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CN115836076A - 甲基2-(氟甲基)-5-氧代-4-苯基-4,5,6,7-四氢-1h-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯和甲基2-(氟甲基)-5-氧代-4-苯基-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯作为cav1.2激活剂 - Google Patents

甲基2-(氟甲基)-5-氧代-4-苯基-4,5,6,7-四氢-1h-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯和甲基2-(氟甲基)-5-氧代-4-苯基-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯作为cav1.2激活剂 Download PDF

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CN115836076A CN202180040510.XA CN202180040510A CN115836076A CN 115836076 A CN115836076 A CN 115836076A CN 202180040510 A CN202180040510 A CN 202180040510A CN 115836076 A CN115836076 A CN 115836076A
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A·M·萨达吉阿尼
周玺琳
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Abstract

本披露提供了一种根据式(I)的化合物或其药学上可接受的盐作为CaV1.22激活剂用于治疗精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、物质使用障碍、ADHD、费伦‑麦克德米德综合征、孤独症谱系障碍、多发性硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、布鲁格达综合征、短QT综合征、或早期复极综合征。

Description

甲基2-(氟甲基)-5-氧代-4-苯基-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并 [B]吡啶-3-甲酸酯和甲基2-(氟甲基)-5-氧代-4-苯基-1,4, 5,7-四氢呋喃并[3,4-B]吡啶-3-甲酸酯作为CAV1.2激活剂
1.技术领域
本发明涉及甲基2-(氟甲基)-5-氧代-4-苯基-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯和甲基2-(氟甲基)-5-氧代-4-苯基-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯化合物、含有它们的药物组合物、以及此类化合物作为CaV1.2激活剂用于治疗以下疾病中的钙信号传导缺陷和/或突触功能障碍的用途：精神障碍，包括精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍；神经发育障碍，如注意缺陷多动障碍、费伦-麦克德米德综合征(Phelan-McDermid Syndrome)、和孤独症谱系障碍；神经退行性障碍，如多发性硬化、额颞叶痴呆、和阿尔茨海默病；以及心脏病症，如布鲁格达综合征(Brugada Syndrome)、短QT综合征、和早期复极综合征(early repolarization syndrome)。
2.背景技术
人类基因组学的进展揭示了精神障碍的遗传基础。精神分裂症的全基因组关联研究(GWAS)已经鉴定了一百多个疾病相关的基因座，包括CaV1.2和其他参与神经元钙信号传导的基因。跨障碍的GWAS分析已经鉴定出CaV1.2及其形成通道的β亚基(CACNB2)与精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、ADHD和孤独症谱系障碍密切相关。除了来自GWAS的证据外，精神分裂症患者的外显子组测序显示CaV1.2和神经元钙信号传导途径的其他基因成员(包括CACNA2D、CACNB、CAMK2基因)中破坏性突变的富集。CaV1.2已被证明对神经元分化和迁移、神经突增生、突触信号传导、基因表达和脑可塑性很重要。它已被证明在情绪、学习和记忆、执行功能、以及脑的奖励应答中起作用。
CaV1.2在全身广泛表达，并且在多个器官系统(包括心血管系统)中起主要作用；然而，CaV1.2在心血管系统中的生理功能不同于其在脑中的功能。研究表明，CaV1.2是心脏中动作电位生成的关键因素，同时它是神经元中细胞内信号传导和基因表达的关键驱动因素，而在动作电位生成中的作用最小。在提摩西综合征(Timothy Syndrome)中，CaV1.2突变p.G406R导致心肌细胞和神经元之间不同的细胞表型。导致心血管特定障碍(布鲁格达综合征和长QT综合征8型)的CaV1.2突变是CaV1.2在心脏和脑中具有不同功能的进一步证据。
先前已报道过钙通道激活剂，但由于它们对心血管系统的影响，对其用于神经精神障碍的进一步研究受到限制。事实上，这些分子中的许多分子最初是因它们在心力衰竭中的潜在治疗用途而进行研究和开发的。大多数与精神病学GWAS研究相关的CaV1.2SNP位于基因的内含子中，并且这些风险SNP已被证明与mRNA表达的减少有关，在许多情况下，该mRNA表达的减少导致钙电流振幅的整体减少。因此，能够增加整体电流振幅的小分子可能对患者最有益。
3.发明内容
本披露提供了一种根据式(I)的化合物或其药学上可接受的盐
Figure BDA0003980215760000021
其中：
A是O或CH2；
R1是H或F；
R2是H或F；并且
R3是OCHF2、甲基、乙基、或环丙基，其中的每一个任选地被1个至3个F取代。
在第二方面，本披露提供了一种根据式(III)的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物，
Figure BDA0003980215760000031
其中：
A是O或CH2；
R1是H或F；
R2是H或F；
R3是OCHF2、甲基、乙基、或环丙基，其中的每一个任选地被1个至3个F取代；并且
R4是H或F。
在第三方面，本披露提供了药物组合物，其包含具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在第四方面，本披露提供了具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐用于在疗法，特别地在治疗以下疾病中使用：精神障碍，包括精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍；神经发育障碍，如注意缺陷多动障碍、费伦-麦克德米德综合征(Phelan-McDermid Syndrome)、和孤独症谱系障碍；神经退行性障碍，如多发性硬化、额颞叶痴呆、和阿尔茨海默病；以及心脏病症，如布鲁格达综合征(Brugada Syndrome)、短QT综合征、和早期复极综合征(early repolarization syndrome)。
在第五方面，本披露提供了用于治疗以下疾病的方法：精神障碍，包括精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍；神经发育障碍，如注意缺陷多动障碍、费伦-麦克德米德综合征(Phelan-McDermid Syndrome)、和孤独症谱系障碍；神经退行性障碍，如多发性硬化、额颞叶痴呆、和阿尔茨海默病；以及心脏病症，如布鲁格达综合征、短QT综合征、和早期复极综合征，该方法包括向需要治疗的患者施用有效量的根据式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在第六方面，本披露提供了具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗以下疾病的药物中的用途：精神障碍，包括精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍；神经发育障碍，如注意缺陷多动障碍、费伦-麦克德米德综合征(Phelan-McDermid Syndrome)、和孤独症谱系障碍；神经退行性障碍，如多发性硬化、额颞叶痴呆、和阿尔茨海默病；以及心脏病症，如布鲁格达综合征(Brugada Syndrome)、短QT综合征、和早期复极综合征(early repolarization syndrome)。
在第七方面，本披露提供了用于治疗以下疾病的方法：精神障碍，包括精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍；神经发育障碍，如注意缺陷多动障碍、费伦-麦克德米德综合征(Phelan-McDermid Syndrome)、和孤独症谱系障碍；神经退行性障碍，如多发性硬化、额颞叶痴呆、和阿尔茨海默病；以及心脏病症，如布鲁格达综合征、短QT综合征、和早期复极综合征，该方法包括向需要治疗的患者施用根据式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在第八方面，本披露提供了药物组合物，其包含具有式(III)的化合物或其药学上可接受的盐。
在第九方面，本披露提供了具有式(III)的化合物或其药学上可接受的盐用于在疗法，特别地在治疗以下疾病中使用：精神障碍，包括精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍；神经发育障碍，如注意缺陷多动障碍、费伦-麦克德米德综合征(Phelan-McDermid Syndrome)、和孤独症谱系障碍；神经退行性障碍，如多发性硬化、额颞叶痴呆、和阿尔茨海默病；以及心脏病症，如布鲁格达综合征(Brugada Syndrome)、短QT综合征、和早期复极综合征(early repolarization syndrome)。
在第十方面，本披露提供了用于治疗以下疾病的方法：精神障碍，包括精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍；神经发育障碍，如注意缺陷多动障碍、费伦-麦克德米德综合征(Phelan-McDermid Syndrome)、和孤独症谱系障碍；神经退行性障碍，如多发性硬化、额颞叶痴呆、和阿尔茨海默病；以及心脏病症，如布鲁格达综合征、短QT综合征、和早期复极综合征，该方法包括向需要治疗的患者施用有效量的根据式(III)的化合物或其药学上可接受的盐。
在第十一方面，本披露提供了具有式(III)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗以下疾病的药物中的用途：精神障碍，包括精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍；神经发育障碍，如注意缺陷多动障碍、费伦-麦克德米德综合征(Phelan-McDermid Syndrome)、和孤独症谱系障碍；神经退行性障碍，如多发性硬化、额颞叶痴呆、和阿尔茨海默病；以及心脏病症，如布鲁格达综合征(Brugada Syndrome)、短QT综合征、和早期复极综合征(early repolarization syndrome)。
在第十二方面，本披露提供了用于治疗以下疾病的方法：精神障碍，包括精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍；神经发育障碍，如注意缺陷多动障碍、费伦-麦克德米德综合征(Phelan-McDermid Syndrome)、和孤独症谱系障碍；神经退行性障碍，如多发性硬化、额颞叶痴呆、和阿尔茨海默病；以及心脏病症，如布鲁格达综合征、短QT综合征、和早期复极综合征，该方法包括向需要治疗的患者施用根据式(III)的化合物或其药学上可接受的盐。
4.附图说明
图1：展示了本披露的甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的形式A的代表性XRPD。x轴显示散射角(以°2-θ)，y轴显示散射的X射线束的强度(以检测到的光子的计数)。
图2：展示了本披露的[甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的形式B的代表性XRPD。x轴显示散射角(以°2-θ)，y轴显示散射的X射线束的强度(以检测到的光子的计数)。
图3：展示了本发明的本披露的甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的形式C的代表性XRPD。x轴显示散射角(以°2-θ)，y轴显示散射的X射线束的强度(以检测到的光子的计数)。
图4：展示了本披露的甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的水合物A的代表性XRPD。x轴显示散射角(以°2-θ)，y轴显示散射的X射线束的强度(以检测到的光子的计数)。
图5：展示了本披露的甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的水合物B的代表性XRPD。x轴显示散射角(以°2-θ)，y轴显示散射的X射线束的强度(以检测到的光子的计数)。
图6：展示了来自心外膜环境的模拟心脏动作电位，这显示出CaV1.2激活的电压向更负的膜电位偏移的影响。x轴是时间(ms)，并且y轴是电位。
图7：展示了实例6(甲基(R)-4-(2-((S)-1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯)的单晶X射线，证实了活性对映异构体是R-对映异构体。
图8：展示了实例8(甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯)的单晶X射线，证实了活性对映异构体是R-对映异构体。
图9：展示了实例9(甲基(R)-4-(2-(二氟甲氧基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯)的单晶X射线，证实了活性对映异构体是R-对映异构体。
5.具体实施方式
5.1.定义
一般来讲，本文使用的命名法和本文所述的有机化学、药物化学和药理学中的实验室程序是在本领域中熟知且常用的那些。除非另外定义，否则本文所用的全部技术和科学术语通常具有与本披露内容所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的意义。
如本文所用，“施用(administration，administering和administer)”是指将本文所述的化合物呈递给受试者的方式。
如本文所用，“任选取代的”意指所提及的基团可以在一个或多个位置被在之后列出的基团中的任何一个或其任意组合取代。
如本文所用，“卤代”或“卤素”如本文所用可以是氟、氯、溴或碘。
如本文所用，“受试者”是指患有可以通过施用本文所述的药物组合物来治疗的本文所述的疾病或障碍(例如，精神障碍，包括精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍；神经发育障碍，如注意缺陷多动障碍、费伦-麦克德米德综合征、和其他孤独症谱系障碍；神经退行性障碍，如多发性硬化、额颞叶痴呆、和阿尔茨海默病；以及心脏病症，如布鲁格达综合征、短QT综合征、和早期复极综合征)中的一种或多种的活生物体。受试者的实例包括哺乳动物(例如，人和动物，诸如狗、乳牛、马、猴、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人动物)。在某些实施例中，受试者是人，例如，患有、有风险患上、或可能患上本文所述的疾病(例如，精神障碍，包括精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍；神经发育障碍，如注意缺陷多动障碍、费伦-麦克德米德综合征、和其他孤独症谱系障碍；神经退行性障碍，如多发性硬化、额颞叶痴呆、和阿尔茨海默病；以及心脏病症，如布鲁格达综合征、短QT综合征、和早期复极综合征)的人。
除非上下文另有要求，否则贯穿本说明书和其后的权利要求书，词语“包含(comprise)”或诸如“包含(comprises或comprising)”的变型应理解为暗指包括所陈述的整数或步骤或者整数或步骤的组，但不排除任何其他整数或步骤或者整数或步骤的组。
如果所描绘的结构与针对该结构给出的化学名称之间存在差异，则应以所描绘的结构为准。另外，如果未用例如粗线或虚线指示结构或结构的一部分的立体化学，则该结构或该结构的一部分应解释为涵盖该结构或该结构的一部分的所有立体异构体。
5.2.化合物
一种根据式(I)的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物
Figure BDA0003980215760000071
其中：
A是O或CH2；
R1是H或F；
R2是H或F；并且
R3是OCHF2、甲基、乙基、或环丙基，其中的每一个任选地被1个至3个F取代。
一个实施例是具有式(Ia)的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物，
Figure BDA0003980215760000081
另一个实施例是具有式(Ib)的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物，
Figure BDA0003980215760000082
在另一个实施例中，A是O。
在另一个实施例中，A是CH2。
在另一个实施例中，R1是H。
在另一个实施例中，R1是F。
在另一个实施例中，R2是H。
在另一个实施例中，R2是F。
在另一个实施例中，R3是OCHF2。
在另一个实施例中，R3是甲基、乙基、或环丙基，其中的每一个任选地被1个至3个F取代。
在另一个实施例中，R3是甲基、乙基、或环丙基，其中的每一个被1个至3个F取代。
在另一个实施例中，R3是CHF2或CF3。
在另一个实施例中，R3是被1个或2个F取代的乙基。
在另一个实施例中，R3是未被取代的乙基。
在另一个实施例中，R3是未被取代的或被2个F取代的环丙基。
一种根据式(III)的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物，
Figure BDA0003980215760000091
其中：
A是O或CH2；
R1是H或F；
R2是H或F；
R3是OCHF2、甲基、乙基、或环丙基，其中的每一个任选地被1个至3个F取代；并且
R4是H或F。
在另一个实施例中，A是O。
在另一个实施例中，A是CH2。
在另一个实施例中，R1是H。
在另一个实施例中，R1是F。
在另一个实施例中，R2是H。
在另一个实施例中，R2是F。
在另一个实施例中，R3是OCHF2。
在另一个实施例中，R3是甲基、乙基、或环丙基，其中的每一个任选地被1个至3个F取代。
在另一个实施例中，R3是甲基、乙基、或环丙基，其中的每一个被1个至3个F取代。
在另一个实施例中，R3是CHF2或CF3。
在另一个实施例中，R3是被1个或2个F取代的乙基。
在另一个实施例中，R3是未被取代的乙基。
在另一个实施例中，R3是未被取代的或被2个F取代的环丙基。
在另一个实施例中，R4是F。
在另一个实施例中，R4是H。
特定化合物包括：
甲基(R)-4-(2-((R)-2,2-二氟环丙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((S)-2,2-二氟环丙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
(R)-4-(2-环丙基-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((R)-2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((S)-2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3,5-二氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3,5-二氟-2-((S)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((S)-1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((R)-1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((S)-1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3-氟-2-((S)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(二氟甲氧基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-环丙基-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-环丙基-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(二氟甲基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((R)-1,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((S)-1,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(二氟甲基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基4-(2-(二氟甲氧基)-5-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-环丙基-5-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-环丙基苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-2-(氟甲基)-5-氧代-4-(2-(三氟甲基)苯基)-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
(R)-4-(3-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3-氟-2-((S)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-环丙基-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(S)-4-(3,5-二氟-2-((S)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；以及
甲基(S)-4-(3,5-二氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯。
特定化合物进一步包括：
甲基(R)-4-(2-乙基苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；以及
甲基(R)-2-(二氟甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯。
根据起始材料和程序的选择，化合物可以呈可能的立体异构体形式或作为其混合物(例如作为纯的光学异构体或作为立体异构体混合物，如外消旋体和非对映异构体混合物)存在，这取决于不对称碳原子的数目。本披露意在包括所有此类可能的立体异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯的形式。光学活性(R)-和(S)-立体异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术拆分。如果化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型。如果化合物含有二取代的环烷基，则环烷基取代基可以具有顺式或反式构型。所有互变异构形式也旨在包括在内。
如本文所用，术语“盐(salt或salts)”是指本披露的化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别地包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”是指保留本披露化合物的生物有效性和特性，并且典型地不是生物学上或其他方面不希望的盐。在许多情况下，由于氨基和/或羧基基团或与其类似的基团的存在，本披露的化合物能够形成酸盐和/或碱盐。
可以用无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐。
可以衍生出盐的无机酸包括，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以衍生出盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
可以用无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。
可以衍生出盐的无机碱包括例如铵盐和来自元素周期表第I至XII列的金属。在某些实施例中，盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别合适的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。
可以衍生出盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺；取代的胺(包括天然存在的取代的胺)；环胺；碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星、胆碱盐、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
在另一个方面，本披露提供了呈以下形式的本披露的化合物：乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐(chlortheophyllonate)、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八烷酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三苯乙酸盐(trifenatate)、三氟乙酸盐或昔萘酸盐形式。
本披露的化合物，即含有能够充当氢键供体和/或受体的基团的具有式(I)的化合物，能够与适合的共晶形成体形成共晶体。这些共晶体可以通过已知的共晶形成程序由具有式(I)的化合物制备。此类程序包括在结晶条件下研磨、加热、共升华、共熔或使具有式(I)的化合物与共晶形成体在溶液中接触，并分离由此形成的共晶体。合适的共晶形成体包括WO 2004/078163中描述的那些。因此本披露进一步提供了包含具有式(I)的化合物的共晶体。
此外，本披露的化合物，包括其盐，也可以以其水合物的形式获得，或包括用于其结晶的其他溶剂。本披露的化合物可以固有地或通过设计与药学上可接受的溶剂(包括水)形成溶剂化物；因此，旨在将本披露包括溶剂化形式和非溶剂化形式两者。术语“溶剂化物”是指本披露化合物(包括其药学上可接受的盐)与一种或多种溶剂分子的分子复合物。此类溶剂分子是制药领域常用的那些，已知它们对接受者是无害的，例如水、乙醇等。术语“水合物”是指溶剂分子为水的复合物。
本披露包括具有式(I)的化合物的未标记形式以及同位素标记的形式。同位素标记的化合物具有由本文给出的式绘示的结构，除了一个或多个原子被具有所选择的原子质量或质量数的原子替代。可以掺入本披露的化合物中的同位素包括例如氢的同位素。
此外，掺入某些同位素，特别是氘(即2H或D)可以提供更高代谢稳定性导致的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或减少的剂量要求或治疗指数或耐受性的改善。应当理解，在此上下文中氘被认为是本披露的化合物的取代基。氘的浓度可以由同位素富集因子定义。如本文所用，术语“同位素富集因子”意指同位素丰度与指定同位素的天然丰度之间的比率。如果本披露的化合物中的取代基指示为氘，则这种化合物具有的针对每个指定的氘原子的同位素富集因子为至少3500(在每个指定的氘原子上52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)、或至少6633.3(99.5％氘掺入)。应当理解，术语“同位素富集因子”可以以与对氘描述的相同方式应用于任何同位素。
例如，式(I)氘化，如式(II)所示：
Figure BDA0003980215760000141
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、和A如在式(I)中所定义；RD1至RD8各自独立地是H或D。
可以掺入本披露的化合物的同位素的其他实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，如分别是3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、123I、124I、125I。因此，应当理解，本披露内容包括结合了一种或多种任何前述同位素(包括例如放射性同位素，诸如3H和14C)的化合物，或其中存在非放射性同位素诸如2H和13C的那些。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(用14C)、反应动力学研究(例如用2H或3H)、检测或成像技术(如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定)，或用于患者的放射性治疗。特别地，18F或标记的化合物对于PET或SPECT研究可能是特别期望的。同位素标记的本披露的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实例和制备中所述的那些类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替未标记的先前使用的试剂来制备。
一种或多种本披露化合物的任何不对称原子(例如碳等)可以以外消旋或对映异构体富集的构型存在，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型。在某些实施例中，每个非对称原子具有至少50％对映异构体过量、至少60％对映异构体过量、至少70％对映异构体过量、至少80％对映异构体过量、至少90％对映异构体过量、至少95％对映异构体过量、或至少99％对映异构体过量的(R)-或(S)-构型。如果可能，在具有不饱和双键的原子上的取代基可以以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。
因此，如本文所用，本披露的化合物可以呈可能的立体异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如，作为基本上纯的几何(顺式或反式)立体异构体、非对映异构体、光学异构体(对映体)、外消旋体或其混合物。
可以基于组分的物理化学差异，例如通过色谱法和/或分级结晶法将任何所得的立体异构体混合物分离成纯的或基本上纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体。
可以通过已知方法将任何所得的本披露的化合物或中间体的外消旋体拆分成旋光对映体，例如通过将用光学活性酸或碱得到的其非对映异构体盐进行分离，并释放出光学活性的酸性或碱性化合物。特别地，因此可以使用碱性部分将本披露的化合物拆分成其光学对映体，例如通过分级结晶用如下光学活性酸形成的盐，例如，酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二乙酰酒石酸、二-O,O'-对甲苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。本披露的外消旋化合物或外消旋中间体还可以通过手性色谱法(例如，使用手性吸附剂的高压液相色谱法(HPLC))拆分。
使用方法
呈游离形式或药学上可接受的盐形式的本披露的化合物展示出有价值的药理学特性，例如，CaV1.2激活特性，例如，如在下一个部分中提供的体外和体内测试所示，并且因此指示用于疗法或用作研究化学品，例如作为工具化合物。
本披露的化合物可用于治疗选自以下清单的适应证：精神障碍，包括精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍；
神经发育障碍，如注意缺陷多动障碍、费伦-麦克德米德综合征(Phelan-McDermidSyndrome)、和孤独症谱系障碍；及
神经退行性障碍，如多发性硬化、额颞叶痴呆、和阿尔茨海默病，以及
心脏病症，如布鲁格达综合征、短QT综合征、和早期复极综合征。在一个实施例中，该适应证是精神障碍，如精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、和物质使用障碍。在另一个实施例中，该适应证是精神分裂症或双相障碍。
因此，作为另外的方面，本披露提供了本披露的化合物或其药学上可接受的盐在疗法中的用途。在另外的实施例中，该疗法选自可以通过激活CaV1.2而治疗的疾病。在另一个实施例中，该疾病选自上述适应证的清单。
因此，作为另外的方面，本披露提供了本披露的化合物或其药学上可接受的盐用于在疗法中使用。在另外的实施例中，该疗法选自可以通过激活CaV1.2而治疗的疾病。在另一个实施例中，该疾病选自上述适应证的清单。
在另一个方面，本披露提供了治疗通过激活CaV1.2而治疗的疾病的方法，该方法包括施用治疗有效量的本披露的化合物或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该疾病选自上述适应证的清单。
在另一个方面，本披露提供了治疗通过激活CaV1.2而治疗的疾病的方法，该方法包括施用本披露的化合物或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该疾病选自上述适应证的清单。
因此，作为另外的方面，本披露提供了本披露的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药物的用途。在另外的实施例中，该药物用于治疗通过激活CaV1.2而治疗的疾病。在另一个实施例中，该疾病选自上述适应证的清单。
在另一个方面，本披露提供了用于治疗通过激活CaV1.2而治疗的精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、物质使用障碍、ADHD、费伦-麦克德米德综合征、孤独症谱系障碍、多发性硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、布鲁格达综合征、短QT综合征、或早期复极综合征的方法，该方法包括施用治疗有效量的本披露的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本披露提供了用于治疗通过激活CaV1.2而治疗的精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、物质使用障碍、ADHD、费伦-麦克德米德综合征、孤独症谱系障碍、多发性硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、布鲁格达综合征、短QT综合征、或早期复极综合征的方法，该方法包括施用本披露的化合物或其药学上可接受的盐。
因此，作为另外的方面，本披露提供了本披露的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的疾病的用途：精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、物质使用障碍、ADHD、费伦-麦克德米德综合征、孤独症谱系障碍、多发性硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、布鲁格达综合征、短QT综合征、或早期复极综合征。
因此，作为另外的方面，本披露提供了本披露的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的疾病：精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、物质使用障碍、ADHD、费伦-麦克德米德综合征、孤独症谱系障碍、多发性硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、布鲁格达综合征、短QT综合征、或早期复极综合征。
在另一个方面，本披露提供了用于治疗精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、物质使用障碍、ADHD、费伦-麦克德米德综合征、孤独症谱系障碍、多发性硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、布鲁格达综合征、短QT综合征、或早期复极综合征的方法，该方法包括施用治疗有效量的本披露的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本披露提供了用于治疗精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、物质使用障碍、ADHD、费伦-麦克德米德综合征、孤独症谱系障碍、多发性硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、布鲁格达综合征、短QT综合征、或早期复极综合征的方法，该方法包括施用本披露的化合物或其药学上可接受的盐。
因此，作为另外的方面，本披露提供了本披露的化合物或其药学上可接受的盐用于制造用于治疗精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、物质使用障碍、ADHD、费伦-麦克德米德综合征、孤独症谱系障碍、多发性硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、布鲁格达综合征、短QT综合征、或早期复极综合征的药物的用途。
药物组合物
在另一个方面，本披露提供了药物组合物，其包含本披露的化合物或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的载剂。在另外的实施例中，组合物包含至少两种药学上可接受的载剂(例如本文描述的那些)。该药物组合物可以配制用于特定的施用途径，例如口服施用、肠胃外施用(例如通过注射、输注、经皮或局部施用)和直肠施用。局部施用也可以涉及吸入或鼻内应用。本披露的药物组合物可以固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒、粉末或栓剂)、或以液体形式(包括但不限于溶液、悬浮液或乳液)制成。片剂可以根据本领域已知的方法添加薄膜包衣或肠溶包衣。典型地，药物组合物是包含活性成分及以下中的一个或多个的片剂或明胶胶囊：
a)稀释剂，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如，二氧化硅、滑石、硬酯酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；就片剂而言还包含
c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯基吡咯烷酮；如果希望
d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐，或泡腾混合物；以及
e)吸附剂、着色剂、调味剂及甜味剂。
对于约50-70kg的受试者，本披露的药物组合物或组合可以是约1-1000mg的一种或多种活性成分的单位剂量，或约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg、或约1-50mg的活性成分的单位剂量。化合物、药物组合物、或其组合的治疗有效剂量取决于受试者的物种、体重、年龄及治疗中的个别病症、障碍或疾病或其严重程度。具有普通技能的医师、临床医生或兽医可以容易地确定预防、治疗或抑制障碍或疾病进展所必需的每种活性成分的有效量。
使用有利的哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、狗、猴)或其分离的器官、组织和制品在体外和体内测试中证明上述剂量特性。本披露的化合物可以以溶液形式(例如水溶液)体外应用，并且可以肠内、肠胃外，有利地静脉内，例如作为悬浮液或在水溶液中体内应用。体外剂量可以在约10-3摩尔浓度和10-9摩尔浓度之间的范围内。取决于施用途径，体内治疗有效量可以在约0.1-500mg/kg之间，或约1-100mg/kg之间的范围内。
结晶形式
本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式，并且涉及其制备方法。此外，本披露涉及药物组合物，其包含优选预定量和/或有效量的所述甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式以及至少一种药学上可接受的赋形剂。本披露的药物组合物可用作药物，特别地用于治疗和/或预防精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、物质使用障碍、ADHD、费伦-麦克德米德综合征、孤独症谱系障碍、多发性硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、布鲁格达综合征、短QT综合征、或早期复极综合征的药物。
活性药物成分的不同固态形式通常具有不同的特性。固体形式的物理化学特性的差异可以对药物组合物的改进起关键作用，例如，由于活性药物成分的固态形式的改进，具有改进的溶出曲线或改进的稳定性或保质期的药物配制品可变得容易获得。还可以在配制过程中改进对活性药物成分的加工或处理。活性药物成分的新的固态形式可以因此具有希望的加工特性。与先前已知的固体形式相比，它们更易于处理，更适于储存和/或允许更好的纯化。
甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式可以通过制药工业领域中众所周知的用于表征固体的分析方法来表征。此类方法包括但不限于XRPD、SXRD、FTIR、拉曼(Raman)、DSC、TGA、和GMS(重量测量系统)。这些形式可以通过前述分析方法之一或者通过将它们中的两种或更多种组合来表征。
甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式在本文中可以被称为由“如图中所示”的图形数据表征。此类数据包括例如粉末X射线衍射、FTIR和拉曼光谱学。本领域技术人员理解，诸如仪器类型的变化，应答以及样品定向性、样品浓度和样品纯度的变化的因素可能导致当以图形形式呈现时此类数据的小变化，例如与精确的峰位置和强度有关的变化。然而，本文附图中的图形数据与针对另一种或未知的固体形式而生成的图形数据的比较以及两组图形数据涉及相同的晶体形式的确认完全在本领域技术人员的知识范围内。
如本文所用，关于粉末X射线衍射的术语“反射”意指X射线衍射图中的峰，其在某些衍射角(布拉格角)由固体材料中原子的平行面散射的X射线的相长干涉引起，该固体材料在长程位置顺序以顺序的和重复的模式分布。这种固体材料被分类为结晶材料，而无定形材料被定义为固体材料，其缺乏长程有序且仅显示短程有序，因此导致宽散射。根据文献，长程有序例如延伸超过大约100个至1000个原子，而短程有序仅超过几个原子(参见Vitalij K.Pecharsky和Peter Y.Zavalij的Fundamentals of Powder Diffraction andStructural Characterization of Materials[粉末衍射原理和材料的结构表征],KluwerAcademic Publishers[克吕韦尔学术出版集团],2003年,第3页)。
关于粉末X射线衍射的术语“基本上相同”意指需要考虑反射位置和反射的相对强度变异性。例如，2-θ值的典型精度在±0.2°2-θ的范围内，优选地在±0.1°2-θ的范围内。
此外，本领域技术人员将理解，相对反射强度将示出装置间变异性以及由于结晶度、优选取向、粒度、样品制备和其他本领域技术人员已知的因素的变异性，并且应该仅作为定性测量。
如本文可互换使用的术语“固体形式”或“固态形式”是指化合物的任何结晶和/或无定形相。
如本文所用，术语“无定形的”是指非结晶的化合物的固体形式。无定形化合物不具有长程有序，并且不显示具有反射的确定性X射线衍射图。
如本文所用，术语“多晶型物”是指具有相同的化学组成但是形成晶体的分子、原子和/或离子的空间排列不同的结晶形式。
如本文所用，术语“共晶体”是指同一晶格内的包含通过非离子键和非共价键缔合的两种或更多种不同分子和/或离子化合物的结晶材料，其中，在室温下至少两种单个分子和/或离子化合物是固体。
如本文所用，术语“水合物”是指其中水配合在晶体结构中或被其容纳(例如，作为晶体结构的一部分)或被截留在晶体中(水夹杂物)的结晶固体。因此，水能够以化学计量的量或非化学计量的量存在。当水以化学计量的量存在时，可以通过添加希腊数字前缀来指代水合物。例如，水合物可被称为半水合物或称为一水合物，取决于水/化合物的化学计量学。水含量可以例如通过卡尔费休库仑分析法(Karl-Fischer-Coulometry)来测量。
如本文所用，术语“脱水(dehydrating或dehydration)”描述了从宿主分子的晶体结构中至少部分除去水。
如本文所用，术语“溶剂化物”是指一种或多种有机溶剂配合在晶体结构中或被其容纳(例如，作为晶体结构的一部分)或截留在晶体中(水夹杂物)的结晶固体。因此，一种或多种有机溶剂能够以化学计量的量或非化学计量的量存在。当一种或多种有机溶剂以一个或多个化学计量的量存在时，可以通过添加希腊数字前缀来指代溶剂化物。例如，取决于一种或多种溶剂/化合物的化学计量学，溶剂化物可被称作半溶剂化物或单溶剂化物。溶剂含量可以例如通过GC、NMR、SXRD和/或TGA/MS测量。
如本文所用，术语“非吸湿性”是指当用GMS测量时在从0至95％ RH范围内的相对湿度下并且在(25.0±0.1)℃的温度下在吸附循环中显示出基于化合物的重量至多2w-％的水吸收量的化合物。
如本文所用，术语“约”意指在统计上有意义的值的范围内。这种范围可以在指示值或范围的一个数量级内，典型地在10％内、更典型地在5％内、甚至更典型地在1％内、以及最典型地在0.1％内。有时，这种范围可以在实验误差范围内，这是用于测量和/或测定给定值或范围的标准方法的典型值。
如本文所用，关于包含甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的特定固体形式的组合物，术语“基本上不含任何其他固体形式”意指该组合物包括基于该组合物的重量的至多20w-％，优选地至多10w-％，更优选地至多5w-％，甚至更优选地至多2w-％、以及最优选地至多1w-％的甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的任何其他固体形式。
如本文所用，当关于形式使用时，“基本上纯的”意指如下化合物，该化合物具有基于该化合物的重量大于90w-％，包括大于90w-％、91w-％、92w-％、93w-％、94w-％、95w-％、96w-％、97w-％、98w-％、和99w-％，并且还包括等于约100w-％的甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的纯度。其余的材料包含化合物的一种或多种其他形式、和/或反应杂质和/或由其制备产生的加工杂质。例如，甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式可以被认为是基本上纯的，因为其具有如通过本领域此时已知和普遍接受的手段所测量的大于90w-％的纯度，其中剩余的小于10w-％的材料包含[化合物ABC]的一种或多种其他形式和/或反应杂质和/或加工杂质。
结晶形式A
在另外的方面，本披露提供了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式A。表1显示了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的形式A的最突出的X射线粉末衍射峰。
表1.形式A的最突出的X射线粉末衍射峰
Figure BDA0003980215760000221
本披露的一个实施例提供了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的形式A，该形式A特征在于：当在20℃至30℃范围内的温度、用具有0.15419nm的波长的Cu-Kα1,2辐射测量时，具有包含在以下2-θ角处的反射的XRPD图：
(8.5±0.2)°、(10.4±0.2)°和(10.8±0.2)°；或者(8.5±0.2)°、(10.4±0.2)°、(10.8±0.2)°和(22.4±0.2)°；或者(8.5±0.2)°、(10.4±0.2)°、(10.8±0.2)°、(14.4±0.2)°和(22.4±0.2)°；或者(8.5±0.2)°、(10.4±0.2)°、(10.8±0.2)°、(14.4±0.2)°、(21.6±0.2)°和(22.4±0.2)°；或者(7.2±0.2)°、(8.5±0.2)°、(10.4±0.2)°、(10.8±0.2)°、(14.4±0.2)°、(21.6±0.2)°和(22.4±0.2)°；或者(7.2±0.2)°、(8.5±0.2)°、(10.4±0.2)°、(10.8±0.2)°、(14.4±0.2)°、(18.5±0.2)°、(21.6±0.2)°和(22.4±0.2)°；或者(7.2±0.2)°、(8.5±0.2)°、(10.4±0.2)°、(10.8±0.2)°、(14.4±0.2)°、(15.6±0.2)°、(18.5±0.2)°、(21.6±0.2)°和(22.4±0.2)°；或者(6.7±0.2)°、(7.2±0.2)°、(8.5±0.2)°、(10.4±0.2)°、(10.8±0.2)°、(14.4±0.2)°、(15.6±0.2)°、(18.5±0.2)°、(21.6±0.2)°和(22.4±0.2)°；或者(6.7±0.2)°、(7.2±0.2)°、(8.5±0.2)°、(10.4±0.2)°、(10.8±0.2)°、(13.5±0.2)°、(14.4±0.2)°、(15.6±0.2)°、(18.5±0.2)°、(21.6±0.2)°和(22.4±0.2)°。
在又另一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式(形式A)，该结晶形式特征在于当在20℃至30℃范围内的温度、用具有0.15418nm的波长的Cu-Kα1,2辐射测量时，具有与本披露的图1所示基本上相同的XRPD图。
在另一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式(形式A)，该结晶形式特征在于当以10K/min的加热速率用DSC测量时，具有98℃±5℃的熔点起始温度。
在另一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式(形式A)，该结晶形式特征在于当以10K/min的加热速率用DSC测量时，具有104℃±5℃的熔点峰最高温度。
结晶形式B
在另外的方面，本披露提供了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的形式B。表2显示了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的形式B的最突出的X射线粉末衍射峰。
表2.形式B的最突出的X射线粉末衍射峰
Figure BDA0003980215760000241
在一个实施例中，本披露提供了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的形式B，该形式B特征在于：当在20℃至30℃范围内的温度、用具有0.15419nm的波长的Cu-Kα1,2辐射测量时，具有包含在以下2-θ角处的反射的XRPD图：
(12.0±0.2)°、(13.7±0.2)°和(21.4±0.2)°；或者(12.0±0.2)°、(13.7±0.2)°、(18.3±0.2)°和(21.4±0.2)°；或者(12.0±0.2)°、(13.7±0.2)°、(18.3±0.2)°、(21.4±0.2)°和(23.8±0.2)°；或者(12.0±0.2)°、(13.7±0.2)°、(18.3±0.2)°、(21.4±0.2)°、(23.0±0.2)°和(23.8±0.2)°；或者(9.1±0.2)°、(12.0±0.2)°、(13.7±0.2)°、(18.3±0.2)°、(21.4±0.2)°、(23.0±0.2)°和(23.8±0.2)°；或者(9.1±0.2)°、(12.0±0.2)°、(13.7±0.2)°、(14.5±0.2)°、(18.3±0.2)°、(21.4±0.2)°、(23.0±0.2)°和(23.8±0.2)°；或者(9.1±0.2)°、(12.0±0.2)°、(13.7±0.2)°、(14.5±0.2)°、(15.7±0.2)°、(18.3±0.2)°、(21.4±0.2)°、(23.0±0.2)°和(23.8±0.2)°。
在又另一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式(形式B)，该结晶形式特征在于当在20℃至30℃范围内的温度、用具有0.15418nm的波长的Cu-Kα1,2辐射测量时，具有与本发明的图2所示基本上相同的XRPD图。
在另一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式(形式B)，该结晶形式特征在于当以10K/min的加热速率用DSC测量时，具有184℃±5℃的熔点起始温度。
在另一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式(形式B)，该结晶形式特征在于当以10K/min的加热速率用DSC测量时，具有185℃±5℃的熔点峰最高温度。
结晶形式C
在另外的实施例中，本披露提供了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的形式C。表3显示了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的形式C的最突出的X射线粉末衍射峰。
表3.形式C的最突出的X射线粉末衍射峰
Figure BDA0003980215760000251
在一个实施例中，本披露提供了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的形式C，该形式C特征在于：当在20℃至30℃范围内的温度、用具有0.15419nm的波长的Cu-Kα1,2辐射测量时，具有包含在以下2-θ角处的反射的XRPD图：
(10.3±0.2)°、(15.5±0.2)°和(20.6±0.2)°；或者(10.3±0.2)°、(11.3±0.2)°、(15.5±0.2)°和(20.6±0.2)°；或者(10.3±0.2)°、(11.3±0.2)°、(15.5±0.2)°、(20.6±0.2)°和(22.7±0.2)°；或者(10.3±0.2)°、(11.3±0.2)°、(15.5±0.2)°、(18.2±0.2)°、(20.6±0.2)°和(22.7±0.2)°；或者(10.3±0.2)°、(11.3±0.2)°、(15.5±0.2)°、(18.2±0.2)°、(20.6±0.2)°、(22.7±0.2)°和(22.0±0.2)°；或者(10.3±0.2)°、(11.3±0.2)°、(15.5±0.2)°、(16.6±0.2)°、(18.2±0.2)°、(20.6±0.2)°、(22.7±0.2)°和(22.0±0.2)°；或者(10.3±0.2)°、(11.3±0.2)°、(12.8±0.2)°、(15.5±0.2)°、(16.6±0.2)°、(18.2±0.2)°、(20.6±0.2)°、(22.7±0.2)°和(22.0±0.2)°；或者(10.3±0.2)°、(11.3±0.2)°、(12.8±0.2)°、(15.5±0.2)°、(16.6±0.2)°、(18.2±0.2)°、(20.6±0.2)°、(22.7±0.2)°、(22.0±0.2)°和(23.2±0.2)°；或者(10.3±0.2)°、(11.3±0.2)°、(12.3±0.2)°、(12.8±0.2)°、(15.5±0.2)°、(16.6±0.2)°、(18.2±0.2)°、(20.6±0.2)°、(22.7±0.2)°、(22.0±0.2)°和(23.2±0.2)°；或者(10.3±0.2)°、(11.3±0.2)°、(12.3±0.2)°、(12.8±0.2)°、(15.5±0.2)°、(16.6±0.2)°、(17.3±0.2)°、(18.2±0.2)°、(20.6±0.2)°、(22.7±0.2)°、(22.0±0.2)°和(23.2±0.2)°；或者(10.3±0.2)°、(11.3±0.2)°、(12.3±0.2)°、(12.8±0.2)°、(14.0±0.2)°、(15.5±0.2)°、(16.6±0.2)°、(17.3±0.2)°、(18.2±0.2)°、(20.6±0.2)°、(22.7±0.2)°、(22.0±0.2)°和(23.2±0.2)°；或者(7.0±0.2)°、(10.3±0.2)°、(11.3±0.2)°、(12.3±0.2)°、(12.8±0.2)°、(14.0±0.2)°、(15.5±0.2)°、(16.6±0.2)°、(17.3±0.2)°、(18.2±0.2)°、(20.6±0.2)°、(22.7±0.2)°、(22.0±0.2)°和(23.2±0.2)°。
在又另一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式(形式C)，该结晶形式特征在于当在20℃至30℃范围内的温度、用具有0.15418nm的波长的Cu-Kα1,2辐射测量时，具有与本发明的图3所示基本上相同的XRPD图。
在另一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式(形式C)，该结晶形式特征在于当以10K/min的加热速率用DSC测量时，具有178℃±5℃的熔点起始温度。
在一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式(形式C)，该结晶形式特征在于当以10K/min的加热速率用DSC测量时，具有178℃±5℃的熔点峰最高温度。
水合物A
在另外的方面，本披露提供了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的水合物A。表4显示了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式水合物A的最突出的X射线粉末衍射峰。
表4.水合物A的最突出的X射线粉末衍射峰
Figure BDA0003980215760000271
在一个实施例中，本披露提供了水合物A甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯，该水合物A特征在于具有包含在以下2-θ角处的反射的XPRD图：
(10.0±0.2)°、(10.6±0.2)°和(23.5±0.2)°；或者(10.0±0.2)°、(10.6±0.2)°、(23.5±0.2)°和(25.0±0.2)°；或者(10.0±0.2)°、(10.6±0.2)°、(14.4±0.2)°、(23.5±0.2)°和(25.0±0.2)°；或者(10.0±0.2)°、(10.6±0.2)°、(14.4±0.2)°、(22.9±0.2)°、(23.5±0.2)°和(25.0±0.2)°；或者(10.0±0.2)°、(10.6±0.2)°、(12.8±0.2)°、(14.4±0.2)°、(22.9±0.2)°、(23.5±0.2)°和(25.0±0.2)°；或者(10.0±0.2)°、(10.6±0.2)°、(12.8±0.2)°、(14.4±0.2)°、(17.5±0.2)°、(22.9±0.2)°、(23.5±0.2)°和(25.0±0.2)°；或者(10.0±0.2)°、(10.6±0.2)°、(12.8±0.2)°、(14.4±0.2)°、(17.5±0.2)°、(18.1±0.2)°、(22.9±0.2)°、(23.5±0.2)°和(25.0±0.2)°；或者(10.0±0.2)°、(10.6±0.2)°、(11.1±0.2)°、(12.8±0.2)°、(14.4±0.2)°、(17.5±0.2)°、(18.1±0.2)°、(22.9±0.2)°、(23.5±0.2)°和(25.0±0.2)°；或者(10.0±0.2)°、(10.6±0.2)°、(11.1±0.2)°、(12.8±0.2)°、(14.4±0.2)°、(17.5±0.2)°、(18.1±0.2)°、(20.0±0.2)°、(22.9±0.2)°、(23.5±0.2)°和(25.0±0.2)°；(当在20℃至30℃范围内的温度、用具有0.15419nm的波长的Cu-Kα1,2辐射测量时)。
在又另一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(水合物A)的结晶形式，该结晶形式特征在于当在20℃至30℃范围内的温度、用具有0.15418nm的波长的Cu-Kα1,2辐射测量时，具有与本发明的图4所示基本上相同的XRPD图。
在另一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(水合物A)的结晶形式，该结晶形式特征在于当以10K/min的加热速率用DSC测量时，具有峰最高温度为109±10℃的广泛的吸热事件。
水合物B
在另外的方面，本披露提供了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的水合物B。表5显示了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶水合物B的最突出的X射线粉末衍射峰。
表5.水合物B的最突出的X射线粉末衍射峰
Figure BDA0003980215760000291
在一个实施例中，本披露提供了甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的水合物B，该水合物B特征在于当在20℃至30℃范围内的温度、用具有0.15419nm的波长的Cu-Kα1,2辐射测量时，具有包含在以下2-θ角处的反射的XRPD图：
(5.5±0.2)°、(8.4±0.2)°和(13.0±0.2)°；或者(5.5±0.2)°、(8.4±0.2)°、(13.0±0.2)°和(19.6±0.2)°；或者(5.5±0.2)°、(8.4±0.2)°、(8.7±0.2)°、(13.0±0.2)°和(19.6±0.2)°；或者(5.5±0.2)°、(8.4±0.2)°、(8.7±0.2)°、(13.0±0.2)°、(16.5±0.2)°和(19.6±0.2)°；或者(5.5±0.2)°、(8.4±0.2)°、(8.7±0.2)°、(13.0±0.2)°、(16.5±0.2)°、(19.6±0.2)°和(20.6±0.2)°；或者(5.5±0.2)°、(8.4±0.2)°、(8.7±0.2)°、(11.0±0.2)°、(13.0±0.2)°、(16.5±0.2)°、(19.6±0.2)°和(20.6±0.2)°；或者(5.5±0.2)°、(8.4±0.2)°、(8.7±0.2)°、(11.0±0.2)°、(13.0±0.2)°、(16.5±0.2)°、(17.9±0.2)°、(19.6±0.2)°和(20.6±0.2)°；或者(5.5±0.2)°、(8.4±0.2)°、(8.7±0.2)°、(11.0±0.2)°、(13.0±0.2)°、(16.5±0.2)°、(17.9±0.2)°、(19.6±0.2)°、(20.6±0.2)°和(24.0±0.2)°；
在又另一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(水合物B)的结晶形式，该结晶形式特征在于当在20℃至30℃范围内的温度、用具有0.15418nm的波长的Cu-Kα1,2辐射测量时，具有与本发明的图5所示基本上相同的XRPD图。
在另一个实施例中，本披露涉及甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(水合物B)的结晶形式，该结晶形式特征在于当以10K/min的加热速率用DSC测量时，具有峰最高温度为93±10℃的广泛的吸热事件。
在另一个方面，本发明涉及包含上述实施例中的任何一个中定义的甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式的组合物，所述组合物基本上不包含甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的任何其他固体形式。例如，本披露的包含甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶水合物A的组合物包含基于该组合物的重量至多20w-％，优选地至多10w-％，更优选地至多5w-％、4w-％、3w-％、2w-％或1w-％的甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯]的任何其他固体形式。
CaV1.2-HEK293(AUX)细胞系
在一个方面，本披露涉及细胞，该细胞包含人CaV1.2α1C(alpha1C)亚基(由人CACNA1C转录变体14编码；GenBank ID：NM_001129840)、α2Δ(alpha2delta，α2Δ2)辅助亚基(由人CACNA2D2转录变体3编码；GenBank ID：NM_001174051)、和β2(beta2)辅助亚基(由人CACNB2转录变体2编码；GenBank ID：NM_201596)，其中该α1C亚基是组成型表达的，并且该α2Δ2亚基和β2亚基是强力霉素诱导型表达的。在另一个方面，本披露涉及用于在筛选具有生物活性的化合物的方法中使用的细胞。在一个方面，该细胞包含在稳定的细胞系(例如，HEK293)中，该细胞系组成型表达α1C亚基，并强力霉素诱导型表达α2Δ2亚基和β2亚基。在另一个方面，该稳定的细胞系通过DNA转染或病毒转导，例如，经由慢病毒或杆状病毒产生。在一个方面，该细胞包含在来自瞬时DNA转染的细胞系(例如，HEK293)中，该细胞系组成型表达α1C亚基，并且强力霉素诱导型表达α2Δ2亚基和β2亚基。在本披露的另一个方面，化合物是CaV1.2激活剂。在另一个方面，本披露涉及用于在鉴定用于治疗、预防、和/或诊断疾病或障碍(例如，精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、物质使用障碍、ADHD、费伦-麦克德米德综合征、孤独症谱系障碍、多发性硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、布鲁格达综合征、短QT综合征、或早期复极综合征)的药剂的方法中使用的细胞。在一些方面，该药剂是CaV1.2激活剂。
中间体和实例
以下实例旨在说明本披露，而不应解释为对其的限制。
这些实例都被分离为它们的单一对映异构体，并在以下生物学数据部分中描述的Sophion Qpatch测定中进行测试。然而，尚未确定每个对映异构体的立体化学。使用单晶体x射线晶体学分析实例6(甲基(R)-4-(2-((S)-1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯)和实例9(甲基(R)-4-(2-(二氟甲氧基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯)的活性对映异构体的立体化学，并且确定了该活性对映异构体是R-对映异构体。因此，假设下面描绘的甲基2-(氟甲基)-5-氧代-4-苯基-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯和甲基2-(氟甲基)-5-氧代-4-苯基-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯化合物的R-对映异构体是活性对映异构体。
Figure BDA0003980215760000311
甲基(R)-2-(氟甲基)-5-氧代-4-苯基-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000312
甲基(R)-2-(氟甲基)-5-氧代-4-苯基-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
给出了所有假定为具有R构型的活性对映异构体的实例编号(实例1、2、3等)。从合成中分离出的所有其他异构体都给出了带有字母的实例编号(实例1b、2b、3b等)。尽管有强有力的证据表明，R构型是希望的立体化学，但仍有可能S-对映异构体是活性对映异构体。
温度以摄氏度给出。如果没有另外提及，所有蒸发都在减压下进行，典型地在约15mm Hg与100mm Hg(＝20-133毫巴)之间进行。终产物、中间体和起始材料的结构通过标准分析方法(例如，微量分析和光谱特征(例如，MS、IR、NMR))确认。
用于合成本披露的化合物的所有起始材料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂是可商购获得的或可通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备。此外，本披露的化合物可以通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备，如以下实例所示。所使用的缩写是本领域常规的缩写或以下缩写：
1H NMR 质子核磁共振
AUX CaV1.2通道的辅助亚基
C 摄氏度
CD3OD 甲醇-d4
CDCl3 氯仿-d
CHO 中国仓鼠卵巢细胞
Ct 定量聚合酶链式反应测定中的阈值循环
d 双重峰
DAST 二乙基氨基三氟化硫
DCM 二氯甲烷
dd 双二重峰
DME 1,4-二甲氧基乙烷
DMEM 杜尔贝科改良伊格尔培养基
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DMSO-d6 二甲亚砜-d6
D-PBS 杜尔贝科磷酸盐缓冲盐水
EC50 半数最大有效浓度
EDTA 乙二胺四乙酸
EGTA 乙二醇-双(β-氨基乙基醚)-N,N,N′,N′-四乙酸
Eq 当量
EtOAc 乙酸乙酯
FAM 6-羧基荧光素
FCS 弗林蛋白酶切割位点
FRT 翻转酶识别靶位点
g 克
h 小时
H2O 水
HEPES 4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸
HOBt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HPLC 高压液相色谱法
HRMS 高分辨质谱法
Hrs 小时
Hz 赫兹
IACUC 机构动物护理和使用委员会
IPA 异丙醇
kg 千克
L 升
LCMS 液相色谱质谱法
M 摩尔
m 多重峰
m/z 质荷比
mg 毫克
MHz 兆赫兹
min 分钟
mL 毫升
ml 毫升
mL/min 毫升/分钟
mm 毫米
mM 毫摩尔
mmol 毫摩尔
mRNA 信使核糖核酸
MS 质谱法
mV 毫伏μl
N 当量浓度
n-BuLi 正丁基锂
NMR 核磁共振
NOESY 核欧沃豪斯效应谱
pCMV 巨细胞病毒启动子
P2A 衍生自猪捷申病毒-1的肽自切割序列
PdCl2(dppf) 二氯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)
PD 药效动力学
PK 药代动力学
ppm 百万分率
PyBOP 苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐
QT 心电图仪Q波和T波之间的时间间隔
rac 外消旋的
rpm 转/分钟
RNA 核糖核酸
RT 室温
Rt 保留时间
RT-PCR 逆转录-聚合酶链式反应
s 单峰
SFC 超临界液相色谱法
SFM 无血清培养基
SNP 单核苷酸多态性
t 三重峰
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
uL 微升
Um 微米
UPLC 超高效液相色谱法
UV 紫外线
VIC 2′-氯-7′苯基-1,4-二氯-6-羧基-荧光素
v/v 体积/体积百分比
小分子X射线晶体学
数据收集
在100K下，在具有单色Cu(Kα)-辐射、微焦点旋转阳极发生器和使用SMART软件的Smart 6000CCD检测器的Bruker AXS三圆衍射仪上收集强度数据(Bruker AXS(2003))。在不同的φ-位置进行了16ω扫描，以确保适当的数据冗余。使用Saint(Bruker AXS(2012))进行数据处理和全局单元精化。应用了半经验吸收校正，其基于在不同角度设置下，使用SADABS 2016/2版(Krause L(2015))测得的与对称相关的反射的强度。消光系数精确至0.00048(11)。列出了晶体数据、数据收集参数、和收敛结果。
结构解决方案和精化
通过双重空间再循环法和随后的DF合成解析结构并且基于对F2的全矩阵最小二乘法、使用SHELXTL程序套件(Sheldrick GM(2001))与SHELXL-2013/4一起精化。
参考文献：
Allen FH,Kennard O,Watson D et al(1987)Tables of Bond Lengthsdetermined by X-Ray and Neutron Diffraction.Part 1,Bond Lengths in OrganicCompounds.J.Chem.Soc.Perkin Trans II；S1-S19.
Bruker AXS(2005)SMART V5.632.Bruker AXS Inc.,Madison,WI,USA.
Bruker AXS(2012)SAINT V7.36A.Bruker AXS Inc.,Madison,WI,USA.
Krause L,Herbst-Irmer R,Sheldrick GM et al(2015)Comparison of silverand molybdenum microfocus X-ray sources for single-crystal structuredetermination.J.Appl.Cryst.；48:3-10.
Spek AL(2003)Single-crystal structure validation with the programPLATON.J.Appl.
Cryst.；36:7-13.
Sheldrick GM(2001)SHELXTL V6.12.Bruker AXS Inc..Madison,WI,USA.
LCMS方法1：
仪器：Waters Acquity UPLC，光电二极管阵列检测器；柱：Acquity UPLC BEH C181.7μm，21x30mm；2min运行时间，2％溶剂B从0到0.1min，2％→98％溶剂B:溶剂A从0.1到1.8min，98％溶剂B持续0.2min。溶剂：溶剂A＝在水中的0.1％甲酸(v/v)，溶剂B＝在乙腈中的0.1％甲酸(v/v)。进样体积2-5μL；UV检测阵列210-400，质量检测120-1250(电喷雾电离)；柱，在50℃下；流速1.0mL/min。
LCMS方法2：
仪器：Waters Acquity UPLC，光电二极管阵列检测器；柱：Acquity UPLC BEH C181.7μm 21x50mm；2min运行时间，2％溶剂B从0到0.1min，2％→98％溶剂B:溶剂A从0.1到1.8min，98％溶剂B持续0.2min。溶剂：溶剂A＝在水中的5mM氢氧化铵，溶剂B＝在乙腈中的5mM氢氧化铵。进样体积2-5μL；UV检测阵列210-400，质量检测120-1250(电喷雾电离)；柱，在50℃下；流速1.0mL/min。
LCMS方法3：
仪器：Waters Acquity UPLC，光电二极管阵列检测器；柱Acquity UPLC BEH C181.7μm 21x30mm；5.2min运行时间，2％→98％溶剂B:溶剂A从0到5.15min，98％溶剂B从5.15到5.20min。溶剂：溶剂A＝在水中的0.1％甲酸(v/v)，溶剂B＝在乙腈中的0.1％甲酸(v/v)。进样体积2-5μL；UV检测阵列210-400，质量检测120-1600；柱，在50℃下，流速1.0mL/min。
LCMS方法4：
仪器：Waters Acquity UPLC，光电二极管阵列检测器；柱Acquity UPLC BEH C181.7μm 21x30mm；5.2min运行时间，2％→98％溶剂B:溶剂A从0到5.15min，98％溶剂B从5.15到5.20min。溶剂：溶剂A＝在水中的5mM氢氧化铵，溶剂B＝在乙腈中的5mM氢氧化铵。进样体积2-5μL；UV检测阵列210-400，质量检测120-1600；柱，在50℃下，流速1.0mL/min。
LCMS方法5：
仪器：Agilent 1200LC/G1956A，二极管阵列检测器；柱：Chromolith Flash C18，1.6微米2x25mm；1.5分钟运行时间，5％→95％溶剂B:溶剂A(从0→1.2分钟)并且然后95％溶剂B(从1.21→1.5分钟)。溶剂：溶剂A＝在水中0.0375％ TFA(v/v)，溶剂B＝在乙腈中0.01875％ TFA(v/v)。进样体积2-5μL；UV检测220和254nM，质量检测100-1000(电喷雾电离)；柱，在50℃下；流速1.5mL/min。
LCMS方法6：
仪器：SHIMADZU LCMS-2020，光电二极管阵列检测器；柱：Kinetex EVO C18，5uM，1x30mm；1.55分钟运行时间，5％→95％溶剂B:溶剂A(从0→1.20分钟)并且然后95％溶剂B(从1.21分钟至1.55分钟)。溶剂：溶剂A＝在水中0.025％ NH4OH(v/v)，溶剂B＝乙腈。进样体积2-5μL；UV检测220和254nM，质量检测100-1000(电喷雾电离)；柱，在40℃下；流速1.5mL/min。
LCMS方法7：
仪器：API2000，柱：Mercury MS Synergi 2μm，20X4.0mm，C12；梯度：A-在水中的0.1％甲酸/B-乙腈：时间/％B：0.0/30，0.5/30，1.5/95，2.0/95，2.5/30，3.0/30，流速2.0mL/min；UV检测阵列190-400，质量检测100-1000(电喷雾电离)；柱温30℃。
LCMS方法8：
仪器：API3000，柱：Synergi 2.5μm MAX-RP，20X4.0mm 100A Mercury；梯度：在水中的0.1％甲酸，B：乙腈：时间/％B 0/10，0.5/20，1.5/95，2.0/95，2.5/10，3/10，流速2.0mL/min；UV检测阵列190-400(总波长色谱图)，质量检测100-1000(电喷雾电离)；柱温30℃。
LCMS方法9：
仪器：API3000，柱：Synergi 2.5μm，50x4.6mm，MAX-RP 100A；梯度：在水中的0.1％甲酸，B：乙腈：时间0.0/10，0.2/50，1.0/95，1.5/100，2.5/95，2.9/50，3.2/10，4/10，流速1.2mL/min；UV检测阵列190-400(总波长色谱图)，质量检测100-1000(电喷雾电离)；柱温30℃。
LCMS方法10：
Shimadzu，柱：Mercury MS Synergi 2.5μm，20X4.0mm，C12；梯度：A-在水中的0.1％甲酸/B-乙腈：时间/％B：0.1/5，0.5/5，1.0/95，1.5/95，2.0/5，3.0/5，流速2.0mL/min；UV检测阵列200-400，质量检测100-1000(电喷雾电离)；柱温40℃。
LCMS方法11：
Shimadzu，柱：Kinetex 5μm EVO C18 100A，(100x2.1mm)；梯度：A-在水中的0.1％甲酸/B-乙腈：时间/％B：0/5，1/30，3/95，4/95，4.1/5，6/5，流速1.4mL/min；UV检测阵列200-400，质量检测100-1000(电喷雾电离)；柱温40℃。
LCMS方法12：
Shimadzu，柱：Synergi 2.5μm MAX-RP 100A，(20X4.0mm)Mercury；梯度：A-在水中的0.1％甲酸/B-乙腈：时间/％B：0.1/5，0.5/5，1.0/95，1.5/95，2.0/5，3.0/5，流速2.0mL/min；UV检测阵列200-400，质量检测100-1000(电喷雾电离)；柱温40℃。
LCMS方法13：
Acquity，柱：UPLC BEH C18 1.7μm 2.1x50mm；梯度：A-在水中的0.1％甲酸/B-乙腈：2.2min运行时间，2％→98％溶剂B:溶剂A(从0→1.76分钟)并且然后95％溶剂B(从1.76分钟至2.0分钟)；流速1.0mL/min；UV检测阵列210-400nm；质量范围100-2050Da；HRMS_2min；柱温50℃
用于纯化的制备型HPLC方法：
方法1：HPLC柱：XBRIDGE-C18(19.0x150mm，5微米)，流动相-A：在H2O中的0.1％TFA，B：CH3CN，梯度(时间/％B)：0/20，2/20，8/50)流速：[19mL/min]。
方法2：HPLC柱：ZORBAX ECLIPSE XDB C18(21.2X150mm，5微米)，流动相-A：在H2O中的0.1％ TFA，B：CH3CN，梯度(时间/％B)：0/10，2/20，10/40，流速：[20mL/min]。
方法3：HPLC[柱：XBRIDGE C18(21.2x150mm，5微米)，流动相-A：在水中的10mMNH4HCO3，B：CH3CN，梯度(时间/％B)：0/10，2/20，8/50，流速：[18mL/min]。
方法4：HPLC柱：Gemini NX C18(21.2x150.00mm，5微米)；流动相-(A)：在水中的0.1％ TFA(B)：乙腈/甲醇；流速：15mL/min；(时间/％B0/20，2/20，8/20)
方法5：HPLC柱：KINETEX EVO 5μC18(21.2X150mm)，流动相：水(A)CH3CN(B)，梯度(时间/％B)：0/20，2/30，7/70，以及流速：[18mL/min]。
方法6：HPLC柱：KINETEX C18，(21.2x150mm)，流动相：A：水，B：CH3CN:MeOH，梯度(时间/％B)：0/20，2/30，7/70，流速：18mL/min]。
方法7：HPLC柱：KINETEX(21.2x150mm，5微米)，流动相：A＝在水中的0.05％ TFA，B＝CH3CN，梯度(时间/％B)：0/20，2/30，10/60，流速：20mL/min]。
用于分离异构体的手性制备型HPLC方法：
方法1：柱：CHIRALPAK IC(10x250mm，5微米)，流动相：己烷(A)IPA:MeOH，1:1(B)；流速：8mL/min；等度：96:04(A:B)。
方法2：柱：REGIS WELKO(250x10mm，5微米)，流动相：己烷(A):EtOH，1:1(B)；流速：9mL/min；等度：85:15(A:B)。
方法3：柱：CHIRALPAC IG(250x10mm，5微米)，流动相：IPA(A):MeOH，1:1(B)；流速：6mL/min；等度：98:2(A:B)。
方法4：柱：LUX纤维素-4(10x250mm，5微米)，流动相：己烷(A)EtOH:IPA 1:1(B)；流速：8mL/min；等度：90:10(A:B)。
方法5：柱：LUX纤维素-4(10x250mm，5微米)，流动相：己烷(A)EtOH:1:1(B)；流速：8mL/min；等度：90:10(A:B)。
方法6：柱：LUX纤维素-4(10x250mm，5微米)，流动相：己烷(A)；EtOH:MeOH 1:1(B)；流速：18mL/min；等度：90:10(A:B)。
方法7：柱：LUX纤维素-4(21.2x250mm，5微米)，流动相：己烷(A)；EtOH:MeOH 1:1(B)；流速：19mL/min；等度：80:20(A:B)。
方法8：柱：REGIS(10X250mm，5微米)，流动相：CO2(A)MeOH:EtOH 1:1(B)；流速：13mL/min，等度：80:20(A:B)。
方法9：柱：LUX纤维素-4(10x250mm，5微米)，流动相：己烷(A)在EtOH中的0.1％DEA:MeOH(50:50)(B)；流速：7mL/min；等度：93:07(A:B)。
用于分析分离的异构体的手性分析型HPLC方法：
方法1：柱：Lux，纤维素-4(250X4.6mm，5微米)；流动相：A＝正己烷，B＝在乙醇中的0.1％ TFA；1mL/min；等度：70:30(A:B)
方法2：柱：LUX纤维素-4(4.6x250mm，5微米)；流动相：己烷(A)EtOH:1:1(B)；流速：1mL/min；等度：50:50(A:B)。
方法3：柱：REGIS，(S,S)WHELK-01(250X4.6mm，5微米)；流动相：A＝正己烷，B＝乙醇；流速：1mL/min；等度：70:30(A:B)。
中间体A：乙基4-乙酰氧基-3-氧代丁酸酯的形成
Figure BDA0003980215760000401
向乙基4-氯-3-氧代丁酸酯(200g，1215.1mmol)在乙酸(1500mL)中的溶液中添加乙酸钾(357g，3645.4mmol)。将所得溶液在90℃下搅拌18小时。将溶剂溶解于水(2L)中并且萃取到乙酸乙酯(1L X 4次)中。将EtOAc相合并，并用饱和NaHCO3溶液(2L)、盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→15％)乙酸乙酯)纯化，得到呈淡棕色液体的标题化合物乙基4-乙酰氧基-3-氧代丁酸酯(152g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.78(s,2H),4.20(q,J＝14.1,7.2Hz,2H),3.49(s,2H),2.16(s,3H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体B：甲基(Z)-3-氨基-4-氟丁-2-烯酸酯的形成
方法1：
Figure BDA0003980215760000402
在氮气气氛下，将乙酸甲酯(36.5g，492.71mmol)在四氢呋喃(200mL)中的溶液冷却至-78℃，将在THF中的二异丙基酰胺锂(246.44mL，2.0M，492.71mmol)经20min的时间段缓慢添加到反应中，将所得混合物在-78℃下搅拌1h，随后逐滴添加在四氢呋喃(150mL)溶液中的2-氟乙腈(19.4g，328.9mmol)。将反应混合物在-78℃再搅拌1h，然后添加饱和氯化铵溶液(200mL)，并且将产物萃取到乙酸乙酯(5L)中。将EtOAc用饱和盐水溶液(500mL)洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈白色结晶固体的标题化合物甲基(Z)-3-氨基-4-氟丁-2-烯酸酯(16g)。
方法2：
Figure BDA0003980215760000411
步骤1：在氮气气氛下，将乙酸甲酯(83.78g，1131.0mmol)在四氢呋喃(800mL)中的溶液冷却至-78℃，然后将在THF中的二异丙基酰胺锂(565.5mL，2.0M，1131.0mmol)经20min的时间段缓慢添加到反应中。将所得混合物在-78℃下搅拌1h，然后在四氢呋喃(200mL)溶液中逐滴添加乙基2-氟乙酸酯(100g，942.5mmol)，并且将反应混合物在-78℃下再搅拌1h。将饱和氯化铵溶液(200mL)添加到反应混合物中，并且将产物萃取到乙酸乙酯(5L)中。将EtOAc用饱和盐水溶液(500mL)洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，以给出甲基4-氟-3-氧代丁酸酯的黄色晶体(60g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.97(s,1H),4.85(s,1H),3.76(d,J＝2.3Hz,3H),3.62(d,J＝3.7Hz,2H)。
步骤2：在密封管中在室温下，向甲基4-氟-3-氧代丁酸酯(来自步骤1，60g)中添加在甲醇(300mL)中的饱和氨溶液。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将溶剂在减压下除去，得到呈白色固体的标题化合物甲基(Z)-3-氨基-4-氟丁-2-烯酸酯(51g)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ4.98(t,J＝0.7,0.7Hz,1H),4.82(t,J＝0.7,0.7Hz,1H),4.53(q,,1H),3.53(d,J＝1.2Hz,3H)。
通用程序I
Figure BDA0003980215760000421
步骤1：向醛(1mmol)在EtOH(10mL)中的溶液中添加甲基(Z)-3-氨基-4-氟丁-2-烯酸酯(中间体B，1mmol或1.2mmol)和乙基4-乙酰氧基-3-氧代丁酸酯(中间体A，1mmol或1.2mmol)。将所得溶液在80℃下搅拌16小时。将溶剂在减压下除去，得到标题化合物(粗品)。
步骤2：向在甲醇(10mL)中的来自步骤1的粗中间体中添加碳酸钾(5mmol)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。将溶剂在减压下除去并且将其添加到水中。将产物萃取到乙酸乙酯(100mL)中，用盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法纯化。
通用程序II
Figure BDA0003980215760000422
向醛(1mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加甲基(Z)-3-氨基-4-氟丁-2-烯酸酯(中间体B，1mmol或1.2mmol)和乙基4-乙酰氧基-3-氧代丁酸酯(中间体A，1mmol或1.2mmol)。将所得溶液在75℃下搅拌16-48小时。将溶剂在减压下除去，并且将产物使用二氧化硅快速色谱法纯化。
实例1：甲基(R)-4-(2-((R或S)-2,2-二氟环丙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000423
步骤1：2-(2-溴-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000431
向2-溴-3-氟苯甲醛(60g，295.56mmol)和乙二醇(65.4mL，1182.2mmol)在甲苯(600mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸一水合物(28.11g，147.78mmol)。将所得溶液在120℃下使用迪安-斯达克(dean-stark)设备搅拌24小时。将反应混合物倒入水(2L)中，并且萃取到乙酸乙酯(3L)中。将EtOAc用饱和NaHCO3溶液(1L)、盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(2-溴-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(60g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42-7.37(m,1H),7.34-7.29(m,1H),7.16-7.10(m,1H),6.10(s,1H),4.19-4.09(m,4H)。
步骤2：2-(3-氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000432
向2-(2-溴-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤1，15g，60.72mmol)和乙烯基三氟硼酸钾(16.26g，121.45mmol)在异丙醇(200mL)中的溶液中添加三乙胺(25.5mL，182.16mmol)和[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II).DCM(4.95g，6.07mmol)。将所得溶液用氩气脱气10min，并且在80℃下搅拌16小时。将反应混合物过滤，并且用乙酸乙酯(100mL)洗涤。将滤液添加到水(1L)中，并且将产物萃取到乙酸乙酯(2L)中。将EtOAc相用盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(3-氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环(7.5g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.41(m,1H),7.27-7.20(m,1H),7.10-7.03(m,1H),6.82(dd,J＝17.7,11.7Hz,1H),5.82-5.78(m,1H),5.66-5.60(m,1H),5.95(s,1H),4.18-4.02(m,4H)。
步骤3：2-(2-(2,2-二氟环丙基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000441
向2-(3-氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤2，6.5g，33.47mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(50mL，334.7mmol)在四氢呋喃(120mL)中的溶液中添加碘化钠(2.5g，16.73mmol)。将所得溶液在65℃下搅拌24小时。将溶剂在减压下蒸发，并且将残余物溶解于二氯甲烷(100mL)中。将此用水(50mL)、盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，得到呈无色液体的标题化合物2-(2-(2,2-二氟环丙基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(8g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42(d,J＝7.5Hz,1H),7.34-7.28(m,1H),7.16-7.03(m,1H),6.06(s,1H),4.20-4.01(m,4H),2.77-2.66(m,1H),2.02-1.72(m,2H)。
步骤4：2-(2,2-二氟环丙基)-3-氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000442
向2-(2-(2,2-二氟环丙基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤3，8g，32.76mmol)和在二乙醚(80mL)中的溶液中添加6N HCl(10mL)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。将此用水(50mL)、饱和NaHCO3溶液(100mL)、盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→5％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(2,2-二氟环丙基)-3-氟苯甲醛(3.8g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.28(s,1H),7.70(d,J＝6.9Hz,1H),7.50-7.43(m,1H),7.36-7.26(m,1H),2.92-2.81(m,1H),2.16-2.06(m,1H),1.67-1.53(m,1H)。
步骤5：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(2,2-二氟环丙基)-3-氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000451
使用通用程序I的步骤1合成标题化合物(使用来自步骤4的醛(1.0g，4.996mmol)、中间体A(945mg，4.996mmol)和中间体B(665mg，4.996mmol))以给出3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(2,2-二氟环丙基)-3-氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(1.4g，粗品)。将粗产物不经进一步纯化和分析原样用于下一步骤。
步骤6：甲基4-(2-(2,2-二氟环丙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000452
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤5的中间体，1.4g，2.884mmol)。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(2-(2,2-二氟环丙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(125mg)。使用手性SFC将样品手性分离为两种产物：柱：Lux-纤维素-2 21x250mm 5um；流速：80g/分钟；共溶剂：20％1:1MeOH:IPA；检测：344nm；BPR设定点：125巴。
使用手性SFC将先前分离得到的峰1和2分离为4个异构体：柱：WO1 SS 21x250mm；流速：80g/分钟；共溶剂：15％ IPA；检测：344nm；BPR设定点：150巴。
实例1
20mg的呈白色固体的作为第二洗脱立体异构体的标题化合物(61％)
SFC Rt＝2.49；流动相：5％-55％(1:1)MeOH IPA w/在CO2中的10mM NH4OH，5mL/min；柱：Lux纤维素-2 4.6x100mm 5μm
LCMS Rt＝2.12min；MS m/z 398.3[M+H]+；[方法3]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(d,J＝3.3Hz,1H),7.31(td,J＝8.0,5.6Hz,1H),7.20-6.83(m,2H),5.78-5.41(m,2H),5.22(s,1H),5.03-4.73(m,2H),3.51(s,3H),2.86(td,J＝12.4,8.5Hz,1H),2.64-2.53(m,1H),2.18(dt,J＝12.2,5.5Hz,1H)。
实例1b
15mg的呈白色固体的第一洗脱立体异构体(46％)
SFC Rt＝2.42；流动相：5％-55％(1:1)MeOH IPA w/在CO2中的10mM NH4OH，5mL/min；柱：Lux纤维素-2 4.6x100mm 5μm
LCMS Rt＝2.15min；MS m/z 398.2[M+H]+；[方法3]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(d,J＝3.2Hz,1H),7.33(td,J＝8.1,5.8Hz,1H),7.25-6.92(m,2H),5.94-5.54(m,2H),5.27(s,1H),4.79(d,J＝1.4Hz,2H),3.44(s,3H),3.15-3.04(m,1H),2.35-2.19(m,1H),1.88(dtd,J＝14.0,8.2,3.2Hz,1H)。
实例1c
24mg的呈白色固体的第三洗脱立体异构体(73％)
SFC Rt＝2.73min；流动相：5％-55％(1:1)MeOH IPA w/在CO2中的10mM NH4OH，5mL/min；柱：Lux纤维素-2 4.6x100mm 5μm
LCMS Rt＝2.16min；MS m/z 398.3[M+H]+；[方法3]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(d,J＝3.3Hz,1H),7.31(td,J＝8.0,5.6Hz,1H),7.18-6.87(m,2H),5.61(dd,J＝47.8,4.0Hz,2H),5.22(s,1H),4.98-4.78(m,2H),3.51(s,3H),2.86(td,J＝12.5,8.5Hz,1H),2.64-2.55(m,1H),2.18(tt,J＝12.8,6.8Hz,1H)。
实例1d
15mg的呈白色固体的第四洗脱立体异构体(46％)
SFC Rt＝2.78min；流动相：5％-55％(1:1)MeOH IPA w/在CO2中的10mM NH4OH，5mL/min；柱：Lux纤维素-2 4.6x100mm 5μm
LCMS Rt＝2.11min；MS m/z 398.1[M+H]+；[方法3]
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(d,J＝3.3Hz,1H),7.33(td,J＝8.0,5.6Hz,1H),7.14-6.94(m,2H),5.72(dd,J＝47.8,4.8Hz,2H),5.27(s,1H),4.79(d,J＝1.4Hz,2H),3.44(s,3H),3.15(d,J＝14.7Hz,1H),2.33-2.20(m,1H),1.99-1.79(m,1H)。
实例2：甲基(R)-4-(2-环丙基-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000471
步骤1：2-环丙基-3-氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000472
向2-溴-3-氟苯甲醛(15g，73.88mmol)和环丙基硼酸(7.61g，88.66mmol)在甲苯(160mL)中的溶液中添加2N K2CO3(25.5mL，182.16mmol)和[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II).DCM(6.03g，7.38mmol)。将所得溶液用氩气脱气10min，并且在100℃下搅拌4小时。将反应混合物过滤，并且用乙酸乙酯(200mL)洗涤。将滤液添加到水(500mL)中，并将产物萃取到乙酸乙酯(2L)中，将EtOAc相用盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→1％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(3-氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环(11.2g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.70(s,1H),7.63(dd,J＝1.2,7.8Hz,1H),7.35-7.15(m,2H),2.14-2.02(m,1H),1.19-1.09(m,2H),0.85-0.75(m,2H)。
步骤2：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-环丙基-3-氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000481
使用通用程序I的步骤1合成标题化合物(使用来自步骤1的醛，4.0g，24.36mmol)以给出3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-环丙基-3-氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(7.0g，粗品)。
LCMS Rt＝1.806min；MS m/z 450.3[M+H]+；[方法7]
步骤3：甲基4-(2-环丙基-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000482
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤2的中间体，7.0g，15.57mmol)。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(2-环丙基-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(1.15g)。
使用手性制备型HPLC[方法6]，将150mg的外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例2
获得的50mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝6.129min[手性分析方法1]
LCMS Rt＝1.538min；MS m/z 360.0[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.15-7.05(m,1H),6.92(ddd,J＝7.8,1.2,0.6Hz,1H),6.82(ddd,J＝10.8,8.2,1.3Hz,1H),5.78(d,J＝0.9Hz,1H),5.71-5.59(m,2H),4.80-4.69(m,2H),3.55(s,3H),2.19-2.15(m,1H),1.34-1.20(m,1H),1.06-0.96(m,2H),0.82-0.71(m,1H)。光谱中未见可交换的NH。
实例3：甲基(R)-4-(2-((R或S)-2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
以及实例4：甲基(R)-4-(2-((R或S)-2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000491
步骤1：2-(2-溴-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000492
按照与实例1的步骤1相似的程序合成标题化合物，使用10g的2-溴-3,5-二氟苯甲醛以获得11.5g的希望的产物2-(2-溴-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.20-7.15(m,1H),6.49-6.87(m,1H),6.08(s,1H),4.17-4.04(m,4H)。
步骤2：2-(3,5-二氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000493
按照与实例1的步骤2相似的程序合成标题化合物，使用2-(2-溴-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环，产生2-(3,5-二氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环(3.45g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.20-7.16(m,1H),6.94-6.83(m,1H),6.82(dd,J＝17.7,11.7Hz,1H),5.60(dd,J＝1.2,11.7Hz,1H),5.66-5.60(m,1H),5.95(s,1H),4.18-4.02(m,4H)。
步骤3：2-(2-(2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000494
向2-(3,5-二氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤2，2.4g，11.31mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(16.1g，113.1mmol)在四氢呋喃(15mL)中的溶液中添加碘化钠(850mg，5.65mmol)。将所得溶液在65℃下搅拌24小时。将反应混合物冷却至室温，并且添加三氟甲基三甲基硅烷(16.1g，113.1mmol)和碘化钠(850mg，5.65mmol)，将所得溶液在65℃下搅拌24小时。然后将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，将有机相用盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，得到呈棕色液体的标题化合物2-(2-(2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环(1.5g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.26-7.14(m,1H),6.90-6.77(m,1H),6.04(s,1H),4.17-4.03(m,4H),2.77-2.66(m,1H),1.98-1.70(m,2H)。
步骤4：2-(2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000501
向2-(2-(2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤3，1.5g，5.72mmol)在二乙醚(15mL)中的溶液中添加6N HCl(3mL)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。将此用水(50mL)、饱和NaHCO3溶液(100mL)和盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在己烷中的(0→5％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯甲醛(1.25g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.22(s,1H),7.50-7.39(m,1H),7.20-7.05(m,1H),2.80-2.60(m,1H),2.18-1.89(m,1H),1.65-1.53(m,1H)。
步骤5：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000502
使用方法I的通用步骤1合成标题化合物(使用来自步骤4的醛(1.0g，4.58mmol)、中间体A(862mg，4.58mmol)和中间体B(608mg，4.58mmol))以给出3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(2.5g，粗品)。
LCMS Rt＝1.683min；MS m/z 504[M+H]+；[方法7]
步骤6：甲基4-(2-(2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000511
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤5的中间体，2.5g，4.97mmol)。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(2-(2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(120mg)。将外消旋通过手性SFC(流动相：20％ IPA/CO2 80g/min；柱：Whelk-O1 SS 21x250mm；仪器：Thar80_SN4740)分离为其对映异构体。
实例3
20.9mg的呈白色固体的第一洗脱立体异构体(68.8％)。
SFC Rt＝2.40min((SS)Whelk-O1 4.6x100mm，5μm，在CO2中的5％→55％ IPA)。
LCMS Rt＝2.27min；MS m/z 416.2[M+H]+；[方法4]
1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ6.93-6.73(m,2H),5.90-5.77(m,1H),5.77-5.64(m,1H),5.46(s,1H),4.83(s,2H),3.54(s,3H),3.20-3.02(m,1H),2.09(tdd,J＝11.8,7.5,5.9Hz,1H),1.95(ddt,J＝16.5,7.8,3.4Hz,1H)。
实例4
20.6mg的呈白色固体的第二洗脱立体异构体(67.8％)。
SFC Rt＝2.43min((SS)Whelk-O1 4.6x100mm，5μm，在CO2中的5％→55％ IPA)。
LCMS Rt＝2.21min；MS m/z 416.4[M+H]+；[方法4]
1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ6.93 -6.72(m,2H),5.74(d,J＝3.6Hz,1H),5.62(d,J＝4.1Hz,1H),5.42(s,1H),5.00-4.90(m,2H),3.60(s,3H),2.97-2.80(m,1H),2.68-2.49(m,1H),2.02(tdd,J＝11.9,7.8,5.9Hz,1H)。
将剩余的立体异构体作为实例3b和4b分离
实例3b
21.6mg的呈白色固体的第三洗脱立体异构体(74.1％)。
SFC Rt＝2.68min((SS)Whelk-O1 4.6x100mm，5μm，在CO2中的5％→55％ IPA)。
LCMS Rt＝2.22min；MS m/z 416.6[M+H]+；[方法4]
1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ6.78-6.63(m,2H),5.76-5.64(m,1H),5.64-5.52(m,1H),5.33(s,1H),4.70(s,2H),3.41(s,3H),3.07-2.91(m,1H),1.96(tdd,J＝11.8,7.6,5.9Hz,1H),1.90-1.77(m,1H)。
实例4b
20.6mg的呈白色固体的第四洗脱立体异构体(70.7％)。
SFC Rt＝2.79min((SS)Whelk-O1 4.6x100mm，5μm，在CO2中的5％→55％ IPA)。
LCMS Rt＝2.21min；MS m/z 416.3[M+H]+；[方法4]
1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ6.91-6.73(m,2H),5.80-5.67(m,1H),5.67-5.55(m,1H),5.41(d,J＝1.6Hz,1H),4.98-4.88(m,2H),3.59(s,3H),2.98-2.81(m,1H),2.68-2.48(m,1H),2.00(tdd,J＝11.8,7.8,5.9Hz,1H)。
实例5：甲基(R)-4-(3,5-二氟-2-((R或S)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000521
步骤1：2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000531
向2-(3,5-二氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环(在实例4从步骤2制备，5g，23.58mmol)和氯化钌.XH2O(490mg，2.35mmol)在二氯甲烷(50mL)和水(10mL)中的溶液中添加二乙酰氧基碘苯(11.4g，35.37mmol)。将所得溶液在30℃下搅拌2小时。将反应混合物过滤，并且用乙酸乙酯(200mL)洗涤。将滤液添加到水(200mL)中，并且将产物萃取到乙酸乙酯(500mL)中。将EtOAc相用盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯甲醛(3g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.41(s,1H),7.35(d,J＝9.6Hz,1H),6.95-6.85(m,1H),6.53(s,1H),4.08(s,4H)。
步骤2：1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯基)乙-1-醇
Figure BDA0003980215760000532
在0℃下，向2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯甲醛(来自步骤1，1.0g，4.67mmol)在干燥四氢呋喃(10mL)中的溶液中添加甲基溴化镁(2.33mL，3M在醚中，4.67mmol)。将所得溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在0℃下用饱和氯化铵(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(100mL)稀释。将有机相分离，用盐水洗涤并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去以得到呈无色液体的标题化合物1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯基)乙-1-醇(950mg)。将粗化合物不经进一步纯化用于下一步骤。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.17(dd,J＝2.4,6.3Hz,1H),6.89-6.72(m,1H),6.17(s,1H),5.31(dd,J＝6.9,13.5Hz,1H),4.15-4.02(m,4H),2.64-2.59(m.1H),1.58(d,J＝9.0Hz,3H)。
步骤3：2-(3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000541
在-78℃下，向1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯基)乙-1-醇(来自步骤2，950mg，4.13mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(1.0g，6.13mmol)。将所得溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在0℃下用饱和氯化铵(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(100mL)稀释。将有机相分离，用盐水洗涤并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去以得到呈浓稠的黄色液体的标题化合物2-(3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环(600mg)。将粗化合物不经进一步纯化用于下一步骤。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.20(dd,J＝2.4,6.3Hz,1H),6.87-6.75(m,1H),6.15-5.98(m,1H),6.11(s,1H),4.15-4.02(m,4H),1.70(dd,J＝6.6,22.8Hz,3H)。
步骤4：3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯甲醛
Figure BDA0003980215760000542
在室温下，向2-(3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤3，600mg，2.58mmol)在二乙醚(10mL)中的溶液中添加4N HCl(2mL)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。将此用水(50mL)、饱和NaHCO3溶液(100mL)、盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，得到呈无色液体的标题化合物3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯甲醛(200mg)。(注意：获得的醛在本质上是易挥发的)
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.44(d,J＝3.0Hz,1H),7.20(d,J＝9.3Hz,1H),7.10-6.98(m,1H),6.43-6.19(m,1H),1.78(dd,J＝7.2,23.1Hz,3H)。
步骤5：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000551
使用通用程序I的步骤1合成标题化合物(使用来自步骤4的醛(200mg，1.06mmol))以给出呈非对映异构体的混合物的3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-6-甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯。将粗产物不经纯化用于下一步骤。
LCMS Rt＝2.272min；MS m/z 472.3[M-H]-；[方法7]
步骤6：甲基4-(3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000552
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤5的中间体的混合物，800mg，1.75mmol)给出呈灰白色固体的甲基4-(3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(2g粗品)。
将非对映异构体混合物使用combi-快速色谱法(0→80％)分离为其两种异构体，以给出100mg的呈白色固体的第一非对映异构体和80mg的呈白色固体的第二非对映异构体。
将峰-1：100mg和峰-2：80mg使用制备型手性HPLC[方法7]进一步分离为其对映异构体，以获得四种异构体。
实例5
获得的21mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝4.418min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.514min；MS m/z 384.0[M-H]-；[方法7]
1H NMR:(400MHz,CD3OD)δ6.87-6.74(m,2H),6.46-6.18(m,1H),5.75(t,J＝1.0Hz,1H),5.63(dd,J＝1.6,0.7Hz,1H),5.20-5.12(m,1H),4.91-4.81(m,2H),3.53(s,3H),1.83(ddd,J＝22.7,6.6,1.4Hz,3H)。
实例5b
获得的22mg的呈白色固体的第二洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝4.792min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.513min；MS m/z 384.0[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.87-6.74(m,2H),6.46-6.18(m,1H),5.75(t,J＝1.0Hz,1H),5.63(dd,J＝1.6,0.7Hz,1H),5.20-5.12(m,1H),4.91-4.81(m,2H),3.53(s,3H),1.83(ddd,J＝22.7,6.6,1.4Hz,3H)。
实例5c
获得的18mg的呈白色固体的第三洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝6.777min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.476min；MS m/z 384.1[M-H]-；[方法7]
1H NMR:(400MHz,CDCl3)δ6.77-6.63(m,2H),6.48(dd,J＝44.3,6.6Hz,1H),5.85-5.77(m,1H),5.70(d,J＝4.5Hz,1H),5.10(s,1H),4.83-4.77(m,2H),3.56(s,3H),1.79(ddd,J＝22.5,6.7,1.1Hz,3H)。
实例5d
使用手性HPLC方法7获得的16mg的呈白色固体的第四洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝7.475min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝2.00min；MS m/z 384.2[M-H]-；[方法9]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.77-6.63(m,2H),6.48(dd,J＝44.3,6.6Hz,1H),5.85-5.77(m,1H),5.70(d,J＝4.5Hz,1H),5.10(s,1H),4.83-4.77(m,2H),3.56(s,3H),1.79(ddd,J＝22.5,6.7,1.1Hz,3H)。
实例6：甲基(R)-4-(2-((S)-1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000561
步骤1：1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯基)-2-氟乙烷-1-酮
Figure BDA0003980215760000571
在氮气气氛下，将2-(2-溴-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤1，实例1，26g，105.23mmol)在THF(250mL)中的溶液冷却至-78℃。然后添加在正己烷溶液中的正丁基锂(44.19mL，2.5M，110.49mmol)，将反应在-78℃下搅拌30min。然后将乙基2-氟乙酸酯(22.33g，210.47mmol)添加到反应中，并且将所得混合物在-78℃下再搅拌60min。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(2x250mL)萃取。将合并的有机相用水(250mL)、盐水(250mL)洗涤并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯基)-2-氟乙烷-1-酮(16.2g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45(m,1H),7.37(d,J＝7.8,1H),7.13(dd,J＝9.3,8.2Hz,1H),6.02(s,1H),5.23(d,J＝1.4Hz,1H),5.11(d,J＝1.3Hz,1H),4.08-3.87(m,4H)。
步骤2：1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯基)-2-氟乙烷-1-醇
Figure BDA0003980215760000572
在氮气气氛下在0℃下，向1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯基)-2-氟乙烷-1-酮(来自步骤1，19.6g，85.89mmol)在甲醇(100mL)中的搅拌溶液中添加硼氢化钠(3.9g，103.07mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1h。将反应混合物用冰水淬灭并且用乙酸乙酯(2x250mL)萃取。将合并的有机相用水(250mL)洗涤，随后用盐水(250mL)洗涤并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→30％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯基)-2-氟乙烷-1-醇(18g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(dd,J＝7.9,1.2Hz,1H),7.33(dd,J＝8.0,8.0Hz,1H),7.10(dd,J＝8.2,1.3Hz,1H),6.13(s,1H),5.47(m,1H),4.98-4.51(m,2H),4.22-3.97(m,4H),3.04(m,1H)。
步骤3：2-(2-(1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000581
将1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯基)-2-氟乙烷-1-醇(来自步骤2，18g，78.18mmol)在二氯甲烷(150mL)中的溶液冷却至-78℃，然后添加二乙基氨基三氟化硫(DAST)(15.49mL，117.28mmol)，并且将所得反应混合物在-78℃下搅拌1h。使反应混合物缓慢达到0℃，并且将其再搅拌1h。添加水(150mL)，并且将产物用二氯甲烷(2x200mL)萃取。将合并的有机相合并，用饱和碳酸氢钠溶液(2x200mL)、水(200mL)、盐水(200mL)洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(2-(1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(12.4g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45(d,J＝7.8Hz,1H),7.42-7.35(m,1H),7.12(dd,J＝10.6,8.2Hz,1H),6.21(m,1H),6.04(s,1H),5.22-4.85(m,1H),4.75-4.42(m,1H),4.20-3.97(m,4H)。
步骤4：2-(1,2-二氟乙基)-3-氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000582
在0℃下，向2-(2-(1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤3，12.4g，53.40mmol)在二乙醚(150mL)中的溶液中添加2N HCl(100mL)。将所得反应混合物在室温下搅拌8小时。将反应混合物用二乙醚(200mL)萃取，用水(2x100mL)、盐水(100mL)洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(1,2-二氟乙基)-3-氟苯甲醛(10g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.30(s,1H),7.88-7.70(m,1H),7.56(m,1H),7.44-7.30(m,1H),6.70-6.36(m,1H),4.95-4.70(m,2H)
步骤5：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000591
使用通用程序I的步骤1合成标题化合物(使用来自步骤4的醛，9g，47.83mmol)，得到呈灰白色固体的作为非对映异构体的混合物的标题化合物3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(25.0g，粗品)。
将粗产物不经进一步纯化和分析用于下一步骤。
步骤6：甲基4-(2-(1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000592
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤5的中间体的混合物，25g，52.8mmol)，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(2-(1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(1g粗品)。将非对映异构体混合物使用二氧化硅快速色谱法(0→80％)分离为其两种异构体，给出1.51g的呈白色固体的第一非对映异构体和820mg的呈白色固体的第二非对映异构体。
将先前分离的非对映异构体的峰-1：200mg和峰-2：200mg使用制备型手性HPLC[方法7]进一步分离为其对映异构体，以获得四种异构体。
实例6
获得的56mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝7.623min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.445min；MS m/z 384.0[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.41-7.35(m,1H),7.17(dt,J＝7.9,1.3Hz,1H),6.98(dd,J＝11.4,8.1Hz,1H),6.66-6.33(m,1H),5.75(d,J＝3.7Hz,1H),5.68-5.56(m,1H),5.18(s,1H),5.15-4.91(m,2H),4.85(s,2H),3.52(s,3H)。
通过单晶体x射线晶体学分析确定实例6(甲基2-甲基-5-氧代-4-苯基-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯)的立体化学，并且证实活性对映异构体是R-对映异构体(图7)。
实例6b
获得的54mg的呈白色固体的第二洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝8.757min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.443min；MS m/z 386.3[M+H]+；[方法7]
1H NMR:(400MHz,CD3OD)δ7.41-7.35(m,1H),7.17(dt,J＝7.9,1.3,1.3Hz,1H),7.10-6.88(m,1H),6.67-6.26(m,1H),5.82-5.70(m,1H),5.69-5.57(m,1H),5.18(s,1H),5.15-4.91(m,2H),4.85(d,J＝0.7Hz,2H),3.52(s,3H)。
实例6c
获得的67mg的呈白色固体的第三洗脱对映异构体。
手性HPLC＝Rt＝10.574min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.379min；MS m/z 384.0[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.41-7.35(m,1H),7.13(dt,J＝7.9,1.3,1.3Hz,1H),6.97(dd,J＝11.3,8.2Hz,1H),6.60(ddd,J＝47.2,18.0,8.4Hz,1H),5.75(s,1H),5.63(s,1H),5.14(s,1H),5.12-4.92(m,1H),4.84(s,2H),4.70(ddd,J＝44.6,32.7,10.8Hz,1H),3.53(s,3H)。
实例6d
获得的69mg的呈白色固体的第四洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝13.93min[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.379min；MS m/z 384.0[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.41-7.35(m,1H),7.13(dt,J＝7.8,1.3Hz,1H),6.97(dd,J＝11.3,8.2Hz,1H),6.60(ddd,J＝47.1,17.9,8.3Hz,1H),5.75(s,1H),5.63(s,1H),5.17-5.11(m,1H),5.11-4.92(m,1H),4.84(s,2H),4.70(ddd,J＝45.1,33.0,11.1Hz,1H),3.53(s,3H)。
实例7：甲基(R)-4-(2-((R或S)-1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000611
步骤1：3-乙氧基环戊-2-烯-1-酮
Figure BDA0003980215760000612
在室温下，向环戊烷-1,3-二酮(5.0g，50.96mmol)在甲苯(70mL)中的搅拌溶液中添加pTSA(193mg，1.019mmol)和EtOH(22.61ml，387.35mmol)。将所得混合物在120℃下使用迪安-斯达克设备搅拌10小时。将溶剂在减压下除去，给出粗化合物。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，以得到呈棕色固体的标题化合物3-乙氧基环戊-2-烯-1-酮(4.3g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.26(s,1H),4.02(q,J＝6.6Hz,2H),2.60-2.55(m,2H),2.44-2.40(m,2H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤2：3-氨基环戊-2-烯-1-酮
Figure BDA0003980215760000613
在室温下，向3-乙氧基环戊-2-烯-1-酮(来自步骤1，4.3g，34.08mmol)在乙醇(50mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化铵溶液(25mL，387.35mmol)。将所得混合物在85℃下搅拌16小时。将溶剂在减压下除去，得到呈棕色固体的标题化合物3-氨基环戊-2-烯-1-酮(3.2g)。
LCMS Rt＝0.114min；MS m/z 98.2[M+H]+；[方法1]
步骤3：甲基4-(2-(1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000621
向醛(来自实例6，步骤4，3.0g，15.944mmol)的溶液中添加在叔丁醇(25mL)中的甲基(Z)-3-氨基-4-氟丁-2-烯酸酯(中间体B，2.54g，19.133mmol)和环戊烷-1,3-二酮(1.56g，15.944mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌48小时。将溶剂在减压下除去，得到粗化合物。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→70％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体并作为非对映异构体的混合物的标题化合物甲基4-(2-(1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯(500mg，粗品)。将非对映异构体混合物使用二氧化硅快速色谱法(0→80％)分离为其两种异构体，给出12mg的呈白色固体的第一非对映异构体和15mg的呈白色固体的第二非对映异构体。
将第一次分离的非对映异构体的峰-1：12mg和峰-2：15mg使用制备型手性HPLC[方法7]进一步分离为其对映异构体，以获得四种异构体。
实例7
获得的2mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝9.084min；[手性分析方法4]
LCMS Rt＝1.477min；MS m/z 384.05[M+H]+；[方法2]
1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.36-7.24(m,1H),7.06(d,J＝7.8Hz,1H),6.92(dd,J＝11.4,8.2Hz,1H),6.87-6.60(m,1H),5.72(s,1H),5.60(s,1H),5.05(s,1H),4.69(ddd,J＝44.8,32.9,10.8Hz,2H),3.54(s,3H),2.70(t,J＝5.0Hz,2H),2.43-2.29(m,2H)。
实例7b
获得的4mg的呈白色固体的第二洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝10.439min；[手性分析方法4]
LCMS Rt＝1.477min；MS m/z 384.2[M+H]+；[方法2]
1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.37-7.23(m,1H),7.10-7.02(m,1H),6.92(dd,J＝11.4,8.1Hz,1H),6.86-6.60(m,1H),5.72(s,1H),5.60(s,1H),5.05(s,1H),4.69(ddd,J＝44.9,33.5,11.1Hz,2H),3.54(s,3H),2.76-2.66(m,2H),2.42-2.27(m,2H)。
实例7c
获得的4mg的呈白色固体的第三洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝12.453min；[手性分析方法4]
LCMS Rt＝1.327min；MS m/z 384.2[M+H]+；[方法2]
1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.32(tdd,J＝8.1,5.6,1.5Hz,1H),7.08(dt,J＝7.8,1.3Hz,1H),6.93(dd,J＝11.5,8.1Hz,1H),6.60-6.38(m,1H),5.81-5.69(m,1H),5.69-5.54(m,1H),5.13-5.07(m,2H),5.07-4.93(m,1H),3.53(s,3H),2.75-2.67(m,2H),2.45-2.22(m,2H)。
实例7d
获得的4mg的呈白色固体的第四洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝13.173min；[手性分析方法4]
LCMS Rt＝1.33min；MS m/z 384.2[M+H]+；[方法2]
1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.40-7.25(m,1H),7.14-7.05(m,1H),6.93(dd,J＝11.4,8.2Hz,1H),6.60-6.38(m,1H),5.80-5.66(m,1H),5.66-5.53(m,1H),5.13-5.07(m,2H),5.07-4.94(m,1H),3.53(s,3H),2.71(t,J＝4.8Hz,2H),2.44-2.21(m,2H)。
实例8：甲基(R)-4-(3-氟-2-((R或S)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000631
步骤1：1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯基)乙-1-醇
Figure BDA0003980215760000641
在氮气气氛下，将2-(2-溴-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤1，实例1，30g，121.42mmol)在THF(300mL)中的溶液冷却至-78℃。然后经10min添加在正己烷溶液中的正丁基锂(58.3mL，2.5M，147.71mmol)，并且将所得混合物在-78℃下搅拌1小时。添加乙醛(6.42g，145.71mmol)，并且将所得混合物在-78℃下搅拌1小时。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机相用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯基)乙-1-醇(15g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.30-7.18(m,1H),7.10-7.01(m,1H),6.15(s,1H),5.30-5.25(m,1H),4.15-3.95(m,4H),2.75-2.69(m.1H),1.58(dd,J＝6.6,22.8Hz,3H)。
步骤2：2-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000642
在-78℃下，向1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯基)乙-1-醇(来自步骤1，15g，70.68mmol)在二氯甲烷(150mL)中的溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(19.3mL，141.37mmol)。将所得溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在0℃下用饱和氯化铵(20mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(100mL)稀释。将有机相分离，用盐水洗涤并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环(8.5g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.38(d,J＝7.5Hz,1H),7.30-7.18(m,1H),7.13-7.01(m,1H),6.20-5.95(m,1H),6.10(s,1H),4.16-4.02(m,4H),1.74(dd,J＝7.2,23.1Hz,3H)。
步骤3：3-氟-2-(1-氟乙基)苯甲醛
Figure BDA0003980215760000651
在室温下，向2-(3-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤2，8.5g，69.38mmol)和在二乙醚(150mL)中的溶液中添加4N HCl(85mL)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。将此用水(100mL)、饱和NaHCO3溶液(200mL)、盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，得到呈无色液体的标题化合物3-二氟-2-(1-氟乙基)苯甲醛(6.5g)。(注意：获得的醛在本质上是易挥发的)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.44(d,J＝1.0Hz,1H),7.74(d,J＝7.7Hz,1H),7.45-7.42(m,1H),7.35-7.30(m,1H),6.45-6.38(m,1H),1.92-1.72(m,3H)。
步骤4：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000652
使用通用程序I的步骤1合成标题化合物(使用来自步骤3的醛，10g，58.76mmol)以给出呈非对映异构体的混合物的3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(13g，粗品)。
LCMS Rt＝1.795min；MS m/z 454.2[M-H]-；[方法9]
步骤5：甲基4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000661
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤4的中间体的混合物(13.0g，28.54mmol))，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(5g，粗品)。将非对映异构体混合物通过二氧化硅快速色谱法(在己烷中的(0→80％)乙酸乙酯)分离以给出1.04g的第一非对映异构体和1.45g的第二非对映异构体。
将非对映异构体使用手性SFC进一步分离：柱2.1x25.0cm Chiralcel OX-H；CO2共溶剂(溶剂B)，甲醇等度方法25％共溶剂，80g/min，系统压力100巴
实例8
37mg的作为第一洗脱立体异构体的标题化合物
LCMS Rt＝1.95min；MS m/z 366.3[M-H]-；[方法4]
SFC Rt＝1.12min；流动相：在CO2中的20％ MeOH(0.1％异丙胺)，4mL/min；柱：Chiralcel OX-H 4.6x100mm
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(d,J＝3.3Hz,1H),7.34(qd,J＝7.0,2.9Hz,1H),7.21-6.91(m,2H),6.35(dq,J＝45.6,6.6Hz,1H),5.87-5.45(m,2H),5.03(s,1H),4.86(d,J＝2.8Hz,2H),3.44(s,3H),1.80(dd,J＝22.9,6.6Hz,3H)。
实例8b
38mg作为第二洗脱立体异构体
LCMS Rt＝1.95min；MS m/z 366.3[M-H]-；[方法4]
SFC Rt＝1.52min；流动相：在CO2中的20％ MeOH(0.1％异丙胺)，4mL/min；柱：Chiralcel OX-H 4.6x100mm
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(d,J＝3.3Hz,1H),7.56-7.23(m,1H),7.25-6.94(m,2H),6.35(dd,J＝45.5,6.9Hz,1H),5.66(dd,J＝47.9,2.7Hz,2H),5.03(s,1H),4.86(d,J＝2.6Hz,2H),3.44(s,3H),1.80(dd,J＝22.8,6.5Hz,3H)。
实例8c
42mg作为第三洗脱立体异构体
LCMS Rt＝1.88min；MS m/z 366.3[M-H]-；[方法4]
SFC Rt＝2.08min；流动相：在CO2中的20％ MeOH(0.1％异丙胺)，4mL/min；柱：Chiralcel OX-H 4.6x100mm
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(d,J＝3.3Hz,1H),7.33(td,J＝8.0,5.4Hz,1H),7.23-6.92(m,2H),6.49(dd,J＝44.7,6.8Hz,1H),5.68(d,J＝47.8Hz,2H),4.97(s,1H),4.83(s,2H),3.44(s,3H),1.70(dd,J＝22.7,6.6Hz,3H)。
实例8d
40mg：作为第四洗脱立体异构体
LCMS Rt＝1.88min；MS m/z 366.3[M-H]-；[方法4]
SFC Rt＝3.01min；流动相：在CO2中的20％ MeOH(0.1％异丙胺)，4mL/min；柱：Chiralcel OX-H 4.6x100mm
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(d,J＝3.4Hz,1H),7.33(td,J＝8.0,5.4Hz,1H),7.20-6.93(m,2H),6.69-6.31(m,1H),5.68(d,J＝47.8Hz,2H),4.97(s,1H),4.83(s,2H),3.44(s,3H),1.70(dd,J＝22.8,6.5Hz,3H)。
通过单晶体x射线晶体学分析确定实例8(甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯)的立体化学，并且证实活性对映异构体是R-对映异构体(图8)。
实例9：甲基(R)-4-(2-(二氟甲氧基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000671
步骤1：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(二氟甲氧基)苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000681
使用通用程序I的步骤1合成标题化合物(使用2-(二氟甲氧基)苯甲醛(350mg，2.033mmol)、中间体A(382.3mg，2.033mmol)和中间体B(275.65mg，2.033mmol))以给出3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(二氟甲氧基)苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(600mg，粗品)。不经分析，将其用于下一步骤。
步骤2：甲基4-(2-(二氟甲氧基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000682
向在甲醇(20mL)中的来自步骤1的粗中间体(600mg，1.30mmol)中添加氢氧化钾(293.44mg，5.22mmol)。将所得溶液在65℃下搅拌30min。将水添加到反应混合物中，并且将固体沉淀出来并过滤。将固体用二乙醚洗涤，并且将固体收集并在减压下干燥，得到标题化合物甲基4-(2-(二氟甲氧基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(100mg)。
使用手性HPLC[方法4]，将90mg的外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例9
40mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体，44％产率。
手性HPLC Rt＝6.481min；[手性分析方法1]
LCMS Rt＝1.473min；MS m/z 370[M+H]+；[方法7]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30(dd,J＝7.5,1.9Hz,1H),7.24-7.12(m,2H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),6.81-6.43(m,1H),5.82-5.69(m,1H),5.68-5.56(m,1H),5.19(s,1H),4.77(d,J＝1.6Hz,2H),3.55(d,J＝0.7Hz,3H)。未见可交换的NH质子。
通过单晶体x射线晶体学分析确定实例9(甲基(R)-4-(2-(二氟甲氧基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯)的立体化学，并且证实活性对映异构体是R-对映异构体(图9)。
实例9b
38mg的呈白色固体的第二洗脱对映异构体，42％产率。
手性HPLC Rt＝10.303min；[手性分析方法1]
LCMS Rt＝1.475min；MS m/z 370.1[M+H]+；[方法7]
1H NMR:(400MHz,CDCl3)δ7.30(dd,J＝7.5,1.9Hz,1H),7.24-7.12(m,2H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),6.81-6.43(m,1H),5.82-5.69(m,1H),5.68-5.56(m,1H),5.19(s,1H),4.77(d,J＝1.6Hz,2H),3.55(d,J＝0.7Hz,3H)。
实例10：甲基(R)-4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000691
步骤1：1-溴-3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯
Figure BDA0003980215760000692
将3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯胺(10g，50.735mmol)在48％ HBr/H2O水溶液(80mL/80mL)中的溶液冷却至-5℃，然后经5min的时间段缓慢添加NaNO2(8.74g在100mL H2O中，126.83mmol)，然后将所得混合物在-5℃下搅拌1h。在-5℃下，将反应混合物用CuBr(10.92g，76.103mmol)分批处理。将反应混合物缓慢升高至室温并且搅拌4小时。将反应混合物用己烷(3X200mL)萃取。将有机相合并，用饱和盐水溶液(100mL)洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中)纯化，得到呈无色液体的标题化合物1-溴-3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯(8g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31(dt,J＝7.6,2.2Hz,1H),6.95-6.88(m,1H)。
步骤2：1,5-二氟-2-(三氟甲基)-3-乙烯基苯
Figure BDA0003980215760000701
向1-溴-3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯(来自步骤1，12.0g，45.99mmol)和三氟(乙烯基)-l4-硼烷在异丙醇(120mL)中的溶液中添加钾盐(12.3g，91.98mmol)和三乙胺(19.16mL，137.98mmol)。将所得溶液通过氩气吹扫10min，之后添加[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II).DCM(3.75g，4.599mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌6小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且用乙酸乙酯(100mL)洗涤并经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中)纯化，得到呈无色液体的标题化合物1,5-二氟-2-(三氟甲基)-3-乙烯基苯(6.5g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.16-6.97(m,2H),6.85-6.80(m,1H),5.67(d,J＝17.2Hz,1H),5.49(d,J＝10.9Hz,1H)。
步骤3：3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯甲醛
Figure BDA0003980215760000702
将1,5-二氟-2-(三氟甲基)-3-乙烯基苯(来自步骤2，6.5g，31.23mmol)和RuCl3.XH2O(647mg，3.123mmol)添加到二乙酰氧基碘苯(20g，62.46mmol)在二氯甲烷:H2O(130mL:30mL)中的溶液中。将所得溶液在室温下搅拌2h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且用二氯甲烷(200mL)洗涤并经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→5％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯甲醛(3.0g)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.34(m,1H),7.82-7.52(m,1H),7.22-7.07(m,1H)。
步骤4：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000711
使用通用程序I的步骤1合成标题化合物(使用来自步骤3的醛(400mg，1.903mmol))以给出3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(900mg，粗品)。
LCMS Rt＝1.76min；MS m/z 496.0[M+H]+；[方法7]
步骤5：甲基4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000712
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤4的中间体(900mg，1.8mmol))。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(90mg)。使用手性HPLC[方法7]，将外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例10
获得的30mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝5.502min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.542min；MS m/z 406[M-H]-；[方法7]
1H NMR:(400MHz,CDCl3)δ7.30(d,J＝7.2Hz,1H),6.87(d,J＝9.5Hz,1H),6.856.75(m,1H),5.79(t,J＝1.2,1.2Hz,1H),5.67(t,J＝1.1Hz,1H),5.62(s,1H),4.80(d,J＝1.2Hz,2H),3.54(s,3H)。
实例10b
获得的30mg的呈白色固体的第二洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝6.935min；[手性分析方法1]
LCMS Rt＝1.542min；MS m/z 406[M-H]-；[方法7]
1H NMR:(400MHz,CDCl3)δ7.30(d,J＝7.2Hz,1H),6.87(d,J＝9.5Hz,1H),6.856.75(m,1H),5.79(t,J＝1.2,1.2Hz,1H),5.67(t,J＝1.1Hz,1H),5.62(s,1H),4.80(d,J＝1.2Hz,2H),3.54(s,3H)。
实例11：甲基(R)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000721
步骤1：2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000722
在氮气气氛下，将2-(2-溴-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤1，实例1，7g，28.45mmol)在THF(70mL)中的溶液冷却至-78℃。然后经10min添加在正己烷溶液中的正丁基锂(13.66mL，2.5M，58.5mmol)，并且将所得混合物在-78℃下搅拌45min。添加DMF(2.5g，34.15mmol)，并且将所得混合物在-78℃下搅拌1.15h。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机相用水(50mL)洗涤，随后用盐水(50mL)洗涤并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯甲醛(5g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.52(s,1H),7.67-7.53(m,2H),7.22-7.12(m,1H),6.50(s,1H),4.27-3.99(m,4H)。
步骤2：2-(2-(2,2-二氟乙烯基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000731
将乙腈(65mL)、三苯基膦(28.1g，107.1mmol)、碘化钾(11.85g，71.4mmol)和2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯甲醛(来自步骤1，7g，35.7mmol)的溶液在氮气气氛下加热至70℃，并且搅拌30min。经10min的时间段缓慢添加甲基2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸酯(12g，62.4mmol)(添加期间物料(mass)颜色变为黄色)。将所得混合物在70℃下再搅拌3小时，然后冷却至室温，并且用二乙醚稀释。将沉淀的固体过滤并且用二乙醚(100mL)洗涤。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→5％)乙酸乙酯)纯化，得到呈淡黄色液体的标题化合物2-(2-(2,2-二氟乙烯基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(6.9g)。
1H NMR:(300MHz,CDCl3)δ7.39(dd,J＝7.8,1.4Hz,1H),7.31(m,1H),7.11(m,1H),5.87(s,1H),5.39(m,1H),4.21-3.95(m,4H)。
步骤3：2-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000732
向2-(2-(2,2-二氟乙烯基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤2，3g，13.04mmol)在乙酸乙酯(60mL)中的溶液中添加10％ Pd-C(1g)。在室温下在氢气气氛下，在60psi的压力下将所得反应混合物保存在帕尔振摇器(Parr-Shaker)中持续48小时。将反应混合物在硅藻土垫上过滤，并且用乙酸乙酯(30mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→30％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(3g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.42-7.35(m,1H),7.34-7.27(m,1H),7.15-7.08(m,1H),6.31-5.78(m,2H),4.19-4.02(m,4H),3.38(m,2H)。
步骤4：2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000741
向2-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤3，3g，12.93mmol)在二乙醚(40mL)中的溶液中添加6N HCl(5mL)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。将此用水(50mL)、饱和NaHCO3溶液(100mL)、盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→5％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯甲醛(1.9g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.14(d,J＝1.6Hz,1H),7.70-7.63(m,1H),7.52(td,J＝8.0,7.9,5.2Hz,1H),7.35-7.30(m 1H),6.03(m,1H),3.83-3.58(m,2H)。
步骤5：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000742
使用通用程序I的步骤1合成标题化合物(使用来自步骤4的醛，400mg，2.12mmol)以给出标题化合物3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(1g，粗品)。
LCMS Rt＝1.764min；MS m/z 473.4[M+H]+；[方法7]
步骤6：甲基4-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000743
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤5的中间体，1g，2.11mmol)。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(85mg)。使用手性制备型HPLC[方法6]，将外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例11
获得的30mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝6.325min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.508min；MS m/z 386.0[M+H]+；[方法7]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34-7.27(m,1H),7.21(m,1H),7.01-6.89(m,2H),6.55-6.17(m,1H),5.81(dd,J＝1.7,0.8Hz,1H),5.69(t,J＝1.1Hz,1H),5.08(s,1H),4.78(d,J＝0.9Hz,2H),3.94-3.73(m,1H),3.60-3.55(m,1H),3.54(s,3H)。
实例11b
获得的30mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝8.402min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.508min；MS m/z 386.4[M+H]+；[方法7]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34-7.27(m,1H),7.21(td,J＝8.0,8.0,5.6Hz,1H),7.01-6.89(m,2H),6.55-6.17(m,1H),5.81(dd,J＝1.7,0.8Hz,1H),5.69(t,J＝1.1,1.1Hz,1H),5.08(s,1H),4.78(d,J＝0.9Hz,2H),3.94-3.73(m,1H),3.60-3.55(m,1H),3.54(s,3H)。
实例12：甲基(R)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000751
步骤2：2-(3,5-二氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000761
将2-(2-溴-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤1，实例3，5g，18.94mmol)和乙烯基三氟硼酸钾(5.8g，37.89mmol)、三乙胺(7.91mL，56.82mmol)在异丙醇(50mL)中的溶液使用氩气脱气10min，并且添加[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II).DCM(1.55g，1.89mmol)。将所得溶液再次用氩气脱气10min，并且在80℃下搅拌5小时。将反应混合物过滤，并且用乙酸乙酯(100mL)洗涤。将滤液溶解于水(1L)中并且萃取到乙酸乙酯(2L)中。将EtOAc用盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(3,5-二氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环(3.45g)。注意：化合物在本质上是易挥发的，化合物中存在己烷。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.20-7.16(m,1H),6.94-6.83(m,1H),6.82(dd,J＝17.7,11.7Hz,1H),5.60(dd,J＝1.2,11.7Hz,1H),5.66-5.60(m,1H),5.95(s,1H),4.18-4.02(m,4H)。
步骤3：2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000762
向2-(3,5-二氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤2，5g，23.58mmol)和氯化钌.XH2O(490mg，2.35mmol)在二氯甲烷(50mL)和水(10mL)中的溶液中添加(二乙酰氧基碘)苯(11.4g，35.37mmol)。将所得溶液在30℃下搅拌2小时。将反应混合物过滤，并且用乙酸乙酯(200mL)洗涤。将滤液溶解于水(200mL)中并且将产物萃取到乙酸乙酯(500mL)中。将有机物用盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯甲醛(3g)。注意：化合物在本质上是易挥发的，化合物中存在己烷。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.41(s,1H),7.35(d,J＝9.6Hz,1H),6.95-6.85(m,1H),6.53(s,1H),4.08(s,4H)。
步骤4：2-(2-(2,2-二氟乙烯基)-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000771
在氮气气氛下，向乙腈(4.5mL)中添加三苯基膦(1.83g，7.0mmol)、碘化钾(775mg，4.66mmol)和2-1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯甲醛(来自步骤3，500mg，2.33mmol)。将反应在70℃下搅拌30min。然后经10min的时间段缓慢添加2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯甲醛(783mg，4.07mmol)(添加期间物料颜色变为黄色)，并且将所得混合物在70℃下再搅拌3小时。然后将反应混合物冷却至室温并且用二乙醚稀释，将沉淀的固体过滤，并且用二乙醚(100mL)洗涤。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→5％)乙酸乙酯)纯化，得到呈淡黄色液体的标题化合物2-(2-(2,2-二氟乙烯基)-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环(400mg)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.19-7.12(m,1H),6.89-6.80(m,1H),5.85(d,J＝0.9Hz,1H),5.31(dt,J＝26.1,1.5Hz,1H),4.16-3.98(m,4H)。
步骤5：2-(2-(2,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000772
向2-(2-(2,2-二氟乙烯基)-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤4，400mg，1.61mmol)在乙酸乙酯(10mL)中的溶液中添加10％ Pd-C(180mg)。在氢气气氛下在室温下，在60psi的压力下将所得反应混合物保存在帕尔振摇器中持续48小时。将反应混合物通过硅藻土垫上过滤并且用乙酸乙酯(30mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→30％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(2-(2,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环(400mg)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.22-7.12(m,1H),6.81-6.75(m,1H),6.26-5.75(m,2H),4.20-3.99(m,4H),3.36-3.33(m,2H)。
步骤6：2-(2,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000781
向2-(2-(2,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤5，400mg，1.6mmol)在二乙醚(10mL)中的溶液中添加5N HCl(1mL)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。将此用水(50mL)、饱和NaHCO3溶液(100mL)和盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→5％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(2,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯甲醛(250mg)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.11(d,J＝1.3Hz,1H),7.51-7.34(m,1H),7.20-7.07(m,1H),6.31-5.73(m,1H),3.79-3.56(m,2H)。
步骤7：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000782
使用通用程序I的步骤1合成标题化合物(使用来自步骤6的醛(250mg，1.21mmol))以给出标题化合物3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(800mg，粗品)。
LCMS Rt＝1.77min；MS m/z 491.0[M+]+；[方法7]
步骤8：甲基4-(2-(2,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000791
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤7的中间体，800mg，1.62mmol)。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(2-(2,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(44mg)。使用手性制备型HPLC[方法6]，将外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例12
获得的11mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝5.674min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.561min；MS m/z 403.9[M+]+；[方法7]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.87-6.76(m,2H),6.64-6.26(m,1H),5.76(s,1H),5.64(s,1H),5.13(d,J＝1.4Hz,1H),4.87-4.83(m,2H),3.50-3.36(m,1H),3.70(s,2H),3.53(s,3H)。
实例12b
获得的10mg的呈白色固体的第二洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝7.215min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.557min；MS m/z 403.9[M+]+；[方法7]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.87-6.76(m,2H),6.64-6.26(m,1H),5.76(s,1H),5.64(s,1H),5.13(d,J＝1.4Hz,1H),4.87-4.83(m,2H),3.50-3.36(m,1H),3.70(s,2H),3.53(s,3H)。
实例13：甲基(R)-4-(2-环丙基-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000792
步骤1：2-环丙基-3,5-二氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000801
向2-溴-3,5-二氟苯甲醛(10g，45.20mmol)和环丙基硼酸(4.67g，54.2mmol)在甲苯(100mL)中的溶液中添加2N K2CO3(102mL，204mmol)和[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II).DCM(3.17g，3.88mmol)。将所得溶液用氩气脱气10min，并且在100℃下搅拌4小时。将反应混合物过滤，并且用乙酸乙酯(200mL)洗涤。将滤液添加到水(500mL)中，并且将产物萃取到乙酸乙酯(2L)中。将EtOAc相用盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→1％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-环丙基-3,5-二氟苯甲醛(8g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.71(d,J＝3Hz,1H),7.40-730(m,1H),7.05-6.90(m,1H),2.05-1.95(m,1H),1.19-1.09(m,2H),0.85-0.75(m,2H)。
步骤2：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-环丙基-3,5-二氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000802
使用通用程序I的通用步骤1合成标题化合物(使用来自步骤1的醛(1.8g，9.88mmol))以给出3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-环丙基-3,5-二氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(4.61g，粗品)。
LCMS Rt＝1.586min；MS m/z 477.0[M+H]+；[方法10]
步骤3：甲基4-(2-环丙基-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000811
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤2的中间体，4.61g，9.871mmol)。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(2-环丙基-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(350mg)。
使用手性制备型HPLC[方法9]，将外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例13
获得的135mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝5.33min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.591min；MS m/z 380.2[M+H]+；[方法7]
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ6.78-6.70(m,1H),6.66(m,1H),5.75(s,1H),5.61(d,J＝14.1Hz,2H),4.84(q,J＝1.7,1.7,0.9Hz,2H),3.53(s,3H),2.08(m,1H),1.18(m,1H),1.07-0.87(m,2H),0.75(m,1H)。
实例14：甲基(R)-4-(2-环丙基-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000812
步骤2：甲基4-(2-环丙基-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000813
向醛(来自步骤1，实例13，300mg，1.64mmol)的溶液中添加在乙醇(5mL)中的甲基(Z)-3-氨基-4-氟丁-2-烯酸酯(中间体B，220mg，1.64mmol)和环戊烷-1,3-二酮(161mg，1.64mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌16小时。将溶剂在减压下除去，给出粗化合物。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→70％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(2-环丙基-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯(55mg)。使用手性制备型HPLC[方法3]，将外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例14
获得的17mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝8.588min；[手性分析方法3]
LCMS Rt＝1.548min；MS m/z 378.0[M+H]+；[方法7]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.21(d,J＝7.2Hz,1H),6.65-6.48(m,2H),5.78(d,J＝0.9Hz,1H),5.65(d,J＝0.8Hz,1H),5.60-5.52(m,1H),3.56(s,3H),2.75-2.56(m,2H),2.52-2.32(m,2H),2.20-2.13(m,1H),1.34-1.13(m,1H),1.05-0.98(m,2H),0.83-0.69(m,1H)。
实例14b
获得的17mg的呈白色固体的第二洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝11.651min；[手性分析方法3]
LCMS Rt＝1.548min；MS m/z 378.0[M+H]+；[方法7]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.21(d,J＝7.2Hz,1H),6.65-6.48(m,2H),5.78(d,J＝0.9Hz,1H),5.65(d,J＝0.8Hz,1H),5.60-5.52(m,1H),3.56(s,3H),2.75-2.56(m,2H),2.52-2.32(m,2H),2.20-2.13(m,1H),1.34-1.13(m,1H),1.05-0.98(m,2H),0.83-0.69(m,1H)。
实例15：甲基(R)-4-(2-(二氟甲基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000821
步骤1：2-(二氟甲基)-1-氟-3-乙烯基苯
Figure BDA0003980215760000831
向1-溴-2-(二氟甲基)-3-氟苯(2.0g，8.889mmol)的溶液中添加在异丙醇(20mL)中的乙烯基三氟硼酸钾(2.38g，17.78mmol)和三乙胺(3.7mL，26.66mmol)。将所得溶液通过氩气吹扫10min，并且添加[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II).DCM(725mg，0.889mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌6小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且用乙酸乙酯(100mL)洗涤并经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(二氟甲基)-1-氟-3-乙烯基苯(1.2g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.48-7.40(m,1H),7.30-7.15(m,1H),7.04(t,J＝53.4Hz,1H),7.04-6.90(m,2H),5.44(d,J＝11.2Hz,1H),5.70(d,J＝11.2Hz,1H)。
步骤2：2-(二氟甲基)-3-氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000832
向2-(二氟甲基)-1-氟-3-乙烯基苯(来自步骤1，1.2g，6.970mmol)的溶液中添加在二氯甲烷:H2O(20mL:6mL)中的RuCl3.XH2O(145mg，0.697mmol)和二乙酰氧基碘苯(6.73g，20.91mmol)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且用二氯甲烷(200mL)洗涤并经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→5％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(二氟甲基)-3-氟苯甲醛(500mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.42(t,J＝2.0Hz,1H),8.44(d,J＝8.0Hz,1H),7.70-7.59(m,1H),7.45-7.35(m,1H),7.30(t,J＝53.2Hz,1H)。
步骤3：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(二氟甲基)-3-氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000841
使用通用程序I的步骤1合成标题化合物(使用来自步骤2的醛，500mg，2.871mmol)以给出3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(二氟甲基)-3-氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(1.5g，粗品)。
LCMS Rt＝1.716min；MS m/z 460.1[M+H]+；[方法7]
步骤4：甲基4-(2-(二氟甲基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000842
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤3的中间体，1.0g，2.177mmol)。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(2-(二氟甲基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(280mg)。使用手性制备型HPLC[方法5]，将外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例15
获得的90mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝10.05min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝1.947min；MS m/z 372.2[M+H]+；[方法9]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44-7.28(m,2H),7.09-6.96(m,2H),5.80(d,J＝0.8Hz,1H),5.68(d,J＝0.9Hz,1H),5.20(s,1H),4.80(d,J＝1.1Hz,2H),3.54(s,3H)。光谱中未见可交换的NH质子。
实例15b
获得的90mg的呈白色固体的第二洗脱对映异构体。
手性HPLC Rt＝12.05min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝2.09min；MS m/z 372.2[M+H]+；[方法9]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43-7.33(m,2H),7.10-6.93(m,2H),5.80(d,J＝0.8Hz,1H),5.68(d,J＝0.9Hz,1H),5.20(s,1H),4.80(d,J＝0.9Hz,2H),3.54(s,3H)。
实例16：甲基(R)-4-(2-((R或S)-1,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000851
步骤1：2-(2-溴-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000852
按照与实例1的步骤1相似的程序合成标题化合物，使用15g的2-溴-3,5-二氟苯甲醛以获得15g的希望的产物2-(2-溴-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.23-7.18(m,1H),6.95-6.90(m,1H),6.08(t,J＝1.1Hz,1H),4.24-3.99(m,4H)。
步骤2：(3-溴-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2,6-二氟苯基)三甲基硅烷
Figure BDA0003980215760000853
在-78℃下，在惰性气氛下，向2-(2-溴-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤1，15.0g，56.59mmol)在新鲜蒸馏的THF(150mL)中的溶液中添加二异丙基酰胺锂(31.1mL，2.0M在己烷中，62.25mmol)，并且搅拌30min。将三甲基甲硅烷基氯化物(7.37g，67.91mmol)添加到反应混合物中，并且在-78℃搅拌1h。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(250mL)淬灭，并且将产物萃取到乙酸乙酯(2X500mL)中。将合并的EtOAc相用盐水溶液(250mL)洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中(100％))纯化，得到呈无色液体的标题化合物(3-溴-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2,6-二氟苯基)三甲基硅烷(9.0g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.08(dd,J＝8.9,1.6Hz,1H),6.07(d,J＝1.3Hz,1H),4.33-3.89(m,4H),0.37(t,J＝1.6Hz,9H)。
步骤3：1-(6-(1,3-二氧戊环-2-基)-2,4-二氟-3-(三甲基甲硅烷基)苯基)-2-氟乙烷-1-酮
Figure BDA0003980215760000861
在-78℃下，在惰性气氛下，向(3-溴-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2,6-二氟苯基)三甲基硅烷(来自步骤2，5.0g，14.961mmol)在新鲜蒸馏的THF(50mL)中的溶液中缓慢添加正丁基锂(6.0mL，2.5M在己烷中，14.961mmol)。然后将乙基2,2-二氟乙酸酯(3.1g，29.9mmol)添加到反应混合物中，并且在-78℃下搅拌1h。将反应用饱和NH4Cl溶液(250mL)淬灭，并且萃取到乙酸乙酯(2X200mL)中。将合并的EtOAc相用盐水溶液(50mL)洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物1-(6-(1,3-二氧戊环-2-基)-2,4-二氟-3-(三甲基甲硅烷基)苯基)-2-氟乙烷-1-酮(2.5g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.04(dt,J＝8.9,0.8Hz,1H),6.02(s,1H),5.22(d,J＝1.6Hz,1H),5.07(d,J＝1.6Hz,1H),4.03-3.79(m,4H),0.37(s,9H)。
步骤4：1-(6-(1,3-二氧戊环-2-基)-2,4-二氟-3-(三甲基甲硅烷基)苯基)-2-氟乙烷-1-醇
Figure BDA0003980215760000862
在0℃下，向1-(6-(1,3-二氧戊环-2-基)-2,4-二氟-3-(三甲基甲硅烷基)苯基)-2-氟乙烷-1-酮(来自步骤3，2.5g，7.854mmol)在甲醇(20mL)中的溶液中分批添加硼氢化钠(594.2mg，15.70mmol)。允许温度经1小时缓慢升高至室温，并且在室温下再搅拌2小时。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭并且萃取到乙酸乙酯(200mL)中。将EtOAc用盐水溶液(50mL)洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→30％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物1-(6-(1,3-二氧戊环-2-基)-2,4-二氟-3-(三甲基甲硅烷基)苯基)-2-氟乙烷-1-醇(2.5g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.12(dd,J＝9.4,1.2Hz,1H),6.15(s,1H),5.42-5.35(m,1H),4.93-4.47(m,2H),4.19-3.88(m,4H),2.96(dd,J＝6.1,2.8Hz,1H),0.36(s,9H)。
步骤5：(3-(1,2-二氟乙基)-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2,6-二氟苯基)三甲基硅烷
Figure BDA0003980215760000871
在0℃下，向1-(6-(1,3-二氧戊环-2-基)-2,4-二氟-3-(三甲基甲硅烷基)苯基)-2-氟乙烷-1-醇(来自步骤4，2.0g，6.24mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(DAST)(1.24mL，9.36mmol)。允许反应温热至室温并搅拌1h。向反应混合物中添加水(50mL)，并且将产物萃取到二氯甲烷(3X50mL)中。将DCM相合并，并用饱和NaHCO3溶液(50mL)、盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→2％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物(3-(1,2-二氟乙基)-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2,6-二氟苯基)三甲基硅烷(1.1g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.23-7.04(m,1H),6.24-6.05(m,1H),6.04(s,1H),5.15-4.89(m,1H),4.70-4.39(m,1H),4.14-3.99(m,4H),0.36(s,9H)。
步骤6：2-(1,2-二氟乙基)-3,5-二氟-4-(三甲基甲硅烷基)苯甲醛
Figure BDA0003980215760000881
向(3-(1,2-二氟乙基)-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2,6-二氟苯基)三甲基硅烷(来自步骤5，1.1g，3.41mmol)在二乙醚(10mL)中的溶液中添加6N HCl(11mL)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。将此用水(50mL)、饱和NaHCO3溶液(100mL)和盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，得到呈无色液体的标题化合物2-(1,2-二氟乙基)-3,5-二氟-4-(三甲基甲硅烷基)苯甲醛(900mg)。不经进一步纯化和分析，将产物用于下一步骤。
步骤7：2-(1,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000882
向(2-(1,2-二氟乙基)-3,5-二氟-4-(三甲基甲硅烷基)苯甲醛(来自步骤6，900mg，3.23mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加TBAF(8.0mL，1.0M在THF中，8.08mmol)。将所得溶液在室温下搅拌1h。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，并且将此用水(50mL)、饱和NaHCO3溶液(100mL)和盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(5％→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(1,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯甲醛(400mg)。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.41-10.14(m,1H),7.54(d,J＝8.3Hz,1H),7.15-7.06(m,1H),6.34-6.30(m,1H),4.95-4.67(m,2H)。
步骤8：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(1,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000891
使用通用程序I的步骤1合成标题化合物(使用来自步骤7的醛，490mg，2.377mmol)以给出3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(1,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(1.0g，粗品)。不经进一步纯化和分析，将产物用于下一步骤。
步骤9：甲基4-(2-(1,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000892
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤8的中间体，1.0g，2.03mmol)。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(2-(1,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(1.0g，粗品)。将非对映异构体混合物使用二氧化硅快速色谱法(0→80％)分离为其两种异构体，以给出70mg的呈白色固体的第一非对映异构体和50mg的呈白色固体的第二非对映异构体。将第一次分离的非对映异构体的峰-1：70mg和峰-2：50mg使用制备型手性SFC[方法8]进一步分离为其对映异构体，以获得四种异构体。
实例16
获得的25mg的呈白色固体的第二洗脱对映异构体
手性HPLC Rt＝12.95min；[手性分析方法3]
LCMS Rt＝1.52min；MS m/z 402.2[M-H]-；[方法7]
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.29(d,J＝6.8Hz,1H),6.80-6.69(m,2H),6.41(dd,J＝48.5,17.2Hz,1H),5.80(s,1H),5.72(s,1H),5.36-4.69(m,5H),3.59(s,3H)。
实例16b
获得的25mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体
手性HPLC RT 10.54min；[手性分析方法3]
LCMS Rt＝1.52min；MS m/z 402.0[M-H]-；[方法7]
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.29(d,J＝6.8Hz,1H),6.80-6.69(m,2H),6.41(dd,J＝48.5,17.2Hz,1H),5.80(s,1H),5.72(s,1H),5.36-4.69(m,5H),3.59(s,3H)。
实例16c
15mg的呈白色固体的第三洗脱对映异构体
手性HPLC Rt＝14.54min；[手性分析方法3]
LCMS Rt＝1.472min；MS m/z 402.0[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.92-6.80(m,2H),6.70-6.48(m,1H),5.76(s,1H),5.64(s,1H),5.48(s,1H),5.16(s,1H),5.15-4.51(m,4H),3.55(s,3H)。
实例16d
15mg的呈白色固体的第四洗脱对映异构体
手性HPLC Rt＝18.97min；[手性分析方法3]
LCMS Rt＝1.466min；MS m/z 402.2[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.92-6.80(m,2H),6.70-6.48(m,1H),5.76(s,1H),5.64(s,1H),5.48(s,1H),5.16(s,1H),5.15-4.51(m,4H),3.55(s,3H)。
实例17：甲基(R)-4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000901
步骤1：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000911
使用通用程序I合成标题化合物(使用可商购获得的3-氟-2-(三氟甲基)苯甲醛，1.4g，7.28mmol)以给出3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(2g，粗品)。不经进一步纯化和分析，将产物用于下一步骤。
步骤2：甲基4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000912
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(来自步骤2，2g，4.18mmol)。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→70％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(240mg)。使用制备型手性HPLC[方法5]，将外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例17
80mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体，33％产率。
手性HPLC Rt＝7.549min；[手性分析方法1]
LCMS Rt＝1.485min；MS m/z 390.1[M+H]+；[方法7]
1H NMR(600MHz,CD3OD)δ7.62-7.46(m,1H),7.35-7.30(m,1H),7.20-7.02(m,1H),5.75-5.69(m,1H),5.68-5.60(m,1H),5.58-5.50(m,1H),4.84(d,J＝5.1Hz,2H),3.47(s,3H)。
实例18：甲基(R)-4-(2-(二氟甲基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000921
步骤1：2-(2-溴-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000922
按照与实例1的步骤1相似的程序合成标题化合物，使用15g的2-溴-3,5-二氟苯甲醛，获得15.4g的2-(2-溴-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.20-7.15(m,1H),6.49-6.87(m,1H),6.08(s,1H),4.17-4.04(m,4H)。
步骤2：2-(3,5-二氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000923
按照与实例1的步骤2相似的程序合成标题化合物，使用2-(2-溴-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环，给出2-(3,5-二氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环(3.0g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.20-7.16(m,1H),6.94-6.83(m,1H),6.82(dd,J＝17.7,11.7Hz,1H),5.60(dd,J＝1.2,11.7Hz,1H),5.66-5.60(m,1H),5.95(s,1H),4.18-4.02(m,4H)。
步骤3：2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000924
按照与实例5的步骤1相似的程序合成标题化合物，给出2 2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯甲醛(1.0g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.41(s,1H),7.35(d,J＝9.6Hz,1H),6.95-6.85(m,1H),6.53(s,1H),4.08(s,4H)。
步骤4：2-(2-(二氟甲基)-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760000931
按照与实例5的步骤3相似的程序合成标题化合物，给出2-(2-(二氟甲基)-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环(570mg)
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.29-7.25(m,1H),7.06(t,J＝1.1Hz,1H),6.95-6.84(m,1H),6.13(t,J＝1.2Hz,1H),4.30-3.86(m,4H)。
步骤5：2-(二氟甲基)-3,5-二氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000932
在0℃下，向2-(2-(二氟甲基)-3,5-二氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤4，570mg，2.41mmol)在二乙醚(10mL)中的溶液中添加6N HCl(10mL)。将所得反应混合物在室温下搅拌6小时。将反应混合物萃取到二乙醚(50mL)中并且用水(30mL)洗涤。将有机相用饱和NaHCO3溶液(30mL)、盐水(30mL)洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，得到呈无色液体的粗化合物2-(二氟甲基)-3,5-二氟苯甲醛(360mg)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.42(s,1H),7.74-7.54(m,1H),7.25(dd,J＝46.8,10.4Hz,1H),7.15 -7.10(m,1H)。
步骤6：3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(二氟甲基)-3,5-二氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760000933
使用通用程序I的步骤1合成标题化合物(使用来自步骤5的醛，360mg，1.87mmol)以给出3-乙基5-甲基2-(乙酰氧基甲基)-4-(2-(二氟甲基)-3,5-二氟苯基)-6-(氟甲基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(720mg，粗品)。
LCMS Rt＝1.698min；MS m/z 476.1[M-H]-；[方法7]
步骤7：甲基4-(2-(二氟甲基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000941
使用通用程序I的步骤2合成标题化合物(使用来自步骤6的中间体，720mg，1.50mmol)。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→70％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基4-(2-(二氟甲基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(120mg)。使用手性制备型HPLC[方法7]，将外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例18
获得的30mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体，25％产率。
手性HPLC Rt＝17.629min；[手性分析方法1]
LCMS Rt＝1.454min；MS m/z 388.2[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.40-7.38(m,1H),6.93(dd,J＝10.3,7.6Hz,2H),5.77(d,J＝0.8Hz,1H),5.65(d,J＝0.7Hz,1H),5.27(d,J＝1.6Hz,1H),4.89-4.86(m,2H),3.51(s,3H)。
实例18b
获得的36mg的呈白色固体的第二洗脱对映异构体，30％产率。
手性HPLC Rt＝19.634min；[手性分析方法1]
LCMS Rt＝1.454min；MS m/z 388.0[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.40-7.38(m,1H),6.93(dd,J＝10.3,7.6Hz,2H),5.77(d,J＝0.8Hz,1H),5.65(d,J＝0.7Hz,1H),5.27(d,J＝1.6Hz,1H),4.89-4.86(m,2H),3.51(s,3H)。
实例19：甲基(R)-4-(2-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000951
使用通用程序II制备标题化合物，使用可商购获得的2-(二氟甲氧基)-3-氟苯甲醛(249mg，1.311mmol)。将粗品通过自动快速柱色谱法纯化，用在庚烷中的EtOAc(梯度为0-100％)在24g Si-柱上洗脱，并且将其进一步通过质量定向的反相制备型色谱法纯化；条件：Xbridge C18 OBD 30x50mm 5um柱ACN/H2O w/NH3OH 5mL/min进样1.5mL。使用手性SFC(流动相：5％-25％MeOH在C02中80g/min；柱：(RR)Whelk-O1 21x250mm)将外消旋体分离为其单独的对映异构体。
实例19
8.6mg的第二洗脱对映异构体(4％)
手性SFC Rt＝2.61min(流动相：5％-55％ MeOH柱：(RR)Whelk-O1 4.6x100mm 5um柱，6min运行)
LCMS Rt＝1.94min；MS m/z 388.2[M+H]+；[方法4]
1H NMR(400MHz,二氯甲烷-d2)δ7.46(d,J＝6.8Hz,1H),7.29-7.05(m,3H),6.93(t,J＝74.16Hz,1H),5.88-5.56(m,2H),5.23(s,1H),4.81(s,2H),3.57(s,3H)。
实例19b
9.5mg的第一洗脱对映异构体(4％)
手性SFC Rt＝2.41min(流动相：5％-55％ MeOH柱：(RR)Whelk-O1 4.6x100mm 5um柱，6min运行)
LCMS Rt＝1.90min；MS m/z 388.2[M+H]+；[方法4]
1H NMR(400MHz,二氯甲烷-d2)δ7.46(d,J＝6.8Hz,1H),7.29-7.05(m,3H),6.93(t,J＝74.16Hz,1H),5.88-5.56(m,2H),5.23(s,1H),4.81(s,2H),3.57(s,3H)。
实例20：甲基(R)-4-(2-(二氟甲氧基)-5-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000961
使用通用程序II制备标题化合物，使用可商购获得的2-(二氟甲氧基)-5-氟苯甲醛(229mg，1.206mmol)。将粗品通过自动快速柱色谱法纯化，用在庚烷中的EtOAc(梯度为0-100％)在24g Si-柱上洗脱，并且将其进一步通过质量定向的反相制备型色谱法纯化；条件：Xbridge C18 OBD 30x50mm 5um柱ACN/H2O w/NH3OH 5mL/min进样1.5mL。使用手性SFC(流动相：5％-25％MeOH在C02中80g/min；柱：(RR)Whelk-O1 21x250mm)将外消旋体分离为其单独的对映异构体。
实例20
10mg的第二洗脱对映异构体
手性SFC Rt＝2.51min(流动相：5％-55％ MeOH柱：(RR)Whelk-O1 4.6x100mm 5um柱，6min运行)
LCMS Rt＝1.91min；MS m/z 388.1[M+H]+；[方法4]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.11(d,J＝3.3Hz,1H),7.32-6.85(m,4H),5.79-5.65(m,1H),5.65-5.48(m,1H),5.05(s,1H),4.83(s,2H),3.45(s,3H)。
实例20b
12mg的第一洗脱对映异构体
手性SFC Rt＝2.31min(流动相：5％-55％ MeOH柱：(RR)Whelk-O1 4.6x100mm 5um柱，6min运行)
LCMS Rt＝1.91min；MS m/z 388.0[M+H]+；[方法4]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.11(d,J＝2.0Hz,1H),7.33-6.80(m,4H),5.77-5.65(m,1H),5.64-5.51(m,1H),5.05(s,1H),4.83(s,2H),3.45(s,3H)。
实例21：甲基(R)-4-(2-环丙基-5-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000971
步骤1：2-环丙基-5-氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760000972
将2-溴-5-氟苯甲醛(2.03g，10.00mmol)、环丙烷硼酸(1.031g，12.00mmol)、和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.817g，1.000mmol)在二噁烷(20mL)和2.0M K2CO3水溶液(10.00mL，20.00mmol)中的脱气溶液搅拌并加热至80℃。完成后，将反应混合物冷却至室温，然后在水和乙酸乙酯之间分配。将有机相用水和盐水洗涤，然后经MgSO4干燥并浓缩。将粗品通过二氧化硅快速色谱法[0-20％乙酸乙酯在庚烷中]纯化以提供800mg的标题化合物，49％产率。粗产物不经进一步纯化而使用。
步骤2：甲基4-(2-环丙基-5-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000973
根据通用程序II，由乙基4-氯-3-氧代丁酸酯(346mg，2.10mmol)、步骤1中制备的2-环丙基-5-氟苯甲醛(345mg，2.10mmol)、和甲基(Z)-3-氨基-4-氟丁-2-烯酸酯(中间体B，280mg，2.10mmol)制备标题化合物。使用手性SFC(流动相：25％甲醇(含有0.2％ NH4OH/CO2)，以80g/min；柱：(SS)Whelk-O1 4.6x100mm)，将外消旋甲基4-(2-环丙基-5-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯分离为其对映异构体。
实例21
21.4mg呈白色固体的第一洗脱对映异构体(5.6％)。
手性SFC Rt＝2.41min(流动相：5％-55％ MeOH w/10mM NH4OH/CO2 5mL/min 120巴；柱：(SS)Whelk-O1 4.6x100mm 5μm)。
LCMS Rt＝0.95min；MS m/z 362.5[M+H]+；[方法4].
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.08(s,1H),7.08-6.95(m,1H),6.93-6.82(m,2H),5.78-5.58(m,2H),5.37(s,1H),4.90-4.77(m,2H),3.45(s,3H),1.00-0.80(m,3H),0.54-0.46(m,1H)。环丙基上苄基CH隐藏在DMSO峰下。
实例21b
10.3mg呈白色固体的第二洗脱对映异构体(2.7％)。
手性SFC Rt＝2.69min(流动相：5％-55％ MeOH w/10mM NH4OH/CO2 5mL/min 120巴；柱：(SS)Whelk-O1 4.6x100mm 5μm)。
LCMS Rt＝0.95min；MS m/z 362.5[M+H]+；[方法4].
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.08(s,1H),7.08-6.95(m,1H),6.93-6.82(m,2H),5.78-5.58(m,2H),5.37(s,1H),4.90-4.77(m,2H),3.45(s,3H),1.00-0.80(m,3H),0.54-0.46(m,1H)。
实例22：甲基(R)-4-(2-环丙基苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000981
步骤1：2-环丙基苯甲醛
Figure BDA0003980215760000982
将2-溴苯甲醛(1g，5.40mmol)、环丙烷硼酸(0.557g，6.49mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(0.441g，0.540mmol)在二噁烷(15mL)和2.0M K2CO3水溶液(5.40mL，10.81mmol)中的脱气溶液搅拌并加热至80℃。完成后，将反应混合物冷却至室温，然后在水和乙酸乙酯之间分配。将有机相用水和盐水洗涤，然后经MgSO4干燥并浓缩。将粗品通过二氧化硅快速色谱法[0-20％乙酸乙酯在庚烷中]纯化以提供420mg mg的标题化合物，53％产率。粗产物不经进一步纯化而使用。
步骤2：甲基4-(2-环丙基苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760000991
根据通用程序II，由乙基4-氯-3-氧代丁酸酯(0.204mL，1.500mmol)、步骤1中制备的2-环丙基苯甲醛(219mg，1.5mmol)、和甲基(Z)-3-氨基-4-氟丁-2-烯酸酯(中间体B，200mg，1.50mmol)制备标题化合物。使用手性SFC(流动相：5％-55％甲醇(含有10mM NH4OH/CO2)，以3mL/min；柱：(SS)WHO；1 4.6x100mm)，将外消旋甲基-4-(2-环丙基苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯甲酸酯分离为其对映异构体。
实例22
7.9mg呈白色固体的第一洗脱对映异构体(3.0％)。
手性SFC Rt＝2.77min
LCMS Rt＝0.93min；MS m/z 344.5[M+H]+；[方法4].
1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 6.91-7.23(m,4H),5.73(d,J＝1.96Hz,1H),5.61(d,J＝2.93Hz,1H),5.48(s,1H),4.82(s,2H),3.50(s,3H),2.53-2.65(m,1H),0.86-0.99(m,3H),0.58(d,J＝5.87Hz,1H)。
实例22b
7.5mg呈白色固体的第二洗脱对映异构体(2.9％)。
手性SFC Rt＝3.19min
LCMS Rt＝0.93min；MS m/z 344.5[M+H]+；[方法4].
1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 6.91-7.23(m,4H),5.73(d,J＝1.96Hz,1H),5.61(d,J＝2.93Hz,1H),5.48(s,1H),4.82(s,2H),3.50(s,3H),2.53-2.65(m,1H),0.86-0.99(m,3H),0.58(d,J＝5.87Hz,1H)。
实例23：甲基(R)-4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001001
根据通用程序II，由乙基4-氯-3-氧代丁酸酯(0.318mL，2.342mmol)、可商购获得的5-氟-2-(三氟甲基)苯甲醛(450mg，2.342mmol)和甲基(Z)-3-氨基-4-氟丁-2-烯酸酯(中间体B，312mg，2.342mmol)制备标题化合物。使用手性SFC(流动相：15％甲醇(含有0.2％氢氧化铵/CO2)，以80g/min；柱：2.0x25.0cm ChromegaChiral CC4)，将外消旋甲基4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯分离为其对映异构体。
实例23
12.2mg呈白色固体的第一洗脱对映异构体(2.7％)。
手性SFC Rt＝1.29min(柱：4.6x100mm Chiralcel OZ-H；等度15％甲醇与0.1％异丙胺；125巴
LCMS Rt＝0.92min；MS m/z 390.0[M+H]+；[方法4].
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.16(br s,1H),7.70(dd,J＝8.80,5.38Hz,1H),7.20-7.30(m,2H),5.72(s,1H),5.60(s,1H),5.20(s,1H),4.74-4.91(m,2H),3.38(s,3H)。
实例23b
14.0mg呈白色固体的第二洗脱对映异构体(3.0％)。
手性SFC Rt＝1.74min(柱：4.6x100mm Chiralcel OZ-H；等度15％甲醇(含有0.1％异丙胺)；125巴)
LCMS Rt＝0.92min；MS m/z 390.0[M+H]+；[方法4].
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.16(br s,1H),7.70(dd,J＝8.80,5.38Hz,1H),7.20-7.30(m,2H),5.72(s,1H),5.60(s,1H),5.20(s,1H),4.74-4.91(m,2H),3.38(s,3H)。
实例24：甲基(R)-2-(氟甲基)-5-氧代-4-(2-(三氟甲基)苯基)-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001011
根据通用程序II，由乙基4-氯-3-氧代丁酸酯(0.286mL，2.10mmol)、可商购获得的2-三氟甲基苯甲醛(366mg，2.10mmol)和甲基(Z)-3-氨基-4-氟丁-2-烯酸酯(中间体B，280mg，2.10mmol)制备标题化合物。使用手性SFC(流动相：20％甲醇(含有0.2％氢氧化铵)，以80g/min；柱：2.0x25.0cm ChromegaChiral CC4)，将外消旋甲基2-(氟甲基)-5-氧代-4-(2-(三氟甲基)苯基)-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯分离为其对映异构体。
实例24
7.9mg呈白色固体的第一洗脱对映异构体(2.0％)。
手性SFC Rt＝1.19min(流动相：20％甲醇(含有0.1％异丙胺/CO2)，以4mL/min；柱：Chiralcel OZ-H；1 4.6x100mm)。
LCMS Rt＝0.91min；MS m/z 370.0[M+H]+；[方法4].
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.12(br s,1H),7.60(d,J＝7.82Hz,2H),7.49(d,J＝7.83Hz,1H),7.31-7.42(m,1H),5.70(s,1H),5.58(s,1H),5.19(s,1H),4.81(s,2H),3.37(s,3H)。
实例24b
9.3mg呈白色固体的第二洗脱对映异构体(2.4％)。
手性SFC Rt＝1.72min(流动相：20％甲醇(含有0.1％异丙胺/CO2)，以4mL/min；柱：Chiralcel OZ-H；1 4.6x100mm)。
LCMS Rt＝0.91min；MS m/z 370.0[M+H]+；[方法4].
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.12(br s,1H),7.60(d,J＝7.82Hz,2H),7.49(d,J＝7.83Hz,1H),7.31-7.42(m,1H),5.70(s,1H),5.58(s,1H),5.19(s,1H),4.81(s,2H),3.37(s,3H)。
实例25：甲基(R)-4-(3-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001021
步骤1：2-(2-溴-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760001022
向2-溴-3-氟苯甲醛(60g，295.56mmol)和乙二醇(65.4mL，1182.2mmol)在甲苯(600mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸一水合物(28.11g，147.78mmol)。将所得溶液在120℃下使用迪安-斯达克设备搅拌24小时。将溶剂添加到水(2L)中并萃取到EtOAc(3L)中。将EtOAc用饱和NaHCO3溶液(1L)、盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(2-溴-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(60g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42-7.37(m,1H),7.34-7.29(m,1H),7.16-7.10(m,1H),6.10(s,1H),4.19-4.09(m,4H)。
步骤2：2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760001023
在氮气气氛下，将2-(2-溴-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤1，7g，28.45mmol)在THF(70mL)中的溶液冷却至-78℃。然后经10min添加在正己烷溶液中的正丁基锂(13.66mL，2.5M，58.5mmol)。将所得混合物在-78℃下搅拌45min，然后添加DMF(2.5g，34.15mmol)，并且将所得混合物在-78℃下搅拌1.15h。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机相用水(50mL)洗涤，随后用盐水(50mL)洗涤并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯甲醛(5g)。
1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ10.52(s,1H),7.67-7.53(m,2H),7.22-7.12(m,1H),6.50(s,1H),4.27-3.99(m,4H)。
步骤3：2-(2-(2,2-二氟乙烯基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760001031
在氮气气氛下，向乙腈(65mL)的溶液中添加三苯基膦(28.1g，107.1mmol)、碘化钾(11.85g，71.4mmol)和2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯甲醛(来自步骤2，7g，35.7mmol)。将反应在70℃下搅拌30min，然后经10min的时间段缓慢添加甲基2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸酯(12g，62.4mmol)(添加时物料颜色变为黄色)。将所得混合物在70℃下再搅拌3小时，然后冷却至室温，用二乙醚稀释，将沉淀的固体通过过滤除去，并且用二乙醚(100mL)洗涤。将所得溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→5％)乙酸乙酯)纯化，得到呈淡黄色液体的标题化合物2-(2-(2,2-二氟乙烯基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(6.9g)。
1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.39(dd,J＝7.8,1.4Hz,1H),7.31(m,1H),7.11(m,1H),5.87(s,1H),5.39(m,1H),4.21-3.95(m,4H)。
步骤4：2-(3-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760001032
将2-(2-(2,2-二氟乙烯基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤3，2.7g，11.73mmol)和四丁基氟化铵在THF(13.7g，1M，13.7mmol)中的溶液在封闭系统中加热至70℃，持续2小时。允许反应冷却，将其用二乙醚稀释，并且将此用水(50mL)、饱和NaHCO3溶液(100mL)和盐水洗涤并经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(3-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环(1.2g)。
1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.49-7.42(m,1H),7.35(m,1H),7.17-7.05(m,1H),6.03(s,1H),4.25-3.90(m,4H),3.75(m,2H)。
步骤5：3-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯甲醛
Figure BDA0003980215760001041
向2-(3-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤4，2g，8.0mmol)在二乙醚(40mL)中的溶液中添加6N HCl(5mL)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。将此用水(50mL)、饱和NaHCO3溶液(100mL)、盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→5％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物3-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯甲醛(1.2g)。将粗产物不经进一步纯化原样用于下一步骤。
步骤6：3-乙氧基环戊-2-烯-1-酮
Figure BDA0003980215760001042
在室温下，向环戊烷-1,3-二酮(5.0g，50.96mmol)在甲苯(70mL)中的搅拌溶液中添加pTSA(193mg，1.019mmol)和EtOH(22.61ml，387.35mmol)。将所得混合物在120℃下使用迪安-斯达克设备搅拌10小时。将溶剂在减压下除去。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，以得到呈棕色固体的标题化合物3-乙氧基环戊-2-烯-1-酮(4.3g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.26(s,1H),4.02(q,J＝6.6Hz,2H),2.60-2.55(m,2H),2.44-2.40(m,2H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤7：3-氨基环戊-2-烯-1-酮
Figure BDA0003980215760001043
在室温下，向3-乙氧基环戊-2-烯-1-酮(来自步骤6，4.3g，34.08mmol)在乙醇(50mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化铵溶液(25mL，387.35mmol)。将所得混合物在85℃下搅拌16小时。将溶剂在减压下除去，得到呈棕色固体的标题化合物3-氨基环戊-2-烯-1-酮(3.2g)。
LCMS Rt＝0.114min；MS m/z 98.2[M+H]+；[方法7]
步骤8：甲基4-(3-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001051
向醛(来自步骤5，200mg，0.9708mmol)、甲基4-氟-3-氧代丁酸酯(方法2，中间体B的步骤1，130mg，0.9708mmol)在EtOH(2mL)中的溶液中添加3-氨基环戊-2-烯-1-酮(来自步骤7，94mg，0.9708mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌18小时。将溶剂在减压下除去。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→70％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物。使用手性制备型HPLC[方法6]，将外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例25
获得的呈白色固体的第二洗脱对映异构体(25mg)。
手性HPLC Rt＝7.610min；[手性分析方法4]
LCMS Rt＝1.533min；MS m/z 401.75[M+]+；[方法12]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.31-7.25(m,1H),7.04(d,J＝8Hz,1H),6.97-6.90(m,1H),5.76(d,J＝3.2Hz,1H),5.64(d,J＝2.8Hz,2H),5.08(s,1H),4.79-4.60(m,2H),3.70-3.55(m,2H),3.44(s,3H),2.66-2.61(m,2H)。
实例25b
呈白色固体的第一洗脱对映异构体(24mg)。
手性HPLC Rt 7.103min；[手性分析方法4]
LCMS Rt＝1.533min；MS m/z 401.75[M+]+；[方法12]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.31-7.25(m,1H),7.04(d,J＝8Hz,1H),6.97-6.90(m,1H),5.76(d,J＝3.2Hz,1H),5.64(d,J＝2.8Hz,2H),5.08(s,1H),4.79-4.60(m,2H),3.70-3.55(m,2H),3.44(s,3H),2.66-2.61(m,2H)。
实例26：甲基(R)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001061
步骤1：2-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760001062
向2-(2-(2,2-二氟乙烯基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自实例25，步骤3，3g，13.04mmol)在乙酸乙酯(60mL)中的溶液中添加10％ Pd-C(1g)。在室温下在氢气气氛下，在60psi的压力下将所得反应混合物保存在帕尔振摇器中持续48小时。将反应混合物通过硅藻土垫上过滤，用乙酸乙酯(30mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→30％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(3g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.42-7.35(m,1H),7.34-7.27(m,1H),7.15-7.08(m,1H),6.31-5.78(m,2H),4.19-4.02(m,4H),3.38(m,2H)。
步骤2：2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760001063
向2-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤1，3g，12.93mmol)在二乙醚(40mL)中的溶液中添加6N HCl(5mL)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。将此用水(50mL)、饱和NaHCO3溶液(100mL)和盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→5％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯甲醛(1.9g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.14(d,J＝1.6Hz,1H),7.70-7.63(m,1H),7.52(td,J＝8.0,7.9,5.2Hz,1H),7.35-7.30(m 1H),6.03(m,1H),3.83-3.58(m,2H)。
步骤3：甲基(R)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯和甲基(S)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001071
向醛(来自步骤2，200mg，1.063mmol)、甲基4-氟-3-氧代丁酸酯(方法2，中间体B的步骤1，142mg，1.063mmol)在EtOH(2mL)中的溶液中添加3-氨基环戊-2-烯-1-酮(实例25，步骤7，103mg，1.063mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌18小时。将溶剂在减压下除去，给出粗化合物。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→70％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物(100mg)。使用手性制备型HPLC[方法6]，将外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例26
获得的呈白色固体的第一洗脱对映异构体(25mg)。
手性HPLC Rt 7.341min；[手性分析方法4]
LCMS Rt＝1.505min；MS m/z 384.2[M+1]+；[方法12]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.25-7.17(m,1H),7.01(d,J＝8Hz,1H),6.92-6.85(m,1H),6.80-6.40(m,1H),5.76(d,J＝3.2Hz,1H),5.64(d,J＝2.8Hz,1H),5.08(s,1H),4.79-4.60(m,2H),3.70-3.55(m,2H),3.60-3.40(m,1H),3.52(s,3H),2.75-2.65(m,2H)。
实例26b
获得的呈白色固体的第二洗脱对映异构体(26mg)。
手性HPLC Rt 9.044min；[手性分析方法4]
LCMS Rt＝1.505min；MS m/z 384.2[M+1]+；[方法12]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.25-7.17(m,1H),7.01(d,J＝8Hz,1H),6.92-6.85(m,1H),6.80-6.40(m,1H),5.76(d,J＝3.2Hz,1H),5.64(d,J＝2.8Hz,1H),5.08(s,1H),4.79-4.60(m,2H),3.70-3.55(m,2H),3.60-3.40(m,1H),3.52(s,3H),2.75-2.65(m,2H)。
实例27：甲基(R)-4-(3-氟-2-((R或S)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001081
步骤1：1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯基)乙-1-醇
Figure BDA0003980215760001082
在-78℃下在氮气气氛下，向2-(2-溴-3-氟苯基)-1,3-二氧戊环(来自实例25，步骤1，30g，121.42mmol)在THF(300mL)中的溶液中经10min逐滴添加在正己烷溶液中的n-BuLi(58.3mL，2.5M，147.71mmol)。将所得混合物在-78℃下搅拌1h，然后添加乙醛(6.42g，145.71mmol)，并且将反应在-78℃下搅拌1h。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机相用水(50mL)洗涤，用盐水(50mL)洗涤并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯基)乙-1-醇(15g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.30-7.18(m,1H),7.10-7.01(m,1H),6.15(s,1H),5.30-5.25(m,1H),4.15-3.95(m,4H),2.75-2.69(m.1H),1.58(dd,J＝6.6,22.8Hz,3H)。
步骤-2：2-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760001091
在-78℃下，向1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-6-氟苯基)乙-1-醇(来自步骤1，15g，70.68mmol)在二氯甲烷(150mL)中的溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(19.3mL，141.37mmol)。允许所得溶液温热至RT并搅拌1小时。将反应混合物在0℃下用饱和氯化铵(20mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(100mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环(8.5g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.38(d,J＝7.5Hz,1H),7.30-7.18(m,1H),7.13-7.01(m,1H),6.20-5.95(m,1H),6.10(s,1H),4.16-4.02(m,4H),1.74(dd,J＝7.2,23.1Hz,3H)。
步骤-3：3-氟-2-(1-氟乙基)苯甲醛
Figure BDA0003980215760001092
在室温下，向2-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤2，8.5g，69.38mmol)在二乙醚(150mL)中的溶液中添加4N HCl(85mL)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。将此用水(100mL)、饱和NaHCO3溶液(200mL)和盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，以得到呈无色液体的标题化合物3-氟-2-(1-氟乙基)苯甲醛(6.5g)。(注意：获得的醛在本质上是易挥发的)。
步骤-4：甲基4-(3-氟-2-((R或S)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001093
向醛(来自步骤3，1g，5.876mmol)、甲基4-氟-3-氧代丁酸酯(方法2，中间体B的步骤1，780mg，5.876mmol)在EtOH(10mL)中的溶液中添加3-氨基环戊-2-烯-1-酮(实例25，步骤7，570mg，5.876mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌18小时。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→70％)乙酸乙酯)纯化，得到作为甲基4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯的非对映异构体混合物的呈灰白色固体的标题化合物(220mg)。
使用手性制备型纯化[方法2]，将非对映异构体混合物分离为其两种异构体。
使用手性制备型纯化[方法5]，将非对映异构体分离的第一个峰分离为其对映异构体峰1和峰2。
实例27
获得的呈白色固体的第二洗脱对映异构体(55mg)
手性HPLC Rt＝5.729min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝2.25min；MS m/z 364.1[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.25-7.15(m,2H),6.96-6.75(m,2H),6.52-6.30(m,1H),5.79(s,1H),5.67(s,1H),5.05(s,1H),3.59(s,3H),2.80-2.60(m,2H),2.50-2.35(m,2H),2.01(dd,J＝6.4,23.2HZ,3H)。
实例27b
获得的呈白色固体的第一洗脱对映异构体(55mg)。
手性HPLC Rt＝5.678min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝2.25min；MS m/z 364.1[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.25-7.15(m,2H),6.96-6.75(m,2H),6.52-6.30(m,1H),5.79(s,1H),5.67(s,1H),5.05(s,1H),3.59(s,3H),2.80-2.60(m,2H),2.50-2.35(m,2H),2.01(dd,J＝6.4,23.2HZ,3H)。
使用手性制备型纯化[方法10]，将非对映异构体分离的第二个峰分离为其对映异构体峰3和峰4。
实例27c
呈白色固体的第三洗脱对映异构体(10mg)。
手性HPLC Rt＝8.702min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝2.22min；MS m/z 364.1[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.25-7.15(m,2H),6.96-6.75(m,2H),6.80-6.60(m,1H),5.79(s,1H),5.69(s,1H),5.03(s,1H),3.54(s,3H),2.75-2.58(m,2H),2.50-2.45(m,2H),1.83(dd,J＝6.4,22.4HZ,3H)。
实例27d
呈白色固体的第四洗脱对映异构体(10mg)。
手性HPLC Rt＝9.851min；[手性分析方法2]
LCMS Rt＝2.22min；MS m/z 364.1[M-H]-；[方法7]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.25-7.15(m,2H),6.96-6.75(m,2H),6.80-6.60(m,1H),5.79(s,1H),5.69(s,1H),5.03(s,1H),3.54(s,3H),2.75-2.58(m,2H),2.50-2.45(m,2H),1.83(dd,J＝6.4,22.4HZ,3H)。
实例28：甲基(R)-4-(2-环丙基-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001111
步骤1：2-环丙基-3-氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760001112
向2-溴-3-氟苯甲醛(15g，73.88mmol)和环丙基硼酸(7.61g，88.66mmol)在甲苯(160mL)中的溶液中添加2N K2CO3(25.5mL，182.16mmol)和[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II).DCM(6.03g，7.38mmol)。将所得溶液用氩气脱气10min，并且在100℃下搅拌4小时。将反应混合物过滤，并且用乙酸乙酯(200mL)洗涤。将滤液添加到水(500mL)中，并且将产物萃取到乙酸乙酯(2L)中。将EtOAc相用盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→1％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-环丙基-3-氟苯甲醛(11.2g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.70(s,1H),7.63(dd,J＝1.2,7.8Hz,1H),7.35-7.15(m,2H),2.14-2.02(m,1H),1.19-1.09(m,2H),0.85-0.75(m,2H)。
步骤2：甲基4-(2-环丙基-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001121
向醛(来自步骤1，900mg，5.481mmol)、甲基(Z)-3-氨基-4-氟丁-2-烯酸酯(中间体B，537.76mg，5.481mmol)在乙醇(5mL)中的溶液中添加环戊烷-1,3-二酮(875.68161mg，5.481mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌16小时。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→70％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物甲基-4-(2-环丙基-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯(130mg)。使用手性制备型HPLC[方法11]，将外消旋混合物分离为其对映异构体。
实例28
获得的呈白色固体的第一洗脱对映异构体(46mg)。
手性HPLC Rt＝10.37min；[手性分析方法3]
LCMS Rt＝1.47min；MS m/z 360.2[M+H]+；[方法7]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.10-7.01(m,1H),6.95-6.90(m,1H),6.78-6.71(m,1H),5.68(d,J＝0.9Hz,1H),5.58-5.52(m,2H),3.53(s,3H),2.70-2.65(m,2H),2.45-2.12(m,4H),1.34-1.25(m,1H),1.05-0.89(m,2H),0.80-0.69(m,1H)。
实例28b
获得的呈白色固体的第二洗脱对映异构体(48mg)。
手性HPLC Rt＝15.216min；[手性分析方法3]
LCMS Rt＝1.47min；MS m/z 360.2[M+H]+；[方法7]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.10-7.01(m,1H),6.95-6.90(m,1H),6.78-6.71(m,1H),5.68(d,J＝0.9Hz,1H),5.58-5.52(m,2H),3.53(s,3H),2.70-2.65(m,2H),2.45-2.12(m,4H),1.34-1.25(m,1H),1.05-0.89(m,2H),0.80-0.69(m,1H)。
实例29：甲基(R)-4-(3,5-二氟-2-((S或R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001131
步骤1：2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯甲醛
Figure BDA0003980215760001132
向2-(3,5-二氟-2-乙烯基苯基)-1,3-二氧戊环(来自实例3的步骤2，5g，23.58mmol)和氯化钌.XH2O(490mg，2.35mmol)在二氯甲烷(50mL)和水(10mL)的溶液中添加二乙酰氧基碘苯(11.4g，35.37mmol)。将所得溶液在30℃下搅拌2小时。将反应混合物过滤，并且用乙酸乙酯(200mL)洗涤。将滤液溶解于水(200mL)中并萃取到乙酸乙酯(500mL)中，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，并且将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→10％)乙酸乙酯)纯化，得到呈无色液体的标题化合物2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯甲醛(3g)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.41(s,1H),7.35(d,J＝9.6Hz,1H),6.95-6.85(m,1H),6.53(s,1H),4.08(s,4H)。
步骤2：1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯基)乙-1-醇
Figure BDA0003980215760001133
在0℃下，向2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯甲醛(来自步骤1，1.0g，4.67mmol)在干燥四氢呋喃(10mL)中的溶液中添加甲基溴化镁(2.33mL，3M在醚中，4.67mmol)。将所得溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在0℃下用饱和氯化铵(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(100mL)稀释。将有机层分离，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，得到呈无色液体的标题化合物1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯基)乙-1-醇(950mg)。将粗化合物不经进一步纯化进行至下一步骤。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.17(dd,J＝2.4,6.3Hz,1H),6.89-6.72(m,1H),6.17(s,1H),5.31(dd,J＝6.9,13.5Hz,1H),4.15-4.02(m,4H),2.64-2.59(m.1H),1.58(d,J＝9.0Hz,3H)。
步骤3：2-(3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环
Figure BDA0003980215760001141
在-78℃下，向1-(2-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,6-二氟苯基)乙-1-醇(来自步骤2，950mg，4.13mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(1.0g，6.13mmol)。将所得溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在0℃下用饱和氯化铵(100mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(100mL)稀释。将有机层分离，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，得到呈浓稠的黄色液体的标题化合物2-(3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环(600mg)。将粗化合物不经进一步纯化进行至下一步骤。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.20(dd,J＝2.4,6.3Hz,1H),6.87-6.75(m,1H),6.15-5.98(m,1H),6.11(s,1H),4.15-4.02(m,4H),1.70(dd,J＝6.6,22.8Hz,3H)。
步骤4：3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯甲醛
Figure BDA0003980215760001142
在室温下，向2-(3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,3-二氧戊环(来自步骤3，600mg，2.58mmol)在二乙醚(10mL)中的溶液中添加4N HCl(2mL)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。将此用水(50mL)和饱和NaHCO3溶液(100mL)洗涤，并且经Na2SO4干燥。将溶剂在减压下除去，得到呈无色液体的标题化合物3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯甲醛(200mg)。(注意：获得的醛本质上是易挥发的)
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.44(d,J＝3.0Hz,1H),7.20(d,J＝9.3Hz,1H),7.10-6.98(m,1H),6.43-6.19(m,1H),1.78(dd,J＝7.2,23.1Hz,3H)。
步骤5：3-乙氧基环戊-2-烯-1-酮
Figure BDA0003980215760001151
在室温下，向环戊烷-1,3-二酮(5.0g，50.96mmol)在甲苯(70mL)中的搅拌溶液中添加pTSA(193mg，1.019mmol)和EtOH(22.61ml，387.35mmol)。将所得混合物在120℃下使用迪安-斯达克设备搅拌10小时。将溶剂在减压下除去，给出粗化合物。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，以得到呈棕色固体的标题化合物3-乙氧基环戊-2-烯-1-酮(4.3g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.26(s,1H),4.02(q,J＝6.6Hz,2H),2.60-2.55(m,2H),2.44-2.40(m,2H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤6：3-氨基环戊-2-烯-1-酮
Figure BDA0003980215760001152
在室温下，向3-乙氧基环戊-2-烯-1-酮(来自步骤5，4.3g，34.08mmol)在乙醇(50mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化铵溶液(25mL，387.35mmol)。将所得混合物在85℃下搅拌16小时。将溶剂在减压下除去，得到呈棕色固体的标题化合物3-氨基环戊-2-烯-1-酮(3.2g)。
LCMS RT＝0.114min；MS m/z 98.2[M+H]+；[方法7]
步骤7：甲基4-(3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001161
向醛(来自步骤4，700mg，3.7204mmol)、甲基4-氟-3-氧代丁酸酯(步骤1；中间体B的方法2，598.73mg，4.4645mmol)和3-氨基环戊-2-烯-1-酮(步骤6，361.32mg，3.7204mmol)在叔丁醇(15mL)的溶液中。将反应混合物在80℃下搅拌48小时。将溶剂在减压下除去，给出粗化合物。将粗产物通过二氧化硅快速色谱法(在石油醚中的(0→50％)乙酸乙酯)纯化，得到呈灰白色固体并作为非对映异构体的混合物和灰白色固体第一非对映异构体(320mg，峰-1)的标题化合物甲基4-(3,5-二氟-2-(1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯(580mg)。将混合物(580mg)通过制备型HPLC纯化(方法8)进一步纯化，给出灰白色固体第二非对映异构体(80mg，峰-2)。
使用制备型手性HPLC[方法11]，将峰-1：160mg和峰-2：80mg进一步分离为其对映异构体，以获得实例29的四种异构体。
实例29
使用手性HPLC[方法11]获得的50mg的呈白色固体的第一洗脱对映异构体。
LCMS RT＝1.445min；MS m/z 382.1[M-H]-；[方法7]
将此通过制备型HPLC纯化[方法9]进一步纯化，给出灰白色固体(25mg)。
手性HPLC：RT：8.905min；[手性分析方法3]
LCMS RT＝1.445min；MS m/z 382.1[M-H]-；[方法13]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),7.06(ddd,J＝11.6,8.8,2.6Hz,1H),6.82-6.68(m,1H),6.36(dq,J＝45.3,6.5Hz,1H),5.75-5.64(m,1H),5.63-5.50(m,1H),4.97(s,1H),3.45(s,3H),2.70-2.59(m,2H),2.25-2.09(m,2H),1.84(dd,J＝23.0,6.5Hz,3H)。
实例29b
使用手性HPLC[方法11]获得的55mg的呈白色固体的第二洗脱对映异构体。
手性HPLC：RT：10.197min；[手性分析方法3]
LCMS RT＝1.510min；MS m/z 382.1[M-H]-；[方法13]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),7.06(ddd,J＝11.6,8.8,2.6Hz,1H),6.82-6.67(m,1H),6.36(dq,J＝45.4,6.6Hz,1H),5.75-5.64(m,1H),5.63-5.48(m,1H),4.97(s,1H),3.45(s,3H),2.71-2.59(m,2H),2.27-2.16(m,2H),1.84(dd,J＝23.0,6.5Hz,3H)。
实例29c
使用手性HPLC[方法11]获得的24.2mg的呈白色固体的第三洗脱对映异构体。
手性HPLC：RT：14.455min；[手性分析方法3]
LCMS RT＝1.504min；MS m/z 382.0[M-H]-；[方法10]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),7.14-6.96(m,1H),6.75(d,J＝9.8Hz,1H),6.63(dq,J＝44.2,6.8Hz,1H),5.71(s,1H),5.59(s,1H),4.88(s,1H),3.47(s,3H),2.62(q,J＝4.5Hz,2H),2.25(t,J＝4.9Hz,2H),1.68(dd,J＝22.8,6.5Hz,3H)。
实例29d
使用手性HPLC[方法11]获得的32.4mg的呈白色固体的第四洗脱对映异构体。
手性HPLC：RT：18.561min[手性分析方法3]
LCMS RT＝1.514min；MS m/z 382.0[M-H]-；[方法10]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),7.05-7.00(m,1H),6.75(d,J＝9.7Hz,1H),6.62(dt,J＝44.2,6.6Hz,1H),5.71(s,1H),5.59(s,1H),4.88(s,1H),3.47(s,3H),2.62(q,J＝4.6Hz,2H),2.25(t,J＝4.9Hz,2H),1.68(dd,J＝22.8,6.4Hz,3H)。
实例30：甲基(R)-4-(2-乙基苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001171
步骤1：甲基4-(2-乙基苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001181
使用通用方法I合成标题化合物(使用2-乙基苯甲醛，0.2g，1.44mmol)。将粗产物通过二氧化硅柱色谱法(在DCM中的2％→3％甲醇)纯化，得到呈奶油色固体的标题化合物，甲基甲基4-(2-乙基苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(0.165g，43％)。LCMS Rt＝1.506min；MS m/z 331.85[M+H]+；[方法10]
将外消旋样品通过手性HPLC(柱：LUX纤维素-4(250MM X 21.2MM X5微米)；流动相：正己烷(A)EtOH:MeOH，1:1(B)，流速：15mL)分离为其对映异构体。
实例30
呈淡黄色固体的第一洗脱对映异构体(30mg)。
手性HPLC Rt＝5.952min(柱：LUX纤维素-4(150X4.6mmX5μ)；流动相：A＝正己烷，B：乙醇:甲醇(50:50)；流速：1.0mL/min)。
LCMS Rt＝1.53min；MS m/z 332.0[M+H]+；[方法7]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),7.13-7.10(m,4H),5.71(s,1H),5.59(s,1H),4.98(s,1H),4.82(s,2H),3.44(s,3H),2.98-2.92(m,2H),1.25(t,J＝7.8Hz,3H)。
实例30b
呈淡黄色固体的第二洗脱对映异构体(29mg)。
手性HPLC Rt＝7.581min(柱：LUX纤维素-4(150X4.6mmX5μ)；流动相：A＝正己烷，B：乙醇:甲醇(50:50)；流速：1.0ml/min)。
LCMS Rt＝1.528min；MS m/z 332.0[M+H]+；[方法7]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),7.13-7.10(m,4H),5.71(s,1H),5.59(s,1H),4.98(s,1H),4.82(s,2H),3.44(s,3H),2.98-2.92(m,2H),1.25(t,J＝7.8Hz,3H)。
实例31：甲基(R)-2-(二氟甲基)-4-(3-氟-2-((R或S)-1-氟乙基)苯基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001191
步骤1：5-乙基3-甲基2-(二甲氧基甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-6-甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760001192
将甲基4,4-二甲氧基-3-氧代丁酸酯(2.0g，11.35mmol)、3-氟-2-(1-氟乙基)苯甲醛(来自实例27，步骤3，1.93g，11.35mmol)和乙基(Z)-3-氨基丁-2-烯酸酯(1.46g，11.35mmol)在乙醇(20mL)中的搅拌溶液加热至90℃，持续16h。将反应混合物在减压下浓缩以得到呈棕色液体的粗化合物。将粗化合物通过二氧化硅快速色谱法(在己烷中的(9％→10％)乙酸乙酯)纯化，以得到呈黄色粘性液体的标题化合物。5-乙基3-甲基2-(二甲氧基甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-6-甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(1.7g，34％)。
将化合物无需进一步分析直接作为粗品使用
步骤2：3-乙基5-甲基4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-6-甲酰基-2-甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760001193
将5-乙基3-甲基2-(二甲氧基甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-6-甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(来自步骤1，1.7g，3.86mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。在0℃下，添加6N盐酸水溶液(15.0mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且将产物萃取到乙酸乙酯中。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并且将溶剂在减压下除去。将粗化合物通过二氧化硅快速色谱法(在己烷中的(12％→15％)乙酸乙酯)纯化，以得到呈黄色粘性液体的标题化合物的非对映异构体1(400mg，26％)和非对映异构体2(300mg，20％)。
非对映异构体1
LCMS Rt＝1.606min；MS m/z 392.0[M-H]-；[方法10]
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),9.05(s,1H),7.33(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H),7.10-7.02(m,2H),6.45-6.23(m,1H),5.19(s,1H),4.06-3.98(m,2H),3.63(s,3H),2.35(s,3H),1.76(dd,J＝22.8,6.6Hz,3H),1.13(t,J＝6.9Hz,3H)
非对映异构体2
LCMS Rt＝1.461min；MS m/z 392.0[M-H]-；[方法14]
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),9.07(s,1H),7.33(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H),7.10-7.03(m,2H),6.44-6.22(m,1H),5.18(s,1H),4.13-3.87(m,2H),3.67(s,3H),2.35(s,3H),1.74(dd,J＝22.8,6.6Hz,3H),1.11(t,J＝6.9Hz,3H)。
步骤3：5-乙基3-甲基2-(二氟甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-6-甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760001201
将3-乙基5-甲基4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-6-甲酰基-2-甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(来自步骤2的非对映异构体1，0.40g，1.01mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的搅拌溶液冷却至-78℃。在-78℃下，分批添加二乙基氨基三氟化硫(0.16mL，1.22mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物通过冰冷的水淬灭，并且将产物萃取到二氯甲烷中。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并且将溶剂在减压下除去以得到呈棕色粘性液体的标题化合物。5-乙基3-甲基2-(二氟甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-6-甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(0.3g)。
LCMS Rt＝1.632min；MS m/z 414.0[M-H]-；[方法10]
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.38(s,1H),7.58-7.23(m,2H),7.09-7.01(m,2H),6.43-6.22(m,1H),5.12(s,1H),4.08-3.97(m,2H),3.58(s,3H),2.34(s,3H),1.75(dd,J＝23.1,6.0Hz,3H),1.13(t,J＝6.9Hz,3H)
步骤4：3-乙基5-甲基2-(溴甲基)-6-(二氟甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯
Figure BDA0003980215760001211
将5-乙基3-甲基2-(二氟甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-6-甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(来自步骤3，0.3g，0.722mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的溶液冷却至-78℃。在-78℃下，添加三溴化吡啶鎓(0.254g，0.794mmol)，并且在相同温度下搅拌1h。然后将反应混合物在室温下搅拌30分钟。将反应混合物用冰冷的水稀释，并且将产物萃取到二氯甲烷中。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并且将溶剂在减压下除去。将粗化合物通过二氧化硅快速色谱法(在己烷中的(10％→12％)乙酸乙酯)纯化，以得到呈黄色粘性液体的标题化合物。3-乙基5-甲基2-(溴甲基)-6-(二氟甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(0.2g，56％)
LCMS Rt＝1.653min；MS m/z 491.95[M-H]-；[方法10]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.73(s,1H),7.40-7.34(m,2H),7.11-7.02(m,2H),6.40-6.24(m,1H),5.16(s,1H),4.73(dd,J＝34,9.2Hz,2H),4.14-4.05(m,2H),3.58(s,3H),1.75(dd,J＝22.4,6.4Hz,3H),1.18(t,J＝7.4Hz,3H)
步骤5：甲基2-(二氟甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯
Figure BDA0003980215760001221
在室温下，向3-乙基5-甲基2-(溴甲基)-6-(二氟甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(来自步骤4，0.1g，0.202mmol)在氯仿(5.0mL)中的溶液中添加氢氧化钾(0.005g，0.101mmol)。将反应混合物加热至60℃并搅拌8h。在室温下，添加四-正丁基碘化铵(0.007g，0.020mmol)，并且将反应混合物加热至65℃，持续12h。将反应混合物用水稀释，并且将产物萃取到二氯甲烷中。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并且将溶剂在减压下除去。将粗产物通过制备型HPLC(柱：ZORBAX XDB(250mmx21.2mm)，5.0μ；流动相：A＝水B＝ACN；流速：18ml/min)纯化，以得到呈奶油色固体的标题化合物(甲基2-(二氟甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯)(20mg，26％)。
LCMS Rt＝1.503min；MS m/z 384.05[M-H]-；[方法10]
将外消旋样品通过手性HPLC(柱：CHIRALPAK IJ，250MM X 4.3MM X 5微米；流动相：A＝己烷，B＝在MeOH中的0.1％ HCOOH:EtOH，1:1，流速：5mL)分离为其对映异构体。
实例31：
呈奶油色固体的手性HPLC的第一洗脱峰(3.4mg)。
手性HPLC Rt＝6.393min(柱：CHIRAL PAK IJ(250X4.6mm X 5μ)；流动相：A：正己烷B：乙醇；流速：1.0mL/min。
LCMS Rt＝1.502min；MS m/z 384.05[M-H]-[方法10]
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),7.64-7.28(m,2H),7.10-7.02(m,2H),6.44-6.22(m,1H),5.13(s,1H),4.88(s,2H),3.49(s,3H),1.80(dd,J＝22.8,6.0Hz,3H)
实例31b
呈奶油色固体的手性HPLC的第二洗脱峰(3mg)。
手性HPLC Rt＝7.605min(柱：CHIRAL PAK IJ(250X4.6mm X 5μ)；流动相：A：正己烷B：乙醇；流速：1.0mL/min。
LCMS Rt＝1.500min；MS m/z 384.05[M-H]-。[方法10]
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),7.59-7.32(m,2H),7.10-7.02(m,2H),6.42-6.25(m,1H),5.13(s,1H),4.88(dd,J＝19.2,16.4Hz,2H),3.49(s,3H),1.80(dd,J＝23.2,6.4Hz,3H)。
结晶形式
X射线粉末衍射测量(XRPD)
XRPD是用Bruker D8 Advance衍射计进行的，其配备有镍滤光片单色仪和LYNXEYE(1D模式)检测器，该检测器具有开角：2.948°，使用Cu-Kα1,2辐射(波长0.15419nm)。在管电压为40kV，管电流为40mA下记录衍射图，在环境条件下在2°到40°2-θ的角度范围内，其应用每步0.3秒的0.0164°(2-θ值)的步长。扫描时间为768秒。2-θ值的典型精度在±0.2°2-θ，优选地±0.1°2-θ的范围内。因此，例如，在标准条件下在大多数X射线衍射计上，例如在10.4°2-θ处出现的甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式A的衍射峰可以出现在从(10.4-0.2)°至(10.4+0.2)°2-θ，优选地从(10.4-0.1)°至(10.4+0.1)°2-θ范围内。
结晶形式A
在室温下，将粗甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(130g，0.35mol)在乙醚(520ml)中浆化3小时以获得悬浮液，将该悬浮液过滤。然后将湿饼在60℃下在真空下干燥72小时以提供甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(形式A)(100g，0.27mol)，产率为77％。
结晶形式B
通过将100mg的形式A溶解在足够的乙酸异丙酯中以获得溶液来制备结晶形式B。然后在55℃下添加足够的庚烷直至获得浑浊悬浮液。将悬浮液在55℃下保持一定时间，然后冷却至25℃，并且在25℃下平衡2至4小时。将固体部分分离并且通过XRPD分析，确认甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(形式B)的存在。
替代合成：将400mL庚烷添加到500mL反应器中，并且加热至55℃。在室温下，将20g形式A添加到60mL乙酸异丙酯中。在55℃下，将约2g的形式B作为种子添加到反应器中，并且将所得混合物在55℃下平衡30min。然后使用注射泵将形式A游离形式的乙酸异丙酯溶液在2小时内逐滴添加到反应器中。将所得混合物在55℃下平衡2小时。然后将混合物在6小时内冷却至25℃，然后在25℃下再平衡10小时。然后将悬浮液过滤，并且将湿饼在真空下在50℃下干燥4小时。获得了约21g的最终产物，通过XRPD确认其与形式B相符。通过KF测得的水含量为0.3％。
结晶形式C
将约100mg的甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯与各种化学计量的柠檬酸(碱:酸比率为4:1、3:1、2:1或1:1)在叔丁基甲基醚中结晶。获得的固体形式与甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯(形式C)相符。
替代合成：在25℃下，将40mL的庚烷添加到100mL EasyMax反应器中。在室温下，将2g的形式A溶解于5mL乙酸异丙酯中。然后在25℃下，将20mg的形式C的种子添加到反应器中。将所得混合物在25℃下平衡30min。使用注射泵将形式A游离形式的乙酸异丙酯溶液在2小时时间段内逐滴添加到反应器中。将所得混合物在25℃下平衡2小时。过程控制显示了形式C和水合物A的混合物。然后将固体材料在10mL乙酸异丙酯/庚烷(1/7)中浆化2天。然后将悬浮液过滤，并且在40℃下干燥18小时。最终产物的XRPD与形式C相符。通过KF测得的水含量为0.3％。
结晶形式水合物A
将1.97g的形式A称重到100mL EasyMax玻璃小瓶中并且分散在35mL的水中，将悬浮液在50℃下通过顶部搅拌在300rpm下搅拌3小时，然后以约0.07℃/min在6小时内冷却至25℃，之后在25℃下保持搅拌24小时。将固体材料通过过滤分离。固体形式的XRPD与水合物A相符。
替代合成：例如，通过将结晶形式B在丙酮、乙腈/水(99.5:0.5)、乙酸乙酯或水中的澄清饱和溶液蒸发结晶获得水合物A。水合物A通过TGA显示的质量损失为约4.1％，这接近于一水合物(计算的水含量为4.7％)。水合物A略微吸湿。在25℃下，10％至95％ RH之间的水吸收为约0.2％。
结晶形式水合物B
将2g的形式A称重到100mL EasyMax玻璃小瓶中并且分散在30mL的甲醇中，将悬浮液在25℃下通过顶部搅拌在300rpm下搅拌20小时。将固体材料通过过滤分离，并且将固体暴露于92％ RH下持续1天。如通过XRPD确认，该固体材料与水合物B相符。
替代合成：通过将在甲醇溶剂化物中的结晶形式B风干获得水合物B。水合物B通过TGA显示的质量损失为约4.4％，这也接近于一水合物(计算的水含量为4.7％)。水合物B在低于20％ RH时开始脱水，并且到0％ RH时失去约4.4％的水。在随后的相对湿度增加时，它在25℃下仅吸收约3％的水。
差示扫描量热法
使用TA Discovery DSC，在30C至300C的温度范围内，以10C/min的扫描速率，在氮气下，以25mL/min的流速进行差示扫描量热法。使用的样品质量为约2mg。
生物学数据
许多已知的钙通道激活剂显示出激活CaV1.2的复杂机制。这些分子不仅增加峰电流，而且具有增加细胞内钙浓度的另外的机制，例如，通过使通道的电压灵敏度向更负的膜电位偏移。图6通过描绘来自心外膜环境的模拟心脏动作电位并显示在电位(mV)相对于时间(ms)下CaV1.2激活的电压向更负的膜电位偏移的影响来展示这些另外的机制。这些另外的机制可能驱动或促进心血管效应，如血压升高、心率或收缩力的改变和/或QT延长导致的心律失常。例如，O’Hara-Rudy模型用于研究CaV1.2调节对动作电位持续时间和心律失常倾向的影响。已确定激活曲线中>12mV的超极化偏移(hyperpolarizing shift)可能潜在地导致>15％的QT延长和心律失常的风险增加。因此，将电压灵敏度的任何偏移最小化可能导致化合物发生QT延长和心律失常的风险降低。
具有式(I)的化合物是高效的CaV1.2激活剂，其具有将上述心血管风险最小化的生物物理特征。首先，具有式(I)的化合物通过将超极化偏移最小化至<9mV来限制它们对电压灵敏度的影响，从而减轻心律失常可能性。第二，具有式(I)的化合物使CaV1.2峰电流增加不超过2.5倍，从而限制了通道的过度激活。第三，具有式(I)的化合物不延迟CaV1.2通道失活(这是提摩西综合征心脏症状的潜在病理生理机制)。此外，具有式(I)的化合物被设计为通过在脑中不显示显著的外流而将脑暴露最大化。
CaV1.2-HEK293(AUX)细胞系的产生和维持
单克隆CaV1.2-HEK293(AUX)细胞系组成型表达人CaV1.2α1C(alpha1C)亚基(CACNA1C)并且强力霉素诱导型表达α2Δ(alpha2delta，α2Δ2)辅助亚基(CACNA2D2)和β2(beta2)辅助亚基(CACNB2)。为了产生细胞系，通过基因合成和克隆建立了表达载体pcDNA5.0/FRT-TO-CACNA2D2-FCS-P2A-CACNB2和pCMV6-entry-CACNA1C。在此，pcDNA5.0/FRT-TO质粒来自英杰公司(Invitrogen)，pCMV6-entry来自傲锐东源公司(Origene)，FCS代表弗林蛋白酶切割位点，P2A是衍生自猪捷申病毒-1的肽自切割序列，并且FRT是翻转酶识别靶位点。接下来，用pcDNA5.0/FRT-TO-CACNA2D2-FCS-P2A-CACNB2和翻转酶载体pOG44(英杰公司)转染亲本系Flp-InTM 293T-Rex(英杰公司)，以建立CACNA2D2-FCS-P2A-CACNB2表达盒向Flp-InTM 293T-Rex中预先工程化的FRT位点的靶向整合。然后用pCMV6-entry-CACNA1C转染该中间体细胞系以建立稳定的CACNA1C表达。在新霉素选择下实现克隆分离。选择具有良好电压依赖性钡电流(参见下面的电生理学方法)的细胞克隆(2-19B)用于表征CaV1.2激活剂。
为了维持该细胞系，将细胞每周传代两次。在每次传代时，将生长培养基(表6)完全除去，并且将细胞依次用10ml的D-PBS和5ml的温热TrypLETM Express酶(吉博克公司(Gibco))冲洗。冲洗后立即除去D-PBS和TrypLETM Express酶。然后将板在室温下放置3-5分钟。接下来，添加10mL温热的37℃完全培养基，以冲洗细胞生长表面并收集解离的细胞。对细胞进行计数并接种到新的烧瓶中，目标密度为2-3×106个细胞/T175cm2烧瓶。
表6.HEK293-CaV1.2(AUX)细胞的生长培养基
试剂 浓度
DMEM
热灭活的胎牛血清 10％
潮霉素B 100ug/ml 30
杀稻瘟菌素 10ug/ml
遗传霉素(G418) 200ug/mL
使用CaV1.2-HEK293(AUX)细胞系和QPatch对CaV1.2激活剂进行电生理学表征
在电生理学实验前24小时，将强力霉素(1μg/ml)添加到生长培养基(表6)中，并且共同应用25μM的维拉帕米(verapamil)，以防止钙流入引发的细胞死亡。就在实验前，细胞汇合应达到70％-80％。
为了收获细胞(从作为实例的T175cm2烧瓶中)，将生长培养基完全除去，并且将细胞用10mL的D-PBS冲洗。将D-PBS吸出并添加10mL的Detachin(Genlantis公司)，并且将板置于37℃培养箱中持续10分钟。将脱离的细胞放入15mL锥形管中，并以1000rpm旋转2分钟。将上清液除去，并且将细胞重悬于QPatch完全培养基(表7)中，以达到每次QPatch运行150-300万个细胞的所希望的细胞密度。每次实验运行使用1.5mL的细胞。
将细胞悬浮液取出至Sophion QPatch平台，该平台使用全细胞电压钳测量单孔QPlates上通过CaV1.2传导的钡电流。表7和表8中分别描述了细胞外和细胞内膜片钳溶液。剂量应答测定方案用于确定每种化合物的峰内向电流(Emax)和效力(EC50)的最大倍数变化。该方案有八个液体周期(liquid period)。第一个液体周期是稳定电流振幅，该电流振幅使用重复的200-ms电压脉冲从-80mV步进到0mV进行监测。第二个液体周期是在媒介物对照的存在下，使用单个20-ms电压脉冲从-80mV步进到0mV确定基线电流振幅。第三到第八个液体周期也使用单个20-ms电压脉冲从-80mV步进到0mV，用于确定对化合物治疗的6剂量应答。使用以下方程产生EC50：I浓度＝I基线+(I完整-I基线)*cn/(XC50 n+cn)，其中c是浓度，并且n是希尔系数常数。I完整是可达到的最大电流，并且I基线是0。通道生物物理学测定方案用于确定通道门控特性，包括电流-电压关系(IV曲线)、中途通道激活电压(half-way channelactivation voltage)(V1/2)、通道失活率(tau)和尾电流振幅。其中，V1/2由拟合方程：G(V)＝GVmin+(GVmax-GVmin)/(1+exp(-(V-V1/2)/V斜率))得出，其中G代表电导，GVmin等于0，GVmax是最大电导，并且Vslope是斜率因子。G(V)是由方程G(V)＝I(V)/(V-0.06)预先计算的，对于每个实验应用的去极化电位(V)和相应的电流振幅(I(V))，方程中的0.06是实验确定的逆转电位，单位是伏。该方案有四个液体周期。第一个液体周期是稳定电流振幅，该电流振幅使用重复的200-ms电压脉冲从-80mV步进到0mV进行监测。在电流振幅稳定后，通过对电流轨迹的失活阶段进行单指数拟合，确定失活tau的基线值。第二个液体周期是测量在媒介物对照的存在下构成电流-电压关系的基线值，并且第三个液体周期是测量化合物对电流-电压关系的作用。在这两个液体周期的每一个的期间，给予细胞十个20-ms电压脉冲，每个脉冲从-80mV步进到增量值，该增量值范围从-55mV到+35mV(增量大小为10mV)。在第四个液体周期期间，再次递送从-80mV到0mV的200-ms电压脉冲，以测量化合物对失活tau的作用。
表6.QPatch完全培养基：
试剂 浓度
CHO-无血清培养基(SFM)
1M HEPES 25mM
表7.用于QPatch实验的细胞外溶液
Figure BDA0003980215760001281
表8.用于QPatch实验的细胞内溶液。该溶液是80％第二部分(储存于-80℃)和20％第一部分的混合：
第一部分：
Figure BDA0003980215760001291
第二部分：
Figure BDA0003980215760001292
评估野生型小鼠中化合物暴露-cFos诱导(PK-PD)关系
动物维持与伦理。将所有的动物都在调节的温度和光照循环(22℃，12小时的光照/12小时的黑暗循环)下圈养，不受限制地获得食物和水。所有动物实验均按照诺华生物医学研究所(Novartis Institutes for BioMedical Research,Inc.)(美国马萨诸塞州剑桥市)的机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的实验室动物护理和使用机构指南进行。
化合物施用和脑组织收集。野生型C57BL/6J雄性小鼠获得自杰克森实验室(Jackson laboratories)(巴尔港，缅因州)。在八周龄的雄性小鼠中评估了本披露的CaV1.2激活剂的急性单剂量作用(每种化合物，n＝6只小鼠)。将每种化合物溶解于10％PEG300、10％ Solutol、10％ Cremophore EL和70％磷酸盐缓冲盐水中，并且根据化合物，以1mg/kg至30mg/kg的浓度腹膜内(i.p.)施用。在深度麻醉下通过放血在化合物施用后一小时对动物实施安乐死。将血液收集在EDTA管中用于药物水平的下游分析。将脑从颅骨中迅速取出，并且将大脑皮质和小脑进行局部解剖。将小脑样品在液氮中速冻，以评估化合物暴露。将用于cFos评估的皮质样品置于500μl的RNAlater溶液(赛默飞世尔公司(ThermoFisher))中，以保持样品中RNA的完整性。将样品在4℃下保持在RNAlater中至少24小时，然后在处理前移至-80℃保存。
对cFos mRNA诱导进行定量。使用96孔板的组织研磨机(TissueLyser)系统(凯杰公司(Qiagen))进行组织匀浆。首先，将冷冻的皮质样品解冻，从RNAlater中取出，并与含有0.5％试剂DX和一个5mm组织研磨机金属珠的缓冲液RLT一起放入组织研磨机管中。将组织研磨机管装入组织研磨机II组织匀浆器进行3轮匀浆，每轮匀浆以30Hz珠磨频率持续5分钟。使用RNeasy96Plus试剂盒(凯杰公司)从匀浆中纯化总RNA，通过Nanodrop(赛默飞世尔公司)对RNA浓度和A260/A280比率进行量化，并且将所有样品相对于100ng/μL浓度归一化。使用Superscript III第一链合成超级混合物试剂盒(Superscript III First-strandsynthesis SuperMix Kit)(赛默飞世尔公司)，将RNA反转录为cDNA。对于每个样品，将6μL的RNA(共600ng)与1μL的寡聚dT和1μL的退火缓冲液混合，并加热至65℃，持续5分钟。接下来，添加10μL的2X第一链反应混合物(First-Strand Reaction Mix)和2μL的酶混合物，使达到20uL的总反应体积。将样品加热至50℃持续50分钟，然后加热至85℃持续5分钟以完成cDNA合成。
使用Quantitect Multiplex RT-PCR试剂盒(凯杰公司)以384孔测定形式对cDNA样品进行定量PCR。每个PCR孔含有2μl的cDNA(共60ng)、10μL的RT-PCR预混液、1μL的cFosFAM Taqman探针(Mm00487425_m1(FAM)#4351368)、1μL的GAPDH VIC Taqman探针(Mm99999915-g1(VIC)#4448486)、0.2μl的Multiplex RT混合物和5.8μl的无RNA酶水。在ViiA7实时PCR系统(赛默飞世尔公司)上，将样品加热至95℃持续15分钟，然后在94℃下持续45秒和60℃下持续45秒之间循环，进行45个循环。将cFos Ct值导出，相对于GAPDH Ct值归一化，并使用Δ-ΔCt相对定量方法转换为表达中的相对倍数变化。通过单因素方差分析，随后通过Tukey事后比较分析化合物治疗与媒介物之间的cFos倍数变化。
对化合物暴露进行定量。对于每1g的组织，将小脑组织样品以4ml的20％乙腈和80％磷酸盐缓冲盐水进行匀浆(5x稀释)。根据组织类型，使用以下三种方法中的一种对组织进行匀浆：手持探针系统、带有5mm钢珠的组织研磨机系统，频率为30s-1，持续4min、或OMNI Bead Ruptor Elite匀浆器，持续30秒到1分钟。将组织样品添加到96孔板中(12.5uL样品)，并且通过质谱法进行定量处理。
结果
表9：化合物数据
Figure BDA0003980215760001311
Figure BDA0003980215760001321
Qpatch以6点剂量应答进行，每个浓度下有10次单独的测定。除非说明只有一次实验重复(n＝1)
*n＝2
#n＝3
nd＝未确定
对比实例
其他CaV1.2激活剂是已知的，然而这些化合物不那么有效和/或不具有激活通道所需的希望的生物物理特性，并且没有足够的脑暴露，而同时将心血管风险(如血压升高、心率或收缩力的改变和/或QT延长导致的心律失常)最小化。
表10.与其他已知CaV1.2激活剂的对比实例
Figure BDA0003980215760001331
Figure BDA0003980215760001341

Claims (42)

1.一种根据式(I)的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物
Figure FDA0003980215750000011
其中：
A是O或CH2；
R1是H或F；
R2是H或F；并且
R3是OCHF2、甲基、乙基、或环丙基，其中的每一个任选地被1个至3个F取代。
2.如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物，所述化合物为具有式(Ia)的化合物
Figure FDA0003980215750000012
3.如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物，所述化合物为具有式(Ib)的化合物
Figure FDA0003980215750000013
4.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中A是O。
5.如权利要求4所述的化合物，其中R2是F。
6.如权利要求4所述的化合物，其中R2是H。
7.如权利要求4所述的化合物，其中R3是OCHF2。
8.如权利要求4所述的化合物，其中R3是甲基、乙基、或环丙基，其中的每一个被1个至3个F取代。
9.如权利要求4所述的化合物，其中R3是CHF2或CF3。
10.如权利要求4所述的化合物，其中R3是被1个或2个F取代的乙基，或者未被取代的或被2个F取代的环丙基。
11.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中A是CH2。
12.如权利要求11所述的化合物，其中R2是F。
13.如权利要求11或权利要求12所述的化合物，其中R3是被1个至3个F取代的乙基。
14.一种根据式(III)的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物
Figure FDA0003980215750000021
其中：
A是O或CH2；
R1是H或F；
R2是H或F；
R3是OCHF2、甲基、乙基、或环丙基，其中的每一个任选地被1个至3个F取代；并且
R4是H或F。
15.如权利要求14所述的化合物，其中A是O。
16.如权利要求15所述的化合物，其中R2是F。
17.如权利要求15所述的化合物，其中R2是H。
18.如权利要求15所述的化合物，其中R3是OCHF2。
19.如权利要求15所述的化合物，其中R3是甲基、乙基、或环丙基，其中的每一个任选地被1个至3个F取代。
20.如权利要求15所述的化合物，其中R3是CHF2或CF3。
21.如权利要求15所述的化合物，其中R3是任选地被1个或2个F取代的乙基，或者未被取代的或被2个F取代的环丙基。
22.如权利要求15所述的化合物，其中R3是乙基。
23.如权利要求15所述的化合物，其中R4是F。
24.如权利要求15所述的化合物，其中R4是H。
25.如权利要求14所述的化合物，其中A是CH2。
26.如权利要求23所述的化合物，其中R2是F。
27.如权利要求23所述的化合物，其中R3是被1个至3个F取代的乙基。
28.如权利要求23所述的化合物，其中R4是F。
29.如权利要求23所述的化合物，其中R4是H。
30.如权利要求1所述的化合物，其选自由以下组成的组：
甲基(R)-4-(2-((R)-2,2-二氟环丙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((S)-2,2-二氟环丙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
(R)-4-(2-环丙基-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((R)-2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((S)-2,2-二氟环丙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3,5-二氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3,5-二氟-2-((S)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((S)-1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3-氟-2-((S)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(二氟甲氧基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-环丙基-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(二氟甲基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((R)-1,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((S)-1,2-二氟乙基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(二氟甲基)-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基4-(2-(二氟甲氧基)-5-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-环丙基-5-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-环丙基苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基4-(2-乙基苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；以及
甲基(R)-2-(氟甲基)-5-氧代-4-(2-(三氟甲基)苯基)-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
31.如权利要求1所述的化合物，其选自由以下组成的组：
乙基(R)-4-(2-((R)-1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-((S)-1,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
(R)-4-(3-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-环丙基-3,5-二氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-(2,2-二氟乙基)-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(3-氟-2-((S)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(R)-4-(2-环丙基-3-氟苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；
甲基(S)-4-(3,5-二氟-2-((S)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；以及
甲基(S)-4-(3,5-二氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊并[b]吡啶-3-甲酸酯；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
32.如权利要求14所述的化合物，其中所述化合物是甲基2-(二氟甲基)-4-(3-氟-2-(1-氟乙基)苯基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
33.一种甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶形式。
34.如权利要求33所述的结晶形式，其中所述形式是形式A。
35.如权利要求33所述的结晶形式，其中所述形式是形式B。
36.如权利要求33所述的结晶形式，其中所述形式是形式C。
37.一种甲基(R)-4-(3-氟-2-((R)-1-氟乙基)苯基)-2-(氟甲基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-甲酸酯的结晶水合物形式。
38.如权利要求37所述的结晶水合物形式，其中所述水合物形式是水合物A。
39.如权利要求37所述的结晶水合物形式，其中所述水合物形式是水合物B。
40.一种药物组合物，其包含如权利要求1-32中任一项所述的化合物和药学上可接受的赋形剂。
41.一种用于治疗精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、物质使用障碍、ADHD、费伦-麦克德米德综合征、孤独症谱系障碍、多发性硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、布鲁格达综合征、短QT综合征、或早期复极综合征的方法，所述方法包括向需要治疗的患者施用有效量的如权利要求1-32中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
42.一种用于治疗精神分裂症、双相障碍、重度抑郁障碍、物质使用障碍、ADHD、费伦-麦克德米德综合征、孤独症谱系障碍、多发性硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、布鲁格达综合征、短QT综合征、或早期复极综合征的方法，所述方法包括向需要治疗的患者施用如权利要求1-32中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
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