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CN116535379B - 化合物及其医药用途 - Google Patents

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CN116535379B
CN116535379B CN202310783142.9A CN202310783142A CN116535379B CN 116535379 B CN116535379 B CN 116535379B CN 202310783142 A CN202310783142 A CN 202310783142A CN 116535379 B CN116535379 B CN 116535379B
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Abstract

本申请提供了一种化合物及其医药用途，所述化合物如式I所示。还提供了该化合物的药学上可接受的盐。还提供了涉及本申请化合物的药物组合物以及本申请化合物和药物组合物的用途。式I

Description

化合物及其医药用途
技术领域
本申请属于药物领域，具体涉及一种化合物及其在医药领域中的用途。
背景技术
Hippo通路已成为治疗过度增殖性病症和疾病，特别是癌症的有效靶标(S.A.Smith et al. ,J.Med.Chem. 2019, 62, 1291-1305；K.C.Lin et al., Annu. Rev.Cancer Biol. 2018, 2:59-79；C.-L.Kim et al., Cells (2019), 8, 468；K.F.Harveyet al., Nature Reviews Cancer, Vol.13, 246–257(2013))。Hippo信号通路调控着许多生物进程，包括细胞增殖、存活、分化、器官大小和组织稳态。该通路由丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的复杂级联反应组成，包括丝氨酸苏氨酸激酶 3（STK3）和 STK4。这些激酶与衔接蛋白salvador 同系物 1（SAV1）形成的复合物可以磷酸化并激活效应蛋白，LATS1/2。LATS1/2活化后会与 MOB 激酶激活因子 1A/B（MOB1A/B）结合，并抑制转录辅助因子 yes 相关蛋白（YAP1）以及带有 PDZ 结合基序的转录共激活因子（TAZ 或 WWTR1）。Hippo 通路“关闭”时，磷酸化的 YAP/TAZ 会滞留在细胞质中，并且可能发生蛋白降解 。Hippo 通路“开启”时，未磷酸化的 YAP/TAZ 会进入细胞核，并与转录因子 TEA DNA 结合蛋白（TEAD1-4）结合。Hippo 通路失调会导致 YAP/TAZ 的活性增加，从而与肿瘤、过度增殖、细胞侵袭、转移和化学抗性有关。
TEAD转录因子家族是Hippo通路的最终效应因子，其通过整合协调多种信号转导通路（包括Hippo，Wnt，TGFβ和EGFR）调控靶基因的表达（Kras，Braf，Ctgf, Cyr6, Axl，Myc等），进而介导肿瘤生长、转移、组织稳态。众多临床研究发现，TEAD在多种实体瘤高水平表达，包括前列腺癌、胃癌、乳腺癌、生殖细胞肿瘤、头颈鳞状细胞癌、肾细胞癌等。由于与人类恶性肿瘤的临床病理参数高度相关，TEAD可作为实体瘤预后生物标志物。Hippo通路作为近十年发现的重要抗肿瘤靶点，相对于针对Hippo信号通路上游的调节子，靶向TEAD-YAP的抑制剂可能会更有效和直接地纠正失调的Hippo信号通路，从而达到肿瘤治疗目的。
因此，可以通过靶向YAP、TAZ或TEAD，从而抑制YAP-TEAD、TAZ-TEAD或其他功能蛋白与TEAD的蛋白质-蛋白质相互作用来预防和/或治疗与Hippo通路功能障碍相关的癌症和其他过度增殖性病症和疾病。
发明内容
本申请的第一方面涉及一种化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物如式I所示：
式I，
R1、R2、R3各自独立选自氢、卤素、含取代基或不含取代基的C1-C6烷基、含取代基或不含取代基的C1-C6烷氧基、氰基、硝基、含取代基或不含取代基的C2-C10杂环基、含取代基或不含取代基的C1-C10杂芳基、和组成的组，其中，X选自单键、-O-、C6-C12亚芳基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、含取代基或不含取代基的C3-C6亚杂芳基、含取代基或不含取代基的C2-C10亚杂环基组成的组；R18和R19各自独立选自氢、羟基、含取代基或不含取代基的C1-C6烷基、含取代基或不含取代基的C2-C6烯基组成的组；
R4至R17各自独立选自氢或卤素；
其中，取代基选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、氰基、硝基组成的组。
在一些实施方式中，所述化合物如式I-1所示：
式I-1，
其中，R1、R2和R3的限定同所述式I。
在一些实施方式中，R1选自氢、卤素、含取代基或不含取代基的C1-C6烷基、含取代基或不含取代基的C1-C6烷氧基、氰基、硝基、含取代基或不含取代基的C1-C10杂芳基组成的组；
R2和R3其中之一为氢，另一个选自卤素、含取代基或不含取代基的C1-C6烷基、含取代基或不含取代基的C1-C6烷氧基、氰基、硝基、含取代基或不含取代基的C2-C10的杂环基、、组成的组；其中，X选自单键、-O-、C6-C12亚芳基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、含取代基或不含取代基的C3-C6亚杂芳基、含取代基或不含取代基的C2-C10亚杂环基组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、羟基、含取代基或不含取代基的C1-C6烷基、含取代基或不含取代基的C2-C6烯基组成的组，
其中，取代基选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、氰基、硝基组成的组。
在一些实施方式中，R2为氢，R3选自卤素、含取代基或不含取代基的C1-C6烷基、含取代基或不含取代基的C1-C6烷氧基、氰基、硝基、含取代基或不含取代基的C2-C10的杂环基、、组成的组；其中，X选自单键、-O-、C6-C12亚芳基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、含取代基或不含取代基的C3-C6亚杂芳基、含取代基或不含取代基的C2-C10亚杂环基组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、羟基、含取代基或不含取代基的C1-C6烷基、含取代基或不含取代基的C2-C6烯基组成的组。
在一些实施方式中，取代基选自氟、氯、溴、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、氟代甲基、氟代乙基、氟代正丙基、氟代异丙基、氟代正丁基、氟代异丁基、氟代叔丁基、氟代正戊基、氟代异戊基、氟代正己基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、异戊氧基、正己氧基、氟代甲氧基、氟代乙氧基、氟代正丙氧基、氟代异丙氧基、氟代正丁氧基、氟代异丁氧基、氟代叔丁氧基、氟代正戊氧基、氟代异戊氧基、氟代正己氧基、氰基、硝基组成的组。
在一些实施方式中，R1选自氢、卤素、含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C1-C6杂芳基组成的组，其中，取代基选自氟、氰基、硝基、C1-C4烷基、C1-C6烷氧基组成的组。
在一些实施方式中，R1选自氢、溴、氟、含取代基或不含取代基的吡唑、含取代基或不含取代基的四唑、含取代基或不含取代基的组成的组，其中，取代基选自C1-C4烷基。
在一些实施方式中，R1选自氢、卤素、不含取代基的C1-C4烷基、不含取代基的C1-C6杂芳基、含一个或两个取代基的C1-C6杂芳基，其中，取代基选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基组成的组。
在一些实施方式中，R1选自氢、氟、氯、溴、不含取代基的吡唑、含一个或两个取代基的吡唑、不含取代基的四唑、含一个取代基的四唑、不含取代基的组成的组，其中，取代基选自甲基、乙基、正丙基或异丙基组成的组。
在一些实施方式中，R1选自氢、溴、氟或以下基团组成的组：
。
在一些实施方式中，R2和R3其中之一为氢，另一个选自含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C5杂环基、、组成的组；其中，X选自单键、-O-、C6-C10亚芳基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、含取代基或不含取代基的C2-C5亚杂环基组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、羟基、含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C4烯基组成的组，其中，取代基选自氟、氰基、硝基、C1-C4烷基、C1-C6烷氧基组成的组。
在一些实施方式中，R2为氢，R3选自含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C5杂环基、、组成的组；其中，X选自单键、-O-、C6-C10亚芳基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、含取代基或不含取代基的C2-C5亚杂环基组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、羟基、含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C4烯基组成的组，其中，取代基选自氟、氰基、硝基、C1-C4烷基、C1-C6烷氧基组成的组。
在一些实施方式中，R2和R3其中之一为氢，另一个选自不含取代基的C1-C4烷基、不含取代基的C2-C5杂环基、含一个或两个取代基的C2-C5杂环基其中，取代基选自氟、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基组成的组。
在一些实施方式中，R2为氢，R3选自不含取代基的C1-C4烷基、不含取代基的C2-C5杂环基、含一个或两个取代基的C2-C5杂环基，其中，取代基选自氟、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基组成的组。
在一些实施方式中，R2和R3其中之一为氢，另一个选自不含取代基的、含一个取代基的，其中，取代基选自氟、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基组成的组。
在一些实施方式中，R2为氢，R3选自不含取代基的、含一个取代基的，其中，取代基选自氟、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基组成的组。
在一些实施方式中，R2和R3其中之一为氢，另一个选自或组成的组，其中，X选自单键、-O-、C6-C8亚芳基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、含取代基或不含取代基的C2-C5亚杂环基组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C4烯基组成的组，其中，取代基选自氟、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基组成的组。
在一些实施方式中，R2为氢，R3选自或组成的组，其中，X选自单键、-O-、C6-C8亚芳基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、含取代基或不含取代基的C2-C5亚杂环基组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C4烯基组成的组，其中，取代基选自氟、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基组成的组。
在一些实施方式中，R2和R3中其中之一为氢，另一个选自或组成的组，其中，X选自单键、-O-、亚苯基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、不含取代基的氮杂环丁烷、含一个或两个取代基的氮杂环丁烷组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、不含取代基的C1-C4烷基、不含取代基的C2-C4烯基、含一个或两个取代基的C2-C4烯基组成的组，其中，取代基选自氟、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基组成的组。
在一些实施方式中，R2为氢，R3选自或组成的组，其中，X选自单键、-O-、亚苯基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、不含取代基的氮杂环丁烷、含一个或两个取代基的氮杂环丁烷组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、不含取代基的C1-C4烷基、不含取代基的C2-C4烯基、含一个或两个取代基的C2-C4烯基组成的组，其中，取代基选自氟、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基组成的组。
在一些实施方式中，R2和R3其中之一为氢，另一个选自选自以下基团组成的组：
，
其中，X选自-O-或亚苯基，R18和R19各自独立选自羟基、含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C4烯基组成的组，其中，取代基选自C1-C4烷基或氟。
在一些实施方式中，R2为氢，R3选自以下基团组成的组：
，
其中，X选自-O-或亚苯基，R18和R19各自独立选自羟基、含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C4烯基组成的组，其中，取代基选自C1-C4烷基或氟。
在一些实施方式中，R18和R19各自独立选自羟基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、氟代甲基、氟代乙基、氟代正丙基、氟代异丙基、氟代正丁基、氟代异丁基、氟代叔丁基、氟代乙烯基、氟代正丙烯基、氟代异丙烯基、氟代正丁烯基、氟代异丁烯基组成的组。
在一些实施方式中，R2和R3其中之一为氢，另一个选自选自以下基团组成的组：
。
在一些实施方式中，R2为氢，R3选自以下基团组成的组：
。
在一些实施方式中，所述化合物如式I-2所示：
式I-2，
式I-2中，R1选自氢、卤素、含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C1-C6杂芳基组成的组，优选地，R1选自氢、卤素、不含取代基的C1-C4烷基、不含取代基的C1- C6杂芳基、含一个或两个取代基的C1-C6杂芳基，更优选地，R1选自氢、氟、氯、溴、不含取代基的吡唑、含一个或两个取代基的吡唑、不含取代基的四唑、含一个取代基的四唑、不含取代基的，其中，取代基选自氟、氰基、硝基、C1-C4烷基组成的组；
R3选自含取代基或不含取代基的C2-C10的杂环基、、组成的组；其中，X选自单键、-O-、C6-C12亚芳基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、含取代基或不含取代基的C3-C6亚杂芳基、含取代基或不含取代基的C2-C10亚杂环基组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、羟基、含取代基或不含取代基的C1-C6烷基、含取代基或不含取代基的C2-C6烯基组成的组，其中，取代基选自氟、氰基、硝基、C1-C4烷基、C1-C6烷氧基组成的组。
在一些实施方式中，式I-2中，R3选自含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C5杂环基，优选选自不含取代基的、含一个取代基的，其中，取代基选自氟、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基组成的组。
在一些实施方式中，式I-2中，R3选自或组成的组，其中，X选自单键、-O-、C6-C8亚芳基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、含取代基或不含取代基的C2-C5亚杂环基组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C4烯基组成的组，优选地，X选自单键、-O-、亚苯基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、不含取代基的氮杂环丁烷、含一个或两个取代基的氮杂环丁烷组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、不含取代基的C1-C4烷基、不含取代基的C2-C4烯基、含一个或两个取代基的C2-C4烯基组成的组，其中，取代基选自氟、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基组成的组。
在一些实施方式中，式I-2中，R3选自选自以下基团组成的组：
，
其中，X选自-O-或亚苯基，R18和R19各自独立选自羟基、含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C4烯基组成的组，优选地，R18和R19各自独立选自羟基、不含取代基的C1-C4烷基、不含取代基的C2-C4烯基、含一个或两个取代基的C2-C4烯基组成的组，其中，取代基选自C1-C4烷基或氟。
在一些实施方式中，式I-2中，R1选自氢、溴、氟或以下基团组成的组：
；
R3选自以下基团组成的组：
。
在一些实施方式中，所述化合物如式I-3所示：
式I-3，
其中，R2选自、组成的组；其中，X选自单键、-O-、C6-C12亚芳基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、含取代基或不含取代基的C3-C6亚杂芳基、含取代基或不含取代基的C2-C10亚杂环基组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、羟基、含取代基或不含取代基的C1-C6烷基、含取代基或不含取代基的C2-C6烯基组成的组，其中，取代基选自氟、氰基、硝基、C1-C4烷基、C1-C6烷氧基组成的组。
在一些实施方式中，式I-3中，R2选自或组成的组，其中，X选自单键、-O-、C6-C8亚芳基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、含取代基或不含取代基的C2-C5亚杂环基组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C4烯基组成的组，优选地，X选自单键、-O-、亚苯基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、不含取代基的氮杂环丁烷、含一个或两个取代基的氮杂环丁烷组成的组，R18和R19各自独立选自氢、卤素、不含取代基的C1-C4烷基、不含取代基的C2-C4烯基、含一个或两个取代基的C2-C4烯基组成的组，其中，取代基选自氟、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基组成的组。
在一些实施方式中，式I-3中，R2选自以下基团组成的组：
，
其中，X选自-O-或亚苯基，R18和R19各自独立选自羟基、含取代基或不含取代基的C1-C4烷基、含取代基或不含取代基的C2-C4烯基组成的组，优选地，R18和R19各自独立选自羟基、不含取代基的C1-C4烷基、不含取代基的C2-C4烯基、含一个或两个取代基的C2-C4烯基组成的组，其中，取代基选自C1-C4烷基或氟。
在一些实施方式中，式I-3中，R2选自以下基团组成的组：
。
本申请第二方面提供了一种药物组合物，包括如上所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂或载体。
本申请第三方面提供了如上所述的化合物或其药学上可接受的盐或如上所述的药物组合物用作TEAD抑制剂的用途。
本申请第四方面提供了如上所述的化合物或其药学上可接受的盐或如上所述的药物组合物，在制备预防或治疗与TEAD的调节相关的疾病或病症的药物中的应用。
具体地，与TEAD的调节相关的疾病或病症选自如下：脑癌、食管癌、肾癌、间皮瘤、肝癌、头颈癌、肺癌、胃癌、乳腺癌或前列腺癌。
本申请的化合物可以通过靶向抑制YAP、TAZ或TEAD，从而抑制YAP-TEAD、TAZ-TEAD或其他功能蛋白与TEAD的蛋白质-蛋白质相互作用来预防和/或治疗与Hippo通路功能障碍相关的癌症和其他过度增殖性病症和疾病，具有较好的临床应用前景。
附图说明
图1示出了本申请的化合物4对YAP/TAZ下游靶基因的抑制作用。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请进行详细说明：本实施例在以本申请为技术方案为前提下进行实施，给出了详细实施方案和过程，但本申请提供的实施方案是示例性的，旨在用于解释本申请，而不能理解为对本申请的限制。下述的实施例未注明的条件和方法等均按常规进行。
本申请的发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现了一类具有较好的抑制TEAD活性的化合物。此外，所述化合物还具有更好药效学/药代动力学性能。在此基础上，完成了本申请。
本申请所述化合物如式I所示：
式I，
其中，
R1、R2、R3各自独立选自氢、卤素、含取代基或不含取代基的C1-C6烷基、含取代基或不含取代基的C1-C6烷氧基、氰基、硝基、含取代基或不含取代基的C2-C10芳香或非芳香的杂环基、和组成的组，其中，X选自单键、-O-、C6-C12亚芳基组成的组，X1至X4各自独立选自单键、-NH-、含取代基或不含取代基的C3-C6亚杂芳基、含取代基或不含取代基的C2-C10亚杂环基组成的组；R18和R19各自独立选自氢、卤素、羟基、含取代基或不含取代基的C1-C6烷基、含取代基或不含取代基的C2-C6烯基组成的组；
R4至R17各自独立选自氢或卤素；
其中，取代基选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、氰基、硝基组成的组。
在一些实施方式中，所述化合物如式I-1所示：
式I-1
式中，R1、R2和R3的限定同所述式I。
具体地，所述化合物可选自如下化合物组成的组：
，
，
。
本申请中，术语“烷基”是指脂肪族烃基团，可以是支链或直链的烷基。根据结构，烷基可以是单价基团或双价基团(即亚烷基)。在本申请中，烷基具有1-6个碳原子的“低级烷基”，优选具有1-4个碳原子的烷基。典型的烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基等。应理解，本申请中提到的“烷基”包括可能存在的所有构型和构象的该烷基，例如本申请中提到的“丙基”包括正丙基和异丙基，“丁基”包括正丁基、异丁基和叔丁基，“戊基”包括正戊基、异丙基、新戊基、叔戊基、和戊-3-基等。
本申请中，术语“烷氧基”是指-O-烷基，其中烷基如本申请中定义。典型的烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等。
本申请中，术语“芳基”是指芳香基环中每一个构成环的原子都是碳原子。芳基环可以由五、六、七、八、九或多于九个原子构成。“芳基”包括“共轭的”或多环体系，所述多环体系含有至少一个芳香环且在其环形结构中不含任何杂原子。芳基可以是任选取代的。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、菲基、蒽基、芴基和茚基。根据结构，芳基可以是单价基团或双价基团(即亚芳基)。
本申请中，“杂芳基”是指如上所定义的芳基，只是在环结构中具有1-4个杂原子，其还可以被称为“芳杂环”或“杂芳族化合物”。如本申请所使用的，术语“杂芳基”是指包括稳定的5、6或7元单环或7、8、9、10、11或12元由碳原子和一个或多个杂原子构成的双环芳族杂环，例如1或1-2或1-3或1-4或1-5或1-6个杂原子，或者例如1、2、3、4、5或6个杂原子，所述杂原子独立地选自氮、氧和硫。氮原子可以被取代或不被取代（即，N或NR，其中R是氢或是如本申请定义的其它取代基）。氮和硫杂原子可任选被氧化（即，N→O和S(O)p，其中p=1或2）。但是应当注意的是，芳族杂环中硫和氧原子的总数不超过1。杂芳基的实例包括但不限于吡唑、四唑、等。据结构，杂芳基可以是单价基团或双价基团(即亚杂芳基)。
术语“杂环基”是指饱和或不饱和的非芳香族的具有一个或多个杂原子（如氧原子、氮原子、硫原子或硒原子）的3-8元单环、7-12元双环（稠环、桥环或螺环）或11-14元三环（稠环、桥环或螺环）体系。杂环基环可以是任选取代的。杂环基的实例包括不限于氮杂环丁烷、等。根据结构，杂环基可以是单价基团或双价基团(即亚杂环基)。
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
本申请中，杂环基、芳基或杂芳基可以在一个或多个环位置（例如，成环碳原子或杂原子，如氮原子）被取代基取代，所述取代基如上文所述。
本申请中“药学上可接受的盐”是指化合物与药学上可接受的（相对无毒、安全、适合于患者使用）酸或碱反应得到的盐。当化合物中含有相对酸性的官能团时，可以通过在合适的惰性溶剂中用足量的药学上可接受的碱与化合物的游离形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括但不限于钠盐、钾盐、钙盐、铝盐、镁盐、铋盐、铵盐等。当化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在合适的惰性溶剂中用足量的药学上可接受的酸与化合物的游离形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐包括但不限于盐酸盐、醋酸盐、三氟乙酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐等。具体参见Handbook ofPharmaceuticalSalts: Properties , Selection , and Use (P . Heinrich Stahl ,2002)。
本申请的药物组合物的剂型包括(但并不限于)：注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用擦剂、控释型或缓释型或纳米制剂。
本申请的药物组合物包含安全有效量范围内的本申请中的化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本申请的化合物/剂，更佳地，含有10-1000mg本申请的化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
本申请中，“药学上可以接受的赋形剂或载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本申请中的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的赋形剂或载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温®)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
I. 化合物的制备
实施例1 化合物1合成方法：
。
步骤1：1-2的合成
在冰水浴下向化合物1-1(5000 mg, 22.83 mmol)的浓硫酸(30 mL)溶液中缓慢滴加浓硝酸(3 mL)，缓慢升至室温并在室温下搅拌2小时。反应完全后，冷却至0℃后缓慢滴加入冰水中，固体析出，升至室温后过滤，滤饼用水洗涤并干燥后得到化合物1-2。
步骤2：1-3的合成
在氮气保护下，向冰水浴下的化合物1-2(2000 mg, 7.58 mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中缓慢滴加硼烷四氢呋喃络合物(11.36 mL, 11.36 mmol)，缓慢升至室温并在室温下搅拌过夜。反应完全后，冷却至0℃后缓慢滴加甲醇(20 mL)，升至50℃搅拌1小时，冷却至室温，加入水(20 mL)淬灭，并用EA (20 mL)萃取。将有机相用水(10 mL×2)洗涤，干燥后浓缩，并将所得残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯比例100/0至65/35)，得到化合物1-3。
步骤3：1-4的合成
在氮气保护下，向冰水浴下的化合物1-3(1700 mg, 6.80 mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中缓慢滴加三溴化硼(1278.16 μL, 13.60 mmol)，缓慢升至室温并在室温下搅拌2小时。反应完全后，冷却至0℃后缓慢滴加饱和碳酸氢钠溶液调节pH至7左右，加入水(10mL)稀释，并用EA (20 mL)萃取。将有机相用水(10 mL×2)洗涤，干燥后浓缩，并将所得残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯比例100/0至80/20)，得到化合物1-4。
步骤4：1-5的合成
在-78℃，氮气保护下，向乙基-4,4-二氟环己烷羧酸盐(1186.72 mg, 6.17 mmol)的四氢呋喃(20 mL)溶液中缓慢滴加LDA的四氢呋喃溶液 (3858.81 μL, 7.72 mmol)，在此温度下反应0.5小时，缓慢滴加化合物1-4(1610 mg, 5.15 mmol)的四氢呋喃(5 mL)溶液，缓慢升至室温并在室温下搅拌过夜。反应完全后，冷却至0℃后缓慢滴加饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入水(10 mL)稀释，并用EA (20 mL)萃取。将有机相用饱和食盐水(10 mL×2)洗涤，干燥后浓缩，并将所得残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯比例100/0至85/15)，得到化合物1-5。
步骤5：1-6的合成
在氮气保护下，向冰水浴下的化合物1-5(1785 mg, 4.21 mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中缓慢滴加二异丁基氢化铝的四氢呋喃溶液(10.52 mL, 10.52 mmol)，滴加完毕后混合物在0℃搅拌3小时。反应完全后，在0℃后缓慢滴加饱和酒石酸钾钠溶液(20 mL)，并升至室温搅拌1小时，加入水(10 mL)稀释，并用EA (20 mL)萃取。将有机相用饱和食盐水(10 mL×2)洗涤，干燥后浓缩，并将所得残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯比例100/0至80/20)，得到化合物1-6。
步骤6：1-7的合成
在氮气保护下，向化合物1-6 (1570 mg, 4.11 mmol)的四氢呋喃(15 mL)溶液中加入叔丁醇钾(1382.88 mg, 12.32 mmol)，混合物在60℃搅拌2小时。反应完全后，加入水(10 mL)稀释，并用EA (20 mL)萃取。将有机相用饱和食盐水(10 mL×2)洗涤，干燥后浓缩，并将所得残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯比例100/0至90/10)，得到化合物1-7。
步骤7：1-8的合成
在氮气保护下，向化合物1-7(780 mg, 2.15 mmol)的甲醇(9 mL)和水(3 mL)混合溶液中加入铁粉(962 mg, 17.23 mmol)和氯化铵(962 mg, 17.23 mmol)，混合物在65℃搅拌1小时。反应完全后，趁热过滤，滤液加入水(10 mL)稀释，并用EA (20 mL)萃取。将有机相用饱和食盐水(10 mL×2)洗涤，干燥后浓缩，并将所得残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯比例100/0至40/60)，得到化合物1-8。
步骤8：化合物1的合成
在氮气保护下，向化合物1-8(200 mg, 0.60 mmol)和三乙胺(166.91 μL, 1.20mmol)的二氯甲烷(5 mL)溶液中缓慢加入对甲苯磺酰氯(116.49 μL, 1.51 mmol)，混合物在0℃搅拌1小时。反应完全后，混合物加入DCM (10 mL)稀释，饱和食盐水(10 mL×2)洗涤，有机相干燥后浓缩。将所得残余物溶于四氢呋喃(5 mL)中，在0℃下缓慢加入氢氧化钠溶液(6N, 0.5 mL)，混合物于室温下搅拌3小时。反应完全后，加入水(10 mL)稀释，并用EA (20mL)萃取。将有机相用饱和食盐水(10 mL×2)洗涤，干燥后浓缩，并将所得残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯比例100/0至70/30)，得到化合物1(154 mg, 0.38mmol, 产率：73.32%)。MS(ESI)：m/z = 410.0[M+H]+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.51 (s, 1H), 7.22 (d, J = 2.4 Hz, 1H),6.96 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 4.00 (s, 2H), 2.94 (s, 3H), 2.73 (s, 2H), 2.05 -1.88 (m, 4H), 1.48 (q, J = 5.8 Hz, 4H)。
实施例2 化合物2的合成方法：
。
步骤1：2-1的合成
在冰水浴下，向二氯亚砜(436.72 μL, 6.02 mmol)的水(3 mL)溶液中加入氯化亚铜(59.60 mg, 0.60 mmol)，混合物0℃下反应0.5小时，记为反应液1；在另一圆底烧瓶中加入化合物1-8(200 mg, 0.60 mmol)，并用浓盐酸(1.5 mL)溶解，冷却至-5℃后缓慢滴加亚硝酸钠(80.50 μL, 1.51 mmol)的水(0.8 mL)溶液。混合物在此温度下搅拌0.5小时，记为反应液2。将反应液2缓慢滴加至反应液1，混合物缓慢升至室温并搅拌1小时。反应完全后，混合物加入EA乙酸乙酯 (10 mL)稀释，饱和食盐水(10 mL×2)洗涤，有机相干燥后浓缩。将所得残余物溶于四氢呋喃(5 mL)中，在0℃下缓慢加入至甲胺盐酸盐(405.12 mg, 6.00mmol)与碳酸氢钠NaHCO3(1010.54mg, 12.03 mmol)的四氢呋喃(4 mL)和水(6 mL)的混合溶液中，混合物于室温下搅拌过夜。反应完全后，加入水(10 mL)稀释，并用EA (20 mL)萃取。将有机相用饱和食盐水(10 mL×2)洗涤，干燥后浓缩，并将所得残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯比例100/0至60/40)，得到化合物2-1。
步骤2：化合物2的合成
在氮气保护下，向化合物2-1 (10 mg, 0.02 mmol)的1,4-二氧六环(1 mL)和水(0.2 mL)的混合溶液中加入1-甲基吡唑-4-硼酸频哪醇酯(15.21 mg, 0.07 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (3.57 mg, 0.005 mmol)和碳酸钠(5.17 mg, 0.05 mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌过夜，冷却至室温后加入水，加入水(10 mL)稀释，并用EA (20 mL)萃取。将有机相用饱和食盐水(10 mL×2)洗涤，干燥后浓缩，并将所得残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯比例100/0至25/75)，得到化合物2(3.85 mg, 0.01 mmol, 产率：46.78%)。MS(ESI)：m/z = 412.2[M+H]+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 8.16 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.75 (d, J =2.1 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.23 (br d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.14 (s,2H), 3.88 (s, 3H), 2.82 (s, 2H), 2.43 - 2.38 (m, 3H), 2.03 - 1.93 (m, 4H),1.57 - 1.47 (m, 4H)。
实施例3 化合物3的合成方法：
。
在氮气保护下，向化合物1 (66 mg, 0.16 mmol)的1,4-二氧六环(3 mL)和水(0.6mL)的混合溶液中加入1-甲基吡唑-4-硼酸频哪醇酯(100.42 mg, 0.48 mmol)、Pd(dppf)Cl2(23.54 mg, 0.03 mmol)和碳酸钠(34.10 mg, 0.32 mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌过夜，冷却至室温后加入水，加入水(10 mL)稀释，并用EA (20 mL)萃取。将有机相用饱和食盐水(10 mL×2)洗涤，干燥后浓缩，并将所得残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯比例100/0至70/30)，得到化合物3(55 mg, 0.13 mmol, 产率：83.09%)。MS(ESI)：m/z = 412.2[M+H]+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.29 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.75 (s, 1H),7.19 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.00 (s, 2H), 3.86 (s,3H), 2.93 (s, 3H), 2.76 - 2.68 (s, 2H), 1.99 (m, 4H), 1.58 - 1.44 (m, 4H)。
实施例4 化合物4的合成方法：
。
在冰水浴下，向化合物1-8 (30 mg, 0.09 mmol)的DCM (5 mL)溶液中加入DIEA(44.89 μL, 0.27 mmol)和丙烯酰氯(8.76 μL, 0.11 mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时，冷却至0℃后加入水淬灭，并用DCM (20 mL)萃取。将有机相用饱和食盐水(10 mL×2)洗涤，干燥后浓缩，并将所得残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯比例100/0至50/50)得到化合物4(20 mg, 0.05 mmol, 产率：57.34%)。MS(ESI)：m/z = 386.1 [M+H]+。
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ: 10.06 (br s, 1H), 7.80 (br s, 1H), 7.46 - 7.19 (m,1H), 6.44 - 6.17 (m, 2H), 5.88 - 5.61 (m, 1H), 4.01 (br s, 2H), 2.72 (br s,2H), 2.06 - 1.82 (m, 4H), 1.49 (br s, 4H)。
II. 活性测试：测试例1. TEAD报告基因实验-MCF7
细胞：Hippo Pathway/TEAD Luciferase Reporter MCF7细胞（BPS Bioscience，60618）。
步骤：
1. 实验前，将生长培养基（BPS Bioscience，79531）在37 ℃水浴中预热。
2. 将MCF7细胞（BPS Bioscience，60618）从37 ℃恒温培养箱中取出，用PBS洗涤一次。
3. 将 2 mL 胰蛋白酶加入 T75 细胞培养瓶中，在 37 °C下CO2 培养箱中消化 3分钟。
4. 加入4.5 mL培养基终止消化，收集细胞于50 mL离心管中，1000 rpm离心5min，弃上清，用10 mL新鲜培养基重悬细胞。
5. 将 30 μL 细胞悬液与 30 μL台盼蓝混合，用细胞计数器计数。
6. 将细胞密度调整为2.5×105/ mL，每孔40 μL细胞接种到白色透明底384微孔板（Corning，3765）中。
7. 将细胞在 37°C，CO2 培养箱中孵育过夜。
8. 使用Ehco650加入40 nL化合物的DMSO溶液到384微孔板中。DMSO在测定培养基中的最终浓度为 0.1%。
9. 在37 °C，CO2 培养箱中培养细胞24 小时。
10. 每孔加入20 μL ONE-Step™ Luciferase Assay System（BPS，60690）试剂，室温稳定5分钟。使用EnVision Xcite Multilabel Reader（PerkinElmer，2105-0020）测量发光值。
11. 数据处理：
%Inhibition=｛(Signalcompound-SignalAve_PC)/(SignalAve_VC-SignalAve_PC)｝×100%
IC50(nM)计算：使用 Prism 9 软件 Curve fit 中的 curve fit（ Prism 9,non-liner inhibitor, 4 parameter）算法进行计算。
Signalcompound：加药组信号值；
SignalAve_PC：阳参组平均信号值；
SignalAve_VC： DMSO对照组平均信号值。
结果如下表1所示：
实验结果显示，本申请的化合物具有抑制TEAD报告基因活性。
测试例2. CellTiter-Glo®化学发光法检测TEAD抑制剂对NCI-H226细胞活力的影响
1. 实验前准备：康宁®96孔黑色透明底细胞板，Corning公司，货号：#3603；CellTiter-Glo®检测试剂盒：Promega公司，货号：G7570；SpectraMax®iD3型号酶标仪。
2. NCI-H226细胞培养：来源于ATCC货号:CRL-5826的NCI-H226培养于89% RPMI-1640+10% FBS+1% 双抗，置于含5% CO2的37 °C恒温培养箱。
3. 第一天：待细胞汇合率达90%，吸走培养基，加入3mL PBS洗净残余培养基，加入1mL Trypsin置于培养箱孵育5 min。大部分细胞脱落后，加入2mL 培养基中止消化。将细胞浓度稀释到5×103个/mL，在康宁®96孔黑色透明底细胞板，铺500个细胞/孔，即每孔加入100μL 。
4. 第二天给药：取出10mM的TEAD抑制剂储存液(DMSO溶液)室温解冻，配制以下浓度的工作液：0.0015 μM，0.0046 μM，0.0137 μM，0.0412 μM，0.1235 μM，0.3704 μM，1.1111μM，3.3333 μM，10 μM。0.6 mL 完全培养基+1.2 μL 10mM的储存液， 配制成20 μM的工作液；取0.2 mL上述药液加到0.4 mL 完全培养基，配置成6.6666 μM的工作液，依此3倍梯度稀释配制其他浓度。在已铺细胞的96孔板中加100 μL工作液。
5. 加药后第3天更换新鲜的药液。
6. 给药第6天用CellTiter-Glo®试剂盒检测。在酶标仪上选择CellTiter-Glo的检测程序，读取发光值。
数据处理：细胞活力值=100×（加药孔发光值-空白空发光值）/（溶剂孔发光值-空白空发光值），IC50计算：将细胞活力值和对应的药物浓度值使用Prism 8软件Curve fit中的（log(inhibitor) vs. normalized response -- Variable slope算法计算。
选择性结果如下表2所示：
实验结果显示，本申请的化合物能够抑制靶点敏感肿瘤细胞H226的增殖。
测试例3. 实时荧光定量核酸扩增检测系统（qPCR）检测TEAD抑制剂对NCI-H226细胞YAP/TEAD转录活性的影响
1. 试剂及细胞
NCI-H226细胞培养：来源于ATCC货号:CRL-5826的NCI-H226培养于89% RPMI-1640+10% FBS+1% 双抗，置于含5% CO2的37 ℃恒温培养箱。
RNA提取试剂盒(天根，DP430，常温放置)。
SYBR染料 (康为世纪，CW0957M，-20 ℃放置)。
2. RNA提取操作步骤
2.1 培养细胞的培养基中加入1μM药物（DMSO溶液）24h后，收集细胞（细胞量不要超过1×107），吸除细胞培养基上清，PBS洗一次，吸除PBS，立即进行第二步裂解步骤。
2.2 裂解细胞
配裂解液：在RL中加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1 mL RL中加入10 μL β-巯基乙醇；裂解：加入适量裂解液RL，将细胞裂解液转移至离心管中，涡旋震荡混匀。参数见表3：
2.3 将所有溶液转移至过滤柱CS上(过滤柱CS放在收集管中)，12000 rpm(~13400×g) 离心2 min，收集滤液。
2.4 向滤液中加入1倍体积70%乙醇（通常为350 μL或600 μL），混匀，得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中， 12000 rpm (~13400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
2.5 向吸附柱CR3中加入350 μL去蛋白液RW1，12000 rpm(13400×g)离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
2.6 DNase I 工作液的配制：取10 μL DNase I 储存液放入新的RNase-Free离心管中，加入70 μL RDD缓冲液，轻柔混匀。
2.7 向吸附柱CR3中央加入80 μL的DNase I 工作液，室温放置15 min。
2.8 向吸附柱CR3中加入350 μL 去蛋白液RW1，12000 rpm(~13400×g)离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
2.9 向吸附柱CR3中加入500 μL 漂洗液RW，室温静置2 min，12000 rpm(~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
2.10 重复步骤9。
2.11 12000 rpm(~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置3-5分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
2.12 将吸附柱CR3转入一个新的RNase-Free离心管中，加入30-100 μL RNase-Free ddH2O室温放置2 min，12000 rpm(~13400×g)离心2 min，得到RNA溶液。
2.13 用Nanodrop 检测所提RNA的浓度。
3. 反转录操作步骤
3.1 将准备反转录的RNA样品和反转录的试剂盒(thermo，4368814，-20 ℃放置)的试剂放在冰上完全溶解。
3.2 按照试剂盒说明书配置2×RT master mix。
3.3 将配好的2×RT master mix（混合液） 轻弹管底混合均匀，用掌上离心机轻甩一下，置于冰上备用。
3.4 先根据提取的RNA浓度计算出每个样品吸取500ng RNA所需要的体积，然后按照10μL体系计算出需要补齐的RNase-free H2O的体积。将RNase的PCR8联管做好编号，先对应编号加入RNase-free H2O，再加入对应体积的500ng RNA，吹打数次混匀后，加入10μL的2×RT master mix，轻弹管底混合均匀，用掌上离心机轻甩一下，置于冰上。
3.5 将PCR管放入PCR仪器中，拧好盖子按下面条件设置PCR程序，反应体积是20μL。
3.6 将反转完的cDNA放-20 ℃保存备用。
4. qPCR操作步骤
4.1 将所检测基因36B4、CTGF和CYR61的正反向引物（具体引物序列见表4），样品cDNA和SYBR green放在冰上完全溶解，混合均匀。
4.2 稀释引物
将合成的正向引物和反向引物按照管上体积用ddH2O溶解混匀(一般浓度为100μM)。分别取2.5 μL100μM的引物储存液，加到装有47.5 μLddH2O的EP管中，便稀释成5μM。然后将5 μM的正向引物和反向引物等体积混合成2.5μM的F/R 引物混合液。
4.3 稀释cDNA
反转录后的cDNA在冰上完全溶解后，混合均匀，根据每次实验，384QPCR板中每孔加入4μL cDNA，做3个重复，计算好所需样本体积，取出PCR8连管，将cDNA用ddH2O稀释20倍，轻弹管底混合均匀，在掌上离心机上甩一下，置于冰上备用。
4.4 在1.5mL离心管中配好SYBR和引物的混合液，轻弹管底混合均匀，在掌上离心机上甩一下，置于冰上备用。
4.5 加样，加完所有孔后用排枪吸入6μL对应基因的SYBR和2.5μM的F/R 引物混合液，加完后贴上封板膜，并四边压紧，在上机前先用离心机离心5min，保证液体都在板底。设置QPCR反应程序，康为世纪SYBR染料预变性反应必须在95 ℃ 10min下完成，反应体系10 μL，40个循环。保存好数据进行分析。
实验结果如图1所示，从图1中可以看出本申请的化合物能够抑制靶点敏感肿瘤细胞H226的YAP/TEAD转录活性。

Claims (5)

1.一种化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物如式I-1所示：
；
式I-1中，R1选自氢、溴、氟或以下基团组成的组：
；
R2为氢，R3选自以下基团组成的组：
。
2.一种化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自如下化合物所组成的组：
。
3.一种药物组合物，包括权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
4.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐或如权利要求3所述的药物组合物在制备预防或治疗与TEAD的调节相关的疾病或病症的药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述与TEAD的调节相关的疾病或病症选自如下：脑癌、食管癌、肾癌、间皮瘤、肝癌、头颈癌、肺癌、胃癌、乳腺癌或前列腺癌。
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