CN116026654A - 用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法 - Google Patents
用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，包括以下步骤：使用切片机对组织进行切片，获得一定厚度的蜡片；将切好的蜡片放入离心管中并碾碎；在离心管中加入二甲苯，离心分离；离心结束后，倒去管内二甲苯加入等量无水乙醇，混匀、离心；离心结束后，倒去管内无水乙醇，根据沉淀物量加入乙醇；将得到的产物进行烘烤，然后在载玻片上除了蜡片以外的地方滴加；滴加好阳性对照的切片在烤片一段时间即得，可进行后续的免疫组织化学染色。本发明提供的液体阳性组织切片制作方法，将阳性对照切片变为液态，节省人力而且节省玻片的损耗。同时液体阳性对照组织切片的使用可减少贴错标签的风险以及节省贴玻片标签的时间。
Description
技术领域
本发明涉及免疫组织化学染色技术领域，尤其是涉及其中的阳性对照技术，具体而言涉及一种用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法。
背景技术
免疫组织化学是利用抗原抗体特异性结合的特点，通过化学反应，使标记于抗体上的显色剂(酶、金属离子、荧光素)显示出一种颜色，借助电子、荧光或普通显微镜观察其颜色变化，从而在抗原结合部位确定组织细胞某种成分的方法。免疫组织化学是病理诊断中常用的检测技术。
目前，检测机构所检测的项目中依然沿用传统的方式，即一个检测指标加一种阳性对照，在检测项目较多时，耗时耗力。而且，在检测项目量大时，大量的切片标签的粘贴增加了工作量，也增加了标签贴错的风险，导致检测过程和结果出现偏差和错误，影响检测项目的正常运行。
为此，现有技术中尝试通过预置检测试剂盒的方式来解决批量检测时的工作量和容易出错的问题，开发的使用培养细胞切片做的检测试剂盒产品，例如杭州百凌生物科技有限公司提供的配备有液体阳性细胞切片的EB病毒检测试剂盒，试剂盒自带液体阳性细胞切片，由此通过自带的液体阳性细胞切片，可以有效监测检测过程，并确保了染色结果的可靠性，可实现在一张切片上有待检测组织的情况下，同时添加阳性对照，以对角线方式滴加有效检测试剂覆盖面，实现对待检样品的检测。这样配备了液态阳性细胞切片的EB病毒检测试剂盒产品，虽然保证了染色结果的可靠性，但是，阳性细胞的获取是一个难点，很多细胞比较娇弱，每种细胞的培养方式都不一样，在实际使用和普及过程中，其局限性太强，从细胞的获取到细胞的培养及验证，耗费了大量金钱和时间，而且要求试验人员有过硬的细胞培养技术，大大限制了液体阳性细胞切片的使用范围。同时，并非所有的肿瘤靶点或者药物靶点都有对应的阳性细胞，导致这样配备自带的液态阳性细胞切片的检测试剂盒的普遍应用成为难点。
发明内容
鉴于现有技术存在的技术问题，本发明目的在于提供一种用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，采用液态阳性组织切片，节省玻片损耗并减少大量检测时的标签黏贴耗时和贴错的风险。
为实现上述目的，根据本发明的第一方面，提出一种用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，包括以下步骤：
步骤1、使用切片机对组织进行切片，获得一定厚度的蜡片；
步骤2、将切好的蜡片放入离心管中，使用玻璃棒进行碾碎；
步骤3、在所述离心管中加入二甲苯，离心分离一定时间；
步骤4、离心结束后，倒去管内二甲苯，加入等量无水乙醇，混匀，离心分离一定时间；
步骤5、离心结束后，倒去管内无水乙醇，根据沉淀物量加入75％～100％的乙醇；
步骤6、将步骤5得到的产物在烤片机进行烘烤，然后在载玻片上除了蜡片以外的地方滴加；
步骤7、滴加好阳性对照的切片在烤片机烤片一段时间，即得，可进行后续的免疫组织化学染色。
其中，所述步骤5中，根据沉淀物量的1：20～1：50，加入75％～100％乙醇。
其中，所述步骤6中，被检组织周围均滴加阳性对照，尤其是，在被检组织上方及下方各一滴，或者以对角线方式滴加。
其中，所述步骤7中，滴加好的切片在烤片机上的烤片时间设定为：80℃下烤片30分钟；或者在60℃下烤片3小时。
由以上本发明的技术方案可见，本发明提出的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，可解决检测项目量多时阳性对照组织切片添加的繁琐问题，减少和消除玻片损耗和切片标签的粘贴费时且贴错的风险。
具体实施方式
为了更了解本发明的技术内容，特举具体实施例具体说明如下。
根据本发明的实施例公开的一种用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，其制作过程包括以下步骤：
步骤1、使用切片机对组织进行切片，获得一定厚度的蜡片；
步骤2、将切好的蜡片放入离心管中，使用玻璃棒进行碾碎；
步骤3、在所述离心管中加入二甲苯，离心分离一定时间；
步骤4、离心结束后，倒去管内二甲苯，加入等量无水乙醇，混匀，离心分离一定时间；
步骤5、离心结束后，倒去管内无水乙醇，根据沉淀物量加入75％～100％的乙醇；
步骤6、将步骤5得到的产物在烤片机进行烘烤，然后在载玻片上除了蜡片以外的地方滴加；
步骤7、滴加好阳性对照的切片在烤片机烤片一段时间，即得，可进行后续的免疫组织化学染色。
作为可选的示例，在步骤1中，切片时控制蜡片的厚度为2～3μm。
作为可选的示例，在步骤2中，在离心管可以被替换为烧杯。
作为可选的示例，在步骤3和步骤4中，离心分离的转速控制在2000～3000转/分钟，离心时间2～5分钟。
作为可选的示例，在步骤5中，根据沉淀物量的1：20～1：50，加入75％～100％乙醇。
作为可选的示例，在步骤6中，被检组织周围均滴加阳性对照。
作为可选的示例，在步骤6中，在被检组织上方及下方各一滴，或者以对角线方式滴加。
作为可选的示例，在步骤7中，滴加好的切片在烤片机上的烤片时间设定为：80℃下烤片30分钟；或者，60℃下烤片3小时。
下面我们结合一个具体实施例，更加具体的描述前述实施例的阳性对照组织切片的制作过程。
1.使用切片机对组织进行切片，切片的蜡片厚度为2～3μm；
2.接着将切好的蜡片放入50mL离心管中，使用玻璃棒轻轻碾碎；
3.然后在50mL离心管中加入适量二甲苯，设定离心机转速2500转/分钟，离心3分钟；
4.离心结束后，倒去管内的二甲苯，加入与前述步骤3添加的二甲苯等量的无水乙醇，混匀，设定离心机转速2500转/分钟，离心3分钟；
5.再次离心结束后，倒去管内的无水乙醇，根据沉淀物量按照1：30加入75％～100％的乙醇；
6.将步骤5得到产物在烤片机上烤一会，一般5～10分钟，然后在载玻片上除了蜡片以外的地方进行滴加；
7.滴加好阳性对照的切片在80℃烤片30分钟之后，即可进行后续的免疫组织化学染色。
其中，在前述制作过程中，在步骤6的滴加操作中，需要滴加在蜡片以外的载玻片位置上，并且为了确保免疫组织化学染色结果的准确性，被检组织周围均滴加阳性对照，可以组织上方及下方各一滴，或者以对角线方式滴加。
作为可选的实施例，在最后烤片时，还可以在不同的温度下进行烤片，例如在60℃下烤片3小时即可。然后，可以直接用于免疫组化仪进行染色。如果是手工染色，须先在组织周围用免疫组化笔画圈，然后进行染色。
由此，通过本发明提供的液体阳性组织切片的制作方法，将阳性对照切片变为液态，节省了人力而且节省了玻片的损耗。同时，液体阳性对照组织切片的使用减少了贴错标签的风险以及节省了贴玻片标签的时间。同时，液体阳性对照组织切片因为其组织的获取和验证较细胞培育容易，很大程度上解决了市场上培养细胞切片做的产品局限性较强、细胞获取和培养难而无法实现大规模推广的难题。
虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明。本发明所属技术领域中具有通常知识者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作各种的更动与润饰。因此，本发明的保护范围当视权利要求书所界定者为准。
Claims (8)
1.一种用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、使用切片机对组织进行切片，获得一定厚度的蜡片；
步骤2、将切好的蜡片放入离心管中，使用玻璃棒进行碾碎；
步骤3、在所述离心管中加入二甲苯，离心分离一定时间；
步骤4、离心结束后，倒去管内二甲苯，加入等量无水乙醇，混匀，离心分离一定时间；
步骤5、离心结束后，倒去管内无水乙醇，根据沉淀物量加入75％～100％的乙醇；
步骤6、将步骤5得到的产物在烤片机进行烘烤，然后在载玻片上除了蜡片以外的地方滴加；
步骤7、滴加好阳性对照的切片在烤片机烤片一段时间，即得，可进行后续的免疫组织化学染色。
2.根据权利要求1所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，其特征在于，所述步骤1中，切片时控制蜡片的厚度为2～3μm。
3.根据权利要求1所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，其特征在于，所述步骤2中，所述离心管可以被替换为烧杯。
4.根据权利要求1所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，其特征在于，所述步骤3和步骤4中，离心分离的转速控制在2000～3000转/分钟，离心时间2～5分钟。
5.根据权利要求1所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，其特征在于，所述步骤5中，根据沉淀物量的1：20～1：50，加入75％～100％乙醇。
6.根据权利要求1所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，其特征在于，所述步骤6中，被检组织周围均滴加阳性对照。
7.根据权利要求6所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，其特征在于，所述步骤6中，在被检组织上方及下方各一滴，或者以对角线方式滴加。
8.根据权利要求1所述的用于免疫组织化学阳性对照组织切片的制作方法，其特征在于，所述步骤7中，滴加好的切片在烤片机上的烤片时间设定为：80℃下烤片30分钟；或者，60℃下烤片3小时。
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