CN116195575A - 一种液基细胞保存液及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种液基细胞保存液及其制备方法和应用，所述液基细胞保存液的组分以质量百分含量计包括：缓冲剂0.1‑10％、酶抑制剂0.001‑1％、有机溶剂10‑50％、水。该细胞保存液广泛适用于各类液基细胞尤其适用较难实现保存的针吸细胞，该细胞保存液既能有效保存细胞形态进行液基细胞学实验，又能无需解交联核酸提取进行分子实验，因此取材一次可以同时用来做液基细胞学实验和分子检测，大大提高了疾病诊断的效率。

Description

一种液基细胞保存液及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于细胞保存液技术领域，涉及一种液基细胞保存液及其制备方法和应用，尤其涉及一种针对针吸细胞的保存液及其制备方法和应用。

背景技术

针吸细胞学也称为细针吸取细胞学，其方法简便、安全、快速、敏感性好，确诊率高，微创伤性，已成为临床肿瘤疾病快速确诊的重要方法之一。针吸细胞标本采集的基本原理是用穿刺针准确刺破皮肤进入病变区域后，通过提插针方式，使斜面部对病变组织进行多次抽提切割，并同时借助针管内的持续负压将割获得标本吸入针芯及针筒内，从而获得细胞标本。所获的细胞标本需及时放入保存液中进行固定，细胞保存液起到保持、固定细胞原形态结构的作用，是病理细胞诊断基础，因为如果细胞形态结构发生变化，可能会带来诊断结果的误差，所以需要细胞保存液进行固定细胞形态。

目前多数的细胞保存液为了能够最大程度的固定细胞形态，避免细胞发生退变，不影响液基细胞学制片及诊断，起到保护细胞的作用，会加入较多的醇、醛类。而醇、醛类物质介导的DNA与核蛋白之间的交联结构，生物大分子之间缓慢形成广泛的亚甲基交联桥，导致DNA链的脆性增加，更容易发生随机断裂，进行核酸提取时不能获得完整的扩增靶区域片段，致使分子检测失败。这就会导致取材一次只能单一用来做液基细胞学实验，分子检测需要再取材。例如CN110742059A公开了一种液基细胞保存液，其成分包括：酒精300-350ml，水600-650ml，磷酸二氢钾15g，磷酸氢二钠8g，乙二胺四乙酸二钠1.8g，二硫苏糖醇1.5g，氯化铵0.9g，叠氮钠0.2g；还提供了上述液基细胞保存液的制备方法；该液基细胞保存液够快速固定细胞，稳定细胞的pH值，防止标本中血液凝结，及时裂解标本中的红细胞，溶解标本中粘液的粘蛋白，同时防腐杀菌，使标本可以长期保存。

当然，在核酸提取过程中增加解交联步骤即可避免分子检测实验失败，但目前大部分核酸提取设备无法进行解交联这一步，若进行手工柱提，那么实验时间就比较久，且无法实现自动化，影响日常工作中的效率。同时，目前开发的液基细胞保存液大多适应范围比较窄，对脱落细胞效果较好，对针吸细胞效果不佳，且针对针吸细胞的保存液鲜少，因此，开发一种广泛适用于液基细胞尤其适用针吸细胞的既能有效保存细胞形态进行液基细胞学实验，又能无需解交联核酸提取进行分子实验的细胞保存液是非常有意义的。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种液基细胞保存液及其制备方法和应用，尤其提供一种针对针吸细胞的保存液及其制备方法和应用。该细胞保存液广泛适用于各类液基细胞尤其适用较难实现保存的针吸细胞，该细胞保存液既能有效保存细胞形态进行液基细胞学实验，又能无需解交联核酸提取进行分子实验，因此取材一次可以同时用来做液基细胞学实验和分子检测，大大提高了疾病诊断的效率。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种液基细胞保存液，所述液基细胞保存液的组分以质量百分含量计包括：缓冲剂0.1-10％、酶抑制剂0.001-1％、有机溶剂10-50％、水。

本发明所涉及的液基细胞保存液包含特定质量百分含量的缓冲剂、酶抑制剂和有机溶剂，其中有机溶剂起到固定细胞形态，避免细胞发生退变的作用，其中酶抑制剂起到保护核酸，使DNA链不易发生随机断裂的作用。有机溶剂的添加量为10-50％是因为若添加量过高或过低则会打破酶抑制剂和有机溶剂的平衡，无法获得既能有效保存细胞形态又能无需解交联核酸提取的效果；酶抑制剂的添加量为0.001-1％是因为若添加量过高或过低都会使保护核酸的效果变差。

所述缓冲剂的质量百分含量可以选择0.1％、0.5％、0.8％、1％、2％、4％、6％、7％、8％、10％等。

所述酶抑制剂的质量百分含量可以选择0.001％、0.005％、0.01％、0.05％、0.08％、0.1％、0.2％、0.3％、0.5％、0.8％、1％等。

所述有机溶剂的质量百分含量可以选择10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％等。

上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述缓冲剂包括氯化盐和磷酸盐。

本发明所涉及的细胞保存液中的缓冲剂优选同时含有如下质量配比的氯化盐和磷酸盐，使得细胞的状态保持效果更优。

优选地，所述氯化盐与磷酸盐的质量比为(5-20):1，例如5:1、8:1、10:1、12:1、14:1、16:1、18:1、20:1等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述氯化盐包括氯化钠和/或氯化钾。

优选地，所述磷酸盐包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾或磷酸二氢钾中的任意一种或至少两种的组合。

优选地，所述酶抑制剂包括盐酸胍。

本发明创造性地以盐酸胍作为细胞保存液中的酶抑制剂，其能很好地保护核酸，发挥DNA链不易发生随机断裂的作用，获得既能有效保存细胞形态又能无需解交联核酸提取的效果。

优选地，所述酶抑制剂为盐酸胍和乙二胺四乙酸的组合。

本发明还创造性地发现以盐酸胍和乙二胺四乙酸的组合作为细胞保存液中的酶抑制剂，其在保护核酸方面的效果更显著。

优选地，所述盐酸胍与乙二胺四乙酸的质量比为(3-8):1，例如3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述有机溶剂包括醛和醇。

优选地，所述醛包括多聚甲醛和/或甲醛，更优选多聚甲醛。

优选地，所述醛在液基细胞保存液中的质量百分含量为0.001-0.009％，例如0.001％、0.002％、0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.007％、0.008％等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

所述醛在液基细胞保存液中的质量百分含量特定选择为0.001-0.009％是因为若其添加量进一步增加或降低，其固定细胞形态的效果会显著降低。

优选地，所述醇包含乙醇。

优选地，所述醇还包含甲醇和/或异丙醇。

本发明还发现进一步地添加甲醇和/或异丙醇与乙醇形成醇的复配方式，能够更加显著地提高产品在固定细胞形态上的效果。

第二方面，本发明提供根据第一方面所述的液基细胞保存液的制备方法，所述制备方法包括：

将缓冲剂、酶抑制剂与水混合溶解，然后与有机溶剂混合，即可。

本发明所涉及的液基细胞保存液的制备工艺简单易操作，适合大规模的工业化生产。

第三方面，本发明提供根据第一方面所述的液基细胞保存液在保存液基细胞学检测和BRAF检测临床样本中的应用。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

本发明所涉及的液基细胞保存液包含特定质量百分含量的缓冲剂、酶抑制剂和有机溶剂，其中有机溶剂起到固定细胞形态，避免细胞发生退变的作用，其中酶抑制剂起到保护核酸，使DNA链不易发生随机断裂的作用。该细胞保存液广泛适用于各类液基细胞尤其适用较难实现保存的针吸细胞，该细胞保存液既能有效保存细胞形态进行液基细胞学实验，又能无需解交联核酸提取进行分子实验，因此取材一次可以同时用来做液基细胞学实验和分子检测，方便临床取材，减少病人因多次取材造成的痛苦，节省了操作时间，操作更简便，可以适用更多的核酸提取设备，更能适应实际工作场景，大大提高了疾病诊断的效率，为临床诊断提供更多的支持。

附图说明

图1是保存于实施例1制得的保存液中1天后的细胞染色玻片成像图；

图2是保存于实施例1制得的保存液中1天后的细胞核酸分子检测图；

图3是保存于实施例1制得的保存液中7天后的细胞染色玻片成像图；

图4是保存于实施例1制得的保存液中7天后的细胞核酸分子检测图；

图5是保存于实施例1制得的保存液中14天后的细胞染色玻片成像图；

图6是保存于实施例1制得的保存液中14天后的细胞核酸分子检测图；

图7是保存于实施例1制得的保存液中21天后的细胞染色玻片成像图；

图8是保存于实施例1制得的保存液中21天后的细胞核酸分子检测图；

图9是保存于实施例2制得的保存液中7天后的细胞染色玻片成像图；

图10是保存于实施例2制得的保存液中7天后的细胞核酸分子检测图；

图11是保存于实施例3制得的保存液中7天后的细胞染色玻片成像图；

图12是保存于实施例3制得的保存液中7天后的细胞核酸分子检测图；

图13是保存于实施例4制得的保存液中7天后的细胞染色玻片成像图；

图14是保存于实施例4制得的保存液中7天后的细胞核酸分子检测图；

图15是保存于实施例5制得的保存液中7天后的细胞染色玻片成像图；

图16是保存于实施例5制得的保存液中7天后的细胞核酸分子检测图；

图17是保存于实施例6制得的保存液中7天后的细胞染色玻片成像图；

图18是保存于实施例6制得的保存液中7天后的细胞核酸分子检测图；

图19是保存于实施例7制得的保存液中7天后的细胞染色玻片成像图；

图20是保存于实施例7制得的保存液中7天后的细胞核酸分子检测图；

图21是保存于实施例8制得的保存液中7天后的细胞染色玻片成像图；

图22是保存于实施例8制得的保存液中7天后的细胞核酸分子检测图；

图23是保存于实施例9制得的保存液中7天后的细胞染色玻片成像图；

图24是保存于实施例9制得的保存液中7天后的细胞核酸分子检测图；

图25是保存于实施例10制得的保存液中7天后的细胞染色玻片成像图；

图26是保存于实施例10制得的保存液中7天后的细胞核酸分子检测图；

图27是保存于对比例1制得的保存液中1天后的细胞染色玻片成像图；

图28是保存于对比例1制得的保存液中1天后的细胞核酸分子检测图；

图29是保存于实施例1制得的保存液中7天后的浆膜腔细胞染色玻片成像图；

图30保存于实施例1制得的保存液中7天后的浆膜腔细胞核酸分子检测图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

下述实施例中涉及的多聚甲醛为购自于生工生物工程(上海)股份有限公司的型号为A500684-0500的产品。下述实施例中涉及的乙二胺四乙酸为购自生工生物工程(上海)股份有限公司的型号为A600107-0500的产品。

下述应用例中使用的染色液、核酸提取试剂盒来自于广州安必平医药科技股份有限公司，BRAF基因检测试剂盒来自于艾德生物医药科技股份有限公司。

实施例1

本实施例提供一种液基细胞保存液，其以质量百分含量计由如下组分组成：氯化钠0.55％、氯化钾0.01％、磷酸二氢钠0.02％、磷酸二氢钾0.01％、盐酸胍0.05％、乙二胺四乙酸0.01％、多聚甲醛0.001％、乙醇17％、甲醇0.5％、异丙醇8％、余量为纯化水。

制备方法为：将氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、盐酸胍、乙二胺四乙酸与水混合溶解，然后与多聚甲醛、乙醇、甲醇、异丙醇混合，即可。

实施例2

本实施例提供一种液基细胞保存液，其以质量百分含量计由如下组分组成：氯化钠0.55％、氯化钾0.01％、磷酸二氢钠0.02％、磷酸二氢钾0.01％、盐酸胍0.06％、多聚甲醛0.001％、乙醇17％、甲醇0.5％、异丙醇8％、余量为纯化水。

制备方法为：将氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、盐酸胍与水混合溶解，然后与多聚甲醛、乙醇、甲醇、异丙醇混合，即可。

实施例3

本实施例提供一种液基细胞保存液，其以质量百分含量计由如下组分组成：氯化钠0.55％、氯化钾0.01％、磷酸二氢钠0.02％、磷酸二氢钾0.01％、乙二胺四乙酸0.06％、多聚甲醛0.001％、乙醇17％、甲醇0.5％、异丙醇8％、余量为纯化水。

制备方法为：将氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、乙二胺四乙酸与水混合溶解，然后与多聚甲醛、乙醇、甲醇、异丙醇混合，即可。

实施例4

本实施例提供一种液基细胞保存液，其以质量百分含量计由如下组分组成：氯化钠0.55％、氯化钾0.01％、磷酸二氢钠0.02％、磷酸二氢钾0.01％、盐酸胍0.05％、乙二胺四乙酸0.01％、乙醇17.001％、甲醇0.5％、异丙醇8％、余量为纯化水。

制备方法为：将氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、盐酸胍、乙二胺四乙酸与水混合溶解，然后与乙醇、甲醇、异丙醇混合，即可。

实施例5

本实施例提供一种液基细胞保存液，其以质量百分含量计由如下组分组成：氯化钠0.55％、氯化钾0.01％、磷酸二氢钠0.02％、磷酸二氢钾0.01％、盐酸胍0.05％、乙二胺四乙酸0.01％、多聚甲醛0.02％、乙醇16.981％、甲醇0.5％、异丙醇8％、余量为纯化水。

制备方法为：将氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、盐酸胍、乙二胺四乙酸与水混合溶解，然后与多聚甲醛、乙醇、甲醇、异丙醇混合，即可。

实施例6

本实施例提供一种液基细胞保存液，其以质量百分含量计由如下组分组成：氯化钠0.55％、氯化钾0.01％、磷酸二氢钠0.02％、磷酸二氢钾0.01％、盐酸胍0.05％、乙二胺四乙酸0.01％、多聚甲醛0.001％、乙醇25.5％、余量为纯化水。

制备方法为：将氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、盐酸胍、乙二胺四乙酸与水混合溶解，然后与多聚甲醛、乙醇混合，即可。

实施例7

本实施例提供一种液基细胞保存液，其以质量百分含量计由如下组分组成：氯化钠0.55％、氯化钾0.01％、磷酸二氢钠0.02％、磷酸二氢钾0.01％、盐酸胍0.05％、乙二胺四乙酸0.01％、多聚甲醛0.001％、甲醇1.5％、异丙醇24％、余量为纯化水。

制备方法为：将氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、盐酸胍、乙二胺四乙酸与水混合溶解，然后与多聚甲醛、甲醇、异丙醇混合，即可。

实施例8

本实施例提供一种液基细胞保存液，其以质量百分含量计由如下组分组成：氯化钠0.55％、氯化钾0.01％、磷酸二氢钠0.02％、磷酸二氢钾0.01％、盐酸胍0.05％、乙二胺四乙酸0.01％、多聚甲醛0.001％、乙醇42％、甲醇0.5％、异丙醇8％、余量为纯化水。

制备方法为：将氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、盐酸胍、乙二胺四乙酸与水混合溶解，然后与多聚甲醛、乙醇、甲醇、异丙醇混合，即可。

实施例9

本实施例提供一种液基细胞保存液，其以质量百分含量计由如下组分组成：氯化钠0.55％、氯化钾0.01％、磷酸二氢钠0.02％、磷酸二氢钾0.01％、盐酸胍0.05％、乙二胺四乙酸0.01％、多聚甲醛0.001％、乙醇1％、甲醇0.5％、异丙醇8％、余量为纯化水。

制备方法为：将氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、盐酸胍、乙二胺四乙酸与水混合溶解，然后与多聚甲醛、乙醇、甲醇、异丙醇混合，即可。

实施例10

本实施例提供一种液基细胞保存液，其以质量百分含量计由如下组分组成：氯化钠0.55％、氯化钾0.01％、磷酸二氢钠0.02％、磷酸二氢钾0.01％、盐酸胍1％、乙二胺四乙酸0.2％、多聚甲醛0.001％、乙醇17％、甲醇0.5％、异丙醇8％、余量为纯化水。

制备方法为：将氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、盐酸胍、乙二胺四乙酸与水混合溶解，然后与多聚甲醛、乙醇、甲醇、异丙醇混合，即可。

对比例1

本对比例提供一种液基细胞保存液，其配方组成与实施例1的区别仅在于不含有酶抑制剂，其减少量由纯化水补足。

制备方法为：将氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾与水混合溶解，然后与多聚甲醛、乙醇、甲醇、异丙醇混合，即可。

应用例1

本应用例提供一种液基细胞保存液的使用方法，包括以下步骤：

(1)按照诊疗规范用穿刺针对甲状腺部位进行穿刺，采集甲状腺滤泡上皮细胞样本；

(2)将采集到的样本放入实施例1制得的细胞保存液中，分别在4℃下保存1天、7天、14天、21天；

(3)然后将包含样本的保存瓶震荡均匀，将震荡均匀含有样本的保存液转移至离心管中，600g离心力，离心10min，缓慢倒掉上清液，得到第一沉淀物；

(4)将一部分第一沉淀物加入1000μL缓冲液(弱碱性PBS缓冲液)稀释重悬后，转移400μL到染色仓中，进行制片，染色，将染色后的片子放置于无水乙醇脱水30s，取出片子用透明剂浸泡，透明10min，随后用中性树胶及盖玻片封片；对制得的玻片进行显微镜观察，观察细胞的退变和染色情况；

(5)将上述步骤(3)中剩余的样本沉淀置于56℃干氏恒温仪中干燥10min，然后加入180μL水和20μL蛋白酶K，震荡混匀后，将其全部转移到核酸提取试剂盒的试剂条中，然后上核酸提取仪提取核酸，提取程序如下：

名称	孔位	体积/ul	旋转混匀	吸磁次数	干燥时间	混匀速度	温度/℃
								裂解	A	0	0	0	0	800	56
取磁	E	---	1	1	---	400	---
								结合	A	1100	5	1	0	800	56
洗涤/消化	B	0	0	0	0	400	---
								洗涤1	C	600	1	1	0	400	---
洗涤2	D	600	1	1	0	400	---
								洗涤3	E	0	0	0	0	400	---
洗涤4	F	600	1	1	15	400	---
								洗脱	G	100	2	1	---	400	55

(6)将所提取的核酸使用Nano Drop2000进行浓度检测，并做好记录，然后配制BRAF体系、分装、加样及上机；根据分子检测图，观察内控Ct值是否满足BRAF基因检测试剂盒的检测要求(≤24)，内控Ct值应小于24为好。

结果分别如图1-图8所示(图1、图3、图5、图7分别为保存1天、7天、14天、21天的玻片成像图，图2、图4、图6、图7分别为保存1天、7天、14天、21天的分子检测图)。

应用例2-10

本应用例提供九种液基细胞保存液的使用方法，包括以下步骤：

(1)按照诊疗规范用穿刺针对甲状腺部位进行穿刺，采集甲状腺滤泡上皮细胞样本；

(2)将采集到的样本分别放入实施例2-9制得的细胞保存液中，分别在4℃下保存7天；

(3)然后将包含样本的保存瓶震荡均匀，将震荡均匀含有样本的保存液转移至离心管中，600g离心力，离心10min，缓慢倒掉上清液，得到第一沉淀物；

(4)将一部分第一沉淀物加入1000μL缓冲液(弱碱性PBS缓冲液)稀释重悬后，转移400μL到染色仓中，进行制片，染色，将染色后的片子放置于无水乙醇脱水30s，取出片子用透明剂浸泡，透明10min，随后用中性树胶及盖玻片封片；对制得的玻片进行显微镜观察，观察细胞的退变和染色情况；

(5)将上述步骤(3)中剩余的样本沉淀置于56℃干氏恒温仪中干燥10min，然后加入180μL水和20μL蛋白酶K，震荡混匀后，将其全部转移到核酸提取试剂盒的试剂条中，然后上核酸提取仪提取核酸；

(6)将所提取的核酸使用Nano Drop2000进行浓度检测，并做好记录，然后配制BRAF体系、分装、加样及上机；根据分子检测图，观察内控Ct值是否满足BRAF基因检测试剂盒的检测要求(≤24)，内控Ct值应小于24为好。

结果分别如图9-图26所示(图9、图11、图13、图15、图17、图19、图21、图23、图25分别为实施例2-10的玻片成像图，图10、图12、图14、图16、图18、图20、图22、图24、图26分别为实施例2-10的分子检测图)。

对比应用例1

本对比应用例提供一种液基细胞保存液的使用方法，包括以下步骤：

(1)按照诊疗规范用穿刺针对甲状腺部位进行穿刺，采集甲状腺滤泡上皮细胞样本；

(2)将采集到的样本分别放入对比例1制得的细胞保存液中，在4℃下保存1天；

(3)然后将包含样本的保存瓶震荡均匀，将震荡均匀含有样本的保存液转移至离心管中，600g离心力，离心10min，缓慢倒掉上清液，得到第一沉淀物；

(4)将一部分第一沉淀物加入1000μL缓冲液(弱碱性PBS缓冲液)稀释重悬后，转移400μL到染色仓中，进行制片，染色，将染色后的片子放置于无水乙醇脱水30s，取出片子用透明剂浸泡，透明10min，随后用中性树胶及盖玻片封片；对制得的玻片进行显微镜观察，观察细胞的退变和染色情况；

(5)将上述步骤(3)中剩余的样本沉淀置于56℃干氏恒温仪中干燥10min，然后加入180μL水和20μL蛋白酶K，震荡混匀后，将其全部转移到核酸提取试剂盒的试剂条中，然后上核酸提取仪提取核酸；

(6)将所提取的核酸使用Nano Drop2000进行浓度检测，并做好记录，然后配制BRAF体系、分装、加样及上机；根据分子检测图，观察内控Ct值是否满足BRAF基因检测试剂盒的检测要求(≤24)，内控Ct值应小于24为好。

结果分别如图27-图28所示(图27为对比例1的玻片成像图，图28为对比例1的分子检测图)。

对上述所有实施例和对比例的试验结果归纳如下表所示：

由上表结果可知：本发明所涉及的液基细胞保存液适用较难实现保存的针吸细胞，既能有效保存细胞形态进行液基细胞学实验，又能无需解交联核酸提取进行分子实验。其中有机溶剂的添加量或类型选择影响固定细胞的形态和维持细胞不发生退变的程度，其中酶抑制剂的添加量或类型选择影响保护核酸的技术效果。

应用例11

本应用例提供一种液基细胞保存液的使用方法，包括以下步骤：

(1)按照诊疗规范对浆膜腔细胞取样，使用引流管采集浆膜腔细胞样本；

(2)将采集到的样本放入实施例1制得的细胞保存液中，在4℃下保存7天；

步骤(3)-步骤(6)同应用例1。

结果分别如图29-图30所示(图29为玻片成像图，图30为分子检测图)，由图可知：浆膜腔细胞形态保持良好，无明显退变，分子检测Ct值为22，小于检测试剂盒质控值，符合要求。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种液基细胞保存液及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (10)

1.一种液基细胞保存液，其特征在于，所述液基细胞保存液的组分以质量百分含量计包括：缓冲剂0.1-10％、酶抑制剂0.001-1％、有机溶剂10-50％、水。

2.根据权利要求1所述的液基细胞保存液，其特征在于，所述缓冲剂包括氯化盐和磷酸盐；

优选地，所述氯化盐与磷酸盐的质量比为(5-20):1。

3.根据权利要求2所述的液基细胞保存液，其特征在于，所述氯化盐包括氯化钠和/或氯化钾；

优选地，所述磷酸盐包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾或磷酸二氢钾中的任意一种或至少两种的组合。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的液基细胞保存液，其特征在于，所述酶抑制剂包括盐酸胍。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的液基细胞保存液，其特征在于，所述酶抑制剂为盐酸胍和乙二胺四乙酸的组合；

优选地，所述盐酸胍与乙二胺四乙酸的质量比为(3-8):1。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的液基细胞保存液，其特征在于，所述有机溶剂包括醛和醇。

7.根据权利要求6所述的液基细胞保存液，其特征在于，所述醛包括多聚甲醛和/或甲醛，更优选多聚甲醛；

优选地，所述醛在液基细胞保存液中的质量百分含量为0.001-0.009％。

8.根据权利要求6所述的液基细胞保存液，其特征在于，所述醇包含乙醇；

优选地，所述醇还包含甲醇和/或异丙醇。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的液基细胞保存液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

将缓冲剂、酶抑制剂与水混合溶解，然后与有机溶剂混合，即可。

10.根据权利要求1-8中任一项所述的液基细胞保存液在保存液基细胞学检测和BRAF检测临床样本中的应用。

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