[go: up one dir, main page]

CN116133686A - 癌症治疗剂 - Google Patents

癌症治疗剂 Download PDF

Info

Publication number
CN116133686A
CN116133686A CN202180059622.XA CN202180059622A CN116133686A CN 116133686 A CN116133686 A CN 116133686A CN 202180059622 A CN202180059622 A CN 202180059622A CN 116133686 A CN116133686 A CN 116133686A
Authority
CN
China
Prior art keywords
composition
cancer
botulinum neurotoxin
antibody
administered
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180059622.XA
Other languages
English (en)
Inventor
郭星成
金兑暻
李效珍
姜源镐
梁起赫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Medy Tox Inc
Original Assignee
Medy Tox Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from KR1020210009360A external-priority patent/KR20220012791A/ko
Priority claimed from KR1020210074544A external-priority patent/KR20220012809A/ko
Application filed by Medy Tox Inc filed Critical Medy Tox Inc
Publication of CN116133686A publication Critical patent/CN116133686A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
    • A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
    • C12Y304/24069—Bontoxilysin (3.4.24.69), i.e. botulinum neurotoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

公开一种与免疫治疗剂例如免疫检查点抑制剂组合施用的癌症治疗剂。

Description

癌症治疗剂
技术领域
本公开涉及一种癌症治疗剂，更具体地，涉及一种与免疫治疗剂组合施用的癌症治疗剂，其包括肉毒神经毒素作为有效成分。
背景技术
肉毒神经毒素(Botulinum neurotoxin，BoNT)为肉毒杆菌(Clostridiumbotulinum)的多肽产物，其为一种特别应用于神经细胞的毒性物质。肉毒神经毒素本来为导致致命的毒性物质，但其用于治疗颈部肌张力障碍(cervical dystonia；CD)、睑痉挛(blepharospasm)、多汗症(hyperhidrosis)、斜视(strabismus)、弛缓不能(achalasia)、神经原性膀胱(urologic disease)、尿道疾病(urologic disease)、和偏头痛(migraine)等。
国际公开WO2010/062955号公开一种方法，其通过将治疗有效量的肉毒神经毒素与抗癌药物或抗癌疗法组合施用于肿瘤附近的非肿瘤区域(nonneoplastic area)来抑制肿瘤的生长或转移，其中，治疗有效量的肉毒神经毒素不穿透(penetrate)肿瘤。另外，国际公开W02006/094539号公开一种通过细胞毒性疗法如化学疗法或放射线疗法使癌症治疗敏感(sensitizing)的方法以及用于所述方法的组合物，其中，所述方法包括向癌组织或细胞施用包括肉毒神经毒素的药物组合物的步骤。
抗癌免疫疗法(immunotherapy)是通过激活人体免疫系统来增强自身免疫力，从而使免疫细胞攻击癌细胞的治疗法。免疫治疗剂主要可分为免疫检查点抑制剂(immunecheckpoint inhibitor)、免疫细胞治疗剂(immune cell therapy)、治疗性抗体(therapeutic antibody)、抗癌疫苗(anticancer vaccine)、以及溶瘤病毒(oncolyticvirus)。免疫检查点抑制剂为通过阻断参与T细胞抑制的免疫检查点蛋白(immunecheckpoint protein)的活性来激活T细胞以攻击癌细胞的药物，其通常使用识别CTLA-4、PD-1和PD-L1的抗体。免疫细胞治疗剂为通过收集、强化和修饰患者体内的T细胞并将其再次注入体内来增强对于癌细胞的细胞性免疫的药物，其包括NK细胞治疗剂、T细胞治疗剂、CAR-T细胞治疗剂等。治疗性抗体为一种当抗体-药物结合体与癌细胞结合时，通过释放药物来攻击癌细胞的药物，抗体-药物偶联物(antibody-drug conjugate，ADC)为一个代表性的例子。抗癌疫苗通过将癌细胞所具有的肿瘤特异性抗原或能够提高体内整体免疫反应的蛋白质或多肽分子施用于癌症患者来激活免疫系统，从而激活体内免疫功能来攻击癌细胞。溶瘤病毒为一种攻击癌症的病毒，其作用为直接杀死癌细胞，但除此之外，其还能诱导免疫细胞的激活化来增强抗癌能力。
到目前为止，还未知通过将肉毒神经毒素与免疫治疗剂组合施用来治疗癌症的尝试。
发明内容
技术问题
本公开的第一目的为提供一种用于与免疫治疗剂组合施用来治疗癌症的组合物，其包括肉毒神经毒素作为有效成分。
本公开的第二目的为提供一种通过将治疗有效量的肉毒神经毒素与免疫治疗剂组合施用于有需要的对象来治疗癌症的方法。
本公开的第三目的为提供一种用于与免疫治疗剂组合施用作癌症治疗剂的肉毒神经毒素。
本公开的第四目的涉及一种肉毒神经毒素在作为与免疫治疗剂组合施用的癌症治疗剂中的用途。
技术方案
本公开的第一方面涉及一种用于与免疫治疗剂组合施用来治疗癌症的组合物，其包括肉毒神经毒素作为有效成分。
本公开的第二方面涉及一种通过将治疗有效量的肉毒神经毒素与免疫治疗剂组合施用于有需要的对象来治疗癌症的方法。
本公开的第三方面涉及一种用于与免疫治疗剂组合施用作癌症治疗剂的肉毒神经毒素。
本公开的第四方面涉及一种肉毒神经毒素在作为与免疫治疗剂组合施用的癌症治疗剂中的用途。
在本说明书中所用的术语“肉毒神经毒素(botulinum toxin)”是指包括所有血清型(serotype)和其变体或融合蛋白的、由细菌或重组产生的肉毒神经毒素蛋白质分子。
肉毒杆菌菌株生成免疫学上不同的神经毒素(A-G型)。A-G型神经毒素(NTX)的分子量(molecular masses)为约150kDa(7S)。在具有酸性条件的培养基和食物中，NTX与无毒成分结合形成被称为前体毒素(progenitor toxins；PTX)的大型复合物。发现具有分子量为900kDa(19S)、500kDa(16S)、以及300kDa(12S)的PTX。12S毒素由NTX和不具有血凝素活性的无毒成分(命名为非毒性非凝血素；nontoxic nonhemagglutinin；NTNH)组成，且19S和16S毒素由NTX、NTNH、和血凝素组成。A型菌株生成三种类型的毒素(19S、16S、以及12S)。B、C和D型菌株生成16S和12S毒素。在碱性条件下，PTX解离成NTX和无毒成分，19S和16S毒素解离成NTX、NTNH、和血凝素的无毒成分(复合物)，且12S毒素解离成NTX和NTNH。在本说明书中，肉毒神经毒素可以是上述任何形式，并且可以具有例如19S、16S、12S或7S的分子量。
肉毒神经毒素包括肉毒神经毒素衍生物。肉毒神经毒素衍生物可以为在具有肉毒神经毒素活性的天然肉毒神经毒素或重组原型(recombinant native)肉毒神经毒素的一部分或部分链上包括一个或更多个化学或功能修饰的衍生物。例如，肉毒神经毒素衍生物可为具有一个或更多个的氨基酸缺失、修饰或取代的修饰毒素。肉毒神经毒素可为重组肽、融合蛋白、或例如从不同毒素血清型的亚基或结构域制备的杂合神经毒素。肉毒神经毒素也可以为具有毒素活性的整个分子的一部分，并且可以使用其组合或缀合的分子，例如，可用作融合蛋白的一部分。
在一方面，肉毒神经毒素可为不包括化学或功能修饰的肉毒神经毒素，例如天然肉毒神经毒素或重组原型肉毒神经毒素或其一部分，例如复合化的肉毒神经毒素(例如：19S毒素)或非复合化的肉毒神经毒素(例如：7S毒素)。
术语“免疫治疗剂”是指间接或直接增强、刺激或增加身体对癌细胞的免疫反应和/或减少其他抗癌疗法的副作用的化合物、组合物或治疗。免疫治疗剂的非限制性实例包括细胞因子、癌症疫苗、单克隆抗体、非细胞因子佐剂、溶瘤病毒、免疫细胞(T细胞、NK细胞、树突状细胞、B细胞等)、免疫检查点抑制剂等。
术语“组合施用”是指两种或更多种不同治疗剂的任何形式，其使得在先前施用的治疗剂在体内仍然有效时施用第二治疗剂。例如，两种治疗剂对对象同时有效，这可包括两种治疗剂的相乘效果。不同的治疗剂可以在单一制剂或个别的制剂中同时或顺序施用。
“施用”或“施用的”是指向对象提供药物组合物或有效成分的步骤。药物组合物可通过各种合适的途径施用。
“药物组合物”是指含有有效成分的制剂。术语“制剂”是指除了有效成分(例如：肉毒神经毒素)之外，药物组合物中还存在至少一种额外成分，例如白蛋白(人血清白蛋白或重组人白蛋白)和/或氯化钠。药物组合物是适合施用于对象如人类患者的制剂。药物组合物可为冻结干燥的形式，例如使用盐水或水来重构冻结干燥的药物组合物后所形成的溶液，或者是不需要重构的溶液形式。药物组合物可为液体或固体。药物组合物可不包括动物源性蛋白质和/或白蛋白。
“治疗有效量”是指治疗疾病、障碍、或异常所需的应用剂，例如，肉毒神经毒素或包括肉毒神经毒素的药物组合物的水平、量或浓度，其不会引起显着负面或不利的副作用。
“进行治疗”、“治疗的”或“治疗”是指，例如，通过治愈受伤或受损的组织，或改变、变化、增强、改善、改良和/或美化先前存在或认知的疾病、障碍或异常来减轻或减少(包括部分减少、大幅减少、接近完全减少和完全减少)、解决或预防(暂时的或永久的)疾病、障碍或异常，从而达到预期的治疗效果。在本说明书中，“治疗”是包括预防在内的概念。“预防”是指延迟疾病、障碍或疾患的发病。当疾病、障碍或疾患的发病延迟预定的时间段，则可认为预防是完成的。
在一方面，“治疗(treatment)”是指在诸如哺乳动物(尤其是人类)的患者中的疾病、障碍或医学病态的治疗，包括以下一项或更多项：
(a)预防上述疾病、障碍或医学病态的发生，即防止上述疾患或医学病态的复发，或对易患(pre-disposed)上述疾患或医学病态的患者进行预防性治疗(prophylactictreatment)；
(b)通过包括通过拮抗其他治疗剂的效果，来改善(ameliorating)上述疾病、障碍或医学病态，即消除或倒退(regression)患者的上述疾病、障碍或医学病态；
(c)抑制(suppressing)上述疾病、障碍或医学病态，即在患者中缓和或阻止上述疾病、障碍或医学病态的发展；或者
(d)在患者中缓和上述疾病、障碍或医学病态的症状。
本公开基于发现通过将肉毒神经毒素或包括其的组合物与免疫治疗剂组合施用可有用作癌症的治疗剂。
本公开基于发现通过将肉毒神经毒素或包括其的组合物与免疫治疗剂组合施用可有用作转移性癌症的治疗剂。
在一方面，可以使用肉毒神经毒素而不受血清型的限制，并可以选自由A型(BoNT/A)、B型(BoNT/B)、C型(BoNT/C)、D型(BoNT/D)、E型(BoNT/E)、F型(BoNT/F)、G型(BoNT/G)、H型(BoNT/H)、X型(BoNT/X)、肠球菌种肉毒神经毒素J(eBoNT/J)和镶嵌肉毒神经毒素和/或其变体组成的组。镶嵌毒素的实例包括BoNT/DC、BoNT/CD、以及BoNT/FA。例如，可以使用A型。
在一方面，肉毒神经毒素源自各种BoNT/A亚型，例如A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A9、A10；BoNT/B亚型，例如B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、Bnp和Bbv；BoNT/C亚型，例如C和CD；BoNT/D亚型，例如D和DC；BoNT/E亚型，例如E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7、E8、E9；BoNT/F亚型，例如F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7；以及BoNT/G亚型，例如G。BoNT亚型包括嵌合的BoNT，例如BoNT/DC、BoNT/CD、BoNT/FA等。
在一方面，免疫治疗剂可以使用本领域已知的任何物质或疗法，并包括细胞因子、癌症疫苗、溶瘤病毒(oncolytic virus)、单克隆抗体、非细胞因子佐剂、免疫细胞(T细胞、NK细胞、树突状细胞、B细胞等)、免疫检查点抑制剂。在一具体实施例中，免疫治疗剂为免疫检查点抑制剂。免疫检查点抑制剂包括多肽、抗体、核酸分子和小分子。例如，可以施用免疫检查点抑制剂以增强对象中CD8+T细胞的增殖性、移动性、持续性和/或细胞毒活性，特别是对象的CD8+T细胞的肿瘤侵润性。通常，免疫检查点抑制剂可为一种阻断NK细胞表达的免疫抑制受体的拮抗剂或阻断这些受体的关键配体如PD-1配体CD274(最广为人知的名称是PD-L1或B7-H1)的拮抗剂，诸如激活的T淋巴细胞，例如细胞毒性淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)和程序性细胞死亡(PD-1)、或杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)家族的各种成员。例如，免疫检查点抑制剂为抗体或其抗原结合片段。具体地，免疫检查点抑制剂可为选自由抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2抗体、抗CTLA-4抗体、抗TIM-3抗体、抗LAG3抗体、抗IDO1抗体、抗TIGIT抗体、抗B7H3抗体、抗B7H4抗体、抗BTLA抗体、抗B7H6抗体、以及其抗原结合片段组成的组中的一种或更多种。更具体地，免疫检查点抑制剂可为选自伊匹单抗(Ipilimumab)(
Figure BDA0004113682240000061
BMS/Ono)、替西木单抗(Tremelimumab)(阿斯利康)、阿替利珠单抗(atezolizumab)(
Figure BDA0004113682240000062
罗氏)、纳武单抗(nivolumab)(
Figure BDA0004113682240000063
BMS/Ono)、帕博利珠单抗(Pembrolizumab)(
Figure BDA0004113682240000064
MSD)、阿维单抗(Avelumab)(
Figure BDA0004113682240000065
辉瑞/德国默克)、德瓦鲁单抗(Durvalumab)(
Figure BDA0004113682240000066
AstraZeneca/Medimmune)、以及其抗原结合片段中的一种或更多种，但不限于此。
在一方面，癌症可为是外泌体介导的(exosome-mediated)。
外泌体(exosomes)为细胞外囊泡(extracellular vesicles)的一种，其具有直径约为100nm的大小。它们被脂质双层膜包围并且由大多数细胞分泌。外泌体在内吞系统(endocytic system)中作为管腔内膜囊泡(ILV；intraluminal membrane vesicle)而生成，并在细胞膜与多囊体(MVB；multivesicular body)融合期间分泌。据报道，外泌体通过调节细胞间通讯(cell-cell communication)有助于维持组织稳态(homeostasis)。从癌细胞释放的外泌体参与癌症进展。增殖性癌细胞(1)利用血管生成的癌组织扩张、(2)获得迁移和浸透的能力、以及(3)获得逃避免疫细胞攻击的能力，以及最终形成转移性病变(metastatic lesion)，外泌体可能参与这些过程中的每一个。
在一方面，癌症可以是实体瘤(solid tumor)。
实体瘤的非限制性实例包括乳腺癌、肺癌、头部或颈部癌、大肠癌、食道癌、喉头癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、骨癌、皮肤癌、皮肤或眼内黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛周癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、小肠癌、内分泌癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾细胞癌、肾盆腔癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、脊髓肿瘤、脑肿瘤，例如神经胶质瘤(例如：星形细胞瘤(astrocytoma)、胶质母细胞瘤(glioblastoma)、少突神经胶质瘤(oligodendroglioma)上的室管膜瘤(ependymoma))、囊胚细胞瘤、脑膜瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、神经鞘瘤、先天性肿瘤、颅咽管瘤，转移性脑肿瘤。例如，实体瘤可为选自由黑色素瘤、大肠癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、和胃癌组成的组中的一种或更多种，但不限于此。
在一方面，癌症可以是转移性癌症(metastatic cancer)。
在一方面，组合物可用于其中外泌体分泌增加的对象。
在一方面，包括肉毒神经毒素的组合物还可包括一种或更多种药学上可接受的赋形剂或添加剂。
药学上可接受的赋形剂或添加剂可以是稳定剂、离子化合物(ionic compound)、表面活性剂、缓冲剂、冻结干燥保护剂、或其组合，例如氨基酸(例如甲硫氨酸)、盐(例如NaCl)、缓冲液、非离子表面活性剂(例如聚山梨醇酯，例如聚山梨醇酯20)、糖(例如双糖例如蔗糖等)、糖醇(例如山梨糖醇)、或其组合。
所述组合物可不包括白蛋白或动物源性成分或多糖。
所述组合物包括例如WO2009-008595A1或WO2012-134240A2中公开的内容，其内容通过引用整体并入本文。
所述组合物包括但不限于市售的含肉毒神经毒素的药物组合物，例如可以包括保妥适(BOTOX)
Figure BDA0004113682240000071
(人血清白蛋白和氯化钠的肉毒神经毒素A型的神经毒素复合物)(Allergan，Inc：美国加利福尼亚州尔湾)、
Figure BDA0004113682240000072
(作为使用前用0.9％氯化钠重构的粉剂，制剂中人血清白蛋白和乳糖的肉毒杆菌A型毒素血凝素复合物(Ipsen Limited：英国伯克希尔)、MYOBLOCTM(包括肉毒神经毒素B型、人血清白蛋白、琥珀酸钠和氯化钠(pH值约为5.6)的注射液)(Solstice Neurosciences,Inc：美国加利福尼亚州南旧金山)、
Figure BDA0004113682240000081
(包括肉毒杆菌毒素A型、人血清白蛋白和氯化钠的冻结干燥粉末制剂)(Medytox Co.，Ltd.，韩国)、
Figure BDA0004113682240000082
(包括肉毒杆菌毒素A型、L-甲硫氨酸、聚山梨酯20、氯化钠、和注射用水的液体制剂)(Medytox Co.，Ltd.，韩国)、以及
Figure BDA0004113682240000083
(包括肉毒杆菌毒素A型(150kD)、聚山梨酯20、白糖、和氯化钠的冻结干燥粉末制剂)(Medytox Co.,Ltd.，韩国)。在具体实施例中，所述组合物可以是
Figure BDA0004113682240000084
或其一种或更多种的组合，但不限于此。
在一方面，所述组合物可以以任何形式制剂化，例如固体或液体制剂，例如冻结干燥粉末、液相、或预充注射器(pre-filled syringe)制剂等。
在一方面，所述组合物可以是用于局部施用的制剂。例如，局部施用可以在肿瘤或癌前组织内施用或在肿瘤或癌前组织周围施用，并通常通过肉毒神经毒素水溶液的肿瘤内注射(intratumoral injection)或肿瘤周围注射(peritumoral injection)而构成。例如，制剂可以以皮下或软组织，例如肌肉内施用。所述组合物可以通过特定位置的肿瘤内或周围施用来在从所述位置远离的位置抑制肿瘤生长或阻止肿瘤发生，所述组合物可以通过局部施用表现出全身效果。
在一方面，肉毒神经毒素的治疗有效量为约0.01U/㎏至约100U/㎏、约0.1U/㎏至约100U/㎏、约0.2U/㎏至约100U/㎏、约0.2U/㎏至约50U/㎏、约0.2U/㎏至约30U/㎏、约0.2U/㎏至约10U/㎏、约0.2U/㎏至约1U/㎏。在另一方面，基于体重为60kg的成人，可以是约1U至约10,000U、约1U至约5,000U、约1U至约2,500U、约1U至约1,000U、约1U至约500U、约1U至约300U、约1U至约200U、约10U至约200U、约10U至约100U、约10U至约50U。
在本说明书中所使用的术语“单位”、“单位(unit)(s)”或“U”是指LD50用量，其定义为杀死注射了肉毒神经毒素的小鼠中的50％的肉毒神经毒素的量，其在一产品中可互换使用。
在一方面，肉毒神经毒素可以以单次或多次治疗段来施用。施用量可以在注射部位作为单次或分次注射施用。在多次治疗段中，肉毒神经毒素可以以6个月或更短的间隔来施用。在多次治疗段中，肉毒神经毒素的施用间隔包括第一次治疗和第二次治疗，且第二次治疗的施用量可以少于、多于、或等于第一次治疗的施用量。
本领域技术人员可以根据患者的体重、年龄、性别、健康状况、疾病的严重程度等，适当地选择和使用肉毒神经毒素的施用用量、施用时间、施用方法、施用期间或间隔等。
在一方面，肉毒神经毒素可以与免疫治疗剂同时或顺序施用。
在一方面，肉毒神经毒素可以与免疫治疗剂作为单一制剂或个别的制剂来施用。
在一方面，免疫治疗剂根据使用目的按常规方法制剂化成且使用为各种形式，例如，口服剂型如液剂、混悬剂、散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、提取剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂等，以及肠胃外剂型如无菌注射溶液的注射剂等。免疫治疗剂可以经口服施用，或可以通过包括静脉内、腹腔内、皮下、皮内、肌内、脊椎、脊椎腔、或直肠内局部施用或注入等的各种途径肠胃外施用。施用量可根据患者的体重、年龄、性别、健康状况、饮食、施用时间、施用方法，施用期间或间隔、排泄率、体质特异性、制剂的性质、疾病的严重程度等而变化其范围，且可由本领域技术人员适当地选择。例如，其可以在约0.1mg/kg至10,000mg/kg的范围内，但不限于此，并且可以每天分为一次至数次来施用。
在一方面，一种治疗外泌体介导的癌症的方法可包括以下步骤：
1)定量从对象获得的生物样品中分泌的外泌体的步骤；以及
2)将治疗有效量的肉毒神经毒素与免疫治疗剂组合施用为单一制剂或个别的制剂来同时或顺序地施用于外泌体分泌增加的对象。
所分泌的外泌体可以根据本领域已知的常规方法从对象的生物样品例如血液中分离和定量，并且对样品的类型、分离和定量方法没有特别限制。
施用肉毒神经毒素或包括其的组合物的对象可以包括但不限于人或动物，例如人、猪、狗、猫、牛、马、和小鼠。
有益效果
根据本公开，肉毒神经毒素或包括其的组合物可与免疫治疗剂例如免疫检查点抑制剂组合施用来有用为癌症治疗剂。
附图说明
图1为示出在实施例1所述的小鼠恶性黑色素瘤移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体后，随时间的肿瘤生长的图表。
图2a为示出在实施例1所述的小鼠恶性黑色素瘤移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体后，基于浸润在肿瘤的总活细胞的CD4+T细胞的比率的图表。
图2b为示出在实施例1所述的小鼠恶性黑色素瘤移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体后，基于浸润在肿瘤的总活细胞的CD8+T细胞的比率的图表。
图2c为示出在实施例1所述的小鼠恶性黑色素瘤移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体后，基于浸润在肿瘤的总活细胞的实际肿瘤中CD4+T细胞的数量的图表。
图2d为示出在实施例1所述的小鼠恶性黑色素瘤移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体后，基于浸润在肿瘤的总活细胞的实际肿瘤中CD8+T细胞的数量的图表。
图3为示出在实施例1所述的小鼠恶性黑色素瘤移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体后，载体组和各试验组的血液中的外泌体数量的图表。
图4为示出在实施例2所述的小鼠恶性黑色素瘤移植模型中按用量组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体后，随时间的肿瘤生长的图表。
图5为示出在实施例2所述的小鼠恶性黑色素瘤移植模型中按用量组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体后小鼠存活率的图表。
图6为示出在实施例3所述的小鼠恶性黑色素瘤移植模型中组合施用复合物肉毒神经毒素或非复合物肉毒神经毒素与抗PD-1抗体后，随时间的肿瘤生长的图表。
图7为示出在实施例4所述的小鼠肺肿瘤移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗CTLA4抗体后，随时间的肿瘤生长的图表。
图8a为示出在实施例5所述的小鼠恶性黑色素瘤两侧移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体后，随时间的右侧肿瘤生长的图表。
图8b为示出在实施例5所述的小鼠恶性黑色素瘤两侧移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体后，随时间的左侧肿瘤生长的图表。
图9为示出在实施例5所述的小鼠恶性黑色素瘤两侧移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体后小鼠存活率的图表。
图10a为示出在实施例5所述的小鼠恶性黑色素瘤两侧移植模型中，基于浸润在左侧未施用肿瘤的活细胞的CD11b+细胞的比率的图表。
图10b为示出在实施例5所述的小鼠恶性黑色素瘤两侧移植模型中，基于浸润在左侧未施用肿瘤的活细胞的CD4+T细胞的比率的图表。
图10c为示出在实施例5所述的小鼠恶性黑色素瘤两侧移植模型中，基于浸润在左侧未施用肿瘤的活细胞的CD8a+T细胞的比率的图表。
图11为示出在实施例6所述的小鼠大肠癌移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体或组合施用普萘洛尔与抗PD-1抗体后，随时间的肿瘤生长的图表。
图12为示出在实施例6所述的小鼠大肠癌移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗PD-1抗体或组合施用普萘洛尔与抗PD-1抗体后小鼠存活率的图表。
图13为示出在实施例6所述的小鼠大肠癌移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗CTLA4抗体后，随时间的肿瘤生长的图表。
图14为示出在实施例6所述的小鼠大肠癌移植模型中组合施用肉毒神经毒素与抗CTLA4抗体后小鼠存活率的图表。
具体实施方式
将通过实施例更详细地描述本公开，但这只是描述本公开，并不旨在以任何方式限制其范围。
实施例1：肉毒神经毒素和抗PD-1抗体对于小鼠恶性黑色素瘤移植模型的抗癌效能试验
购入雄性6周龄C57BL/6(购自Orient Bio)小鼠，驯化且检疫1周，然后在试验中使用7周龄小鼠。对于饲料，自由喂给实验动物用固型饲料(R40-10，SAFE，法国)，对于饮水，高温高压灭菌(autoclave)自来水且自由喂给。在驯化、检疫和试验期间，小鼠在设定为温度为23±3℃、相对湿度为55±15％、照明时间为12小时(上午8时至下午8时)、换气次数为15次/小时、以及照度为150至300Lux的无特定病原体条件下饲养。本试验是在经Medytox动物试验伦理委员会审查和批准(A-2020-004)后进行的。
从韩国细胞株库(KCLB：Korean Cell Line Bank)获得B16-F10小鼠恶性黑色素瘤细胞株(KCLB No：80008)。B16-F10细胞在含有10％胎牛血清(FBS)(目录号：10082-147，Gibco)和1％青霉素-链霉素(目录号：15140-122，Gibco)的DMEM培养基(目录号：11965-092，Gibco)中在37℃、5％ CO2的条件下在培养箱中培养。使用注射器将0.1ml的5×105细胞移植到经麻醉的C57BL/6小鼠的右侧肋下。
对于载体，使用在肉毒神经毒素调剂中使用的灭菌生理盐水(批号：M8T7AF3，大韩药品工业)，对于肉毒神经毒素，使用100单位的Coretox(批号：NSA19007A，Medytox)。抗PD-1抗体(克隆：RMP1-14，目录号：BE0146，批号：760220J1)购自Bio X cell并使用。
根据下表1调剂且施用各试验物质。向肉毒神经毒素100单位小瓶加入6.667ml的灭菌生理盐水，并调剂成浓度为15units/ml，从而以1ml/㎏、15units/㎏的用量施用于肿瘤内。在施用当天，使用灭菌PBS(目录号：10010，Gibco)将抗PD-1抗体调剂成最终浓度为1mg/ml，从而以5ml/㎏、15mg/㎏的用量施用于腹腔内。
在小鼠恶性黑色素瘤移植后第8天，测量体重和肿瘤大小，并在平均约33mm3的大小中，根据试验组将10只小鼠随机分配到每个组，使试验组之间没有任何差异。在肿瘤移植后第8天，基于体重按照表1肿瘤内施用载体和肉毒神经毒素。根据表1，在肿瘤移植后第8、11、14、和17天腹腔内施用抗PD-1抗体。肿瘤移植后每周测量肿瘤大小两次。用游标卡尺测量肿瘤大小，并使用测量值，通过下式计算肿瘤体积。
肿瘤体积(mm3)＝(W2×L)/2
W(mm)＝宽度(肿瘤的短轴)，L(mm)＝肿瘤的长度(肿瘤的长轴)
肿瘤生长抑制率(TGI；tumor growth inhibition)(％)＝(1-平均肿瘤大小试验组/平均肿瘤大小载体)×100
[表1]
Figure BDA0004113682240000131
在试验组1和4中，由于个体之间的争斗造成肿瘤周围的严重伤口，分别在试验中排除1只。
在肿瘤移植后第19天，在肿瘤大小达到2000mm3之前，对所有动物实施安乐死。结束后，取出肿瘤组织并测量重量，并使用流式细胞分析仪(FACSVerse，BD)测量肿瘤组织中T细胞的数量。对于肿瘤组织内T细胞分析，在使用温和MACS C管(目录号：130-093-237，Miltenyi Biotec)将肿瘤组织分离成单细胞后，以LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead CellStain(目录号：L34957，Invitrogen)、Fc block(目录号：553142，BD)、CD45-PECy7(目录号：25-0451-82，eBioscience)、TCRbeta-FITC(目录号：109206，Biolegend)、CD4-pacificblue(目录号：100428，Biolegend)、以及CD8a-PerCPCy55(目录号：100734，Biolegend)抗体进行染色，并用流式细胞分析仪进行分析。基于肿瘤重量计算肿瘤中CD4+和CD8+T细胞的数量，比率显示基于活细胞的CD45+TCRbeta+CD4+和CD45+TCRbeta+CD8a+T细胞的比率。
使用Exoquick外泌体沉淀溶液(exosome precipitation solution)(目录号：EXOQ20A-1，批号：200107-001，System Biosciences)分离血液中的外泌体，并使用ExoELISA-ULTRA完整试剂盒(Complet Kit)(目录号：EXEL-ULTRA-CD63-1，批号：200226-002，System Biosciences)进行测量。
Graphpad Prism(7.05版，GraphPad Software Inc，加利福尼亚州，美国)用于图表呈现，且SPSS软件(25.0版，SPSS Inc，伊利诺伊州，美国)用于统计分析。对于参数数据，进行两侧(two-tailed)t-检验，且对于非参数数据，Mann-Whitney检验统计分析在显着性水平p＝0.05下进行。
肿瘤生长抑制率测量结果见表2和图1。
[表2]
Figure BDA0004113682240000141
Figure BDA0004113682240000151
1)在肿瘤移植后第18天的结果，2)在肿瘤移植后第19天的结果，**p<0.01,vs载体。
Figure BDA0004113682240000152
vs肉毒神经毒素，
Figure BDA0004113682240000153
vs抗PD-1抗体，两侧t-检验。
如表2和图1所示，在小鼠恶性黑色素瘤移植后第18天，通过肿瘤内单独施用肉毒神经毒素，显示出平均1433mm3的肿瘤大小和15％的肿瘤生长抑制率，且抗PD-1抗体显示出平均1415mm3的肿瘤大小和16％的肿瘤生长抑制率，但与载体施用组相比无统计学意义。相反，当组合施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体时，显示出平均肿瘤大小为平均479mm3且71％的肿瘤生长抑制率，确认了与分别单独施用的情况相比，肿瘤生长受到更显着的抑制。此外，即使在肿瘤移植后第19天取出肿瘤并测量重量时，组合施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的情况与载体施用组、以及单独施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的组相比，肿瘤重量显着减少。
作为通过取出肿瘤组织分析浸润在肿瘤中的CD4+和CD8+T细胞的结果，与载体施用组相比，示出单独施用肉毒神经毒素时的肿瘤中CD8+T细胞的数量趋于增加(图2a、图2b)。CD4+和CD8+T细胞的比率在单独施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的情况下与载体施用组没有显着差异，但在组合施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的组中，可以确认出，与载体施用组相比，浸润到肿瘤中的CD4+和CD8+T细胞的比率显着更高(图2c、图2d)。这与单独施用抗PD-1抗体的组相比，是一个显着的增加。可以说明，在组合施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的组中，两种物质之间的相乘作用显着增加了肿瘤中的T细胞，从而肿瘤生长显着减少。
血液中的外泌体数量的测量结果示于图3。如图3所示，与载体施用组相比，单独施用肉毒神经毒素的组中的外泌体数量显示有减少的趋势，并在抗PD-1抗体以及组合施用肉毒神经毒素+抗PD-1抗体的组中显着减少。另外，与单独施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的组相比，组合施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的组中的血液中外泌体数量显着减少。
实施例2：肉毒神经毒素和抗PD-1抗体按用量对于小鼠恶性黑色素瘤移植模型的抗癌效能试验
购入雄性6周龄C57BL/6(购自Orient Bio)小鼠，驯化且检疫1周，然后在试验中使用7周龄小鼠。对于饲料，自由喂给实验动物用固型饲料(R40-10，SAFE，法国)，对于饮水，高温高压灭菌(autoclave)自来水且自由喂给。在驯化、检疫和试验期间，小鼠在设定为温度为23±3℃、相对湿度为55±15％、照明时间为12小时(上午8时至下午8时)、换气次数为15次/小时、以及照度为150至300Lux的无特定病原体条件下饲养。本试验是在经Medytox动物试验伦理委员会审查和批准(A-2020-004)后进行的。
从韩国细胞株库(KCLB：Korean Cell Line Bank)获得B16-F10小鼠恶性黑色素瘤细胞株(KCLB No：80008)。B16-F10细胞在含有10％ FBS(CAT No：10082-147，Gibco)和1％青霉素-链霉素(目录号：15140-122，Gibco)的DMEM培养基(目录号：11965-092，Gibco)中在37℃、5％ CO2的条件下在培养箱中培养。使用注射器将0.1ml的5×105细胞移植到经麻醉的C57BL/6小鼠的右侧肋下。
作为载体，使用安慰剂(placebo)，其中仅肉毒神经毒素被排除在肉毒神经毒素产品之外且其余赋形剂成分相同，并使用100单位的Coretox(批号：NSA19007A，Medytox)作为肉毒神经毒素。抗PD-1抗体(克隆：RMP1-14，目录号：BE0146，批号：780120J2)购自Bio Xcell并使用。根据下表3调剂且施用各试验物质。向肉毒神经毒素100单位小瓶加入灭菌生理盐水，并调剂成浓度为1units/ml、3units/ml、10units/ml，从而以1ml/㎏、1units/㎏、3units/㎏、10units/㎏的用量施用于肿瘤内。在施用当天，使用灭菌PBS(目录号：10010，Gibco)将抗PD-1抗体调剂成最终浓度为1mg/ml，从而以5ml/㎏、15㎎/㎏的用量施用于腹腔内。
在小鼠恶性黑色素瘤移植后第8天，测量肿瘤大小，根据试验组将12只小鼠随机分配到每个组，使试验组之间没有任何差异。在肿瘤移植后第8天，根据试验组的构成肿瘤内施用载体和肉毒神经毒素。在抗PD-1抗体的情况下，根据表3，每周腹腔内施用两次，总共4次。肿瘤移植后每周测量肿瘤大小两次。用游标卡尺测量肿瘤大小，并使用测量值，通过实施例1中所示的式计算肿瘤体积。
[表3]
Figure BDA0004113682240000171
Figure BDA0004113682240000181
肿瘤移植后，进行测量直到每只小鼠的肿瘤大小达到2000mm3，并对超过安乐死标准(2000mm3)的个体立即实施安乐死并记录为死亡。
Graphpad Prism(7.05版，GraphPad Software Inc，加利福尼亚州，美国)用于图表呈现，且SPSS软件(25.0版，SPSS Inc，伊利诺伊州，美国)和Excel(2013，MS，美国)用于统计分析。对于肿瘤大小，进行两侧t-检验，且对于存活率，Mantel-Cox对数等级分析在显着性水平p＝0.05下进行。
肿瘤大小测量结果显示在图4中(*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)。如图4所示，在小鼠恶性黑色素瘤模型中，当肉毒神经毒素以1U/kg、3U/kg和10U/kg用量单次肿瘤内施用时，在第14天，在10U/kg施用组中观察到显着的肿瘤生长抑制。在肿瘤移植后第18天，与载体施用组相比，单独施用肉毒神经毒素的试验组和施用载体+5mg/kg抗PD1抗体的试验组中未观察到显着的肿瘤生长抑制效果。然而，与载体施用组相比，在组合施用3U/㎏或10U/㎏肉毒神经毒素和5㎎/㎏抗PD1抗体的试验组中观察到显着的肿瘤生长抑制效果。
存活率测量结果示于图5。如图5所示，在组合施用3U/㎏或10U/㎏肉毒神经毒素和5㎎/㎏抗PD1抗体的试验组中，小鼠的存活率显着提高。此外，在施用载体+5㎎/㎏抗PD1抗体的组中也观察到存活率显着增加。由上述结果确认，在小鼠黑色素瘤模型中，当肉毒神经毒素在3U/㎏或更高的用量中与抗PD1抗体组合施用时，具有抑制肿瘤生长的效果。
实施例3：复合化的肉毒神经毒素和非复合化的肉毒神经毒素与抗PD-1抗体组合施用在小鼠恶性黑色素瘤移植模型中的抗癌效能试验
购入雄性6周龄C57BL/6(购自Orient Bio)小鼠，驯化且检疫1周，然后在试验中使用7周龄小鼠。对于饲料，自由喂给实验动物用固型饲料(R40-10，SAFE，法国)，对于饮水，高温高压灭菌(autoclave)自来水且自由喂给。在驯化、检疫和试验期间，小鼠在设定为温度为23±3℃、相对湿度为55±15％、照明时间为12小时(上午8时至下午8时)、换气次数为15次/小时、以及照度为150至300Lux的无特定病原体条件下饲养。本试验是在经Medytox动物试验伦理委员会审查和批准(A-2020-004)后进行的。
从韩国细胞株库(KCLB：Korean Cell Line Bank)获得B16-F10小鼠恶性黑色素瘤细胞株(KCLB No：80008)。B16-F10细胞在含有10％ FBS(CAT No：10082-147，Gibco)和1％青霉素-链霉素(目录号：15140-122，Gibco)的DMEM培养基(目录号：11965-092，Gibco)中在37℃、5％ CO2的条件下在培养箱中培养。使用注射器将0.1ml的5×105细胞移植到经麻醉的C57BL/6小鼠的右侧肋下。
作为载体，使用安慰剂，其中仅肉毒神经毒素被排除在肉毒神经毒素产品之外且其余赋形剂成分相同。对于非复合化的肉毒神经毒素，使用100单位的Coretox(批号：NSA19007A，Medytox)，且对于复合化的肉毒神经毒素，使用100单位的Meditoxin(批号：TFAA20024，Medytox)。抗PD-1抗体(克隆：RMP1-14，目录号：BE0146，批号：780120J2)购自Bio X cell并使用。根据下表4调剂且施用各试验物质。向肉毒神经毒素100单位小瓶加入灭菌生理盐水，并调剂成浓度为15units/ml，从而以1ml/㎏、15units/㎏的用量施用于肿瘤内。在施用当天，使用灭菌PBS(目录号：10010，Gibco)将抗PD-1抗体调剂成最终浓度为1mg/ml，从而以5ml/㎏、15mg/㎏的用量施用于腹腔内。
在小鼠恶性黑色素瘤移植后第8天，测量肿瘤大小，根据试验组将12只小鼠随机分配到每个组，使试验组之间没有任何差异。在肿瘤移植后第8天，根据试验组的构成肿瘤内施用载体和肉毒神经毒素。在抗PD-1抗体的情况下，根据表4，每周腹腔内施用两次，总共4次。肿瘤移植后每周测量肿瘤大小两次。用游标卡尺测量肿瘤大小，并使用测量值，通过实施例1中所示的式计算肿瘤体积。
[表4]
Figure BDA0004113682240000201
Figure BDA0004113682240000211
在肿瘤移植后第19天，在肿瘤大小达到2000mm3之前，对所有动物实施安乐死并结束试验。
Graphpad Prism(7.05版，GraphPad Software Inc，加利福尼亚州，美国)用于图表呈现，且SPSS软件(25.0版，SPSS Inc，伊利诺伊州，美国)和Excel(2013，MS，美国)用于统计分析。对于肿瘤大小，两侧t-检验在显着性水平p＝0.05下进行。
结果如图6所示(*p<0.05，**p<0.01)。如图6所示，观察到，在小鼠恶性黑色素瘤移植后第19天，当15U/㎏的非复合化的肉毒神经毒素和复合化的肉毒神经毒素与5㎎/㎏抗PD1抗体组合施用时，显着抑制肿瘤生长。在单独施用非复合化的肉毒神经毒素和复合化的肉毒神经毒素的试验组之间没有观察到显着差异。此外，非复合化的肉毒神经毒素+抗PD1抗体施用组与复合化的肉毒神经毒素+抗PD1抗体施用组之间未观察到显着差异。从上述结果确认，当非复合化的肉毒神经毒素和复合化的肉毒神经毒素都与抗-PD1抗体组合施用时，具有肿瘤生长抑制效果，而不管肉毒神经毒素的类型。
实施例4：肉毒神经毒素与抗CTLA4抗体对小鼠肺肿瘤移植模型的抗癌效能试验
购入雄性6周龄C57BL/6(购自Orient Bio)小鼠，驯化且检疫1周，然后在试验中使用7周龄小鼠。对于饲料，自由喂给实验动物用固型饲料(R40-10，SAFE，法国)，对于饮水，高温高压灭菌(autoclave)自来水且自由喂给。在驯化、检疫和试验期间，小鼠在设定为温度为23±3℃、相对湿度为55±15％、照明时间为12小时(上午8时至下午8时)、换气次数为15次/小时、以及照度为150至300Lux的无特定病原体条件下饲养。本试验是在经Medytox动物试验伦理委员会审查和批准(A-2020-004)后进行的。
从ATCC获得LLC1小鼠肺癌细胞株(ATCC No：CRL-1642)。LLC1细胞在含有10％ FBS(CAT No：10082-147，Gibco)和1％青霉素-链霉素(目录号：15140-122，Gibco)的DMEM培养基(目录号：LM001-05，Welgene)中在37℃、5％CO2的条件下在培养箱中培养。使用注射器将0.1ml的5×105细胞移植到经麻醉的C57BL/6小鼠的右侧肋下。
作为载体，使用安慰剂，其中仅肉毒神经毒素被排除在肉毒神经毒素产品之外且其余赋形剂成分相同，并使用100单位的Coretox(批号：NSA19007A，Medytox)作为肉毒神经毒素。抗CTLA4抗体(克隆：9H10，目录号：BE0131，批号：704019A2)购自Bio X cell并使用。根据下表5调剂且施用各试验物质。向肉毒神经毒素100单位小瓶加入灭菌生理盐水，并调剂成浓度为15units/ml，从而以1ml/㎏、15units/㎏的用量施用于肿瘤内。在施用当天，使用灭菌PBS(目录号：10010，Gibco)将抗CTLA4抗体调剂成最终浓度为1mg/ml，从而以5ml/㎏、15mg/㎏的用量施用于腹腔内。
在小鼠LLC1肺肿瘤细胞株移植第8天，测量肿瘤大小，根据试验组将10只小鼠随机分配到每个组，使试验组之间没有任何差异。在肿瘤移植后第8天，根据试验组的构成肿瘤内施用载体和肉毒神经毒素。在抗CTLA4抗体的情况下，根据表5，每周腹腔内施用两次，总共4次。肿瘤移植后每周测量肿瘤大小两次。用游标卡尺测量肿瘤大小，并使用测量值，通过实施例1中所示的式计算肿瘤体积。
[表5]
Figure BDA0004113682240000221
Figure BDA0004113682240000231
肿瘤移植后第21天，在肿瘤大小达到2000mm3之前，对所有动物实施安乐死并结束试验。
Graphpad Prism(7.05版，GraphPad Software Inc，加利福尼亚州，美国)用于图表呈现，且SPSS软件(25.0版，SPSS Inc，伊利诺伊州，美国)和Excel(2013，MS，美国)用于统计分析。对于肿瘤大小，两侧t-检验在显着性水平p＝0.05下进行。
其结果示于图7(*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001)。如图7所示，在小鼠肺肿瘤移植后第21天，与载体试验组相比，在施用15U/㎏肉毒神经毒素或载体+5㎎/㎏抗CTLA4抗体的组中未观察到显着的肿瘤生长抑制效果，但与载体试验组相比，在组合施用15U/㎏肉毒神经毒素+5㎎/㎏抗CTLA4抗体的组中观察到显着的肿瘤生长抑制效果。另外，与单独施用15U/㎏肉毒神经毒素的试验组以及施用载体+5mg/kg抗CTLA4抗体的组相比，组合施用15U/㎏肉毒神经毒素+5㎎/㎏抗CTLA4抗体的组中的肿瘤体积显著地减少。由上述结果确认出，通过在小鼠LLC1肺肿瘤模型中组合施用肉毒神经毒素和抗CTLA4抗体对肿瘤生长具有抑制效果。
实施例5：肉毒神经毒素和抗PD-1抗体对于小鼠恶性黑色素瘤两侧移植模型的抗癌效能试验
购入雄性6周龄C57BL/6(购自Orient Bio)小鼠，驯化且检疫1周，然后在试验中使用7周龄小鼠。对于饲料，自由喂给实验动物用固型饲料(R40-10，SAFE，法国)，对于饮水，高温高压灭菌(autoclave)自来水且自由喂给。在驯化、检疫和试验期间，小鼠在设定为温度为23±3℃、相对湿度为55±15％、照明时间为12小时(上午8时至下午8时)、换气次数为15次/小时、以及照度为150至300Lux的无特定病原体条件下饲养。本试验是在经Medytox动物试验伦理委员会审查和批准(A-2020-004)后进行的。
从韩国细胞株库(KCLB：Korean Cell Line Bank)获得B16-F10小鼠恶性黑色素瘤细胞株(KCLB No：80008)。B16-F10细胞在含有10％ FBS(CAT No：10082-147，Gibco)和1％青霉素-链霉素(目录号：15140-122，Gibco)的DMEM培养基(目录号：11965-092，Gibco)中在37℃、5％ CO2的条件下在培养箱中培养。使用注射器将0.1mL的5×105细胞移植到经麻醉的C57BL/6小鼠的右侧肋下，并在5天后使用注射器将0.1mL的2至2.5×105细胞移植到左侧肋下。
作为载体，使用安慰剂，其中仅肉毒神经毒素被排除在肉毒神经毒素产品之外且其余赋形剂成分相同，并使用100单位的Coretox(批号：NSA20015，Medytox)作为肉毒神经毒素。抗PD-1抗体(克隆：RMP1-14，目录号：BE0146，批号：780120J3或798921J1C)购自Bio Xcell并使用。根据下表6调剂且施用各试验物质。向肉毒神经毒素100单位小瓶加入灭菌生理盐水，并调剂成浓度为15units/mL，从而以1mL/㎏、15units/㎏的用量施用于肿瘤内。使用PBS(目录号：LB004-02，Welgene)以5mg/kg容量腹腔内施用抗PD-1抗体。
使用相同的试验组和方法重复进行试验2次。在黑色素瘤移植到右侧肋下后第8天，测量肿瘤大小，根据试验组将12只小鼠随机分配到每个组，使试验组之间没有任何差异。在黑色素瘤移植到右侧肋下后第8天，根据试验组的构成对右侧肋下的肿瘤内施用载体和肉毒神经毒素。在抗PD-1抗体的情况下，根据试验组的构成，每周腹腔内施用两次，总共4次。肿瘤移植后，每周测量移植到右侧和左侧的肿瘤的大小2次。用游标卡尺测量肿瘤大小，并使用测量值，通过实施例1中所示的式计算肿瘤体积。
[表6]
Figure BDA0004113682240000251
在右侧肿瘤移植后第21天，对所有动物实施安乐死以结束试验。结束后，观察所有个体的左侧肋下有无移植肿瘤组织，并取出左侧肿瘤，从而使用流式细胞分析仪(FACSVerse，BD)分析肿瘤组织中的免疫细胞。对于肿瘤组织内免疫细胞分析，在使用温和MACS C管(目录号：130-093-237，Miltenyi Biotec)将肿瘤组织分离成单细胞后，以LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain(目录号：L34957，Invitrogen)、Fc block(目录号：553142，BD)、CD45-PE-Cy7(目录号：25-0451-82，eBioscience)、TCRbeta-APC-eFluor780(目录号：47-5961-82，Invitrogen)、CD4-pacific blue(目录号：100428，Biolegend)、CD8a-PerCPCy55(目录号：100734，Biolegend)、以及CD11b-A647(目录号：101218，Biolegend)抗体进行染色，并用流式细胞分析仪进行分析。肿瘤中CD4+和CD8a+T细胞与CD11b+细胞的比率表示基于活细胞的CD45+TCRbeta+CD4+、CD45+TCRbeta+CD8a+、CD45+CD11b+细胞的比率。
肿瘤移植后，当每只小鼠的左侧和右侧肿瘤大小之和达到2000mm3时，即记录该个体为死亡。
Graphpad Prism(7.05版，GraphPad Software Inc，加利福尼亚州，美国)用于图表呈现，且SPSS软件(25.0版，SPSS Inc，伊利诺伊州，美国)和Excel(2013，MS，美国)用于统计分析。对于肿瘤大小，进行两侧t-检验，对于左侧肿瘤形成率，进行皮尔森卡方检验，对于存活率，Mantel-Cox对数等级分析在显着性水平p＝0.05下进行。
在图8a和图8b中以肿瘤体积(mm3)示出右侧和左侧肿瘤随时间的生长(*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)。观察到，在右侧和左侧移植的恶性黑色素瘤模型中，当以15U/kg用量单次右侧肿瘤内施用肉毒神经毒素并向腹腔组合施用5mg/kg抗PD-1抗体时，与载体相比，右侧肿瘤的大小显着减少，并观察到与分别单独施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的试验组相比右侧肿瘤的大小显着减少(图8a)。在左侧肿瘤大小的情况下，与载体施用组相比，组合施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的试验组中显着减小(图8b)。
表7示出是否存在左侧肿瘤形成(*p<0.05vs G3抗PD-1抗体)。
[表7]
Figure BDA0004113682240000261
Figure BDA0004113682240000271
如表7所示，与单独施用抗PD-1抗体的组相比，组合施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的组中左侧肿瘤的形成率显着降低。
图9示出小鼠的存活率(**p<0.01)。已确认，在组合施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的试验组的存活率显着改善。
通过使用两侧t-检验，计算基于浸润在左侧未施用肿瘤的活细胞的CD11b+细胞与CD4+和CD8a+T细胞的比率(*p<0.05)。通过取出移植到左侧的肿瘤组织分析浸润在肿瘤中的CD4+和CD8a+T细胞和CD11b+细胞的结果，观察到组合施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的组中的CD11b+细胞比率相比于载体施用组显着减少(图10a)，并与单独施用PD-1抗体的组相比，CD4+T细胞显着增加(图10b)，与单独施用载体和肉毒神经毒素的组相比，CD8a+T细胞的比率在组合施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的组中显着增加(图10c)。
由上述结果确认出，组合施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体在小鼠两侧黑色素瘤移植模型中显著改善存活率，并且具有抑制施用了肉毒神经毒素的肿瘤的生长以及抑制未施用的肿瘤的形成和生长的效果。
实施例6：组合施用肉毒神经毒素和免疫抗癌剂(抗PD-1和抗-CTLA4)在小鼠大肠癌移植模型中的抗癌效能试验
购入雌性6周龄C57BL/6(购自Orient Bio)小鼠，驯化且检疫1周，然后在试验中使用7周龄小鼠。对于饲料，自由喂给实验动物用固型饲料(R40-10，SAFE，法国)，对于饮水，高温高压灭菌(autoclave)自来水且自由喂给。在驯化、检疫和试验期间，小鼠在设定为温度为23±3℃、相对湿度为55±15％、照明时间为12小时(上午8时至下午8时)、换气次数为15次/小时、以及照度为150至300Lux的无特定病原体条件下饲养。本试验是在经Medytox动物试验伦理委员会审查和批准(A-2020-004)后进行的。
从Kerafast获得小鼠大肠癌MC38细胞株(ENH204-FP)。MC38细胞株在含有10％FBS(目录号：10082-147，Gibco)以及1％青霉素-链霉素(目录号：15140-122，Gibco))、10mMHEPES(目录号：15630-080，Gibco)、0.1mM MEM NEAA(目录号：11140-050，Gibco)、1mM丙酮酸钠(目录号：11360-070，Gibco)的DMEM培养基中(目录号：11965-092，Gibco)在37℃、5％CO2的条件下在培养箱中培养。使用注射器将0.1mL的2.5×105细胞移植到经麻醉的C57BL/6小鼠的右侧肋下。
作为载体，使用安慰剂，其中仅肉毒神经毒素被排除在肉毒神经毒素产品之外且其余赋形剂成分相同，并使用100单位的Coretox(批号：NSA20015，Medytox)作为肉毒神经毒素。抗PD-1抗体(克隆：RMP1-14，目录号：BE0146，批号：798921J1C)和抗CTLA4抗体(克隆：9H10，目录号：BE0131，批号：755620A2)购自Bio X cell并使用。根据下表6调剂且施用各试验物质。向肉毒神经毒素100单位小瓶加入灭菌生理盐水，并调剂成浓度为15units/mL，从而以1mL/㎏、15units/㎏的用量施用于肿瘤内。使用PBS(目录号：LB004-02，Welgene)以5mg/kg容量腹腔内施用抗PD-1抗体和抗CTLA4抗体。施用PBS将普萘洛尔(目录号：P0884，Sigma)制造成2mg/mL，并以10mg/kg用量腹腔内施用。
在小鼠大肠癌细胞株移植后第7天，测量肿瘤大小，根据试验组将10只小鼠随机分配到每个组，使试验组之间没有任何差异。在肿瘤移植后第7天，根据试验组的构成肿瘤内施用载体和肉毒神经毒素。根据表8，每周腹腔内施用抗PD-1和抗CTLA4抗体两次，总共4次，并且普萘洛尔在肿瘤移植后第7天至第16天之间腹腔内施用总共8次，肿瘤移植后每周测量肿瘤大小两次。用游标卡尺测量肿瘤大小，并使用测量值，通过实施例1中所示的式计算肿瘤体积。
[表8]
Figure BDA0004113682240000291
Figure BDA0004113682240000301
肿瘤移植后，进行测量直到每只小鼠的肿瘤大小达到2000mm3，并对超过安乐死标准(2000mm3)的个体立即实施安乐死并记录为死亡。
Graphpad Prism(7.05版，GraphPad Software Inc，加利福尼亚州，美国)用于图表呈现，且SPSS软件(25.0版，SPSS Inc，伊利诺伊州，美国)和Excel(2013，MS，美国)用于统计分析。对于肿瘤大小，进行两侧t-检验，且对于存活率，Mantel-Cox对数等级分析在显着性水平p＝0.05下进行。
图11和图13以肿瘤体积(mm3)示出肿瘤随时间的生长(图11：**p<0.01vs载体，图13：**p<0.01,***p<0.001vs载体)。在小鼠大肠癌移植后第20天，与单独施用载体、肉毒神经毒素和抗PD-1的组相比，在组合施用15U/kg肉毒神经毒素和5mg/kg抗PD-1抗体的组中观察到显着的肿瘤生长抑制(图11)。此外，在大肠癌移植后第20天，与载体施用组相比，单独施用5mg/kg抗CTLA4的组和组合施用肉毒神经毒素和抗CTLA4的组中观察到显着的肿瘤生长抑制(图13)。
图12和图14显示小鼠的存活率(图12：*p<0.05，**p<0.01vs载体，ap<0.05vs抗PD-1，图14：***p<0.001vs载体，ap<0.05vs抗CTLA4)。与单独施用载体和抗PD-1抗体的组相比，组合施用肉毒神经毒素和抗PD-1抗体的试验组中小鼠的存活率显着增加，并与单独施用载体和抗PD-1抗体的组相比，组合施用10mg/kg普萘洛尔和抗PD-1抗体的试验组中存活率显着增加。在单独施用抗CTLA4抗体的组中观察到存活率显着增加，并且与单独施用载体和抗CTLA4抗体的组相比，在组合施用肉毒神经毒素和抗CTLA4抗体的组中观察到存活率显着增加(图14)。
由上述结果确认出，在小鼠大肠癌模型中肉毒神经毒素和抗PD-1或抗CTLA4免疫治疗剂的组合施用具有肿瘤生长抑制相乘效果(synergistic effect)和存活率改善效果。此外，确认了通过β受体阻滞剂(普萘洛尔)与免疫抗癌剂的组合施用的相乘效果，当组合施用肉毒神经毒素和免疫抗癌剂时，效果等于或大于组合施用β受体阻滞剂和免疫抗癌剂的组。

Claims (23)

1.一种用于与免疫治疗剂组合施用来治疗癌症的组合物，其包括肉毒神经毒素作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中，肉毒神经毒素为血清型A、B、C、D、E、F、G、H、或其组合。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，免疫治疗剂为免疫检查点抑制剂。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中，免疫检查点抑制剂为PD-1拮抗剂、PD-L1拮抗剂、CTLA-4拮抗剂、TIM3拮抗剂、LAG3拮抗剂、TIGIT拮抗剂、VISTA拮抗剂、BTLA拮抗剂、或其组合。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中，免疫检查点抑制剂为选自由抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗TIM3抗体、抗LAG3抗体、抗TIGIT抗体、抗VISTA抗体、抗BTLA抗体、或其抗原结合片段组成的组中的一种或更多种。
6.根据权利要求5所述的组合物，其中，免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、或其抗原结合片段。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中，癌症是外泌体介导的。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中，癌症是实体瘤。
9.根据权利要求8所述的组合物，其中，实体瘤为选自由黑色素瘤、大肠癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、以及胃癌组成的组中的一种或更多种。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中，癌症为转移性癌症。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物，其用于其中外泌体分泌增加的对象。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其还包括药学上可接受的赋形剂或添加剂。
13.根据权利要求12所述的组合物，其中，药学上可接受的赋形剂或添加剂为稳定剂、离子化合物、表面活性剂、缓冲剂、冻结干燥保护剂、或其组合。
14.根据权利要求13所述的组合物，其中，药学上可接受的赋形剂或添加剂为氨基酸、盐、缓冲液、非离子表面活性剂、糖、糖醇、或其组合。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的组合物，其不包括白蛋白或动物源性成分或多糖。
16.根据权利要求12至15中任一项所述的组合物，其为冻结干燥粉末、液相、或预充注射器制剂的形式。
17.根据权利要求12至16中任一项所述的组合物，其用于局部施用。
18.根据权利要求17所述的组合物，其用于肿瘤内或肿瘤周围施用。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的组合物，其包括0.01units/㎏至100units/㎏的肉毒神经毒素。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的组合物，其中，肉毒神经毒素与免疫治疗剂同时或顺序施用。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的组合物，其中，肉毒神经毒素与免疫治疗剂作为单一制剂或个别的制剂施用。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的组合物，其中，免疫治疗剂为肠胃外施用。
23.根据权利要求22所述的组合物，其中，免疫治疗剂通过静脉内、腹腔内、皮下、皮内、肌内、脊椎、脊椎腔、或直肠内局部施用或注入。
CN202180059622.XA 2020-07-23 2021-07-19 癌症治疗剂 Pending CN116133686A (zh)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2020-0091709 2020-07-23
KR20200091709 2020-07-23
KR1020210009360A KR20220012791A (ko) 2020-07-23 2021-01-22 암 치료제
KR10-2021-0009360 2021-01-22
KR1020210074544A KR20220012809A (ko) 2020-07-23 2021-06-09 암 치료제
KR10-2021-0074544 2021-06-09
PCT/KR2021/009225 WO2022019584A1 (ko) 2020-07-23 2021-07-19 암 치료제

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116133686A true CN116133686A (zh) 2023-05-16

Family

ID=79728877

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180059622.XA Pending CN116133686A (zh) 2020-07-23 2021-07-19 癌症治疗剂

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20230256064A1 (zh)
EP (1) EP4186520A4 (zh)
CN (1) CN116133686A (zh)
WO (1) WO2022019584A1 (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101031317A (zh) * 2004-08-27 2007-09-05 阿勒根公司 治疗癌症的方法
WO2010062955A1 (en) * 2008-11-26 2010-06-03 Toxcure, Inc. Treating neoplasms with neurotoxin
WO2018022668A2 (en) * 2016-07-26 2018-02-01 Flagship Pioneering, Inc. Neuromodulating compositions and related therapeutic methods for the treatment of cancer
CN109843922A (zh) * 2016-09-02 2019-06-04 莱蒂恩技术公司 用DuoCAR治疗癌症的组合物和方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8343929B2 (en) * 2004-09-23 2013-01-01 Toxcure, Inc. Treating neoplasms with neurotoxin
WO2006094539A1 (en) 2005-03-03 2006-09-14 Université Catholique de Louvain Methods and compositions for the treatment of cancer
CA2690773C (en) 2007-07-10 2013-09-17 Medy-Tox, Inc. Pharmaceutical liquid composition of botulinum toxin with improved stability
DK3241547T3 (da) 2011-03-31 2020-08-17 Medy-Tox Inc Lyofiliseret præparat af botulinumtoksin
US20170246267A1 (en) * 2014-08-18 2017-08-31 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Cholinergic antagonism as an adjunct to cancer therapy

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101031317A (zh) * 2004-08-27 2007-09-05 阿勒根公司 治疗癌症的方法
WO2010062955A1 (en) * 2008-11-26 2010-06-03 Toxcure, Inc. Treating neoplasms with neurotoxin
WO2018022668A2 (en) * 2016-07-26 2018-02-01 Flagship Pioneering, Inc. Neuromodulating compositions and related therapeutic methods for the treatment of cancer
CN109843922A (zh) * 2016-09-02 2019-06-04 莱蒂恩技术公司 用DuoCAR治疗癌症的组合物和方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KATHLEEN M ET AL.: "Mechanisms associated with biogenesis of exosomes in cance", 《MOLECULAR CANCER》, vol. 18, no. 52, 31 December 2019 (2019-12-31), pages 2 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP4186520A1 (en) 2023-05-31
EP4186520A4 (en) 2024-05-01
WO2022019584A1 (ko) 2022-01-27
US20230256064A1 (en) 2023-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7161938B2 (ja) スーパー抗原媒介性癌免疫療法の能力を増強するための方法および組成物
US12201686B2 (en) Compositions including a therapeutic antibodies and/or a checkpoint inhibitor and an integrin activating compound
CN115920007A (zh) 组合
KR20210008155A (ko) 단순 헤르페스 바이러스 및 면역 체크포인트 억제제를 사용한 흑색종의 치료방법
US20180303935A1 (en) A nanomaterial complex comprising graphene oxide associated with a therapeutic agent and methods of use
JP2022188159A (ja) 二本鎖ポリリボヌクレオチドとポリアルキレンイミンとの複合体を含む粒子を含む新規な医薬組成物
CN116916960A (zh) PPAR-delta抑制剂联合免疫治疗药物在制备抗肿瘤药物中的应用
WO2020104479A1 (en) Methods and compositions for treating cancers and resistant cancers with anti transferrin receptor 1 antibodies
US20190060479A1 (en) Polymalic acid based nanoimmunoconjugates and uses thereof
EP2502071A1 (en) New medical methods and agents for use therein
JP2011506436A (ja) 細胞傷害性ｔリンパ球抗原４（ｃｔｌａ４）に対する抗体と組み合わせられたアルファチモシンペプチドによる黒色腫の処置の方法
WO2021118988A1 (en) Compositions and methods for preventing recurrence of cancer
CN116133686A (zh) 癌症治疗剂
US20180147198A1 (en) Combinations of pfkfb3 inhibitors and immune checkpoint inhibitors to treat cancer
KR20220012809A (ko) 암 치료제
KR20220012791A (ko) 암 치료제
US11311619B2 (en) Integrin activator vaccine compositions
JP7504106B2 (ja) がんの処置のための組合せ物
US20230255904A1 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising naphthoquinone-based compound and immune checkpoint inhibitor as active ingredients
JP2024510760A (ja) Ｃｄ３およびｃｄ１９に二重特異性を有するｐｅｇ化ｔ細胞エンゲージャー
KR20220012790A (ko) 엑소좀-매개된 질환 치료제
KR20240016287A (ko) 항체 및 기능성 물질의 콘쥬게이트 또는 이의 염, 및 이의 제조에 사용되는 화합물 또는 이의 염
WO2020127885A1 (en) Compositions for treating cancers and resistant cancers
KR100601080B1 (ko) (-)-에피갈로카테킨 갈레이트를 유효성분으로 하는류마티스성 관절염 치료제
WO2020127411A1 (en) Methods and compositions for treating cancers by immuno-modulation using antibodies against cathespin-d

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20230516