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CN116601145A - 用于平台治疗的强效且选择性钙激活钾通道KCa3.1抑制剂 - Google Patents

用于平台治疗的强效且选择性钙激活钾通道KCa3.1抑制剂 Download PDF

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CN116601145A
CN116601145A CN202180080257.0A CN202180080257A CN116601145A CN 116601145 A CN116601145 A CN 116601145A CN 202180080257 A CN202180080257 A CN 202180080257A CN 116601145 A CN116601145 A CN 116601145A
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CN
China
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compound
acid
independently selected
unsubstituted
formula
Prior art date
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Pending
Application number
CN202180080257.0A
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English (en)
Inventor
乔治·卡尼亚塔拉·钱迪
翁晓婷
李英骥
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ice Bioscience Inc
Nanyang Technological University
Original Assignee
Ice Bioscience Inc
Nanyang Technological University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ice Bioscience Inc, Nanyang Technological University filed Critical Ice Bioscience Inc
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Abstract

本发明提供了式I的化合物以及某些特定化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或衍生物在制备用于治疗或预防与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症(诸如卒中)的用途。

Description

用于平台治疗的强效且选择性钙激活钾通道KCa3.1抑制剂
技术领域
本发明涉及式I的化合物和某些特定化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物和衍生物在制备用于治疗或预防与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症的药物中的用途。
背景技术
本说明书中列出或讨论先前公布的文件不应被视为承认该文件是现有技术的一部分或是公知常识。
KCa3.1(KCNN4)是人类基因组中78个钾通道基因之一，编码中电导钙激活钾通道(S.P.Alexander et al.,Br.J.Pharmacol.2017,174 Suppl 1,S1-S16；G.A.Gutman etal.,Pharmacol.Rev.2005,57,473-508；L.K.Kaczmarek et al.,Pharmacol.Rev.2017,69,1-11；以及A.D.Wei et al.,Pharmacol.Rev.2005,57,463-472)。该通道是四个KCa3.1亚基的复合物，每个亚基附连至作为钙传感器的钙调蛋白(CaM)上(图1A)。已经确定了复合物的冷冻EM结构，并且已经通过诱变确定了抑制剂和激活剂的结合位点(图1B)。在免疫细胞(淋巴细胞、小胶质细胞、巨噬细胞、肥大细胞)、红细胞、血小板、肺和胃肠道上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、肌成纤维细胞以及一些癌症中，Ca2+激活K+通道KCa3.1充当阳离子平衡剂以维持钙进入和钙信号传导。在这些细胞中，外部信号激活相关的细胞表面受体，导致细胞内Ca2+升高，从而打开KCa3.1通道(图2)。
药理学和遗传学研究已经证实KCa3.1是治疗靶标。KCa3.1抑制剂可以减少啮齿动物和猪模型中的血管狭窄和动脉粥样硬化(D.Tharp et al.,ArteriosclerThromb.Vasc.Biol.2008,28,1084-1089；K.Toyama et al.,J.Clin.Invest.2008,118,3025-3037；R.Kohler et al.,Circulation2003,108,1119-1125)。KCa3.1阻断或基因敲除KCa3.1改善啮齿动物模型中的疾病：炎性肠病(L.Di et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U SA2010,107,1541-1546；D.Strobaek et al.,Br.J.Pharmacol.2013,168,432-444；S.Ohyaet al.,Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.2014,306,G873-885)、多发性硬化(E.Reich et al.,Eur.J.Immunol.2005,35,1027-1036)、肾小球肾炎(H.Kang etal.,CellRep.2014,8,1210-1224)、炎性关节炎(H.Kang et al.,Cell Rep.2014,8,1210-1224)、骨吸收(H.Kang et al.,Cell Rep.2014,8,1210-1224)、变应性鼻炎(H.Lin et al.,Sci.Rep.2015,5,13127；H.Lin et al.,Int.Immunopharmacol.2014,23,642-648)、结膜和角膜纤维化(H.Yang et al.,Exp Eye Res2013,110,76-87；G.Anumanthan et al.,PLoSOne2018,13)、心肌纤维化(L.Zhao et al.,Pflugers Arch.2015,467,2275-2285；L.Wanget al.,Pflugers Arch.2016,468,2041-2051)、肺纤维化(D.Amrutkar ExperimentalBiology Meeting 2021；L.Organ et al.,Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.2017,56,539-550；L.Organ et al.,Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.2017,56,539-550；U.Perera et al.,Can.Respir.J.2021,6683,1955)、糖尿病性肾病(C.Huang etal.,Diabetes2013,62,2923-2934；C.Huang et al.,PLoS One2018,13,e0192800；I.Grgic et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA2009,106,14518-14523；C.Huang et al.,Nephrology DialysisTransplantation 2014,29(2),313–324；C.Huang et al.,Sci.Rep.2016,6,23884)、饮食诱导肝脂肪变性、非酒精性脂肪变性和肝纤维化(L.Paka et al.,WorldJ.Gastroenterol.2017,23,4181-4190；C.Freise and U.Querfeld.Pharmacol.Res.2014,85,6-14)，以及镰状细胞病(L.De Franceschi et al.,J.Clin.Invest.1994,93,1670-1676；J.Stocker et al.,Blood2003,101(6),2412-8；K.Ataga et al.,Pharmacotherapy2006,26,1557-1564；K.Ataga et al.,Blood2008,111(8),3991-7；K.Ataga et al.,Expert.Opin.Investig.Drugs 2009,8(2),231-9；K.Ataga et al.,BrJHaematol.2011,153(1),92-104；K.Ataga et al.,Br J Haematol.2021,192(5),e129-e132)。在神经系统中，KCa3.1调节小胶质细胞激活，并且通道抑制剂抑制动物模型中小胶质细胞介导的神经元损伤：卒中(Y.Chen et al.,J.Cereb.Blood Flow Metab.2011,31,2363-2374；Y.Chen et al.,J.Cereb.Blood Flow Metab.2016,36,2146-2161；M.Yi etal.,J.Neuroinflammation2017,14,203)、阿尔茨海默病(M.Yi et al.,Mol.CellNeurosci.2016,76,21-32；T.Wei et al.,Front.Pharmacol.2016,7,528；L.Jin et al.,Ann.Clin.Transl.Neurol.2019,6,723-738)、帕金森病(J.Lu et al.,J.Neuroinflammation2019,16,273)以及颅脑损伤(F.Mauler et al.,Eur.J.Neurosci.2004,20,1761-1768；K.Urbahns et al.,Bioorg.Med.Chem.Lett.2005,15,401-404；K.Urbahns etal.,Bioorg.Med.Chem.Lett.2003,13,2637-2639)。KCa3.1阻断剂通过抑制肌成纤维细胞来治疗啮齿动物和绵羊模型中的肺纤维化，以及啮齿动物模型中的心脏和肾纤维化(L.Organ et al.,Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.2017,56,539-550；L.Organ et al.,Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.2017,56,539-550；U.Perera etal.Can.Respir.J.2021,6683,1955；L.Zhao et al.,Pflugers Arch.2015,467,2275-2285；L.Wang et al.,Pflugers Arch.2016,468,2041-2051；C.Huang et al.,Diabetes2013,62,2923-2934；C.Huang et al.,PLoS One2018,13,e0192800；I.Grgic etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA2009,106,14518-14523；C.Huang et al.,NephrologyDialysis Transplantation 2014,29(2),313–324；C.Huang et al.,Sci.Rep.2016,6,23884)。恶性胶质瘤患者生存期缩短与肿瘤中较高的KCa3.1表达相关联，而KCa3.1阻断剂降低啮齿动物异种移植模型中的肿瘤侵袭力(G.D'Alessandro et al.,Cell DeathDis.2013,4,e773；A.Grimaldi et al.,Cell Death Dis.2016,7,e2174；K.Turner etal.,Glia2014,62,971-981；G.D'Alessandro et al.,Oncotarget2016,7,30781-30796)。遗传和药理学研究也证实KCa3.1为肝癌(P.Song et al.,J.Cancer2017,8,1568-1578)、卵巢癌(Z.Wang et al.,Oncogene2007,26,5107-5114)、结肠癌(N.Sassi et al.,Biochim.Biophys.Acta.2010,1797(6-7),1260-7；U.De Marchi et al.,CellCalcium2009,45(5),509-16)、直肠癌(H.Xu et al.,BMC Cancer2014,10(14),330；W.Laiet al.,Med.Oncol.2013,30(2),566；W.Lai et al.,Oncol.Rep.2011,26(4),909-17)、胰腺癌(H.et al.,Mol.Pharmacol.2004,65(3),630–638)以及白血病(E.etal.,Leukemia2014,28,954–958)的治疗靶标。另一种潜在的适应症是遗传性干瘪红细胞增多症，这是一种常染色体显性先天性溶血性贫血，其中受侵袭的红细胞(RBC)的特征是红细胞膜阳离子泄漏，伴有失水、钾含量降低和血液学参数改变(I.Andolfo et al.,Am.J.Hematol.2015,90,921-926；E.Fermo et al.,Sci.Rep.2017,7,1744；R.Rapetti-Mauss et al.,Haematologica2017,102,e415-e418；R.Rapetti-Mauss et al.,Haematologica2016,101,e431-e435；以及A.Rivera et al.,Am.J.Physiol.CellPhysiol.2019,317,C287-C302)。在这些患者的一些小组中，KCa3.1的功能获得突变引起KCl和水的损失，导致红细胞萎缩和贫血(E.Fermo et al.,Sci.Rep.2017,7,1744；A.Riveraet al.,Am.J.Physiol.Cell Physiol.2019,317,C287-C302)。因此，预计KCa3.1阻断剂可以逆转这些变化并改善血液学参数(R.Rapetti-Mauss et al.,Haematologica2016,101,e431-e435)。在患有镰状细胞贫血的动物模型和人中，KCa3.1的药理学阻断已被证明通过防止KCl和水的损失以及通过减少RBC收缩来改善血液学参数(J.Stocker et al.,Blood2003,101(6),2412-8；K.Ataga et al.,Blood2008,111(8),3991-7；K.Ataga etal.,Expert.Opin.Investig.Drugs2009,8(2),231-9；K.Ataga et al.,Br JHaematol.2011,153(1),92-104；K.Ataga et al.,Br J Haematol.2021,192(5),e129-e132；C.Brugnara et al.,J.Clin.Invest.1993,92(1),520-6；S.Alper et al.,BloodCells Mol.Dis.2009,41(1),22-34)。基于动物模型的实验研究，KCa3.1抑制剂的其他潜在适应症是哮喘(Z.Yu et al.,Front.Pharmacol.2017,8,559；L.Chachi et al.,JImmunol2013,191,2624-2636；J.Der Velden et al.,PLoS One2013,8,e66886；ZH.Yu etal.,Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.2013,48(6),685-93；D.Hynes et al.,Steroids2019,19,151,108459；P.Girodet et al.,Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.2013,48(2),212-9；https://ichgcp.net/clinical-trials-registry/NCT00861185)、变应性鼻炎(H.Lin etal.,Sci.Rep.2015,5,13127)、分泌性腹泻(P.Rufo et al.,J.Clin.Invest.1997,100,3111–3120)以及囊性纤维化(A.Philp et al.,Sci.Rep.2018,8,9320)。
然而，KCa3.1的分子抑制剂，诸如TRAM-34、NS6180、4-苯基-4-吡喃以及环己二烯，由于口服生物利用度和药代动力学特性较差，尚未进入临床试验。另一方面，尽管Senicapoc(ICA-17043)已进入临床试验并且是安全的，但其专利已过期。
因此，需要发掘具有良好药代动力学特性的口服可生物利用、强效且选择性KCa3.1抑制剂。
发明内容
令人惊讶地发现，一系列的苯基二氢吡啶显示出期望的特性。现在将参考以下编号的条目来讨论本发明的各方面和实施方式。
1.式I的化合物：
其中：
R1选自H、卤素、CF3、CN或NO2；
R2和R3独立地选自H、卤素、CH3、CF3、CN或NO2；
R4选自H、卤素、CN或CF3；
R5和R6独立地选自R9aC(O)O-、R9bOC(O)-、R9cC(O)NRd-、R9eR9fNC(O)-或具有1至10个碳原子的烷基酮，所述碳原子是支链的或非支链的并且是未取代的或者被选自卤素和NO2的更多个取代基之一取代；
R7和R8独立地选自H、NR10aR10b、OR10c或C1至C3烷基，其是未取代的或者被选自卤素的一个或多个取代基取代，或
R5和R7对或R6和R8对之一与它们附连的碳原子一起形成碳环或杂环的4至14元环系，并且其是未取代的或者被选自卤素、＝O、-OC(O)R10d、-(O)COR10e以及C1至C6烷基的一个或多个取代基取代；
R9a至R9f和R10a至R10e独立地选自H和C1至C6烷基，其是未取代的或者被选自卤素的一个或多个取代基取代，
或其药学上可接受的盐和/或溶剂化物。
2.根据条目1所述的化合物，其中R1选自H、F、Cl、Br、CF3或NO2。
3.根据条目1或条目2所述的化合物，其中R2和R3独立地选自H、F、Cl、Br、CH3、CF3或NO2。
4.根据前述条目中任一项所述的化合物，其中R4选自H、F、Cl、Br或CF3。
5.根据前述条目中任一项所述的化合物，其中R5和R6独立地选自R9aC(O)O-、R9bOC(O)-或具有1至10个碳原子的烷基酮，所述碳原子是支链的或非支链的并且是未取代的或者被选自Cl、F和NO2的更多个取代基之一取代。
6.根据前述条目中任一项所述的化合物，其中R7和R8独立地选自H或C1至C3烷基，其是未取代的或者被选自F和Cl的一个或多个取代基取代，或
R5和R7对或R6和R8对之一与它们附连的碳原子一起形成碳环或杂环的4至10元环系，其是未取代的或被选自F、Cl、＝O以及C1至C6烷基的一个或多个取代基取代。
7.根据前述条目中任一项所述的化合物，其中R9a至R9f和R10a至R10e独立地选自H和C1至C3烷基，其是未取代的或者被选自F和Cl的一个或多个取代基取代。
8.根据前述条目中任一项所述的化合物，其中
R1选自H、F、Cl或CF3；
R2和R3独立地选自H、F、Cl或CF3；
R4选自H、F、Cl或CF3；
R5和R6独立地选自R9bOC(O)-、具有1至3个碳原子的烷基酮，所述碳原子是未取代的或者被选自Cl和F的更多个取代基之一取代；
R7和R8独立地选自H或甲基，其是未取代的或者被选自F和Cl的一个或多个取代基取代。
9.根据前述条目中任一项所述的化合物，其中
R1选自H、F或Cl；和/或
R2选自CF3或更特别地H或F；和/或
R3选自H或CF3；和/或
R4是H；和/或
R5和R6独立地选自CH3OC(O)-或丙-2-酮基(例如R5和R6均为CH3OC(O)-)；和/或
R7和R8独立地选自H和CH3。
10.根据前述条目中任一项所述的化合物，其中R7和R8中至少一个是H。
11.根据前述条目中任一项所述的化合物，其中R7和R8都是H。
12.根据条目1至10中任一项所述的化合物，其中R7是H且R8是CH3。
13.根据条目1至10中任一项所述的化合物，其中R7和R8都是CH3。
14.根据条目1至10中任一项所述的化合物，其中R7是CH3且R8是H。
15.根据前述条目中任一项所述的化合物，选自列表，
或其盐和溶剂化物。
16.根据前述条目中任一项所述的化合物，选自列表，
或其盐和溶剂化物。
17.根据前述条目中任一项所述的化合物，选自列表，
或其盐和溶剂化物。
18.根据前述条目中任一项所述的化合物，选自列表，
或其盐和溶剂化物。
19.根据前述条目中任一项所述的化合物，其中化合物是
或其盐和溶剂化物。
20.一种药物组合物，其包括如条目1至19中任一项所述的式I的化合物或其盐和溶剂化物，以及一种或多种药学上可接受的载体、佐剂或负载体。
21.如条目1至19中任一项所述的式I的化合物或其盐和溶剂化物在药物中的用途。
22.如条目1至19中任一项所述的式I的化合物或其盐和溶剂化物，用于治疗或预防与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症。
23.如条目1至19中任一项所述的式I的化合物或其盐和溶剂化物，在制备用于治疗或预防与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症的药物中的用途。
24.一种治疗或预防与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症的方法，其中所述方法包括向有此需要的受试者给药有效量的如条目1至19中任一项所述的式化合物或其盐和溶剂化物。
25.用于条目19所述的用途的化合物、条目20所述的用途或条目21所述的方法，其中与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症选自以下一种或多种：白血病或更特别地炎性肠病(IBD)、纤维化疾病(肺、肝、肾、心脏、结膜、角膜纤维化)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、胶质瘤(胶质母细胞瘤)、肺癌、胰腺癌、肝细胞癌、卵巢癌、结直肠癌、囊性纤维化、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、骨吸收、炎性关节炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、支架内新动脉粥样硬化、卒中、创伤性脑损伤、阿尔茨海默病、遗传性干瘪红细胞增多症、镰状细胞贫血、哮喘、变应性鼻炎、小胶质细胞激活、一氧化氮依赖性神经退行性变、神经肿瘤学疾病和孤儿红细胞疾患。
26.用于条目25所述的用途的化合物、所述用途或所述方法的化合物，其中，与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症选自以下一种或多种：白血病或更特别地炎性肠病(IBD)、纤维化疾病(肺、肝、肾、心脏、结膜、角膜纤维化)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、胶质瘤(胶质母细胞瘤)、肺癌、胰腺癌、肝细胞癌、卵巢癌、结直肠癌、囊性纤维化、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、骨吸收、炎性关节炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、支架内新动脉粥样硬化、卒中、创伤性脑损伤、阿尔茨海默病、遗传性干瘪红细胞增多症、镰状细胞贫血、哮喘、变应性鼻炎、小胶质细胞激活和一氧化氮依赖性神经退行性变。
27.用于根据条目26所述的用途的化合物、所述用途或所述方法，其中所述疾病病症是卒中。
附图
图1示出了(A)每个KCa3.1亚基包含六个跨膜片段，其中片段5和6之间的环形成孔。细胞质C末端与CaM组成性结合(C.M.Fanger et al.,J Biol Chem1999,274,5746-5754)。四个KCa3.1亚基和四个CaM形成功能性通道。图取自H.Wulff&N.A.Castle,ExpertRev.Clin.Pharmacol.2010,3,385-396；以及(B)KCa3.1-CaM复合物的冷冻-EM结构。示出了阻断剂的结合位点。肽抑制剂与通道的外口结合。小分子抑制剂结合在内孔或内孔的窗口区域。小分子激活剂与KCa3.1-CaM复合物的内表面结合。图取自B.M.Brown et al.,Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.2020,60,219-240。
图2示出了KCa3.1的生理作用。(A)示出了KCa3.1在免疫细胞(小胶质细胞、T细胞、B细胞、肥大细胞、单核细胞、巨噬细胞)、红细胞、血小板、肺和胃肠道上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、肌成纤维细胞和一些癌症中起着生理上的重要作用。在这些细胞中，外部信号激活相关的细胞表面受体，导致细胞内Ca2+升高，从而打开KCa3.1通道。该通道充当阳离子平衡剂以维持钙信号传导。图取自Wulff&N.A.Castle,Expert Rev.Clin.Pharmacol.2010,3,385-396；(B)示出了许多细胞类型可以分化为原肌成纤维细胞。当受到转化生长因子β(TGF-b)、血小板源性生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、纤连蛋白、机械张力等刺激时，原肌成纤维细胞分化为肌纤维细胞，在许多器官的纤维化中起到促纤维化作用。肌成纤维细胞上调KCa3.1表达，并且它们的阻断抑制肌成纤维细胞增殖和促纤维化作用。图取自S.W.M.van der Borne et al.,Nat.Rev.Cardiol.2010,7,30-37；以及(C)KCa3.1在促炎性小胶质细胞中发挥关键作用，这些小胶质细胞导致神经炎性疾病，包括卒中、阿尔茨海默病、帕金森病和创伤性脑损伤。当小胶质细胞分化为M1促炎细胞时KCa3.1上调，并且通道的阻断抑制神经炎症介质，包括IL-1β、IL-6和TNF-α产生。相反，当小胶质细胞分化为M2抗炎细胞时，它们下调KCa3.1。因此，KCa3.1抑制剂优先靶向促炎小胶质细胞。图取自S.R.Roiget al.,J.Neurol.Neuromed.2018,3,18-23。
图3描述了来自第2-4组的示例性化合物对KCa3.1电流的影响。示出了示例化合物的浓度响应曲线。
图4描绘了用于强效阻断KCa3.1的药效团，以及相较于CaV1.2的>1000倍的选择性(第4c组)。
图5描述了化合物103(在3μM下测试)对一组其他分子靶标的选择性(EurofinsPharmacological P9 Diversity Panel Safety Screen)。
图6描绘了单次静脉注射(5mg/kg)或口服给药(50mg/kg)后化合物103(第4c组)在大鼠中的药代动力学评估。
图7描绘了组织病理学分析。
图8示出了(A)在经受大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)60min的大鼠中，再灌注7天，与负载体对照相比，化合物103有效地减少了梗死体积(n＝28)，并且比阳性对照依达拉奉(Edaravone)更有效；以及(B)在48h(n＝8)和第7天(n＝5)测量的神经行为评分的提高比依达拉奉更有效。数据表示为平均值±SEM，通过单向ANOVA(A)或双向ANOVA(B)进行统计学显著性分析：*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001,****p<0.0001。
图9示出了与MCAO或负载体组相比，化合物103(10mg/kg)在第7天有效地减少了CA1、CPu、M1和S1脑区域中的Iba1+CD11b+双阳性激活的小胶质细胞。数据表示为平均值±SEM，通过单向ANOVA进行统计学显著性分析*p<0.05,n＝5。
具体实施方式
如上所述，令人惊讶地发现，一系列苯基-二氢吡啶显示出出乎意料的良好特性，克服了上文所述的一个或多个问题。因此，在本发明的第一方面，提供了一种式I的化合物：
其中：
R1选自H、卤素、CF3、CN或NO2；
R2和R3独立地选自H、卤素、CH3、CF3、CN或NO2；
R4选自H、卤素、CN或CF3；
R5和R6独立地选自R9aC(O)O-、R9bOC(O)-、R9cC(O)NRd-、R9eR9fNC(O)-或具有1至10个碳原子的烷基酮，所述碳原子是支链的或非支链的并且是未取代的或者被选自卤素和NO2的更多个取代基之一取代；
R7和R8独立地选自H、NR10aR10b、OR10c或C1至C3烷基，其是未取代的或者被选自卤素的一个或多个取代基取代，或
R5和R7对或R6和R8对之一与它们附连的碳原子一起形成碳环或杂环的4至14元环系，并且其是未取代的或者被选自卤素、＝O、-OC(O)R10d、-(O)COR10e以及C1至C6烷基的一个或多个取代基取代；
R9a至R9f和R10a至R10e独立地选自H和C1至C6烷基，其是未取代的或者被选自卤素的一个或多个取代基取代，
或其药学上可接受的盐和/或溶剂化物。
在本文中单词“包括”指可以解释为需要所提到的特征，但不限制其他特征的存在。替代地，单词“包括”也可以涉及其中旨在仅所列举的组分/特征存在的情况(例如，单词“包括”可以被短语“由……组成”或“基本上由……组成”替换)。明确设想了无论是广义的解释还是狭义的解释两者都可以适用于本发明的所有方面和实施方式。换句话说，单词“包括”及其同义词可被短语“由……组成”或短语“基本上由……组成”或其同义词所替换，并且反之亦然。
短语“本质上由……组成”及其其他措辞可在本文中解释为指可能存在少量杂质的材料。例如，该材料可以是大于或等于90％纯，诸如大于95％纯，诸如大于97％纯，诸如大于99％纯，诸如大于99.9％纯，诸如大于99.99％纯，诸如大于99.999％纯，诸如100％纯。
在本文中，除上下文另外明确规定，否则单数形式"一个/种(a)"、"一个/种(an)"和"所述(the)"包括复数指示物。
本文(在本发明的任何方面或实施方式中)对式I的化合物的提及包括对这样的化合物本身、这样的化合物的互变异构体以及这样的化合物的药学上可接受的盐或溶剂化物或药学上功能衍生物的提及。
可以被提及的药学上可接受的盐包括酸加成盐和碱加成盐。这样的盐可以通过常规的手段来形成，例如通过使式I的化合物的游离酸或游离碱形式与一当量或多当量的适当的酸或碱任选地在其中该盐是不可溶的溶剂或介质中反应，紧接着使用标准技术(例如，在真空中通过冻干或过滤)去除所述溶剂或所述介质。盐也可以通过以下制备：将呈盐的形式的式I的化合物的反荷离子与另一反荷离子交换，例如使用合适的离子交换树脂。
药学上可接受的盐的实例包括来源于矿物酸和有机酸的酸加成盐，以及来源于金属，诸如钠、镁，或优选地钾和钙的盐。
酸加成盐的实例包括用以下形成的酸加成盐：乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、海藻酸、芳基磺酸(例如苯磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸以及对甲苯磺酸)、抗坏血酸(例如，L-抗坏血酸)、L-天冬氨酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、丁酸、(+)樟脑酸、樟脑-磺酸、(+)-(1S)-樟脑-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙烷磺酸、2-羟基乙烷磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、葡糖酸(例如，D-葡糖酸)、葡糖醛酸(例如，D-葡糖醛酸)、谷氨酸(例如，L-谷氨酸)、α-氧代戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟乙磺酸、乳酸(例如(+)-L-乳酸和(±)-DL-乳酸)、乳糖酸、马来酸、苹果酸(例如(-)-L-苹果酸)、丙二酸、(±)-DL-苦杏仁酸、偏磷酸、甲烷磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、磷酸、丙酸、L-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、单宁酸、酒石酸(例如(+)-L-酒石酸)、硫氰酸、十一烯酸以及戊酸。
盐的具体实例是来源于以下的盐：矿物酸，诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸；有机酸，诸如酒石酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、乙醇酸、葡糖酸、琥珀酸、芳基磺酸；以及金属诸如钠、镁，或优选地钾和钙。
如上面所提及的，还被式I的化合物涵盖的是化合物的任何溶剂化物及其盐。优选的溶剂化物是通过将无毒的药学上可接受的溶剂(以下被称为溶剂化溶剂)的分子并入到本发明的化合物的固态结构(例如晶体结构)而形成的溶剂化物。这样的溶剂的实例包括水、醇(诸如乙醇、异丙醇和丁醇)以及二甲基亚砜。可以通过用溶剂或包含溶剂化溶剂的溶剂的混合物使本发明的化合物重结晶来制备溶剂化物。在任何给定的情况下，是否已经形成溶剂化物可以通过使用众所周知且标准的技术，诸如热重分析(TGE)、差示扫描量热法(DSC)和X射线晶体学使化合物的晶体经受分析来确定。
溶剂化物可以是化学计量或非化学计量的溶剂化物。特别优选的溶剂化物是水合物，并且水合物的实例包括半水合物、一水合物和二水合物。
对于溶剂化物以及用于制造和表征它们的方法的更详细的讨论，参见Bryn etal.,Solid-State Chemistry of Drugs,Second Edition,published by SSCI,Inc ofWest Lafayette,IN,USA,1999,ISBN 0-967-06710-3。
本文定义的式I的化合物的“药学上的功能性衍生物”包括酯衍生物和/或具有或提供与本发明任何相关化合物相同的生物功能和/或活性的衍生物。因此，为了本发明的目的，该术语还包括式I的化合物的前药。
术语式I的化合物的“前药”包括口服或肠胃外给药以后，在体内代谢以实验上可检测的量且在预定时间内(例如，在6与24小时之间的给药间隔内(即每天一至四次))形成该化合物的任何化合物。
式I的化合物的前药可以通过以下制备：修饰存在于化合物上的官能团使得当这样的前药被给药到哺乳动物受试者时，该修饰在体内裂解。修饰典型地是通过合成具有前药取代基的母体化合物来实现的。前药包括式I的化合物，其中式I的化合物中的羟基、氨基、巯基、羧基或羰基基团结合到可以在体内裂解以分别再生游离羟基、氨基、巯基、羧基或羰基基团的任何基团上。
前药的实例包括但不限于羟基官能团的酯和氨基甲酸酯、羧基官能团的酯基团、N-酰基衍生物和N-曼尼希碱。前药的一般信息可以例如在Bundegaard,H.“Design ofProdrugs”p.I-92,Elsevier,New York-Oxford(1985)中找到。
为简便起见，式I的化合物以及这样的化合物的药学上可接受的盐、溶剂化物和药学上功能衍生物在下文中统称为“式I的化合物”。
式I的化合物可以包含双键，并且因此关于每个单独的双键可以作为E(异侧)和Z(同侧)几何异构体存在。所有的这样的异构体及其混合物都包括在本发明的范围内。
式I的化合物可以作为位置异构体存在，并且也可以表现出互变异构。所有互变异构形式及其混合物都包括在本发明的范围内。
式I的化合物可以包含一个或多个不对称碳原子，并且因此可以展现光学和/或非对映异构。非对映异构体可以使用常规技术分离，例如，色谱法或分级结晶。各种立体异构体可以通过使用常规例如分级结晶或HPLC技术分离化合物的外消旋或其他混合物来分离。替代地，所需的光学异构体可以通过以下制造：在不引起外消旋化或差向异构化的条件下适当的光学活性起始材料的反应(即‘手性池’方法)；适当的起始材料与“手性助剂”的反应，该手性助剂随后可以在合适的阶段被去除；衍生化(即拆分，包括动态拆分)，例如用同手性的酸，然后通过常规手段诸如色谱法分离非对映异构体衍生物；或在技术人员已知的条件下与所有适当的手性试剂或手性催化剂反应。所有的立体异构体和其混合物都包括在本发明的范围内。
为了避免疑问，在本发明的上下文中，术语“治疗”包括对需要这样的治疗的患者的治疗性或姑息性治疗的提及，以及对易受相关疾病状态影响的患者的预防性治疗和/或诊断的提及。
术语“患者(patient)”和“患者(patients)”包括对哺乳动物(例如人)患者的提及。如本文所用，术语“受试者”或“患者”是本领域所公认的，并且本文中可互换使用来指哺乳动物，包括狗、猫、大鼠、小鼠、猴、奶牛、马、山羊、绵羊、猪、骆驼以及最优选地人。在一些实施方式中，受试者是需要治疗的受试者或具有疾病或疾患的受试者。然而，在其他实施方式中，受试者可以是正常的受试者。该术语没有指示具体的年龄或性别。因此，旨在涵盖成人和新生的受试者，无论雄性或雌性。
术语“有效量”是指对治疗的患者具有治疗效果(例如足以治疗或预防疾病)的化合物的量。该效果可以是客观的(即通过某种测试或标记物可测量的)或主观的(即受试者给出的标示或感觉到的效果)。
本文所用的术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘。
本文所述时，当本文提及碳环或杂环的4至14元环系时，它可以包含一至三个环。为避免疑问，本文所述的碳环或杂环的4至14元环系可以部分地使用已经是环的一部分的原子形成，这些原子不应当计入4至14元环系中的环的总数目。4至14元环系可以是6至10元环系，诸如6至8元环系，其可以是单环的或双环的。
除非另有说明，否则本文所用的术语“芳基”包括C6-14(诸如C6-10)芳基基团。这样的基团可以是单环的、双环的或三环的，并且具有6至14个环碳原子，其中至少一个环是芳族的。芳基基团的附连点可以通过环系的任何原子。然而，当芳基基团是双环或三环时，它们通过芳环与分子的其余部分连接。C6-14芳基基团包括苯基、萘基等，诸如1,2,3,4-四氢萘基、茚满基、茚基和芴基。可以提及的本发明的实施方式包括其中芳基是苯基的那些实施方式。
除非另有说明，否则术语“烷基”是指非支链或支链、非环状、环状、饱和或不饱和(如此形成，例如，烯基或炔基)烃基基团，其可以是取代的或未取代的(具有例如，一种或多种卤素原子)。其中术语“烷基”是指非环状基团，其优选地是C1-10烷基以及更优选地，C1-6烷基(诸如乙基、丙基(例如，正丙基或异丙基)、丁基(例如，支链或非支链丁基)、戊基或更优选地，甲基)。其中术语“烷基”是环状基团(其可以是被指定为基团“环烷基”的情况)，其优选地是C3-12环烷基以及更优选地C5-10(例如C5-7)环烷基。
除非另有说明，否则“杂环系”可以是4至14元，诸如5至10元(例如6至10元)的杂环基基团，其可以是芳族的(即杂芳基基团)，完全饱和或部分不饱和的，并且其包含一个或多个选自O、S和N的杂原子，该杂环基基团可以包括一个或两个环。本文中可以提及的杂环系的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、二氢呋喃基(例如2,3-二氢呋喃基、2,5-二氢呋喃基)、二氢吡喃基(例如3,4-二氢吡喃基、3,6-二氢吡喃基)、4,5-二氢-1H-马来酰亚胺、二噁烷基、二氧戊环基、呋喃基、呋咱基(furazanyl)、六氢嘧啶基、乙内酰脲基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑烷基、异噁唑基、吗啉基、1,2-或1,3-噁嗪烷基、噁唑烷基、噁唑基、哌啶基、哌嗪基、吡喃基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啉基(例如3-吡咯啉基)、吡咯基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、3-环丁烯砜基(3-sulfolenyl)、环丁砜基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基(例如3,4,5,6-四氢吡啶基)、1,2,3,4-四氢嘧啶基、3,4,5,6-四氢嘧啶基、四氢噻吩基、四亚甲基亚砜、四唑基、噻二唑基、噻唑基、噻唑烷基、噻吩基、噻吩乙基(thiophenethyl)、三唑基和三嗪烷基(triazinanyl)。
除非另有说明，否则“碳环系”可以是4至14元，诸如5至10元(例如6至10元，诸如6元或10元)的碳环基团，其可以是芳族的、完全饱和的或部分不饱和的，该碳环基团可以包括一个或两个环。本文中可以提及的碳环系的实例包括但不限于环丁基、环戊基、环己基、环辛基、苯基、萘基、十氢萘基、四氢萘基、双环[4.2.0]辛基以及2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢-1H-茚满基。特别优选的碳环基团包括苯基、环己基和萘基。
本文使用的术语“杂芳基”是指包含一个或多个优选选自N、O和S的杂原子(例如一至四个杂原子)的芳族基团(因此形成例如单环、双环或三环杂芳族基团)。杂芳基基团包括具有5至14(例如10)元的那些，并且可以是单环、双环或三环，前提是至少一个环是芳族的。然而，当杂芳基基团是双环或三环时，它们通过芳环与分子的其余部分连接。可以提及的杂环基团包括苯并噻二唑基(包括2,1,3-苯并噻二唑基)、异硫代色烷基，以及更优选地吖啶基、苯并咪唑基、苯并二噁烷基、苯并二氧杂环庚烯基、苯并间二氧杂环戊烯基(包括1,3-苯并间二氧杂环戊烯基)、苯并呋喃基、苯并呋吖基、苯并噻唑基、苯并噁二唑基(包括2,1,3-苯并噁二唑基)、苯并噁嗪基(包括3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪基)、苯并噁唑基、苯并吗啉基、苯并硒二唑基(包括2,1,3-苯并硒二唑烷基)、苯并噻吩基、咔唑基、色烷基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吲唑基、吲哚啉基、吲哚基、异苯并呋喃基、异色烷基、异吲哚啉基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、萘啶基(包括1,6-萘啶基，或优选1,5-萘啶基和1,8-萘啶基)、噁二唑基(包括1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基和1,3,4-噁二唑基)、噁唑基、吩嗪基、吩噻嗪基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹嗪基、喹喔啉基、四氢异喹啉基(包括1,2,3,4-四氢异喹啉基和5,6,7,8-四氢异喹啉基)、四氢喹啉基(包含1,2,3,4-四氢喹啉基和5,6,7,8-四氢喹啉基)、四唑基、噻二唑基(包括1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基和1,3,4-噻二唑基)、噻唑基、硫代色烷基、硫代乙氧苯基(thiophenetyl)、噻吩基、三唑基(包括1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基和1,3,4-三唑基)等。在适当的情况下，杂芳基基团上的取代基可以位于环系中的任何原子上，包括杂原子。杂芳基基团的附连点可以是通过环系中的任何原子，包括(在适当的情况下)杂原子(诸如氮原子)，或者可以作为环系的一部分存在的任何稠合碳环上的原子。杂芳基基团也可以是N-或S-氧化的形式。特别优选的杂芳基基团包括吡啶基、吡咯基、喹啉基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、噻二唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、异噁唑基、异噻唑基、咪唑基、嘧啶基、吲哚基、吡嗪基、吲唑基、嘧啶基、噻吩基(thiophenetyl)、硫代苯基、吡喃基、咔唑基、吖啶基、喹啉基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、噌啉基和蝶啶基。特别优选的杂芳基基团包括单环杂芳基基团。
可以被提及的本发明的另外实施方式包括其中式I的化合物被同位素标记的那些。然而，可以被提到的本发明的其他具体实施方式包括其中式I的化合物不被同位素标记的那些。
当在本文中使用时，术语“同位素标记的”包括对其中在化合物中的一个或多个位置存在非天然同位素(或同位素的非天然分布)的式I的化合物的提及。本文对“化合物中的一个或多个位置”的提及将被本领域技术人员理解为是指式I的化合物的原子中的一个或多个。因此，术语“同位素标记的”包括对在化合物中的一个或多个位置处被同位素地富集的式I的化合物的提及。
式I的化合物的同位素标记或富集可以具有氢、碳、氮、氧、硫、氟、氯、溴和/或碘的任何放射性或非放射性同位素。在这个方面可以被提到的具体同位素包括2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、35S、18F、37CI、77Br、82Br和125l。
当式I的化合物用放射性或非放射性同位素所标记或富集时，可以被提到的式I的化合物包括其中化合物中至少一个原子显示同位素分布的那些，在同位素分布中所讨论的原子的放射性或非放射性同位素以超过该放射性或非放射性同位素的天然水平至少10％(例如10％至5000％，特别是50％至1000％，以及更特别是100％至500％)的水平存在。
可以提及的本发明的实施方式包括式I的化合物选择性抑制KCa3.1钙激活钾通道亚型的那些实施方式。
当本文所用涉及抑制KCa3.1钙激活钾通道时，术语“选择性(selective)”和“选择性(selectivity)”包括的是，指化合物与KCa3.1结合的IC50值比在相同温度(例如室温，诸如298K)下测定的所述化合物与Cav1.2钙激活钾通道亚型结合的IC50值低至少10倍(例如低至少20倍、50倍、100倍、500倍或1000倍)。
还可以提及的本发明的实施方式包括其中式I的化合物是KCa3.1钙激活钾通道的选择性抑制剂的那些实施方式。
当本文所用涉及抑制KCa3.1钙激活钾通道时，术语“选择性(selective)”和“选择性(selectivity)”包括的是，指化合物与KCa3.1钙激活钾通道结合的IC50值比在相同温度(例如室温，诸如298K)下测定的所述化合物与另一钙激活钾通道亚型(例如，Cav1.2钙激活钾通道亚型)结合的IC50值低至少10倍(例如低到其至少20倍、50倍、100倍、500倍或1000倍)。KCa3.1钙激活钾通道的选择性可以超过一种其他钙激活钾通道亚型，但在本发明的某些实施方式中，超过两种或多种(例如所有其他)钙激活钾通道亚型。
在本发明的第二方面中，提供了如第一方面所述的用作KCa3.1通道抑制剂的化合物或其衍生物。可以提及的本发明的实施方式包括其中式I的化合物选择性抑制KCa3.1通道的那些实施方式。
当本文所用涉及抑制KCa3.1通道时，术语“选择性(selective)”和“选择性(selectivity)”包括的是，指化合物与KCa3.1通道结合的IC50值比在相同温度(例如室温，诸如298K)下测定的所述化合物与以下通道中的一种或多种结合的IC50值低至少10倍(例如低至少20倍、50倍、100倍、500倍或1000倍)：KCa1.1通道、KCa2.2通道、KCa2.3通道、KV1.1通道、KV1.2通道、KV1.3通道、KV1.4通道、KV1.5通道、KV1.7通道、KV3.1通道、KV4.2通道、KV11.1通道。KCa3.1通道的选择性可以超过一种其他钙通道亚型和/或电压门控通道亚型，但在本发明的某些实施方式中，超过两种或多种(例如所有其他)钙通道亚型和电压门控通道亚型。
在本发明的实施方式中，以下中的一个或多个可以适用：
(Ai)R1可以选自H、F、Cl、Br、CF3或NO2；
(Aii)R2和R3可以独立地选自H、F、Cl、Br、CH3、CF3或NO2；
(Aiii)R4可以选自H、F、Cl、Br或CF3；
(Aiv)R5和R6可以独立地选自R9aC(O)O-、R9bOC(O)-或具有1至10个碳原子的烷基酮，所述碳原子是支链的或非支链的并且是未取代的或者被选自Cl、F和NO2的更多个取代基之一取代；
(Av)R7和R8可以独立地选自H或C1至C3烷基，其是未取代的或者被选自F和Cl的一个或多个取代基取代，或
R5和R7对或R6和R8对之一与它们附连的碳原子一起可以形成碳环或杂环的4至10元环系，并且其是未取代的或被选自F、Cl、＝O以及C1至C6烷基的一个或多个取代基取代；
(Avi)R9a至R9f和R10a至R10e独立地选自H和C1至C3烷基，所述碳原子是未取代的或者被选自F和Cl的一个或多个取代基取代。
在本文可以提及的特定实施方式中，以下一个或多个可以适用：
R1选自H、F、Cl或CF3；
R2和R3独立地选自H、F、Cl或CF3；
R4选自H、F、Cl或CF3；
R5和R6独立地选自R9bOC(O)-、具有1至3个碳原子的烷基酮，所述碳原子是未取代的或者被选自Cl和F的更多个取代基之一取代；
R7和R8独立地选自H或甲基，其是未取代的或者被选自F和Cl的一个或多个取代基取代。
在可以提及的本发明的更特定的实施方式中，以下中的一个或多个可以适用：
R1选自H、F或Cl；
R2选自CF3或更特定地，H或F；
R3选自H或CF3；
R4是H；
R5和R6独立地选自CH3OC(O)-或丙-2-酮基(例如R5和R6均为CH3OC(O)-)；
R7和R8独立地选自H和CH3。
在本文中可以提及的本发明的特定实施方式中，R7和R8中至少一个是H。例如，R7和R8两者都可以是H。在本文中可以提及的替代实施方式中：
R7可以是H并且R8可以是CH3；
R7和R8两者都可以是CH3；或
R7可以是CH3并且R8可以H。
式I的化合物或其盐和/或溶剂化物可以选自列表中的化合物中的一种或多种：
更特定地，式I的化合物或其盐和/或溶剂化物可以选自列表中的化合物中的一种或多种：
又更特定地，式I的化合物或其盐和/或溶剂化物可以选自列表中的化合物中的一种或多种：
再更特定地，式I的化合物或其盐和/或溶剂化物可以选自列表中的化合物中的一种或多种：
例如式I的化合物或其盐和/或溶剂化物可以是
可以理解，本发明的化合物可以合适于治疗受试者。因此，在本发明的其他方面，提供了一种药物组合物，其包括如上所述的式I的化合物或其盐和溶剂化物，以及一种或多种药学上可接受的载体、佐剂或负载体。
式I的化合物可以通过任何合适的途径给药，但是特别地可以口服地、静脉内地、肌内地、皮地、皮下地、经粘膜地(例如舌下地或颊地)、直肠地、经皮地、鼻地、经肺地(例如经气管地或经支气管地)、局部地、通过任何其他肠胃外途径，以呈药学上可接受的剂型的包括化合物的药物制剂的形式给药。可以被提到的具体的给药的模式包括口服、静脉内、皮的、皮下、鼻的、肌内或腹膜内给药。
式I的化合物将通常作为与在适当考虑预期给药途径和标准药学实践下可以选择的药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体的掺合物的药物制剂来给药。这样的药学上可接受的载体对活性化合物可以是化学惰性的，并且在使用的条件下可以没有有害的副作用或毒性。合适的药物制剂可以在例如，Remington The Science and Practice of Pharmacy,19th ed.,Mack Printing Company,Easton,Pennsylvania(1995)中找到。对于肠胃外给药，可以使用肠胃外可接受的水性溶液，其不含致热原并且具有必要的pH、等渗压和稳定性。合适的溶液将是技术人员所众所周知的，其中在文献中描述了众多的方法。药物递送的方法的简要综述也可以在例如Langer,Science(1990)249,1527中找到。
否则，合适的制剂的制备可以由技术人员使用常规技术和/或按照标准和/或公认的药学实践来常规地实现。
在根据本发明所使用的任何药物制剂中的式I的化合物的量将取决于各种因素，诸如待治疗的病症的严重性、待治疗的具体患者以及使用的一种或多种化合物。在任何情况下，在制剂中的式I的化合物的量可以由技术人员常规地确定。
例如，固体口服组合物诸如片剂或胶囊可以包含1至99％(w/w)的活性成分；0至99％(w/w)的稀释剂或填料；0至20％(w/w)的崩解剂；0至5％(w/w)的润滑剂；0至5％(w/w)的助流剂；0至50％(w/w)的造粒剂或粘结剂；0至5％(w/w)的抗氧化剂以及0至5％(w/w)的色素。控释片可以另外包含0至90％(w/w)的释放-控制聚合物。
肠胃外制剂(诸如用于注射的溶液或悬浮液或用于输注的溶液)可以包含1至50％(w/w)的活性成分；以及50％(w/w)至99％(w/w)的液体或半固体载体(carrier)或负载体(例如溶剂诸如水)；以及0-20％(w/w)的一种或多种其他赋形剂诸如缓冲剂、抗氧化剂、悬浮液稳定剂、张力调节剂以及防腐剂。
取决于待治疗的疾患和患者以及给药途径，可以向有此需要的患者以不同治疗有效剂量给药式I的化合物。
然而，在本发明的上下文中，向哺乳动物，特别是人给药的剂量，应当足以在合理的时间范围内在哺乳动物中产生治疗反应。本领域技术人员将认识到，确切剂量和组成以及最合适的递送方案的选择也将尤其受到以下影响：制剂的药理学特性，被治疗的病症的性质和严重性以及接受者的身体状况和精神敏度以及特定化合物的潜能，待治疗的患者的年龄、状况、体重、性别和反应，以及疾病的阶段/严重性。
给药可以是连续的或间歇的(例如，通过弹丸式注射)。剂量也可以通过定时和给药频率来确定。在口服或肠胃外给药的情况下，式I的化合物的剂量可以从每天约0.01mg至约1000mg变化。
在任何情况下，执业医师或其他技术人员将能够常规地确定对个体患者将是最合适的实际的剂量。以上提到的剂量是平均情况的示例；当然，可以是其中更高或更低的剂量范围是理所当然的个别情况，并且这样的在本发明的范围内。
如将理解的，本发明的进一步的方面涉及如上文所述的式I的化合物或其盐和/或溶剂化物，其用于药物中。
因此，本发明的进一步的方面涉及以下：
(a)如之前限定的式I的化合物或其盐和溶剂化物，用于治疗或预防与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症。
(b)如之前限定的式I的化合物或其盐和溶剂化物，用于制备用于治疗或预防与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症的药物的用途。
(c)一种治疗与KCa3.1升高或活性改变相关的疾患或病症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的如之前限定的式I的化合物或其盐和溶剂化物。
在本发明的实施方式中，与KCa3.1活性升高或改变相关的疾病病症可以选自以下一种或多种：白血病或更特别地炎性肠病(IBD)、纤维化疾病(肺、肝、肾、心脏、结膜、角膜纤维化)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、胶质瘤(胶质母细胞瘤)、肺癌、胰腺癌、肝细胞癌、卵巢癌、结直肠癌、囊性纤维化、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、骨吸收、炎性关节炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、支架内新动脉粥样硬化、卒中、创伤性脑损伤、阿尔茨海默病、遗传性干瘪红细胞增多症、镰状细胞贫血、哮喘、变应性鼻炎、小胶质细胞激活、一氧化氮依赖性神经退行性变、神经肿瘤学疾病和孤儿红细胞疾患。例如，与KCa3.1活性升高或改变相关的疾病病症可以选自以下一种或多种：白血病或更特别地炎性肠病(IBD)、纤维化疾病(肺、肝、肾、心脏、结膜、角膜纤维化)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、胶质瘤(胶质母细胞瘤)、肺癌、胰腺癌、肝细胞癌、卵巢癌、结直肠癌、囊性纤维化、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、骨吸收、炎性关节炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、支架内新动脉粥样硬化、卒中、创伤性脑损伤、阿尔茨海默病、遗传性干瘪红细胞增多症、镰状细胞贫血、哮喘、变应性鼻炎、小胶质细胞激活以及一氧化氮依赖性神经退行性变。
在本文可以提及的特定实施方式中，与KCa3.1活性升高或改变相关的疾病病症可以是卒中。
如可以理解的，本文公开的式I的化合物或衍生物在啮齿动物的重复剂量毒理学研究中具有以下优势：对KCa3.1通道具有强效力和选择性、口服生物利用度、优异的脑渗透性和良好的耐受性。此外，已发现本文公开的式I的化合物或衍生物对治疗卒中有效，卒中是一种与KCa3.1活性升高或改变相关的病症。
本文所述的本发明的各方面(例如，上述化合物、组合、方法和用途)对比现有技术中已知的类似的化合物、组合、方法(治疗)或用于治疗这些病症的用途或其他方面可以具有以下优点：在治疗本文所述病症时，它们对医师和/或患者来说可能更方便、更强效、毒性更小、选择性更好、活性范围更广、更有效、产生的副作用更少或可能具有其他有用的药理特性。
式I的化合物可以使用如下实施例所示的已知技术合成。其他化合物可以通过类似的方法制备。本发明的化合物可以使用常规技术(例如重结晶、柱色谱、制备型HPLC等)从它们的反应混合物中分离。
实施例
材料
碳酸铵((NH4)2CO3)、乙酸、乙酸铵(NH4OAc)、二环己基脲、4-二甲基氨基吡啶、n,o-二甲基羟胺HCl、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)、氯甲酸乙酯、乙酰乙酸甲酯、哌啶和偏高碘酸钠购自Avra Synthesis Pvt Ltd.。氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乙二醇双(β-氨基乙醚)-N,N,N’,N’-四乙酸(EGTA)、D-葡萄糖、鸟苷5'-三磷酸钠盐水合物(Na2-GTP)、腺苷5'-三磷酸镁盐(Mg-ATP)、酮康唑、奎尼丁、磺胺苯吡唑(Sulphaphenazolefor)、诺卡酮、维拉帕米、华法林、纳曲酮(Naltrexone)、盐酸洛哌丁胺、非那西汀(Phenacetin)、利血平(Reserpine)、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸2′-磷酸还原的四钠盐水合物(NADPH)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、Solutol HS-15、聚乙二醇400(PEG-400)、托可索仑(Tocophersolan，TPGS)、氧化锰和二氯甲烷购自Sigma-Aldrich。氧化锇(VIII)购自Chempure Pte Ltd.丙炔酸甲酯、4-氯-3-(三氟甲基)苯甲醛、3,4-二氟-5-(三氟甲酯)苯甲酸、3-氟-5-(三氟甲基)苯甲醛、乙烯基三氟硼酸钾(95％)、5-溴-2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸和4-氟-3-(三氟甲基)苯甲醛购自Combi-Blocks Inc。1,1'-双-(二苯基膦)-二茂铁]-二氯化钯购自Hindustan Platinum Pte Ltd。氯仿购自SAI Enterprises。在THF中的1.3M溶液的异丙基氯化镁-氯化锂络合物、1,4-二噁烷中的4mol氯化氢和乙醚中的甲基溴化镁3M溶液购自Sainor Laboratories Pte.Ltd。N,N,N,N-四甲基胍叠氮盐购自SelectLabChemicals GmbH。丙炔酸甲酯、四乙基氯化铵(TEA-Cl)和3-(三氟甲基)苯甲醛(97％)购自TCI Chemicals(印度)Pte.Ltd。N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸(HEPES)购自赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific)。呋喃茶碱(Furafylline)购自BD Gentest。甲酸购自霍尼韦尔研究级化学品(Honeywell Research Chemicals)。乙腈(ACN)购自Avantor。甲苯磺丁脲购自Supelco。2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TCC)购自Vicmed Biotechnology。依达拉奉购自TargetMol。所有其他化学品和溶剂都是从工业化学品供应商处购买的，并且在没有进一步纯化的情况下直接使用。
分析技术
1H NMR波谱法
所有1H NMR光谱均记录在400MHz(Bruker)和500MHz(Agilent(安捷伦))NMR光谱仪上。所有化学位移均以δ值给出，并以四甲基硅烷(TMS)作为内标。
液相色谱-质谱法(LC-MS)
对于毒理学研究，使用LC-MS/MS AB SCIEX API-4000三重四极杆仪器结合WatersUPLC系统。对于细胞色素P450酶抑制测定和血浆蛋白结合测定，使用API-4000(美国应用生物系统公司(Applied Biosystems))质谱仪结合LC SIL-HTc(岛津(Shimadzu))。对于微粒体稳定性研究，使用质谱仪TSQ Quantum Ultra(赛默飞世尔)结合LC SIL HTc(岛津)。对于化合物合成分析，使用LCMS(SQD)-2010EV(岛津)、LCMS(SQD)-1200系列LC/G6125B-MS(安捷伦)以及UPLC/MS(SQD)(Waters)。
高效液相层析(HPLC)
对于水性溶解性测定，使用Waters Alliance 2690 HPLC。对于化合物合成分析，使用HPLC 2010CHT(岛津)。
实施例1
将本工作中研究的二氢吡啶分为四类，以及如表1所示。基于在R7和R8处的部分，将第4组进一步分为三个小组(4a、4b、4c)。
表1.示出了四组抑制剂及其化学取代基。
第4b组和第4c组类似物的合成如下所示。基于对SciFinder数据库的搜索，所有这些化合物都是新的化学实体。
4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸二甲酯(103)
向冷却至0℃的在乙酸(800mL)中的4-氟-3-(三氟甲基)苯甲醛(1，80g，416.42mmol，1.0当量)的搅拌溶液中添加丙炔酸甲酯(2，70g，832.84mmol，2.0当量)和(NH4)2CO3(40g，416.42mmol，1.0当量)，并将反应混合物在70℃下搅拌16h。在完全反应后(通过薄层色谱(TLC)监测)，用冷水(1L)稀释反应混合物，然后用乙酸乙酯(EtOAc，2x1L)萃取。将有机相用饱和NaHCO3溶液(2L)和盐水溶液(2L)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以获得粗产物。使用己烷(800mL)磨碎粗产物，倾析，然后用MeOH(50mL)结晶并过滤，得到103(44g,29.4％)，为淡黄色固体。TLC:50％ EtOAc/庚烷(Rf:0.3)。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ9.32(br s,1H),7.55-7.50(m,1H),7.48-7.44(m,1H),7.43-7.37(m,3H),4.80(s,1H),3.55(s,6H)。
LC-MS:99.59％,m/z＝358.0[M-H]-(柱:EVO-C18(3.0X50mm,2.6μm)；Rt:2.83min；A:2.5mM NH4OAc(在水中),B：乙腈(CAN)T/B％:0.01/5,3/90,5/90,5.5/5,6/5；温度：50℃；以及流速：0.8mL/min)。
HPLC：99.94％(柱:X-SELECT CSH C-18(4.6x150mm,3.5μm)；Rt:10.20min；A:在水中的5.0mM NH4OAc,B：ACN T/B％：0.01/20,12/90,16/90；以及流速：1.0mL/min)。
4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-2-甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸二甲酯(104)
3-叠氮丙烯酸甲酯(3b)
向在氯仿(40mL)中的丙炔酸甲酯(3a，2.0g，23.80mmol，1.0当量)搅拌溶液中添加N,N,N,N-四甲基胍叠氮盐(4.0g，26.19mmol，1.1当量)，并将反应物在室温下(RT)搅拌16h。在完全反应后(通过TLC监测)，将反应混合物在35℃水浴中在300mbar下浓缩。首先在35℃水浴中以室内真空蒸馏粗产物，去除大部分剩余的氯仿。连接真空泵以产生真空，并蒸馏粗产物以获得3b，为灰白色固体(1.5g，粗产物)。将粗产物直接用于下一个反应中，而无需进一步纯化。TLC:20％ EtOAc/庚烷(Rf:0.5)。
(E)-3-((三苯基-l5-膦亚基)氨基)丙烯酸甲酯(3c)
向在DCM(50mL)中的3-叠氮丙烯酸甲酯(1.5g，11.81mmol，1.0当量)的搅拌溶液中添加三苯基膦(3.0g，11.80mmol，1.0当量)，并将反应物在RT下搅拌16h。在完全反应后(通过TLC监测)，在真空下直接蒸发反应混合物以获得3c，其为灰白色固体(1.0g，粗品)。TLC:20％ EtOAc/庚烷(Rf:0.5)。
(Z)-2-(4-氟-3-(三氟甲基)亚苄基)-3-氧代丁酸甲酯(2)
在0℃下，向在甲苯(10mL)中的4-氟-3-(三氟甲基)苯甲醛(1，0.5g，2.60mmol，1.0当量)的搅拌溶液中添加哌啶(22.1mg，0.26mmol，0.1当量)和乙酸(15.6mg，0.26mmol，0.1当量)，并将反应物在RT下搅拌16h。在完全反应后(通过TLC监测)，用冷水(20mL)稀释反应混合物，然后用DCM(2x50mL)萃取。将有机相用盐水溶液(20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以获得粗产物，该粗产物通过组合快速色谱法(combi-flash chromatography)纯化，使用在己烷中的20-30％ EtOAc作为洗脱剂，得到2，为浅黄色固体(0.5g，66.2％)。TLC:30％ EtOAc/庚烷(Rf:0.2)。
104
向在氯仿(20mL)中的2(0.5g，1.72mmol，1.0当量)的搅拌溶液中添加3c(0.930g，2.58mmol，1.5当量)，并将反应混合物在40℃下搅拌6h。通过TLC监测反应进展，并按照上述用于2的方案对产物进行处理和纯化，以得到104，为淡黄色固体(0.2g，31％)。TLC:40％EtOAc/庚烷(Rf:0.2)。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ9.36(br s,1H),7.55-7.50(m,1H),7.48-7.44(m,2H),7.43-7.37(m,1H),4.82(s,1H),3.55(s,6H)2.25(s,3H).
LC-MS:99.91％,m/z＝374.1[M+H]+(柱:EVO-C18(3.0X50mm,2.6μm)；Rt:2.8\8min；A:在水中的2.5mM甲酸铵，B：ACN T/B％：0.01/5,3/90,5/90,5.5/5,6/5；温度：50℃；以及流速：0.8mL/min)。
HPLC：99.94％(柱:X-SELECT CSH C-18(4.6x150mm,3.5μm)；Rt:10.95min；A:在水中的5.0mM乙酸铵(NH4OAc)，B：ACN T/B％：0.01/20,12/90,16/90；以及流速：1.0mL/min)。
4-(3-(三氟甲基)苯基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸二甲酯(108)
向冷却至0℃的在乙酸(200mL)中的3-(三氟甲基)苯甲醛(1，20g，114.92mmol，1.0当量)的搅拌溶液中添加丙炔酸甲酯(2，20.45mL，229.85mmol，2.0当量)和(NH4)2CO3(11g，114.92mmol，1.0当量)，并在80℃下搅拌16h。在完全反应后(通过TLC监测)，用冷水(400mL)稀释反应混合物，然后用EtOAc(2x500mL)萃取。将有机相用饱和NaHCO3溶液(500mL)和盐水溶液(500mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以获得粗产物，该粗产物通过组合快速色谱法纯化，使用在己烷中的30-40％EtOAc作为洗脱剂，得到108，为浅黄色固体(11.0g，28％)。TLC:40％EtOAc/庚烷(Rf:0.2)。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ9.32(br s,1H),7.55-7.50(m,3H),7.48-7.44(m,1H),7.43-7.37(m,2H),4.80(s,1H),3.55(s,6H)。
LC-MS:99.54％,m/z＝340.0[M-H]-(柱:EVO-C18(3.0X50mm,2.6
μm)；Rt:2.65min；A:2.5mM NH4OAc在水中,B：ACN T/B％：0.01/5,3/90,5/90,5.5/5,6/5；温度：50℃；以及流速：0.8mL/min)。
HPLC：99.91％(柱:X-SELECT CSH C-18(4.6x150mm,3.5μm)；Rt:9.43min；A:5.0mMNH4OAc在水中,B：ACN T/B％：0.01/20,12/90,16/90；以及流速：1.0mL/min)。
4-(3-氟-5-(三氟甲基)苯基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(109)
在RT下，向在乙酸(10mL)中的3-氟-5-(三氟甲基)苯甲醛(1，0.100g，0.5208mmol，1.0当量)和丙炔酸甲酯(2，0.085g，1.041mmol，2.0当量)的搅拌溶液中缓慢添加(NH4)2CO3(0.049g，0.5208，1.0当量)并将反应混合物在70℃下加热14h。在起始原料完全消耗后(通过TLC监测)，将反应混合物冷却至RT，并用冰冷的水(10mL)缓慢淬灭。用DCM(15mL x 2)萃取水性层。将合并的有机相用盐水溶液(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，以及在减压下浓缩以获得粗产物，使用在正己烷中的10-40％ EtOAc作为洗脱剂将该粗产物通过组合快速色谱法纯化，得到109，为浅黄色固体(0.040g，22％)。TLC:40％ EtOAc/己烷(Rf:0.5)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.36(brs,1H),7.40–7.50(m,3H),7.32(s,1H),7.26(d,J＝7.9Hz,1H),4.81(s,1H),3.53(s,6H)。
LC-MS:99.32％,m/z＝360.0[M+H]+(柱:X-Select CSH C18(3.0x50mm,2.5μm)；Rt:1.941min；A:在水:ACN(95:05)中的0.05％甲酸，B：在ACN中的0.05％甲酸。温度：50℃；以及流速：1.2mL/min)。
HPLC：99.45％(柱:X-SELECT CSH C-18(4.6x150mm,3.5μm)；Rt:8.48min；在水中的A-0.1％甲酸，B：ACN T/B％：0.01/5,1.0/5,8.0/100,12.0/100,14.0/5,18.0/5以及流速：1.0mL/min)。
4-(3,4-二氟-5-(三氟甲基)苯基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸二甲酯(110)
3,4-二氟-5-(三氟甲基)苯基)甲醇(2)
在0℃下，向在THF(20mL)中的3,4-二氟-5-(三氟甲基)苯甲酸(1，0.500g，2.212mmol)的搅拌溶液中缓慢添加BH3:THF(6.6mL，6.637mmol)。使反应混合物达到RT并搅拌12h。在起始原料完全消耗后(通过TLC监测)，用3M HCl(30mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(20mL)萃取水性层。将有机层用盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，得到2，为粘性无色油(0.300g，64％)。将所得粗产物直接用于下一个反应中，而无需进一步纯化。TLC:5％ MeOH(在DCM中)(Rf:0.6)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.45-7.55(m,1H),7.25(s,1H),6.95(s,1H),4.58-4.68(s,2H)。
3,4-二氟-5-(三氟甲基)苯甲醛(3)
在RT下，向在DCM(20mL)中的(3,4-二氟-5-(三氟甲基)苯基)甲醇(2，0.300g，1.415mmol)的搅拌溶液中缓慢添加MnO2(0.738g，8.490mmol)并搅拌12h。在起始原料完全消耗后(通过TLC监测)，通过硅藻土垫过滤反应混合物。用DCM(5mL)洗涤硅藻土垫，并在减压下浓缩所获得的滤液以获得3，为粘性无色油(0.200g，67％)。将所得粗产物直接用于下一个反应中，而无需进一步纯化。TLC:40％ EtOAc/己烷(Rf:0.8)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.88(br.s,1H),7.73(s,1H),7.45(s,1H)。
110
在RT下，向在乙酸(10mL)中的3,4-二氟-5-(三氟甲基)苯甲醛(3，0.200g，0.9523mmol)和丙炔酸甲酯(2，0.159g，1.904mmol)的搅拌溶液中缓慢添加(NH4)2CO3(0.091g，0.9523mmol)并且将反应混合物在75℃下加热16h。在起始原料完全消耗后(通过TLC监测)，将反应混合物冷却至RT，并用冰冷的水(10mL)缓慢淬灭。用DCM(20mL x 2)萃取水性层。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。使用在正己烷中的0–40％ EtOAc通过组合快速色谱法对所获得的粗品进行纯化，得到110，为淡黄色固体(0.040g，11％)。TLC:40％EtOAc/己烷(Rf:0.5)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(br.s,1H),7.40-7.50(m,3H),7.30(s,1H),4.81(s,1H),3.55(s,6H)。
LC-MS:99.64％,m/z＝360.0[M+H]+(柱:X-Select CSH C18(3.0x50mm,2.5μm)；Rt:2.034min；A:0.05％甲酸(在水:ACN(95:5)中)，B：0.05％甲酸(在ACN中)；温度：50℃；以及流速：1.2mL/min)。
HPLC：98.11％(Column；X-SELECT CSH C-18(4.6x150mm,3.5μm)；Rt:9.043min；A-0.1％甲酸(在水中)，B：ACN T/B％：0.01/5,1.0/5,8.0/100,12.0/100,14.0/5,18.0/5以及流速：1.0mL/min)。
4-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸二甲酯(113)
在70℃下，向在乙酸(10mL)中的4-氯-3-(三氟甲基)苯甲醛(1，0.100g，0.4807mmol)和丙炔酸甲酯(2，0.080g，0.9615mmol)的搅拌溶液中缓慢添加(NH4)2CO3(0.046g，0.4807，1.0)并将反应混合物在70℃下加热14h。在起始原料完全消耗后(通过TLC监测)，将反应混合物冷却至RT，并用冰冷的水(10mL)缓慢淬灭。用DCM(20mL x 2)萃取水性层。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。使用在正己烷中的0–40％ EtOAc通过组合快速色谱法对所获得的粗产物进行纯化，得到113，为淡黄色固体(0.040g，22％)。TLC:40％ EtOAc/己烷(Rf:0.8)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.33(br.s,1H),7.63(d,J＝8.01Hz,1H),7.57(s,1H),7.40-7.50(m,3H),4.79(s,1H),3.35(s,6H)。
LC-MS:99.75％,m/z＝376.0(M+H)+(柱:X-Select CSH C18(3.0x50mm,2.5μm)；Rt:1.986min；A:在水:ACN(95:05)中的0.05％甲酸，B：0.05％甲酸(在ACN中)；温度：50℃；以及流速：1.2mL/min)。
HPLC：99.42％(柱:X-SELECT CSH C-18(4.6x150mm,3.5μm)；Rt:8.715min；A-在水中的0.1％甲酸，B：ACN T/B％：0.01/5,1.0/5,8.0/100,12.0/100,14.0/5,18.0/5以及流速：1.0mL/min)。
实施例2
使用膜片钳筛选KCa3.1通道上的二氢吡啶的组，以了解结构-活性关系。
KCa3.1膜片钳方案
通过使用QPatch HTX自动电生理平台的膜片钳(丹麦索菲恩(Sophion))以及通过手动膜片钳(德国HEKA)评估化合物对KCa3.1通道的影响。对于QPatch实验，自动化电生理的高阻封接(giga-seal)和全细胞要求如下：最小封接电阻＝0.1GΩ；钳制电位＝-80mV；钳制压力＝-20mbar；以及定位压力＝-70mbar。对于KCa3.1实验，外部溶液为Na+-林格氏液，并包含(以mM计)：160NaCl；10 HEPES；4.5KCl；1MgCl2；以及2CaCl2(pH＝7.4,310mOsm)。所包含的内部溶液(以mM计)：120KCl；10 HEPES；1.75MgCl2；1Na2ATP；10EGTA；以及8.6CaCl2(1μM无Ca2+)(pH＝7.2，300mOsm)。在建立全细胞构型后，将细胞钳制在-80mV下，并且通过以下电压方案引起KCa3.1电流：在-80mV下钳制持续20ms，阶跃至-120mV持续20ms，在200ms内从-120mV增加至+40mV，并且然后回到-120mV持续20ms。该脉冲方案每10s应用一次。使用索菲恩QPatch软件测量电流斜率(以安培/秒计)，并将其导出到Microsoft Excel和GraphPadPrism 7中进行分析。-85至-65mV之间的斜率的减小用于确定KCa3.1抑制的IC50。使用GraphPad Prism软件进行曲线拟合和IC50测定。
结果与讨论
表2中概括了二氢吡啶的IC50。第一组以IC50值大于5μM阻断KCa3.1。第二组以1-5μM阻断通道。第三组以100-200nM阻断KCa3.1。第三组以低纳摩尔浓度阻断KCa3.1。选定的第2、3、4a、4b和4c组化合物对KCa3.1电流的效果如图3所示。
表2.结构-活性关系示出了四组抑制剂，它们的化学取代基以及阻断KCa3.1的效力。
*通过自动平面膜片钳测定的第4组化合物的IC50值略高于通过手动膜片测定的IC50值。
实施例3
由于二氢吡啶抑制L型电压门控钙通道，因此在CaV1.2上测试了选定的类似物。
CaV1.2膜片钳方案
用EPC-10 HEKA放大器通过手动膜片钳评估化合物对CaV1.2通道的影响。所包含的外部溶液(以mM计)：140TEA-Cl；2MgCl2；10CaCl2；10 HEPES；以及5D-葡萄糖(pH＝7.4)。所包含的内部溶液(以mM计)：120CsCl；1MgCl2；10 HEPES；10EGTA；0.3Na2-GTP；以及4Mg-ATP(pH＝7.2)。在建立全细胞模式后，在钳制膜电位为-80mV时记录CaV1.2电流，以及然后去极化至+10mV(由于IV导联测试，测试脉冲略有改变)持续0.3s。以20s的间隔重复该方案，以观察测试化合物对CaV1.2电流的峰值的影响。将每个细胞与每个测试化合物一起孵育5min，或者直到电流达到稳态。这些化合物以从低到高的多种浓度施加。每个细胞都作为自己的对照。峰值电流的降低用于确定CaV1.2抑制的IC50。使用IGOR软件进行曲线拟合和IC50计算。
结果与讨论
表3示出了选定类似物，并比较了选定类似物对KCa3.1和CaV1.2的选择性。第2组类似物示出对CaV1.2的选择性高于KCa3.1。第3组类似物示出对KCa3.1的选择性是CaV1.2的约10倍。第4组类似物示出对KCa3.1的选择性是CaV1.2的>50倍，其中第4c组类似物对KCa3.1最具选择性。KCa3.1的低nM IC50阻断所需的药效团以及KCa3.1相比于CaV1.2的>1000倍选择性如图4所示。
表3.化合物对KCa3.1比对CaV1.2的选择性。
#文献已报道的值(Y.Kuryshev et.al.,Assay Drug Dev Technol.2014,12(2),110-119；Eurofins Panlab)。
实施例4
将从第4组中选定的类似物在相关的钾通道上进行测试。
钾通道膜片钳方案
通过使用QPatch HTX自动电生理平台(丹麦索菲恩)的膜片钳评估第4组化合物对相关钾通道的影响。对于自动化电生理的高阻封接和全细胞要求如下：最小封接电阻＝0.1GΩ；钳制电位＝-80mV；钳制压力＝-20mbar；以及定位压力＝-70mbar。测试的每个特定离子通道的缓冲液组成和电压方案如表4所示。
表4.测试钾通道的缓冲液组成和电压方案。
结果与讨论
第4a、4b和4c组类似物对KCa3.1的选择性是相关钾通道的>1000(表5)。
表5.第4组化合物对KCa3.1比对相关K+通道的选择性。
实施例5
测试来自第4组的化合物101和103抑制细胞色素P450酶的能力。此外，还评估了它们的血浆蛋白结合和微粒体稳定性。
细胞色素P450酶抑制测定
将磷酸钾缓冲液(50mM，pH＝7.4)中的微粒体悬浮液与相应的探针底物混合，然后在37℃下平衡5分钟。将DMSO对照、参考抑制剂(酮康唑用于3A4、奎尼丁用于2D6、磺胺苯吡唑用于2C9、诺卡酮用于2C19、呋喃茶碱用于1A2)、不同浓度(0.009μM、0.027μM、0.082μM、0.247μM、0.741μM、2.222μM、6.667μM和20μM)的化合物101或103掺入制备的微粒体和探针底物混合物中，并在37℃的振荡水浴中孵育5min。将NADPH(10mM)添加到所有样品中以引发反应。在37℃下孵育10min后，将含有维拉帕米(200ng)和华法林(200ng)作为内标的ACN添加到混合物中以停止反应。将样品轻轻涡旋，并在4℃下以1021g离心20min，然后将其注入LC-MS/MS系统。使用以下公式估计在上述条件下每种底物的代谢物形成：抑制百分比＝[1-(测试面积比/对照面积比)]x100。使用GraphPad5软件中的S型剂量-反应曲线(可变斜率)确定IC50值。
血浆蛋白结合测定
将含有测试化合物(3μM，最终浓度)和磷酸钠缓冲液(150μL，100mM，pH 7.4)的人和小鼠血浆(150μL)添加至平衡透析装置中，并在37℃下在持续振荡下平衡4.5h。平衡后，从孔的前半部分取出10μL的血浆，与50μL的空白缓冲液混合，并且然后用200μL的0.05％甲酸(在含有100ng/mL的洛哌丁胺、非那西丁&甲苯磺丁脲作为内标的ACN)淬灭。类似地，从孔的后半部分取出50μL的血浆，与10μL的空白血浆混合然后淬灭。为了制备回收样品，将10μL的含有3μM的化合物101或103的血浆添加至50μL的空白缓冲液中并淬灭。所有样品在4℃下以14,000rpm离心5min。华法林和纳曲酮作为阳性对照。通过LC-MS/MS分析所有样品的上清液。
微粒体稳定性研究
将人微粒体(20mg/mL)悬浮在磷酸钾缓冲液(66.7mM，pH＝7.4)中作为孵育混合物。将1μL的测试化合物或对照(1.1mM)添加至孵育混合物中，以得到1.1μM的工作浓度，并等分到4个试管中进行4个时间点测定(0、5、15和30min)。将所有试管和NADPH溶液(10mM)在37℃下在振荡水浴中预孵育5min。预孵育后，将NADPH溶液(10mM)添加至5-min、15-min和30-min试管中。将缓冲液添加至0-min试管中，以获得最终浓度为1μM的测试化合物或参考标准品。在每个相应试管的孵育期结束时，添加淬灭溶液(含有100ng/mL的华法林和洛哌丁胺作为内标的ACN)以使反应停止。将所得样品以3,220g离心20min，并从每个反应管中取出上清液用于LC-MS/MS分析。
结果与讨论
与第4a组化合物相比，第4c组类似物对KCa3.1的选择性高于细胞色素P450酶，表现出更少的血浆蛋白结合、更低的cLogP值以及更大的稳定性和溶解性(表6)。
表6.第4a组与第4c组类似物的比较。
由于来自第4c组的化合物103以低纳摩尔效力(IC50＝6nM)阻断KCa3.1，并且对KCa3.1的选择性是其他通道和～100个分子靶标的组的>1000，因此在随后的研究中使用了它。
实施例6
通过对97个靶标的竞争性结合、酶和摄取测定来评估化合物103的选择性。
竞争性结合测定
单独的竞争性结合测定的实验条件如表7所示。化合物103在3μM下进行测试。结果表示为对照特异性结合的抑制百分比[100-(测量的特异性结合/对照特异性结合*100)]。IC50值和希尔系数(nH)是通过用平均重复值使用在Cerep开发的软件(Hill软件)进行希尔方程曲线拟合产生的竞争曲线进行非线性回归分析来确定的，并通过与商业软件产生的数据进行比较来验证。
表7.竞争性结合测定的实验条件。
酶和摄取测定
单独的酶和摄取测定的实验条件如下表所示。化合物103在3μM下进行测试。结果表示为对照比活性的抑制百分比[100-(测量的比活性/对照比活性*100)]。IC50值、EC50值和希尔系数(nH)是通过用平均重复值使用在Cerep开发的软件(Hill软件)进行希尔方程曲线拟合产生的抑制/浓度响应曲线进行非线性回归分析来确定的，并通过与商业软件产生的数据进行比较来验证。
表8.单独的酶和摄取测定的实验条件。
结果与讨论
结果呈现在图5中。
实施例7
对化合物103的溶解性和药代动力学进行了评估。
溶解性测试
1、5、10、50、100、200和300μM的校准标准品由20mM的原液在DMSO中制备。将198μL的0.01M PBS(pH＝7.4)等分试样分配到多重筛选的溶解性滤板的重复孔中，然后分配2μL的测试化合物溶液(20mM)。将板覆盖住并以150转/min的速度振荡90min。在90min结束时，使用MultiScreen HTS真空歧管组件过滤样品，并将滤液收集到受体板上。将来自上述96孔受体板的滤液的等分试样(150μL)转移到HPLC小瓶中，并通过HPLC-UV进行分析。维拉帕米、酮康唑和利血平分别作为高、中、低可溶性参考标准品。
药代动力学分析
使用6-8周龄的雄性Sprague Dawley(SD)大鼠(200-240g)(n＝3，连续取样)。将化合物103在DMSO:solutol-乙醇:生理盐水(10:10:80；v/v)中配制，用于以5mg/kg静脉给药(IV)，以及在5％v/v NMP、7.5％v/v Solutol HS-15、50％v/v PEG-400以及37.5％v/vTPGS(10％w/v在水中)中配制，用于以50mg/kg口服给药(PO)。IV和PO给药的血浆采集时间点分别为0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、24h和0.25、0.5、1、2、4、8、10、24h。血浆样品通过LC-MS/MS分析，并且PK参数通过Phoenix 8.1版软件计算。
结果与讨论
发现化合物103在pH 7.4下在PBS中可溶性最高达到87.4μM(表9)。
表9.化合物103(第4c组)的溶解性
溶解性(μM)
PBS pH 1.5 54.6
PBS pH 5.0 58.1
PBS pH 7.4 87.4
在小鼠中，化合物103的血浆终末半衰期(t1/2)在5mg/kg单次静脉注射后为1.15h，以及在50mg/kg单次口服给药后为4h。在大鼠中的生物利用度估计为44.1％(图6)。
实施例8
对化合物103在小鼠中的脑渗透能力进行了评估。
血浆和大脑分布研究
在体重在20-35g之间的雄性C57BL/6小鼠(8-12周龄)中，在以25mg/kg和50mg/kg的单次腹腔给药后，测定化合物103的血浆和脑分布。所使用的制剂负载体为5％v/v NMP、7.5％v/v Solutol HS-15、50％v/vPEG-400以及37.5％v/v TPGS(10％w/v)。腹腔给药的给药量为5mL/kg。采集血液后，处死动物，并且切开其腹腔静脉，并使用10mL生理盐水从心脏灌注全身。在0.08、0.25、0.5、1、2、4、8和10h时从一组三只小鼠中收集脑样品。分离后，将脑样品在冰冷的生理盐水中漂洗三次(每次漂洗使用～10-20mL生理盐水在一次性培养皿中漂洗5-10s/漂洗)，并在吸墨纸上干燥。使用冰冷的磷酸盐缓冲盐水(pH＝7.4)对脑样品进行匀浆。匀浆的总体积是组织重量的三倍。所有匀浆均储存在-70℃以下，直至进行生物分析。通过符合目的的LC-MS/MS方法测定小鼠血浆和脑样品中化合物103的浓度。Phoenix(8.0版)的非房室模型分析工具用于评估药代动力学参数。
结果与讨论
在以25mg/kg和50mg/kg单次腹腔剂量给药化合物103之后，分别在0.5h和0.25h观察到峰值血浆和脑浓度，表明快速脑渗透。在2.24h和1.63h观察到终末消除半衰期。总体而言，脑-Kp为1.97和4.4时，脑浓度高于血浆(表10)。
表10.化合物103的血浆和脑分布(4c组)。
#脑C最大和AUC分别表示为ng/g和h*ng/g。
实施例9
评估了化合物103在小鼠中的血浆和肝脏浓度。
血浆和肝脏研究
在5至8周龄的雄性(18.7至20.8g)和雌性(17.6至18.9g)C57/BL6小鼠中，以25和50mg/kg/BID口服剂量给药在5％v/v NMP、7.5％v/v Solutol HS-15、50％v/v PEG-400、37.5％v/v TPGS(10％w/v)中制备的化合物103重复14天后，使用AB SCIEX LC-MS/MS三重四极杆仪器和Waters UPLC系统对血浆和肝脏测试项目浓度进行定量。
结果与讨论
雄性和雌性在25mg/kg/BID时的肝脏与血浆浓度比分别为36.03和85.59，在50mg/kg/BID时分别为19.57和31.90(表11)。
表11.血浆和肝脏浓度化合物103(第4c组)。
实施例10
通过口服给药来评估化合物103的安全性概况。
小鼠中两周非GLP毒理学
通过在小鼠中以25mg/kg和50mg/kg口服给药，每天两次，持续2周来评估化合物103的安全性概况。所用制剂为5％v/v NMP、7.5％v/vSolutol HS-15、50％v/v PEG-400以及37.5％v/v TPGS(10％w/v)。总共使用6个动物组，其中3组为雄性小鼠(18.7至20.8g)，3组为雌性小鼠(17.6至18.9g)，并且小鼠年龄为5-8周。每组包含6只小鼠。在整个研究过程中对动物进行了分析，并在研究结束时对血液和组织进行了分析。
结果与讨论
未检测到异常临床症状，所有动物均存活至研究终止。小鼠的体重和体重增加没有变化(表12-13)，食物消耗也没有改变(表14)。
表12a雄性小鼠的体重。
关键词:N＝动物数目
表12b雌性小鼠的体重。
关键词:N＝动物数目
表13a雄性小鼠的体重增加(％)。
关键词:N＝动物数目，*↓＝在p＜0.05下，组的平均值比对照组显著减少。
表13b雌性小鼠的体重增加(％)。
关键词:N＝动物数目
表14a雄性小鼠的食物消耗量(g/动物)。
关键词:N＝笼子数目
表14b雌性小鼠的食物消耗量(g/动物)。
关键词:N＝笼子数目
血液学评估示出，25mg/kg和50mg/kg处理的雄性和雌性小鼠的白细胞(WBC)在统计学上显著减少(最高达3.4倍)。未检测到其他毒理学上的显著变化(表15)。此外，临床化学评估显示，雄性和雌性小鼠的任何参数都没有显著的毒理学变化(表16)。化合物103没有改变器官重量(表17)，也没有发现明显的大体病理。组织病理学分析没有检测到与对照组的任何差异(图7)。
表15a雄性小鼠的血液学参数。
关键词:N＝动物数目，*↓＝在p＜0.05下，组的平均值比对照组显著减少，*↑＝在p＜0.05下，组的平均值比对照组显著增加。
关键词:N＝动物数目
关键词:N＝动物数目
表15b雌性小鼠的血液学参数。
关键词:N＝动物数目，*↓＝在p＜0.05下，组的平均值比对照组显著减少，*↑＝在p＜0.05下，组的平均值比对照组显著增加。
关键词:N＝动物数目
关键词:N＝动物数目
表16a雄性小鼠的临床化学评估。
关键词:N＝动物数目，*↓＝在p＜0.05下，组的平均值比对照组显著减少。
关键词:N＝动物数目，↓＝在p＜0.05下，组的平均值比对照组显著减少，*↑＝在p＜0.05下，组的平均值比对照组显著增加。
表16b雌性小鼠的临床化学评估。
关键词:N＝动物数目，*↓＝在p＜0.05下，组的平均值比对照组显著减少。
关键词:N＝动物数目。
表17a相对于雄性小鼠体重的器官重量(％)。
关键词:N＝动物数目。
表17b相对于雌性小鼠体重的器官重量(％)。
关键词:N＝动物数目，*↑＝在p＜0.05下，组的平均值比对照组显著增加。
因此，可以得出结论，当化合物103通过口服途径向C57BL/6小鼠连续14天每天两次给药时，耐受剂量≥50mg/kg/BID。
实施例11
在基于KCa3.1基因敲除或选择性KCa3.1阻断的实验验证的许多潜在临床适应症中，作为概念验证研究，我们在动物模型中评估了化合物103的一种临床适应症，即卒中。在小鼠和大鼠缺血/再灌注卒中模型中，KCa3.1的基因敲除或药物阻断减少了梗死面积、小胶质细胞介导的神经炎症和星形胶质细胞增生，并提高了神经评分(Y.J.Chen et al.,J.Cereb.Blood Flow Metab.2011,31,2363-2374；M.Yi et al.,J.Neuroinflammation2017,14,203；M.S.V.Elkind et al.,Neurology2020,95,e1091-e1104；and Z.Yu et al.,Front.Cell.Neurosci.2017,11,319)。由于化合物103具有良好的脑渗透性，因此对化合物103在缺血性卒中的啮齿动物模型中进行了概念验证研究，以确定化合物103是否通过抑制急性缺血再灌注卒中后神经炎症介导的继发性脑损伤而有效治疗卒中。
MCAO缺血再灌注模型
作为阳性对照，使用了依达拉奉，这是临床批准的一流药物，用于帮助患者的卒中后恢复。
简言之，体重为240-270g的SD雄性大鼠用于再灌注7天的MCAO研究。右侧大脑中动脉(MCA)闭塞引起局灶性脑缺血。在颈部的正中切口以暴露右侧颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉。颈总动脉上的滑结，颈外动脉近端上的死结以及颈总动脉分叉附近的颈外动脉上的滑结用丝线绑着。在颈外动脉的两个结之间切开小开口，将线栓插入颈动脉，并向内进入大脑中动脉。将栓保持在适当位置60min，并且然后撤回并从血管中取出以恢复血液供应。再灌注12h后，小鼠通过每12h腹膜内注射接收一次2、5、10mg/kg的化合物103或负载体，持续7天。以5mg/kg的依达拉奉作为参考对照，每天腹腔内给药持续7天。通过从额叶开始的全脑切片(2mm厚)的2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色来评估梗死面积，并用ImageJ分析扫描图像。
神经行为评估
根据表18中描述的评分方法单独对动物进行评估。
表18.神经行为评分方法。
结果与讨论
通过腹腔内注射每天给药两次的化合物103有效地减少了梗死体积，在10mg/kg时减少了近50％，并且比阳性对照依达拉奉(5mg/kg)更有效(图8A所示)。使用18分系统的神经行为评估表明，化合物103比依达拉奉更有效地改善神经行为评分(图8B)。
实施例12
对小胶质细胞和白细胞标志物的免疫组织化学分析
将动物用异氟醚(瑞沃德生命科技(RWD Life Science))麻醉，用4％PFA(国药化学试剂(Sinopharm Chemical Reagent))灌注并固定。将脑组织进一步浸泡在4％PFA中4h在4℃下过夜，然后用蔗糖梯度溶液(20-30％，国药化学试剂)处理，然后用OCT(Leica)包埋并在-80℃下冷冻。对于免疫荧光染色，将来自初级体感皮层(S1)、初级运动皮层(M1)、海马CA1区(CA1)和尾壳核(纹状体，CPu)的脑切片加热30min，以及然后用0.01MPBS(pH＝7.2-7.4，5min×3)洗涤。洗涤后，将切片在RT下用在10％绵羊血清(Solarbio)中的0.3％TritonX-100(Solarbio)封闭1h。去除封闭溶液后，将脑切片与一抗Iba1(Proteintech,Cat.10904-1-AP)和CD11b(赛默飞，Cat.MA5-17857)在4℃下孵育过夜。用0.01M PBS洗涤3次(5min/次)后，将切片与背光加二抗(Abcam，Cat.ab150113；Cat.ab150080)在RT下孵育2h。洗涤3次后，将细胞核用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI,Beyotime Biotech,Cat.C1006)染色。通过共聚焦激光扫描显微镜(CLSM，Leica STELLARIS 5，德国)获取全脑切片的图像。我们使用两种标志物来可视化小胶质细胞、Iba1(在小胶质细胞中表达并且在小神经细胞激活过程中上调的17-kDa EF手蛋白)和CD11b(整合素受体CD11b/CD18的α链(也称为αMβ2、Mac-1和CR3)，在包括小胶质细胞在内的先天免疫细胞表面高度表达)。通过Image J V1.8.0分析Iba1+CD11b+双阳性小胶质细胞的数目。小胶质细胞/巨噬细胞激活以每切片Iba1和CD11b共定位细胞的数目表示。
结果与讨论
与MCAO或负载体组相比，用化合物103的处理在第7天显著减少了CA1、CPu、M1和S1脑区中Iba1+CD11b+双阳性小胶质细胞的数目(图9)。当在大鼠中再灌注后12h开始给药时，化合物103减少了CD11b小胶质细胞上的小胶质细胞激活。
总而言之，与我们系列中的其他类似物相比，化合物103较少与血浆蛋白结合，具有较低的cLogP值，更易溶解，在单剂量给药后在大脑中的积累浓度高于血浆，并且在25和50mg/kg/BID的14天重复日剂量后不会导致异常临床症状和死亡率。进一步地，在探索性概念验证研究中，化合物103在缺血/再灌注卒中大鼠模型中有效减少梗死体积、小胶质细胞激活以及提高神经和行为评分。

Claims (27)

1.式I的化合物：
其中：
R1选自H、卤素、CF3、CN或NO2；
R2和R3独立地选自H、卤素、CH3、CF3、CN或NO2；
R4选自H、卤素、CN或CF3；
R5和R6独立地选自R9aC(O)O-、R9bOC(O)-、R9cC(O)NRd-、R9eR9fNC(O)-或具有1至10个碳原子的烷基酮，所述碳原子是支链的或非支链的并且是未取代的或者被选自卤素和NO2的一个或多个取代基取代；
R7和R8独立地选自H、NR10aR10b、OR10c或C1至C3烷基，其是未取代的或者被选自卤素的一个或多个取代基取代，或
R5和R7对或R6和R8对之一与它们附连的碳原子一起形成碳环或杂环的4至14元环系，并且其是未取代的或者被选自卤素、＝O、-OC(O)R10d、-(O)COR10e以及C1至C6烷基的一个或多个取代基取代；
R9a至R9f和R10a至R10e独立地选自H和C1至C6烷基，其是未取代的或者被选自卤素的一个或多个取代基取代，
或其药学上可接受的盐和/或溶剂化物。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1选自H、F、Cl、Br、CF3或NO2。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中R2和R3独立地选自H、F、Cl、Br、CH3、CF3或NO2。
4.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4选自H、F、Cl、Br或CF3。
5.根据前述权利要求中的任一项所述的化合物，其中R5和R6独立地选自R9aC(O)O-、R9bOC(O)-或具有1至10个碳原子的烷基酮，所述碳原子是支链的或非支链的并且是未取代的或者被选自Cl、F和NO2的一个或多个取代基取代。
6.根据前述权利要求中的任一项所述的化合物，其中R7和R8独立地选自H或C1至C3烷基，其是未取代的或者被选自F和Cl的一个或多个取代基取代，或
R5和R7对或R6和R8对之一与它们附连的碳原子一起形成碳环或杂环的4至10元环系，并且其是未取代的或被选自F、Cl、＝O以及C1至C6烷基的一个或多个取代基取代。
7.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R9a至R9f和R10a至R10e独立地选自H和C1至C3烷基，其是未取代的或者被选自F和Cl的一个或多个取代基取代。
8.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中
R1选自H、F、Cl或CF3；
R2和R3独立地选自H、F、Cl或CF3；
R4选自H、F、Cl或CF3；
R5和R6独立地选自R9bOC(O)-、具有1至3个碳原子的烷基酮，所述碳原子是未取代的或者被选自Cl和F的一个或多个取代基取代；
R7和R8独立地选自H或甲基，其是未取代的或者被选自F和Cl的一个或多个取代基取代。
9.根据前述权利要求中任一项所述的化合物,其中
R1选自H、F或Cl；和/或
R2选自CF3或更特别地H或F；和/或
R3选自H或CF3；和/或
R4是H；和/或
R5和R6独立地选自CH3OC(O)-或丙-2-酮基(例如R5和R6均为CH3OC(O)-)；和/或
R7和R8独立地选自H和CH3。
10.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R7和R8中至少一个是H。
11.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R7和R8都是H。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R7是H且R8是CH3。
13.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R7和R8都是CH3。
14.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R7是CH3且R8是H。
15.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，选自列表，
或其盐和溶剂化物。
16.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，选自列表，
或其盐和溶剂化物。
17.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，选自列表，
或其盐和溶剂化物。
18.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，选自列表，
或其盐和溶剂化物。
19.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中化合物是
或其盐和溶剂化物。
20.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至19中任一项所述的式I的化合物或其盐和溶剂化物以及一种或多种药学上可接受的载体、佐剂或负载体。
21.根据权利要求1至19中任一项所述的式I的化合物或其盐和溶剂化物在药物中的用途。
22.根据权利要求1至19中任一项所述的式I的化合物或其盐和溶剂化物用于治疗或预防与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症的用途。
23.根据权利要求1至19中任一项所述的式I的化合物或其盐和溶剂化物在制备用于治疗或预防与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症的药物中的用途。
24.一种治疗或预防与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症的方法，其中所述方法包括向有此需要的受试者给药有效量的根据权利要求1至19中任一项所述的式的化合物或其盐和溶剂化物。
25.权利要求19所述用途的化合物、权利要求20所述用途或权利要求21所述方法，其中与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症选自以下一种或多种：炎性肠病(IBD)、纤维化疾病(肺、肝、肾、心脏、结膜、角膜纤维化)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、胶质瘤(胶质母细胞瘤)、肺癌、胰腺癌、肝细胞癌、卵巢癌、结直肠癌、囊性纤维化、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、骨吸收、炎性关节炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、支架内新动脉粥样硬化、卒中、创伤性脑损伤、阿尔茨海默病、遗传性干瘪红细胞增多症、镰状细胞贫血、白血病、哮喘、变应性鼻炎、小胶质细胞激活、一氧化氮依赖性神经退行性变、神经肿瘤学疾病和孤儿红细胞疾患。
26.根据权利要求25所述用途的化合物、所述用途或所述方法，其中与KCa3.1升高或活性改变相关的疾病病症选自以下一种或多种：炎性肠病(IBD)、纤维化疾病(肺、肝、肾、心脏、结膜、角膜纤维化)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、胶质瘤(胶质母细胞瘤)、肺癌、胰腺癌、肝细胞癌、卵巢癌、结直肠癌、囊性纤维化、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、骨吸收、炎性关节炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、支架内新动脉粥样硬化、卒中、创伤性脑损伤、阿尔茨海默病、遗传性干瘪红细胞增多症、镰状细胞贫血、白血病、哮喘、变应性鼻炎、小胶质细胞激活和一氧化氮依赖性神经退行性变。
27.根据权利要求26所述用途的化合物、所述用途或所述方法，其中，所述疾病病症是卒中。
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