CN115813929B - S63845在制备抗流感病毒感染药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，尤其涉及S63845在制备抗流感病毒感染药物中的应用。本发明证实了S63845在细胞水平和动物水平均能抗流感病毒感染，S63845呈剂量依赖的抑制流感病毒在细胞中复制；S63845除了能够抑制病毒在细胞中复制外，还能抑制病毒N蛋白在细胞中的表达；S63846可以抑制流感病毒感染导致的小鼠体重降低和死亡率的发生；S63845还能够抑制肺组织中流感病毒的复制和病毒NP蛋白的表达。基于此，本发明为临床上流感病毒的治疗提供一种安全高效且毒副作用小的小分子化合物。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种S63845在制备抗流感病毒感染药物中的应用。
背景技术
流感病毒属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，流感病毒属。包括人流感病毒和动物流感病毒。根据病毒核蛋白(NP)和基质蛋白(M)的抗原特性及基因特性的不同，将流感病毒分为A、B、C三种型。A型流感病毒全基因组由8条大小不等的单股负链RNA组成。根据病毒粒子表面糖蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的不同，A型流感病毒可进一步分为17个H(H1-H17)和10个N(N1-N10)亚型。人流感病毒主要是H1、H2和H3亚型。高致病性禽流感病毒多为H5、H7和H9亚型，其中以H5N1亚型致死率最高。B型流感病毒仅在人和海豹中发现，一般仅引起局部流行。C型流感病毒可感染人类和猪，多以散在形式存在，主要感染婴幼儿，一般不引起大流行。
流感病毒通过其表面的刺突HA识别和结合宿主细胞表面的唾液酸受体，以内吞体的形式进入到宿主细胞。在内吞体的酸性pH条件下，病毒HA蛋白的构象发生变化，使病毒囊膜与细胞膜融合。低pH环境使病毒粒子的核酸释放到被感染细胞的胞浆，随后转到细胞核内进行基因组的复制和转录，转录生成的mRNA由核内转移到胞浆，翻译出病毒的结构蛋白和非结构蛋白。病毒核酸和蛋白会组装成新的病毒粒子，新生成的子代病毒通过神经氨酸酶(NA)水解细胞表面的糖蛋白，促使病毒粒子从出芽位点释放出来，完成整个生命周期。
A型流感病毒是人畜共患传染病病原体，并且可在多个动物宿主间连续不断的传播和变异。新型病毒株的出现可能会导致人类大规模流行性疾病的发生。最令人担忧的是源于其他物种的新变异毒株的产生(例如猪源流感H1N1病毒的产生)，从而引起世界范围内的疫情爆发。一些抗病毒的化合物已经被研发出来，并且已经被运用到临床流感预防和治疗当中。目前FDA批准上市的抗流感药物有四种：金刚烷胺、金刚乙胺、奥司他韦、扎那米韦。前两种属于M2离子通道抑制剂，通过抑制病毒核酸释放到胞质从而抑制病毒的复制；后两种属于NA活性抑制剂，通过抑制病毒粒子的释放和扩散抑制病毒的复制。然而，由于药物毒性和病毒突变体的耐药性，这些药物中大多数的疗效有限。而且当新的疫情爆发时，新病毒毒株的鉴定以及预防或治疗药物的鉴定配送都会有长时间的延时，因此对流感病毒感染药物研发迫在眉睫。
S63845是一种新型的、选择性的细胞抗凋亡蛋白(MCL-1)抑制剂。S63845通过抑制MCL-1，诱导癌细胞系的死亡，因此具有有效的抗肿瘤活性。在小鼠实验中，S63845耐受良好，没有明显的体重减少。经查阅相关资料，未发现S63845能够抑制流感病毒复制的相关报道。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种抗流感病毒的药物，该药物包括有效成分S63845和药学上可接受的载体，S63845具备抗流感病毒的效果。
进一步地，抗流感病毒的药物为固体制剂，优选地所述固体制剂包括片剂、胶囊、丸剂、注射用制剂、缓释或控释制剂。
S63845在制备用于预防和/或治疗由流感病毒感染引起的疾病的药物中的应用。
进一步地，S63845通过抑制流感病毒复制或抑制病毒NP蛋白表达治疗由流感病毒感染引起的疾病。
进一步地，S63845能够抑制肺组织中流感病毒复制或流感病毒NP蛋白表达。
进一步地，S63845呈剂量依赖的抑制流感病毒在细胞中复制。
进一步地，S63846可以抑制流感病毒感染导致的体重降低。
进一步地，S63846可以用于提高流感病毒感染后的生存率。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
1.药物结构相对简单；
2.药物在3μM低浓度条件下就可以发挥抗流感病毒的作用；
3.药物使用成本低，使用简单方便；
4.药物在细胞和动物水平上没有明显副作用。
附图说明
图1A S63845在A549细胞中抑制流感病毒的拷贝数
图1B S63845在A549细胞中抑制NP蛋白的表达水平
图2为一种S63845呈剂量依赖的抑制流感病毒在A549细胞中复制的检测示意图。
图3为一种小鼠体重变化的检测示意图。
图4为一种小鼠生存率的检测示意图。
图5A S63845在肺组织中抑制流感病毒的拷贝数
图5B S63845在肺组织中抑制NP蛋白的表达水平
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明，各实施例及试验例中所用的设备和试剂如无特殊说明，均可从商业途径得到。此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
根据本申请包含的信息，对于本领域技术人员来说可以轻而易举地对本发明的精确描述进行各种改变，而不会偏离所附权利要求的精神和范围。应该理解，本发明的范围不局限于所限定的过程、性质或组分，因为这些实施方案以及其他的描述仅仅是为了示意性说明本发明的特定方面。实际上，本领域或相关领域的技术人员明显能够对本发明实施方式作出的各种改变都涵盖在所附权利要求的范围内。
实施例1
S63845在细胞水平抗流感病毒感染
该实施例中A549细胞购自于美国模式培养物集存库(ATCC)，并且由本实验室保存。流感病毒(H1N1，PR8毒株)，由本实验室保存。
该实施例中DMEM培养基购自GIBCO公司；GAPDH抗体购自sigma；IAV-NP抗体购自GeneTex；S63845购自Selleck。
该实施例中实验方法如下：
先加入MCL-1的特异性抑制剂S63845(3μM)处理A549细胞4小时，再加入流感病毒(MOI＝0.1)感染细胞48小时。通过使用荧光绝对定量PCR的方法检测细胞上清中流感病毒的拷贝数。使用的模板是流感病毒的NP基因，引物序列如下：Forward：5’-ATCACTCACTGAGTGACATC-3’，Reverse:5’-TCGTCCAATTCCACCAATCA-3’。
实验结果结果显示：和对照处理细胞相比，S63845处理后，细胞上清中流感病毒的拷贝数显著性降低(如图1A所示),同样的，western-blot结果也证明细胞中NP蛋白的表达水平也显著性降低(如图1B所示)。
另外，申请人使用不同浓度的S63845(分别是0、0.3μM、3μM和30μM)处理A549细胞4小时，再加入流感病毒(MOI＝0.1)感染细胞48小时。通过使用荧光绝对定量PCR的方法检测细胞上清中流感病毒的拷贝数。使用的模板是流感病毒的NP基因，引物序列如下：Forward：5’-ATCACTCACTGAGTGACATC-3’，Reverse:5’-TCGTCCAATTCCACCAATCA-3’。
实验结果结果显示：S63845以剂量依赖的方式抑制细胞上清中流感病毒的拷贝数(图2)。
实施例2S63845在动物水平抗流感病毒感染
该实施例中4到6周龄的C57BL/6雄鼠购自于广东省医学实验动物中心。流感病毒(H1N1，PR8毒株)，由本实验室保存。
该实施例中GAPDH抗体购自sigma；IAV-NP抗体购自GeneTex；S63845购自Selleck。
该实施例实验方法如下所示：
4到6周龄的C57BL/6雄鼠共计32只，随机分为4个小组，每组小鼠8只。
第1组小鼠通过腹腔注射200μl的S63845(12.5mg/kg),90分钟后，通过滴鼻注入50μlPBS，该组小鼠命名为ctrl+S63845；
第2组小鼠通过腹腔注射200μl的S63845(12.5mg/kg),90分钟后，通过滴鼻注入50μl流感病毒(1LD50)，该组小鼠命名为IAV+S63845；
第3组小鼠通过腹腔注射200μl的对照溶剂(100μl的PEG300加100μl的PBS),90分钟后，通过滴鼻注入50μlPBS，该组小鼠命名为ctrl+PEG300；
第4组小鼠通过腹腔注射200μl的对照溶剂(100μl的PEG300加100μl的PBS),90分钟后，通过滴鼻注入50μl流感病毒(1LD50)，该组小鼠命名为IAV+PEG300。
4天后，第1组和第2组小鼠腹腔再次注射200μl的S63845(12.5mg/kg)，第3组和第4组小鼠腹腔再次注射200μl的对照溶剂(100μl的PEG300加100μl的PBS)。从感染流感病毒开始，每天称量上述4组小鼠的体重，记录小鼠的生存率。
实验结果显示：和第3组ctrl+PEG300小鼠相比，第1组小鼠ctrl+S63845体重没有明显变化(图3)，生存率也没有变化(图4)。证明S63845对小鼠体重和生存率是没有影响的。和第3组ctrl+PEG300小鼠相比，第4组IAV+PEG300小鼠体重从第二天开始出现下降，至第9天降至最低(图3)，并且在第7天开始出现小鼠死亡，最后第四组小鼠的死亡率为66.7％(图4)。以上结果证明流感病毒感染小鼠模型构建成功。和第4组IAV+PEG300小鼠相比，第2组IAV+S63845小鼠体重降低减缓(图3)，仅仅在第9天出现1只小鼠死亡，死亡率为16.7％(图4)。
以上结果证明S63846可以抑制流感病毒感染导致的小鼠体重降低和死亡率的发生。
另外，申请人在流感病毒感染小鼠的第7天，分别取上述4组小鼠的肺组织进行检测。使用荧光绝对定量PCR的方法检测肺组织中流感病毒的拷贝数。使用的模板是流感病毒的NP基因，引物序列如下：Forward：5’-ATCACTCACTGAGTGACATC-3’，Reverse:5’-TCGTCCAATTCCACCAATCA-3’。实验结果结果显示：和对照组小鼠(IAV+PEG300)相比，S63845处理后，肺组织中流感病毒的拷贝数显著性降低(如图5A所示)，同样的，western-blot结果也证明细胞中NP蛋白的表达水平也显著性降低(如图5B所示)。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.S63845在制备用于预防和/或治疗由流感病毒感染引起疾病的药物中的应用；
S63845的分子式为：C39H37ClF4N6O6S；
S63845的结构式如下：。
2.如权利要求1所述的应用，S63845通过抑制流感病毒复制或抑制病毒NP蛋白表达治疗由流感病毒感染引起的疾病。
3.如权利要求1所述的应用，S63845能够抑制肺组织中流感病毒复制或流感病毒NP蛋白表达。
4.如权利要求1所述的应用，S63845呈剂量依赖的抑制流感病毒在细胞中复制。
5.如权利要求1所述的应用，S63846可以抑制流感病毒感染导致的体重降低。
6.如权利要求1所述的应用，S63846可以用于提高流感病毒感染后的生存率。
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