷酸和核酸分子可以包含核糖核苷酸以及核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸的组合。此类脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸包括天然存在的分子和合成类似物二者。本公开的多核苷酸还涵盖所有形式的序列，其包括但不限于单链形式、双链形式、发夹、茎环结构等。在一个方面，本文提供的核酸分子是DNA分子。在一个方面，本文提供的核酸分子是RNA分子。在一个方面，本文提供的核酸分子是单链的。在一个方面，本文提供的核酸分子是双链的。核酸分子可以编码多肽或小RNA。

如本文所用，术语“多肽”是指至少两个共价连接的氨基酸的链。多肽可以由本文提供的多核苷酸编码。本文提供的蛋白质可由本文提供的核酸分子编码。蛋白质可包含本文提供的多肽。如本文所用，“蛋白质”是指能够为细胞提供结构或酶促活性的氨基酸残基链。如本文所用，“编码序列”是指编码蛋白质的核酸序列。

如本文所用，术语“CpG位点”或“CG位点”是指胞嘧啶和鸟嘌呤仅被一个磷酸酯基团隔开的DNA序列区域。

如本文所用，术语“CG岛”的“CpG岛”是指以高频率出现的CpG位点。

如本文所用，术语“密码子”是指三个核苷酸的序列。

如本文所用，术语“密码子优化的”是指通过用在宿主细胞的基因中更频繁或最频繁使用的密码子替换序列的至少一个密码子同时保持原始氨基酸序列来修饰以增强在目的宿主细胞中的表达的密码子。

如本文所用，术语“增强子”是指运行以启动、辅助、影响、引起和/或促进相关可转录DNA序列或编码序列至少在某些组织、发育阶段和/或条件中的转录和表达的DNA序列区域。在一个方面，增强子是顺式增强子。在一个方面，增强子是反式增强子。

如本文所用，“CE”是指巨细胞病毒(CMV)启动子增强子序列。

如此处所用，“EE”是指Ef1α启动子增强子序列。

增强子序列可以通过利用本领域熟知的基因组技术来鉴定。非限制性示例包括使用报告基因和下一代测序方法，诸如染色质免疫共沉淀测序(ChIP-seq)、DNA酶I超敏性测序(DNase-seq)、微球菌核酸酶测序(MNase-seq)、甲醛辅助分离调控元件测序(FAIRE-seq)以及染色质转座酶可及性测序测定(ATAC-seq)。

如本文所用，术语“可操作地连接”是指启动子或其他调控元件与基因(或转基因)的相关可转录DNA序列或编码序列之间的功能性连接，使得启动子等运行以启动、辅助、影响、引起和/或促进相关可转录DNA序列或编码序列至少在某些组织、发育阶段和/或条件中的转录和表达。如本文所用，“调控元件”指正向或负向调节可操作连接的序列的表达的任何序列元件。“调控元件”包括但不限于启动子、增强子、前导序列、转录起始位点(TSS)、接头、5'和3'非翻译区(UTR)、内含子、多聚腺苷酸化信号和终止区或序列等，它们对于调节或允许基因或可转录DNA序列在细胞中的表达是合适的、必需的或优选的。此类额外的调控元件可以是任选的并且用于增强或优化基因或可转录DNA序列的表达。

如本文所用，“p2A”或“P2A”是指来自猪捷申病毒-1的2A自切割肽序列。在一个方面，接头可包含P2A序列。

如本文所用，术语“启动子”是指含有RNA聚合酶结合位点、转录起始位点和/或TATA盒并辅助或促进相关可转录多核苷酸序列和/或基因(或转基因)的转录和表达的DNA序列。启动子可以通过合成产生自、改变自或源自已知或天然存在的启动子序列或其他启动子序列。启动子还可以包括包含两个或更多个异源序列的组合的嵌合启动子。因此，本申请的启动子可以包括在组成上与已知或本文提供的其他启动子序列相似但不相同的启动子序列的变体。

如本文所用，“内含子”是指当信使RNA(mRNA)从mRNA前体成熟时通过RNA剪接去除的核苷酸序列。

如本文所用，“mRNA”或“信使RNA”是指对应于基因的遗传序列的单链RNA。

可以使用本领域已知的任何合适的方法测量mRNA的表达。测量mRNA表达的非限制性示例包括定量逆转录酶聚合酶链反应(qRT-PCR)、RNA印迹(例如，Northern印迹)和RNA测序。表达差异可以描述为绝对量化或相对量化。参见，例如，Livak和Schmittgen，Methods,25:402-408(2001)。

如本文所用，“基因组编辑”或“基因编辑”是指使用靶向编辑技术对基因组中目的核苷酸序列进行的靶向诱变、插入、缺失、倒位、取代或易位。目的核苷酸序列可以为任何长度，例如，至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45、至少50、至少75、至少100、至少250、至少500、至少1000、至少2500、至少5000、至少10,000或至少25,000个核苷酸。基因编辑技术的非限制性示例是小干扰RNA(siRNA)技术、小发夹RNA(shRNA)技术、微小RNA(miRNA)技术、反义寡核苷酸(ASO)技术或CRISPR/CAS技术。

如本文所用，“ASO”或“反义寡核苷酸”是小的单链核酸，其与细胞内的靶RNA序列结合并使基因沉默。

如本文所用，“编码区”、“基因区”或“基因”是指可产生功能单元的多核苷酸。非限制性示例包括蛋白质或非编码RNA分子。“编码区”、“基因”或“基因区”可以包含启动子、增强子序列、前导序列、转录起始位点、转录终止位点、多聚腺苷酸化位点、一个或多个外显子、一个或多个内含子、5'-UTR、3'-UTR或其任何组合。

在一个方面，基因编辑靶向突变的亨廷顿蛋白(Htt)聚集体。在一个方面，基因编辑通过非编码RNA分子进行。非编码RNA分子的非限制性示例包括微小RNA(miRNA)、miRNA前体(pre-miRNA)、小干扰RNA(siRNA)、小RNA(长度为18-26个核苷酸)和编码它们的前体、异色siRNA(hc-siRNA)、Piwi相互作用RNA(piRNA)、发夹双链RNA(发夹dsRNA)、反式作用siRNA(ta-siRNA)、天然存在的反义siRNA(nat-siRNA)、CRISPR RNA(crRNA)、示踪RNA(tracrRNA)、向导RNA(gRNA)和单向导RNA(sgRNA)。在一个方面，shRNA靶向Htt基因。在一个方面，siRNA靶向Htt基因。在一个方面，ASO靶向Htt基因。在一个方面，miRNA靶向Htt基因。在一个方面，gRNA靶向Htt基因。在一个方面，pre-miRNA靶向Htt基因。在一个方面，小RNA靶向Htt基因。在一个方面，hc-siRNA靶向Htt基因。在一个方面，piRNA靶向Htt基因。在一个方面，发夹dsRNA靶向Htt基因。在一个方面，ta-siRNA靶向Htt基因。在一个方面，nat-siRNA靶向Htt基因。在一个方面，crRNA靶向Htt基因。在一个方面，tracrRNA靶向Htt基因。在一个方面，sgRNA靶向Htt基因。在一个方面，shRNA包含选自由以下项组成的组的核酸序列：SEQ IDNO:15至17。在一个方面，shRNA包含核酸序列SEQ ID NO:15。在一个方面，shRNA包含核酸序列SEQ ID NO:16。在一个方面，shRNA包含核酸序列SEQ ID NO:17。

如本文所用，“供体分子”或“供体序列”定义为已被选择用于定点、靶向插入到基因组中的核酸序列。在一个方面，供体分子包含“供体序列”。在一个方面，本文提供的靶向编辑技术包括使用一种或多种、两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种、或五种或更多种供体分子或供体序列。本文提供的供体分子或供体序列可以是任何长度。例如，本文提供的供体分子或供体序列的长度介于2与50,000个核苷酸之间、介于2与10,000个核苷酸之间、介于2与5000个核苷酸之间、介于2与1000个核苷酸之间、介于2与500个核苷酸之间、介于2与250个核苷酸之间、介于2与100个核苷酸之间、介于2与50个核苷酸之间、介于2与30个核苷酸之间、介于15与50个核苷酸之间、介于15与100个核苷酸之间、介于15与500个核苷酸之间、介于15与1000个核苷酸之间、介于15与5000个核苷酸之间、介于18与30个核苷酸之间、介于18与26个核苷酸之间、介于20与26个核苷酸之间、介于20与50个核苷酸之间、介于20与100个核苷酸之间、介于20与250个核苷酸之间、介于20与500个核苷酸之间、介于20与1000个核苷酸之间、介于20与5000个核苷酸之间或介于20与10,000个核苷酸之间。

如此处所用，“HTT”是指Htt特异性向导RNA(gRNA)和/或供体序列。

本文提供的位点特异性核酸酶可用作靶向编辑技术的一部分。位点特异性核酸酶的非限制性示例包括大范围核酸酶、锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)、RNA引导的核酸酶(例如，Cas9和Cpf1)、重组酶(例如但不限于，附着于DNA识别基序的丝氨酸重组酶、附着于DNA识别基序的酪氨酸重组酶)、转座酶(例如但不限于，附着于DNA结合结构域的DNA转座酶)或其任何组合。

位点特异性核酸酶(诸如大范围核酸酶、ZFN、TALEN、Argonaute蛋白(Argonaute蛋白的非限制性示例包括嗜热栖热菌Argonaute(Thermus thermophilus Argonaute，TtAgo)、嗜热古细菌Argonaute(Pyrococcus furiosus Argonaute，PfAgo)、格氏嗜盐碱杆菌Argonaute(Natronobacterium gregoryi Argonaute，NgAgo)、其同源物或其修饰版本)、Cas9核酸酶(RNA引导的核酸酶的非限制性示例包括Cas1、Cas1B、Cas2、Cas3、Cas4、Cas5、Cas6、Cas7、Cas8、Cas9(也称为Csn1和Csx12)、Cas10、Csy1、Csy2、Csy3、Cse1、Cse2、Csc1、Csc2、Csa5、Csn2、Csm2、Csm3、Csm4、Csm5、Csm6、Cmr1、Cmr3、Cmr4、Cmr5、Cmr6、Csb1、Csb2、Csb3、Csx17、Csx14、Csx10、Csx16、CsaX、Csx3、Csx1、Csx15、Csf1、Csf2、Csf3、Csf4、Cpf1、CasX、CasY、其同源物或其修饰版本))在基因组序列的靶位点诱导双链DNA断裂，然后通过自然过程修复。然后在切割位点发生序列修饰，这可能包括导致基因破坏或核酸序列整合的倒位、缺失或插入。在一个方面，本文提供的RNA引导的核酸酶选自由以下项组成的组：Cas1、Cas1B、Cas2、Cas3、Cas4、Cas5、Cas6、Cas7、Cas8、Cas9(也称为Csn1和Csx12)、Cas10、Csy1、Csy2、Csy3、Cse1、Cse2、Csc1、Csc2、Csa5、Csn2、Csm2、Csm3、Csm4、Csm5、Csm6、Cmr1、Cmr3、Cmr4、Cmr5、Cmr6、Csb1、Csb2、Csb3、Csx17、Csx14、Csx10、Csx16、CsaX、Csx3、Csx1、Csx15、Csf1、Csf2、Csf3、Csf4、Cpf1、CasX、CasY、其同源物或其修饰版本

在一个方面，本文所述的靶向编辑技术包括使用RNA引导的核酸酶。

尽管不受任何特定科学理论的限制，但CRISPR/CAS核酸酶是细菌和古细菌适应性免疫系统的一部分，通过以序列依赖性方式切割靶DNA来保护它们免受诸如病毒的核酸的入侵。免疫力通过在CRISPR基因座(CRISPR阵列)近端约20个核苷酸长的CRISPR重复序列之间整合入侵DNA的短片段(称为间隔子)来获得。一种充分描述的Cas蛋白是Cas9核酸酶(也称为Csn1)，它是酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)中2类II型CRISPR/Cas系统的一部分。参见Makarova等人Nature Reviews Microbiology(2015)doi:10.1038/nrmicro3569。Cas9包含在其氨基末端的RuvC样核酸酶结构域和位于蛋白质中间的HNH样核酸酶结构域。Cas9蛋白还含有PAM相互作用(PI)结构域、识别叶(REC)和BH结构域。Cpf1核酸酶是另一种II型系统，其作用方式与Cas9相似，但Cpf1不需要tracrRNA。参见Cong等人Science(2013)339:819-823；Zetsche等人，Cell(2015)doi:10.1016/j.cell.2015.09.038；美国专利公开号2014/0068797；美国专利公开号2014/0273235；美国专利公开号2015/0067922；美国专利号8,697,359；美国专利号8,771,945；美国专利号8,795,965；美国专利号8,865,406；美国专利号8,871,445；美国专利号8,889,356；美国专利号8,889,418；美国专利号8,895,308；和美国专利号8,906,616，其各自通过引用整体并入本文。

在一个方面，本公开提供并包括一种包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中AAV载体包含Cas9核酸酶基因、Htt特异性gRNA和供体序列。在一个方面，本公开提供并包括一种包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中AAV载体包含Cas9核酸酶基因、Htt特异性gRNA、供体序列和Dlx2基因序列。在一个方面，本公开提供并包括一种包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中AAV载体包含Cas9核酸酶基因、Htt特异性shRNA和供体序列。在一个方面，本公开提供并包括一种包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中AAV载体包含Cas9核酸酶基因、Htt特异性shRNA、供体序列和Dlx2基因序列。

如本文所用，术语“神经胶质”或“神经胶质细胞”是指CNS或PNS中的非神经元细胞。在一个方面，至少一种神经胶质细胞选自由以下项组成的组：至少一种少突胶质细胞、至少一种星形胶质细胞、至少一种NG2细胞、至少一种室管膜细胞和至少一种小神经胶质细胞。在一个方面，至少一种神经胶质细胞是至少一种少突胶质细胞。在一个方面，至少一种神经胶质细胞是至少一种NG2细胞。在一个方面，至少一种神经胶质细胞是至少一种室管膜细胞。在一个方面，至少一种神经胶质细胞是至少一种小神经胶质细胞。在一个方面，至少一种神经胶质细胞是至少一种反应性星形胶质细胞。在一个方面，至少一种星形胶质细胞是至少一种反应性星形胶质细胞。

如本文所用，术语“星形胶质细胞”是指作为脑的重要组成部分的神经胶质细胞。星形胶质细胞参与支持神经元功能，诸如突触形成和可塑性、钾缓冲、营养供应、神经或神经胶质递质的分泌和吸收，以及血脑屏障的维持。如本文所用，术语“反应性星形胶质细胞”是指星形胶质细胞在受伤或疾病后的异常状态。

如本文所用，术语“NG2细胞”或“多突胶质细胞”是指表达硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG4)和血小板衍生生长因子α受体(PDGFRA)的神经胶质细胞。

如本文所用，术语“神经元”或“神经元细胞”是指通过突触与其他神经元通讯的电可兴奋细胞。在一个方面，神经元选自由单极神经元、双极神经元、假单极神经元和多极神经元组成的组。在一个方面，神经元是单极神经元。在一个方面，神经元是双极神经元。在一个方面，神经元是假单极神经元。在一个方面，神经元是双极神经元。在一个方面，神经元选自由感觉神经元、运动神经元和中间神经元组成的组。在一个方面，神经元是感觉神经元。在一个方面，神经元是运动神经元。在一个方面，神经元是中间神经元。

如本文所用，术语“功能性神经元”是指可以执行生物过程的神经元。生物过程的示例包括但不限于信息的处理和传输以及经由化学和电突触的通讯。

如本文所用，术语“谷氨酸能神经元”是指产生谷氨酸并建立兴奋性突触的神经元亚类。如本文所用，术语“兴奋性突触”是指其中突触前神经元中的动作电位增加突触后细胞中动作电位发生概率的突触。如本文所用，术语“动作电位”或“神经冲动”是指穿过轴突膜的电脉冲。如本文所用，术语“轴突”或“神经纤维”是指传导动作电位的神经元。如本文所用，术语“GABA能神经元”是指产生GABA并建立抑制性突触的神经元子集。如本文所用，术语“GABA”或“γ-氨基丁酸”是指打开离子通道以允许带负电荷的氯离子流入细胞或带正电荷的钾离子流出细胞的化合物。如本文所用，术语“抑制性突触”是指使突触后神经元的膜电位远离生成动作电位的阈值的突触。如本文所用，术语“多巴胺能神经元”是指产生多巴胺的神经元子集。如本文所用，术语“多巴胺”是指一类神经递质。如本文所用，术语“神经递质”是指激活神经传递的一类内源性化学物质。如本文所用，术语“神经传递”是指由神经元的轴突末端释放神经递质的过程。如本文所用，术语“乙酰胆碱能神经元”或“胆碱能神经元”是指分泌乙酰胆碱的神经元子集。如本文所用，术语“乙酰胆碱”是指一类神经递质。如本文所用，术语“血清素能神经元”是指合成血清素的神经元子集。如本文所用，术语“血清素”是指一类神经递质。如本文所用，“肾上腺素能神经元”是指释放肾上腺素作为神经递质的神经元。如本文所用，术语“运动神经元”是指神经元的子集，其中细胞体位于运动皮层、脑干或脊髓中并且轴突投射到脊髓或脊髓外并直接或间接地控制肌肉和腺体。如本文所用，术语肽能神经元是指利用小肽分子作为其神经递质的神经元子集。

在一个方面，神经元是功能性神经元。在一个方面，功能性神经元选自由谷氨酸能神经元、GABA能神经元、多巴胺能神经元、胆碱能神经元、血清素能神经元、肾上腺素能神经元、运动神经元和肽能神经元组成的组。在一个方面，功能性神经元是谷氨酸能神经元。在一个方面，功能性神经元是GABA能神经元。在一个方面，功能性神经元是多巴胺能神经元。在一个方面，功能性神经元是胆碱能神经元。在一个方面，功能性神经元是血清素能神经元。在一个方面，功能性神经元是肾上腺素能神经元。在一个方面，功能性神经元是运动神经元。在一个方面，功能性神经元是肽能神经元。

如本文所用，术语“转化”或“转化的”是指将其物理形态和/或生物功能改变为不同的物理形态和/或不同的生物功能的细胞类型。在一个方面，本公开提供了至少一种神经胶质细胞向至少一种神经元的转化。在一个方面，至少一种神经胶质细胞向至少一种神经元的转化发生在CNS或PNS中。在一个方面，至少一种神经胶质细胞向至少一种神经元的转化发生在CNS中。在一个方面，至少一种神经胶质细胞向至少一种神经元的转化发生在PNS中。

在一个方面，本公开提供并包括一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，该hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中该hDlx2序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号序列、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供了一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸编码序列，该hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中该编码序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和具有SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含编码Dlx2蛋白的无远端同源框2(Dlx2)核酸编码序列，其中该编码序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)增强子；(c)嵌合内含子；(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)多聚腺苷酸化信号序列。

在一个方面，本公开提供并包括一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中该AAV载体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，该hDlx2序列具有SEQ ID NO:6的核酸序列，并且其中该序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中该AAV载体包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸编码序列，该hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，并且其中该编码序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ IDNO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种用于治疗有此需要的受试者的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中该AAV载体包含可操作地连接到表达控制元件的无远端同源框2(Dlx2)序列，该表达控制元件包含：(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)增强子；(c)嵌合内含子；(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，AAV载体包含编码AAV蛋白的核酸序列。在一个方面，AAV载体包含编码病毒蛋白的核酸序列。AAV蛋白和病毒蛋白的非限制性示例包括rep和cap蛋白。

无远端同源框2(Dlx2：也称为TES1)是Dlx基因家族的成员，并且是含有在前脑和颅面发育中起作用的基因的同源框。

在一个方面，Dlx2序列是人Dlx2(hDlx2)序列。在一个方面，Dlx2序列选自由以下项组成的组：黑猩猩Dlx2序列、倭黑猩猩Dlx2序列、红毛猩猩Dlx2序列、大猩猩Dlx2序列、猕猴Dlx2序列、狨猴Dlx2序列、卷尾猴Dlx2序列、狒狒Dlx2序列、长臂猿Dlx2序列和狐猴Dlx2序列。在一个方面，Dlx2序列是黑猩猩Dlx2序列。在一个方面，Dlx2序列是倭黑猩猩Dlx2序列。在一个方面，Dlx2序列是红毛猩猩Dlx2序列。在一个方面，Dlx2序列是大猩猩Dlx2序列。在一个方面，Dlx2序列是猕猴Dlx2序列。在一个方面，Dlx2序列是狨猴Dlx2序列。在一个方面，Dlx2序列是卷尾猴Dlx2序列。在一个方面，Dlx2序列是狒狒Dlx2序列。在一个方面，Dlx2序列是长臂猿Dlx2序列。在一个方面，Dlx2序列是狐猴Dlx2序列。

在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少70％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少75％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少80％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少85％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少90％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少91％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少92％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少93％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少94％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少95％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少96％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少97％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少98％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少99％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少99.5％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少99.8％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。在一个方面，Dlx2核酸序列包含与以下100％相同的序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。

在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少70％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少75％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少80％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少85％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少90％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少91％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少92％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少93％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少94％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少95％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少96％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少97％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少98％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少99％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少99.5％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少99.8％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下至少99.9％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。在一个方面，核酸编码序列编码包含与以下100％相同或相似的氨基酸序列的Dlx2蛋白：SEQ ID NO:10。

神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein，GFAP)；也称为神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein)是III型中间丝状蛋白家族的成员，其在中枢神经系统中表达并且在细胞通讯和血脑屏障功能中发挥作用。

在一个方面，启动子选自由以下项组成的组：GFAP启动子、Sox9启动子、S100b启动子、A1dh1l1启动子、脂质运载蛋白2(Lcn2)启动子、谷氨酰胺合成酶启动子、水通道蛋白-4(AQP4)启动子、少突胶质细胞转录因子(Olig2)启动子和突触蛋白启动子、NG2启动子、离子钙结合衔接分子1(Iba1)启动子、分化簇86(CD86)启动子、血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)启动子、血小板衍生生长因子受体β(PDGFRB)启动子、延伸因子1-α(EF1a)启动子、CAG启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、泛素启动子。在一个方面，启动子是GFAP启动子。在一个方面，启动子是Sox9启动子。在一个方面，启动子是Lcn2启动子。在一个方面，启动子是谷氨酰胺合成酶启动子。在一个方面，启动子是AQP4启动子。在一个方面，启动子是Olig2启动子。在一个方面，启动子是突触蛋白启动子。在一个方面，启动子是Iba1启动子。在一个方面，启动子是CD86启动子。在一个方面，启动子是PDGFRA启动子。在一个方面，启动子是PDGFRB启动子。在一个方面，启动子是EF1a启动子。在一个方面，启动子是CAG启动子。在一个方面，启动子是CMV启动子。在一个方面，启动子是泛素启动子。在一个方面，泛素启动子选自由U6、H1、7SK和U1组成的组。在一个方面，泛素启动子是U6。在一个方面，泛素启动子是H1。在一个方面，泛素启动子是H1。在一个方面，泛素启动子是7SK。在一个方面，泛素启动子是U1。在一个方面，U6包含SEQ ID NO:17的核酸序列。

在一个方面，GFAP启动子是指导称为神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的蛋白质在细胞中的星形胶质细胞特异性表达的启动子。在一个方面，GFAP启动子序列是人GFAP(hGFAP)启动子序列。在一个方面，GFAP启动子选自由Gfa681、Gfa1.6和hGFA2.2组成的组。在一个方面，GFAP启动子是Gfa681。在一个方面，GFAP启动子是Gfa1.6。在一个方面，GFAP启动子是hGFA2.2。在一个方面，GFAP Gfa681是SEQ ID NO:3。在一个方面，GFAP Gfa1.6是SEQ IDNO:4。在一个方面，hGFa2.2是SEQ ID NO:12。在一个方面，GFAP启动子选自由以下项组成的组：SEQ ID NO:3、4和12。在一个方面，GFAP启动子是SEQ ID NO:3。在一个方面，GFAP启动子是SEQ ID NO:4。在一个方面，GFAP启动子是SEQ ID NO:12。

如本文所用，“pGfa681”是指大小为681bp的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子截短序列。“pGfa681”和“Gfa681”在本文中可互换使用。

在一个方面，GFAP启动子序列选自由以下项组成的组：黑猩猩GFAP启动子序列、倭黑猩猩GFAP启动子序列、红毛猩猩GFAP启动子序列、大猩猩GFAP启动子序列、猕猴GFAP启动子序列、狨猴GFAP启动子序列、卷尾猴GFAP启动子序列、狒狒GFAP启动子序列、长臂猿GFAP启动子序列和狐猴GFAP启动子序列。在一个方面，GFAP启动子序列是黑猩猩GFAP启动子序列。在一个方面，GFAP启动子序列是倭黑猩猩GFAP启动子序列。在一个方面，GFAP启动子序列是红毛猩猩GFAP启动子序列。在一个方面，GFAP启动子序列是大猩猩GFAP启动子序列。在一个方面，GFAP启动子序列是猕猴GFAP启动子序列。在一个方面，GFAP启动子序列是狨猴GFAP启动子序列。在一个方面，GFAP启动子序列是卷尾猴GFAP启动子序列。在一个方面，GFAP启动子序列是狒狒GFAP启动子序列。在一个方面，GFAP启动子序列是长臂猿GFAP启动子序列。在一个方面，GFAP启动子序列是狐猴GFAP启动子序列。

在一个方面，GFAP启动子序列包含至少100个核苷酸。在一个方面，GFAP启动子包含至少500个核苷酸。在另一个方面，GFAP启动子包含至少1000个核苷酸。在又一个方面，GFAP启动子包含至少1500个核苷酸。

本领域理解启动子序列的片段可以起到驱动可操作连接的核酸分子转录的作用。例如，但不限于，如果1000个核苷酸的启动子被截短至500个核苷酸，并且该500个核苷酸的片段能够驱动转录，则该500个核苷酸的片段被称为“功能片段”。

在一个方面，启动子包含至少10个核苷酸。在一个方面，启动子包含至少50个核苷酸。在一个方面，启动子包含至少100个核苷酸。在一个方面，内含子包含至少150个核苷酸。在一个方面，启动子包含至少200个核苷酸。在一个方面，启动子包含至少250个核苷酸。在一个方面，启动子包含至少300个核苷酸。在一个方面，启动子包含至少350个核苷酸。在一个方面，启动子包含至少400个核苷酸。在一个方面，启动子包含至少450个核苷酸。在一个方面，启动子包含至少500个核苷酸。在一个方面，启动子包含介于50个核苷酸与7500个核苷酸之间。在一个方面，启动子包含介于50个核苷酸与5000个核苷酸之间。在一个方面，启动子包含介于50个核苷酸与2500个核苷酸之间。在一个方面，启动子包含介于50个核苷酸与1000个核苷酸之间。在一个方面，启动子包含介于50个核苷酸与500个核苷酸之间。在一个方面，启动子包含介于10个核苷酸与7500个核苷酸之间。在一个方面，启动子包含介于10个核苷酸与5000个核苷酸之间。在一个方面，启动子包含介于10个核苷酸与2500个核苷酸之间。在一个方面，启动子包含介于10个核苷酸与1000个核苷酸之间。在一个方面，启动子包含介于10个核苷酸与500个核苷酸之间

在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少70％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少75％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少80％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少85％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少90％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少91％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少92％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少93％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少94％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少95％相同的序列：SEQID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少96％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少97％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少98％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少99％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少99.5％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少99.8％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。在一个方面，GFAP启动子核酸序列包含与选自由以下项组成的组的序列100％相同的序列：SEQ ID NO:3、4、12及其功能片段。

在一个方面，本文提供的核酸序列是密码子优化的。

在一个方面，本文提供的核酸序列是CpG位点耗尽的。

如本文所用，术语“脑”是指充当神经系统中枢的器官。在一个方面，脑包含大脑、大脑皮层、小脑和/或脑干。

如本文所用，术语“大脑皮层”是指大脑神经组织的外层。

如本文所用，术语“纹状体(striatum)”或“纹状体(corpus striatum)”是指前脑皮层下基底神经节中的神经元簇，并且包含腹侧纹状体和背侧纹状体。

如本文所用，术语“黑质”是指中脑皮层下基底神经节中的神经元簇并且包含致密部和网状部。

如本文所用，术语“前脑”是指脑的最前部。

如本文所用，术语“壳核”是指前脑基底的圆形结构并且是背侧纹状体的组成部分。

如本文所用，术语“尾状核”是指前脑基底的结构并且是背侧纹状体的组成部分。

如本文所用，术语“皮层下基底神经节”是指脑的大脑半球深部中的神经元簇。

如本文所用，术语“脊髓”是指在将神经信号从运动皮层传递到身体中起作用的结构。

如本文所用，术语“运动皮层”是指大脑皮层额叶中参与自主运动的计划、控制和执行的区域。

在一个方面，本文提供的方法将反应性星形胶质细胞转化为脑中的功能性神经元。在一个方面，本文提供的方法将反应性星形胶质细胞转化为脑的大脑皮层中的功能性神经元。在一个方面，本文提供的方法将反应性星形胶质细胞转化为脑的纹状体中的功能性神经元。在一个方面，本文提供的方法将反应性星形胶质细胞转化为脑的背侧纹状体中的功能性神经元。在一个方面，本文提供的方法将反应性星形胶质细胞转化为脑的脊髓中的功能性神经元。在一个方面，本文提供的方法将反应性星形胶质细胞转化为脑的壳核中的功能性神经元。在一个方面，本文提供的方法将反应性星形胶质细胞转化为脑的尾状核中的功能性神经元。在一个方面，本文提供的方法将反应性星形胶质细胞转化为脑的黑质中的功能性神经元。

延伸因子1α(EF-1α；也称为eEF1a1)是延伸因子1复合物的α亚基的同种型。该复合物参与将氨酰tRNA酶促递送至核糖体。EF-1α同种型在脑、胎盘、肺、肝、肾和胰腺中表达。

在一个方面，来自EF-1α启动子的增强子序列是来自EF-1α启动子的人增强子序列。在一个方面，来自EF-1α启动子的增强子序列选自由以下项组成的组：来自EF-1α启动子的黑猩猩增强子序列、来自EF-1α启动子的倭黑猩猩增强子序列、来自EF-1α启动子的红毛猩猩增强子序列、来自EF-1α启动子的大猩猩增强子序列、来自EF-1α启动子的猕猴增强子序列、来自EF-1α启动子的狨猴增强子序列、来自EF-1α启动子的卷尾猴增强子序列、来自EF-1α启动子的狒狒增强子序列、来自EF-1α启动子的长臂猿增强子序列和来自EF-1α启动子的狐猴增强子序列。在一个方面，来自EF-1α启动子的增强子序列是来自EF-1α启动子的黑猩猩增强子序列。在一个方面，来自EF-1α启动子的增强子序列是来自EF-1α启动子的倭黑猩猩增强子序列。在一个方面，来自EF-1α启动子的增强子序列是来自EF-1α启动子的红毛猩猩增强子序列。在一个方面，来自EF-1α启动子的增强子序列是来自EF-1α启动子的大猩猩增强子序列。在一个方面，来自EF-1α启动子的增强子序列是来自EF-1α启动子的猕猴增强子序列。在一个方面，来自EF-1α启动子的增强子序列是来自EF-1α启动子的狨猴增强子序列。在一个方面，来自EF-1α启动子的增强子序列是来自EF-1α启动子的卷尾猴增强子序列。在一个方面，来自EF-1α启动子的增强子序列是来自EF-1α启动子的狒狒增强子序列。在一个方面，来自EF-1α启动子的增强子序列是来自EF-1α启动子的长臂猿增强子序列。在一个方面，来自EF-1α启动子的增强子序列是来自EF-1α启动子的狐猴增强子序列。

在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少70％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少75％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少80％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少85％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少90％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少91％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少92％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少93％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少94％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少95％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少96％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少97％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少98％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少99％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少99.5％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少99.8％相同的序列：SEQID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。在一个方面，来自EF-1α启动子核酸序列的增强子包含与以下100％相同的序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。

巨细胞病毒(CMV)是疱疹病毒目(Herpesvirale)中的一个病毒属。

在一个方面，来自CMV的增强子序列是来自CMV的人增强子序列。在一个方面，来自CMV的增强子序列选自由以下项组成的组：来自CMV的黑猩猩增强子序列、来自CMV的倭黑猩猩增强子序列、来自CMV的红毛猩猩增强子序列、来自CMV的大猩猩增强子序列、来自CMV的猕猴增强子序列、来自CMV的狨猴增强子序列、来自CMV的卷尾猴增强子序列、来自CMV的狒狒增强子序列、来自CMV的长臂猿增强子序列和来自CMV的狐猴增强子序列。在一个方面，来自CMV的增强子序列是来自CMV的黑猩猩增强子序列。在一个方面，来自CMV的增强子序列是来自CMV的倭黑猩猩增强子序列。在一个方面，来自CMV的增强子序列是来自CMV的红毛猩猩增强子序列。在一个方面，来自CMV的增强子序列是来自CMV的大猩猩增强子序列。在一个方面，来自CMV的增强子序列是来自CMV的猕猴增强子序列。在一个方面，来自CMV的增强子序列是来自CMV的狨猴增强子序列。在一个方面，来自CMV的增强子序列是来自CMV的卷尾猴增强子序列。在一个方面，来自CMV的增强子序列是来自CMV的狒狒增强子序列。在一个方面，来自CMV的增强子序列是来自CMV的长臂猿增强子序列。在一个方面，来自CMV的增强子序列是来自CMV的狐猴增强子序列。

在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少70％相同的序列：SEQ IDNO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少75％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少80％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少85％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少90％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少91％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少92％相同的序列：SEQ IDNO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少93％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少94％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少95％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少96％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少97％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少98％相同的序列：SEQ IDNO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少99％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少99.5％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少99.8％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。在一个方面，来自CMV核酸序列的增强子包含与以下100％相同的序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。

在一个方面，增强子选自由来自EF1-α启动子的增强子和CMV增强子组成的组。在一个方面，增强子来自EF1-α启动子。在一个方面，增强子是CMV增强子。

内含子可分为至少五类，包括：剪接体内含子；转移RNA内含子；I组内含子；II组内含子；和III组内含子。内含子可以通过合成产生自、改变自或源自已知或天然存在的内含子序列或其他内含子序列。内含子还可以包括包含两个或更多个异源序列的组合的嵌合内含子。因此，本申请的内含子可以包括在组成上与已知或本文提供的其他内含子序列相似但不相同的内含子序列的变体。在一个方面，内含子包含至少10个核苷酸。在一个方面，内含子包含至少50个核苷酸。在一个方面，内含子包含至少100个核苷酸。在一个方面，内含子包含至少150个核苷酸。在一个方面，内含子包含至少200个核苷酸。在一个方面，内含子包含至少250个核苷酸。在一个方面，内含子包含至少300个核苷酸。在一个方面，内含子包含至少350个核苷酸。在一个方面，内含子包含至少400个核苷酸。在一个方面，内含子包含至少450个核苷酸。在一个方面，内含子包含至少500个核苷酸。在一个方面，内含子包含介于50个核苷酸与7500个核苷酸之间。在一个方面，内含子包含介于50个核苷酸与5000个核苷酸之间。在一个方面，内含子包含介于50个核苷酸与2500个核苷酸之间。在一个方面，内含子包含介于50个核苷酸与1000个核苷酸之间。在一个方面，内含子包含介于50个核苷酸与500个核苷酸之间。在一个方面，内含子包含介于10个核苷酸与7500个核苷酸之间。在一个方面，内含子包含介于10个核苷酸与5000个核苷酸之间。在一个方面，内含子包含介于10个核苷酸与2500个核苷酸之间。在一个方面，内含子包含介于10个核苷酸与1000个核苷酸之间。在一个方面，内含子包含介于10个核苷酸与500个核苷酸之间。

如本文所用，“CI”是指由来自人β-球蛋白基因第一内含子的5'-供体位点和来自免疫球蛋白基因重链可变区内含子的分支和3'-受体位点构成的嵌合内含子。

如本文所用，“CRGI”是指在CAG启动子中相似的兔β-球蛋白和鸡β肌动蛋白的嵌合内含子。

在一个方面，嵌合内含子核酸序列选自由SEQ ID NO:5和19组成的组。在一个方面，嵌合内含子核酸序列是SEQ ID NO:5。在一个方面，嵌合内含子核酸序列是SEQ ID NO:19。

在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少70％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少75％相同的序列：SEQID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少80％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少85％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少90％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少91％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少92％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少93％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少94％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少95％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少96％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少97％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少98％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少99％相同的序列：SEQ IDNO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少99.5％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少99.8％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下100％相同的序列：SEQ ID NO:5，或其互补序列。

在一个方面，嵌合内含子是在CAG启动子中相似的兔β-球蛋白和鸡β肌动蛋白的嵌合内含子(CRGI)。在一个方面，CRGI序列包含SEQ ID NO:19。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少70％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少75％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少80％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少85％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少90％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少91％相同的序列：SEQID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少92％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少93％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少94％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少95％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少96％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少97％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少98％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少99％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少99.5％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少99.8％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。在一个方面，嵌合内含子核酸序列包含与以下100％相同的序列：SEQ ID NO:19，或其互补序列。

土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)是创建增强病毒载体中递送基因的表达的三级结构的DNA序列。

如本文所用，“WPRE”是指土拨鼠肝炎病毒(WHV)转录后调控元件。

如本文所用，“oPRE”是指WPRE的优化版本。

在一个方面，WPRE核酸序列选自由以下项组成的组：SEQ ID NO:7和18。在一个方面，WPRE核酸序列是SEQ ID NO:7。在一个方面，WPRE核酸序列是SEQ ID NO:18。

在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少70％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少75％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少80％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少85％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少90％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少91％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少92％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少93％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少94％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少95％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少96％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少97％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少98％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少99％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少99.5％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少99.8％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下100％相同的序列：SEQ ID NO:7，或其互补序列。

在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少70％相同的序列：SEQ ID NO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少75％相同的序列：SEQ IDNO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少80％相同的序列：SEQ ID NO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少85％相同的序列：SEQ ID NO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少90％相同的序列：SEQ ID NO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少91％相同的序列：SEQ IDNO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少92％相同的序列：SEQ IDNO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少93％相同的序列：SEQ IDNO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少94％相同的序列：SEQ IDNO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少95％相同的序列：SEQ IDNO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少96％相同的序列：SEQ IDNO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少97％相同的序列：SEQ IDNO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少98％相同的序列：SEQ IDNO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少99％相同的序列：SEQ IDNO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少99.5％相同的序列：SEQID NO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少99.8％相同的序列：SEQ ID NO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:18，或其互补序列。在一个方面，WPRE核酸序列包含与以下100％相同的序列：SEQ ID NO:18，或其互补序列。

SV40多聚腺苷酸化信号序列(也称为SV40 PolyA；猿猴病毒40PolyA；和PolyA)是可以终止转录并在信使RNA(mRNA)的3'端添加PolyA尾巴的DNA序列。

hGH多聚腺苷酸化信号序列(也称为hGH PolyA)是可以终止转录并在信使RNA(mRNA)的3'端添加PolyA尾巴的DNA序列。

如本文所用，“SV40pA”是指SV40病毒的多聚腺苷酸化信号。

如本文所用，“bGHpA”是指牛生长激素的多聚腺苷酸化信号。

如本文所用，“PolyA尾巴”是指仅含核碱基腺嘌呤的一段RNA。在一个方面，从本文提供的AAV载体构建体转录的RNA分子包含PolyA尾巴。在一个方面，PolyA尾巴包含至少两个腺嘌呤。在一个方面，PolyA尾巴包含至少十个腺嘌呤。在一个方面，PolyA尾巴包含至少50个腺嘌呤。在一个方面，PolyA尾巴包含至少100个腺嘌呤。在一个方面，PolyA尾巴包含至少150个腺嘌呤。在一个方面，PolyA尾巴包含至少200个腺嘌呤。在一个方面，PolyA尾巴包含至少250个腺嘌呤。在一个方面，PolyA尾巴包含介于50个腺嘌呤与300个腺嘌呤之间。

在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少70％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少75％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少80％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少85％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少90％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少91％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少92％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少93％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少94％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少95％相同的序列：SEQID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少96％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少97％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少98％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少99％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少99.5％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少99.8％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。在一个方面，SV40多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下100％相同的序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。

在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少70％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少75％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少130％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少135％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少90％相同的序列：SEQ IDNO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少91％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少92％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少93％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少94％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少95％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少96％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少97％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少98％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少99％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少99.5％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少99.13％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。在一个方面，hGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下100％相同的序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。

在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少70％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少75％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少80％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少85％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少90％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少91％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少92％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少93％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少94％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少95％相同的序列：SEQID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少96％相同的序列：SEQ IDNO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少97％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少98％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少99％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少99.5％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少99.13％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下至少99.9％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。在一个方面，bGH多聚腺苷酸化信号核酸序列包含与以下100％相同的序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。

如本文所用，术语“中枢神经系统”或“CNS”是指双侧对称动物的脑和脊髓。CNS还包括视网膜、视神经、嗅觉神经和嗅觉上皮细胞。

如本文所用，术语“周围神经系统”或“PNS”是指脑和脊髓之外的神经和神经节，不包括视网膜、视神经、嗅觉神经和嗅觉上皮细胞。在一个方面，周围神经系统分为躯体神经系统和自主神经系统。

如本文所用，术语“躯体神经系统”是指与身体运动的自主控制相关的PNS部分。

如本文所用，术语“自主神经系统”是指调节内部器官功能的PNS部分

如本文所用，术语“GFAP阳性”是指具有可使用本领域标准技术检测的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的蛋白质积累或可使用本领域标准技术检测的GFAP mRNA表达积累的细胞。在一个方面，神经胶质细胞是GFAP阳性的。

如本文所用，术语“可检测的”是指可识别的蛋白质或mRNA积累。

可以使用抗体鉴定蛋白质积累。测量蛋白质积累的非限制性示例包括Western印迹、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫沉淀和免疫荧光。本文提供的抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体。可以使用本领域熟知的方法生成本文提供的对蛋白质具有特异性结合亲和力的抗体。可以使用本领域已知的方法将本文提供的抗体连接至固体支持物(诸如微量滴定板)。

如本文所用，术语“感染复数”和“MOI”是指在感染期间每个细胞添加的病毒体数量。

如本文所用，术语“病毒体”指宿主细胞外的病毒感染形式。

如本文所用，术语“神经系统病症”是指中枢神经系统或周围神经系统中的病症、病、病患、损伤或疾病。神经系统病症的非限制性示例可以在Neurological Disorders:course and treatment,第2版(2002)(Academic Press Inc.)和Christopher Goetz,Textbook of Clinical Neurology,第3版(2007)(Saunders)中找到。

如本文所用，术语“损伤”是指对中枢神经系统或周围神经系统的损伤。

在一个方面，神经系统病症选自由以下项组成的组：阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、亨廷顿病、癫痫、物理性损伤、卒中、脑动脉瘤、外伤性脑损伤、脑震荡、肿瘤、炎症、感染、共济失调、脑萎缩、脊髓萎缩、多发性硬化症、外伤性脊髓损伤、缺血性或出血性脊髓病(脊髓病)、全脑缺血、缺氧缺血性脑病、栓塞、纤维软骨栓塞性脊髓病、血栓形成、肾病、慢性炎性疾病、脑膜炎、和脑静脉窦血栓形成。在一个方面，神经系统病症是阿尔茨海默病。在一个方面，神经系统病症是帕金森病。在一个方面，神经系统病症是ALS。在一个方面，神经系统病症是亨廷顿病。在一个方面，神经系统病症是癫痫。在一个方面，神经系统病症是物理性损伤。在一个方面，神经系统病症是卒中。在一个方面，神经系统病症是缺血性卒中。在一个方面，神经系统病症是出血性卒中。在一个方面，神经系统病症是脑动脉瘤。在一个方面，神经系统病症是外伤性脑损伤。在一个方面，神经系统病症是脑震荡。在一个方面，神经系统病症是肿瘤。在一个方面，神经系统病症是炎症。在一个方面，神经系统病症是感染。在一个方面，神经系统病症是共济失调。在一个方面，神经系统病症是脑萎缩。在一个方面，神经系统病症是脊髓萎缩。在一个方面，神经系统病症是多发性硬化症。在一个方面，神经系统病症是外伤性脊髓损伤。在一个方面，神经系统病症是缺血性或出血性脊髓病(脊髓病)。在一个方面，神经系统病症是全脑缺血。在一个方面，神经系统病症是缺氧缺血性脑病。在一个方面，神经系统病症是栓塞。在一个方面，神经系统病症是纤维软骨栓塞性脊髓病。在一个方面，神经系统病症是血栓形成。在一个方面，神经系统病症是肾病。在一个方面，神经系统病症是慢性炎性疾病。在一个方面，神经系统病症是脑膜炎。在一个方面，神经系统病症是脑静脉窦血栓形成。

在一个方面，神经系统病症包括对CNS或PNS的损伤。在一个方面，神经系统病症包括对CNS的损伤。在一个方面，神经系统病症包括对PNS的损伤。

在一个方面，本公开提供并包括一种将活人脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中该AAV包含DNA载体构建体，该DNA载体构建体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，该hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中该序列可操作地连接到调控元件，该调控元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种将活人脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中该AAV包含DNA载体构建体，该DNA载体构建体包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸编码序列，该hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中该编码序列可操作地连接到表达控制元件，该表达控制元件包含：(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本公开提供并包括一种将有此需要的受试者的神经胶质细胞转化为神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)递送至有此需要的受试者，其中该AAV包含DNA载体构建体，该DNA载体构建体包含无远端同源框2(Dlx2)序列，该Dlx2序列可操作地连接到表达控制元件，该表达控制元件包含：(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)增强子；(c)嵌合内含子；(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)多聚腺苷酸化信号序列，其中该载体能够将有此需要的受试者的至少一种神经胶质细胞转化为神经元。

在一个方面，本公开提供并包括一种治疗有此需要的受试者的神经系统病症的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)递送至受试者，其中给予有此需要的受试者的AAV包含DNA载体构建体，该DNA载体构建体包含可操作地连接到表达控制元件的无远端同源框2(Dlx2)序列，该表达控制元件包含：(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；(b)增强子；(c)嵌合内含子；(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(e)多聚腺苷酸化信号。

在一个方面，本文提供的方法能够将至少一种神经胶质细胞转化为神经元。在一个方面，本文提供的方法将至少一种神经胶质细胞转化为神经元。

神经源性分化因子1(NeuroD1；也称为β2)是一种基本螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子，其与其他bHLH蛋白形成异二聚体以激活含有称为E-盒的DNA序列的基因转录。

Achaete-scute家族BHLH转录因子1(Ascl1；也称为ASH1、HASH1、MASH-1和bHLHa46)编码转录因子基本螺旋-环-螺旋家族的成员，并且是在神经元承诺和分化中起作用的基因。

胰岛素基因增强子蛋白(ISL1；也称为ISL LIM同源框1和ISLET1)是一种编码转录因子的基因，该转录因子含有两个N末端LIM结构域和一个C末端同源结构域。编码的蛋白质在朗格汉斯胰岛的胚胎发生中起作用。

LIM-同源框3(LHX3；也称为LIM3和CPHD3)基因编码来自具有独特的富含半胱氨酸的锌结合结构域(LIM结构域)的蛋白质家族的蛋白质。

亨廷顿蛋白(Htt；也称为亨廷顿病基因)基因编码亨廷顿蛋白。野生型含有6-35个谷氨酰胺残基，并且突变型Htt含有超过36个谷氨酰胺残基。

在一个方面，本文提供的方法使用根据本公开的包含Dlx2编码序列的AAV载体。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列的AAV载体与包含第二转录因子编码序列的第二AAV载体的组合。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列和第二转录因子编码序列的AAV载体。在一个方面，第二转录因子选自由NeuroD1、Ascl1、ISL1和LHX3组成的组。在一个方面，第二转录因子是NeuroD1。在一个方面，第二转录因子是Ascl1。在一个方面，第二转录因子是ISL1。在一个方面，第二转录因子是LHX3。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列和第二Dlx2编码序列的AAV载体。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列的AAV载体与包含Dlx2编码序列的第二AAV载体的组合。

在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列的AAV载体与包含靶向Htt的shRNA序列的AAV载体的组合。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列的AAV载体与包含靶向Htt的shRNA序列和靶向Htt的第二shRNA序列的AAV载体的组合。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列的AAV载体与包含靶向Htt的shRNA序列、靶向Htt的第二shRNA序列和靶向Htt的第三shRNA的AAV载体的组合。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列和靶向Htt的shRNA序列的AAV载体。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列和靶向Htt的shRNA序列以及靶向Htt的第二shRNA序列的AAV载体。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列和靶向Htt的shRNA序列、靶向Htt的第二shRNA序列和靶向Htt的第三shRNA的AAV载体。在一个方面，本文提供的方法使用包含靶向Htt的shRNA序列、靶向Htt的第二shRNA序列和靶向Htt的第三shRNA序列的AAV载体。

在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列与靶向Htt的ASO序列的组合的AAV载体。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列与靶向Htt的ASO序列和靶向Htt的第二ASO序列的组合的AAV载体。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列与靶向Htt的ASO序列、靶向Htt的第二ASO序列和靶向Htt的第三ASO的组合的AAV载体。

在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列与靶向Htt的siRNA序列的组合的AAV载体。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列与靶向Htt的siRNA序列和靶向Htt的第二siRNA序列的组合的AAV载体。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列与靶向Htt的siRNA序列、靶向Htt的第二siRNA序列和靶向Htt的第三siRNA的组合的AAV载体。

在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列的AAV载体与包含靶向Htt的miRNA序列的AAV载体的组合。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列的AAV载体与包含靶向Htt的miRNA序列和靶向Htt的第二miRNA序列的AAV载体的组合。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列的AAV载体与包含靶向Htt的miRNA序列、靶向Htt的第二miRNA序列和靶向Htt的第三miRNA的AAV载体的组合。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列和靶向Htt的miRNA序列的AAV载体。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列和靶向Htt的miRNA序列以及靶向Htt的第二miRNA序列的AAV载体。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列和靶向Htt的miRNA序列、靶向Htt的第二miRNA序列和靶向Htt的第三miRNA的AAV载体。

在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列的AAV载体与包含靶向Htt和CAS核酸酶的gRNA序列的AAV载体的组合。在一个方面，本文提供的方法使用包含Dlx2编码序列和靶向Htt和CAS核酸酶的gRNA序列的AAV载体。

在一个方面，通过评估NeuN、双皮质素(DCX)、β3-微管蛋白、(神经丝200)NF-200、(微管相关蛋白2)MAP2、离子钙结合衔接分子(Iba1)的转录水平和蛋白质水平来测量本文提供的AAV载体的功能性。

如本文所用，术语“NeuN”或“Fox-3”或“Rbfox2”或“六核糖核苷酸结合蛋白-3”是指与秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)中的性别决定基因的蛋白质产物同源的蛋白质，并且是神经元核抗原。

如本文所用，术语“DCX”或“doubling”或“lissencephalin-X”是指由胚胎和成人皮层结构中的神经元前体细胞和未成熟神经元表达的微管相关蛋白。

如本文所用，术语“β3-微管蛋白”或“III类β-微管蛋白”或“β-微管蛋白III”是指在神经元中发现的微管蛋白家族的微管元件。

如本文所用，术语“NF-200”是指一类蛋白质，其是在神经元细胞质中发现的IV型中间丝状蛋白。

如本文所用，术语“MAP2”是指属于微管相关蛋白家族并且在神经元发育期间在确定和稳定神经元形态中起作用的蛋白质。

如本文所用，术语“Iba1”是指小胶质细胞巨噬细胞特异性钙结合蛋白。

在一个方面，本文提供的方法结合基因编辑技术将神经胶质细胞转化为神经元。在一个方面，基因编辑技术靶向突变型Htt。在一个方面，基因编辑技术选自由siRNA、miRNA、ASO和CRISPR/CAS组成的组。在一个方面，基因编辑技术是siRNA。在一个方面，基因编辑技术是miRNA。在一个方面，基因编辑技术是ASO。在一个方面，基因编辑技术是CRISPR/CAS。在一个方面，本文提供的组合物能够将至少一种神经胶质细胞转化为神经元。在一个方面，本文提供的组合物将至少一种神经胶质细胞转化为神经元

如本文所用，术语“哺乳动物”是指分类为哺乳动物纲的任何物种。

如本文所用，术语“人”是指智人(Homo sapiens)。在一个方面，人患有神经病症。

如本文所用，术语“活人”是指具有心脏、呼吸和脑活动的人。

如本文所用，术语“非人灵长类动物”是指分类为灵长目但不是智人的任何物种或亚种。非人灵长类动物的非限制性示例包括黑猩猩、倭黑猩猩、红毛猩猩、大猩猩、猕猴、狨猴、卷尾猴、狒狒、长臂猿和狐猴。

如本文所用，术语“递送(delivering)”或“递送(delivery)”是指用本文提供的AAV载体或组合物治疗哺乳动物。在一个方面，将本文提供的AAV载体或组合物递送给有此需要的受试者。在一个方面，配制本文提供的AAV载体或组合物以递送给有此需要的受试者。在一个方面，递送包括局部递送。在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物被配制用于局部递送。在一个方面，递送包括全身递送。在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物被配制用于全身递送。在一个方面，递送包括将本文提供的AAV载体或组合物注射到有此需要的受试者中。在一个方面，递送选自由以下项组成的组：腹膜内、肌肉内、静脉内、鞘内、大脑内、颅内、脑的侧脑室内、小脑延髓池内、玻璃体内、视网膜下内、实质内、鼻内或口服施用。在一个方面，递送包括腹膜内递送。在一个方面，递送包括肌肉内递送。在一个方面，递送包括静脉内递送。在一个方面，递送包括鞘内递送。在一个方面，递送包括大脑内递送。在一个方面，递送包括颅内递送。在一个方面，递送包括脑的侧脑室内递送。在一个方面，递送包括小脑延髓池内递送。在一个方面，递送包括玻璃体内递送。在一个方面，递送包括视网膜下内递送。在一个方面，递送包括实质内递送。在一个方面，递送包括鼻内递送。在一个方面，递送包括口服施用。

如本文所用，术语“注射”是指在压力和用力下递送本文提供的AAV载体或组合物。作为非限制性示例，注射可包括使用注射器和针头。

在一个方面，将本文提供的AAV载体或组合物注射到受试者脑中。在一个方面，将AAV载体或组合物注射到受试者的大脑皮层中。在一个方面，将本文提供的AAV载体或组合物注射到脊髓或受试者中。在一个方面，将AAV载体或组合物注射到受试者的纹状体中。在一个方面，将AAV载体或组合物注射到受试者的背侧纹状体中。在一个方面，将AAV载体或组合物注射到受试者的壳核中。在一个方面，将AAV载体或组合物注射到受试者的尾状核中。在一个方面，将AAV载体或组合物注射到受试者的黑质中。

在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在脑中扩散介于约1％与约100％之间。在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在脑中扩散介于约1％与约10％之间、介于1％与约20％之间、介于1％与约30％之间、介于10％与约20％之间、介于10％与约30％之间、介于约10％与约40％之间、介于约20％与约30％之间、介于约20％与约40％之间、介于约20％与约50％之间、介于约30％与约40％之间、介于约30％与约50％之间、介于约30％与约60％之间、介于约40％与约50％之间、介于约40％与约60％之间、介于约40％与约70％之间、介于约50％与约60％之间、介于约50％与约70％之间、介于约50％与约80％之间、介于约60％与约70％之间、介于约60％与约80％之间、介于约60％与约90％之间、介于约70％与约80％之间、介于约70％与约90％之间、介于约70％与约100％之间、介于约80％与约90％之间、介于约80％与约100％之间或介于约90％与约100％之间。

在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在大脑皮层中扩散介于约1％与约100％之间。在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在大脑皮层中扩散介于约1％与约10％之间、介于1％与约20％之间、介于1％与约30％之间、介于10％与约20％之间、介于10％与约30％之间、介于约10％与约40％之间、介于约20％与约30％之间、介于约20％与约40％之间、介于约20％与约50％之间、介于约30％与约40％之间、介于约30％与约50％之间、介于约30％与约60％之间、介于约40％与约50％之间、介于约40％与约60％之间、介于约40％与约70％之间、介于约50％与约60％之间、介于约50％与约70％之间、介于约50％与约80％之间、介于约60％与约70％之间、介于约60％与约80％之间、介于约60％与约90％之间、介于约70％与约80％之间、介于约70％与约90％之间、介于约70％与约100％之间、介于约80％与约90％之间、介于约80％与约100％之间或介于约90％与约100％之间。

在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在脊髓中扩散介于约1％与约100％之间。在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在脊髓中扩散介于约1％与约10％之间、介于1％与约20％之间、介于1％与约30％之间、介于10％与约20％之间、介于10％与约30％之间、介于约10％与约40％之间、介于约20％与约30％之间、介于约20％与约40％之间、介于约20％与约50％之间、介于约30％与约40％之间、介于约30％与约50％之间、介于约30％与约60％之间、介于约40％与约50％之间、介于约40％与约60％之间、介于约40％与约70％之间、介于约50％与约60％之间、介于约50％与约70％之间、介于约50％与约80％之间、介于约60％与约70％之间、介于约60％与约80％之间、介于约60％与约90％之间、介于约70％与约80％之间、介于约70％与约90％之间、介于约70％与约100％之间、介于约80％与约90％之间、介于约80％与约100％之间或介于约90％与约100％之间。

在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在纹状体中扩散介于约1％与约100％之间。在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在纹状体中扩散介于约1％与约10％之间、介于1％与约20％之间、介于1％与约30％之间、介于10％与约20％之间、介于10％与约30％之间、介于约10％与约40％之间、介于约20％与约30％之间、介于约20％与约40％之间、介于约20％与约50％之间、介于约30％与约40％之间、介于约30％与约50％之间、介于约30％与约60％之间、介于约40％与约50％之间、介于约40％与约60％之间、介于约40％与约70％之间、介于约50％与约60％之间、介于约50％与约70％之间、介于约50％与约80％之间、介于约60％与约70％之间、介于约60％与约80％之间、介于约60％与约90％之间、介于约70％与约80％之间、介于约70％与约90％之间、介于约70％与约100％之间、介于约80％与约90％之间、介于约80％与约100％之间或介于约90％与约100％之间。

在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在背侧纹状体中扩散介于约1％与约100％之间。在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在背侧纹状体中扩散介于约1％与约10％之间、介于1％与约20％之间、介于1％与约30％之间、介于10％与约20％之间、介于10％与约30％之间、介于约10％与约40％之间、介于约20％与约30％之间、介于约20％与约40％之间、介于约20％与约50％之间、介于约30％与约40％之间、介于约30％与约50％之间、介于约30％与约60％之间、介于约40％与约50％之间、介于约40％与约60％之间、介于约40％与约70％之间、介于约50％与约60％之间、介于约50％与约70％之间、介于约50％与约80％之间、介于约60％与约70％之间、介于约60％与约80％之间、介于约60％与约90％之间、介于约70％与约80％之间、介于约70％与约90％之间、介于约70％与约100％之间、介于约80％与约90％之间、介于约80％与约100％之间或介于约90％与约100％之间。

在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在壳核中扩散介于约1％与约100％之间。在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在壳核中扩散介于约1％与约10％之间、介于1％与约20％之间、介于1％与约30％之间、介于10％与约20％之间、介于10％与约30％之间、介于约10％与约40％之间、介于约20％与约30％之间、介于约20％与约40％之间、介于约20％与约50％之间、介于约30％与约40％之间、介于约30％与约50％之间、介于约30％与约60％之间、介于约40％与约50％之间、介于约40％与约60％之间、介于约40％与约70％之间、介于约50％与约60％之间、介于约50％与约70％之间、介于约50％与约80％之间、介于约60％与约70％之间、介于约60％与约80％之间、介于约60％与约90％之间、介于约70％与约80％之间、介于约70％与约90％之间、介于约70％与约100％之间、介于约80％与约90％之间、介于约80％与约100％之间或介于约90％与约100％之间。

在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在尾状核中扩散介于约1％与约100％之间。在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在尾状核中扩散介于约1％与约10％之间、介于1％与约20％之间、介于1％与约30％之间、介于10％与约20％之间、介于10％与约30％之间、介于约10％与约40％之间、介于约20％与约30％之间、介于约20％与约40％之间、介于约20％与约50％之间、介于约30％与约40％之间、介于约30％与约50％之间、介于约30％与约60％之间、介于约40％与约50％之间、介于约40％与约60％之间、介于约40％与约70％之间、介于约50％与约60％之间、介于约50％与约70％之间、介于约50％与约80％之间、介于约60％与约70％之间、介于约60％与约80％之间、介于约60％与约90％之间、介于约70％与约80％之间、介于约70％与约90％之间、介于约70％与约100％之间、介于约80％与约90％之间、介于约80％与约100％之间或介于约90％与约100％之间。

在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物从注射部位扩散介于约1％与约100％之间。在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物从注射部位扩散介于约1％与约10％之间、介于1％与约20％之间、介于1％与约30％之间、介于10％与约20％之间、介于10％与约30％之间、介于约10％与约40％之间、介于约20％与约30％之间、介于约20％与约40％之间、介于约20％与约50％之间、介于约30％与约40％之间、介于约30％与约50％之间、介于约30％与约60％之间、介于约40％与约50％之间、介于约40％与约60％之间、介于约40％与约70％之间、介于约50％与约60％之间、介于约50％与约70％之间、介于约50％与约80％之间、介于约60％与约70％之间、介于约60％与约80％之间、介于约60％与约90％之间、介于约70％与约80％之间、介于约70％与约90％之间、介于约70％与约100％之间、介于约80％与约90％之间、介于约80％与约100％之间或介于约90％与约100％之间。

在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在黑质中扩散介于约1％与约100％之间。在一个方面，本文提供的AAV载体或组合物已在壳核中扩散介于约1％与约10％之间、介于1％与约20％之间、介于1％与约30％之间、介于10％与约20％之间、介于10％与约30％之间、介于约10％与约40％之间、介于约20％与约30％之间、介于约20％与约40％之间、介于约20％与约50％之间、介于约30％与约40％之间、介于约30％与约50％之间、介于约30％与约60％之间、介于约40％与约50％之间、介于约40％与约60％之间、介于约40％与约70％之间、介于约50％与约60％之间、介于约50％与约70％之间、介于约50％与约80％之间、介于约60％与约70％之间、介于约60％与约80％之间、介于约60％与约90％之间、介于约70％与约80％之间、介于约70％与约90％之间、介于约70％与约100％之间、介于约80％与约90％之间、介于约80％与约100％之间或介于约90％与约100％之间。

如本文所使用的，术语“AAV颗粒”是指将其核酸基因组传递到细胞的AAV病毒的包装衣壳形式。

在一个方面，包含由本文提供的AAV载体编码的AAV颗粒的组合物以介于10¹⁰个AAV颗粒/mL与10¹⁴个AAV颗粒/mL之间的浓度注射。在一个方面，包含由本文提供的AAV载体编码的AAV颗粒的组合物以介于10¹⁰个AAV颗粒/mL与10¹¹个AAV颗粒/mL之间、介于10¹⁰个AAV颗粒/mL与10¹²个AAV颗粒/mL之间、介于10¹⁰个AAV颗粒/mL与10¹³个AAV颗粒/mL之间、介于10¹¹个AAV颗粒/mL与10¹²个AAV颗粒/mL之间、介于10¹¹个AAV颗粒/mL与10¹³个AAV颗粒/mL之间、介于10¹¹个AAV颗粒/mL与10¹⁴个AAV颗粒/mL之间、介于10¹²个AAV颗粒/mL与10¹³个AAV颗粒/mL之间、介于10¹²个AAV颗粒/mL与10¹⁴个AAV颗粒/mL之间或介于10¹³个AAV颗粒/mL与10¹⁴个AAV颗粒/mL之间的浓度注射。

在一个方面，包含由本文提供的AAV载体编码的AAV颗粒的组合物以介于10μL与1000μL之间的体积注射。在一个方面，包含由本文提供的AAV载体编码的AAV颗粒的组合物以介于10μL与100μL之间、介于10μL与200μL之间、介于10μL与300μL之间、介于100μL与200μL之间、介于100μL与300μL之间、介于100μL与400μL之间、介于200μL与300μL之间、介于200μL与400μL之间、介于200μL与500μL之间、介于300μL与400μL之间、介于300μL与500μL之间、介于300μL与600μL之间、介于400μL与500μL之间、介于400μL与600μL之间、介于400uL与700μL之间、介于500μL与600μL之间、介于500μL与700μL之间、介于500μL与800μL之间、介于600μL与700μL之间、介于600μL与800μL之间、介于600μL与900μL之间、介于700μL与800μL之间、介于700μL与900μL之间、介于700μL与1000μL之间、介于800μL与900μL之间、介于800μL与1000μL之间、或介于900μL与1000μL之间的体积注射。

如本文所用，术语“受试者”是指任何动物受试者。动物受试者的非限制性示例包括人、实验动物(例如，灵长类动物、大鼠、小鼠)、家畜(例如，牛、绵羊、山羊、猪、火鸡、鸡)和家庭宠物(例如，狗、猫、啮齿动物等)。

如本文所用，“有此需要的受试者”是指患有神经系统病症的受试者。在一个方面，有此需要的受试者患有选自由以下项组成的组的神经系统病症：阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、亨廷顿病、癫痫、物理性损伤、卒中、脑动脉瘤、外伤性脑损伤、脑震荡、肿瘤、炎症、感染、共济失调、脑萎缩、脊髓萎缩、多发性硬化症、外伤性脊髓损伤、缺血性或出血性脊髓病(脊髓病)、全脑缺血、缺氧缺血性脑病、栓塞、纤维软骨栓塞性脊髓病、血栓形成、肾病、慢性炎性疾病、脑膜炎、和脑静脉窦血栓形成。在一个方面，有此需要的受试者患有阿尔茨海默病。在一个方面，有此需要的受试者患有帕金森病。在一个方面，有此需要的受试者患有ALS。在一个方面，有此需要的受试者患有亨廷顿病。在一个方面，有此需要的受试者患有癫痫。在一个方面，有此需要的受试者患有物理性损伤。在一个方面，有此需要的受试者患有卒中。在一个方面，有此需要的受试者患有缺血性卒中。在一个方面，有此需要的受试者患有出血性卒中。在一个方面，有此需要的受试者患有脑动脉瘤。在一个方面，有此需要的受试者患有外伤性脑损伤。在一个方面，有此需要的受试者患有脑震荡。在一个方面，有此需要的受试者患有肿瘤。在一个方面，有此需要的受试者患有炎症。在一个方面，有此需要的受试者患有感染。在一个方面，有此需要的受试者患有共济失调。在一个方面，有此需要的受试者患有脑萎缩。在一个方面，有此需要的受试者患有脊髓萎缩。在一个方面，有此需要的受试者患有多发性硬化症。在一个方面，有此需要的受试者患有外伤性脊髓损伤。在一个方面，有此需要的受试者患有缺血性或出血性脊髓病(脊髓病)。在一个方面，有此需要的受试者患有全脑缺血。在一个方面，有此需要的受试者患有缺氧缺血性脑病。在一个方面，有此需要的受试者患有栓塞。在一个方面，有此需要的受试者患有纤维软骨栓塞性脊髓病。在一个方面，有此需要的受试者患有血栓形成。在一个方面，有此需要的受试者患有肾病。在一个方面，有此需要的受试者患有慢性炎性疾病。在一个方面，有此需要的受试者患有脑膜炎。在一个方面，有此需要的受试者患有脑静脉窦血栓形成。

在一个方面，有此需要的受试者是哺乳动物。在一个方面，有此需要的受试者是人。在一个方面，有此需要的受试者是非人灵长类动物。在一个方面，有此需要的受试者选自由黑猩猩、倭黑猩猩、红毛猩猩、大猩猩、猕猴、狨猴、卷尾猴、狒狒、长臂猿和狐猴组成的组。在一个方面，有此需要的受试者是黑猩猩。在一个方面，有此需要的受试者是倭黑猩猩。在一个方面，有此需要的受试者是猩猩。在一个方面，有此需要的受试者是大猩猩。在一个方面，有此需要的受试者是猕猴。在一个方面，有此需要的受试者是狨猴。在一个方面，有此需要的受试者是卷尾猴。在一个方面，有此需要的受试者是狒狒。在一个方面，有此需要的受试者是长臂猿。在一个方面，有此需要的受试者是狐猴。

在一个方面，有此需要的受试者是男性。在一个方面，有此需要的受试者是女性。在一个方面，有此需要的受试者是中性。在一个方面，有此需要的受试者是早产儿。在一个方面，早产儿在妊娠36周之前出生。在一个方面，有此需要的受试者是足月儿。在一个方面，足月儿小于约2月龄。在一个方面，有此需要的受试者是新生儿。在一个方面，新生儿小于约1月龄。在一个方面，有此需要的受试者是婴儿。在一个方面，婴儿介于2月龄与24月龄之间。在一个方面，婴儿介于2月龄与3月龄之间、介于2月龄与4月龄之间、介于2月龄与5月龄之间、介于3月龄与4月龄之间、介于3月龄与5月龄之间、介于3月龄与6月龄之间、介于4月龄与5月龄之间、介于4月龄与6月龄之间、介于4月龄与7月龄之间、介于5月龄与6月龄之间、介于5月龄与7月龄之间、介于5月龄与8月龄之间、介于6月龄与7月龄之间、介于6月龄与8月龄之间、介于6月龄与9月龄之间、介于7月龄与8月龄之间、介于7月龄与9月龄之间、介于7月龄与10月龄之间、介于8月龄与9月龄之间、介于8月龄与10月龄之间、介于8月龄与11月龄之间、介于9月龄与10月龄之间、介于9月龄与11月龄之间、介于9月龄与12月龄之间、介于10月龄与11月龄之间、介于10月龄与12月龄之间、介于10月龄与13月龄之间、介于11月龄与12月龄之间、介于11月龄与13月龄之间、介于11月龄与14月龄之间、介于12月龄与13月龄之间、介于12月龄与14月龄之间、介于12月龄与15月龄之间、介于13月龄与14月龄之间、介于13月龄与15月龄之间、介于13月龄与16月龄之间、介于14月龄与15月龄之间、介于14月龄与16月龄之间、介于14月龄与17月龄之间、介于15月龄与16月龄之间、介于15月龄与17月龄之间、介于15月龄与18月龄之间、介于16月龄与17月龄之间、介于16月龄与18月龄之间、介于16月龄与19月龄之间、介于17月龄与18月龄之间、介于17月龄与19月龄之间、介于17月龄与20月龄之间、介于18月龄与19月龄之间、介于18月龄与20月龄之间、介于18月龄与21月龄之间、介于19月龄与20月龄之间、介于19月龄与21月龄之间、介于19月龄与22月龄之间、介于20月龄与21月龄之间、介于20月龄与22月龄之间、介于20月龄与23月龄之间、介于21月龄与22月龄之间、介于21月龄与23月龄之间、介于21月龄与24月龄之间、介于22月龄与23月龄之间、介于22月龄与24月龄之间和介于23月龄与24月龄之间。在一个方面，有此需要的受试者是幼儿。在一个方面，幼儿介于1岁与4岁之间。在一个方面，幼儿介于1岁与2岁之间、介于1岁与3岁之间、介于1岁与4岁之间、介于2岁与3岁之间、介于2岁与4岁之间和介于3岁与4岁之间。在一个方面，有此需要的受试者是小儿。在一个方面，小儿介于2岁与5岁之间。在一个方面，小儿介于2岁与3岁之间、介于2岁与4岁之间、介于2岁与5岁之间、介于3岁与4岁之间、介于3岁与5岁之间和介于4岁与5岁之间。在一个方面，有此需要的受试者是儿童。在一个方面，儿童介于6岁与12岁之间。在一个方面，儿童介于6岁与7岁之间、介于6岁与8岁之间、介于6岁与9岁之间、介于7岁与8岁之间、介于7岁与9岁之间、介于7岁与10岁之间、介于8岁与9岁之间、介于8岁与10岁之间、介于8岁与11岁之间、介于9岁与10岁之间、介于9岁与11岁之间、介于9岁与12岁之间、介于10岁与11岁之间、介于10岁与12岁之间和介于11岁与12岁之间。在一个方面，有此需要的受试者是青少年。在一个方面，青少年介于13岁与19岁之间。在一个方面，青少年介于13岁与14岁之间、介于13岁与15岁之间、介于13岁与16岁之间、介于14岁与15岁之间、介于14岁与16岁之间、介于14岁与17岁之间、介于15岁与16岁之间、介于15岁与17岁之间、介于15岁与18岁之间、介于16岁与17岁之间、介于16岁与18岁之间、介于16岁与19岁之间、介于17岁与18岁之间、介于17岁与19岁之间和介于18岁与19岁之间。在一个方面，有此需要的受试者是儿科受试者。在一个方面，儿科受试者介于1天龄与18岁之间。在一个方面，儿科受试者介于1天龄与1岁之间、介于1天龄与2岁之间、介于1天龄与3岁之间、介于1岁与2岁之间、介于1岁与3岁之间、介于1岁与4岁之间、介于2岁与3岁之间、介于2岁与4岁之间、介于2岁与5岁之间、介于3岁与4岁之间、介于3岁与5岁之间、介于3岁与6岁之间、介于4岁与5岁之间、介于4岁与6岁之间、介于4岁与7岁之间、介于5岁与6岁之间、介于5岁与7岁之间、介于5岁与8岁之间、介于6岁与7岁之间、介于6岁与8岁之间、介于6岁与9岁之间、介于7岁与8岁之间、介于7岁与9岁之间、介于7岁与10岁之间、介于8岁与9岁之间、介于8岁与10岁之间、介于8岁与11岁之间、介于9岁与10岁之间、介于9岁与11岁之间、介于9岁与12岁之间、介于10岁与11岁之间、介于10岁与12岁之间、介于10岁与13岁之间、介于11岁与12岁之间、介于11岁与13岁之间、介于11岁与14岁之间、介于12岁与13岁之间、介于12岁与14岁之间、介于12岁与15岁之间、介于13岁与14岁之间、介于13岁与15岁之间、介于13岁与16岁之间、介于14岁与15岁之间、介于14岁与16岁之间、介于14岁与17岁之间、介于15岁与16岁之间、介于15岁与17岁之间、介于15岁与18岁之间、介于16岁与17岁之间、介于16岁与18岁之间和介于17岁与18岁之间。在一个方面，有此需要的受试者是老年受试者。在一个方面，老年受试者介于65岁与95岁或更高之间。在一个方面，老年受试者介于65岁与70岁之间、介于65岁与75岁之间、介于65岁与80岁之间、介于70岁与75岁之间、介于70岁与80岁之间、介于70岁与85岁之间、介于75岁与80岁之间、介于75岁与85岁之间、介于75岁与90岁之间、介于80岁与85岁之间、介于80岁与90岁之间、介于80岁与95岁之间、介于85岁与90岁之间和介于85岁与95岁之间。在一个方面，有此需要的受试者是成年受试者。在一个方面，成年受试者介于20岁与95岁或更高之间。在一个方面，成年受试者介于20岁与25岁之间、介于20岁与30岁之间、介于20岁与35岁之间、介于25岁与30岁之间、介于25岁与35岁之间、介于25岁与40岁之间、介于30岁与35岁之间、介于30岁与40岁之间、介于30岁与45岁之间、介于35岁与40岁之间、介于35岁与45岁之间、介于35岁与50岁之间、介于40岁与45岁之间、介于40岁与50岁之间、介于40岁与55岁之间、介于45岁与50岁之间、介于45岁与55岁之间、介于45岁与60岁之间、介于50岁与55岁之间、介于50岁与60岁之间、介于50岁与65岁之间、介于55岁与60岁之间、介于55岁与65岁之间、介于55岁与70岁之间、介于60岁与65岁之间、介于60岁与70岁之间、介于60岁与75岁之间、介于65岁与70岁之间、介于65岁与75岁之间、介于65岁与80岁之间、介于70岁与75岁之间、介于70岁与80岁之间、介于70岁与85岁之间、介于75岁与80岁之间、介于75岁与85岁之间、介于75岁与90岁之间、介于80岁与85岁之间、介于80岁与90岁之间、介于80岁与95岁之间、介于85岁与90岁之间和介于85岁与95岁之间。在一个方面，有此需要的受试者介于1岁与5岁之间、介于2岁与10岁之间、介于3岁与18岁之间、介于21岁与50岁之间、介于21岁与40岁之间、介于21岁与30岁之间、介于50岁与90岁之间、介于60岁与90岁之间、介于70岁与90岁之间、介于60岁与80岁之间、或介于65岁与75岁之间。在一个方面，有此需要的受试者是年轻老年受试者(65至74岁)。在一个方面，有此需要的受试者是中间老年受试者(75至84岁)。在一个方面，有此需要的受试者是老年受试者(>85岁)。

如本文所用，术语“流速”是指AAV载体或组合物的递送速率。在一个方面，流速介于0.1μL/分钟与5.0μL/分钟之间。在一个方面，流速介于0.1μL/分钟与0.2μL/分钟之间、介于0.1μL/分钟与0.3μL/分钟之间、介于0.1μL/分钟与0.4μL/分钟之间、介于0.2μL/分钟与0.3μL/分钟之间、介于0.2μL/分钟与0.4μL/分钟之间、介于0.2μL/分钟与0.5μL/分钟之间、介于0.3μL/分钟与0.4μL/分钟之间、介于0.3μL/分钟与0.5μL/分钟之间、介于0.3μL/分钟与0.6μL/分钟之间、介于0.4μL/分钟与0.5μL/分钟之间、介于0.4μL/分钟与0.6μL/分钟之间、介于0.4μL/分钟与0.7μL/分钟之间、介于0.5μL/分钟与0.6μL/分钟之间、介于0.5μL/分钟与0.7μL/分钟之间、介于0.5μL/分钟与0.8μL/分钟之间、介于0.6μL/分钟与0.7μL/分钟之间、介于0.6μL/分钟与0.8μL/分钟之间、介于0.6μL/分钟与0.9μL/分钟之间、介于0.7μL/分钟与0.8μL/分钟之间、介于0.7μL/分钟与0.9μL/分钟之间、介于0.7μL/分钟与1.0μL/分钟之间、介于0.8μL/分钟与0.9μL/分钟之间、介于0.8μL/分钟与1.0μL/分钟之间、介于0.8μL/分钟与1.1μL/分钟之间、介于0.9μL/分钟与1.0μL/分钟之间、介于0.9μL/分钟与1.1μL/分钟之间、介于0.9μL/分钟与1.2μL/分钟之间、介于1.0μL/分钟与1.1μL/分钟之间、介于1.0μL/分钟与1.2μL/分钟之间、介于1.0μL/分钟与1.3μL/分钟之间、介于1.1μL/分钟与1.2μL/分钟之间、介于1.1μL/分钟与1.3μL/分钟之间、介于1.1μL/分钟与1.4μL/分钟之间、介于1.2μL/分钟与1.3μL/分钟之间、介于1.2μL/分钟与1.4μL/分钟之间、介于1.2μL/分钟与1.5μL/分钟之间、介于1.3μL/分钟与1.4μL/分钟之间、介于1.3μL/分钟与1.5μL/分钟之间、介于1.3μL/分钟与1.6μL/分钟之间、介于1.4μL/分钟与1.5μL/分钟之间、介于1.4μL/分钟与1.6μL/分钟之间、介于1.4μL/分钟与1.7μL/分钟之间、介于1.5μL/分钟与1.6μL/分钟之间、介于1.5μL/分钟与1.7μL/分钟之间、介于1.5μL/分钟与1.8μL/分钟之间、介于1.6μL/分钟与1.7μL/分钟之间、介于1.6μL/分钟与1.8μL/分钟之间、介于1.6μL/分钟与1.9μL/分钟之间、介于1.7μL/分钟与1.8μL/分钟之间、介于1.7μL/分钟与1.9μL/分钟之间、介于1.7μL/分钟与2.0μL/分钟之间、介于1.8μL/分钟与1.9μL/分钟之间、介于1.8μL/分钟与2.0μL/分钟之间、介于1.8μL/分钟与2.1μL/分钟之间、介于1.9μL/分钟与2.0μL/分钟之间、介于1.9μL/分钟与2.1μL/分钟之间、介于1.9μL/分钟与2.2μL/分钟之间、介于2.0μL/分钟与2.1μL/分钟之间、介于2.0μL/分钟与2.2μL/分钟之间、介于2.0μL/分钟与2.3μL/分钟之间、介于2.1μL/分钟与2.2μL/分钟之间、介于2.1μL/分钟与2.3μL/分钟之间、介于2.1μL/分钟与2.4μL/分钟之间、介于2.2μL/分钟与2.3μL/分钟之间、介于2.2μL/分钟与2.4μL/分钟之间、介于2.2μL/分钟与2.5μL/分钟之间、介于2.3μL/分钟与2.4μL/分钟之间、介于2.3μL/分钟与2.5μL/分钟之间、介于2.3μL/分钟与2.6μL/分钟之间、介于2.4μL/分钟与2.5μL/分钟之间、介于2.4μL/分钟与2.6μL/分钟之间、介于2.4μL/分钟与2.7μL/分钟之间、介于2.5μL/分钟与2.6μL/分钟之间、介于2.5μL/分钟与2.7μL/分钟之间、介于2.5μL/分钟与2.8μL/分钟之间、介于2.6μL/分钟与2.7μL/分钟之间、介于2.6μL/分钟与2.8μL/分钟之间、介于2.6μL/分钟与2.9μL/分钟之间、介于2.7μL/分钟与2.8μL/分钟之间、介于2.7μL/分钟与2.9μL/分钟之间、介于2.7μL/分钟与3.0μL/分钟之间、介于2.8μL/分钟与2.9μL/分钟之间、介于2.8μL/分钟与3.0μL/分钟之间、介于2.8μL/分钟与3.1μL/分钟之间、介于2.9μL/分钟与3.0μL/分钟之间、介于2.9μL/分钟与3.1μL/分钟之间、介于2.9μL/分钟与3.2μL/分钟之间、介于3.0μL/分钟与3.1μL/分钟之间、介于3.0μL/分钟与3.2μL/分钟之间、介于3.0μL/分钟与3.3μL/分钟之间、介于3.1μL/分钟与3.2μL/分钟之间、介于3.1μL/分钟与3.3μL/分钟之间、介于3.1μL/分钟与3.4μL/分钟之间、介于3.2μL/分钟与3.3μL/分钟之间、介于3.2μL/分钟与3.4μL/分钟之间、介于3.2μL/分钟与3.5μL/分钟之间、介于3.3μL/分钟与3.4μL/分钟之间、介于3.3μL/分钟与3.5μL/分钟之间、介于3.3μL/分钟与3.6μL/分钟之间、介于3.4μL/分钟与3.5μL/分钟之间、介于3.4μL/分钟与3.6μL/分钟之间、介于3.4μL/分钟与3.7μL/分钟之间、介于3.5μL/分钟与3.6μL/分钟之间、介于3.5μL/分钟与3.7μL/分钟之间、介于3.5μL/分钟与3.8μL/分钟之间、介于3.6μL/分钟与3.7μL/分钟之间、介于3.6μL/分钟与3.8μL/分钟之间、介于3.6μL/分钟与3.9μL/分钟之间、介于3.7μL/分钟与3.8μL/分钟之间、介于3.7μL/分钟与3.9μL/分钟之间、介于3.7μL/分钟与4.0μL/分钟之间、介于3.8μL/分钟与3.9μL/分钟之间、介于3.8μL/分钟与4.0μL/分钟之间、介于3.8μL/分钟与4.1μL/分钟之间、介于3.9μL/分钟与4.0μL/分钟之间、介于3.9μL/分钟与4.1μL/分钟之间、介于3.9μL/分钟与4.2μL/分钟之间、介于4.0μL/分钟与4.1μL/分钟之间、介于4.0μL/分钟与4.2μL/分钟之间、介于4.0μL/分钟与4.3μL/分钟之间、介于4.1μL/分钟与4.2μL/分钟之间、介于4.1μL/分钟与4.3μL/分钟之间、介于4.1μL/分钟与4.4μL/分钟之间、介于4.2μL/分钟与4.3μL/分钟之间、介于4.2μL/分钟与4.4μL/分钟之间、介于4.2μL/分钟与4.5μL/分钟之间、介于4.3μL/分钟与4.4μL/分钟之间、介于4.3μL/分钟与4.5μL/分钟之间、介于4.3μL/分钟与4.6μL/分钟之间、介于4.4μL/分钟与4.5μL/分钟之间、介于4.4μL/分钟与4.6μL/分钟之间、介于4.4μL/分钟与4.7μL/分钟之间、介于4.5μL/分钟与4.6μL/分钟之间、介于4.5μL/分钟与4.7μL/分钟之间、介于4.5μL/分钟与4.8μL/分钟之间、介于4.6μL/分钟与4.7μL/分钟之间、介于4.6μL/分钟与4.8μL/分钟之间、介于4.6μL/分钟与4.9μL/分钟之间、介于4.7μL/分钟与4.8μL/分钟之间、介于4.7μL/分钟与4.9μL/分钟之间、介于4.7μL/分钟与5.0μL/分钟之间、介于4.8μL/分钟与4.9μL/分钟之间、介于4.8μL/分钟与5.0μL/分钟之间或介于4.9μL/分钟与5.0μL/分钟之间。

如本文所用，术语“治疗有效剂量”或“药物活性剂量”是指有效治疗神经系统病症的本文提供的AAV颗粒或组合物的量。在一个方面，本文提供的AAV颗粒或组合物可以与药学上可接受的载体一起提供。如本文所用，“药学上可接受的载体”是指与本文提供的AAV颗粒或组合物混合的无毒溶剂、分散剂、赋形剂、佐剂或其他材料。

药学上可接受的载体的非限制性示例包括液体(例如，盐水)、凝胶、纳米颗粒、外来体、脂质囊泡或固体形式的稀释剂、佐剂、赋形剂或耐酸包封成分。合适的稀释剂和赋形剂的非限制性示例包括药物级的生理盐水、葡萄糖、甘油、甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等，及其组合。在一个方面，治疗有效剂量含有辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、稳定剂或pH缓冲剂。在一个方面，将治疗有效剂量的本文提供的AAV颗粒或组合物注射至受试者。在一个方面，将治疗有效剂量的本文提供的AAV颗粒或组合物递送至受试者。在一个方面，治疗有效剂量与至少一种药学上可接受的载体一起施用。在一个方面，治疗有效剂量含有介于约1％与约5％之间、介于约5％与约10％之间、介于约10％与约15％之间、介于约15％与约20％之间、介于约20％与约25％之间、介于约25％与约30％之间、介于约30％与约35％之间、介于约40与约45％之间、介于约50％与约55％之间、介于约1％与约95％之间、介于约2％与约95％之间、介于约5％与约95％之间、介于约10％与约95％之间、介于约15％与约95％之间、介于约20％与约95％之间、介于约25％与约95％之间、介于约30％与约95％之间、介于约35％与约95％之间、介于约40％与约95％之间、介于约45％与约95％之间、介于约50％与约95％之间、介于约55％与约95％之间、介于约60％与约95％之间、介于约65％与约95％之间、介于约70％与约95％之间、介于约45％与约95％之间、介于约80％与约95％之间或介于约85％与约95％之间的本文提供的AAV颗粒或组合物。

在一个方面，至少每天一次或至少每周一次将治疗有效剂量递送至有此需要的受试者，持续至少两个连续日或周。在一个方面，至少每天一次或至少每周一次将治疗有效剂量递送至有此需要的受试者，持续至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个连续日或周。在一个方面，至少每天一次或至少每周一次将治疗有效剂量递送至有此需要的受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个连续周。在一个方面，至少每天一次或至少每周一次将治疗有效剂量递送至有此需要的受试者，持续至多4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续日或周。在一个方面，至少每天一次或至少每周一次将治疗有效剂量递送至有此需要的受试者，持续至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个连续周或月。在一个方面，将治疗有效剂量递送至有此需要的受试者，至少施用一次，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个连续月或年，长期地持续受试者的整个生命周期，或无限期的时间段。在一个方面，每年一次将治疗有效剂量递送至有此需要的受试者，持续连续2年、连续3年或连续5年。在一个方面，每年一次将治疗有效剂量递送至有此需要的受试者，持续连续2年。在一个方面，每年一次将治疗有效剂量递送至有此需要的受试者，持续连续3年。在一个方面，每年一次将治疗有效剂量递送至有此需要的受试者，持续连续5年。

如本文所用，术语“缓解”、“治愈”或“消退率”是指有此需要的受试者响应于治疗有效剂量而被治愈神经系统病症或获得神经系统病症的缓解或完全消退的百分比。

如本文所用，术语“响应率”是指有此需要的受试者积极响应(例如，一种或多种症状的严重程度或频率降低)治疗有效剂量的百分比。

在一个方面，治疗有效剂量实现了至少约50％的神经系统病症的缓解、治愈、响应率或消退率。在一个方面，治疗有效剂量消除、减少、减缓或延迟一种或多种神经系统病症症状。神经系统病症症状的非限制性示例包括震颤、动作迟缓(运动徐缓)、肌肉僵硬、姿势和平衡受损、自动运动丧失、言语变化、麻木和书写变化。在一个方面，神经系统病症症状是运动症状。运动症状的非限制性实例包括不自主运动障碍或自主运动障碍。在一个方面，神经系统病症症状是认知症状。认知症状的非限制性示例包括精细运动技能、震颤、癫痫、舞蹈病、肌张力障碍、运动障碍、缓慢或异常的眼球运动、步态受损、姿势受损、平衡受损、言语困难、吞咽困难、组织困难、优先排序困难(difficulty prioritizing)、难以专注于任务、缺乏灵活性、缺乏冲动控制、爆发、对自己的行为和/或能力缺乏意识、处理思想缓慢、学习新信息困难。

在一个方面，神经系统病症症状是精神症状。精神症状的非限制性实例包括抑郁、易怒、悲伤或冷漠、社交退缩、失眠、疲劳、缺乏精力、强迫症、躁狂症、躁郁症和体重减轻。在一个方面，神经系统病症症状是至少一个血管受损。在一个方面，神经系统病症症状是血脑屏障受损(BBB)。在一个方面，神经系统病症症状是血流受损。用于评估神经系统病症症状的消除、减少、减缓或延迟的测试的非限制性示例包括统一亨廷顿病评定量表(UHDRS)评分、UHDRS总功能能力(TFC)、UHDRS功能评估、UHDRS步态评分、UHDRS总运动评分(TMS)、汉密尔顿抑郁量表(HAM-D)、哥伦比亚自杀严重程度评定量表(C-SSRS)、蒙特利尔认知评估(MoCA)、改良Rankin量表(mRS)、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)和巴氏指数(BI)、起立-行走计时测试(TUG)、Chedoke手臂和手活动量表(CAHAI)、符号数字模态测试、受控口语词语联想任务(Controlled Oral Word Association tasks)、磁共振成像(MRI)、功能磁共振成像(fMRI)和正电子发射断层显像(PET)扫描。

在一个方面，治疗有效剂量实现介于约10％与约99％或更多之间的神经系统病症的缓解、治愈、响应率或消退率。在一个方面，治疗有效剂量实现介于10％与100％之间的神经系统病症的缓解、治愈、响应率或消退率，诸如介于10％与15％之间、介于10％与20％之间、介于10％与25％之间、介于15％与20％之间、介于15％与25％之间、介于15％与30％之间、介于20％与25％之间、介于20％与30％之间、介于20％与35％之间、介于25％与30％之间、介于25％与35％之间、介于25％与40％之间、介于30％与35％之间、介于30％与40％之间、介于35％与45％之间、介于35％与50％之间、介于40％与45％之间、介于40％与50％之间、介于40％与55％之间、介于45％与50％之间、介于45％与55％之间、介于45％与60％之间、介于50％与55％之间、介于50％与60％之间、介于50％与65％之间、介于55％与60％之间、介于55％与65％之间、介于55％与70％之间、介于60％与65％之间、介于60％与70％之间、介于60％与75％之间、介于65％与70％之间、介于65％与75％之间、介于65％与80％之间、介于70％与75％之间、介于70％与80％之间、介于70％与85％之间、介于75％与80％之间、介于75％与85％之间、介于75％与90％之间、介于80％与85％之间、介于80％与90％之间、介于80％与95％之间、介于85％与90％之间、介于85％与95％之间、介于85％与100％之间、介于90％与95％之间、介于90％与100％之间或介于95％与100％之间。

在一个方面，治疗有效剂量消除、减少、减缓或延迟一种或多种神经系统病症症状介于10％与100％之间，诸如介于10％与约15％之间、介于10％与20％之间、介于10％与25％之间、介于15％与20％之间、介于15％与25％之间、介于15％与30％之间、介于20％与25％之间、介于20％与30％之间、介于20％与35％之间、介于25与30％之间、介于25％与35％之间、介于25％与40％之间、介于30％与35％之间、介于30％与40％之间、介于35％与45％之间、介于35％与50％之间、介于40％与45％之间、介于40％与50％之间、介于40％与55％之间、介于45％与50％之间、介于45％与55％之间、介于45％与60％之间、介于50％与55％之间、介于50％与60％之间、介于50％与65％之间、介于55％与60％之间、介于55％与65％之间、介于55％与70％之间、介于60％与65％之间、介于60％与70％之间、介于60％与75％之间、介于65％与70％之间、介于65％与75％之间、介于65％与80％之间、介于70％与75％之间、介于70％与80％之间、介于70％与85％之间、介于75％与80％之间、介于75％与85％之间、介于75％与90％之间、介于80％与85％之间、介于80％与90％之间、介于80％与95％之间、介于85％与90％之间、介于85％与95％之间、介于85％与100％之间、介于90％与95％之间、介于90％与100％之间或介于95％与100％之间。

在一个方面，在治疗当天、治疗后1天、治疗后3个月、治疗后6个月、治疗后1年和治疗后每年评估神经系统病症症状。

在一个方面，神经系统病症症状在介于治疗后1天与治疗后7天之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1天与治疗后2天之间、介于治疗后1天与治疗后3天之间、介于治疗后1天与治疗后4天之间、介于治疗后2天与治疗后3天之间、介于治疗后2天与治疗后4天之间、介于治疗后2天与治疗后5天之间、介于治疗后3天与治疗后4天之间、介于治疗后3天与治疗后5天之间、介于治疗后3天与治疗后6天之间、介于治疗后4天与治疗后5天之间、介于治疗后4天与治疗后6天之间、介于治疗后4天与治疗后7天之间、介于治疗后5天与治疗后6天之间、介于治疗后5天与治疗后7天之间或介于治疗后6天与治疗后7天之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1周与治疗后4周之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1周与治疗后2周之间、介于治疗后1周与治疗后3周之间、介于治疗后1周与治疗后4周之间、介于治疗后2周与治疗后3周之间、介于治疗后2周与治疗后4周之间或介于治疗后3周与治疗后4周之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1个月与治疗后12个月之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1个月与治疗后2个月之间、介于治疗后1个月与治疗后3个月之间、介于治疗后1个月与治疗后4个月之间、介于治疗后2个月与治疗后3个月之间、介于治疗后2个月与治疗后4个月之间、介于治疗后2个月与治疗后5个月之间、介于治疗后3个月与治疗后4个月之间、介于治疗后3个月与治疗后5个月之间、介于治疗后3个月与治疗后6个月之间、介于治疗后4个月与治疗后5个月之间、介于治疗后4个月与治疗后6个月之间、介于治疗后4个月与治疗后7个月之间、介于治疗后5个月与治疗后6个月之间、介于治疗后5个月与治疗后7个月之间、介于治疗后5个月与治疗后8个月之间、介于治疗后6个月与治疗后7个月之间、介于治疗后6个月与治疗后8个月之间、介于治疗后6个月与治疗后9个月之间、介于治疗后7个月与治疗后8个月之间、介于治疗后7个月与治疗后9个月之间、介于治疗后7个月与治疗后10个月之间、介于治疗后8个月与治疗后9个月之间、介于治疗后8个月与治疗后10个月之间、介于治疗后8个月与治疗后11个月之间、介于治疗后9个月与治疗后10个月之间、介于治疗后9个月与治疗后11个月之间、介于治疗后9个月与治疗后12个月之间、介于治疗后10个月与治疗后11个月之间、介于治疗后10个月与治疗后12个月之间或介于治疗后11个月与治疗后12个月之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1年与治疗后约20年之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1年与治疗后5年之间、介于治疗后1年与治疗后10年之间、介于治疗后1年与治疗后15年之间、介于治疗后5年与治疗后10年之间、介于治疗后5年与治疗后15年之间、介于治疗后5年与治疗后20年之间、介于治疗后10年与治疗后15年之间、介于治疗后10年与治疗后20年之间或介于治疗后15年与治疗后20年之间评估。

如本文所用，术语“存活率”是指治疗组中的受试者队列在诊断神经系统病症后在给定时间段后仍然存活。

在一个方面，治疗有效剂量实现了介于约10％与99％或更多之间的存活率增加。在一个方面，治疗有效剂量实现了介于10％与100％之间的存活率增加，诸如介于10％与15％之间、介于10％与20％之间、介于10％与25％之间、介于15％与20％之间、介于15％与25％之间、介于15％与30％之间、介于20％与25％之间、介于20％与30％之间、介于20％与35％之间、介于25％与30％之间、介于25％与35％之间、介于25％与40％之间、介于30％与35％之间、介于30％与40％之间、介于35％与45％之间、介于35％与50％之间、介于40％与45％之间、介于40％与50％之间、介于40％与55％之间、介于45％与50％之间、介于45％与55％之间、介于45％与60％之间、介于50％与55％之间、介于50％与60％之间、介于50％与65％之间、介于55％与60％之间、介于55％与65％之间、介于55％与70％之间、介于60％与65％之间、介于60％与70％之间、介于60％与75％之间、介于65％与70％之间、介于65％与75％之间、介于65％与80％之间、介于70％与75％之间、介于70％与80％之间、介于70％与85％之间、介于75％与80％之间、介于75％与85％之间、介于75％与90％之间、介于80％与85％之间、介于80％与90％之间、介于80％与95％之间、介于85％与90％之间、介于85％与95％之间、介于85％与100％之间、介于90％与95％之间、介于90％与100％之间或介于95％与100％之间。

如本文所用，术语“预期寿命”是指预期受试者存活的时间段。

在一个方面，治疗有效剂量使预期寿命增加介于约10％与99％或更多之间。在一个方面，治疗有效剂量使预期寿命增加介于10％与100％之间，诸如介于10％与15％之间、介于10％与20％之间、介于10％与25％之间、介于15％与20％之间、介于15％与25％之间、介于15％与30％之间、介于20％与25％之间、介于20％与30％之间、介于20％与35％之间、介于25％与30％之间、介于25％与35％之间、介于25％与40％之间、介于30％与35％之间、介于30％与40％之间、介于35％与45％之间、介于35％与50％之间、介于40％与45％之间、介于40％与50％之间、介于40％与55％之间、介于45％与50％之间、介于45％与55％之间、介于45％与60％之间、介于50％与55％之间、介于50％与60％之间、介于50％与65％之间、介于55％与60％之间、介于55％与65％之间、介于55％与70％之间、介于60％与65％之间、介于60％与70％之间、介于60％与75％之间、介于65％与70％之间、介于65％与75％之间、介于65％与80％之间、介于70％与75％之间、介于70％与80％之间、介于70％与85％之间、介于75％与80％之间、介于75％与85％之间、介于75％与90％之间、介于80％与85％之间、介于80％与90％之间、介于80％与95％之间、介于85％与90％之间、介于85％与95％之间、介于85％与100％之间、介于90％与95％之间、介于90％与100％之间或介于95％与100％之间。

在一个方面，治疗有效剂量使有此需要的受试者脑内的萎缩量减少介于约10％与99％或更多之间。在一个方面，治疗有效剂量使有此需要的受试者脑内的萎缩量减少介于10％与100％之间，诸如介于10％与15％之间、介于10％与20％之间、介于10％与25％之间、介于15％与20％之间、介于15％与25％之间、介于15％与30％之间、介于20％与25％之间、介于20％与30％之间、介于20％与35％之间、介于25％与30％之间、介于25％与35％之间、介于25％与40％之间、介于30％与35％之间、介于30％与40％之间、介于35％与45％之间、介于35％与50％之间、介于40％与45％之间、介于40％与50％之间、介于40％与55％之间、介于45％与50％之间、介于45％与55％之间、介于45％与60％之间、介于50％与55％之间、介于50％与60％之间、介于50％与65％之间、介于55％与60％之间、介于55％与65％之间、介于55％与70％之间、介于60％与65％之间、介于60％与70％之间、介于60％与75％之间、介于65％与70％之间、介于65％与75％之间、介于65％与80％之间、介于70％与75％之间、介于70％与80％之间、介于70％与85％之间、介于75％与80％之间、介于75％与85％之间、介于75％与90％之间、介于80％与85％之间、介于80％与90％之间、介于80％与95％之间、介于85％与90％之间、介于85％与95％之间、介于85％与100％之间、介于90％与95％之间、介于90％与100％之间或介于95％与100％之间。

在一个方面，在治疗当天、治疗后1天、治疗后3个月、治疗后6个月、治疗后1年和治疗后每年评估有此需要的受试者脑内的萎缩量。

在一个方面，有此需要的受试者脑内的萎缩量在介于治疗后1天与治疗后7天之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1天与治疗后2天之间、介于治疗后1天与治疗后3天之间、介于治疗后1天与治疗后4天之间、介于治疗后2天与治疗后3天之间、介于治疗后2天与治疗后4天之间、介于治疗后2天与治疗后5天之间、介于治疗后3天与治疗后4天之间、介于治疗后3天与治疗后5天之间、介于治疗后3天与治疗后6天之间、介于治疗后4天与治疗后5天之间、介于治疗后4天与治疗后6天之间、介于治疗后4天与治疗后7天之间、介于治疗后5天与治疗后6天之间、介于治疗后5天与治疗后7天之间或介于治疗后6天与治疗后7天之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1周与治疗后4周之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1周与治疗后2周之间、介于治疗后1周与治疗后3周之间、介于治疗后1周与治疗后4周之间、介于治疗后2周与治疗后3周之间、介于治疗后2周与治疗后4周之间或介于治疗后3周与治疗后4周之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1个月与治疗后12个月之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1个月与治疗后2个月之间、介于治疗后1个月与治疗后3个月之间、介于治疗后1个月与治疗后4个月之间、介于治疗后2个月与治疗后3个月之间、介于治疗后2个月与治疗后4个月之间、介于治疗后2个月与治疗后5个月之间、介于治疗后3个月与治疗后4个月之间、介于治疗后3个月与治疗后5个月之间、介于治疗后3个月与治疗后6个月之间、介于治疗后4个月与治疗后5个月之间、介于治疗后4个月与治疗后6个月之间、介于治疗后4个月与治疗后7个月之间、介于治疗后5个月与治疗后6个月之间、介于治疗后5个月与治疗后7个月之间、介于治疗后5个月与治疗后8个月之间、介于治疗后6个月与治疗后7个月之间、介于治疗后6个月与治疗后8个月之间、介于治疗后6个月与治疗后9个月之间、介于治疗后7个月与治疗后8个月之间、介于治疗后7个月与治疗后9个月之间、介于治疗后7个月与治疗后10个月之间、介于治疗后8个月与治疗后9个月之间、介于治疗后8个月与治疗后10个月之间、介于治疗后8个月与治疗后11个月之间、介于治疗后9个月与治疗后10个月之间、介于治疗后9个月与治疗后11个月之间、介于治疗后9个月与治疗后12个月之间、介于治疗后10个月与治疗后11个月之间、介于治疗后10个月与治疗后12个月之间或介于治疗后11个月与治疗后12个月之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1年与治疗后约20年之间评估。在一个方面，症状可以在介于治疗后1年与治疗后5年之间、介于治疗后1年与治疗后10年之间、介于治疗后1年与治疗后15年之间、介于治疗后5年与治疗后10年之间、介于治疗后5年与治疗后15年之间、介于治疗后5年与治疗后20年之间、介于治疗后10年与治疗后15年之间、介于治疗后10年与治疗后20年之间或介于治疗后15年与治疗后20年之间评估。

评估有此需要的受试者脑内的萎缩量的测试的非限制性示例包括Nissle染色、MRI、fMRI和PET扫描。

虽然已经参考优选实施例描述了本公开，但是本领域技术人员将理解，在不脱离本公开的范围的情况下，可以进行各种改变并且可以用等同物替换其元件以适应特定情况。因此，意图是本公开不限于作为预期用于实施本公开的最佳模式而公开的特定实施例，而是本公开将包含落入所附权利要求的范围和精神内的所有实施例。

本文所列出的实例说明了本公开的几个实施例，但不应被解释为以任何方式限制本公开的范围。

实例

实例1.AAV载体构建体

构建了十二个AAV载体构建体：

EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40(P44)(图1B)，

EF-1α:Gfa1.6:Dlx2:WPRE:SV40(图2B)，

EF-1α:GFA2.2:Dlx2:WPRE:SV40(图3B)，

EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH(图1D)，

EF-1α:Gfa1.6:Dlx2:WPRE:hGH(图2D)，

EF-1α:GFA2.2:Dlx2:WPRE:hGh(图4D)，

CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40(P75)(图1A)，

CE:Gfa1.6:Dlx2:WPRE:SV40(图2A)，

CE:GFA2.2:Dlx2:WPRE:SV40(图3A)，

CE:Gfa681:Dlx2:WPRE:hGH(图1C)，

CE:Gfa1.6:Dlx2:WPRE:hGH(图2C)，

CE:GFA2.2:Dlx2:WPRE:hGH(图3D)，

EF-1α:Gfa681:Dlx2:WPRE:SV40(P60)。

所有12个载体构建体均利用PHSG-299(Takara,Mountain View,CA)，这是一种基于pUC的载体构建体，其含有复制起点、卡那霉素抗性基因和多克隆位点(MSC)，以lacZ基因为骨架。

表达盒的5'端是来自人延伸因子1α启动子的增强子(EF-1α增强子；SEQ ID NO:2)或巨细胞病毒增强子(CMV增强子；SEQ ID NO:11)，该增强子将5′放置在以下启动子：758个核苷酸的GFAP启动子(Gfa681；SEQ ID NO:3)，1667个核苷酸的GFAP启动子(Gfa1.6；SEQ IDNO:4)，或2214个核苷酸的GFAP启动子(GFA2.2 SEQ ID NO:12)。

在增强子/GFAP启动子之后(例如，增强子/GFAP启动子的3')，将几个额外的序列以5'到3'的方向引入表达盒，该序列包括：嵌合内含子(SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:19)；人Dlx2编码序列(hDlx2；SEQ ID NO:6)；和土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE；SEQ IDNO:7或SEQ ID NO:18)。这些序列都可操作地连接到SV40 poly(A)信号(SEQ ID NO:8)或hGH poly(A)信号(SEQ ID NO:13)。增强子、GFAP启动子、嵌合内含子、hDlx2编码序列、WPRE和poly(A)信号两侧是两个AAV ITR序列。

实例2.AAV病毒产生

使用聚乙烯亚胺将十二个质粒中的每一个与Rep-Cap质粒(包含驱动AAV rep和cap基因表达的启动子的质粒)和辅助质粒(包含驱动腺病毒的E2A、E4和VA RNA表达的启动子的质粒)一起共转染到293AAV细胞中以产生重组AAV病毒颗粒。(Cell Biolabs,Inc.)

转染后72小时，将转染细胞刮取并离心。将细胞沉淀冷冻并解冻，即置于干冰/乙醇混合物中，然后置于37℃水浴中。将冷冻/解冻循环再重复三次。AAV裂解物通过在不连续的碘克沙醇梯度中以350,00g超速离心1小时来纯化(例如，去除细胞碎片)。收集含有病毒的层，然后使用Millipore Amicon超滤离心器浓缩。然后使用扩增ITR区域的引物或基因/表达盒特异性序列通过使用qPCR确定病毒滴度。

实例3.星形胶质细胞培养物

人皮层星形胶质细胞(HA1800；ScienCell Research Laboratories,Inc.,Carlsbad,California)在汇合度超过90％时进行传代培养。对于传代培养，使用TrypLE^TMSelect(Invitrogen,Carlsbad,California)对细胞进行胰蛋白酶化，以200×g离心5分钟，然后重悬并接种在包含DMEM/F12(Gibco)；10％胎牛血清(Gibco)；青霉素/链霉素(Gibco)；3.5mM葡萄糖(Sigma-Aldrich)；B27(Gibco)；10ng/mL表皮生长因子(Invitrogen)；和10ng/mL成纤维细胞生长因子2(Invitrogen)的培养基上。星形胶质细胞在24孔板(BDBiosciences)的聚-D-赖氨酸(Sigma-Aldrich)包被的盖玻片(12mm)上以每个盖玻片约20,000个细胞的密度培养。

大鼠原代星形胶质细胞(分离自Sprague Dawley大鼠皮层或纹状体)在包含DMEM/F12(Gibco)；10％胎牛血清(Gibco)、青霉素/链霉素(Gibco)；3.5mM葡萄糖(Gibco)的培养基中培养。

所有细胞都于37℃保持在含有5％二氧化碳的潮湿空气中。

实例4.星形胶质细胞培养物中AAV载体的测试(在体外)

使用从实例2的方法获得的重组AAV以10¹⁰个颗粒/mL和10¹⁴个颗粒/mL的浓度范围感染实例3的人皮层星形胶质细胞和大鼠原代星形胶质细胞。感染细胞后二十四小时，将培养基替换为包含DMEM/F12(Gibco)；N2添加剂(Gibco)；和20ng/mL脑源性神经营养因子(Invitrogen)的分化培养基。每四天将分化培养基添加到细胞培养物中。参见Song等人，Nature,417:39-44(2002)。

用额外的人星形胶质细胞填充细胞培养物中的空隙以支持星形胶质细胞或大鼠原代星形胶质细胞转化为神经元时转化神经元的功能发育。

实例5.AAV载体效力的测试

使用从实例2的方法获得的重组AAV以10¹⁰个颗粒/mL和10¹⁴个颗粒/mL的浓度范围感染实例3的人皮层星形胶质细胞和大鼠原代星形胶质细胞(或其他脑区域或脊髓的星形胶质细胞)的第4代至第7代。进行qPCR、酶联免疫吸附(ELISA)和western印迹以确定Dlx2转录物和蛋白质水平的表达。

NeuN、双皮质素(DCX)、β3-微管蛋白、NF-200和MAP2的表达通过qPCR、ELISA、western印迹和免疫染色进行评估以确定重组AAV的功能输出。

实例6.AAV载体滴度和感染率的测试

纯化的AAV载体用DNA酶I处理以消除残留质粒污染。以100倍、500倍、2500倍和12500倍进行AAV载体连续稀释。稀释AAV质粒骨架以通过连续稀释生成标准曲线。质粒稀释为10⁴、10⁵、10⁶、10⁷和10⁸个分子/μL。对稀释的AAV载体和稀释的AAV质粒进行qPCR。使用的引物针对ITR区域(正向ITR引物5'-GGAACCCCTAGTGATGGAGTT，反向ITR引物5'-CGGCCTCAGTGAGCGA)。qPCR混合物包含10μL的Universal SYBR Master Mix 2X、2μL的5μM正向ITR引物、2μL的5μM反向ITR引物、5μL的测试样品或稀释标准品和1μL的H₂O。qPCR程序是95℃°10分钟，然后是95℃°15秒、60℃°30秒的40个循环，然后是熔解曲线。使用qPCR循环仪软件分析数据。根据标准曲线计算AAV样品的物理滴度(病毒基因组(vg)/ml)。

AAV载体感染率通过使用美国典型培养物菌种保藏中心(ATCC；Manassas,VA)的标准方案进行的50％组织培养感染剂量(TCID50)测定来测试。

实例7.AAV剂量范围的测试(在体内)

将从实例2的方法获得的重组AAV通过双侧颅内注射到运动皮层中来注射到C57/BL6小鼠中。每个AAV以1x10¹¹、3x10¹¹、1x10¹²、3x10¹²、1x10¹²、3x10¹²、1x10¹³个病毒基因组/mL的剂量以1μL体积注射。在注射后4天、20天和60天评估每个剂量以确定细胞和组织水平的最佳有效剂量(OED)、最大耐受剂量(MTD)和最小有效剂量(MED)。每个时间点三只小鼠。OED、MTD和MED通过经由Dlx2、GFAP、NeuN和Iba1的免疫染色评估星形胶质细胞到神经元的转化效率和潜在毒性来确定。如果第一个剂量范围不足以确定OED、MTD和MED，则以1x10¹⁰个病毒基因组/mL至1x10¹⁴GC/mL以1μL体积进行第二个剂量范围。

实例8.人类受试者中AAV载体的测试(在体内)

使用从实例2的方法获得的重组AAV在体内感染人脑或脊髓星形胶质细胞。将重组AAV以10¹⁰个颗粒/mL与10¹⁴个颗粒/mL的浓度范围以10μL至1000μL的体积范围注射到患有神经系统病症的人类受试者的脑或脊髓中。在注射前、注射期间和注射后观察人类受试者的神经系统病症症状、脑成像(包括MRI、PET扫描或MRI和PET的组合)以及行为指标。每周一次进行注射后观察，直至注射后第一个月。在注射后第一个月后，每月一次进行观察，持续接下来的11个月，并可延长至病毒注射后2年。

实例9.非人灵长类动物的剂量标度测定

用来自实例7的表达Dlx2的脑组织的体积除以载体基因组的数量(mm³/载体基因组)。计算非人灵长类动物中特定待治疗脑区域体积(mm³)，并且载体基因组的剂量范围依照实例7获得的感染率按比例确定。如实例7进行剂量范围研究并且OED、MTD和MED通过经由Dlx2、GFAP、NeuN和Iba1的免疫染色评估星形胶质细胞到神经元的转化效率和潜在毒性来确定。

实例10.患有亨廷顿病的有此需要的受试者的治疗(在体内)

用从实例2的方法获得的重组AAV治疗患有亨廷顿病的受试者。受试者的神经症状包括不自主运动(诸如舞蹈样运动)、不受控制的姿势、情绪变化、睡眠障碍、言语变化、吞咽困难，以及认知功能(诸如学习和记忆缺陷)。将重组AAV以10¹⁰个颗粒/mL与10¹⁴个颗粒/mL的浓度范围以10μL至1000μL的体积范围注射到患有神经系统病症的人类受试者的纹状体(核壳和尾状核)中。在注射前、注射期间和注射后观察人类受试者的神经系统病症症状、脑成像(包括MRI、PET扫描或MRI和PET的组合)以及行为指标。每周一次进行注射后观察，直至注射后第一个月。在注射后第一个月后，每月一次进行观察，持续接下来的11个月，并可延长至病毒注射后2年。

实例11.与用于敲低Htt基因表达的shRNA结合的直接将神经胶质细胞转化为神经元的组合方法

鉴定与Htt基因互补的靶序列。shRNA被设计为靶向Htt基因。将Dlx2和靶shRNA包装入AAV载体构建体(hU6::Htt shRNA-hGFAP::hDlx2)(图5A-图6F)，并如实例2所述产生重组AAV。将重组AAV注射到具有突变型Htt基因的小鼠的纹状体中。测试接受治疗的小鼠的行为指标，诸如猫步、旷场测试、紧握、小鼠体重和握力以及脑成像(包括MRI、PET扫描或MRI和PET的组合)。比较以下组的行为测试结果和脑成像：(i)未接受治疗，(ii)接受来自实例2的重组AAV，以及(iii)接受重组AAV(hU6::Htt shRNA-hGFAP::hDlx2)(图5A-图6F)。

或者，将靶shRNA包装入AAV载体构建体(hU6::hHtt shRNA)，并如实例2所述产生另一重组AAV。将两种重组AAV注射到具有突变型Htt的小鼠的纹状体中。测试接受治疗的小鼠的行为指标，诸如猫步、旷场测试、紧握、小鼠体重和握力以及脑成像(包括MRI、PET扫描或MRI和PET的组合)。比较以下组的行为测试结果和脑成像：(i)未接受治疗，(ii)仅接受来自实例2的重组AAV，以及(iii)接受重组AAV(hU6::hHtt shRNA)与来自实例2的重组AAV的组合。

实例12.与Htt基因的CRISPR/CAS基因编辑结合的直接将神经胶质细胞转化为神经元的组合方法

鉴定与Htt基因互补的靶序列。向导RNA(gRNA)序列被设计为靶向Htt基因。供体序列被设计为将Htt基因的CAG重复序列数修改至小于36。将Cas9核酸酶、Htt特异性gRNA和供体序列包装入AAV载体构建体(AAV-Cas9-HTT)。如实例2所述产生重组AAV。

将重组AAV(AAV-Cas9-Htt)与来自实例2的重组AAV同时注射到具有突变型Htt的小鼠的纹状体中。测试接受治疗的小鼠的行为指标，诸如猫步、旷场测试、紧握、小鼠体重和握力以及脑成像(包括MRI、PET扫描或MRI和PET的组合)。比较以下组的行为测试结果和脑成像：(i)未接受治疗，(ii)接受来自实例2的重组AAV，以及(iii)接受重组AAV-Cas9-HTT和来自实例2的重组AAV，以鉴定突变型Htt基因编辑与神经胶质至神经元转化之间的协同效应。重组AAV-Cas9-HTT和来自实例2的重组AAV可以同时注射或在不同时间注射。

或者，将Dlx2、接头(P2A)、Cas9核酸酶、Htt特异性gRNA和供体序列包装入AAV载体构建体(AAV-hDlx2-P2A-Cas9-HTT)。如实例2所述产生重组AAV。将重组AAV(AAV-hDlx2-P2A-Cas9-HTT)与来自实例2的重组AAV同时注射到具有突变型Htt的小鼠的纹状体中。测试接受治疗的小鼠的行为指标，诸如猫步、旷场测试、紧握、小鼠体重和握力以及脑成像(包括MRI、PET扫描或MRI和PET的组合)。比较以下组的行为测试结果和脑成像：(i)未接受治疗，(ii)接受来自实例2的重组AAV，以及(iii)接受重组AAV-hDlx2-P2A-Cas9-HTT和来自实例2的重组AAV，以鉴定突变型Htt基因编辑与神经胶质至神经元转化之间的协同效应。

实例13.与敲低Htt基因表达的反义寡核苷酸(ASO)结合的直接将神经胶质细胞转化为神经元的组合方法

鉴定与Htt基因互补的靶序列。设计并合成敲低Htt基因表达的ASO。将来自实例2的重组AAV与Htt ASO一起注射到具有突变型Htt的小鼠的纹状体中。测试接受治疗的小鼠的行为指标，诸如猫步、旷场测试、紧握、小鼠体重和握力以及脑成像(包括MRI、PET扫描或MRI和PET的组合)。比较以下组的行为测试结果和脑成像：(i)未接受治疗，(ii)接受来自实例2的重组AAV，以及(iii)接受来自实例2的重组AAV和Htt ASO。

实例14.与敲低Htt基因表达的siRNA结合的直接将神经胶质细胞转化为神经元的组合方法

鉴定与Htt基因互补的靶序列。设计并合成敲低Htt基因表达的siRNA。将来自实例2的重组AAV与Htt siRNA一起注射到具有突变型Htt的小鼠的纹状体中。测试接受治疗的小鼠的行为指标，诸如猫步、旷场测试、紧握、小鼠体重和握力以及脑成像(包括MRI、PET扫描或MRI和PET的组合)。比较以下组的行为测试结果和脑成像：(i)未接受治疗，(ii)接受来自实例2的重组AAV，以及(iii)接受来自实例2的重组AAV和Htt siRNA。

实例15.与敲低Htt基因表达的miRNA结合的直接将神经胶质细胞转化为神经元的组合方法

鉴定调节Htt基因表达的miRNA。将NeuroD1、Dlx2和miRNA包装入AAV载体(CAG::Htt miRNA-hGFAP::hDlx2)，并如实例2所述产生重组AAV。将重组AAV注射到具有突变型Htt的小鼠的纹状体中。测试接受治疗的小鼠的行为指标，诸如猫步、旷场测试、紧握、小鼠体重和握力以及脑成像(包括MRI、PET扫描或MRI和PET的组合)。比较以下组的行为测试结果和脑成像：(i)未接受治疗，(ii)接受来自实例2的重组AAV，以及(iii)接受重组AAV(CAG::HttmiRNA-hGFAP::hDlx2)。

或者，将靶miRNA包装入AAV载体(CAG::hHtt miRNA)，并如实例2所述产生重组AAV。将重组AAV注射到具有突变型Htt的小鼠的纹状体中。测试接受治疗的小鼠的行为指标，诸如猫步、旷场测试、紧握、小鼠体重和握力以及脑成像(包括MRI、PET扫描或MRI和PET的组合)。比较以下组的行为测试结果和脑成像：(i)未接受治疗，(ii)仅接受来自实例2的重组AAV，以及(iii)接受重组AAV(CAG::hHtt miRNA)与来自实例2的重组AAV的组合。

实例16.大鼠星形胶质细胞原代培养物的成功建立

从出生后3天的SpragueDawley大鼠脑中分离出皮层和纹状体组织。组织用木瓜蛋白酶处理以生成单细胞悬液并接种在聚-D-赖氨酸包被的烧瓶中。细胞用GFAP抗体和SOX9抗体进行免疫染色。细胞用DAPI抗体复染。超过95％的细胞(第6代)是通过GFAP和SOX9染色鉴定的星形胶质细胞(图7)。最左侧图呈现GFAP染色细胞的图像。中间左图呈现SOX9染色细胞的图像。中间右图呈现DAPI染色细胞的图像。最右侧图呈现GFAP、SOX9和DAPI染色细胞的合并图像。

实例17.用质粒转染的星形胶质细胞中的Dlx2表达

将原代大鼠星形胶质细胞接种并如实例2所述用表达载体P44(EE:pGfa681:CI:Dlx2:WPRE:SV40)、P60(EE:pGfa681:Dlx2:WPRE:SV40)、P75(CE:pGfa681:CI:Dlx2:WPRE:SV40)转染。Dlx2蛋白表达通过用抗Dlx2抗体，然后用荧光染料缀合的二抗进行免疫染色来可视化，并且使用荧光显微镜拍摄图像。(图8；上图显示细胞的Dlx2染色，下图显示合并的细胞Dlx2和DAPI染色)。

实例18.AAV病毒颗粒至原代大鼠星形胶质细胞的转导的定量分析。

将从实例2的方法获得的重组AAV转导到接种在24孔板或96孔板中的原代大鼠星形胶质细胞中，所述板具有病毒颗粒AAV9-P12(pGfa681:GFP)和AAV5-P7(pEF-1α:GFP)。感染后7天通过胰蛋白酶化收获细胞。将细胞固定、洗涤并悬浮在PBS中。使用流式细胞术分析病毒转导率以计数与所有细胞相比的GFP阳性细胞(图9A-9B)。图9A显示AAV9-P12(pGfa681:GFP)和AAV5-P7(pEF-1α:GFP)在MOI为5x10⁵vg/细胞、2x10⁵ vg/细胞和5x10⁴vg/细胞时的转导率百分比。图9B显示以一系列密度(2x10⁴个细胞/孔、1.5x10⁴个细胞/孔、1x10⁴个细胞/孔和5x10³个细胞/孔)接种在96孔板中并且用一系列量的病毒(100μl培养基中的1x10¹³vg/ml病毒的2μl、1μl、0.5μl、0.25μl、0.125μl)感染的细胞中AAV病毒颗粒的转导率。

实例19.Dlx2的在体外转基因表达

载体：通过转染大鼠皮层星形胶质细胞(RAC)测试载体。此外，AAV用选定的载体生产，并通过转导在体外进行测试：NXL-P44:EE-pGfa681-CI-Dlx2-WPRE-SV40pA

·NXL-P60:EE-pGfa681-Dlx2-WPRE-SV40pA

·NXL-P75:CE-pGfa681-CI-Dlx2-WPRE-SV40pA

·NXL-P104:CE-pGfa681-CGRI-Dlx2-bGHpA

·NXL-P105:CE-pGfa681-CI-Dlx2-oPRE-bGHpA

·NXL-P131:EE-pGfa681-CI-Dlx2-oPRE-bGHpA

·NXL-P133:CE-pGfa681-CGRI-Dlx2-oPRE-bGHpA

·NXL-P137:EE-pGfa681-CGRI-Dlx2-oPRE-bGHpA

在转染培养的RAC后24小时，NXL-P104和NXL-P105构建体有效驱动Dlx2的表达，这些细胞中的阳性Dlx2染色证明了这一点(图10)。在转染培养的RAC后24小时，NXL-P133、NXL-P137和NXL-P131构建体有效驱动Dlx2的表达，这些细胞中的阳性Dlx2染色证明了这一点(图11)。在用AAV9-P133(用NLX-P133产生的AAV)转导培养的RAC后，该病毒有效驱动Dlx2的表达，这些细胞中的阳性Dlx2染色证明了这一点(图12)。

对本公开的组合物和方法的各种进一步修改和改进对于本领域技术人员来说将是显而易见的。设想以下非限制性实施例：

1.一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，所述hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中所述hDlx2序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；

(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；

(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

2.一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸编码序列，所述hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中所述编码序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；

(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；

(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)具有SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

3.一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含编码Dlx2蛋白的无远端同源框2(Dlx2)核酸编码序列，其中所述编码序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)增强子；

(c)嵌合内含子；

(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)多聚腺苷酸化信号序列。

4.一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述AAV载体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，所述hDlx2序列具有SEQID NO:6的核酸序列，并且其中所述序列可操作地连

接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；

(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；

(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

5.一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述AAV载体包含编码无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸序列，所述hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸编码序列，并且其中所述编码序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；

(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；

(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号序列、包含SEQID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

6.一种用于治疗有此需要的受试者的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述AAV载体包含可操作地连接到表达控制元件的无远端同源框2(Dlx2)序列，所述表达控制元件包含：

(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)增强子；

(c)嵌合内含子；

(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)多聚腺苷酸化信号。

7.根据实施例1至3中任一项所述的AAV载体或根据实施例4至6中任一项所述的组合物，其中所述AAV载体选自由AAV血清型2、AAV血清型5和AAV血清型9组成的组。

8.根据实施例7所述的AAV载体或组合物，其中所述AAV载体是AAV血清型2。

9.根据实施例7所述的AAV载体或组合物，其中所述AAV载体是AAV血清型5。

10.根据实施例7所述的AAV载体或组合物，其中所述AAV载体是AAV血清型9。

11.根据实施例4或5所述的组合物，其中所述神经胶质细胞是反应性星形胶质细胞。

12.根据实施例4或5所述的组合物，其中所述功能性神经元选自由谷氨酸能神经元、GABA能神经元、多巴胺能神经元、胆碱能神经元、血清素能神经元、肾上腺素能神经元、运动神经元和肽能神经元组成的组。

13.根据实施例4或5所述的组合物，其中所述人患有神经系统病症。

14.根据实施例3所述的AAV载体或根据实施例6所述的组合物，其中所述Dlx2是人Dlx2(hDlx2)。

15.根据实施例3所述的AAV载体或根据实施例6所述的组合物，其中所述Dlx2选自由黑猩猩Dlx2、倭黑猩猩Dlx2、红毛猩猩Dlx2、大猩猩Dlx2、猕猴Dlx2、狨猴Dlx2、卷尾猴Dlx2、狒狒Dlx2、长臂猿Dlx2和狐猴Dlx2组成的组。

16.根据实施例14所述的AAV载体或组合物，其中所述hDlx2包含编码与以下至少80％相同或相似的氨基酸序列的核酸编码序列：SEQ ID NO:10。

17.根据实施例14所述的AAV载体或组合物，其中所述hDlx2编码序列包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。

18.根据实施例3所述的AAV载体或根据实施例6所述的组合物，其中所述GFAP启动子是人GFAP(hGFAP)启动子。

19.根据实施例3所述的AAV载体或根据实施例6所述的组合物，其中所述GFAP启动子选自由黑猩猩GFAP启动子、倭黑猩猩GFAP启动子、红毛猩猩GFAP启动子、大猩猩GFAP启动子、猕猴GFAP启动子，狨猴GFAP启动子、卷尾猴GFAP启动子、狒狒GFAP启动子、长臂猿GFAP启动子和狐猴GFAP启动子组成的组。

20.根据实施例18所述的AAV载体或组合物，其中所述hGFAP启动子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:3，或其互补序列。

21.根据实施例18所述的AAV载体或组合物，其中所述hGFAP启动子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:4，或其互补序列。

22.根据实施例18所述的AAV载体或组合物，其中所述hGFAP启动子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:12，或其互补序列

23.根据实施例3所述的AAV载体或根据实施例6所述的组合物，其中所述增强子选自由来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子和巨细胞病毒(CMV)增强子组成的组。

24.根据实施例23所述的AAV载体或组合物，其中所述EF1-α包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。

25.根据实施例23所述的AAV载体或组合物，其中所述CMV增强子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。

26.根据实施例3所述的AAV载体或根据实施例6所述的组合物，其中所述嵌合内含子包含与选自由以下项组成的组的核酸至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:5和19，或其互补序列。

27.根据实施例3所述的AAV载体或根据实施例6所述的组合物，其中所述WPRE包含与选自由以下项组成的组的核酸至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:7和18，或其互补序列。

28.根据实施例3所述的AAV载体或根据实施例6所述的组合物，其中所述多聚腺苷酸化信号选自由SV40多聚腺苷酸化信号、hGH多聚腺苷酸化信号和bGH多聚腺苷酸化信号组成的组。

29.根据实施例28所述的AAV载体或组合物，其中所述SV40多聚腺苷酸化信号包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。

30.根据实施例28所述的AAV载体或组合物，其中所述hGH多聚腺苷酸化信号包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。

31.根据实施例28所述的AAV载体或组合物，其中所述bGH多聚腺苷酸化信号包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。

32.根据实施例3所述的AAV载体或根据实施例6所述的组合物，其中所述AAV载体进一步包含编码AAV蛋白序列的核酸序列。

33.根据实施例1至3中任一项所述的AAV载体或根据实施例4至6中任一项所述的组合物，其中所述AAV载体包含AAV血清型2反向末端重复序列(ITR)。

34.根据实施例1至3中任一项所述的AAV载体或根据实施例4至6中任一项所述的组合物，其中所述AAV载体包含AAV血清型5反向末端重复序列(ITR)。

35.根据实施例1至3中任一项所述的AAV载体或根据实施例4至6中任一项所述的组合物，其中所述AAV载体包含AAV血清型9反向末端重复序列(ITR)。

36.根据实施例1至3中任一项所述的AAV载体或根据实施例4至6中任一项所述的组合物，其中所述AAV载体包含至少一个与以下至少80％相同的ITR核酸序列：SEQ ID NO:1。

37.根据实施例1至3中任一项所述的AAV载体或根据实施例4至6中任一项所述的组合物，其中所述AAV载体包含至少一个与以下至少80％相同的ITR核酸序列：SEQ ID NO:9。

38.根据实施例6所述的组合物，其中所述有此需要的受试者是哺乳动物。

39.根据实施例38所述的组合物，其中所述哺乳动物是人。

40.根据实施例38所述的组合物，其中所述哺乳动物是非人灵长类动物。

41.根据实施例6所述的组合物，其中所述有此需要的受试者患有神经系统病症。

42.根据实施例13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症包括中枢神经系统(CNS)或周围神经系统的损伤。

43.根据实施例13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症包括CNS的损伤。

44.根据实施例13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症选自由以下项组成的组：阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、亨廷顿病、癫痫、物理性损伤、卒中、脑动脉瘤、外伤性脑损伤、脑震荡、肿瘤、炎症、感染、共济失调、脑萎缩、脊髓萎缩、多发性硬化症、外伤性脊髓损伤、缺血性或出血性脊髓病(脊髓病)、全脑缺血、缺氧缺血性脑病、栓塞、纤维软骨栓塞性脊髓病、血栓形成、肾病、慢性炎性疾病、脑膜炎、和脑静脉窦血栓形成。

45.根据实施例13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症是阿尔茨海默病。

46.根据实施例13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症是帕金森病。

47.根据实施例13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症是ALS。

48.根据实施例13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症是亨廷顿病。

49.根据实施例13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症是卒中。

50.根据实施例49所述的组合物，其中所述卒中是缺血性卒中。

51.根据实施例49所述的组合物，其中所述卒中是出血性卒中。

52.根据实施例41所述的组合物，其中所述组合物能够将至少一种神经胶质细胞转化为神经元。

53.根据实施例52所述的组合物，其中所述神经胶质细胞选自由星形胶质细胞和NG2细胞组成的组。

54.根据实施例52所述的组合物，其中所述神经胶质细胞是星形胶质细胞。

55.根据实施例54所述的组合物，其中所述星形胶质细胞是反应性星形胶质细胞。

56.根据实施例52所述的组合物，其中所述神经胶质细胞是GFAP阳性的。

57.根据实施例52所述的组合物，其中所述神经元是功能性神经元。

58.根据实施例52所述的组合物，其中所述功能性神经元选自由谷氨酸能神经元、GABA能神经元、多巴胺能神经元、胆碱能神经元、血清素能神经元、肾上腺素能神经元、运动神经元和肽能神经元组成的组。

59.根据实施例58所述的组合物，其中所述功能性神经元是谷氨酸能神经元。

60.根据实施例6所述的组合物，其中所述组合物被配制以递送给有此需要的受试者。

61.根据实施例60所述的组合物，其中所述组合物被配制以用于局部递送。

62.根据实施例61所述的组合物，其中所述组合物被配制以用于全身递送。

63.根据实施例60至62中任一项所述的组合物，其中所述组合物被配制以用于经由腹膜内、肌肉内、静脉内、鞘内、大脑内、颅内、脑的侧脑室内、小脑延髓池内、玻璃体内、视网膜下内、实质内、鼻内或口服施用进行的递送。

64.一种方法，其包括将根据实施例6所述的组合物递送给所述有此需要的受试者。

65.根据实施例64所述的方法，其中所述组合物被配制以递送给有此需要的受试者。

66.根据实施例64所述的方法，其中所述递送包括局部施用。

67.根据实施例64所述的方法，其中所述递送包括全身施用。

68.根据实施例64至67中任一项所述的方法，其中所述递送包括腹膜内、肌肉内、静脉内、鞘内、大脑内、颅内、脑的侧脑室内、小脑延髓池内、玻璃体内、视网膜下内、实质内、鼻内或口服施用。

69.一种将活人脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中所述AAV包含DNA载体构建体，所述DNA载体构建体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，所述hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中所述序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；

(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；

(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

70.一种将活体脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中所述AAV包含DNA载体构建体，所述DNA载体构建体包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸序列，所述hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸编码序列，其中所述编码序列可操作地连接到表达控制元件，所述表达控制元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；

(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；

(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

71.一种将有此需要的受试者的神经胶质细胞转化为神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)递送至所述有此需要的受试者，其中所述AAV包含DNA载体构建体，所述DNA载体构建体包含无远端同源框2(Dlx2)序列，所述Dlx2序列可操作地连接到表达控制元件，所述表达控制元件包含：

(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)增强子；

(c)嵌合内含子；

(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)和多聚腺苷酸化信号序列，

其中所述载体能够将所述有此需要的受试者的至少一种神经胶质细胞转化为神经元。

72.一种治疗有此需要的受试者的神经系统病症的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)递送至所述受试者，其中给予所述有此需要的受试者的所述AAV包含DNA载体构建体，所述DNA载体构建体包含可操作地连接到表达控制元件的无远端同源框2(Dlx2)序列，所述表达控制元件包含：

(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)增强子；

(c)嵌合内含子；

(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)多聚腺苷酸化信号。

73.根据实施例69至72中任一项所述的方法，其中所述AAV选自由AAV血清型2、AAV血清型5和AAV血清型9组成的组。

74.根据实施例73所述的方法，其中所述AAV是AAV血清型2。

75.根据实施例73所述的方法，其中所述AAV是AAV血清型5。

76.根据实施例73所述的方法，其中所述AAV是AAV血清型9。

77.根据实施例69或70所述的方法，其中所述功能性神经元是谷氨酸能神经元、GABA能神经元、多巴胺能神经元、胆碱能神经元、血清素能神经元、肾上腺素能神经元、运动神经元和肽能神经元。

78.根据实施例71或72所述的方法，其中所述Dlx2是人Dlx2(hDlx2)。

79.根据实施例71或72所述的方法，其中所述Dlx2选自由黑猩猩Dlx2、倭黑猩猩Dlx2、红毛猩猩Dlx2、大猩猩Dlx2、猕猴Dlx2、狨猴Dlx2、卷尾猴Dlx2、狒狒Dlx2，长臂猿Dlx2和狐猴Dlx2组成的组。

80.根据实施例78所述的方法，其中所述hDlx2包含编码与以下至少80％相同或相似的氨基酸序列的氨基酸序列：SEQ ID NO:10。

81.根据实施例78所述的方法，其中所述hDlx2编码序列包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。

82.根据实施例71或72所述的方法，其中所述GFAP启动子是人GFAP(hGFAP)启动子。

83.根据实施例71或72所述的方法，其中所述GFAP启动子选自由黑猩猩GFAP启动子、倭黑猩猩GFAP启动子、红毛猩猩GFAP启动子、大猩猩GFAP启动子、猕猴GFAP启动子，狨猴GFAP启动子、卷尾猴GFAP启动子、狒狒GFAP启动子、长臂猿GFAP启动子和狐猴GFAP启动子组成的组。

84.根据实施例82所述的方法，其中所述hGFAP启动子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:3，或其互补序列。

85.根据实施例83所述的方法，其中所述hGFAP启动子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:4，或其互补序列。

86.根据实施例82所述的方法，其中所述hGFAP启动子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:12，或其互补序列。

87.根据实施例71或72所述的方法，其中所述增强子选自由来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子和巨细胞病毒(CMV)增强子组成的组。

88.根据实施例87所述的方法，其中所述EF1-α包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。

89.根据实施例87所述的方法，其中所述CMV增强子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。

90.根据实施例71或72所述的方法，其中所述嵌合内含子包含与选自由以下项组成的组的核酸序列至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:5和19，或其互补序列。

91.根据实施例71或72所述的方法，其中所述WPRE包含与选自由以下项组成的组的核酸序列至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:7和18，或其互补序列。

92.根据实施例71或72所述的方法，其中所述多聚腺苷酸化信号选自由SV40多聚腺苷酸化信号和hGH多聚腺苷酸化信号组成的组。

93.根据实施例71或72所述的方法，其中所述SV40多聚腺苷酸化信号包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。

94.根据实施例71或72所述的方法，其中所述hGH多聚腺苷酸化信号包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。

95.根据实施例71或72所述的方法，其中所述bGH多聚腺苷酸化信号包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。

96.根据实施例71或72所述的方法，其中所述载体进一步包含编码AAV蛋白序列的核酸序列。

97.根据实施例69至72中任一项所述的方法，其中所述载体包含AAV血清型2反向末端重复序列(ITR)。

98.根据实施例69至72中任一项所述的方法，其中所述载体包含AAV血清型5反向末端重复序列(ITR)。

99.根据实施例69至72中任一项所述的方法，其中所述载体包含AAV血清型9反向末端重复序列(ITR)。

100.根据实施例69至72中任一项所述的方法，其中所述载体包含至少一个与以下至少80％相同的ITR核酸序列：SEQ ID NO:1。

101.根据实施例69至72中任一项所述的方法，其中所述载体包含至少一个与以下至少80％相同的ITR核酸序列：SEQ ID NO:9。

102.根据实施例69所述的方法，其中所述转化发生在中枢神经系统(CNS)或周围神经系统中。

103.根据实施例71所述的方法，其中所述转化发生在CNS中。

104.根据实施例71或72所述的方法，其中所述有此需要的受试者是哺乳动物。

105.根据实施例104所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

106.根据实施例104所述的方法，其中所述哺乳动物是非人灵长类动物。

107.根据实施例71或72所述的方法，其中所述递送包括局部施用。

108.根据实施例71或72所述的方法，其中所述递送包括全身施用。

109.根据实施例71或72所述的方法，其中所述递送包括选自由以下项组成的组的施用：腹膜内施用、肌肉内施用、静脉内施用、鞘内施用、大脑内施用、颅内施用、脑的侧脑室内施用、小脑延髓池内施用、玻璃体内施用、视网膜下内施用、实质内施用、鼻内施用和口服施用。

110.根据实施例69或70所述的方法，其中所述注射包括选自由以下项组成的组的注射：腹膜内注射、肌肉内注射、静脉内注射、鞘内注射、大脑内注射、颅内注射、脑的侧脑室内注射、小脑延髓池内注射、玻璃体内注射、视网膜下内注射、实质内注射、鼻内注射和经口注射。

111.根据实施例71或72所述的方法，其中所述递送包括注射。

112.根据实施例69、70或111中任一项所述的方法，其中所述注射以介于10¹⁰个颗粒/mL与10¹⁴个颗粒/mL之间的浓度进行。

113.根据实施例112所述的方法，其中所述注射进一步包括介于0.1uL/分钟与5.0uL/分钟之间的流速。

114.根据实施例71所述的方法，其中所述至少一种神经胶质细胞选自由至少一种星形胶质细胞和至少一种NG2细胞组成的组。

115.根据实施例69所述的方法，其中所述至少一种神经胶质细胞是至少一种星形胶质细胞。

116.根据实施例114或115所述的方法，其中所述至少一种星形胶质细胞是反应性星形胶质细胞。

117.根据实施例1所述的方法，其中所述神经元是功能性神经元。

118.根据实施例69、70和117中任一项所述的方法，其中所述功能性神经元选自由谷氨酸能神经元、GABA能神经元、多巴胺能神经元、胆碱能神经元、血清素能神经元、肾上腺素能神经元、运动神经元和肽能神经元组成的组。

119.根据实施例71所述的方法，其中与所述递送之前的所述受试者相比，所述受试者表现出至少一种神经系统病症症状的改善。

120.根据实施例119所述的方法，其中所述改善是在所述递送的1年内测量的。

121.根据实施例69、70或111中任一项所述的方法，其中所述方法包括将所述AAV载体直接注射到所述受试者的脑中。

122.根据实施例69或70中任一项所述的方法，其中所述转化是在所述脑的大脑皮层中。

123.根据实施例69或70或111中任一项所述的方法，其中所述方法包括将所述AAV载体直接注射到所述受试者的脊髓中。

124.根据实施例72所述的方法，其中所述神经系统病症包括中枢神经系统(CNS)或周围神经系统的损伤。

125.根据实施例72所述的方法，其中所述神经系统病症选自由以下项组成的组：阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、亨廷顿病、癫痫、物理性损伤、卒中、脑动脉瘤、外伤性脑损伤、脑震荡、肿瘤、炎症、感染、共济失调、脑萎缩、脊髓萎缩、多发性硬化症、外伤性脊髓损伤、缺血性或出血性脊髓病(脊髓病)、全脑缺血、缺氧缺血性脑病、栓塞、纤维软骨栓塞性脊髓病、血栓形成、肾病、慢性炎性疾病、脑膜炎、和脑静脉窦血栓形成。

126.根据实施例72所述的方法，其中所述神经系统病症是阿尔茨海默病。

127.根据实施例72所述的方法，其中所述神经系统病症是帕金森病。

128.根据实施例72所述的方法，其中所述神经系统病症是ALS。

129.根据实施例72所述的方法，其中所述神经系统病症是亨廷顿病。

130.根据实施例72所述的方法，其中所述神经系统病症是卒中。

131.根据实施例130所述的方法，其中所述卒中是缺血性卒中。

132.根据实施例130所述的方法，其中所述卒中是出血性卒中。

133.根据实施例72所述的方法，其中所述方法能够将至少一种神经胶质细胞转化为神经元。

134.根据实施例133所述的方法，其中所述神经胶质细胞选自由星形胶质细胞和NG2细胞组成的组。

135.根据实施例132所述的方法，其中所述神经胶质细胞是星形胶质细胞。

136.根据实施例135所述的方法，其中所述星形胶质细胞是反应性星形胶质细胞。

137.根据实施例133所述的方法，其中所述神经胶质细胞是GFAP阳性的。

138.根据实施例133所述的方法，其中所述神经元是功能性神经元。

139.根据实施例138所述的方法，其中所述功能性神经元选自由谷氨酸能神经元、GABA能神经元、多巴胺能神经元、胆碱能神经元、血清素能神经元、肾上腺素能神经元、运动神经元和肽能神经元组成的组。

140.根据实施例69或70所述的方法，其中将治疗有效剂量的所述AAV注射到所述受试者中。

141.根据实施例71或72所述的方法，其中将治疗有效剂量的所述AAV递送到所述受试者中。

142.根据实施例140或141所述的方法，其中所述治疗有效剂量与药学上可接受的载体一起施用。

143.一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，所述hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中所述hDlx2序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和

(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

144.一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸编码序列，所述hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中所述编码序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和

(c)具有SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

145.一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述AAV载体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，所述hDlx2序列具有SEQ ID NO:6的核酸序列，并且其中所述序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和

(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

146.一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述AAV载体包含编码无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸序列，所述hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸编码序列，并且其中所述编码序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和

(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号序列、包含SEQID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

147.一种将活人脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中所述AAV包含DNA载体构建体，所述DNA载体构建体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，所述hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中所述序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和

(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

148.一种将活体脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中所述AAV包含DNA载体构建体，所述DNA载体构建体包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸序列，所述hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸编码序列，其中所述编码序列可操作地连接到表达控制元件，所述表达控制元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和

(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

序列表

<110> NEUEXCELL THERAPEUTICS INC

<120> DLX2载体

<130> P34836WO00

<140>

<141>

<150> 63/247,417

<151> 2021-09-23

<150> 63/084,927

<151> 2020-09-29

<160> 21

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 128

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 1

tgcaggcagc tgcgcgctcg ctcgctcact gaggccgccc gggcgtcggg cgacctttgg 60

tcgcccggcc tcagtgagcg agcgagcgcg cagagaggga gtggccaact ccatcactag 120

gggttcct 128

<210> 2

<211> 153

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 2

tgcaaagatg gataaagttt taaacagaga ggaatctttg cagctaatgg accttctagg 60

tcttgaaagg agtgggaatt ggctccggtg cccgtcagtg ggcagagcgc acatcgccca 120

cagtccccga gaagttgggg ggaggggtcg gca 153

<210> 3

<211> 686

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 3

ctagtaacat atcctggtgt ggagtagggg acgctgctct gacagaggct cgggggcctg 60

agctggctct gtgagctggg gaggaggcag acagccaggc cttgtctgca agcagacctg 120

gcagcattgg gctggccgcc ccccagggcc tcctcttcat gcccagtgaa tgactcacct 180

tggcacagac acaatgttcg gggtgggcac agtgcctgct tcccgccgca ccccagcccc 240

cctcaaatgc cttccgagaa gcccattgag cagggggctt gcattgcacc ccagcctgac 300

agcctggcat cttgggataa aagcagcaca gccccctagg ggctgccctt gctgtgtggc 360

gccaccggcg gtggagaaca aggctctatt cagcctgtgc ccaggaaagg ggatcagggg 420

atgcccaggc atggacagtg ggtggcaggg ggggagagga gggctgtctg cttcccagaa 480

gtccaaggac acaaatgggt gaggggagag ctctccccat agctgggctg cggcccaacc 540

ccaccccctc aggctatgcc agggggtgtt gccaggggca cccgggcatc gccagtctag 600

cccactcctt cataaagccc tcgcatccca ggagcgagca gagccagagc aggttggaga 660

ggagacgcat cacctccgct gctcgc 686

<210> 4

<211> 1667

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 4

ctgcaagcag acctggcagc attgggctgg ccgcccccca gggcctcctc ttcatgccca 60

gtgaatgact caccttggca cagacacaat gttcggggtg ggcacagtgc ctgcttcccg 120

ccgcacccca gcccccctca aatgccttcc gagaagccca ttgagtaggg ggcttgcatt 180

gcaccccagc ctgacagcct ggcatcttgg gataaaagca gcacagcccc ctaggggctg 240

cccttgctgt gtggcgccac cggcggtgga gaacaaggct ctattcagcc tgtgcccagg 300

aaaggggatc aggggatgcc caggcatgga cagtgggtgg caggggggga gaggagggct 360

gtctgcttcc cagaagtcca aggacacaaa tgggtgaggg gactgggcag ggttctgacc 420

ctgtgggacc agagtggagg gcgtagatgg acctgaagtc tccagggaca acagggccca 480

ggtctcaggc tcctagttgg gcccagtggc tccagcgttt ccaaacccat ccatccccag 540

aggttcttcc catctctcca ggctgatgtg tgggaactcg aggaaataaa tctccagtgg 600

gagacggagg ggtggccagg gaaacggggc gctgcaggaa taaagacgag ccagcacagc 660

cagctcatgc gtaacggctt tgtggagctg tcaaggcctg gtctctggga gagaggcaca 720

gggaggccag acaaggaagg ggtgacctgg agggacagat ccaggggcta aagtcctgat 780

aaggcaagag agtgccggcc ccctcttgcc ctatcaggac ctccactgcc acatagaggc 840

catgattgac ccttagacaa agggctggtg tccaatccca gcccccagcc ccagaactcc 900

agggaatgaa tgggcagaga gcaggaatgt gggacatctg tgttcaaggg aaggactcca 960

ggagtctgct gggaatgagg cctagtagga aatgaggtgg cccttgaggg tacagaacag 1020

gttcattctt cgccaaattc ccagcacctt gcaggcactt acagctgagt gagataatgc 1080

ctgggttatg aaatcaaaaa gttggaaagc aggtcagagg tcatctggta cagcccttcc 1140

ttcccttttt tttttttttt ttttgtgaga caaggtctct ctctgttgcc caggctggag 1200

tggcgcaaac acagctcact gcagcctcaa cctactgggc tcaagcaatc ctccagcctc 1260

agcctcccaa agtgctggga ttacaagcat gagccacccc actcagccct ttccttcctt 1320

tttaattgat gcataataat tgtaagtatt catcatggtc caaccaaccc tttcttgacc 1380

caccttccta gagagagggt cctcttgatt cagcggtcag ggccccagac ccatggtctg 1440

gctccaggta ccacctgcct catgcaggag ttggcgtgcc caggaagctc tgcctctggg 1500

cacagtgacc tcagtggggt gaggggagct ctccccatag ctgggctgcg gcccaacccc 1560

accccctcag gctatgccag ggggtgttgc caggggcacc cgggcatcgc cagtctagcc 1620

cactccttca taaagccctc gcatcccagg agcgagcaga gccagag 1667

<210> 5

<211> 133

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 5

gtaagtatca aggttacaag acaggtttaa ggagaccaat agaaactggg cttgtcgaga 60

cagagaagac tcttgcgttt ctgataggca cctattggtc ttactgacat ccactttgcc 120

tttctctcca cag 133

<210> 6

<211> 987

<212> DNA

<213> 智人

<400> 6

atgactggag tctttgacag tctagtggct gatatgcact cgacccagat cgccgcctcc 60

agcacgtacc accagcacca gcagcccccg agcggcggcg gcgccggccc gggtggcaac 120

agcagcagca gcagcagcct ccacaagccc caggagtcgc ccacccttcc ggtgtccacc 180

gccaccgaca gcagctacta caccaaccag cagcacccgg cgggcggcgg cggcggcggg 240

ggctcgccct acgcgcacat gggttcctac cagtaccaag ccagcggcct caacaacgtc 300

ccttactccg ccaagagcag ctatgacctg ggctacaccg ccgcctacac ctcctacgct 360

ccctatggaa ccagttcgtc cccagccaac aacgagcctg agaaggagga ccttgagcct 420

gaaattcgga tagtgaacgg gaagccaaag aaagtccgga aaccccgcac catctactcc 480

agtttccagc tggcggctct tcagcggcgt ttccaaaaga ctcaatactt ggccttgccg 540

gagcgagccg agctggcggc ctctctgggc ctcacccaga ctcaggtcaa aatctggttc 600

cagaaccgcc ggtccaagtt caagaagatg tggaaaagtg gtgagatccc ctcggagcag 660

caccctgggg ccagcgcttc tccaccttgt gcttcgccgc cagtctcagc gccggcctcc 720

tgggactttg gtgtgccgca gcggatggcg ggcggcggtg gtccgggcag tggcggcagc 780

ggcgccggca gctcgggctc cagcccgagc agcgcggcct cggcttttct gggcaactac 840

ccctggtacc accagacctc gggatccgcc tcacacctgc aggccacggc gccgctgctg 900

caccccactc agaccccgca gccgcatcac caccaccacc atcacggcgg cgggggcgcc 960

ccggtgagcg cggggacgat tttctga 987

<210> 7

<211> 589

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 7

aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct 60

ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt 120

atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg 180

tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact 240

ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct 300

attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg 360

ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc 420

gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc 480

aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt 540

cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgc 589

<210> 8

<211> 251

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 8

cgatccaccg gatctagata actgatcata atcagccata ccacatttgt agaggtttta 60

cttgctttaa aaaacctccc acacctcccc ctgaacctga aacataaaat gaatgcaatt 120

gttgttgtta acttgtttat tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca 180

aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc 240

aatgtatctt a 251

<210> 9

<211> 139

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 9

aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60

ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120

gagcgcgcag ctgcctgca 139

<210> 10

<211> 328

<212> PRT

<213> 智人

<400> 10

Met Thr Gly Val Phe Asp Ser Leu Val Ala Asp Met His Ser Thr Gln

1 5 10 15

Ile Ala Ala Ser Ser Thr Tyr His Gln His Gln Gln Pro Pro Ser Gly

20 25 30

Gly Gly Ala Gly Pro Gly Gly Asn Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu His

35 40 45

Lys Pro Gln Glu Ser Pro Thr Leu Pro Val Ser Thr Ala Thr Asp Ser

50 55 60

Ser Tyr Tyr Thr Asn Gln Gln His Pro Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly

65 70 75 80

Gly Ser Pro Tyr Ala His Met Gly Ser Tyr Gln Tyr Gln Ala Ser Gly

85 90 95

Leu Asn Asn Val Pro Tyr Ser Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Leu Gly Tyr

100 105 110

Thr Ala Ala Tyr Thr Ser Tyr Ala Pro Tyr Gly Thr Ser Ser Ser Pro

115 120 125

Ala Asn Asn Glu Pro Glu Lys Glu Asp Leu Glu Pro Glu Ile Arg Ile

130 135 140

Val Asn Gly Lys Pro Lys Lys Val Arg Lys Pro Arg Thr Ile Tyr Ser

145 150 155 160

Ser Phe Gln Leu Ala Ala Leu Gln Arg Arg Phe Gln Lys Thr Gln Tyr

165 170 175

Leu Ala Leu Pro Glu Arg Ala Glu Leu Ala Ala Ser Leu Gly Leu Thr

180 185 190

Gln Thr Gln Val Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Ser Lys Phe Lys

195 200 205

Lys Met Trp Lys Ser Gly Glu Ile Pro Ser Glu Gln His Pro Gly Ala

210 215 220

Ser Ala Ser Pro Pro Cys Ala Ser Pro Pro Val Ser Ala Pro Ala Ser

225 230 235 240

Trp Asp Phe Gly Val Pro Gln Arg Met Ala Gly Gly Gly Gly Pro Gly

245 250 255

Ser Gly Gly Ser Gly Ala Gly Ser Ser Gly Ser Ser Pro Ser Ser Ala

260 265 270

Ala Ser Ala Phe Leu Gly Asn Tyr Pro Trp Tyr His Gln Thr Ser Gly

275 280 285

Ser Ala Ser His Leu Gln Ala Thr Ala Pro Leu Leu His Pro Thr Gln

290 295 300

Thr Pro Gln Pro His His His His His His His Gly Gly Gly Gly Ala

305 310 315 320

Pro Val Ser Ala Gly Thr Ile Phe

325

<210> 11

<211> 380

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 11

gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc 60

catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca 120

acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga 180

ctttccattg acgtcaatgg gtggactatt tacggtaaac tgcccacttg gcagtacatc 240

aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct 300

ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac atctacgtat 360

tagtcatcgc tattaccatg 380

<210> 12

<211> 2214

<212> DNA

<213> 智人

<400> 12

cgcgtcccac ctccctctct gtgctgggac tcacagaggg agacctcagg aggcagtctg 60

tccatcacat gtccaaatgc agagcatacc ctgggctggg cgcagtggcg cacaactgta 120

attccagcac tttgggaggc tgatgtggaa ggatcacttg agcccagaag ttctagacca 180

gcctgggcaa catggcaaga ccctatctct acaaaaaaag ttaaaaaatc agccacgtgt 240

ggtgacacac acctgtagtc ccagctattc aggaggctga ggtgagggga tcacttaagg 300

ctgggaggtt gaggctgcag tgagtcgtgg ttgcgccact gcactccagc ctgggcaaca 360

gtgagaccct gtctcaaaag acaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaagaaca tatcctggtg 420

tggagtaggg gacgctgctc tgacagaggc tcgggggcct gagctggctc tgtgagctgg 480

ggaggaggca gacagccagg ccttgtctgc aagcagacct ggcagcattg ggctggccgc 540

cccccagggc ctcctcttca tgcccagtga atgactcacc ttggcacaga cacaatgttc 600

ggggtgggca cagtgcctgc ttcccgccgc accccagccc ccctcaaatg ccttccgaga 660

agcccattga gcagggggct tgcattgcac cccagcctga cagcctggca tcttgggata 720

aaagcagcac agccccctag gggctgccct tgctgtgtgg cgccaccggc ggtggagaac 780

aaggctctat tcagcctgtg cccaggaaag gggatcaggg gatgcccagg catggacagt 840

gggtggcagg gggggagagg agggctgtct gcttcccaga agtccaagga cacaaatggg 900

tgaggggact gggcagggtt ctgaccctgt gggaccagag tggagggcgt agatggacct 960

gaagtctcca gggacaacag ggcccaggtc tcaggctcct agttgggccc agtggctcca 1020

gcgtttccaa acccatccat ccccagaggt tcttcccatc tctccaggct gatgtgtggg 1080

aactcgagga aataaatctc cagtgggaga cggaggggtg gccagggaaa cggggcgctg 1140

caggaataaa gacgagccag cacagccagc tcatgtgtaa cggctttgtg gagctgtcaa 1200

ggcctggtct ctgggagaga ggcacaggga ggccagacaa ggaaggggtg acctggaggg 1260

acagatccag gggctaaagt cctgataagg caagagagtg ccggccccct cttgccctat 1320

caggacctcc actgccacat agaggccatg attgaccctt agacaaaggg ctggtgtcca 1380

atcccagccc ccagccccag aactccaggg aatgaatggg cagagagcag gaatgtggga 1440

catctgtgtt caagggaagg actccaggag tctgctggga atgaggccta gtaggaaatg 1500

aggtggccct tgagggtaca gaacaggttc attcttcgcc aaattcccag caccttgcag 1560

gcacttacag ctgagtgaga taatgcctgg gttatgaaat caaaaagttg gaaagcaggt 1620

cagaggtcat ctggtacagc ccttccttcc cttttttttt tttttttttt gtgagacaag 1680

gtctctctct gttgcccagg ctggagtggc gcaaacacag ctcactgcag cctcaaccta 1740

ctgggctcaa gcaatcctcc agcctcagcc tcccaaagtg ctgggattac aagcatgagc 1800

caccccactc agccctttcc ttccttttta attgatgcat aataattgta agtattcatc 1860

atggtccaac caaccctttc ttgacccacc ttcctagaga gagggtcctc ttgcttcagc 1920

ggtcagggcc ccagacccat ggtctggctc caggtaccac ctgcctcatg caggagttgg 1980

cgtgcccagg aagctctgcc tctgggcaca gtgacctcag tggggtgagg ggagctctcc 2040

ccatagctgg gctgcggccc aaccccaccc cctcaggcta tgccaggggg tgttgccagg 2100

ggcacccggg catcgccagt ctagcccact ccttcataaa gccctcgcat cccaggagcg 2160

agcagagcca gagcaggttg gagaggagac gcatcacctc cgctgctcgc cggg 2214

<210> 13

<211> 477

<212> DNA

<213> 智人

<400> 13

gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg ccctggaagt tgccactcca 60

gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca ttttgtctga ctaggtgtcc 120

ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca aggggcaagt tgggaagaca 180

acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga gtgcagtggc acaatcttgg 240

ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc tgcctcagcc tcccgagttg 300

ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt tgtttttttg gtagagacgg 360

ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat ctcaggtgat ctacccacct 420

tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg ctcccttccc tgtcctt 477

<210> 14

<211> 241

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 14

gtcctttcca caagatatat aaacccaaga aatcgaaata ctttcaagtt acggtaagca 60

tatgatagtc cattttaaaa cataatttta aaactgcaaa ctacccaaga aattattact 120

ttctacgtca cgtattttgt actaatatct ttgtgtttac agtcaaatta attctaatta 180

tctctctaac agccttgtat cgtatatgca aatatgaagg aatcatggga aataggccct 240

c 241

<210> 15

<211> 58

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成寡核苷酸

<400> 15

ccggtggttc agttacgggt taattctcga gaattaaccc gtaactgaac catttttg 58

<210> 16

<211> 60

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成寡核苷酸

<400> 16

ccggcagtta cgggttaatt aatacctgac ccatattaat taacccgtaa ctgctttttg 60

<210> 17

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成寡核苷酸

<400> 17

ccggtgttgc cgcagcatca ctaatctcga gattagtgat gctgcggcaa cattttg 57

<210> 18

<211> 581

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 18

gagcatctta ccgccattta tacccatatt tgttctgttt ttcttgattt gggtatacat 60

ttaaatgtta ataaaacaaa atggtggggc aatcatttac atttttaggg atatgtaatt 120

actagttcag gtgtattgcc acaagacaaa catgttaaga aactttcccg ttatttacgc 180

tctgttcctg ttaatcaacc tctggattac aaaatttgtg aaagattgac tgatattctt 240

aactatgttg ctccttttac gctgtgtgga tatgctgctt tatagcctct gtatctagct 300

attgcttccc gtacggcttt cgttttctcc tccttgtata aatcctggtt gctgtctctt 360

ttagaggagt tgtggcccgt tgtccgtcaa cgtggcgtgg tgtgctctgt gtttgctgac 420

gcaaccccca ctggctgggg cattgccacc acctgtcaac tcctttctgg gactttcgct 480

ttccccctcc cgatcgccac ggcagaactc atcgccgcct gccttgcccg ctgctggaca 540

ggggctaggt tgctgggcac tgataattcc gtggtgttgt c 581

<210> 19

<211> 1062

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 19

ggagtcgctg cgttgccttc gccccgtgcc ccgctccgcg ccgcctcgcg ccgcccgccc 60

cggctctgac tgaccgcgtt actcccacag gtgagcgggc gggacggccc ttctccctcc 120

gggctgtaat tagcgcttgg tttaatgacg gctcgtttct tttctgtggc tgcgtgaaag 180

ccttaaaggg ctccgggagg gcctttgtgc gggggggagc ggctcggggg gtgcgtgcgt 240

gtgtgtgtgc gtggggagcg ccgcgtgcgg cccgcgctgc ccggcggctg tgagcgctgc 300

gggcgcggcg cggggctttg tgcgctccgc gtgtgcgcga ggggagcgcg ggccgggggc 360

ggtgccccgc ggtgcggggg ggctgcgagg ggaacaaagg ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg 420

tgggggggtg agcagggggt gtgggcgcgg cggtcgggct gtaacccccc cctggcaccc 480

ccctccccga gttgctgagc acggcccggc ttcgggtgcg gggctccgtg cggggcgtgg 540

cgcggggctc gccgtgccgg gcggggggtg gcggcaggtg ggggtgccgg gcggggcggg 600

gccgcctcgg gccggggagg gctcggggga ggggcgcggc ggccccggag cgccggcggc 660

tgtcgaggcg cggcgagccg cagccattgc cttttatggt aatcgtgcga gagggcgcag 720

ggacttcctt tgtcccaaat ctggcggagc cgaaatctgg gaggcgccgc cgcaccccct 780

ctagcgggcg cgggcgaagc ggtgcggcgc cggcaggaag gaaatgggcg gggagggcct 840

tcgtgcgtcg ccgcgccgcc gtccccttct ccatctccag cctcggggct gccgcagggg 900

gacggctgcc ttcggggggg acggggcagg gcggggttcg gcttctggcg tgtgaccggc 960

ggctttagag cctctgctaa ccatgttcat gccttcttct ttttcctaca gctcctgggc 1020

aacgtgctgg ttgttgtgct gtctcatcat tttggcaaag at 1062

<210> 20

<211> 208

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成多核苷酸

<400> 20

ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc 60

tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc 120

tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt 180

gggaagagaa tagcaggcat gctgggga 208

<210> 21

<211> 66

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列说明：合成寡核苷酸

<400> 21

ggaagcggag ctactaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct 60

ggacct 66

Claims (148)

1.一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，所述hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中所述hDlx2序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；

(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；

(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

2.一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸编码序列，所述hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中所述编码序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；

(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；

(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)具有SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

3.一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含编码Dlx2蛋白的无远端同源框2(Dlx2)核酸编码序列，其中所述编码序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)增强子；

(c)嵌合内含子；

(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)多聚腺苷酸化信号序列。

4.一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述AAV载体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，所述hDlx2序列具有SEQ IDNO:6的核酸序列，并且其中所述序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；

(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；

(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

5.一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述AAV载体包含编码无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸序列，所述hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸编码序列，并且其中所述编码序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；

(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；

(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号序列、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

6.一种用于治疗有此需要的受试者的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述AAV载体包含可操作地连接到表达控制元件的无远端同源框2(Dlx2)序列，所述表达控制元件包含：

(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)增强子；

(c)嵌合内含子；

(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)多聚腺苷酸化信号。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的AAV载体或根据权利要求4至6中任一项所述的组合物，其中所述AAV载体选自由AAV血清型2、AAV血清型5和AAV血清型9组成的组。

8.根据权利要求7所述的AAV载体或组合物，其中所述AAV载体是AAV血清型2。

9.根据权利要求7所述的AAV载体或组合物，其中所述AAV载体是AAV血清型5。

10.根据权利要求7所述的AAV载体或组合物，其中所述AAV载体是AAV血清型9。

11.根据权利要求4或5所述的组合物，其中所述神经胶质细胞是反应性星形胶质细胞。

12.根据权利要求4或5所述的组合物，其中所述功能性神经元选自由谷氨酸能神经元、GABA能神经元、多巴胺能神经元、胆碱能神经元、血清素能神经元、肾上腺素能神经元、运动神经元和肽能神经元组成的组。

13.根据权利要求4或5所述的组合物，其中所述人患有神经系统病症。

14.根据权利要求3所述的AAV载体或根据权利要求6所述的组合物，其中所述Dlx2是人Dlx2(hDlx2)。

15.根据权利要求3所述的AAV载体或根据权利要求6所述的组合物，其中所述Dlx2选自由黑猩猩Dlx2、倭黑猩猩Dlx2、红毛猩猩Dlx2、大猩猩Dlx2、猕猴Dlx2、狨猴Dlx2、卷尾猴Dlx2、狒狒Dlx2、长臂猿Dlx2和狐猴Dlx2组成的组。

16.根据权利要求14所述的AAV载体或组合物，其中所述hDlx2包含编码与以下至少80％相同或相似的氨基酸序列的核酸编码序列：SEQ ID NO:10。

17.根据权利要求14所述的AAV载体或组合物，其中所述hDlx2编码序列包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。

18.根据权利要求3所述的AAV载体或根据权利要求6所述的组合物，其中所述GFAP启动子是人GFAP(hGFAP)启动子。

19.根据权利要求3所述的AAV载体或根据权利要求6所述的组合物，其中所述GFAP启动子选自由黑猩猩GFAP启动子、倭黑猩猩GFAP启动子、红毛猩猩GFAP启动子、大猩猩GFAP启动子、猕猴GFAP启动子，狨猴GFAP启动子、卷尾猴GFAP启动子、狒狒GFAP启动子、长臂猿GFAP启动子和狐猴GFAP启动子组成的组。

20.根据权利要求18所述的AAV载体或组合物，其中所述hGFAP启动子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:3，或其互补序列。

21.根据权利要求18所述的AAV载体或组合物，其中所述hGFAP启动子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:4，或其互补序列。

22.根据权利要求18所述的AAV载体或组合物，其中所述hGFAP启动子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:12，或其互补序列

23.根据权利要求3所述的AAV载体或根据权利要求6所述的组合物，其中所述增强子选自由来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子和巨细胞病毒(CMV)增强子组成的组。

24.根据权利要求23所述的AAV载体或组合物，其中所述EF1-α包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。

25.根据权利要求23所述的AAV载体或组合物，其中所述CMV增强子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。

26.根据权利要求3所述的AAV载体或根据权利要求6所述的组合物，其中所述嵌合内含子包含与选自由以下项组成的组的核酸至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:5和19，或其互补序列。

27.根据权利要求3所述的AAV载体或根据权利要求6所述的组合物，其中所述WPRE包含与选自由以下项组成的组的核酸至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:7和18，或其互补序列。

28.根据权利要求3所述的AAV载体或根据权利要求6所述的组合物，其中所述多聚腺苷酸化信号选自由SV40多聚腺苷酸化信号、hGH多聚腺苷酸化信号和bGH多聚腺苷酸化信号组成的组。

29.根据权利要求28所述的AAV载体或组合物，其中所述SV40多聚腺苷酸化信号包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。

30.根据权利要求28所述的AAV载体或组合物，其中所述hGH多聚腺苷酸化信号包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。

31.根据权利要求28所述的AAV载体或组合物，其中所述bGH多聚腺苷酸化信号包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。

32.根据权利要求3所述的AAV载体或根据权利要求6所述的组合物，其中所述AAV载体进一步包含编码AAV蛋白序列的核酸序列。

33.根据权利要求1至3中任一项所述的AAV载体或根据权利要求4至6中任一项所述的组合物，其中所述AAV载体包含AAV血清型2反向末端重复序列(ITR)。

34.根据权利要求1至3中任一项所述的AAV载体或根据权利要求4至6中任一项所述的组合物，其中所述AAV载体包含AAV血清型5反向末端重复序列(ITR)。

35.根据权利要求1至3中任一项所述的AAV载体或根据权利要求4至6中任一项所述的组合物，其中所述AAV载体包含AAV血清型9反向末端重复序列(ITR)。

36.根据权利要求1至3中任一项所述的AAV载体或根据权利要求4至6中任一项所述的组合物，其中所述AAV载体包含至少一个与以下至少80％相同的ITR核酸序列：SEQ ID NO:1。

37.根据权利要求1至3中任一项所述的AAV载体或根据权利要求4至6中任一项所述的组合物，其中所述AAV载体包含至少一个与以下至少80％相同的ITR核酸序列：SEQ ID NO:9。

38.根据权利要求6所述的组合物，其中所述有此需要的受试者是哺乳动物。

39.根据权利要求38所述的组合物，其中所述哺乳动物是人。

40.根据权利要求38所述的组合物，其中所述哺乳动物是非人灵长类动物。

41.根据权利要求6所述的组合物，其中所述有此需要的受试者患有神经系统病症。

42.根据权利要求13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症包括中枢神经系统(CNS)或周围神经系统的损伤。

43.根据权利要求13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症包括CNS的损伤。

44.根据权利要求13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症选自由以下项组成的组：阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、亨廷顿病、癫痫、物理性损伤、卒中、脑动脉瘤、外伤性脑损伤、脑震荡、肿瘤、炎症、感染、共济失调、脑萎缩、脊髓萎缩、多发性硬化症、外伤性脊髓损伤、缺血性或出血性脊髓病(脊髓病)、全脑缺血、缺氧缺血性脑病、栓塞、纤维软骨栓塞性脊髓病、血栓形成、肾病、慢性炎性疾病、脑膜炎、和脑静脉窦血栓形成。

45.根据权利要求13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症是阿尔茨海默病。

46.根据权利要求13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症是帕金森病。

47.根据权利要求13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症是ALS。

48.根据权利要求13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症是亨廷顿病。

49.根据权利要求13或41所述的组合物，其中所述神经系统病症是卒中。

50.根据权利要求49所述的组合物，其中所述卒中是缺血性卒中。

51.根据权利要求49所述的组合物，其中所述卒中是出血性卒中。

52.根据权利要求41所述的组合物，其中所述组合物能够将至少一种神经胶质细胞转化为神经元。

53.根据权利要求52所述的组合物，其中所述神经胶质细胞选自由星形胶质细胞和NG2细胞组成的组。

54.根据权利要求52所述的组合物，其中所述神经胶质细胞是星形胶质细胞。

55.根据权利要求54所述的组合物，其中所述星形胶质细胞是反应性星形胶质细胞。

56.根据权利要求52所述的组合物，其中所述神经胶质细胞是GFAP阳性的。

57.根据权利要求52所述的组合物，其中所述神经元是功能性神经元。

58.根据权利要求52所述的组合物，其中所述功能性神经元选自由谷氨酸能神经元、GABA能神经元、多巴胺能神经元、胆碱能神经元、血清素能神经元、肾上腺素能神经元、运动神经元和肽能神经元组成的组。

59.根据权利要求58所述的组合物，其中所述功能性神经元是谷氨酸能神经元。

60.根据权利要求6所述的组合物，其中所述组合物被配制以递送给有此需要的受试者。

61.根据权利要求60所述的组合物，其中所述组合物被配制以用于局部递送。

62.根据权利要求61所述的组合物，其中所述组合物被配制以用于全身递送。

63.根据权利要求60至62中任一项所述的组合物，其中所述组合物被配制以用于经由腹膜内、肌肉内、静脉内、鞘内、大脑内、颅内、脑的侧脑室内、小脑延髓池内、玻璃体内、视网膜下内、实质内、鼻内或口服施用进行的递送。

64.一种方法，其包括将根据权利要求6所述的组合物递送给所述有此需要的受试者。

65.根据权利要求64所述的方法，其中所述组合物被配制以递送给有此需要的受试者。

66.根据权利要求64所述的方法，其中所述递送包括局部施用。

67.根据权利要求64所述的方法，其中所述递送包括全身施用。

68.根据权利要求64至67中任一项所述的方法，其中所述递送包括腹膜内、肌肉内、静脉内、鞘内、大脑内、颅内、脑的侧脑室内、小脑延髓池内、玻璃体内、视网膜下内、实质内、鼻内或口服施用。

69.一种将活人脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中所述AAV包含DNA载体构建体，所述DNA载体构建体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，所述hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中所述序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；

(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；

(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

70.一种将活体脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中所述AAV包含DNA载体构建体，所述DNA载体构建体包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸序列，所述hDlx2蛋白包含SEQ IDNO:10的氨基酸编码序列，其中所述编码序列可操作地连接到表达控制元件，所述表达控制元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；

(c)包含选自由SEQ ID NO:5和19组成的组的核酸序列的嵌合内含子；

(d)包含选自由SEQ ID NO:7和18组成的组的核酸序列的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

71.一种将有此需要的受试者的神经胶质细胞转化为神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)递送至所述有此需要的受试者，其中所述AAV包含DNA载体构建体，所述DNA载体构建体包含无远端同源框2(Dlx2)序列，所述Dlx2序列可操作地连接到表达控制元件，所述表达控制元件包含：

(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)增强子；

(c)嵌合内含子；

(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)和多聚腺苷酸化信号序列，

其中所述载体能够将所述有此需要的受试者的至少一种神经胶质细胞转化为神经元。

72.一种治疗有此需要的受试者的神经系统病症的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)递送至所述受试者，其中给予所述有此需要的受试者的所述AAV包含DNA载体构建体，所述DNA载体构建体包含可操作地连接到表达控制元件的无远端同源框2(Dlx2)序列，所述表达控制元件包含：

(a)神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)增强子；

(c)嵌合内含子；

(d)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和

(e)多聚腺苷酸化信号。

73.根据权利要求69至72中任一项所述的方法，其中所述AAV选自由AAV血清型2、AAV血清型5和AAV血清型9组成的组。

74.根据权利要求73所述的方法，其中所述AAV是AAV血清型2。

75.根据权利要求73所述的方法，其中所述AAV是AAV血清型5。

76.根据权利要求73所述的方法，其中所述AAV是AAV血清型9。

77.根据权利要求69或70所述的方法，其中所述功能性神经元是谷氨酸能神经元、GABA能神经元、多巴胺能神经元、胆碱能神经元、血清素能神经元、肾上腺素能神经元、运动神经元和肽能神经元。

78.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述Dlx2是人Dlx2(hDlx2)。

79.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述Dlx2选自由黑猩猩Dlx2、倭黑猩猩Dlx2、红毛猩猩Dlx2、大猩猩Dlx2、猕猴Dlx2、狨猴Dlx2、卷尾猴Dlx2、狒狒Dlx2，长臂猿Dlx2和狐猴Dlx2组成的组。

80.根据权利要求78所述的方法，其中所述hDlx2包含编码与以下至少80％相同或相似的氨基酸序列的氨基酸序列：SEQ ID NO:10。

81.根据权利要求78所述的方法，其中所述hDlx2编码序列包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:6，或其互补序列。

82.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述GFAP启动子是人GFAP(hGFAP)启动子。

83.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述GFAP启动子选自由黑猩猩GFAP启动子、倭黑猩猩GFAP启动子、红毛猩猩GFAP启动子、大猩猩GFAP启动子、猕猴GFAP启动子，狨猴GFAP启动子、卷尾猴GFAP启动子、狒狒GFAP启动子、长臂猿GFAP启动子和狐猴GFAP启动子组成的组。

84.根据权利要求82所述的方法，其中所述hGFAP启动子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:3，或其互补序列。

85.根据权利要求83所述的方法，其中所述hGFAP启动子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:4，或其互补序列。

86.根据权利要求82所述的方法，其中所述hGFAP启动子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:12，或其互补序列。

87.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述增强子选自由来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子和巨细胞病毒(CMV)增强子组成的组。

88.根据权利要求87所述的方法，其中所述EF1-α包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:2，或其互补序列。

89.据权利要求87所述的方法，其中所述CMV增强子包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:11，或其互补序列。

90.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述嵌合内含子包含与选自由以下项组成的组的核酸序列至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:5和19，或其互补序列。

91.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述WPRE包含与选自由以下项组成的组的核酸序列至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:7和18，或其互补序列。

92.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述多聚腺苷酸化信号选自由SV40多聚腺苷酸化信号和hGH多聚腺苷酸化信号组成的组。

93.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述SV40多聚腺苷酸化信号包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:8，或其互补序列。

94.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述hGH多聚腺苷酸化信号包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:13，或其互补序列。

95.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述bGH多聚腺苷酸化信号包含与以下至少80％相同的核酸序列：SEQ ID NO:20，或其互补序列。

96.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述载体进一步包含编码AAV蛋白序列的核酸序列。

97.根据权利要求69至72中任一项所述的方法，其中所述载体包含AAV血清型2反向末端重复序列(ITR)。

98.根据权利要求69至72中任一项所述的方法，其中所述载体包含AAV血清型5反向末端重复序列(ITR)。

99.根据权利要求69至72中任一项所述的方法，其中所述载体包含AAV血清型9反向末端重复序列(ITR)。

100.根据权利要求69至72中任一项所述的方法，其中所述载体包含至少一个与以下至少80％相同的ITR核酸序列：SEQ ID NO:1。

101.根据权利要求69至72中任一项所述的方法，其中所述载体包含至少一个与以下至少80％相同的ITR核酸序列：SEQ ID NO:9。

102.根据权利要求69所述的方法，其中所述转化发生在中枢神经系统(CNS)或周围神经系统中。

103.根据权利要求71所述的方法，其中所述转化发生在CNS中。

104.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述有此需要的受试者是哺乳动物。

105.根据权利要求104所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

106.根据权利要求104所述的方法，其中所述哺乳动物是非人灵长类动物。

107.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述递送包括局部施用。

108.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述递送包括全身施用。

109.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述递送包括选自由以下项组成的组的施用：腹膜内施用、肌肉内施用、静脉内施用、鞘内施用、大脑内施用、颅内施用、脑的侧脑室内施用、小脑延髓池内施用、玻璃体内施用、视网膜下内施用、实质内施用、鼻内施用和口服施用。

110.根据权利要求69或70所述的方法，其中所述注射包括选自由以下项组成的组的注射：腹膜内注射、肌肉内注射、静脉内注射、鞘内注射、大脑内注射、颅内注射、脑的侧脑室内注射、小脑延髓池内注射、玻璃体内注射、视网膜下内注射、实质内注射、鼻内注射和经口注射。

111.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述递送包括注射。

112.根据权利要求69、70或111中任一项所述的方法，其中所述注射以介于10¹⁰个颗粒/mL与10¹⁴个颗粒/mL之间的浓度进行。

113.根据权利要求112所述的方法，其中所述注射进一步包括介于0.1μL/分钟与5.0μL/分钟之间的流速。

114.根据权利要求71所述的方法，其中所述至少一种神经胶质细胞选自由至少一种星形胶质细胞和至少一种NG2细胞组成的组。

115.根据权利要求69所述的方法，其中所述至少一种神经胶质细胞是至少一种星形胶质细胞。

116.根据权利要求114或115所述的方法，其中所述至少一种星形胶质细胞是反应性星形胶质细胞。

117.根据权利要求1所述的方法，其中所述神经元是功能性神经元。

118.根据权利要求69、70和117中任一项所述的方法，其中所述功能性神经元选自由谷氨酸能神经元、GABA能神经元、多巴胺能神经元、胆碱能神经元、血清素能神经元、肾上腺素能神经元、运动神经元和肽能神经元组成的组。

119.根据权利要求71所述的方法，其中与所述递送之前的所述受试者相比，所述受试者表现出至少一种神经系统病症症状的改善。

120.根据权利要求119所述的方法，其中所述改善是在所述递送的1年内测量的。

121.根据权利要求69、70或111中任一项所述的方法，其中所述方法包括将所述AAV载体直接注射到所述受试者的脑中。

122.根据权利要求69或70中任一项所述的方法，其中所述转化是在所述脑的大脑皮层中。

123.根据权利要求69或70或111中任一项所述的方法，其中所述方法包括将所述AAV载体直接注射到所述受试者的脊髓中。

124.根据权利要求72所述的方法，其中所述神经系统病症包括中枢神经系统(CNS)或周围神经系统的损伤。

125.根据权利要求72所述的方法，其中所述神经系统病症选自由以下项组成的组：阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、亨廷顿病、癫痫、物理性损伤、卒中、脑动脉瘤、外伤性脑损伤、脑震荡、肿瘤、炎症、感染、共济失调、脑萎缩、脊髓萎缩、多发性硬化症、外伤性脊髓损伤、缺血性或出血性脊髓病(脊髓病)、全脑缺血、缺氧缺血性脑病、栓塞、纤维软骨栓塞性脊髓病、血栓形成、肾病、慢性炎性疾病、脑膜炎、和脑静脉窦血栓形成。

126.根据权利要求72所述的方法，其中所述神经系统病症是阿尔茨海默病。

127.根据权利要求72所述的方法，其中所述神经系统病症是帕金森病。

128.根据权利要求72所述的方法，其中所述神经系统病症是ALS。

129.根据权利要求72所述的方法，其中所述神经系统病症是亨廷顿病。

130.根据权利要求72所述的方法，其中所述神经系统病症是卒中。

131.根据权利要求130所述的方法，其中所述卒中是缺血性卒中。

132.根据权利要求130所述的方法，其中所述卒中是出血性卒中。

133.根据权利要求72所述的方法，其中所述方法能够将至少一种神经胶质细胞转化为神经元。

134.根据权利要求133所述的方法，其中所述神经胶质细胞选自由星形胶质细胞和NG2细胞组成的组。

135.根据权利要求132所述的方法，其中所述神经胶质细胞是星形胶质细胞。

136.根据权利要求135所述的方法，其中所述星形胶质细胞是反应性星形胶质细胞。

137.根据权利要求133所述的方法，其中所述神经胶质细胞是GFAP阳性的。

138.根据权利要求133所述的方法，其中所述神经元是功能性神经元。

139.根据权利要求138所述的方法，其中所述功能性神经元选自由谷氨酸能神经元、GABA能神经元、多巴胺能神经元、胆碱能神经元、血清素能神经元、肾上腺素能神经元、运动神经元和肽能神经元组成的组。

140.根据权利要求69或70所述的方法，其中将治疗有效剂量的所述AAV注射到所述受试者中。

141.根据权利要求71或72所述的方法，其中将治疗有效剂量的所述AAV递送到所述受试者中。

142.根据权利要求140或141所述的方法，其中所述治疗有效剂量与药学上可接受的载体一起施用。

143.一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，所述hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中所述hDlx2序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和

(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

144.一种腺相关病毒(AAV)载体，其包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸编码序列，所述hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中所述编码序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF1-α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和

(c)具有SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

145.一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述AAV载体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，所述hDlx2序列具有SEQID NO:6的核酸序列，并且其中所述序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和

(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

146.一种用于将人的神经胶质细胞转化为功能性神经元的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，其中所述AAV载体包含编码无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸序列，所述hDlx2蛋白包含SEQ ID NO:10的氨基酸编码序列，并且其中所述编码序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和

(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号序列、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

147.一种将活人脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中所述AAV包含DNA载体构建体，所述DNA载体构建体包含人无远端同源框2(hDlx2)序列，所述hDlx2序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列，其中所述序列可操作地连接到调控元件，所述调控元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和

(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。

148.一种将活体脑中的反应性星形胶质细胞转化为功能性神经元的方法，其包括：将腺相关病毒(AAV)注射到有此需要的受试者中，其中所述AAV包含DNA载体构建体，所述DNA载体构建体包含编码人无远端同源框2(hDlx2)蛋白的核酸序列，所述hDlx2蛋白包含SEQID NO:10的氨基酸编码序列，其中所述编码序列可操作地连接到表达控制元件，所述表达控制元件包含：

(a)包含选自由SEQ ID NO:3、4和12组成的组的核酸序列的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子；

(b)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的来自人延伸因子-1α(EF-1α)启动子的增强子或包含SEQ ID NO:11的核酸序列的巨细胞病毒(CMV)增强子；和

(c)包含SEQ ID NO:8的核酸序列的SV40多聚腺苷酸化信号、包含SEQ ID NO:13的核酸序列的hGH多聚腺苷酸化信号或包含SEQ ID NO:20的核酸序列的bGH多聚腺苷酸化信号。