CN116407502A - 高epa含量的口服微乳及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种高EPA含量的口服微乳及其制备方法。以重量百分比计，该口服微乳包含1％～50％EPA甘油酯原料、0.1％～10％高碘值磷脂(包括PC)，其它乳化剂0.01～10％，辅助EPA肝脏富集的第一辅料0～10％，其它食品中和/或药学上可接受的原辅料0～40％及适量的水，其中，EPA甘油酯原料提供高含量EPA，第一辅料提供肝靶向成分和/或PEG修饰的成分。本发明提供的口服微乳能够实现EPA与磷脂的协同吸收，进一步借助于第一辅料，可减少EPA进入血液循环时被脂蛋白脂肪酶水解，也可在提高EPA的生物利用度的同时促进其在肝脏中的富集，因此，能够用于脂肪肝等疾病的预防和/或治疗。

Description

高EPA含量的口服微乳及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及口服制剂技术领域，特别涉及一种高EPA含量的口服微乳及其制备方法和应用。

背景技术

脂肪肝是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变。肝细胞内脂肪沉积，从单纯性脂肪肝开始，可以发展为具有不同程度肝纤维化的脂肪肝炎，最终可能导致肝硬化，甚至演变为原发性肝细胞癌。近年来随着人们生活方式的变化，脂肪肝已成为了全球性的问题。目前我国脂肪肝的发病率增长速度是西方国家的两倍多，其管理和诊治十分重要。

脂肪肝发病机制十分复杂，常见病因包括长期大量饮酒或营养过剩、肥胖等，医学界认为脂肪肝的初期发展是甘油三酯积累所致，肝细胞内过量的甘油三酯有多种来源，包括饮食中过度摄入的脂肪酸，脂肪组织胰岛素抵抗(IR)引起的外周脂肪增加和高胰岛素血症引起的肝新生脂肪增加等。脂肪堆积导致肝细胞易受到多种肝毒性损害因素的侵害，其中包括脂质过氧化、机体氧化应激、线粒体功能障碍等，最终导致肝脏部位发生炎症反应，细胞损伤和组织纤维化。

目前尚无批准用于脂肪肝的长期治疗的特效药物或制剂，他汀类药物(降脂药)，格列酮类(胰岛素增敏剂)，抗氧化剂和二甲双胍等可作为潜在的治疗脂肪肝的有效药物。但他汀类药物本身可导致各种常见类型的药物性肝损伤，在使用过程中可能造成双重损伤。格列酮类药物在改善脂肪变性的同时还导致患者体重明显增加，其长期使用安全性尚不清楚。抗氧化剂(维生素E和N-乙酰半胱氨酸等)的随机临床试验无法确定药物对肝脏组织学状态的改善，且它们的作用可能会因年龄，剂量和生活方式的改变而有所不同。二甲双胍药物治疗非酒精性脂肪肝在临床上仍未得到一致、明确的结果。

除了药物治疗外，生活方式的改变常被作为主要的临床建议，也是脂肪肝病症管理的第一步。通常进行体育锻炼、减少总脂肪摄入可以有效减少脂肪变性。除此之外，饮食的成分还影响代谢和内分泌功能以及总体能量平衡。一般建议减少饱和脂肪酸，反式脂肪酸和果糖的摄入。相反，增加多不饱和脂肪酸(PUFA)摄入量被证明可降低脂肪肝的风险，且这一类物质更容易被人们所接受，没有药物较强的不良反应，可以长时间服用。

已有研究表明，Omega-3多不饱和脂肪酸(Omega-3 PUFA)，主要包括二十碳五烯酸(EPA)，二十二碳六烯酸(DHA)，α-亚麻酸(ALA)等，可参与脂蛋白分解、脂质氧化、脂质代谢等过程，并在肝病的治疗中表现出了一定的有益效果。Omega-3 PUFA在人体内可以由ALA合成，但是内源转化效率较低，因此必须通过从饮食中定期摄入保证体内供应量足够。常见的富含Omega-3 PUFA的油类包括藻油、鱼油、磷虾油、海豹油等，工业上可通过酶促酯交换法得到高含量的Omega-3 PUFA。

关于Omega-3多不饱和脂肪酸制剂在肝病治疗上的应用报道，专利文献CN101757497A记载了一种EPA和中药的组合胶囊，其油性物质不利于人体消化吸收，专利文献CN104856985A记载了EPA乙酯软胶囊，在脂肪肝治疗上尚未得到积极的临床结果，专利文献CN110312509A记载了EPA/DHA组合物治疗或预防肝病，但提供的是一种注射脂肪乳剂型。目前已报道的Omega-3 PUFA型制剂普遍存在以下问题：(1)现有产品的剂型多为胶囊剂，不利于人体吸收，达不到治疗所需的肝脏内活性脂肪酸浓度；且胶囊剂中Omega-3 PUFA的消化和吸收受食物的摄入的影响，空腹状态的生物利用度低于饱腹状态的50％，服用方法需进行严格控制。(2)部分文献报道的注射脂肪乳虽然通过改善剂型提高了生物利用度，但无法实现将活性脂肪酸高浓度富集于肝脏，对脂肪肝改善效果不佳。

因此，有必要开发一种能够将活性脂肪酸高效富集于肝脏的新制剂。

发明内容

基于此，本发明的一个目的在于提供一种能够将二十碳五烯酸(EPA)高效富集于肝脏的口服微乳，其具有高含量的EPA和高碘值的磷脂(包括磷脂酰胆碱，PC)，控制EPA和PC为合适的比例，可以将EPA和PC协同吸收，有助于EPA口服吸收和在肝脏中富集，能够充分发挥EPA对于脂肪肝等疾病的预防和/或治疗作用。本发明的另一个目的在于提供上述口服微乳的应用，包括但不限于在医学食品、保健食品、药品等方面的应用。

上述发明目的可以通过以下的技术方案实现。

根据本发明的第一方面，提供一种口服微乳，按重量百分比计，所述口服微乳的总重量百分数为100％，包含如下组分：

其中，EPA在所述EPA甘油酯原料中的质量含量≥45％，甘油三酯在甘油酯成分中的质量占比≥58％；

所述第一乳化剂为碘值＞70的磷脂；

在所述第一乳化剂的磷脂成分中，磷脂酰胆碱的质量占比≥50％；

EPA与磷脂酰胆碱的质量比≤8:1；

所述第二乳化剂的成分均与第一乳化剂不同；

所述第一辅料包肝含靶向成分、PEG修饰的成分中至少一种；

所述第二辅料为食品中和/或药学上可接受的原辅料，且不同于所述第一乳化剂、第二乳化剂和所述第一辅料。

在本发明的一些优选的实施方式中，按重量百分比计，所述口服微乳包含如下组分：

在本发明的一些实施方式中，在所述口服微乳中，水的最低重量百分比为65％；及/或，

所述口服微乳包含油相成分和水相成分，其中油相成分的重量百分数≤30％；及/或，

在所述EPA甘油酯原料中，EPA的质量含量≥57％；及/或，

所述EPA甘油酯原料中，甘油一酯在甘油酯成分中的质量占比小于30％，甘油二酯在甘油酯成分中的质量占比小于30％；及/或，

所述第一乳化剂为碘值≥90的磷脂；及/或，

在所述口服乳液的所有磷脂成分中，碘值>70的磷脂的质量占比大于90％；及/或，

在所述第一乳化剂的磷脂成分中，磷脂酰胆碱的质量占比≥70％；及/或，

EPA与磷脂酰胆碱的质量比≤5:1；及/或，

所述肝靶向成分选自肝靶向分子和经修饰的肝靶向分子中的一种或多种，所述经修饰的肝靶向分子中含有PEG修饰的脂质单元和无PEG修饰的脂质修饰单元中的一种或多种；及/或，

所述口服微乳为PEG修饰的微乳，所述PEG修饰的原料在所述口服微乳的重量百分比为0.01％～10％；及/或，

所述PEG修饰的成分选自聚乙二醇修饰的脂类成分和聚乙二醇单甲醚修饰的脂类成分中的一种或多种；及/或，

所述口服微乳为水包油结构；及/或，

所述口服微乳中的液滴平均粒径小于500nm。

在本发明的一些实施方式中，所述EPA甘油酯原料选自具有如下组成的EPA甘油酯中的一种或多种：EPA 57％～60％+DHA 0～10％、EPA 57％～60％+DHA 10～20％、EPA57％～60％+DHA 20～30％、EPA 57％～60％+DHA 30％～40％、EPA 60％～70％+DHA 0～10％、EPA 60％～70％+DHA 10～20％、EPA 60％～70％+DHA 20～30％、EPA 60％～70％+DHA 30％以上、EPA 70％～80％+DHA 0～10％、EPA 70％～80％+DHA 10～20％、EPA 70％～80％+DHA 20％以上、EPA 80％～90％、和EPA＞90％；及/或，

所述第一乳化剂中的磷脂成分来自大豆磷脂、向日葵磷脂、蛋黄磷脂和合成磷脂中的一种或多种；及/或，

所述第二乳化剂选自不同于所述第一乳化剂的磷脂、蔗糖酯、柠檬酸脂肪酸甘油酯、脂肪酸甘油酯、聚山梨酯、脂肪酸山梨坦、聚氧乙烯脂肪酸酯、司盘、泊洛沙姆、海藻酸盐和和酪蛋白酸盐中的一种或多种；及/或，

所述肝靶向成分选自甘草次酸及其衍生物、半乳糖及其衍生物、甘露糖及其衍生物、透明质酸及其衍生物、胆汁酸及其衍生物中的一种或多种；及/或，

所述PEG修饰的成分选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、聚乙二醇-硬脂酸酯、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、大豆磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇单甲醚、聚乙二醇油酸酯、聚乙二醇月桂酸酯中的一种或多种；及/或，

所述第二辅料选自营养补充剂、抗氧化剂、助乳化剂、油脂、矫味剂和pH调节剂中的一种或多种；及/或，

所述口服微乳中的液滴平均粒径≤300nm；及/或，

在所述口服微乳中，水的重量百分比为65％～95％。

在本发明的一些实施方式中，所述第一乳化剂中的磷脂成分为大豆来源的多烯磷脂；及/或，

所述第二乳化剂中不含高碘值的磷脂酰胆碱；及/或，

所述肝靶向成分含有甘草次酸及其衍生物，所述甘草次酸及其衍生物选自甘草次酸的脂溶性衍生物；及/或，

所述肝靶向成分含有DSPE-PEG-半乳糖、DSPE-PEG-甘露糖、DSPE-甘草次酸、DSPE-PEG-甘草次酸和DSPE-透明质酸中的一种或多种；

所述PEG修饰的成分选自PEG修饰的磷脂、PEG修饰的维生素E酯中的一种或多种；及/或，

所述营养补充剂选自维生素A、维生素E、维生素B族、维生素D、水飞蓟素、葡甘露聚糖和支链氨基酸中的一种或多种；及/或，

所述油脂选自大豆油、中链三酸甘油酯、橄榄油、亚麻籽油、核桃油、沙棘油、薏米油、葡萄籽油、生姜油、椰子油、山茶油、玫瑰油、薄荷油和柠檬油中的一种或多种；及/或，

所述抗氧化剂选自亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、维生素C及其酯类、生育酚及其酯类中的一种或多种。

在本发明的一些实施方式中，所述第二乳化剂中不含磷脂成分；及/或，

所述甘草次酸的脂溶性衍生物选自DSPE-甘草次酸、DSPE-PEG-甘草次酸、甘草次酸脂肪酸酯和甘草次酸琥珀酸酯中的一种或多种；及/或，

所述PEG修饰的成分选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯中的一种或多种；及/或，

所述维生素E选自α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚和δ-生育三烯酚中的一种或多种；及/或，

所述维生素B族选自维生素B1、维生素B2、烟酸、泛酸、维生素B6、维生素B12、叶酸和维生素B7中的一种或多种。

在本发明的一些实施方式中，所述口服微乳为PEG修饰的微乳，包含总质量占比为0.01％～10％的所述PEG修饰的原料。

根据本发明的第二方面，提供本发明的第一方面所述口服微乳的制备方法，包括如下步骤：

将包括所述EPA甘油酯原料的油相组分在加热条件下制备油相；

将包括磷脂的水相组分与水性溶剂混合，在加热条件下制备水相；

将所述油相和所述水相进行混合，剪切搅拌，制备水包油的微乳；

将所述水包油的微乳进行高压均质处理，制得液滴粒径小于500nm的纳米乳；

可选地，将所述纳米乳进行过滤、封装、灭菌。

根据本发明的第三方面，提供本发明的第一方面所述口服微乳，或本发明的第二方面所述的制备方法获得的所述口服微乳的应用。

在本发明的一些实施方式中，提供所述口服微乳在制备预防和/或治疗脂肪累积相关疾病的药物中的应用，或者在医学食品、保健食品中的应用。

在本发明的一些优选的实施方式中，所述脂肪累积相关疾病选自脂肪肝、肝损伤、肝炎中的一种或多种，优选地，所述脂肪肝为非酒精性脂肪肝。

发明人经过实验探索还发现，发明人发现EPA活性成分在PUFA中发挥着重要的作用，治疗脂肪肝的疗效与鱼油原料中EPA纯度相关性明显。而且，相对于EPA EE微乳，甘油酯型EPA微乳与本发明中其他成分组合使用后能够使EPA在肝脏中的富集性更好。因此，本发明提供高EPA含量的甘油型原料制备的口服微乳。

本发明提供的口服微乳能够弥补目前尚无批准用于脂肪肝的长期治疗的特效药物或制剂的空白。本发明提供的口服微乳，采用高EPA纯度的EPA甘油酯原料，从而提供高含量的活性EPA，通过磷脂原料提供高碘值的磷脂(包括磷脂酰胆碱，PC)，其中，EPA在EPA甘油酯原料中的含量占比≥45％，EPA甘油三酯在甘油酯成分中的质量占比≥58％，第一乳化剂中磷脂的碘值＞70，且控制EPA与PC的质量比≤8:1，可实现EPA与磷脂的协同吸收，促进EPA进入肝脏，且给药剂量的口服乳中的磷脂含量远低于市面上多烯磷脂酰胆碱胶囊的给药量，市售产品中多烯磷脂酰胆碱约为本发明口服微乳的1.8～2.3倍。本发明提供的口服微乳中进一步添加第一辅料(肝靶向成分和/或PEG修饰的成分)，可通过靶向作用和/或抑制酶解的方式促进EPA在肝脏富集，与水溶性较强的第一辅料相比，脂溶性较强的第一辅料更容易与EPA微乳以及进入体内后形成的乳糜微粒结合，更好地发挥提高EPA的生物利用度同时促进其在肝脏中的富集的效果。本发明提供的口服微乳可在4至6周甚至更长的给药周期内，针对脂肪累积相关疾病，特别是针对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，对降低体重、血浆甘油三酯水平、机体胰岛素抵抗、氧化应激和炎症反应有较好的效果。

本发明提供的口服微乳，相对于EPA软胶囊，可将EPA的生物利用度提高3倍左右。

本发明可通过第一乳化剂、第二乳化剂和/或第一辅料提供PEG修饰的原料，能够得到PEG修饰的口服微乳，可减少EPA进入血液循环时被脂蛋白脂肪酶水解，从而促进EPA在肝脏处聚集。进一步与肝靶向成分组合使用，不仅能够大幅度提升EPA在肝脏的富集，还能有效提高生物利用度。

发明人经过实验探索发现，磷脂酰胆碱的含量与磷脂不饱和度的选择对药效有影响。在本发明中，当磷脂碘值大于等于70时，EPA与磷脂酰胆碱的质量比≤8:1时，降血脂效果更好，对脂肪肝的治疗效果更佳。

本发明所提供的鱼油口服微乳可以降低高脂饮食诱导NASH形成的ALT和AST水平，缓解炎症反应，防止脂质过氧化，且可以降低血清TG和TC水平，因此，本发明所提供的口服微乳可作为预防和/或治疗脂肪肝，特别是非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的潜在药物。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案、更完整地理解本申请及其有益效果，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。

图1为本发明的一个实施例中不同制剂的大鼠脂肪肝NAS评分结果；

图2为本发明的一个实施例中不同制剂给药四周后大鼠血糖含量变化-时间曲线图；

图3为本发明的一个实施例中不同制剂给药四周后大鼠血糖含量的AUC计算结果图；

图4为本发明的一个实施例中不同制剂的大鼠脂肪肝NAS评分结果；

图5为本发明的一个实施例中不同制剂对大鼠肝脏组织形态的HE染色结果。

具体实施方式

下面结合附图、实施方式和实施例，对本发明作进一步详细的说明。应理解，这些实施方式和实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，提供这些实施方式和实施例的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。还应理解，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式和实施例，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本申请的保护范围。此外，在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本发明更为充分地理解，应理解，本发明可以无需一个或多个这些细节而得以实施。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述实施方式和实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

术语

除非另外说明或存在矛盾之处，本文中使用的术语或短语具有以下含义：

本文所使用的术语“和/或”、“或/和”、“及/或”的选择范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个项目，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。需要说明的是，当用至少两个选自“和/或”、“或/和”、“及/或”的连词组合连接至少三个项目时，应当理解，在本申请中，该技术方案毫无疑问地包括均用“逻辑与”连接的技术方案，还毫无疑问地包括均用“逻辑或”连接的技术方案。比如，“A及/或B”包括A、B和A+B三种并列方案。又比如，“A，及/或，B，及/或，C，及/或，D”的技术方案，包括A、B、C、D中任一项(也即均用“逻辑或”连接的技术方案)，也包括A、B、C、D的任意的和所有的组合，也即包括A、B、C、D中任两项或任三项的组合，还包括A、B、C、D的四项组合(也即均用“逻辑与”连接的技术方案)。

本发明中涉及“多个”、“多种”，如无特别限定，指在数量上大于2或等于2。例如，“一种或多种”表示一种或大于等于两种。

本文中所使用的“其组合”、“其任意组合”、“其任意组合方式”等中包括所列项目中任两个或任两个以上项目的所有合适的组合方式。

本文中，“合适的组合方式”、“合适的方式”、“任意合适的方式”等中所述“合适”，以能够实施本发明的技术方案、解决本发明的技术问题、实现本发明预期的技术效果为准。

本文中，“优选”、“更好”、“更佳”、“为宜”仅为描述效果更好的实施方式或实施例，应当理解，并不构成对本发明保护范围的限制。

本发明中，“进一步”、“更进一步”、“特别”等用于描述目的，表示内容上的差异，但并不应理解为对本发明保护范围的限制。

本发明中，“可选地”、“可选的”、“可选”，指可有可无，也即指选自“有”或“无”两种并列方案中的任一种。如果一个技术方案中出现多处“可选”，如无特别说明，且无矛盾之处或相互制约关系，则每项“可选”各自独立。本发明中，“可选地含有”、“可选地包含”等描述，表示“含有或不含有”。“可选的组分X”，表示组分X存在或不存在。

本发明中，“第一方面”、“第二方面”、“第三方面”、“第四方面”等中，术语“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。而且“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等仅起到非穷举式的列举描述目的，应当理解并不构成对数量的封闭式限定。

本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。

本发明中，涉及到数值区间(也即数值范围)，如无特别说明，可选的数值分布在上述数值区间内视为连续，且包括该数值范围的两个数值端点(即最小值及最大值)，以及这两个数值端点之间的每一个数值。如无特别说明，当数值区间仅仅指向该数值区间内的整数时，包括该数值范围的两个端点整数，以及两个端点之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并这些范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。

本发明中，涉及约数，如无特别限定，波动范围一般为±10％，也可以进一步指±8％、±5％、±3％等。本发明中的约数，既提供所列数值，也提供该约数表示的数值区间。比如，约200nm既提供了“为200nm”的技术方案，也提供了“200nm±波动范围”构成的数值区间的技术方案。

本发明中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内存在变动。应当理解的是，所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。允许在如±5℃、±4℃、±3℃、±2℃、±1℃的范围内波动。

本发明中，％(w/w)与wt％均表示重量百分比。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。除非和本申请的发明目的和/或技术方案相冲突，否则，本发明涉及的引用文献以全部内容、全部目的被引用。本发明中涉及引用文献时，相关技术特征、术语、名词、短语等在引用文献中的定义也一并被引用。本发明中涉及引用文献时，被引用的相关技术特征的举例、优选方式也可作为参考纳入本申请中，但以能够实施本发明为限。应当理解，当引用内容与本申请中的描述相冲突时，以本申请为准或者适应性地根据本申请的描述进行修正。

本文中的缩写，如无特别限定，表示以下含义：PUFA指多不饱和脂肪酸，Omega-3PUFA指Omega-3多不饱和脂肪酸，指EPA指二十碳五烯酸，DHA指二十二碳六烯酸，ALA指α-亚麻酸，DSPE指二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，PEG指聚乙二醇，TG指三甘油酯，TPGS指维生素E琥珀酸聚乙二醇酯，DSPE指二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，PC指磷脂酰胆碱，ALT指谷丙转氨酶、AST指谷草转氨酶，SOD指超氧化物歧化酶、MDA指丙二醛，NAFLD表示非酒精性脂肪性肝病。

本发明中，“EPA”单独使用时，如无特别限定，指EPA分子或某分子中的EPA单元。比如，EPA(EPA单元)在EPA甘油酯原料中的质量含量、EPA(PEA单元)与第一乳化剂中磷脂酰胆碱的质量比。

本发明中，表征磷脂的不饱和度主要采用碘值，如无特别限定，指的是平均碘值。

在本发明中所用的“高碘值磷脂”，如无特别限制，为碘值>70的磷脂，可以为更高碘值的磷脂,比如碘值≥90的磷脂。

本发明中涉及的“酶解”、“水解”，如无特别限定，指EPA进入胃肠道中胰脂肪酶对油脂的水解及重组后进入血液中被脂蛋白脂肪酶水解。进入血液循环时被脂蛋白脂肪酶水解。

本发明所用的“中链三酸甘油酯”，也称为“中链甘油三酯”，英文全称mediumchain triglycerides，简称MCT。在食品安全国家标准中，中链甘油三酯可作为食品原料或乳化剂使用。

本发明所用的“支链氨基酸”选自3种拥有一条支化侧链的氨基酸；本发明采用的支链氨基酸可采用多种氨基酸组合，能够促进机体代谢，举例如，选自亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸。

在本发明中，聚乙二醇(PEG)、聚氧化乙烯(POE)具有相同含义，可以互换使用。涉及PEG的分子量，如无特别限定指平均分子量，可以为数均分子量，也可以为重均分子量，如无特别限定指重均分子量。

本发明中，如无特别限定，“以上”、“以下”各自独立地包含本数。

在本发明中，“≥”和“大于等于”具有相同含义，可以互换使用，均表示大于或等于。“≤”和“小于等于”具有相同含义，可以互换使用，均表示小于或等于。

本发明的第一方面

根据本发明的第一方面，提供一种能够将二十碳五烯酸(EPA)高效富集于肝脏的口服微乳，其具有高含量的EPA(比如EPA在EPA甘油酯原料中的含量占比≥45％)和高碘值的磷脂(比如碘值＞70)，控制EPA和PC为合适的比例(比如≤8:1)，可以将EPA和PC协同吸收，有助于EPA口服吸收和在肝脏中富集，能够充分发挥EPA对于脂肪肝等疾病的预防和/或治疗作用。

在本发明的一些实施方式中，提供一种口服微乳，按重量百分比计，所述口服微乳的总重量百分数为100％，所述口服微乳包含如下组分：

其中，EPA在所述EPA甘油酯原料中的质量含量≥45％，甘油三酯在甘油酯成分中的质量占比≥58％；

所述第一乳化剂为碘值＞70的磷脂；

在所述第一乳化剂的磷脂成分中，磷脂酰胆碱的质量占比≥50％；

EPA与磷脂酰胆碱的质量比≤8:1；

所述第二乳化剂的成分均与第一乳化剂不同；

所述第一辅料包括肝靶向成分、PEG修饰的成分中至少一种；

所述第二辅料为食品中和/或药学上可接受的辅料，且不同于所述第一乳化剂、第二乳化剂和所述第一辅料。

第一辅料和第二辅料可以作为可选的组分。

优选地，口服微乳中的液滴平均粒径小于500nm。

在本发明的一些实施例中，口服微乳具体组分包括：EPA甘油酯原料、磷脂、其他乳化剂(非磷脂)、第一辅料(辅助EPA在肝脏富集的辅料)、水及第二辅料(其他食品中和/或药学上可接受的原辅料)。

在一些实施方式中，EPA甘油酯原料、第一乳化剂、第二乳化剂、第一辅料、第二辅料和水的重量百分数总和不超过100％，优选之一为100％。

在本发明的一些实施例中，以重量百分比计，口服微乳包含1％～50％EPA甘油酯原料、0.1％～10％高碘值磷脂(包括PC)，0.01～10％其它乳化剂(记为第二乳化剂)，0～10％辅助EPA肝脏富集的第一辅料，0～40％其它食品中和/或药学上可接受的原辅料及适量的水，其中，EPA甘油酯原料提供高含量EPA，第一辅料提供肝靶向成分和/或PEG修饰的成分。

本发明提供的口服微乳，采用高EPA纯度的EPA甘油酯原料，从而提供高含量的活性EPA，通过磷脂原料提供高碘值的磷脂(包括磷脂酰胆碱，PC)，且控制EPA与PC的质量比为合适的比例，可实现EPA与磷脂的协同吸收，进一步添加第一辅料(肝靶向成分和/或PEG修饰的成分)，可通过靶向作用和/或抑制酶解的方式促进EPA在肝脏富集，可在提高EPA的生物利用度的同时促进其在肝脏中的富集。本发明提供的口服微乳可在4至6周甚至更长的给药周期内，针对脂肪累积相关疾病，特别是针对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，对体重和肝指数实现较好的效果。

发明人经过实验探索发现，在PUFA的多种成分中，EPA是一种发挥脂肪肝等疾病治疗的关键活性脂肪酸，治疗脂肪肝的疗效与鱼油原料中EPA纯度相关性较大。因此，本发明采用高EPA含量的Omega-3多不饱和脂肪酸原料。进一步地，发明人还发现，相对于EPA EE微乳，甘油酯型EPA微乳与本发明中其他成分组合使用后能够使EPA在肝脏中的富集性更好。因此，发明人经过大量实验考察后，筛选出EPA甘油酯型原料作为提供活性脂肪酸成分的原料。进一步地，即使在高浓度下，与常见的高浓度EPA乙酯制备的制剂相比，本发明中的高浓度EPA甘油酯制备的制剂也更容易到达肝脏部位。

本发明提供的制剂是一种微乳制剂，可适于口服，优选为水包油结构。在本发明中，EPA以微乳化的形式存在，在水中溶解度大幅度提高，平均粒径小于500nm的液滴有助于小肠对难溶成分EPA的消化吸收，提高生物利用度，助力EPA到达肝脏部位。另外，本发明发现，微乳化制剂有助于减小空饱腹状态下EPA的生物利用度差异。在本发明的一些实施例中，口服微乳中的液滴平均粒径小于500nm，进一步地，平均粒径可以≤300nm，更进一步地，还可以≤250nm，更进一步地，还可以约150nm。在本发明的一些具体的实施例中，口服微乳中的液滴平均粒径约150nm～300nm。

EPA甘油酯原料

本发明提供的口服微乳含有EPA甘油酯原料。在本发明的一些实施例中，以重量百分比计，EPA甘油酯原料在口服微乳中的含量为1％～30％，进一步可以为4％～20％，具体举例如1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％等。

本发明中使用的EPA甘油酯原料的主要成分为多不饱和脂肪酸酯，包括大量的EPA酯，其中可提供高含量的EPA成分。本发明中，EPA在EPA甘油酯原料中的质量含量优选≥45％，进一步优选≥50％，更进一步优选≥57％。如果EPA甘油酯原料中EPA含量低(比如<20％)，服用后无法达到治疗足够的活性物质曝露量，而且产品中高含量的无效脂肪酸会加重患者脂肪代谢负担。本发明中，采用EPA高含量的EPA甘油酯型原料可减少无效脂肪酸的摄入，防止体内脂肪代谢负担。在有效降低肝脏合成甘油酯的同时，减少对机体其他指标可能产生的不利影响。在本发明的一些实施方式中，EPA在EPA甘油酯原料中的质量含量≥60％。在本发明的一些实施方式中，EPA在EPA甘油酯原料中的质量含量为60％～70％。EPA在EPA甘油酯原料中的质量占比的举例如57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％等。

本发明的EPA甘油酯原料中的EPA主要以EPA甘油酯的形式存在，可提供大量的活性EPA，EPA甘油酯原料中的甘油酯成分可以为甘油一酯、甘油二酯、甘油三酯中的任一种或其任意组合。优选地，甘油三酯在甘油酯成分中的质量占比≥58％，进一步优选地，甘油一酯在甘油酯成分中的质量占比小于30％，甘油二酯在甘油酯成分中的质量占比小于30％。在一些优选的实施例中，甘油三酯在甘油酯成分中的质量占比≥70％。在一些优选的实施例中，甘油三酯在甘油酯成分中的质量占比为70％、71％、72％、73％、74％、75％、78％、79％、80％、82％、85％、88％、90％、92％、95％等。

本发明中，EPA甘油酯原料可以通过天然EPA甘油三酯水解释放游离脂肪酸，分离纯化然后重新将EPA连接到甘油骨架上而合成得到，得到的EPA甘油酯可以为EPA甘油一酯、EPA甘油二酯、EPA甘油三酯中的任一种或其任意组合。

在本发明的一些实施例中，EPA甘油酯原料来自经浓缩或再酯化的EPA甘油酯。

在本发明的一些优选的实施例中，EPA甘油酯原料选自具有如下组成的EPA甘油酯中的一种或多种：EPA 57％～60％+DHA 0～10％、EPA 57％～60％+DHA 10～20％、EPA57％～60％+DHA 20～30％、EPA 57％～60％+DHA 30％～40％、EPA 60％～70％+DHA 0～10％、EPA 60％～70％+DHA 10～20％、EPA 60％～70％+DHA 20～30％、EPA 60％～70％+DHA 30％以上、EPA 70％～80％+DHA 0～10％、EPA 70％～80％+DHA 10～20％、EPA 70％～80％+DHA 20％以上、EPA 80％～90％、和EPA＞90％。具体举例如Epax6015 TGN、KinOmega 7010TG、KinOmega 6020 TG、KinOmega 6015 TG、KinOmega E80 TG、Incromega^TMTG6015、KinOmega E95 TG。

第一乳化剂(高碘值磷脂，碘值>70)

本发明中，“高碘值磷脂”指碘值>70的磷脂。第一乳化剂可以为两种以上磷脂的混合物，此时，任一种磷脂成分的碘值均满足>70。

本发明提供的口服微乳包含高碘值的磷脂(记为第一乳化剂，碘值>70)，用于实现制剂乳化。其中，磷脂酰胆碱(PC)形式的磷脂对脂肪肝的改善效果更好，推测是因为磷脂酰胆碱在化学结构上与重要的内源性磷脂一致。在本发明的一些实施例中，以重量百分比计，高碘值磷脂在口服微乳中的含量为0.1％～10％，进一步可以为0.5％～5％，具体举例如0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％、2.2％、2.4％、2.5％、2.6％、2.8％、3％、3.5％、4％、4.2％、4.5％、4.6％、4.8％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、10％等。

本发明的第一乳化剂为高碘值磷脂。在一些实施方式中，第一乳化剂为碘值≥90的磷脂。

在本发明的一些实施例中，第一乳化剂的磷脂成分中磷脂酰胆碱的质量占比≥50％，进一步可以为≥60％，更进一步可以为≥70％。举例如50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％等。发明人还发现，磷脂的不饱和度也会对药效产生影响，不饱和度较高的磷脂对脂肪肝治疗更好。可采用碘值表征磷脂的不饱和度，碘值越高表示不饱和度越高。当碘值大于70时，对于脂肪肝的治疗效果更佳。在一些实施方式中，第一乳化剂的碘值＞70，进一步可以≥90，更进一步可以≥100。在本发明的一些实施例中，第一乳化剂的碘值为80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、92、94、95、96、98、99、100、101、102、103等。在本发明的一些实施例中，第一乳化剂的磷脂成分中磷脂酰胆碱(PC)的质量占比≥50％，第一乳化剂的碘值>70，此时对于脂肪肝的治疗效果较佳。在本发明的一些优选的实施例中，第一乳化剂为多烯磷脂酰胆碱。

发明人还发现，EPA和PC的质量比也会影响药效，比值相对较低时，对治疗脂肪肝更为有利。在本发明的一些实施例中，EPA与磷脂酰胆碱的质量比≤8:1，更优选地，EPA与磷脂酰胆碱的质量比≤5:1。在本发明的一些实施例中EPA与磷脂酰胆碱的质量比为2:1、2.5:1、3:1、3.5:1、4:1、4.5:1、5:1、5.5:1等。

在本发明的一些实施例中，第一乳化剂(高碘值磷脂)的碘值≥80，EPA与磷脂酰胆碱的质量比≤8:1，此时，具有良好的降血脂效果，具有良好的脂肪肝治疗效果。进一步地，第一乳化剂的磷脂成分中磷脂酰胆碱的质量占比≥50％，更进一步可以为≥60％，更进一步可以为≥70％。

在本发明的一些实施例中，所使用的高碘值磷脂(第一乳化剂)来自大豆、蛋黄、合成磷脂。在一些实施例中，第一乳化剂中的磷脂成分来自大豆磷脂、向日葵磷脂、蛋黄磷脂和合成磷脂中的一种或多种。

在本发明的一些优选的实施例中，所使用的高碘值磷脂(第一乳化剂)为大豆来源的多烯磷脂酰胆碱。

在本发明的一些实施方式中，第一乳化剂的磷脂成分可以为经修饰的磷脂，比如，可以为PEG等亲水成分修饰的磷脂。在本发明的一些实施方式中，PEG修饰的磷脂选自DSPE-PEG-半乳糖、DSPE-PEG-甘露糖、DSPE-PEG等中的一种或多种。

本发明中的任一种磷脂成分，可以为独立的磷脂分子，也可以为磷脂分子的衍生物或者经修饰的磷脂。

口服微乳中的磷脂成分并不局限于由第一乳化剂提供，还可以由第二乳化剂提供。但第二乳化剂提供的磷脂成分并非碘值>70的磷脂。第二乳化剂中的磷脂成分也可以为上述经修饰的磷脂。

第一乳化剂在口服微乳中也可以同时发挥其他功能，比如，还可以同时作为第一辅料，比如可以为高碘值磷脂修饰的肝靶向分子，也可以为PEG修饰的高碘值磷脂。具体举例如，DSPE-甘草次酸、DSPE-透明质酸、DSPE-PEG-半乳糖、DSPE-PEG-甘露糖、DSPE-PEG-甘草次酸等。

在一些实施方式中，在口服乳液的所有磷脂成分中，碘值>70的磷脂的质量占比大于90％。

在一些实施方式中，在口服乳液的所有磷脂成分中，碘值≥90的磷脂的质量占比大于90％。

第二乳化剂

本发明中的第二乳化剂中不包含与第一乳化剂相同的成分。也即第二乳化剂由不同于第一乳化剂的成分组成。

本发明的一些实施方式中，口服微乳中的乳化剂成分除了第一乳化剂(高碘值磷脂)外，还可以包括其他乳化剂(记为第二乳化剂)，起到灵活控制乳化的作用。在本发明的一些实施方式中，第二乳化剂选自其他磷脂(不同于第一乳化剂中的磷脂)、蔗糖酯、柠檬酸脂肪酸甘油酯、脂肪酸甘油酯、聚山梨酯、脂肪酸山梨坦、聚氧乙烯脂肪酸酯、司盘、泊洛沙姆、海藻酸盐(独立地优选海藻酸钠)、酪蛋白酸盐(独立地可以为酪蛋白酸钠)等中的一种或多种。在本发明的一些实施例中，以重量百分比计，第二乳化剂在口服微乳中的含量为0.01％～10％，进一步可以为0.1％～5％，具体举例如0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％、2.2％、2.4％、2.5％、2.6％、2.8％、3％、3.5％、4％、4.2％、4.5％、4.6％、4.8％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、10％等。

在一些实施方式中，第二乳化剂为不包含高碘值磷脂的乳化剂。

在一些实施例中，第二乳化剂不包含高碘值的磷脂酰胆碱。

在一些实施方式中，第二乳化剂中包含磷脂成分，但这些磷脂成分不同于第一乳化剂，也即不为高碘值磷脂。

在一些实施例中，第二乳化剂包含磷脂成分，但均为饱和磷脂。

在一些实施例中，第二乳化剂中不含磷脂酰胆碱成分。

在一些实施例中，第二乳化剂中不含磷脂成分。

第一辅料

本发明中可选的包含第一辅料。第一辅料用于提供辅助EPA富集于肝脏的辅料。发明人研究发现，提高EPA在肝脏的富集有利于充分发挥EPA对于脂肪肝等疾病的预防及治疗作用。EPA与体内磷脂、胆固醇和载脂蛋白组成乳糜微粒通过淋巴转运进入体内。添加具有肝脏靶向效果的辅料，可在吸收过程随EPA、磷脂等共同组成乳糜微粒，选择性地把EPA输送到肝脏部位。降低酶解作用的辅料可通过减少运送过程中其他组织部位对EPA的摄取，间接实现EPA的肝脏富集。

在本发明的一些实施例中，以重量百分比计，第一辅料在口服微乳中的含量为0～10％，进一步可以为0.05％～5％。具体举例如0％、0.01％、0.02％、0.05％、0.06％、0.08％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％、2.2％、2.4％、2.5％、2.6％、2.8％、3％、3.5％、4％、4.2％、4.5％、4.6％、4.8％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、10％等。

在本发明的一些实施方式中，第一辅料为具有肝脏靶向效果的辅料、降低酶解作用的辅料等中至少一种。在本发明的一些实施方式中，第一辅料为肝靶向成分、PEG修饰的成分(例如PEG修饰的脂类成分)中至少一种。

其中，具有肝脏靶向效果的辅料包含肝靶向成分。肝靶向成分可以靶向脂肪肝等疾病病灶处的细胞表面、结合肝细胞膜上相应受体等。肝靶向成分可以为独立的分子(比如甘草次酸、胆汁酸等)，也可以为某个分子的一部分(比如DSPE-甘草次酸等)。在一些实施方式中，肝靶向成分选自肝靶向分子和经修饰的肝靶向分子中的一种或多种，进一步地，经修饰的肝靶向分子中可以含有PEG修饰单元和脂类修饰单元(包括但不限于磷脂修饰单元)中的一种或多种。在本发明的一些实施方式中，肝靶向成分选自甘草次酸及其衍生物、半乳糖及其衍生物、甘露糖及其衍生物、透明质酸及其衍生物、胆汁酸及其衍生物等中的一种或多种。在本发明的一些实施例中，肝靶向成分含有DSPE-PEG-半乳糖、DSPE-PEG-甘露糖、DSPE-甘草次酸、DSPE-PEG-甘草次酸、DSPE-透明质酸等中的一种或多种。在本发明的一些实施方式中，甘草次酸的衍生物、胆汁酸衍生物、透明质酸衍生物各自独立地优选为相应的磷脂衍生物，进一步可以为磷脂酰乙醇胺衍生物。甘草次酸的衍生物举例如DSPE-甘草次酸、甘草次酸琥珀酸酯等。透明质酸衍生物举例如DSPE-透明质酸等。在本发明的一些实施方式中，肝靶向成分含有甘草次酸及其衍生物，进一步地，甘草次酸及其衍生物选自甘草次酸的脂溶性衍生物。在本发明的一些实施方式中，肝靶向成分选自甘草次酸及其衍生物，进一步地，甘草次酸及其衍生物选自甘草次酸、DSPE-甘草次酸、DSPE-PEG-甘草次酸、甘草次酸琥珀酸酯等中的一种或多种。

在一些实施例中，肝靶向成分选自肝靶向分子和经修饰的肝靶向分子中的一种或多种，进一步地，经修饰的肝靶向分子中含有PEG修饰的脂质单元和无PEG修饰的脂质修饰单元中的一种或多种；更进一步地，无PEG修饰的脂质修饰单元的举例如普通脂类修饰单元，进一步如脂肪酸酯修饰单元。

其中，降低酶解作用的辅料，指的是降低EPA被脂肪酸酶的降解。在一些实施方式中，降低酶解作用的辅料包含PEG修饰的成分，可以在微乳液滴的表面形成PEG保护层。在一些优选的实施方式中，PEG修饰的成分为PEG修饰的脂类成分和/或聚乙二醇单甲醚修饰的脂类成分。PEG修饰的脂类成分为两亲性分子，可以参与乳化，PEG作为亲水端溶于水相，疏水的脂质部分被包于油相，因此，可以为乳化液滴的表面形成PEG的保护层，起到防止酶解的作用。PEG修饰的脂类分子中可以仅包含PEG和脂质(比如聚乙二醇脂肪酸酯、聚乙二醇磷脂等)，也可以还包含其它成分(比如DSPE-PEG-半乳糖)。

在本发明的一些实施方式中，PEG修饰的成分选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、聚乙二醇-硬脂酸酯、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、大豆磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇单甲醚、聚乙二醇油酸酯、聚乙二醇月桂酸酯等中的一种或多种。

在本发明的一些实施方式中，PEG修饰的成分选自PEG修饰的磷脂、PEG修饰的维生素E酯中的一种或多种。

在本发明的一些实施方式中，PEG修饰的成分选自DSPE-PEG-半乳糖、DSPE-PEG-甘露糖、DSPE-PEG、PEG-硬脂酸酯等中的一种或多种。

在本发明的一些实施方式中，PEG修饰的成分为维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)PEG硬脂酸酯和/或DSPE-PEG。

在本发明的一些实施方式中，具有肝脏靶向效果的辅料为甘草次酸及其衍生物、透明质酸及其衍生物和/或胆汁酸。

应当理解，本发明的中组分可以不止发挥一种功能，举例如口服微乳中的PEG修饰的成分(具体举例如维生素E聚乙二醇琥珀酸酯、PEG硬脂酸酯、DSPE-PEG)，可以同时作为乳化剂(第一乳化剂或第二乳化剂)以及第一辅料。以PEG和肝靶向分子修饰的磷脂为例(具体举例如DSPE-PEG-半乳糖、DSPE-PEG-半乳糖)，既可以作为肝靶向辅料，也可以作为降低酶解作用的辅料。

口服微乳中的PEG成分并不局限于由第一辅料中的PEG修饰的成分提供，还可以由第一乳化剂、第二乳化剂、肝靶向成分等同时提供。比如，PEG修饰的高碘值磷脂(碘值>70)可同时作为第一乳化剂和PEG修饰的成分。比如，PEG修饰的普通磷脂(非碘值磷脂)可同时作为第二乳化剂和PEG修饰的成分。比如，PEG修饰的肝靶向分子可以同时作为肝靶向成分和PEG修饰的成分。还比如，磷脂-PEG-肝靶向分子可以同时作为乳化剂、PEG修饰的成分和肝靶向成分。在一些实施方式中，口服微乳包含磷脂-PEG-肝靶向分子，其中的磷脂单元可以为高碘值磷脂，也可以不为高碘值磷脂。

当PEG单元在口服微乳的组分中提供端基时，PEG单元的端基可以为OH或单甲醚。

在一些实施方式中，口服微乳为PEG修饰的微乳，进一步地，PEG修饰的原料在口服微乳的重量百分比可以为0.01％～10％，举例如0.05％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％等。

第一辅料中起到EPA富集作用的任一种PEG修饰的成分，其中的PEG单元的分子量各自独立地优选500Da～5000Da。举例如1000Da、2000Da等。

第二辅料

本发明中的第二辅料不同于第一乳化剂、第二乳化剂以及第一辅料。

本发明中可选的包含第二辅料。第二辅料可以选自营养补充剂、抗氧化剂、助乳化剂、油脂、矫味剂、pH调节剂等中的一种或多种。

在本发明的一些实施例中，以重量百分比计，第二辅料在口服微乳中的含量为0～40％，进一步可以为1％～20％。具体举例如0％、0.5％％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％等。

在一些实施方式中，营养补充剂可选自维生素A、维生素E(如α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚、δ-生育三烯酚等)、维生素B族(如维生素B1、维生素B2、烟酸、泛酸、维生素B6、维生素B12、叶酸、维生素B7等)、维生素D、水飞蓟素、葡甘露聚糖、支链氨基酸等中的一种或多种。

在一些实施方式中，抗氧化剂可选自亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、维生素C及其酯类、生育酚及其酯类等中的一种或多种。

在一些实施方式中，助乳化剂可选自丙三醇、丙二醇、甘露醇、油酸、油酸钠、胆固醇等中的一种或多种。

在一些实施方式中，油脂选自大豆油、中链三酸甘油酯、橄榄油、亚麻籽油、核桃油、沙棘油、薏米油、葡萄籽油、生姜油、椰子油、山茶油、玫瑰油、薄荷油、柠檬油等中的一种或多种。

在一些实施方式中，矫味剂可选自水果口味香精、赤藓糖醇、天然植物香料、甜味剂等中的一种或多种。

在一些实施方式中，pH调节剂可选自于各类缓冲盐体系(如柠檬酸-柠檬酸钠、醋酸-醋酸钠、磷酸盐剂等)、碱(如NaOH等)，酸(如HCl等)等中的一种或多种。pH调节剂主要用于调节制备口服微乳时水相的pH环境。

本发明中，口服微乳中的水作为溶剂，可以为纯化水、蒸馏水等，只要适于制备口服制剂即可。水在口服微乳的用量为适量的水，只要能够制成本发明所需粒径的口服微乳即可。适量的水使口服微乳具有合适的油相和水相比例，进行可以形成水包油结构。本发明提供的口服微乳包含油相成分和水相成分，在一些实施例中，油相成分的重量百分数≤30％。在本发明的一些实施方式中，水在口服微乳中的最低重量百分比为65％，但各组分的重量百分比总和不超过100％。在本发明的一些实施方式中，水在口服乳剂中的重量百分比为65％～95％，优选70％～94％，举例如70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％。

口服微乳的一些实施例

在本发明的一些优选的实施方式中，按重量百分比计，口服微乳包含如下组分：

本发明提供的口服微乳具有水包油结构，其中，EPA甘油酯原料等油相组分形成于油相，乳化剂等水相组分形成于水相。

以下为以1g作为1质量份的一些实施方式，应当理解，也可以以其他的质量值作为1质量份。

在本发明的一些实施方式中，口服微乳为PEG修饰的微乳，进一步可以包含总质量占比为0.01％～10％的PEG修饰的原料，进一步可以为0.05％～5％，举例如0.01％、0.02％、0.04％、0.05％、0.08％、0.1％、0.2％、0.4％、0.5％、0.8％、1.0％、1.2％、1.4％、1.5％、1.8％、2％、2.2％、2.5％、2.8％、3.0％、3.3％、3.5％、3.8％、4.0％、4.2％、4.5％、4.8％、5.0％述PEG修饰的成分可以由第一乳化剂(例如PEG修饰的磷脂)、第二乳化剂(举例如聚氧乙烯脂肪酸酯)、第一辅料(如其中的PEG修饰的成分)中的一种或多种提供。

在本发明的一些实施例中，口服微乳包括鱼油(提供EPA甘油酯原料)、高碘值磷脂(举例如大豆磷脂等)、蔗糖酯、抗氧化剂(如α-生育酚)、营养补充剂(可选)、NaOH和水，进一步地，口服微乳包括10g～400g鱼油、1g～60g高碘值磷脂、0.1g～6g蔗糖酯、0.5g～6g抗氧化剂、0～6g营养补充剂、NaOH和水。各组分的种类、规格/型号、用量进一步可参考实施例1.1部分。

在本发明的一些实施例中，口服微乳包括鱼油(提供EPA甘油酯原料)、高碘值磷脂(举例如蛋黄磷脂、大豆磷脂、多烯磷脂酰胆碱等)、生育酚、NaOH和水，进一步地，口服微乳包括10g～200g鱼油(进一步如20g～100g)、3g～25g高碘值磷脂(进一步如4g～20g)、0.5g～5g生育酚(进一步如0.6g～3g)、NaOH和水。各组分的种类、规格/型号、用量进一步可参考实施例1.2部分。

在本发明的一些实施例中，口服微乳包括鱼油(提供EPA甘油酯原料)、高碘值磷脂(举例如大豆磷脂等)、胆汁酸、甘草次酸、生育酚、NaOH和水，进一步地，口服微乳包括10g～200g鱼油(进一步如50g～100g)、1g～35g高碘值磷脂(进一步如2g～30g)、0～15g胆汁酸(进一步如0.1g～15g，更进一步如0.5g～10g)、0～6g甘草次酸(进一步如1g～6g，更进一步如1.2g～5g)、0～6g生育酚(进一步如0～5g，更进一步如0.5g～5g)、0.1～6g营养补充剂(进一步如0.5～5g，更进一步如1g～5g)NaOH和水。各组分的种类、规格/型号、用量进一步可参考实施例1.3部分。

在本发明的一些实施例中，口服微乳包括鱼油(提供EPA甘油酯原料)、高碘值磷脂(举例如大豆磷脂等)、DSPE-PEG、PEG-硬脂酸酯、生育酚、NaOH和水，进一步地，口服微乳包括5g～200g鱼油(进一步如10g～100g)、1g～35g高碘值磷脂(进一步如2g～30g)、0～8gDSPE-PEG(进一步如0.5g～10g，更进一步如0.5g～6g)、0～8g PEG-硬脂酸酯(进一步如0.5g～8g，更进一步如0.5g～6g)、0.1g～6g生育酚(进一步如0.1g～5g，更进一步如0.5g～5g)、NaOH和水。各组分的种类、规格/型号、用量进一步可参考实施例1.4部分。

在本发明的一些实施例中，口服微乳包括鱼油(提供EPA甘油酯原料)、高碘值磷脂(举例如大豆磷脂等)、甘草次酸琥珀酸酯、DSPE-PEG、DSPE-PEG-半乳糖、生育酚、NaOH和水，进一步地，口服微乳包括5g～200g鱼油(进一步如10g～100g)、1g～35g高碘值磷脂(进一步如2g～30g)、0～12g甘草次酸琥珀酸酯(进一步如0～10g，更进一步如1g～10g)、0～8gDSPE-PEG(进一步如0.5g～8g，更进一步如0.5g～6g)、DSPE-PEG-半乳糖、0.1g～6g生育酚(进一步如0.1g～5g，更进一步如0.5g～5g)、NaOH和水。各组分的种类、规格/型号、用量进一步可参考实施例1.5部分。

本发明的第二方面

根据本发明的第二方面，提供一种口服微乳的制备方法，可用于制备本发明的第一方面所述口服微乳。

在本发明的一些实施方式中，所述口服微乳的制备方法包括如下步骤：

S100，制备油相(优选在惰性气体保护下进行)：将包括所述EPA甘油酯原料的油相组分在加热条件(优选50℃～70℃)下制备油相；

S200，制备水相(优选在惰性气体保护下进行)将包括所述磷脂的水相组分与水性溶剂混合，在加热条件下(优选50℃～70℃)制备水相；

S300，水包油乳化：将所述油相和所述水相进行混合(优选在加热条件下进行混合，进一步优选50℃～70℃)，剪切搅拌，制备水包油的微乳；

S400，均质乳化：将所述水包油的微乳进行高压均质处理，制得液滴粒径小于500nm的纳米乳，得到未经灭菌的口服微乳。

可选地，在所述步骤S400之后，还进行步骤S500，后处理(优选在惰性气体保护下进行)：将所述纳米乳进行过滤、封装、灭菌，得到所述口服微乳(为经灭菌口服微乳)；

所述口服微乳的制备过程中使用惰性气体保护的，可以为氮气保护。

应当理解，上述制备方法的各步骤，如无特别指明，没有顺序的限制。比如，S100和S200的步骤不区分先后顺序，但两者均在S300之前。又比如，封装、灭菌之间无顺序限定。

本文所用的“水性溶剂”指提供药学上可接受的提供水相的溶剂，可以为水，也可以为水和其它溶剂构成的混合溶剂。

在一些实施方式中，将pH调节剂与水混合(用pH调节剂调节水溶液的pH值)，得到水性溶剂，用于后续制备。水性溶剂的pH值根据最终制备的微乳的pH进行调节，进而选择合适的pH调节剂。在一些实施方式中，最终微乳的pH为7～8。

在本发明的一些实施方式中，所述口服微乳的制备方法包括如下步骤：

S100：在惰性气体保护下配制将油相组分搅拌混合，直至形成均一的油溶液，水浴加热至50℃～70℃，制得油相；优选地，所述惰性气体为氮气；

S200：惰性气体保护下将配方中的水相组分配制成水性体系，搅拌溶解直至形成均一的水溶液，水浴加热至50℃～70℃，制得水相；优选地，所述惰性气体为氮气；

S300：将所得水相与油相混合，通过剪切和/或高压均质形成水包油的微乳，水浴加热至50℃～70℃；

优选地，所述的制备方法进一步还包括：S400：将所得水包油的微乳进行过滤、灭菌和包装，过程中采用惰性气体保护。

上述的制备方法中，涉及均质处理的，优选采用高压均质处理。

在一些实施例方式中，均质处理的参数为：20bar压力下均质一遍，200bar压力下均质一遍，400bar压力下均质六遍。

在指定原料的种类和用量的情况下，本领域技术人员能够按照上述的指引实施上述的制备方法，得到本发明的所述口服微乳。

发明人通过研究发现，本发明提供的平均粒径小于500nm的口服微乳，可包含辅助EPA在肝脏富集的辅料，从而极大促进肠细胞吸收以及吸收后的EPA在肝脏中的富集，帮助EPA最大程度发挥功效。

本发明的第三方面

根据本发明的第三方面，提供本发明的第一方面所述口服微乳，或本发明的第二方面所述的制备方法获得的所述口服微乳的应用。

在本发明的一些实施方式中，提供所述口服微乳在制备药物中的应用，优选地，所述药物用于预防和/或治疗脂肪累积相关疾病。

在本发明的一些实施方式中，提供所述口服微乳在制备预防和/或治疗脂肪累积相关疾病的药物中的应用。

在本发明的一些优选的实施方式中，所述脂肪累积相关疾病选自脂肪肝、肝损伤、肝炎中的一种或多种，优选地，所述脂肪肝为非酒精性脂肪肝。

在本发明的一些实施方式中，提供所述口服微乳在医学食品、保健食品中的应用。

本发明的一个方面

本发明的另一个目的在于提供上述口服微乳的应用，包括但不限于在医学食品、保健食品、药品等方面的应用。

在本发明的一些实施方式中，提供所述口服微乳在制备用于脂肪肝的预防和/或治疗的保健食品、药品中的用途。

本发明的第四方面

根据本发明的第四方面，提供了一种预防和/或治疗脂肪累积相关疾病的方法，包括给予所需患者治疗有效量的本发明所述口服。

如本文所用，“治疗有效量”是指将引起个体的生物学或医学响应的本发明口服微乳的量(或者EPA的量)，例如为个体带来生理和/或药理上积极效果的本发明口服微乳的量(或者EPA的量)，所述生理和/或药理上积极效果包括但不限于降低或抑制酶或蛋白质活性或改善症状、缓解病症、减缓或延迟疾病进程或预防疾病等。

如本文所用，“药学上可接受的”指在合理医学判断范围内适于施用患者且与合理益处/风险比相称的那些试剂、材料、组合物和/或剂型。

如本文所用，“患者”是指一种动物，优选为哺乳动物，更好的为人。术语“哺乳动物”主要是指温血脊椎类哺乳动物，包括但不限于：如猫、狗、兔、熊、狐狸、狼、猴子、鹿、鼠、猪、牛、羊、马和人类。

具体实施例

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，这些实施例只是为了举例说明本发明，旨在说明本发明的具体配方组成、制备方法及其功能和效果等方面，不应理解为对本发明范围的任何形式的限制。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，优先参考本发明中给出的指引，还可以按照本领域的实验手册或常规条件，还可以按照制造厂商所建议的条件，或者参考本领域已知的实验方法。

下述的具体实施例中，涉及原料组分的量度参数，如无特别说明，可能存在称量精度范围内的细微偏差。涉及温度和时间参数，允许仪器测试精度或操作精度导致的可接受的偏差。

下述各例中，采用Zetasizer Nano ZS 90(马尔文)激光粒度仪测试粒径。

下述实施例及对比例中使用的EPA原料、磷脂原料的信息如表1所示。

表1.本发明的实施例及对比例中使用的EPA原料、磷脂原料的信息。

其中，鱼油中的EPA含量指的是EPA单元的量，甘油三酯含量是指鱼油中各种脂肪酸的三甘油酯的总含量。表1中涉及的百分含量均为质量百分比。

以下实施例中，EPA TG表示EPA甘油酯，EPA EE表示EPA乙酯，PC表示磷脂酰胆碱，MeOH表示甲醇，BHT表示2,6-二叔丁基对甲酚(抗氧化剂)，TG表示甘油三酯，TC表示总胆固醇、ALT表示谷丙转氨酶、AST表示谷草转氨酶。

以下各例中，“高EPA TG含量微乳”、“高含量EPA TG微乳”具有相同含义，可以互换使用；“高EPA含量微乳”、“高含量EPA微乳”具有相同含义，可以互换使用。

1.制剂实施例

下述实施例中，采用包括如下步骤的方法制备口服微乳(各对比例中，参照下述方法制备微乳)。

S1、制备油相：将包含甘油酯型EPA原料、生育酚等油相成分在氮气气体保护下搅拌混合，直至形成均一的油溶液，水浴加热至65℃，备用；

S2、制备水相：将纯化水用pH调节剂调节pH，制得所需pH的水性溶剂，将磷脂(以大豆磷脂为示例)和其他水溶性原辅料成分加入至配制的水性溶剂中，搅拌溶解直至形成均一的水溶液，水浴加热至65℃，备用；

S3、制备微乳：在氮气保护下，将水相在剪切下加入油相，通过剪切搅拌形成水包油的微乳；

S4、均质乳化：通过高压均质，参数为20bar压力下均质一遍，200bar压力下均质一遍，400bar压力下均质六遍，制得液滴粒径小于500nm的纳米乳；

S5、过滤封装：将纳米乳经过0.5μm～1.0μm的滤膜过滤后，灌装，充氮，密封，得到灌装纳米乳；

S6、高压灭菌：将灌装纳米乳在高压灭菌器中灭菌后，得到口服微乳，可作为药用制剂。

其中，所采用的甘油酯型EPA原料为多不饱和脂肪酸甘油酯(PUFA甘油酯)，有的商品名称为鱼油，所采用的甘油酯型EPA原料中的EPA具有高含量，质量百分数至少为40％，一些实施例中具体约40％、60％、70％。

以下实施例和对比例中，除甘油酯型EPA原料、生育酚以外的油相成分涉及甘草次酸琥珀酸酯、PEG-硬脂酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、单油酸甘油酯、水飞蓟素、α-生育酚醋酸酯、维生素A；其他水溶性原辅料成分涉及蔗糖酯、胆汁酸、甘草次酸、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、DSPE-PEG、DSPE-PEG-半乳糖、透明质酸、泊洛沙姆、支链氨基酸、酪蛋白酸钠、复合维生素B、维生素C、维生素D、葡甘露聚糖、海藻酸钠。对比例2中，EPA乙酯作为甘油酯型EPA原料的替代物用于S1步骤制备油相。

以下实施例中，采用碘值表征磷脂的不饱和度。

实施例1.1制备包含不同比例EPA甘油酯(EPA TG)和磷脂酰胆碱(PC)的微乳

根据表2中各处方制备包含不同比例EPA TG和磷脂酰胆碱的口服微乳。其中制剂1-2、制剂1-8、制剂1-10中鱼油来自Epax公司的EPAX 4030TGN，根据产品说明书，每100g中含EPA 40g，甘油三酯的含量大于等于90％。制剂1-4、制剂1-9、制剂1-13中鱼油来自KinOmega 7010TG，根据产品说明书，其中约含EPA 70％，甘油三酯的含量约为70％。制剂1-1、制剂1-11中鱼油来自KinOmega E80 TG，根据产品说明书，其中约含EPA 80％，甘油三酯的含量约为70％。其它制剂中鱼油来自Epax公司的EPAX 6015 TGN，根据产品说明书，其中约含EPA 60％，甘油三酯含量大于等于90％。制剂1-2、1-12中的磷脂来源于上海太伟药业有限公司的大豆磷脂，磷脂酰胆碱含量约为50％，碘值大于90；制剂1-10、1-13中磷脂来源于美国嘉吉公司的多烯磷脂酰胆碱EPIKURON200，碘值约为94～97；其他制剂中磷脂来自德国Lipoid大豆磷脂S75，磷脂酰胆碱含量为70％，碘值为85～95。制剂1-1、1-3、1-12中的第二乳化剂为海藻酸钠，抗氧化剂为维生素C，营养补充剂为支链氨基酸组合物；制剂1-10、1-13中的第二乳化剂为酪蛋白酸钠，抗氧化剂为抗坏血酸棕榈酸酯，营养补充剂为水飞蓟素；其他制剂中第二乳化剂为蔗糖酯，抗氧化剂为α-生育酚，营养补充剂为复合维生素B。

表2.高含量EPA TG微乳的各种处方及微乳粒径

其中，NaOH“调pH”是指在上述步骤S2中调节最终微乳的pH至相应范围，纯化水“至1kg”是指在上述步骤S2中添加纯化水至整个体系为1kg。以下各例中表示相同含义。

其中，“粒径”指制备相同处方及制备工艺下，微乳的平均粒径在不同批次中的范围。以下各例中表示相同含义。按照表2中处方可制备得到不同比例EPATG和磷脂酰胆碱的微乳，微乳的液滴粒径均小于500nm。其中，实施例中制剂1-10至制剂1-13四组的油相比例较高，得到的微乳较粘稠，饮用时产生不适，均不适合作为后续生产的处方。

实施例1.2制备包含不同碘值的磷脂的EPA TG微乳

根据表3中各成分种类及用量制备包含不同碘值的磷脂的微乳。其中，制剂2-1至制剂2-5的四组中，鱼油来自Epax公司的EPAX 6015TGN；制剂2-6至制剂2-9的五组中，鱼油来自KinOmega 7010TG。蛋黄卵磷脂E80(具体为蛋黄磷脂酰胆碱，碘值为60～70)、大豆磷脂S75(具体为大豆磷脂酰胆碱，碘值约为85～95)、大豆磷脂S100(具体为大豆磷脂酰胆碱，碘值为97～107)来自德国Lipoid。多烯磷脂酰胆碱EPIKURON200(碘值约为94～97)来自美国嘉吉公司。制剂2-1、2-2、2-3、2-4中的抗氧化剂为α-生育酚；制剂2-5、2-6、2-7、2-8中的抗氧化剂为抗坏血酸棕榈酸酯。

表3.包含不同碘值的磷脂的EPA TG微乳处方及微乳粒径

其中，“-”表示用量为0。

按照表3中处方可制备形成稳定性良好的微乳，微乳的液滴粒径小于500nm，可用作口服微乳，其中磷脂S75乳化效果较好，磷脂S100乳化效果较差。

实施例1.3.制备含有肝靶向效果辅料的EPA TG微乳

根据表4中各成分种类及用量制备含有肝靶向效果辅料(具体为胆汁酸、甘草次酸)的EPA TG微乳。其中制剂3-1至制剂3-7的七组中鱼油来自Epax公司的EPAX 6015TGN，制剂3-8至制剂3-10的三组中鱼油来自KinOmega 7010TG。制剂3-2、3-8、3-9中的磷脂来源于美国嘉吉公司的多烯磷脂酰胆碱EPIKURON200，碘值约为94～97；其他制剂中磷脂来自德国Lipoid大豆磷脂S75，磷脂酰胆碱含量为70％，碘值为85～95。制剂3-1、3-2、3-3中的第二乳化剂为泊洛沙姆，抗氧化剂为抗坏血酸棕榈酸酯，营养补充剂为葡甘露聚糖；制剂3-4、3-5、3-6、3-7中的第二乳化剂为酪蛋白酸钠，抗氧化剂为α-生育酚醋酸酯，营养补充剂为复合维生素B；其他制剂中第二乳化剂为蔗糖酯，抗氧化剂为α-生育酚，营养补充剂为维生素A。

表4.包含肝靶向效果辅料的EPA TG微乳的不同处方及微乳粒径

其中，“-”表示用量为0。

按照表4中处方可制备形成稳定性良好的微乳，微乳的液滴粒径小于500nm，可用作口服微乳。甘草次酸、胆汁酸具有两亲性，一方面起到辅助乳化的作用，另一方面吸收后与随油脂包裹进乳糜微粒增加肝脏靶向。

实施例1.4.制备包含具有降低酶解作用的辅料的EPA TG微乳

根据表5中各成分种类及用量制备包含具有降低酶解作用的辅料的微乳。其中制剂4-1至制剂4-7的七组中鱼油来自Epax公司的EPAX 6015TGN，制剂4-8至制剂4-10的三组中鱼油来自KinOmega 7010TG。制剂4-4、4-9、4-10中的磷脂来源于德国Lipoid大豆磷脂S100，碘值约为94～97；其他制剂中磷脂来自德国Lipoid大豆磷脂S75，磷脂酰胆碱含量为70％，碘值为85～95。制剂4-1、4-2、4-3中的第二乳化剂为泊洛沙姆，抗氧化剂为抗坏血酸棕榈酸酯，营养补充剂为支链氨基酸；制剂4-4、4-5、4-6、4-7中的第二乳化剂为酪蛋白酸钠，抗氧化剂为α-生育酚，营养补充剂为复合维生素B；其他制剂中第二乳化剂为单油酸甘油酯，抗氧化剂为维生素C，营养补充剂为维生素D。

其中，具有降低酶解作用的辅料为维生素E琥珀酸聚乙二醇酯和/或PEG-硬脂酸酯，其中的PEG的重均分子量分别为1000Da和2000Da。

表5.包含具有降低酶解作用的辅料的EPA TG微乳的不同处方及微乳粒径

其中，“-”表示用量为0。

按照表5中处方可制备形成稳定性良好的微乳，微乳的液滴粒径小于500nm，可用作口服微乳。在水相中添加PEG修饰维生素E琥珀酸酯和/或硬脂酸酯，制得的微乳液滴的表面被PEG所包裹，从而可以起到一定的防止EPA被其他组织水解利用的作用。

实施例1.5.制备含有肝靶向效果辅料和具有降低酶解作用的辅料的EPA TG微乳

根据表6中各成分种类及用量制备含有肝靶向辅料和具有降低酶解作用的辅料的EPA TG微乳。其中，制剂5-1至制剂5-7的七组中鱼油来自Epax公司的EPAX 6015 TGN，制剂5-8至制剂5-10的三组中鱼油来自KinOmega 7010TG。制剂4-4、4-9、4-10中的磷脂来源于德国Lipoid大豆磷脂S100，碘值约为94～97；其他制剂中磷脂来自德国Lipoid大豆磷脂S75，磷脂酰胆碱含量为70％，碘值为85～95。制剂4-1、4-2、4-3中的抗氧化剂为抗坏血酸棕榈酸酯；制剂4-4、4-5、4-6、4-7中的抗氧化剂为α-生育酚；其他制剂中抗氧化剂为维生素C。

其中，肝靶向辅料选用甘草次酸琥珀酸酯。具有降低酶解作用的辅料选用DSPE-PEG和DSPE-PEG-半乳糖，其中的PEG的重均分子量均为2000Da。

表6.包含肝靶向效果辅料和具有降低酶解作用的辅料的EPA TG微乳的不同处方及微乳粒径

其中，“-”表示用量为0。

按照表6中处方可制备形成稳定性良好的微乳，微乳的液滴粒径小于500nm，可用作口服微乳。制得的微乳液滴的表面被PEG所包裹，为微乳液滴提供防降解的保护作用。

制剂对照例

参考“1.制剂实施例”中制备口服微乳的方法进行制备下述对照例中的微乳，对照例1中采用市售普通鱼油代替制剂实施例中具有高EPA含量的鱼油(高含量EPA鱼油)，对照例2中采用EPA乙酯(高含量EPA乙酯)代替制剂实施例中的高含量EPA鱼油。

对照例1.制备包含市售普通鱼油的微乳

采用市售的普通鱼油，根据7表中各成分及用量制备微乳。制剂D1-1至制剂D1-4四组采用的鱼油均为市售鱼油，来自鱼油软胶囊(汤臣倍健股份有限公司)中所采用的挪威/冰岛进口的鱼油，根据产品说明书，每100g鱼油中含有EPA 18.3g，DHA 12.9g，甘油三酯含量为98％。制剂D1-1至制剂D1-4四组中大豆磷脂来自德国Lipoid S75，磷脂酰胆碱含量为70％，碘值为85～95。

表7.包含市售普通鱼油、甘草次酸和DSPE-PEG的微乳的不同处方

对照例2.制备包含不同比例EPA乙酯的微乳

根据表8中各制剂处方制备包含EPA乙酯的微乳。制剂D2-1至制剂D2-4四组采用EPA乙酯作为鱼油的替代物，所用的EPA乙酯来自

中所采用的原料，根据产品说明书，每100g油中含有EPA乙酯96g以上。四组制剂中大豆磷脂均来自德国Lipoid S75，磷脂酰胆碱含量为70％，碘值为85～95。

表8.包含EPA乙酯、透明质酸和DSPE-PEG的微乳的不同处方及微乳粒径

2.制剂动物体内评价

实施例2.1.微乳制剂提高生物利用度的效果评价

2.1.1.实验动物

雄性比格犬(上海实验动物研究中心)，体重10kg左右。

2.1.2.本实施例分为4个对照组和4个实验组，其中对照组包括：市普通鱼油微乳(制剂D1-2)、EPAX 6015 TGN原料(原料组)、EPAX 6015 TGN原料(原料组，空腹)、EPA EE微乳(制剂D2-2)；实验组包括：制剂1-6、制剂5-7、制剂1-6(空腹)、制剂5-7(空腹)。各组折合EPA给药剂量为120mg/kg。

2.1.3.实验方法：将比格犬随机分为8组，每组6只，实验前除了空腹组外不禁食，不禁水，空腹组禁食12h，不禁水。给比格犬分别灌胃给予相应受试物，分别在给药0.5h、1h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h后采血2mL，收集于肝素化管中，于4℃、3000rpm条件下离心10min，分离血浆取上清液，于-20℃保存待测定其药物浓度。

2.1.4.采用甲酯化-GC法检测血浆中总EPA含量。GC色谱条件为(88％-氰丙基)芳基-聚硅氧烷毛细管柱(60m×0.25mm×0.2μm)，程序升温，0min 170℃，3.5℃/min的速度升至240℃，保持10min，进样器温度为250℃，检测器温度为270℃。载气为氦气，流速1.0mL/min。分流比：10:1。进样体积1μL。

步骤一：取干净的干燥具塞玻璃试管，加入300μg/mL二十一烷酸甲酯(内标)100μL，N₂吹干后，加入血浆200μL，0.5mol/L KOH-MeOH溶液2mL，0.5mL BHT的异辛烷溶液，盖盖密封，涡旋60s，混合均匀后，静置10min～15min，收集异辛烷层，置于已加入少量无水硫酸钠的干净进样小瓶中。

步骤二：向步骤一的下层溶液中加入2mL 5％(v/v)的H₂SO₄-MeOH溶液，溶液表面微充N₂后密封，简单涡旋混匀，70℃水浴反应30min；取出后冷却至40℃左右，加入0.5mL异辛烷，涡旋30s，加入0.5mL的饱和氯化钠溶液，涡旋15s，收集异辛烷层，与步骤一有机层合并，无水硫酸钠干燥后，转移至具有进样套管的进样小瓶中，作为供试品溶液进样。

采用相对生物利用度F(如AUC_微乳/AUC_原料)进行评价，以原料组的AUC计为100％。

2.1.5.实验结果

比格犬给予不同制剂后，其药动学参数如表9所示。结果表明，相较于EPAX 6015TGN原料组，采用普通鱼油原料(制剂D1-2)制备的微乳在给予相同的EPA剂量下生物利用度并没有明显提升，采用高含量EPA鱼油制备的口服微乳(四个实验组)可使EPA的生物利用度可提高3倍左右。与EPAX 6015 TGN原料组相比，空腹状态下给药的对照组3的生物利用度显著下降。制剂1-7、制剂5-7的空饱腹对比结果显示，该微乳在空饱腹状态下生物利用度无显著差异。本申请提供的口服微乳可促进鱼油吸收，提高生物利用度且空饱腹下服用生物利用度无显著差异。

表9.鱼油口服微乳中EPA的相对生物利用度结果

实施例2.2.EPA纯度、EPA与磷脂酰胆碱(PC)的比例、磷脂酰胆碱碘值筛选

“EPA纯度”指鱼油原料中EPA的含量。

2.2.1.实验动物

实验动物：雄性Sprague Dawley大鼠(上海实验动物研究中心)，体重180g～200g。

2.2.2.本实施例分为空白组、模型组和9个实验组：其中空白组：喂食普通饲料，每天给予微乳等体积纯化水。模型组：高脂饲料饲养，每天给予微乳等体积纯化水。实验组分别为：制剂1-4，制剂中EPA与磷脂酰胆碱的质量比为约为8.7:1；制剂1-5，制剂中EPA与磷脂酰胆碱的质量比为约为7.2:1；制剂1-6，制剂中EPA与磷脂酰胆碱的比例为约为5.8:1；制剂1-7，制剂中EPA与磷脂酰胆碱的比例为约为4.8:1，制剂中鱼油为Epax公司的EPAX 6015TGN；制剂1-8，制剂中鱼油为Epax公司的EPAX 4030 TGN；制剂1-9，制剂中鱼油为KinOmega7010TG；制剂2-1，制剂中磷脂碘值约为60～70；制剂2-2，制剂中磷脂碘值约为85～95；制剂2-3，制剂中磷脂碘值约为94～97；制剂2-4，制剂中磷脂碘值约为97～107。各组折合EPA给药剂量为150mg/kg/天。

2.2.3.实验方法：取90只SD大鼠，每组10只，给予非酒精性脂肪肝特殊饲料造模。完成造模后，根据空腹血糖、体重、血浆TC(总胆固醇)、TG(甘油三酯)水平分组。空白对照组、模型对照组中小鼠每日给予纯化水灌胃，制剂组给予对应制剂。连续给药6周，给药期间，各组饲料不变。分别于开始给药前和给药6周后，动物禁食4h后麻醉，采集全血样品不少于0.5mL，置于肝素化离心管中，4℃，6500rpm离心15min，取上清血清。最后一次给药取血后立即处死，解剖取肝脏，称重，切取右叶用10％福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，光学显微镜下观察。其余组织于-80℃下冻存备用。

2.2.4.待测指标：

给药6周后，称量大鼠体重，肝重，并计算大鼠肝脏指数(肝脏指数＝大鼠肝脏重量/大鼠末次体重)，肝脏指数也记为肝指数，其中“大鼠末次体重”指“最后一次给药取血后立即处死”时的称重。取血检测甘油三酯(TG)，总胆固醇(TC)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的表达情况。以CHOD-PAP法测定肝脏总胆固醇，以GPO-PAP法测定肝脏甘油三酯，通过HE染色观察组织形态。

2.2.5.实验结果

实验结果数据如表10所示。与空白组比较，模型组中大鼠体重和肝指数明显升高，而各制剂组(共9组)可以降低大鼠的体重及肝指数，大鼠增重和肝指数随EPA/磷脂酰胆碱比值的下降有降低的趋势，随磷脂碘值的增加有降低的趋势，其中EPA/磷脂酰胆碱比值达到8:1以下(包括制剂1-5、制剂1-6、制剂1-7)、磷脂碘值大于80时效果更佳。制剂1-7、制剂1-8、制剂1-9的数据表明，鱼油原料100g中含EPA40g时，对体重和肝指数的影响不明显，鱼油原料100g中含EPA达到60％或更高时，对体重和肝指数有较好的效果。

表10.各组的大鼠体重变化及肝指数情况(n＝10)

其中，EPA/PC表示EPA与磷脂酰胆碱的质量比，碘值表示磷脂的碘值。

各组的大鼠血清中TG、TC水平具体数据见表11，反映了大鼠血脂含量。大鼠血清TC和TG水平随EPA/磷脂酰胆碱比值的下降和磷脂碘值的增加均有降低的趋势，但降低的幅度不显著。大鼠血清TC水平随EPA纯度的上升变化不明显，但TG水平随EPA纯度的上升而呈现下降的趋势。

表11.各组的大鼠血清中TG、TC水平(n＝10)

各组的大鼠血清中ALT、AST水平具体数据见表12。大鼠ALT水平随EPA/磷脂酰胆碱比值的下降变化不明显，随磷脂碘值的增加有降低的趋势。大鼠AST水平随EPA/磷脂酰胆碱比值的下降和磷脂碘值的增加有降低的趋势，其中EPA/磷脂酰胆碱比值达到8:1以下(制剂1-5、制剂1-6、制剂1-7)、磷脂碘值大于80时效果更佳。ALT、AST水平随EPA纯度的变化不明显。

表12.各组的大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)水平(n＝10)

各组的大鼠肝脏中TC、TG水平具体数据见表13。大鼠肝脏TC水平随EPA/磷脂酰胆碱比值的下降和磷脂碘值的增加变化不明显，肝脏TG水平在EPA/磷脂酰胆碱为7:1时在数值上有轻微上升，但无显著性差异，达到6：1时有轻微下降但不明显达到5:1以下(制剂1-7)时开始出现下降的趋势。且肝脏TG水平随磷脂碘值增加呈现下降的趋势。肝脏TC、TG水平随EPA纯度变化不明显。

表13.各组的大鼠肝脂含量测定(n＝10)

脂肪肝NAS评分结果如图1所示。其中EPA/磷脂酰胆碱比值较低的制剂1-6(约6：1)、制剂1-7(约5：1)和磷脂碘值较高的制剂2-3(碘值约为95)、制剂2-4(碘值约为103)有较好的评分结果。与制剂1-8(EPA纯度为约40％)相比，制剂1-7(EPA纯度约为60％)和制剂1-9(EPA纯度约为70％)的评分更低。

综上可得：①与40％EPA纯度原料制备的微乳制剂相比，以EPA含量更高(也即纯度更高)的鱼油原料制备的微乳对脂肪肝模型大鼠体重和肝指数的降低效果更明显，且血液TG水平随鱼油原料EPA含量的上升而呈现下降的趋势。②当EPA/磷脂酰胆碱比值小于等于8:1，磷脂碘值大于70时口服微乳降低脂肪肝模型大鼠体重、肝指数、血脂和肝损伤效果更佳。其中，EPA/磷脂酰胆碱比值小于等于5:1，磷脂碘值大于90时，更有助于肝脏TG的下降，效果更优。

实施例2.3.药物分布研究

2.3.1.实验动物

实验动物：雄性Sprague Dawley大鼠(上海实验动物研究中心)，体重220g～250g。

2.3.2.本实施例分为3个对照组和6个实验组：各组折合EPA给药剂量为500mg/kg。其中对照组包括：普通鱼油微乳(制剂D1-2)、EPAX 6015 TGN原料(原料组，非微乳)、EPA EE微乳(制剂D2-2)。实验组包括高含量EPA微乳(制剂1-7)，含胆汁酸的高含量EPA微乳(制剂3-5)，含甘草次酸的高含量EPA微乳(制剂3-7)；含维生素E琥珀酸聚乙二醇酯的高含量EPA微乳(制剂4-6)，含DSPE-PEG的高含量EPA微乳(制剂4-7)，含甘草次酸琥珀酸酯和DSPE-PEG的高含量EPA微乳(制剂5-7)。

2.3.3.实验方法：取54只SD大鼠，每组6只。实验不禁食，自由饮水。各组按照受试物的剂量为EPA 500mg/kg灌胃给药后。分别在灌胃后3h处死，立即解剖大鼠，取心、肝、脾、肺、肾等组织，用生理盐水清洗干净，称重，存于-80℃冰箱中备用。使用前解冻，将组织与生理盐水按比例混合制备组织匀浆。

2.3.4.实验结果：通过气相色谱仪检测得到EPA在不同组织中的分布情况见表14，检测方法同血浆EPA检测。

表14.不同组给药后EPA的器官分布(μg·g^-1)

不同组别给药后3h EPA主要集中于肝脏，其中，微乳显著提高了体内各个器官中的EPA浓度，添加具有肝靶向效果的辅料(制剂3-5、制剂3-7、制剂5-7)或者降低酶解作用的辅料(制剂4-6、制剂4-7、制剂5-7)都能一定程度增加肝脏中EPA浓度，其中脂溶性更好的辅料可能效果更佳(比较制剂3-5、制剂3-7和制剂4-7、5-7)。具有肝靶向效果的辅料或者PEG修饰的辅料组合使用后(制剂5-7)EPA在肝脏中的富集效果更好。另外，本例中发现，相比于制剂D2-2所采用的EPA EE微乳，甘油酯型EPA微乳在肝脏中达到的浓度更高。

实施例2.4.不同制剂多次给药后药物在肝脏中的富集

2.4.1.实验动物

实验动物：雄性Sprague Dawley大鼠(上海实验动物研究中心)，体重220g～250g。

2.4.2.本实施例分为9组：本实施例分为3个对照组和6个实验组：各组折合EPA给药剂量为125mg/kg/次，2次/天灌胃给药。其中对照组包括：普通鱼油微乳(制剂D1-2)、EPAX6015 TGN原料(原料组)、EPA EE微乳(制剂D2-2)。实验组包括高含量EPA微乳(制剂1-6)，含胆汁酸的高含量EPA微乳(制剂3-5)，含甘草次酸的高含量EPA微乳(制剂3-7)；含维生素E琥珀酸聚乙二醇酯的高含量EPA微乳(制剂4-6)，含DSPE-PEG的高含量EPA微乳(制剂4-7)，含甘草次酸琥珀酸酯和DSPE-PEG的高含量EPA微乳(制剂5-7)。

2.4.3.实验方法：取135只SD大鼠，每组15只。各组按照受试物的剂量给药。实验前不禁食，自由饮水，分别于7天、14天、28天(最后一次给药后6h)解剖取肝，用生理盐水清洗干净，称重，存于-80℃冰箱中待测。使用前解冻，将组织与生理盐水按比例混合制备组织匀浆。

2.4.4.实验结果：通过气相色谱仪检测得到EPA在肝中的富集情况见表15，检测方法同血浆EPA检测。

表15.给药7天/14天/28天后不同组中EPA在肝脏中的富集情况

该结果表明具有辅助EPA在肝脏聚集的鱼油口服微乳(制剂3-5、制剂3-7、制剂4-6、制剂4-7、制剂5-7)显著提升EPA在肝中的富集速率，使其在肝内更快达到稳态浓度。其中，微乳显著提高了肝脏中EPA的富集速率，添加具有肝靶向效果的辅料(制剂3-5、制剂3-7、制剂5-7)或者降低酶解作用的辅料(制剂4-6、制剂4-7、制剂5-7)都能增加肝脏中EPA富集速率，两种辅料组合使用后(制剂5-7)EPA在肝脏中的富集效果更好。特别地，相比于制剂D2-2所采用的EPA EE微乳，甘油酯型EPA微乳在肝脏中富集的速率更快。

实施例2.5.具有肝脏富集作用的高EPA含量甘油酯型原料的口服微乳对非酒精性脂肪肝的治疗效果

2.5.1.实验动物

实验动物：雄性Sprague Dawley大鼠(上海实验动物研究中心)，体重180g～200g。

2.5.2.本实施例分为空白组、模型组、3个对照组和4个实验组。其中空白组：喂食普通饲料，给予微乳等体积纯化水；模型组：高脂饲料饲养，给予微乳等体积纯化水；对照组包括：市售盐酸吡格列酮片(阳性对照组)，给药剂量折合为吡格列酮10mg/kg，每日1次；制剂D1-4，折合EPA剂量为300mg/kg/天，2次/天灌胃给药；Epax公司的EPAX 6015TGN原料(原料组)，折合EPA给药剂量为300mg/kg/天，2次/天灌胃给药；实验组包括：制剂1-7中剂量组，折合EPA给药剂量为150mg/kg/天；制剂5-7低剂量组，折合EPA给药剂量为75mg/kg/天；制剂5-7中剂量组，折合EPA给药剂量为150mg/kg/天；制剂5-7高剂量组，折合EPA给药剂量为300mg/kg/天；

2.5.3.实验方法：取90只SD大鼠，每组10只，给予非酒精性脂肪肝特殊饲料造模。完成造模后，根据空腹血糖、体重、血浆TC、TG水平分组。空白对照组、模型对照组小鼠每日给予纯化水灌胃，制剂组给予对应制剂。连续给药6周，给药期间，各组饲料不变。分别于开始给药前和给药6周后，动物禁食4h后麻醉，采集全血样品不少于0.5mL，置于肝素化离心管中，4℃，6500rpm离心15min，取上清血清。给药2、4、6周测空腹血糖，给药4周后进行OGTT实验。最后一次给药取血后立即处死，解剖取肝脏，称重，切取右叶用10％福尔马林固定，常规石蜡包埋切片,HE染色,光学显微镜下观察。其余组织于-80℃下冻存备用。

2.5.4.待测指标：

给药6周后，称量大鼠体重，肝重，并计算大鼠肝脏指数(肝脏指数＝大鼠肝脏重量/大鼠末次体重)。采用血糖仪和试纸测定空腹血糖。取血检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的表达情况。以CHOD-PAP法测定肝脏总胆固醇，以GPO-PAP法测定肝脏甘油三酯。分别采用相关试剂盒检测SOD(超氧化物歧化酶)、MDA(丙二醛)。通过HE染色观察组织形态。

2.5.5.实验结果

与空白对照比较，模型组大鼠体重和肝指数明显升高，而不同的EPA制剂可以降低大鼠的体重及肝指数，其中制剂5-7口服微乳高剂量组降低体重和肝指数的效果最佳。具体数据见表16。

表16.各组大鼠体重变化及肝指数情况(n＝10)

空白组、模型组，以及对照组及实验组大鼠给药后2、4、6周空腹血糖变化如表17所示，其中罗格列酮对脂肪肝大鼠血糖有较好的控制，在第4周和第6周时空腹血糖水平显著降低。制剂5-7中剂量和高剂量组有与阳性对照相同的趋势，而制剂1-7中剂量组和制剂5-7低剂量组在第6周时才出现显著降低空腹血糖的趋势。

表17.各组大鼠空腹血糖变化(n＝10)

大鼠葡萄糖耐受实验结果如图2、表18、图3。阳性对照组以及制剂5-7中、高剂量的血糖AUC显著小于模型组，表明其能一定程度上改善大鼠的胰岛素抵抗。

表18.各组大鼠葡萄糖耐受实验结果(n＝10)

各组的大鼠血脂含量测试结果如表19所示。与空白对照比较，模型组大鼠血清中TG、TC含量明显升高,与模型对照组比较，除制剂D1-4外的EPA给药组大鼠血清甘油三酯(TG)水平显著低于模型对照组，其中制剂5-7中剂量、高剂量效果最明显，对于总胆固醇(TC)水平仅制剂5-7中剂量、高剂量有显著影响。

表19.各组中大鼠血脂含量情况(n＝10)

各组的大鼠血清中ALT、AST水平测试结果如表20所示。与模型对照组比较，鱼油口服微乳可以显著降低血清中ALT、AST的水平，各组降低血清ALT、AST水平的差异不明显。

表20.各组中大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)水平(n＝10)

各组中大鼠肝脂、肝脏SOD、MDA含量测定结果如表21所示。通过和空白组对照，模型组表现出明显脂质沉积增加和脂滴积累。研究结果表明。不同EPA微乳制剂对肝脏内TC水平无显著影响，但对TG有一定降低作用，可升高肝脏SOD活性，降低MDA含量，反映了EPA微乳制剂通过调节自由基代谢平衡防护机体脂质过氧化。

表21.各组中大鼠肝脂、肝脏SOD、MDA含量测定(n＝10)

脂肪肝NAS评分结果如图4所示,大鼠肝脏组织形态的HE染色结果如图5所示。其中具有肝脏富集作用的高EPA含量甘油酯型原料的口服微乳可有效改善肝脏组织形态。模型组的肝切片显示明显的空泡状肝细胞和严重的微小和大泡脂肪变性,并有明显的炎性反应细胞浸润。制剂5-7低剂量、中剂量、高剂量组肝细胞形态逐渐恢复，肿胀程度逐渐减轻，脂滴空泡现象逐渐减少，炎症细胞浸润逐渐减少，其中制剂5-7高剂量组肝组织损伤改善效果更佳(图5)。

前述实验结果还表明：(1)相对于EPA软胶囊，微乳将EPA的生物利用度提高了3倍左右。(2)磷脂酰胆碱的含量与不饱和度选择对药效有影响，较佳的选择范围为磷脂碘值大于等于80；EPA与磷脂酰胆碱的比例小于8:1。(3)本发明所提供的鱼油口服微乳可有效提高EPA在肝脏中的富集。(4)本发明所提供的鱼油口服微乳可以降低高脂饮食诱导NASH形成的ALT和AST水平，缓解炎症反应，防止脂质过氧化，且可以降低血清TG和TC水平。本发明所提供的口服微乳可作为治疗NAFLD的潜在药物。

以上所述实施方式和实施例的各技术特征可以进行任意合适方式的组合，为使描述简洁，未对上述实施方式和实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为在本说明书记载的范围中。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本申请的保护范围。还应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种口服微乳，其特征在于，按重量百分比计，所述口服微乳的总重量百分数为100％，所述口服微乳包含如下组分：

水；

其中，EPA在所述EPA甘油酯原料中的质量含量≥45％，甘油三酯在甘油酯成分中的质量占比≥58％；

所述第一乳化剂为碘值＞70的磷脂；

在所述第一乳化剂的磷脂成分中，磷脂酰胆碱的质量占比≥50％；

EPA与第一乳化剂中磷脂酰胆碱的质量比≤8:1；

所述第二乳化剂的成分均与第一乳化剂不同；

所述第一辅料包含肝靶向成分、PEG修饰的成分中至少一种；

所述第二辅料为食品中和/或药学上可接受的原辅料，且不同于所述第一乳化剂、第二乳化剂和所述第一辅料。

2.根据权利要求1所述口服微乳，其特征在于，按重量百分比计，包含如下组分：

水。

3.根据权利要求1～2中任一项所述口服微乳，其特征在于，

在所述口服微乳中，水的最低重量百分比为65％；及/或，

所述口服微乳包含油相成分和水相成分，其中油相成分的重量百分数≤30％；及/或，

在所述EPA甘油酯原料中，EPA的质量含量≥57％；及/或，

所述EPA甘油酯原料中，甘油一酯在甘油酯成分中的质量占比小于30％，甘油二酯在甘油酯成分中的质量占比小于30％；及/或，

所述第一乳化剂为碘值≥90的磷脂；及/或，

在所述第一乳化剂的磷脂成分中，磷脂酰胆碱的质量占比≥70％；及/或，

EPA与磷脂酰胆碱的质量比≤5:1；及/或，

所述肝靶向成分选自肝靶向分子和经修饰的肝靶向分子中的一种或多种，所述经修饰的肝靶向分子中含有PEG修饰的脂质单元和无PEG修饰的脂类修饰单元中的一种或多种；及/或，

所述口服微乳为PEG修饰的微乳，所述PEG修饰的原料在所述口服微乳的重量百分比为0.01％～10％；及/或，

所述PEG修饰的成分选自聚乙二醇修饰的脂类成分和聚乙二醇单甲醚修饰的脂类成分中的一种或多种；及/或，

所述口服微乳为水包油结构；及/或，

所述口服微乳中的液滴平均粒径小于500nm。

4.根据权利要求1所述的口服微乳，其特征在于，

所述EPA甘油酯原料选自浓缩EPA甘油酯和再酯化EPA甘油酯中的一种或多种；及/或，

所述EPA甘油酯原料选自具有如下组成的EPA甘油酯中的一种或多种：EPA 57％～60％+DHA 0～10％、EPA 57％～60％+DHA 10～20％、EPA 57％～60％+DHA 20～30％、EPA 57％～60％+DHA 30％～40％、EPA 60％～70％+DHA 0～10％、EPA 60％～70％+DHA 10～20％、EPA 60％～70％+DHA 20～30％、EPA 60％～70％+DHA 30％以上、EPA 70％～80％+DHA 0～10％、EPA 70％～80％+DHA 10～20％、EPA 70％～80％+DHA 20％以上、EPA 80％～90％、和EPA＞90％；及/或，

所述第一乳化剂中的磷脂成分来自大豆磷脂、向日葵磷脂、蛋黄磷脂和合成磷脂中的一种或多种；及/或，

所述第二乳化剂选自不同于所述第一乳化剂的磷脂、蔗糖酯、柠檬酸脂肪酸甘油酯、脂肪酸甘油酯、聚山梨酯、脂肪酸山梨坦、聚氧乙烯脂肪酸酯、司盘、泊洛沙姆、海藻酸盐和和酪蛋白酸盐中的一种或多种；及/或，

所述肝靶向成分选自甘草次酸及其衍生物、半乳糖及其衍生物、甘露糖及其衍生物、透明质酸及其衍生物、胆汁酸及其衍生物中的一种或多种；及/或，

所述PEG修饰的成分选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、聚乙二醇-硬脂酸酯、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、大豆磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇单甲醚、聚乙二醇油酸酯、聚乙二醇月桂酸酯中的一种或多种；及/或，

所述第二辅料选自营养补充剂、抗氧化剂、助乳化剂、油脂、矫味剂和pH调节剂中的一种或多种；及/或，

所述口服微乳中的液滴平均粒径≤300nm；及/或，

在所述口服微乳中，水的重量百分比为65％～95％。

5.根据权利要求4所述口服微乳，其特征在于，

所述第一乳化剂中的磷脂成分为大豆来源的多烯磷脂；及/或，

所述第二乳化剂中不含高碘值的磷脂酰胆碱；及/或，

所述肝靶向成分含有甘草次酸及其衍生物，所述甘草次酸及其衍生物选自甘草次酸的脂溶性衍生物；及/或，

所述肝靶向成分含有DSPE-PEG-半乳糖、DSPE-PEG-甘露糖、DSPE-甘草次酸、DSPE-PEG-甘草次酸和DSPE-透明质酸中的一种或多种；

所述PEG修饰的成分选自PEG修饰的磷脂、PEG修饰的维生素E酯中的一种或多种；及/或，

所述营养补充剂选自维生素A、维生素E、维生素B族、维生素D、水飞蓟素、葡甘露聚糖和支链氨基酸中的一种或多种；及/或，

所述油脂选自大豆油、中链三酸甘油酯、橄榄油、亚麻籽油、核桃油、沙棘油、薏米油、葡萄籽油、生姜油、椰子油、山茶油、玫瑰油、薄荷油和柠檬油中的一种或多种；及/或，

所述抗氧化剂选自亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、维生素C及其酯类、生育酚及其酯类中的一种或多种。

6.根据权利要求5所述口服微乳，其特征在于，

所述第二乳化剂中不含磷脂成分；及/或，

所述甘草次酸的脂溶性衍生物选自DSPE-甘草次酸、DSPE-PEG-甘草次酸、甘草次酸脂肪酸酯和甘草次酸琥珀酸酯中的一种或多种；及/或，

所述PEG修饰的成分选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯中的一种或多种；及/或，

所述维生素E选自α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚和δ-生育三烯酚中的一种或多种；及/或，

所述维生素B族选自维生素B1、维生素B2、烟酸、泛酸、维生素B6、维生素B12、叶酸和维生素B7中的一种或多种。

7.根据权利要求1～6中任一项所述口服微乳的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将包括所述EPA甘油酯原料的油相组分在加热条件下制备油相；

将包括磷脂的水相组分与水性溶剂混合，在加热条件下制备水相；

将所述油相和所述水相进行混合，剪切搅拌，制备水包油的微乳；

将所述水包油的微乳进行高压均质处理，制得液滴粒径小于500nm的纳米乳；

可选地，将所述纳米乳进行过滤、封装、灭菌。

8.根据权利要求1～6中任一项所述口服微乳，或根据权利要求7所述的制备方法获得的所述口服微乳在制备预防和/或治疗脂肪累积相关疾病的药物中的应用，或者根据权利要求1～6中任一项所述口服微乳，或根据权利要求7所述的制备方法获得的所述口服微乳在医学食品、保健食品中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述脂肪累积相关肝脏疾病为脂肪肝、肝损伤、肝炎中的一种或多种。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述脂肪肝为非酒精性脂肪肝。

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