CN116626008B - 一种基于荧光特性的异丁酸锂-l-脯氨酸盐定性和定量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种基于荧光特性的异丁酸锂‑L‑脯氨酸盐定性和定量检测方法，该方法用于异丁酸锂‑L‑脯氨酸盐的生产合成过程中对合成产物的定性检测，在异丁酸锂和L‑脯氨酸采用溶剂法制备过程中，将得到的白色固体加入无荧光性的溶剂中配制成溶液，将所述溶液采用如下方法中的一种或者多种进行检测：①在365nm暗箱式紫外分析仪下照射，观察是否呈现荧光现象；②采用紫外可见吸收光谱检测，观察其吸收峰；③采用荧光光谱检测，观察其荧光峰；④采用荧光光谱仪检测，观察二维图谱中的特征峰；采用标准曲线法对其进行定量。异丁酸锂‑L‑脯氨酸盐在无荧光性溶剂中形成溶液具有独特的荧光特性，基于其这些独特的特性，对异丁酸锂‑L‑脯氨酸盐进行定性和定量检测。

Description

一种基于荧光特性的异丁酸锂-L-脯氨酸盐定性和定量检测 方法

技术领域

本发明属于荧光检测技术领域，具体涉及一种基于荧光特性的异丁酸锂-L-脯氨酸盐定性和定量检测方法。

背景技术

锂盐可用于精神疾病领域，对双相情感障碍中躁狂、抑郁的反复发作有良好的疗效和预防作用，而且具有独特的预防自杀风险的效应。最近研究还发现锂盐能够通过作用于GSK-3、WNT、AKT和神经递质来发挥神经保护作用，锂盐对于GSK-3β具有选择活性，锂盐抑制GSK-3β的作用方式主要有2种：(1)作为Mg²⁺竞争抑制剂直接抑制GSK-3β的活性；(2)通过增高磷酸化AKT、磷酸化GSK-3β(ser9)和MCL-1的表达，间接抑制GSK-3β的活性。这种保护作用对包括阿尔茨海默病在内的神经退行性疾病的防治有潜在用途。目前临床常用的锂盐为碳酸锂、枸橼酸锂、醋酸锂和长效锂盐，其中以碳酸锂最为常用。

由于无机酸锂在治疗精神类疾病的长期用药中存在潜在的肾脏损伤和甲状腺功能损害，还会导致血液PH值的紊乱，造成代谢性酸中毒、加重肾脏负担。人们在研发中发现包括丁酸、异丁酸、丙戊酸和叶酸在内的多种小分子有机酸被发现对于中枢神经系统有重要的影响，能够有效的缓解焦虑抑郁等情绪异常，并且可以延缓中枢神经系统退行性病变。因而开发有机酸盐有望改变现有无机锂盐的体内分布缺陷。

本公司研发了一种新型的有机酸锂氨基酸盐，中国专利CN114081881一种有机锂氨基酸盐、晶型、组合物及应用；将有机酸锂(异丁酸锂)和氨基酸(L-脯氨酸)加入适量溶剂中，采用单一溶剂法或者混合溶剂法制备而成，其得到的白色固体，在加强中枢神经系统疾病疗效的同时，安全性更好。在研发中我们还发现，异丁酸锂-L-脯氨酸盐具有独特的荧光特性，为此，我们提供了一种有机酸锂氨基酸盐(异丁酸锂-L-脯氨酸)的荧光特性定性和定量检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于荧光特性的异丁酸锂-L-脯氨酸盐定性和定量检测方法。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术手段：

本发明第一方面提供了一种基于荧光特性的异丁酸锂-L-脯氨酸盐定性检测方法，该方法用于异丁酸锂-L-脯氨酸盐的生产合成过程中对合成产物的定性检测，采用异丁酸锂和L-脯氨酸制备合成异丁酸锂-L-脯氨酸盐的过程中得到白色固体，所述白色固体加入无荧光性的溶剂中配制成溶液，将所述溶液采用如下方法中的一种或者多种进行检测：

①将所述溶液置于箱式紫外分析仪中，用365nm紫外光照射，观察其荧光现象，若观察到荧光现象，则制备得到的白色固体中有异丁酸锂-L-脯氨酸盐；

②将所述溶液采用紫外可见吸收光谱仪进行紫外可见吸收光谱检测，观察其吸收峰；若在260nm和320nm有吸收峰，并且320nm吸收峰高于260nm吸收峰，则制备得到的白色固体中有异丁酸锂-L-脯氨酸盐；

③将所述溶液采用荧光光谱仪进行荧光光谱检测，观察其荧光峰；若在370nm有荧光峰，则制备得到的白色固体中有异丁酸锂-L-脯氨酸盐；

④将所述溶液采用荧光光谱仪进行荧光光谱检测，观察其二维图谱；若二维图谱中存在280/380nm，380nm/427nm激发/发射两个特征峰，并且380nm/427nm激发/发射特征峰强于280/380nm激发/发射特征峰，则制备得到的白色固体中有异丁酸锂-L-脯氨酸盐。

进一步地，所述二维图谱中存在两个在特征峰波段，特征峰波段1：激发波长260～300nm，对应发射波长350～400nm；特征峰波段2：激发波长360～400nm，对应发色波长410～450nm；两个特征峰波段中280/380nm，380nm/427nm激发/发射波长处的特征峰具有显著特性。

本发明第二方面提供了一种基于荧光特性的异丁酸锂-L-脯氨酸盐定量检测方法，包括如下步骤：

①称取异丁酸锂-L-脯氨酸盐粉末，设置毫克级别浓度，采用倍比稀释法配制成不同稀释度的标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样本，对标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样本采用380/427nm激发/发射波长进行荧光光谱检测，得到对应的荧光值，通过荧光值与浓度拟合得到异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的标准曲线；

②对待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液采用380/427nm激发/发射波长进行荧光光谱分析，得到荧光值；

③将步骤②得到的待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的荧光值，采用标准曲线即可得到待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的浓度。

进一步地，若得到的待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的浓度为微克级别，则采用如下方法进一步检测：

①称取异丁酸锂-L-脯氨酸盐粉末，设置微克级别浓度，采用倍比稀释法配制成不同稀释度的标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样本，对标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样本采用280/380nm激发/发射波长进行荧光光谱检测，得到对应的荧光值，通过荧光值与浓度拟合得到异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的标准曲线；

②对待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液采用280/380nm激发/发射波长进行荧光光谱分析，得到荧光值；

③将步骤②得到的待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的荧光值，采用标准曲线即可得到待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的浓度。

本发明的第三方面提供了一种基于荧光特性的异丁酸锂-L-脯氨酸盐定量检测方法，还可以采用如下步骤：

①称取异丁酸锂-L-脯氨酸盐粉末，设置浓度梯度并配制不同稀释度的标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样本，对标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样本采用260nm或320nm波长进行紫外可见吸收光谱检测，得到光吸收强度，通过光吸收强度和浓度拟合得到异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的标准曲线；

②对待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液采用260nm或320nm波长进行紫外可见吸收光谱检测，得到光吸收强度；

③根据步骤②得到的待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的光吸收强度，采用标准曲线即可得到待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的浓度。

更近一步地，所述标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样品由异丁酸锂-L-脯氨酸盐粉末溶于无荧光性的溶剂中配制而成。

本发明的有益效果

本发明具有以下有益效果：异丁酸锂-L-脯氨酸盐的水溶液在365nm暗箱式紫外分析仪下照射发射荧光现象，并且在紫外可见吸收光谱的260nm和320nm有明显的吸收峰，并且吸收峰的强度与浓度表现出正相关性，该异丁酸锂-L-脯氨酸盐采用荧光光谱检测，在370nm有明显的荧光峰，并且荧光值与溶液的浓度表现出正相关，在荧光光谱仪二维图中，在280/380nm，380nm/427nm激发/发射两个显著的特征峰，并且在380/427nm的激发/发射波长下，其荧光值与溶液浓度表现出正相关，基于这些独特的特性，在生产合成过程中，对异丁酸锂-L-脯氨酸盐合成产品进行定性检测；基于其吸收峰与浓度表现出正相关性和荧光值与浓度表现出正相关对其浓度进行定量检测。

附图说明

图1示出了暗箱式紫外分析仪检测中异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液与对比化合物溶液的检测结果；

图2示出了梯度浓度的异丁酸锂-L-脯氨酸盐水溶液在紫外可见吸收光谱下检测结果；

图3示出了不同化合物水溶液在紫外可见吸收光谱下检测结果；

图4示出了梯度浓度的异丁酸锂-L-脯氨酸盐在不同溶剂中的荧光光谱检测结果；

图5示出了异丁酸锂-L-脯氨酸盐在不同溶剂下荧光光谱检测结果；

图6示出了异丁酸锂-L-脯氨酸盐水溶液在荧光光谱下二维等高图谱；

图7示出了异丁酸锂-L-脯氨酸盐水溶液在荧光光谱下三维图谱；

图8示出了异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液在紫外可见吸收光谱检测中，320nm处吸收峰和浓度的线性关系；

图9示出了高浓度异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液在380/427nm的激发/发射波长下，浓度y和荧光值x的线性关系；

图10示出了低浓度异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液在280/380nm的激发/发射波长下，浓度y和荧光值x的线性关系；

其中，图1中，从左至右，依次是纯化水、双异丁酸锂、双脯氨酸锂、异丁酸锂+脯氨酸等当量混合物、异丁酸锂-L-脯氨酸盐。

具体实施方式

除非另有说明、从上下文暗示或属于现有技术的惯例，否则本申请中所有的份数和百分比都基于重量，且所用的测试和表征方法都是与本申请的提交日期同步的。在适用的情况下，本申请中涉及的任何专利、专利申请或公开的内容全部结合于此作为参考，且其等价的同族专利也引入作为参考，特别这些文献所披露的关于本领域中的合成技术、产物和加工设计、聚合物、共聚单体、引发剂或催化剂等的定义。如果现有技术中披露的具体术语的定义与本申请中提供的任何定义不一致，则以本申请中提供的术语定义为准。

本申请中的数字范围是近似值，因此除非另有说明，否则其可包括范围以外的数值。数值范围包括以1个单位增加的从下限值到上限值的所有数值，条件是在任意较低值与任意较高值之间存在至少2个单位的间隔。例如，如果记载组分、物理或其它性质(如分子量，熔体指数等)是100至1000，意味着明确列举了所有的单个数值，例如100，101，102等，以及所有的子范围，例如100到166，155到170，198到200等。对于包含小于1的数值或者包含大于1的分数(例如1.1，1.5等)的范围，则适当地将1个单位看作0.0001，0.001，0.01或者0.1。对于包含小于10(例如1到5)的个位数的范围，通常将1个单位看作0.1。这些仅仅是想要表达的内容的具体示例，并且所列举的最低值与最高值之间的数值的所有可能的组合都被认为清楚记载在本申请中。

关于化学化合物使用时，除非明确地说明，否则单数包括所有的异构形式，反之亦然(例如，“己烷”单独地或共同地包括己烷的全部异构体)。另外，除非明确地说明，否则用“一个”，“一种”或“该”形容的名词也包括其复数形式。

术语“包含”，“包括”，“具有”以及它们的派生词不排除任何其它的组分、步骤或过程的存在，且与这些其它的组分、步骤或过程是否在本申请中披露无关。为消除任何疑问，除非明确说明，否则本申请中所有使用术语“包含”，“包括”，或“具有”的组合物可以包含任何附加的添加剂、辅料或化合物。相反，出来对操作性能所必要的那些，术语“基本上由……组成”将任何其他组分、步骤或过程排除在任何该术语下文叙述的范围之外。术语“由……组成”不包括未具体描述或列出的任何组分、步骤或过程。除非明确说明，否则术语“或”指列出的单独成员或其任何组合。

为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。

实施例

以下例子在此用于示范本发明的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表发明人发现的可以用于实施本发明的技术，因此可以视为实施本发明的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本发明的精神或范围。

除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本发明所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。

那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的发明的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。

异丁酸锂-L-脯氨酸盐的制备合成方法：

单一溶剂法：将等化学当量的异丁酸锂、L-脯氨酸中加入适量的良溶剂正丁醇，在加热回流下使其恰好溶解，搅拌约3h，趁热过滤，自然冷却析晶，过滤固体，真空干燥至恒重得到白色固体。

混合溶剂析晶法：将等化学当量的异丁酸锂、L-脯氨酸中加入适量的良溶剂--乙醇，加热回流使其恰好溶解，而后加入适量不良溶剂---四氢呋喃至恰好析出固体，补加良溶剂使其重新溶解，回流3h，自然冷却析晶，过滤固体，真空干燥至恒重得到白色固体。

一、异丁酸锂-L-脯氨酸盐的荧光特性定性检测

(1)暗箱式紫外分析仪检测

实施例1

取异丁酸锂-L-脯氨酸盐样品溶解于纯化水中，配制成浓度为100g/ml的样品溶液装入样本管中。

样本管置于暗箱式紫外分析仪中，采用365nm紫外光照射检测，观察其荧光现象。

对比例1

取纯化水装入样本管中，将样本管置于暗箱式紫外分析仪中，采用365nm紫外光照射检测，观察其荧光现象。

对比例2

取双异丁酸锂样品溶解于纯化水中，配制成浓度为100g/ml的样品溶液装入样本管中。

样本管置于暗箱式紫外分析仪中，采用365nm紫外光照射检测，观察其荧光现象。

对比例3

取双脯氨酸锂样品溶解于纯化水中，配制成浓度为100g/ml的样品溶液装入样本管中。

样本管置于暗箱式紫外分析仪中，采用365nm紫外光照射检测，观察其荧光现象。

对比例4

取异丁酸锂和脯氨酸等当量混合后样品溶解于纯化水中，配制成浓度为100mg/ml的样品溶液装入样本管中。

样本管置于暗箱式紫外分析仪中，采用365nm紫外光照射检测，观察其荧光现象。

结果显示：如图1所示，纯化水、双异丁酸锂、双脯氨酸锂、异丁酸锂和脯氨酸等当量混合物均不表现出荧光现象，唯有异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的样本管具有明显的荧光现象，表现出独有的荧光特性。

(2)紫外可见吸收光谱检测

实施例2

配制原液：称取0.3g异丁酸锂-L-脯氨酸盐粉末样品溶于9ml纯化水溶剂中，浓度为33.33g/L。

将原液按照稀释2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、10倍、20倍、40倍、60倍、80倍、100倍150倍、200倍设置不同的浓度梯度。

将异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液采用紫外可见吸收光谱检测。

结果显示：如图2所示，异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液在260nm和320nm有明显的吸收峰，并且吸收峰的强度与浓度呈正相关性；

实施例3

配制原液：用纯化水配制一定浓度的脯氨酸、脯氨酸锂、异丁酸锂、异丁酸、异丁酸锂和脯氨酸等当量混合物、异丁酸锂-L-脯氨酸盐的水溶液，脯氨酸浓度为0.28986mol/L，脯氨酸锂浓度为0.27548mol/L，异丁酸锂浓度为0.3546mol/L，异丁酸浓度为2.69886mol/L，异丁酸锂-L-脯氨酸盐浓度为0.03987mol/L。将不同化合物水溶液采用紫外可见吸收光谱检测。

结果显示：如图3所示，不同化合物在水溶液中的紫外可见吸收光谱扫描图，吸收峰有明显差异性，异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液在260nm和320nm有明显的吸收峰，具有特异性。

对比例5

配制溶液，称取0.3g双异丁酸锂粉末样品溶于9ml纯化水溶剂中，浓度为33.33g/L。采用紫外可见吸收光谱检测。

结果显示：双异丁酸锂溶液在260nm和320nm处，无明显特征峰吸收峰。

对比例6

配制溶液，称取0.3g双脯氨酸锂粉末样品溶于9ml纯化水中，浓度为33.33g/L。采用紫外可见吸收光谱检测。

结果显示：双异丁酸锂溶液在260nm和320nm处，无明显特征峰吸收峰。

(3)荧光光谱检测

实施例4

配制原液：称取0.3g异丁酸锂-L-脯氨酸盐粉末样品溶于9ml纯化水溶剂中，浓度为33.33g/L。

将原液按照稀释2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、10倍、20倍设置不同的浓度梯度。

将异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液采用日立荧光光谱仪进行荧光光谱检测。

荧光光谱检测结果显示，如图4所示，异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液在370nm有明显的荧光峰，而且荧光值和浓度呈正相关性。

对比例7

配制原液：称取0.3g异丁酸锂-L-脯氨酸盐粉末样品溶于9ml甲醇溶剂中，浓度为33.33g/L。

将异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液采用日立荧光光谱仪进行荧光光谱检测。

对比例8

配制原液：称取0.3g异丁酸锂-L-脯氨酸盐粉末样品溶于9ml甲醇与水按1：1混合形成的溶剂中，浓度为33.33g/L。

将异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液采用日立荧光光谱仪进行荧光光谱检测。

结果显示，如图5所示，不同溶剂中，异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液均有荧光特点，不同溶剂中，荧光波长以及对应的荧光值有所不同，对异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的荧光光谱检测带来一定的影响，会导致其荧光发射波长出现一定偏移，同时可以利用溶剂对异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液荧光波长偏移的影响，来优化荧光光谱检测的方法，使得在特异性检测中具有更好的作用。

对比例9

称取0.3g异丁酸样品溶于9ml纯化水溶剂中，浓度为33.33g/L；将异丁酸溶液采用日立荧光光谱仪进行荧光光谱检测。

荧光光谱检测结果，异丁酸溶液在370nm发射波长处无明显荧光特点。

对比例10

称取0.3g异丁酸锂样品溶于9ml纯化水溶剂中，浓度为33.33g/L；将异丁酸锂溶液采用日立荧光光谱仪进行荧光光谱检测。

荧光光谱检测结果，异丁酸锂溶液在370nm发射波长处无荧光特点。

对比例11

称取0.3g脯氨酸样品溶于9ml纯化水溶剂中，浓度为33.33g/L；将脯氨酸溶液采用日立荧光光谱仪进行荧光光谱检测。

荧光光谱检测结果，脯氨酸溶液在370nm发射波长处无荧光特点。

对比例12

称取0.3g脯氨酸锂样品溶于9ml纯化水溶剂中，浓度为33.33g/L；将脯氨酸锂溶液采用日立荧光光谱仪进行荧光光谱检测。

荧光光谱检测结果，脯氨酸锂溶液在370nm发射波长处无荧光特点。

对比例13

将异丁酸溶液、异丁酸锂溶液、脯氨酸溶液、脯氨酸锂溶液形成混合溶液，其混合溶液采用日立荧光光谱仪进行荧光光谱检测。

荧光光谱检测结果，混合溶液在370nm发射波长处无荧光特点。

结果表明：唯有异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液在370nm处具有荧光峰，是其特有的荧光特点。

(4)荧光光谱仪二维等高图和三维图谱检测

实施例5

将实施例4中的异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液采用F97PRO荧光光谱仪进行检测，竖坐标为激发波长，范围在200nm-900nm，横坐标为发射波长，范围在200nm-900nm，得到二维图；

将实施例4中的异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液采用F98荧光光谱仪进行检测，竖坐标为激发波长，范围在250nm-500nm，横坐标为发射波长，范围在250nm-600nm，得到三维图谱，如图7所示。

结果显示1：如图6所示，异丁酸锂-L-脯氨酸盐有280/380nm，380nm/427nm激发/发射两个特征峰；其中，黄色高低场是荧光值，红色的这条线表示激发波长散射峰；可以表示拉曼散射。如图7所示，异丁酸锂-L-脯氨酸盐有280/380nm，380nm/427nm附近存在激发/发射波长的峰顶，越靠近此波段的激发/发射波长位置，则对应的荧光响应值越高。

结果显示2：图6和图7属于二维等高图和三维图，两次相互证实异丁酸锂-L-脯氨酸盐存在两处荧光特征峰，且280/380nm特征峰由于远离红色的拉曼散射峰，所以此处特征峰不容易受到拉曼散射峰的影响，更适合样品容易超低浓度的定性和定量。380nm/427nm处特征峰由于靠近拉曼散射峰，所以此处特征峰容易受到散射峰干扰，适合高浓度样品溶液定性和定量。从三位图谱中可知，同等浓度条件下，380nm/427nm处特征峰要比280/380nm特征峰的荧光响应值更高，特征峰形更为明显。

结果显示3：从图6和图7可以看出，异丁酸锂-L-脯氨酸盐在特征峰范围1有：激发波长260～300nm，对应发射波长350～400nm；特征峰范围2有：激发波长360～400nm，对应发色波长410～450nm；这两个对应波段范围内均存在荧光响应值，而280/380nm，380nm/427nm激发/发射波长属于峰顶的特征峰。

由于异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液在箱式紫外分析仪中365nm紫外光照射下，观察到荧光现象；在采用紫外可见吸收光谱仪进行紫外可见吸收光谱检测，其在260nm和320nm有吸收峰，并且320nm吸收峰高于260nm吸收峰；在采用荧光光谱仪进行荧光光谱检测，其在370nm有荧光峰；荧光光谱二维图谱中存在280/380nm，380nm/427nm激发/发射两个特征峰，并且380nm/427nm激发/发射特征峰强于280/380nm激发/发射特征峰。并且这些荧光特性是异丁酸锂-L-脯氨酸盐所特有的，因此可以用作异丁酸锂-L-脯氨酸盐制备合成过程中的定性检测。

二、异丁酸锂-L-脯氨酸盐的荧光特性定量检测

实施例6

用纯化水将对实施例2中异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的原液以及稀释2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、10倍的不同浓度梯度溶液采用紫外可见吸收光谱检测。

结果显示：异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液在260nm处吸收峰存在杂峰干扰，260nm处特征峰没有320nm特征峰明显清晰，定量检测时优选320nm特征峰。

如图8所示，320nm处吸收峰和浓度呈线性关系，线性方程为：y＝0.0052+0.01382x，相关系数0.9997。

实施例7

用纯化水将异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液配制成毫克级别高浓度，采用倍比稀释法，设置浓度0、1mg/ml、2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml，采用F97PRO荧光光谱仪器在380/427nm的激发/发射波长下检测，荧光值分别为：0.01、25.6、53.64、99.76、195.2。

结果显示：如图9所示，在固定的380/427nm的激发/发射波长下，浓度y和荧光值x表现出良好的线性关系，线性方程为：y＝-0.081426+0.041172x，相关系数0.9997，线性相关性良好。说明样品溶液在高浓度下，该处特征峰呈现良好的线性关系。

实施例8

用纯化水将异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液配制成微克级别低浓度，采用倍比稀释法，设置浓度0、0.31ug/ml、0.61ug/ml、1.22ug/ml、2.44ug/ml、4.88ug/ml、9.77ug/ml、19.53ug/ml、39.06ug/ml、78.13ug/ml、156.25ug/ml，采用F98荧光光谱仪器在280/380nm的激发/发射波长下检测，荧光值分别为-0.19、17.6、22.21、27.98、40.84、67.57、120、227.9、433.5、833.7、1579。

结果显示：如图10所示，在固定的280/380nm的激发/发射波长下，浓度y和荧光值x表现出线性关系；在0.31ug/ml～156.25ug/ml级别范围内，线性关系较好，线性方程为：y＝-2.2366+0.0992x，相关系数0.9997。说明样品溶液在低浓度下，该处特征峰呈现良好的线性关系，且线性范围较大，280/380nm波长下所受干扰较小，准确性和精度高。

综上实施例1～实施例8结果表明，异丁酸锂-L-脯氨酸盐属于有机金属配位盐，具有特异性荧光现象，说明该有机金属化合物分子内存在金属配位键，且为有机双分子金属配位盐，从而产生的荧光现象。

通过紫外分析仪、紫外可见吸收光谱检测和荧光光谱仪等光谱仪器，可以定性和定量检测异丁酸锂-L-脯氨酸配位盐；且在高浓度和低浓度下均可定性和定量检测。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (6)

1.一种基于荧光特性的异丁酸锂-L-脯氨酸盐定性检测方法，该方法用于异丁酸锂-L-脯氨酸盐的生产合成过程中对合成产物的定性检测，其特征在于：采用异丁酸锂和L-脯氨酸制备合成异丁酸锂-L-脯氨酸盐的过程中得到白色固体，所述白色固体加入无荧光性的溶剂中配制成溶液，将所述溶液采用如下方法中的一种或者多种进行检测：

①将所述溶液置于箱式紫外分析仪中，用365nm紫外光照射，观察其荧光现象，若观察到荧光现象，则制备得到的白色固体中有异丁酸锂-L-脯氨酸盐；

②将所述溶液采用紫外可见吸收光谱仪进行紫外可见吸收光谱检测，观察其吸收峰；若在260nm和320nm有吸收峰，并且320nm吸收峰高于260nm吸收峰，则制备得到的白色固体中有异丁酸锂-L-脯氨酸盐；

③将所述溶液采用荧光光谱仪进行荧光光谱检测，观察其荧光峰；若在370nm有荧光峰，则制备得到的白色固体中有异丁酸锂-L-脯氨酸盐；

④将所述溶液采用荧光光谱仪进行荧光光谱检测，观察其二维图谱；若二维图谱中存在280/380nm，380nm/427nm激发/发射两个显著特征峰，并且380nm/427nm激发/发射特征峰强于280/380nm激发/发射特征峰，则制备得到的白色固体中有异丁酸锂-L-脯氨酸盐。

2.根据权利要求1所述的一种基于荧光特性的异丁酸锂-L-脯氨酸盐定性检测方法，其特征在于：所述二维图谱中存在两个在特征峰波段，特征峰波段1：激发波长260~300nm，对应发射波长350~400nm；特征峰波段2：激发波长360~400nm，对应发色波长410~450nm；两个特征峰波段中280/380nm，380nm/427nm激发/发射波长处的特征峰具有显著特性。

3.一种基于荧光特性的异丁酸锂-L-脯氨酸盐定量检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

①称取异丁酸锂-L-脯氨酸盐粉末，设置毫克级别浓度，采用倍比稀释法配制成不同稀释度的标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样本，对标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样本采用380/427nm激发/发射波长进行荧光光谱检测，得到对应的荧光值，通过荧光值与浓度拟合得到异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的标准曲线；

②对待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液采用380/427nm激发/发射波长进行荧光光谱分析，得到荧光值；

③将步骤②得到的待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的荧光值，采用标准曲线即可得到待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的浓度。

4.根据权利要求3所述的一种基于荧光特性的异丁酸锂-L-脯氨酸盐定量检测方法，其特征在于：若待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的浓度为微克级别，则采用如下方法进一步检测：

①称取异丁酸锂-L-脯氨酸盐粉末，设置微克级别浓度，采用倍比稀释法配制成不同稀释度的标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样本，对标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样本采用280/380nm激发/发射波长进行荧光光谱检测，得到对应的荧光值，通过荧光值与浓度拟合得到异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的标准曲线；

②对待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液采用280/380nm激发/发射波长进行荧光光谱分析，得到荧光值；

③将步骤②得到的待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的荧光值，采用标准曲线即可得到待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的浓度。

5.根据权利要求3所述的一种基于荧光特性的异丁酸锂-L-脯氨酸盐定量检测方法，其特征在于：还可以采用如下步骤：

①称取异丁酸锂-L-脯氨酸盐粉末，设置浓度梯度并配制不同稀释度的标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样本，对标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样本采用260nm或320nm波长进行紫外可见吸收光谱检测，得到光吸收强度，通过光吸收强度和浓度拟合得到异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的标准曲线；

②对待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液采用260nm或320nm波长进行紫外可见吸收光谱检测，得到光吸收强度；

③根据步骤②得到的待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的光吸收强度，采用标准曲线即可得到待测异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液的浓度。

6.根据权利要求3-5任一项所述的一种基于荧光特性的异丁酸锂-L-脯氨酸盐定量检测方法，其特征在于：所述标准异丁酸锂-L-脯氨酸盐溶液样品由异丁酸锂-L-脯氨酸盐粉末溶于无荧光性的溶剂中配制而成。