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CN116391128B - 人血浆中麦角酸二乙基酰胺（lsd）和2,3-二氢-3-羟基-2-氧代麦角二乙胺（o-h-lsd）的定量方法 - Google Patents

人血浆中麦角酸二乙基酰胺（lsd）和2,3-二氢-3-羟基-2-氧代麦角二乙胺（o-h-lsd）的定量方法

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CN116391128B
CN116391128B CN202180072446.3A CN202180072446A CN116391128B CN 116391128 B CN116391128 B CN 116391128B CN 202180072446 A CN202180072446 A CN 202180072446A CN 116391128 B CN116391128 B CN 116391128B
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Universitaetsspital Basel USB
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Abstract

一种通过以下来测量和鉴定LSD及其主要代谢物O‑H‑LSD的方法：从个体获得样品，以及通过进行LC‑MS/MS分析来测量、鉴定和定量该样品中的LSD和O‑H‑LSD。一种通过以下来治疗和监测服用LSD的个体的方法：向该个体施用微剂量的LSD、LSD的前药或LSD的类似物；通过以下来监测该个体：从个体获得样品，以及通过进行LC‑MS/MS分析来测量和鉴定该样品中的分析物；以及基于该LC‑MS/MS分析中定量的LSD的量来调整该微剂量。一种通过以下来调整LSD的给药剂量的方法：向该个体施用微剂量的LSD、LSD的前药或LSD的类似物；以及基于血液浓度分析调整该微剂量。

Description

人血浆中麦角酸二乙基酰胺(LSD)和2,3-二氢-3-羟基-2-氧 代麦角二乙胺(O-H-LSD)的定量方法
拨款信息
本申请的研究部分由瑞士国家科学基金会(Swiss National ScienceFoundation)的拨款予以支持(拨款号32003B_185111)。
发明背景
1.技术领域
本发明涉及用于定量和鉴定人血浆中的麦角酸二乙基酰胺(LSD)及其主要代谢物2,3-二氢-3-羟基-2-氧代麦角二乙胺(O-H-LSD)的组合物和方法。
2.背景技术
LSD是一种被广泛地用于娱乐目的的典型致幻剂(迷幻剂(hallucinogen))(Krebs和Johansen,2013)。然而，正在努力使用LSD等治疗抑郁和焦虑、物质使用和丛集性头痛(Gasser等人,2014；Liechti,2017)。另外，LSD微量给药最近变得受欢迎，以改善认知功能和情绪。在这方面，使用者以2至5天的间隔服用非常低剂量的5-20μg LSD(Hutten等人,2019)。此外，这样的微剂量在未来也可以在治疗上用于治疗医学病症(Kuypers等人,2019；Kuypers,2020)。例如，微剂量的LSD减少痛觉(Ramaekers等人,2021)，并且增加人类神经再生的标志物(Hutten等人,2020)。
随着人们对应用LSD作为各种精神障碍的潜在治疗剂的兴趣迅速增长，扩大其临床药理学，特别是其药代动力学(PK)知识至关重要。因此，测量患者和使用者的LSD暴露对于研究药物暴露与治疗或毒性作用之间的关联至关重要。需要PK数据来生成参考浓度值，从而调整用LSD进行治疗的患者的给药剂量。例如，血浆浓度可以在未显示出针对LSD的预期激烈精神促动反应或不充分治疗反应的患者中进行测量。为此目的，需要一种方法来在定义的时间点或重复地(Cmax或全PK曲线)测量血浆中的LSD浓度，并且然后可以将患者的值与来自更大人群的参考数据进行比较，从而确定正确的给药剂量，并且在治疗药物监测(TDM)方法内调整LSD辅助疗法的给药剂量。此外，药物-药物相互作用研究尚待完成，这对于确保安全有效的疗法至关重要。在这种情况下，定量LSD的代谢物(如O-H-LSD)也很重要，它有助于解释药物-药物相互作用数据。最后，考虑到LSD(如果可用作治疗剂)可能更容易获得，需要合适的生物分析方法来鉴定药物滥用。
已经建立了主要针对更高剂量的LSD的PK数据(Dolder等人,2015；Dolder等人,2017；Holze等人,2019；Holze等人,2021b)。相比之下，关于微剂量的LSD的PK数据很少(Family等人,2020；Holze等人,2021a)。建立关于微量给药的PK数据的关键限制是一种用于检测和有效定量施用非常低剂量的LSD后的LSD血浆水平的灵敏的分析方法。本发明提供了这样的方法。
总体而言，LSD的检测和可靠定量是困难的，尤其是在施用微剂量时。几项研究调查了LSD微剂量的主观和行为效应(Bershad等人,2019；Holze等人,2021a；Yanakieva等人,2019)；然而，也只有两项研究成功地报告了LSD的血浆浓度时间曲线(Family等人,2020；Holze等人,2021)。由于所采用方法的灵敏度不足，在一项研究中无法确定5μg LSD剂量的血浆水平(Family等人,2020)，并且对于10和20μg治疗，仅建立了不完整的曲线，这些不完整的曲线仅部分涵盖了LSD的侵袭和消除。在另一项研究中，定量的方法是灵敏的，并且由本文介绍的方法组成，但只能对一部分参与者的血浆进行采样(Holze等人,2021)。因此，需要关于LSD(包括微剂量)的更多PK数据，并且需要一种灵敏且工作优化的新颖检测方法。
在过去的数十年中，已经开发了几种方法来定量LSD和O-H-LSD，如图1中所概述。大多数方法都集中于定量LSD，用于进行药物筛选或涉及有限样品量的初步药代动力学研究。在20世纪90年代，发展了几种气相色谱单质谱方法，主要用于定量尿液(还有血浆)中的LSD和O-H-LSD。这些方法需要2-10ml的较大的样品体积，并且为此需要一个费力的提取程序，该程序涉及液-液萃取或固相萃取。必须将原始提取物蒸发并重悬于适用于气相色谱分析的溶剂中。最后，在大多数情况下，分析物的衍生化对于提高方法的分离度和灵敏度是必要的。在千禧年(millennium)前后，建立了用于人体液中LSD分析的第一个液相色谱单质谱和串联质谱(LC-MS/MS)方法。这些方法需要较少的样品(约1ml)，但仍需要复杂的提取方案，该提取方案涉及生物样品的液-液纯化或固相纯化中的一种。然而，与气相色谱方法相比，衍生化可以省略。重要的是，每个样品的总分析时间很少低于10分钟。在过去的十年里，新颖的LC-MS/MS方法不断演变，实现了低pg/ml范围内的定量下限。引人注目地，只有少数方法实现了适用于分析LSD微剂量的PK的定量下限。如上所述，这些方法利用了精细的样品处理方法，因此仍然需要适量的样品(约0.5ml)。总的来说，据我们所知，没有一种公开的方法适合高通量分析，因此，在必须分析大量样品时，这些方法不符合条件。另外，由于其复杂的提取程序，这些方法对于常规治疗药物监测(TDM)分析是不实用的。
因此，仍然需要新颖的有效方法来评估血浆中的LSD和O-H-LSD，尤其是在用LSD微剂量治疗后。
发明内容
本发明提供了一种通过以下来测量和鉴定LSD及其主要代谢物O-H-LSD的方法：从个体获得样品，以及通过进行LC-MS/MS分析来测量、鉴定和定量该样品中的LSD和O-H-LSD。
本发明提供了一种通过以下来治疗和监测服用LSD的个体的方法：向该个体施用微剂量的LSD、LSD的前药或LSD的类似物；通过以下来监测该个体：从个体获得样品，以及通过进行LC-MS/MS分析来测量和鉴定该样品中的分析物；以及基于该LC-MS/MS分析中定量的LSD的量来调整该微剂量。
本发明还提供了一种通过以下来调整LSD的给药剂量的方法：向个体施用微剂量的LSD、LSD的前药或LSD的类似物；以及基于血液浓度分析调整该微剂量。
附图说明
在与附图结合考虑时，参照以下详细描述，会容易认识到并更好地理解本发明的其他优点，其中：
图1是将本发明与先前公开的定量人体液或组织中LSD的分析方法进行比较的表；
图2是人血浆中LSD和O-H-LSD及其各自的内标LSD-d3和O-H-LSD-d10的色谱分离图；
图3A-3B是显示人血浆中LSD和O-H-LSD的校准线的图(图3A，于2020年7月18日；图3B，于2020年7月20日；以及图3C，于2020年7月21日)；
图4A-4D是展示可以在用内标(空白)和不用内标(双空白)处理的人血浆中选择性测定LSD和O-H-LSD的图，显示了七个O-H-LSD(图4A)和LSD(图4B)双空白(粗黑线)和LLOQ(虚线)色谱图的叠加，以及显示了七个O-H-LSD(图4C)和LSD(图4D)空白(粗黑线)和LLOQ(虚线)色谱图的叠加；以及
图5是显示接受5μg LSD的口服剂量的三名健康志愿者的药代动力学可以用所开发的方法建立的图。
具体实施方式
本发明提供了一种测量人样品(如血浆)中LSD及其代谢物O-H-LSD的方法。对该方法进行验证，提供该方法的质量和性能信息以及在人受试者中的应用，包括首次描述非常低剂量的LSD(包括5-25μg LSD微剂量)的药代动力学。
如本文所用的“样品”是指来自个体，并且优选地来自人或哺乳动物的血浆、血液、尿液、唾液或其他体液的样品。
如本文所用的“代谢物”是指作为代谢物的原始活性化合物的中间产物或最终产物。本发明中的代谢物优选地是LSD的代谢物，包括O-H-LSD。此外，LSD、LSD的其他前药已经被描述或正在开发中。该方法也可以用于在施用产生相同代谢物的LSD的任何其他前药或任何其他LSD类似物后，确定LSD和O-H-LSD的量。此外，可以调整该方法，从而包括分析其他麦角胺化合物。这包括分析方法以及LSD-类似物辅助心理疗法的TDM概念。
如本文所用的“LC-MS/MS”是指液相色谱串联质谱分析化学技术。
本发明提供了一种通过以下来测量和鉴定LSD及其代谢物O-H-LSD的方法：从个体获得样品，以及通过进行LC-MS/MS分析来测量和鉴定该样品中的分析物。与现有的LC-MS/MS方法相比，本发明可以以较不费力的方式处理样品，因此需要较少的分析时间。因此，可以在40分钟内处理含有96个样品的孔板。这包括两个步骤，样品提取(向每个样品中添加提取溶剂)和板离心30分钟。此外，样品的分析时间(即色谱运行)比几乎所有现有的方法都短，使本方法符合高通量分析的条件。每个样品的分析运行时间可以是4分钟。
本发明需要相当少的样品材料，并且仍然比其他已知方法更灵敏或至少同样灵敏。需要从受试者获得的样品的量为300μL，如果必须进行重新分析，这是足够的材料量。50μL的样品可用于实际的LC-MS/MS方法。就绝对灵敏度而言，本发明可以定量0.5pg LSD，而现有方法的定量限大于2.5pg。这种低定量限允许在施用微剂量的LSD后定量LSD的血浆水平，而这种水平不能用现有方法有效地测量。这种高灵敏度还允许在施用任何剂量的LSD后更长时间定量LSD的血浆水平，并扩大使用人血浆对过去使用LSD的阳性记录的窗口。可以在施用后长达六小时用该方法进行定量。重要的是，使用相同类型的串联质谱仪(API5500)的方法没有达到我们的定量限，这指出了我们的提取和色谱方法比其他方法更有利(Grumann等人,2019)(Steuer等人,2017)。最后，本发明重要的是为以后的TDM建立参考PK数据。此分析方法和相关的TDM应用可用于鉴定服用了LSD的个体，以及LSD水平是否在治疗范围内。可以基于该方法中定量的LSD的量，根据需要在个体中调整LSD的给药剂量。另外，同时测定O-H-LSD可用于解释药物-药物相互作用或疾病(如肝或肾功能不全)对LSD的PK特性的影响。
根据监管生物分析指南(FDA/EMA)对LC-MS/MS方法进行了彻底开发和全面验证，将其用于分析人体中的LSD和O-H-LSD(EMA,2011；FDA,2018)。本文描述了一种最先进的LC-MS/MS方法来研究LSD和O-H-LSD的PK。该方法提供了优于其他现有技术方法的优点，因为它的灵敏度至少提高了5倍，使用了少量样品，提取方案简单，并且包括快速样品分析。为了实现上述方法优势，用乙腈沉淀血浆蛋白。然后，将样品离心以固化分析管底部的沉淀物，从而允许将不含蛋白质的上清液注入到LC-MS/MS系统中。将注入的样品经由安装在分析柱前面的T型接管在线稀释，这增强了这些样品与柱的相互作用。选择耐pH分析柱，以便使用9.0的高pH(对于流动相A)。这进一步提高了LSD对柱的吸引力和保留，因此也提高了该方法的灵敏度。总体而言，可以用本发明操作以96孔板格式提取和分析样品的半自动化的工作流程，从而促进高通量分析。相关联地，将该方法付诸实践，并在临床研究中，通过评估健康参与者的LSD微剂量的PK，证明了该方法的临床应用。由此证明，可以毫不费力地在长时间段内监测人血浆中最低剂量为5μg的LSD。
LSD是原型致幻觉药物，其作为治疗一系列精神障碍的药被研究(Gasser等人,2014；Liechti,2017)。仅通过两项初步研究无法充分表征LSD(特别是在低剂量下)的药代动力学特性(Family等人,2020；Holze等人,2021a)。需要有效和快速地测量LSD血浆水平，从而分析来自药代动力学研究和其他临床试验的人血浆样品。O-H-LSD是LSD的主要非活性代谢物，其在很大程度上通过肾脏清除。
一旦LSD上市并定期用于患者，就需要TDM来确定血浆浓度。例如，可以在对常规剂量的LSD无反应的患者中确定药物的血浆水平，从而调整给药剂量。然而，需要一种方法来可靠和快速地测量血浆中的LSD浓度，从而为医师提供这样的信息。因此，该方法必须简单，以便用于常规分析。此外，LSD与O-H-LSD的代谢比率可以用于鉴定缓慢或快速代谢者。代谢比率也将有助于在患者患有肾或肝功能不全的情况下调整剂量。最后，LSD和O-H-LSD水平可用于诊断中毒。因此，本发明得到开发和验证，并且包括快速LC-MS/MS方法来定量人血浆中的LSD和O-H-LSD。使用乙腈通过蛋白质沉淀处理血浆样品。将注入的样品与pH稳定的C18分析柱前面的碳酸氢铵的水溶液(pH 9)混合，从而增加分析物的保留。分别在正和负电喷雾电离模式下，通过多重反应监测检测到了LSD和O-H-LSD。
本发明提供了一种通过以下来治疗和监测服用LSD的个体的方法：向该个体施用微剂量的LSD、LSD的前药或LSD的类似物；通过以下来监测该个体：从个体获得样品，以及通过进行LC-MS/MS分析来测量和鉴定该样品中的分析物；以及基于该LC-MS/MS分析中定量的LSD的量来调整该微剂量。这种方法可用于略微调整个体中LSD的给药剂量和效果。由于微剂量非常少，其功效或毒性可能会有显著差异。因此，测量体内LSD的量并监测个体以调整给药剂量是至关重要的。
本发明总体上还提供了一种通过以下来调整LSD的给药剂量的方法：向个体施用微剂量的LSD、LSD的前药或LSD的类似物；以及基于血液浓度分析调整该微剂量。如上所述，通过进行LC-MS/MS分析获得血液浓度分析。
如以下实例1中所述，在三次验证运行中记录了94.1％-104％的测定间准确度和≤9.1％的精度。回收率完全(≥98.3％)，并且重要的是，不同浓度水平和血浆批次的回收率一致(CV％：≤3.84％)。血浆基质几乎没有引起离子抑制(-10.0％)，并且内源性干扰可以从分析物中分离出来。LSD和O-H-LSD血浆样品可以解冻并且重新冷冻三个周期，在室温下保持8小时，而不会显示出降解(≤8.83％)。该方法的线性范围(R≥0.997)覆盖了低至5μg的微剂量至200μg的高剂量LSD后在人体中观察到的血浆浓度，并且因此能够评估LSD和O-H-LSD的药代动力学。对于测量血浆中的LSD和O-H-LSD，LC-MS/MS方法既方便又可靠，并且当在患者中使用LSD时有助于促进LSD和TDM的临床开发。
通过参考以下实验实例进一步详细描述本发明。提供这些实例仅用于说明的目的，除非另有说明，否则无意为限制性的。因此，本发明决不应被解释为限于以下实例，而是应该被解释为涵盖由于本文提供的传授内容而变得明显的任何和所有变化。
实例1
目的
本研究的目的是验证在API 5500QTRAP LC-MS/MS系统上同时定量人血浆中麦角酸二乙基酰胺(LSD)和2,3-二氢-3-羟基-2-氧代麦角二乙胺(O-H-LSD)的分析方法。该方法正被用于分析来自使用LSD的临床研究的血浆样品。分析在巴塞尔大学医院(UniversityHospital Basel)进行。
生物分析方法的概述
开发并验证了在API 5500QTRAP串联质谱仪上通过LC-MS/MS同时定量人血浆样品中LSD和O-H-LSD的生物分析方法。在人血浆中制备校准(Cal)和质量控制(QC)样品。通过分析QC样品来控制日常性能。用50μl人血浆对样品进行处理，而将50μl等分试样与150μl内标(ISTD)工作溶液混合。将样品涡流混合约1分钟并离心，以获得不含血浆蛋白的透明上清液。将10μl上清液的等分试样注入到LC-MS/MS系统中。所有Cal和QC样品经受相同的测定程序。将定量下限(LLOQ)设定为10pg/ml，而将定量上限(ULOQ)设定为10’000pg/ml。该分析方法根据2018年5月FDA行业生物分析方法验证指南(FDA,2018)规定的标准进行验证。
参考项目
以下参考物质用于制备ISTN溶液以及Cal和QC样品。
表1：参考物质
空白人血浆
通过当地的献血中心(Blutspendezentrum SRK beider Basel，Hebelstrasse10，4056巴塞尔，瑞士)获得空白人血浆(抗凝血剂：肝素锂)。将血浆在约-20℃下储存。
仪器、试剂和材料
LC-MS/MS系统
设备
HPLC柱
化学品
LC-MS/MS系统的描述
采集方法
流动相
自动进样器洗涤液
LC-MS/MS设置
初始HPLC设置
表2：用于LSD和O-H-LSD分析的HPLC泵梯度程序和时间事件
时间 模块 事件 参数
0.00 MS阀 开关 A
0.50 泵 泵B 10
0.50 泵 泵C 0
0.50 泵 总流量 0.6
1.00 MS阀 开关 B
2.75 泵 泵B 95
3.00 MS阀 开关 A
3.50 泵 泵B 95
3.51 泵 泵B 10
4.00 控制器 结束
在每次运行的1.0分钟至3.0分钟之间，将HPLC流导入质谱仪(右阀，位置B)，否则导入溶剂废液瓶中。
分析物的保留时间
质谱仪设置
下表3中列出了用于监测人血浆中分析物和ISTD浓度的不同离子的m/z值。LSD和O-H-LSD的色谱图如图2所示。
表3：用于分析LSD和O-H-LSD的分析物特定设置。
图2是人血浆中LSD(5000pg/ml)和O-H-LSD(5000pg/ml)的色谱图。LSD-d3和O-H-LSD-d10用作内标。LSD和O-H-LSD分别在1.78分钟和1.51分钟后洗脱。色谱图记录于2020年7月21日。
数据采集和计算
样品列表、采集方法、数据收集和定量由爱博才思公司的分析软件(1.7.1版)生成。通过内标法计算Cal和QC样品中LSD和O-H-LSD的浓度。用微软公司(Microsoft)(华盛顿，美国)的Excel Office 365计算Cal和QC样品的平均值、标准偏差、准确度和精度数据。
数据报告
分析物的测定结果四舍五入至三位有效数字。低于10pg/ml的浓度报告为“blq”。
储备溶液和工作溶液的制备
溶液的浓度基于药物的游离形式和非离子化形式。所有溶液均在1.5ml微管(扎尔施泰特，纽伦堡，德国)中制备。
LSD储备溶液
Cal样品的储备溶液：在乙腈中的0.1mg/ml的LSD
0.1mg/ml LSD在乙腈中的溶液购自Lipomed公司(阿勒斯海姆，瑞士)。
QC样品的储备溶液：在乙腈中的1mg/ml的LSD
精确重量的1.0mg LSD购自Lipomed公司(阿勒斯海姆，瑞士)，并且溶解在985μl乙腈(LSD纯度：98.5％)中。
ISTD储备溶液：在乙腈中的0.1mg/ml LSD-d3
0.1mg/ml LSD-d3在乙腈中的溶液购自Lipomed公司(阿勒斯海姆，瑞士)。
O-H-LSD储备溶液
Cal样品的储备溶液：在DMSO中的1mg/ml的O-H-LSD
精确重量的1.094mg O-H-LSD购自多伦多研究化学品公司(安大略省，加拿大)，并且溶解在1050μl DMSO(O-H-LSD纯度：96％)中。
QC样品的储备溶液：在DMSO中的1mg/ml的O-H-LSD
精确重量的1.233mg O-H-LSD购自多伦多研究化学品公司(安大略省，加拿大)，并且溶解在1184μl DMSO(O-H-LSD纯度：96％)中。
ISTD储备溶液：在–MSO中的1mg/ml O-H-LSD-d10
将重量为1mg的O-H-LSD-d10溶解在1000μl DMSO中。
振荡上述制剂直至完全溶解，随后将其储存在-20℃的冰箱中。
工作溶液
Cal样品的储备溶液混合物(Mix-C)：2500ng/ml的LSD和O-H-LSD
将LSD(0.1mg/ml)和O-H-LSD(1mg/ml)储备溶液在DMSO中单独稀释至最终浓度为10μg/ml。因此，将50μl的LSD(0.1mg/ml)与450μL DMSO混合，并将10μl的O-H-LSD(1mg/ml)添加至990μl DMSO中。随后，将250μL的每种工作溶液(10μg/ml)与500μL的DMSO混合。所得溶液具有浓度为2500ng/ml的LSD和O-H-LSD。
QC样品的储备溶液混合物(Mix-Q)：2500ng/ml的LSD和O-H-LSD。
将LSD和O-H-LSD储备溶液(1mg/ml)在DMSO中单独稀释至最终浓度为10μg/ml。因此，将10μl的每种储备溶液添加至990μL的DMSO中。随后，将250μL的每种工作溶液(10μg/ml)与500μL的DMSO混合。所得溶液具有浓度为2500ng/ml的LSD和O-H-LSD。
振荡上述制剂直至完全溶解，随后将其储存在-20℃的冰箱中。
校准样品的制备
使用Mix-C工作溶液制备了浓度范围为从10至10000pg/ml的Cal样品。表4A和4B中报告了稀释程序。
表4A和4B：Cal样品的制备
将工作溶液在约-20℃下储存在1.5ml微管(扎尔施泰特，德国)中(表4A)。将表4B中报告的体积用于制备人血浆中的2ml Cal样品。将50μl的等分试样在约-20℃下储存在0.75ml微管中。
质量控制样品的制备
使用Mix-Q工作溶液制备具有五种不同浓度的LSD和O-H-LSD的QC样品。如表5A所述制备工作溶液，而根据表5B制备血浆中的QC。
表5A和5B：QC样品的制备
将工作溶液在约-20℃下储存在1.5ml微管(扎尔施泰特，德国)中(表5A)。将表5B中报告的体积用于制备人血浆中的4ml QC样品。将50μl的等分试样在约-20℃下储存在0.75ml Thermo微管中。
内标溶液的制备
ISTD工作溶液：在乙腈中的100pg/ml LSD-d3和250pg/ml O-H-LSD-d10
在450μl乙腈中制备50μl LSD-d3储备溶液(0.1mg/ml)，以得到10μg/ml的工作溶液。在990μl乙腈中制备10μl的O-H-LSD-d10储备溶液(1mg/ml)，以得到10μg/ml的溶液。
将5μL的LSD-d3工作溶液(10μg/ml)和12.5μL的O-H-LSD-d10工作溶液(10μg/ml)添加至500ml乙腈中，以分别得到100pg/ml和250pg/ml的溶液。将溶液在约-20℃下储存。
样品提取
将用于验证运行的血浆样品解冻，并按照以下1-4所述进行处理。
1.解冻单独的Cal和QC样品(50μl等分试样)。
2.添加150μl ISTD(空白：乙腈)。
3.涡旋至少30秒。
4.在10℃和3220g下离心30分钟。
如果不立即使用，则将处理后的样品在约10℃下储存。
原理和计算
分析运行和验证运行的组成
分析运行包括两组10个Cal样品、两个双空白样品(无ISTD)、两个空白样品(有ISTD)和至少三个处于三种不同浓度(低、中、高浓度)的QC样品。对于验证运行，研究了处于五个浓度水平(LLOQ、QC低、QC中、QC高、ULOQ)的七个QC样品。将QC样品放置在两组Cal样品之间。在校准前后运行空白样品。以同样的方式处理和分析Cal和QC样品。
验证运行的验收标准
必须满足以下条件：
最低校准点与标称值的偏差百分比必须在±20％以内。
其他Cal样品与标称值的偏差百分比必须在±15％以内。
所有Cal样品中的至少75％(包括一个最高和一个最低)必须满足上述标准。
Cal曲线的相关系数(R)必须大于0.99。
一个浓度水平的QC样品中的≥67％(例如，7个中有5个)必须在其理论值的±15％以内。对应LLOQ，浓度必须在20％以内。
双空白样品中的分析物信号强度必须小于定量信号限的20％。
分析运行的验收标准
所有QC样品中的≥67％(例如，7个中有5个)必须在理论值的±15％以内。33％的QC样品(并非所有重复都在相同浓度下)可能超出理论值的±15％，否则将重新注入或完全重新分析运行。
校准样品的计算
使用MultiQuant软件(3.0.3版)通过绘制每种分析物和各自氘化的ISTD的测量峰面积比相对于标称浓度来进行线性回归。LSD-d3用于归一化LSD反应，而O-H-LSD-d10用于O-H-LSD归一化。选择加权因子1/x2用于线性回归。将所有符合规范的Cal样品用于生成标准校准曲线。这意味着对于有效运行，标准校准曲线由至少15至最多20个Cal样品组成。超出规范的Cal样品不用于任何进一步的计算。
质量控制样品的计算
通过使用相应的峰面积比，校准曲线等式用于反演计算QC样品中LSD和O-H-LSD的浓度。对照验收标准检查每个QC样品的获得值。
研究性能的计算
精度
精度确定为测定内和测定间的再现性。计算每个QC浓度(测定内)和三次验证运行(测定间)的平均值、标准偏差和相对标准偏差百分比(％CV)。
准确度
准确度是根据每个QC水平的总平均值除以每个测定(测定内)和三次验证运行(测定间)中的标称值来计算的。
选择性I
在至少六种不同样本的不含药物的人血浆中，不应存在大于LLOQ水平下分析物峰面积的20％的干扰。
选择性II
LLOQ水平下至少六个不同样本的样品的平均准确度应在80％-120％之间。这些样品中的≥67％(例如，7个中有5个)的准确度必须在80％-120％之间。
残留
通过注入ULOQ样品，随后注入两个双空白样品来测定样品之间的残留。将双空白样品的分析物峰的信号强度与在ULOQ水平测量的信号强度进行比较。所采用的分析系统的总残留通常约占0.1％。另外，将双空白样品的分析物峰面积与在LLOQ水平下测定的峰面积进行比较。残留应小于LLOQ峰面积的20％，否则必须包括额外的溶剂样品用于研究样品的分析。
回收率和基质效应
根据使用的指南(FDA,2018)，分析物和内标的回收率应一致、精确且可重复。
基质效应应该在至少六批基质中保持一致。根据至少6批基质计算的基质效应的％CV不应大于15％。这种测定至少应在低浓度和高浓度水平下进行(EMA,2011)。
稳定性测试
每种分析物必须在人血浆中稳定至少三次冷冻-解冻循环(用于重复的样品制备)，并在环境温度下稳定至少八小时(样品制备的最长持续时间)。当第一次分析运行无效时，测量的样品对于第二次注入应该是稳定的。分析物必须在预期的储存温度和研究持续时间下在基质中保持稳定。
当在低、中和高浓度下观察到至少三种分析QC样品的分析物浓度的平均值没有增加或减少超过15％时，认为分析物在上述测试之一中是稳定的。
实验的描述
验证运行
在不同的三天里进行了三次有效的验证运行。每次运行由两条校准曲线(一条在验证运行的开始，一条在验证运行的结束)、两个双空白样品、两个空白样品和五个浓度水平的35个QC样品组成。QC水平包括LLOQ(10pg/ml)、QC低(25pg/ml)、QC中(100pg/ml)、QC高(1000pg/ml)和ULOQ(10000pg/ml)浓度水平。在分析ULOQ样品后，直接测量两个双空白样品，以确定该方法的残留。
选择性I
在验证运行期间，对来自七个不同受试者的双空白和空白人血浆进行处理和分析。
选择性II
将来自不同受试者的七个空白血浆样品掺入LLOQ下的分析物，进行处理和分析。基于两条校准曲线(一条在验证运行开始时测量，一条在验证运行结束时测量)评估样品的测定内准确度和精度。
回收率和基质效应
为了测定从人血浆中的回收率，将处理后的QC样品(提取前加标的样品)的峰面积与处理后的空白血浆样品(上清液)的峰面积进行比较，这些空白血浆样品掺入的标称分析物浓度为QC低、QC中、QC高和QCULOQ(提取后加标的样品)。在加标上清液中发现的峰面积对应于100％回收率，并且与加标和处理的血浆样品的相应峰面积进行比较。
通过计算存在基质时的峰面积(通过分析提取后掺入分析物的空白血浆来测量)与不存在基质(使用水代替血浆)时的峰面积之比，确定至少六个不同批次基质的基质效应。该测定是在QC低、QC中、QC高和ULOQ下进行的。
稳定性测试
重新注入再现性
重复分析有效运行的处理后的和测量的Cal和QC样品(在人血浆中制备的)。在10℃(自动进样器)下储存过夜后和在-20℃下储存1周后进行重新注入。根据验证运行的验收标准检查运行。比较初始运行和回注运行之间QC样品的计算平均值。
台面稳定性测试
将人血浆中的每种LLOQ、QC低、QC中、QC高和ULOQ样品中的7个在环境温度下解冻，并在该温度下保持8小时。随后，对样品进行处理和分析。将“短期”样品中的浓度值与新处理的QC样品进行比较。基于在验证运行开始和结束时测量的两个新制备的CAL组来计算浓度。
冷冻/解冻稳定性测试
将人血浆中的每种LLOQ、QC低、QC中、QC高和ULOQ样品中的7个在约-20℃下储存至少24小时，并在环境温度下无辅助解冻。当完全解冻时，样品在相同条件下再冷冻至少12小时。将冷冻-解冻循环再重复两次。在第三个循环之后，对样品进行处理和分析。将冷冻和解冻样品中的浓度与新处理的QC样品进行比较。基于在验证运行开始时测量的两种新制备的CAL和结束时测量的另一种CAL来计算浓度。
方法应用
为了检验所开发方法的应用，对三名健康志愿者的血浆样品中的LSD和O-H-LSD浓度进行定量，这些健康志愿者接受了5μg的一次口服剂量。这对应于在LSD微量给药临床试验中使用的非常低的LSD剂量(Holze等人,2021a)。该研究根据赫尔辛基宣言(Declarationof Helsinki)进行，并经马斯特里赫特学术医院和马斯特里赫特大学医学伦理委员会(Medical Ethics Committee of the Academic Hospital of Maastricht andMaastricht University)批准。由荷兰缉毒局授权在人体中使用LSD。所有志愿者在参与研究前提供书面知情同意书。为了建立浓度-时间曲线，在以下时间点在肝素锂涂覆的管中收集血液样品：治疗后0、0.5、1、1.5、2、3、4、6。将血液样品离心，并且将血浆在-20℃下冷冻直到分析。
方法验证和应用的结果
开发了灵敏的LC-MS/MS方法，并且用简单快速的样品分析工作流程进行了充分验证。
方法验证
验证运行：方法线性、准确度和精度
LSD
三次验证运行的所有校准曲线都有效(表6)。所有校准曲线均为线性，相关系数≥0.997(图3A-3C)。在验证运行过程中，总共分析了105个QC样品。在这105个QC样品中，有100个符合QC样品的规范(表8)。
O-H-LSD
三次验证运行的所有校准曲线都有效(表7)。所有校准曲线均为线性，所有运行的相关系数≥0.997(图3A-3C)。在验证运行过程中，总共分析了105个QC样品。在这105个QC样品中，有99个符合QC样品的规范(表9)。
表6：LSD校准曲线的准确度和精度数据
*在85％-115％(对于LLOQ，为80％-120％)的范围之外，不用于计算
表7：O-H-LSD校准曲线的准确度和精度数据
图3A-3C是人血浆中LSD和O-H-LSD的校准曲线。在10至10000pg/ml的浓度范围内观察到线性，其具有≥0.997的高相关系数。分析于2020年7月18日(A)、20日(B)和21日(C)进行。所开发的方法实现了10pg/ml的定量下限，并在分析物信号与10至10000pg/ml的浓度之间呈现出线性关系。
表8：LSD的测定内和测定间精度和准确度
*在85％-115％(对于LLOQ，为80％-120％)的范围之外，不用于计算
表9：O-H-LSD的测定内和测定间精度和准确度
*在85％-115％(对于LLOQ，为80％-120％)的范围之外，不用于计算
选择性
选择性I
来自七名不同受试者的处理后的双空白人血浆未显示出对分析物的显著干扰(≤12.1％)(表10)。还在氘化的ISTD(空白样品)存在下评估了选择性。ISTD确实对LSD造成了不显著的干扰(≤15.3％)，并且对O-H-LSD造成了轻微的干扰(≤25.4％)。重要的是，在不同受试者的血浆中观察到的干扰是一致的。总体而言，该方法对所研究的分析物具有选择性，如图4所示。
表10：人血浆中LSD和O-H-LSD的选择性I
图4A-4D显示了人血浆中LSD和O-H-LSD的选择性。显示了七个O-H-LSD(图4A)和LSD(图4B)双空白(粗黑线)和LLOQ(虚线)色谱图的叠加。显示了七个O-H-LSD(图4C)和LSD(图4D)空白(粗黑线)和LLOQ(虚线)色谱图的叠加。与LSD和OH-LSD获得的定量下限(LLOQ)信号相比，人血浆基质的干扰可以忽略不计。
图4A-4D显示了人血浆中LSD和O-H-LSD的选择性。显示了七个O-H-LSD(图4A)和LSD(图4B)双空白(灰色)和LLOQ(蓝绿色)色谱图的叠加。显示了七个O-H-LSD(图4C)和LSD(图4D)空白(灰色)和LLOQ(蓝绿色)色谱图的叠加。与LSD和OH-LSD获得的定量下限(LLOQ)信号相比，人血浆基质的干扰可以忽略不计。
选择性II
所有样品都符合选择性II规范(准确度：82.2％-100％，血浆1-7的精度：≤6.29％)，这强调了该方法在分析血浆中浓度高达10pg/ml的LSD和O-H-LSD时具有选择性和灵敏度。LSD和O-H-LSD的结果如表11所示。
表11：人血浆中LSD和O-H-LSD的选择性II
残留
两次注入之间的残留≤0.1％。在注入ULOQ样品后，直接测量两个双空白样品。第二个双空白样品的平均信号强度分别占LLOQ水平下LSD和O-H-LSD信号平均的19.6％和14.7％(表12)。
表12：LSD和O-H-LSD在不同注入之间的残留
回收率
表13和表14分别列出了LSD和O-H-LSD的总回收率。所有分析物的回收率在整个浓度范围内是一致的，并且在来自不同受试者的血浆之间是一致的。计算出LSD和O-H-LSD的平均回收率分别为98.3％±1.35％和102％±3.84％。与LSD和O-H-LSD相比，ISTD、LSD-d3和O-H-LSD-d10的回收率相似。
表13：来自七个个体的人血浆的LSD的回收率
表14：来自七个个体的人血浆的O-H-LSD的回收率
基质效应
LSD和LSD-d3的基质效应如表15所示。LSD的平均基质效应为+8％，并且对于LSD-d3是+18％。基质效应在不同血浆批次中是一致的(％CV≤5.77％)，并且与所用的LSD浓度无关(25-10000pg/mL：≤5.53％)。
表15：七个个体的人血浆中LSD和LSD-d3的基质效应
O-H-LSD和O-H-LSD-d10的基质效应如表16所示。LSD的平均基质效应为-10％，并且对于O-H-LSD-d10是-6.8％。基质效应在不同血浆批次中是一致的(％CV≤5.77％)，并且与所用的O-H-LSD浓度无关(CV％25-10000pg/mL：≤2.65％)。
表16：七个个体的人血浆中O-H-LSD和O-H-LSD-d10的基质效应
稳定性测试
重新注入再现性
验证运行及其重新注入是有效的。这表明，在自动进样器中在10℃下储存过夜后，以及在LC-MS/MS系统出现故障的情况下在-20℃下储存至少一周后，可以对运行进行重新注入。在10℃下过夜储存后，两次运行的QC的平均值的偏差对于LSD在-0.451％至+2.3％之间，对于O-H-LSD在-1.59％至+2.08％之间。重新注入的QC样品满足验证运行的规范标准。结果呈现在表17和表18中。在-20℃下8天后，两次运行的QC的平均值的偏差对于LSD在-1.85％至+1.02％之间，对于O-H-LSD在-2.09％至+1.9％之间。重新注入的QC样品满足验证运行的规范标准。结果呈现在表19和表20中。
表17：在自动进样器中在10℃下储存过夜后来自重新注入的LSD的QC结果。
表18：在自动进样器中在10℃下储存过夜后来自重新注入的O-H-LSD的QC结果。
表19：在-20℃下储存8天后来自重新注入的LSD的QC结果。
表20：在-20℃下储存8天后来自重新注入的O-H-LSD的QC结果。
冷冻/解冻和短期稳定性
在室温下三次冷冻/解冻循环和八个小时后，LSD和O-H-LSD的血浆浓度没有显著变化(表21-24)。在三次冷冻/解冻循环后，LSD的血浆浓度变化≤8.83％，O-H-LSD的血浆浓度变化≤6.46％。室温储存8小时后，LSD和O-H-LSD的血浆浓度变化分别为≤3.81％和≤4.52％。
表21：在三次冷冻-解冻循环后LSD的稳定性
表22：在三次冷冻-解冻循环后O-H-LSD的稳定性
表23：在室温下储存8小时后LSD的稳定性
表24：在室温下储存8小时后O-H-LSD的稳定性
LC-MS/MS方法的临床应用
通过分析用口服剂量为5μg的LSD碱进行治疗的三个健康志愿者中LSD和O-H-LSD的PK来评估该方法的应用(图5)。向三名健康志愿者施用口服剂量为5μg的在乙醇中的LSD碱(Holze等人,2021)。在治疗前和治疗后长达六个小时内，对LSD和O-H-LSD血浆浓度进行定量。图5显示了LSD和O-H-LSD的浓度-时间曲线。显示了平均值和标准偏差。
LSD和O-H-LSD的最高血浆水平平均分别为178pg/ml(SD：30.6pg/ml)和10.4pg/ml(SD：2.59pg/ml)。大约在治疗后1小时LSD达到Tmax，而O-H-LSD在3小时后达到峰值。仅5μg剂量后测量的LSD浓度高于方法定量限的约7至18倍。因此，对于非常低的所谓微剂量，也可以直接确定LSD的PK(Kuypers等人,2019)。在O-H-LSD的情况下，需要更大量的血浆样品来测定5μg剂量后的血浆浓度-时间曲线。使用了多三倍的血浆(150而不是50μl)，如上所述进行提取，其中使用多三倍的乙腈用于提取。通过蒸发提取物并在150μl的流动相A和流动相B(9/1v/v)的混合物中重构残留物，提高了灵敏度。该实例表明，通过使用更大量的样品，可以简单地提高方法的灵敏度。未来还将考虑注入更大量的提取物，该提取物在第一步中被保留并浓缩在捕获柱上。在第二步中，倒转流动的方向，从而可以在分析柱上装载和洗脱样品。如果样品可以保留在捕获柱上，这种柱切换程序将提高灵敏度。重要的是，由此可以避免耗时的溶剂蒸发步骤。
总体而言，该方法的应用实例表明，该方法适用于使用LSD微剂量对临床样品进行定量。此外，如果必须提高分析的灵敏度，则可以容易地调整该方法。
结论
与测量人血浆中LSD的其他生物分析方法相比，本文所述的方法只需要少量样品，并且特征在于简单的提取程序，这有助于有效分析。提取方案导致几乎完全的分析物回收。在不同的血浆批次中几乎没有观察到基质效应，而且基质不干扰LSD或O-H-LSD的分析。在选择的校准范围内，两种分析物的定量都是准确和精确的，并且与给药LSD的人体中观察到的水平相当。总体而言，当前的生物分析方法是进一步发展LSD作为治疗剂的重要工具。
在整个申请中，将包括美国专利在内(如果有的话)的各种出版物均按作者和年份以及专利号进行援引。下面列出了这些出版物的完整引文。这些出版物和专利的披露内容以其全文通过援引特此并入本申请中，以便更全面地描述本发明所属领域的现状。
已经以示例性的方式描述了本发明，并且应理解，已经使用的术语意在具有说明性词语的性质，而非限制性的。
显而易见地，能够根据以上传授内容进行本发明的很多修改和变化。因此，应当理解，在所附权利要求的范围内可以用不同于特定描述的方式来实践本发明。
参考文献
1.Berg T,B,&Strand DH(2013).Determination of buprenorphine,fentanyl and LSD in whole blood by UPLC-MS-MS.Journal of AnalyticalToxicology 37:159-165.
2.Bershad AK,Schepers ST,Bremmer MP,Lee R,&de Wit H(2019).AcuteSubjective and Behavioral Effects of Microdoses of Lysergic Acid Diethylamidein Healthy Human Volunteers.Biological Psychiatry 86:792-800.
3.Bogusz MJ,Maier RD,Krüger KD,&Kohls U(1998).Determination of commondrugs of abuse in body fluids using one isolation procedure and liquidchromatography-atmospheric-pressure chemical-ionization massspectrometry.Journal of Analytical Toxicology 22:549-558.
4.Burnley BT,&George S(2003).The development and application of a gaschromatography-mass spectrometric(GC-MS)assay to determine the presence of2-oxo-3-hydroxy-LSD in urine.Journal of Analytical Toxicology 27:249-252.
5.Cai J,&Henion J(1996).On-line immunoaffinity extraction-coupledcolumn capillary liquid chromatography/tandem mass spectrometry:Traceanalysis of LSD analogs and metabolites in human urine.Analytical Chemistry68:72-78.
6.Canezin J,Cailleux A,Turcant A,Le Bouil A,Harry P,&Allain P(2001).Determination of LSD and its metabolites in human biological fluids by high-performance liquid chromatography with electrospray tandem massspectrometry.Journal of Chromatography B:Biomedical Sciences and Applications765:15-27.
7.Caspar AT,Kollas AB,Maurer HH,&Meyer MR(2018).Development ofaquantitative approach in blood plasma for low-dosed hallucinogens andopioids using LC-high resolution mass spectrometry.Talanta 176:635-645.
8.Chung A,Hudson J,&McKay G(2009).Validated ultra-performanceliquidchromatography-tandem mass spectrometry method for analyzing LSD,iso-LSD,nor-LSD,and O-H-LSD in blood and urine.Journal of Analytical Toxicology33:253-259.
9.Cui M,McCooeye MA,Fraser C,&Mester Z(2005).Quantitation oflysergicacid diethylamide in urine using atmospheric pressure matrix-assistedlaserdesorption/ionization ion trap mass spectrometry.Analytical Chemistry76:7143-7148.
10.Dolder PC,Liechti ME,&Rentsch KM(2014).Development and validationof arapid turboflow LC-MS/MS method for the quantification of LSD and 2-oxo-3-hydroxyLSD in serum and urine samples of emergency toxicologicalcases.Analytical andBioanalytical Chemistry 407:1577-1584.
11.Dolder PC,Liechti ME,&Rentsch KM(2018).Development and validationofan LC-MS/MS method to quantify lysergic acid diethylamide(LSD),iso-LSD,2-oxo-3-hydroxy-LSD,and nor-LSD and identify novel metabolites in plasmasamples in acontrolled clinical trial.Journal of Clinical Laboratory Analysis32:12-15.
12.Dolder PC,Schmid Y,Haschke M,Rentsch KM,&Liechti ME(2015).Pharmacokinetics and concentration-effect relationship of oral LSD inhumans.Int JNeuropsychopharmacol 19:pyv072.
13.Dolder PC,Schmid Y,Steuer AE,Kraemer T,Rentsch KM,Hammann F,&Liechti ME(2017).Pharmacokinetics and pharmacodynamics of lysergicaciddiethylamide in healthy subjects.Clinical Pharmacokinetics 56:1219-1230.
14.EMA(2011).Guideline on bioanalytical method validation.EuropeanMedicinesAgency(https://www.ema.europa.eu/en/bioanalytical-method-validation)
15.Family N,Maillet EL,Williams LTJ,Krediet E,Carhart-Harris RL,Williams TM,Nichols CD,Goble DJ,&Raz S(2020).Safety,tolerability,pharmacokinetics,andpharmacodynamics of low dose lysergic acid diethylamide(LSD)in healthy oldervolunteers.Psychopharmacology 237:841-853.
16.Favretto D,Frison G,Maietti S,&Ferrara SD(2007).LC-ESI-MS/MS on aniontrap for the determination of LSD,iso-LSD,nor-LSD and 2-oxo-3-hydroxy-LSDin blood,urine and vitreous humor.International Journal of Legal Medicine121:259-265.
17.FDA(2018).Bioanalytical Method Validation Guidance forIndustry.U.S.Foodand drugadministration(https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/bioanalytical-method-validation-guidance-industry)
18.Fisichella M,Odoardi S,&Strano-Rossi S(2015).High-throughputdispersiveliquid/liquid microextraction(DLLME)method for the rapiddetermination of drugs ofabuse,benzodiazepines and other psychotropicmedications in blood samples by liquidchromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS)and app.Microchemical Journal123:33-41.
19.Francom P,Andrenyak D,Lim HK,Bridges RR,Jones RT,&Foltz RL(1988).Determination of lsd in urine by capillary column gas chromatography andelectron impactmass spectrometry.Journal of Analytical Toxicology 12:1-8.
20.Gasser P,Holstein D,Michel Y,Doblin R,Yazar-Klosinski B,Passie T,&Brenneisen R(2014).Safety and efficacy of lysergic acid diethylamide-assistedpsychotherapy for anxiety associated with life-threateningdiseases.Journal of Nervous andMental Disease 202:513-520.
21.Grumann C,Henkel K,Stratford A,Hermanns-Clausen M,Passie T,BrandtSD,V(2019).Validation of an LC-MS/MS method for the quantitativeanalysis of1P-LSD and its tentative metabolite LSD in fortified urine andserum samples includingstability tests for 1P-LSD under different storageconditions.Journal of Pharmaceutical andBiomedical Analysis 174:270-276.
22.Hoja H,Marquet P,Verneuil B,Lotfi H,Dupuy JL,G(1997).Determination of LSD and N-demethyl-LSD in urine by liquid chromatographycoupled toelectrospray ionization mass spectrometry.Journal of ChromatographyB:BiomedicalApplications 692:329-335.
23.Holze F,Duthaler U,Vizeli P,Muller F,Borgwardt S,&Liechti ME(2019).Pharmacokinetics and subjective effects of a novel oral LSDformulation in healthysubjects.British Journal of Clinical Pharmacology 85:1474-1483.
24.Holze F,Liechti ME,Hutten N,Mason NL,Dolder PC,Theunissen EL,DuthalerU,Feilding A,Ramaekers JG,&Kuypers KPC(2021a).Pharmacokineticsandpharmacodynamics of lysergic acid diethylamide microdoses in healthyparticipants.Clinical and Pharmacological Therapeutics 109:658-666.
25.Holze F,Vizeli P,Ley L,Müller F,Dolder P,Stocker M,Duthaler U,Varghese N,Eckert A,Borgwardt S,&Liechti ME(2021b).Acute dose-dependenteffects of lysergicacid diethylamide in a double-blind placebo-controlledstudy in healthy subjects.Neuropsychopharmacology46:537-544.
26.Horn CK,Klette KL,&Stout PR(2003).LC-MS analysis of 2-oxo-3-hydroxy LSD from urine using apositive-pressure processor withPolychromTMCLIN II columns.Journal of Analytical Toxicology 27:459-463.
27.Hutten N,Mason NL,Dolder P,Theunissen EL,Holze F,Liechti ME,Varghese N,Eckert A,Feilding A,Ramaekers JG,&Kuypers KP(2020).Low dose LSDacutely increases BDNF blood plasma levels in healthy volunteers.ACSPharmacologial Translational Science 31:461-466.
28.Hutten N,Mason NL,Dolder PC,&Kuypers KPC(2019).Motives and Side-Effects of Microdosing With Psychedelics Among Users.Internatonal Journal ofNeuropsychopharmacology 22:426-434.
29.Jang M,Kim J,Han I,&Yang W(2015).Simultaneous determination of LSDand 2-oxo-3-hydroxy LSD in hair and urine by LC-MS/MS and its application toforensic cases.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 115:138-143.
30.Johansen SS,&Jensen JL(2005).Liquid chromatography-tandem massspectrometry determination of LSD,ISO-LSD,and the main metabolite 2-oxo-3-hydroxy-LSD in forensic samples and application in a forensic case.Journal ofChromatography B:Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences825:21-28.
31.Klette KL,Horn CK,Stout PR,&Anderson CJ(2002).LC-MS analysis ofhuman urine specimens for 2-Oxo-3-hydroxy LSD:Method validation for potentialinterferants and stability study of 2-Oxo-3-hydroxy LSD under various storageconditions.Journal of Analytical Toxicology 26:193-200.
32.Krebs TS,&Johansen PO(2013).Over 30 million psychedelic users inthe United States.F1000Res 2:98.
33.Kuypers KP,Ng L,Erritzoe D,Knudsen GM,Nichols CD,Nichols DE,PaniL,Soula A,&Nutt D(2019).Microdosing psychedelics:more questions than answers？An overview and suggestions for future research.Journal of Psychopharmacology33:1039-1057.
34.Kuypers KPC(2020).The therapeutic potential of microdosingpsychedelics in depression.Therapeutic Advances in Psychopharmacology 10:2045125320950567.
35.Libong D,Bouchonnet S,&Ricordel I(2003).A selective and sensitivemethodfor quantitation of lysergic acid diethylamide(LSD)in whole blood bygaschromatography-ion trap tandem mass spectrometry.Journal of AnalyticalToxicology 27:24-29.
36.Liechti ME(2017).Modern Clinical Research onLSD.Neuropsychopharmacology 42:2114-2127.
37.Lim HK,Andrenyak D,Francom P,Foltz RL,&Jones RT(1988).Quantificationof LSD and N-Demethyl-LSD in Urine by Gas Chromatography/Resonance ElectronCapture Ionization Mass Spectrometry.Analytical Chemistry60:1420-1425.
38.Martin R,J,Gasse A,Pfeiffer H,&H(2013).Determination of psilocin,bufotenine,LSD and its metabolites in serum,plasmaand urineby SPE-LC-MS/MS.International Journal of Legal Medicine 127:593-601.
39.Nelson CC,&Foltz RL(1992).Determination of Lysergic AcidDiethylamide(LSD),Iso-LSD,and/V-Demethyl-LSD in Body Fluids by GasChromatography/TandemMass Spectrometry.Analytical Chemistry 64:1578-1585.
40.Musshoff,F.and T.Daldrup(1997)."Gas chromatographic/massspectrometricdetermination of lysergic acid diethylamide(LSD)in serumsamples."Forensic ScienceInternational 88:133-140.
41.Papac DI,&Foltz RL(1990).Measurement of lysergic acid diethylamide(lsd)inhuman plasma by gas chromatography/negative ion chemical ionizationmass spectrometry.Journal of Analytical Toxicology 14:189-190.
42.Paul BD,Mitchell JM,Burbage R,Moy M,&Sroka R(1990).Gaschromatographic-electron-impact mass fragmentometric determination oflysergic aciddiethylamide in urine.Journal of Chromatography B:BiomedicalSciences andApplications 529:103-112.
43.Paulke A,Kremer C,Wunder C,&Toennes SW(2012).Analysis of lysergicacidamide in human serum and urine after ingestion of Argyreia nervosaseeds.Analytical andBioanalytical Chemistry 404:531-538.
44.Pietsch J,Schulz K,B,Trauer H,Dreβler J,&Gey M(2004).Alternativemethod for forensic determination of lysergic acid diethylamideand related compounds inbody fluids by liquid-liquid extraction and HPLC withfluorescence detection.Chromatographia 60:89-92.
45.Poch GK,Klette KL,&Anderson C(2000).The quantitation of 2-oxo-3-hydroxylysergic acid diethylamide(O-H-LSD)in human urine specimens,ametabolite of LSD:Comparative analysis using liquid chromatography-selectedion monitoring massspectrometry and liquid chromatography-ion trap massspec.Journal of AnalyticalToxicology 24:170-179.
46.Ramaekers JG,Hutten N,Mason NL,Dolder P,Theunissen EL,Holze F,LiechtiME,Feilding A,&Kuypers KP(2021).A low dose of lysergic aciddiethylamide decreasespain perception in healthy volunteers.Journal ofPsychopharmacology 35:398-405.
47.Reuschel SA,Percey SE,Liu S,Eades DM,&Foltz RL(1999).Quantitativedetermination of LSD and a major metabolite,2-oxo-3-hydroxy-LSD,in human urine bysolid-phase extraction and gas chromatography-tandem massspectrometry.Journal ofAnalytical Toxicology 23:306-312.
48.Rule GS,&Henion JD(1992).Determination of drugs from urine by on-lineimmunoaffinity chromatography-high-performance liquid chromatography-massspectrometry.Journal of Chromatography B:Biomedical Sciences andApplications 582:103-112.
49.Sklerov JH,Kalasinsky KS,&Ehorn CA(1999).Detection of lysergicaciddiethylamide(LSD)in urine by gas chromatography-ion trap tandem massspectrometry.Journal of Analytical Toxicology 23:474-478.
50.Sklerov JH,Magluilo J,Jr.,Shannon KK,&Smith ML(2000).Liquidchromatography-electrospray ionization mass spectrometry for thedetection of lysergideand a major metabolite 2-oxo-3-hydroxy-LSD,in urine andblood.Journal of AnalyticalToxicology 24:543-549.
51.Steuer AE,Poetzsch M,Stock L,Eisenbeiss L,Schmid Y,Liechti ME,&Kraemer T(2017).Development and validation of an ultra-fast and sensitivemicroflowliquid chromatography-tandem mass spectrometry(MFLC-MS/MS)methodforquantification of LSD and its metabolites in plasma and application to acontrolled LSDadministration study in huma.Drug Testing and Analysis 9:788-797.
52.White SA,Catterick T,Harrison ME,Johnston DE,Reed GD,&Webb KS(1997).Determination of lysergide in urine by high-performance liquidchromatographycombined with electrospray ionisation mass spectrometry.Journalof Chromatography B:Biomedical Applications 689:335-340.
53.Yanakieva S,Polychroni N,Family N,Williams LTJ,Luke DP,&Terhune DB(2019).The effects of microdose LSD on time perception:a randomised,double-blind,placebo-controlled trial.Psychopharmacology 236:1159-1170.

Claims (3)

1.一种测量和鉴定麦角酸二乙基酰胺，简称为LSD，及其主要代谢物2,3-二氢-3-羟基-2-氧代麦角二乙胺，简称为O-H-LSD，的方法，该方法包括以下步骤：
将从个体获得的300µL的血浆作为样品；以及
通过进行LC-MS/MS分析来测量、鉴定和定量该样品中的LSD和O-H-LSD，包括：从该样品中取50µL等分试样与内标工作溶液混合，离心，将上清液注入LC-MS/MS系统中，经由安装在分析柱前面的T型接管在线稀释，选择耐pH分析柱，以便对于流动相A使用9.0的pH，其中，每个样品的分析运行时间为4分钟，且该LC-MS/MS分析步骤具有0.5 pg LSD的定量限。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述方法以每96个样品40分钟的提取时间。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述方法在施用微剂量的LSD后进行，并且其中所述方法能够在施用后长达六小时测量、鉴定和定量该LSD。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115561353A (zh) * 2022-09-22 2023-01-03 河北省药品医疗器械检验研究院(河北省化妆品检验研究中心) 一种测定马来酸甲麦角片剂中乙醇量的方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6207396B1 (en) * 1995-11-20 2001-03-27 Microgenics Corporation Immunoassay reagents and methods for determination of LSD and LSD metabolites
WO1999042840A1 (en) * 1998-02-20 1999-08-26 Microgenics Corporation Immunoassays for determination of lsd and lsd metabolites
GB0304433D0 (en) 2003-02-27 2003-04-02 Xceleron Ltd Improvements relating to chemical libraries
WO2007090081A2 (en) * 2006-01-27 2007-08-09 The Board Of Governors For Higher Education State Of Rhode Island And Providence Plantations Analysis of mycophenolic acid in saliva using liquid chromatography tandem mass spectrometry
AU2008283903B2 (en) 2007-08-06 2014-01-16 Biotie Therapies, Inc Methods for treating dependence
CN101776671B (zh) * 2010-01-05 2012-06-27 浙江大学 一种用于中药复杂成分分析的实时特征提取方法
EP2706355A1 (en) 2012-09-11 2014-03-12 Sensa Bues AB System and method for eluting and testing substance from exhaled aerosol sample
MX2016000293A (es) * 2013-07-09 2016-06-21 Stemina Biomarker Discovery Inc Biomarcadores del trastrono del espectro autista.
CN107543873B (zh) * 2016-10-26 2020-10-13 王喜军 一种基于冠心病心阳虚证的代谢标记物的鉴定方法
CN109709225B (zh) * 2018-12-28 2022-02-18 贵州医科大学 一种血浆中militarine及其代谢物的定性定量分析方法
US20220187304A1 (en) * 2019-01-28 2022-06-16 Redhot Diagnostics Ab A Method for Measuring a Concentration of a Biomarker-Analyte In Blood from Mammals

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Development and validation of a rapid turboflow LC-MS/MS method for the quantification of LSD and 2-oxo-3-hydroxy LSD in serum and urine samples of emergency toxicological cases;Patrick C. Dolder 等;Anal Bioanal Chem;20141227;第407卷(第6期);摘要, 第1579页左栏第2段, 第1581页右栏第10段 *

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