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CN116570638A - 一种联合组合物及其在制备抑菌药物中的应用 - Google Patents

一种联合组合物及其在制备抑菌药物中的应用 Download PDF

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CN116570638A CN202310425615.8A CN202310425615A CN116570638A CN 116570638 A CN116570638 A CN 116570638A CN 202310425615 A CN202310425615 A CN 202310425615A CN 116570638 A CN116570638 A CN 116570638A
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吴志平
胡正宗
颜海英
刘黎明
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Abstract

本发明涉及生物防治技术领域，具体公开了一种联合组合物及其在制备抑菌药物中的应用。所述的联合组合物包括含千里光的清热散结药物与抗生素，所述的抗生素包括庆大霉素、青霉素、氯霉素中的至少一种，通过含千里光的清热散结药物与抗生素组成的联合组合物，能够快速且显著的降低抗生素的用量；通过该联合组合物的协同作用，能够产生良好的抑菌效果，从而显著提高临床疗效，降低耐药性，可为寻找抗菌增敏化合物提供参考。

Description

一种联合组合物及其在制备抑菌药物中的应用
技术领域
本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种联合组合物及其在制备抑菌药物中的应用。
背景技术
细菌性感染是临床常见疾病，尤其是细菌性呼吸道、肺部与肠道感染更为常见，其临床常用药为头孢类与沙星类等化学类抗生素，但是抗生素的过度使用会导致细菌的耐药性。各类中成药尤其具有清热解毒、消炎止痛等功效的中药材及制剂，陆续被报道其抗菌活性。中药具有多成分、多靶点的作用特点，一般可发挥广谱抗菌作用，并具有增强机体免疫力、抗炎、镇痛等整体调节的优势，通过抗菌中药的研究与开发，有望减少抗生素的使用，提高临床治疗效果，缓解临床耐药性问题。
清热散结胶囊是一类中成药胶囊制剂，主要成分是千里光，具有清热解毒、散结止痛的效果，在临床上常用于急性结膜炎、急性咽喉炎、急性扁桃腺炎、急性肠炎等疾病的辅助治疗。
庆大霉素(gentamicin)是氨基糖苷类抗生素，透明琥珀色液体，其抗菌作用机制是作用于细菌体内的核糖体，抑制细菌蛋白质合成，并破坏细菌细胞膜的完整性。
青霉素(Penicillin)是抗菌素的一种，是指分子中含有青霉烷、能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素，是由青霉菌中提炼出的抗生素。青霉素属于β－内酰胺类抗生素(β－lactams)，β－内酰胺类抗生素包括青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类、单环类、头霉素类等。
氯霉素(chloramphenicol)可作用于细菌核糖核蛋白体的50S亚基，而阻挠蛋白质的合成，属抑菌性广谱抗生素，氯霉素对革兰阳性、阴性细菌均有抑制作用，且对后者的作用较强。
在过去抗菌新药开发中，大多数研究通过修饰现有抗菌药物的结构，研制直接抗菌的抗生素，所开发的新药往往由于抗菌活性弱或毒性大而止步于实验室研究。因此寻找新的活性强且毒性低的抗菌药物具有重要意义。目前，联合治疗是最具前途的防治办法，药物联用能够降低抗生素的毒副作用和用量，从而降低细菌耐药性的产生。
当前对于清热散结胶囊的抑菌能力以及与抗生素联合应用的抗菌能力的研究鲜有报道。
发明内容
除非上下文另有明确指示，否则如本文所用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括单数和复数指示物。通过端点表述的数值范围包括在对应范围内的所有数值和分数，以及所表述的端点。
本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种联合组合物及其在制备抑菌药物中的应用。通过含千里光的清热散结药物与抗生素组成的联合组合物，发挥协同作用，产生良好的抑菌效果。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明提供了一种抑菌的联合组合物，所述的联合组合物包括含千里光的清热散结药物与抗生素；所述的抗生素包括庆大霉素、青霉素、氯霉素中的至少一种。
优选地，所述的清热散结药物与庆大霉素制得的联合组合物，质量比为625-5000：0.004-0.0078。
优选地，所述的清热散结药物与青霉素制得的联合组合物，质量比为1250-5000：0.125-8。
优选地，所述的清热散结药物与氯霉素制得的联合组合物，质量比为625-2500：1-4。
优选地，所述的清热散结药物包括清热散结胶囊、清热散结片、清热散结颗粒中的至少一种。
进一步优选地，所述的清热散结药物为清热散结胶囊。
优选地，所述的联合组合物还包括药学上可接受的载体。
优选地，所述的联合组合物通过将含千里光的清热散结药物和抗生素混合后制得。
本发明还提供了上述的联合组合物在制备抑菌药物中的应用，所述的联合组合物包括含千里光的清热散结药物与抗生素；所述的抗生素包括庆大霉素、青霉素、氯霉素中的至少一种。
优选地，所述的应用中抑菌药物包括抑制细菌的药物。
优选地，所述的细菌包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、变异链球菌、粪肠球菌中的至少一种。
进一步优选地，所述的细菌包括金黄色葡萄球菌、变异链球菌、大肠杆菌中的至少一种。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明中的联合组合物通过检测清热散结胶囊与抗生素的联合抗菌作用，发现清热解毒胶囊具有广谱的体外抑菌性能，与临床抗生素联合应用时，可以产生协同作用，产生良好的抑菌效果，且产生抑菌的效果更迅速，从而显著提高临床疗效、降低抗生素的用量、降低耐药性，可为寻找抗菌增敏化合物提供参考。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，以使本发明技术方案更易于理解、掌握，但本发明并不局限于此，描述的实施例仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都应当属于本申请保护的范围。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
TNF-αELISA试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司，货号ml002859。
实施例1清热散结胶囊的体外抗菌活性
为了获得清热散结胶囊的抗菌谱，本发明选取了15种菌株，测定了其体外抗菌的最小抑菌浓度(MIC)。
1.实验菌种：金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、金黄色葡萄球菌CMCC 25923、金黄色葡萄球菌ATCC 6538、枯草芽孢杆菌CMCC 63501、变异链球菌BNCC 336931、粪肠球菌CMCC29212、金黄色葡萄球菌ATCC 43300(MRSA)、金黄色葡萄球菌ATCC 33591(MRSA)、大肠杆菌CMCC 44568、大肠杆菌CMCC 25922、大肠杆菌CMCC 44103、铜绿假单胞菌CMCC 27853、铜绿假单胞菌CMCC 10104、铜绿假单胞菌ATCC BAA-28(MDRB)、铜绿假单胞菌ATCC BAA-2112(MDRB)。
2.实验方法：收集新鲜的实验菌种于培养基中，均稀释至3×108cfu/ml，用1μl接种环将细菌接种于含药琼脂平皿中，药物梯度分别为10、15、20、25、30、35、40、45mg/ml，接种后置于37℃微需氧环境中培养，培养72小时后观察结果。
3.实验结果：
结果如表1所示，清热散结胶囊对绝大部分所测菌株表现出抑菌活性，其MIC值在20-40mg/mL，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌没有明显的选择性。其中ATCC 43300和ATCC33591为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，ATCC BAA-196和ATCC BAA-2111为多重耐药绿假单胞菌。清热散结胶囊对ATCC 43300在40mg/mL浓度下有一定抑制率，但抑制率低于80％。
表1清热散结胶囊的体外抗菌活性(MIC,mg/mL)
实施例2清热散结胶囊与抗生素联合应用的抗菌作用
本发明所述的FICI是指部分抑菌浓度指数(fractional inhibitoryconcentration index)。计算方法是FICI＝MIC药A联用/MICA单+MIC药B联用/MICB单。FICI≤0.5为有协同作用；当FICI＞0.5且≤1，表示两药联用为相加作用；1<FICI≤4为无关作用；FICI>4为拮抗作用。
本发明探究了清热散结胶囊与临床常用抗生素的联合应用抗菌效果。
首先分别测定清热散结胶囊、诺氟沙星、青霉素、氯霉素、庆大霉素单独使用时，对细菌的MIC；再测定清热散结胶囊分别与诺氟沙星、青霉素、氯霉素、庆大霉素联合得到联合组合物，再分别检测联合组合物作用于细菌后的MIC，得到的结果如表2-表5所示：
表2是清热散结胶囊与抗生素联用对金黄色葡萄球菌ATCC 6538的抗菌作用。从表2可以看出，清热散结胶囊与诺氟沙星、氯霉素、庆大霉素联合应用时，对金黄色葡萄球菌ATCC 6538的抗菌作用表现为相加作用。清热散结胶囊与青霉素联合应用的质量比为1250:0.125时则表现为协同作用，可以将青霉素的MIC降低到0.125μg/mL，将清热散结胶囊的MIC降低到1.25mg/mL。
表2.清热散结胶囊与抗生素联用对金黄色葡萄球菌ATCC 6538的抗菌作用
表3是清热散结胶囊与抗生素联用对金黄色葡萄球菌ATCC 33591(MRSA)的抗菌作用。从表3可以看出，清热散结胶囊与氯霉素、青霉素联合应用时，对金黄色葡萄球菌ATCC33591(MRSA)的抗菌作用表现为相加，与氯霉素和庆大霉素联合应用时表现为协同作用。尤其是与庆大霉素联用时且质量比为625：0.0078，可以将清热散结胶囊的MIC值降低32倍，将庆大霉素的MIC值降低16倍。
表3.清热散结胶囊与抗生素联用对金黄色葡萄球菌ATCC 33591(MRSA)的抗菌作用
表4是清热散结胶囊与抗生素联用对变异链球菌BNCC336931的抗菌作用。从表4可以看出，清热散结胶囊与诺氟沙星、庆大霉素、青霉素联合应用时，对变异链球菌BNCC336931的抗菌作用表现为相加，与氯霉素联合应用且质量比为2500：4时表现为协同作用。
表4.清热散结胶囊与抗生素联用对变异链球菌BNCC336931的抗菌作用
表5是清热散结胶囊与抗生素联用对大肠杆菌CMCC 25922的抗菌作用。从表10可以看出，清热散结胶囊与诺氟沙星或氯霉素联合应用时，对大肠杆菌CMCC 25922的抗菌作用表现为无关，与庆大霉素(质量比为5000：0.004)或青霉素(质量比为5000：8)联合应用时表现为协同作用。
表5.清热散结胶囊与抗生素联用对大肠杆菌CMCC 25922的抗菌作用
清热散结胶囊与临床常用抗菌药物联合用药时，表现为相加或协同的作用，说明清热散结胶囊可以作为辅助药物，提高临床抗生素对各种感染性疾病的治疗效果。
实施例3清热散结胶囊联合庆大霉素对急性肺炎大鼠的治疗
1.实验材料：
SD大鼠35只，SPF级，体重200±10g，购于成都达硕实验动物有限公司；阳性对照：氧氟沙星片；实验菌种：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ATCC
33591(MRSA)。
2.实验方法：
(1)分组与给药：
设置模型组、空白对照组、阳性对照组、实验组(清热散结胶囊与庆大霉素联合组合物，其质量比为625：0.0078)、对照组1(单独使用清热散结胶囊)、对照组2(单独使用庆大霉素)、对照组3(清热散结胶囊与庆大霉素联合组合物，其质量比为600：0.01)。
其中，给药剂量分别为：阳性对照组20mg/kg，实验组20mg/kg，对照组1为70mg/kg，对照组2为70mg/kg，对照组3为50mg/kg。
(2)实验方法：
除空白对照组外，其余的大鼠用水合氯醛麻醉，剪开部分皮肤分离出气管，从气管处注入培养好的菌液(浓度为0.8mL/kg)，缝合皮肤后，将大鼠保持直立状态轻晃数次，使菌液在两侧肺部分布均匀。
空白组和模型组进行灌胃0.5％羧甲基纤维素钠，每个时间点每组5只。造模六天后，各组开始进行灌胃给药治疗，2次/天，分别在给药第四天和第六天各组随机抽取五只大鼠进行后续实验处理。检测肺组织的载菌量和检测大鼠血清中TNF-α含量(利用TNF-αELISA试剂盒)。
3、实验结果：
给药第四天和第六天后，检测小鼠肺部细菌载量，结果如表6所示；给药第四天和第六天各组大鼠血清中TNF-α的含量变化如表7所示。
表6给药后小鼠肺部细菌载量(×104CFU/ml)
注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001
表7各组大鼠血清中TNF-α的含量(pg/ml)
注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001
根据表6可知，在给药四天，模型组较空白对照组的肺部细菌载量极显著的升高(P<0.001)，说明造模成功。在给药第四天，实验组相比模型组肺部细菌载量显著的升高(P<0.05)，但是对照组相比模型组的肺部细菌载量没有显著性差异(P>0.05)；给药第六天，实验组和对照组的肺部细菌载量相比模型组均降低，但是实验组效果更好，具有极显著差异(P<0.001)。说明清热散结胶囊能够极显著提高庆大霉素的抑菌作用。
根据表7可知，在给药第四天，模型组较空白对照组的血清中TNF-α的含量极显著增加(P<0.001)，说明造模成功。给药第4天，与模型组相比，实验组与阳性对照组显示出相似的效果，均能极显著的降低大鼠血清中TNF-α的含量(P<0.001)，对照组相比模型组能够降低大鼠血清中TNF-α的含量，但是没有显著性差异(P>0.05)；给药第6天，实验组和对照组相比模型组均能降低大鼠血清中TNF-α的含量，但是实验组效果更好，具有极显著差异(P<0.001)。说明清热散结胶囊能够极显著提高庆大霉素的对TNF-α的抑制作用。
综上，清热散结胶囊与庆大霉素组成的联合组合物，能够迅速且极显著的缓解MRSA引起的细菌感染肺炎。
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (11)

1.一种抑菌的联合组合物，其特征在于：所述的联合组合物包括含千里光的清热散结药物与抗生素；所述的抗生素包括庆大霉素、青霉素、氯霉素中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的联合组合物，其特征在于：所述的清热散结药物与庆大霉素制得的联合组合物，质量比为625-5000：0.004-0.0078。
3.根据权利要求1所述的联合组合物，其特征在于：所述的清热散结药物与青霉素制得的联合组合物，质量比为1250-5000：0.125-8。
4.根据权利要求1所述的联合组合物，其特征在于：所述的清热散结药物与氯霉素制得的联合组合物，质量比为625-2500：1-4。
5.根据权利要求1所述的联合组合物，其特征在于：所述的清热散结药物包括清热散结胶囊、清热散结片、清热散结颗粒中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的联合组合物，其特征在于：所述的清热散结药物为清热散结胶囊。
7.根据权利要求1所述的联合组合物，其特征在于：还包括药学上可接受的载体。
8.权利要求1-7任一项所述的联合组合物在制备抑菌药物中的应用，其特征在于：所述的联合组合物包括含千里光的清热散结药物与抗生素；所述的抗生素包括庆大霉素、青霉素、氯霉素中的至少一种。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述的抑菌药物包括抑制细菌的药物。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的细菌包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、变异链球菌、粪肠球菌中的至少一种。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于：所述的细菌包括金黄色葡萄球菌、变异链球菌、大肠杆菌中的至少一种。
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Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李延鸿等: "中药单方或复方对大肠埃希菌R质粒消除作用的研究", 实用药物与临床, vol. 16, no. 12, 31 December 2013 (2013-12-31), pages 1147 - 1150 *

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