CN115814060A

CN115814060A - 胸腺素β10在制备修复肝损伤药物中的用途

Info

Publication number: CN115814060A
Application number: CN202211048982.2A
Authority: CN
Inventors: 张国坤; 李春义
Original assignee: Changchun University of Science and Technology
Current assignee: Changchun University of Science and Technology
Priority date: 2022-08-30
Filing date: 2022-08-30
Publication date: 2023-03-21

Abstract

本发明公开了胸腺素β10在制备修复肝损伤药物中的用途，涉及基因工程技术领域；Tβ‑10在治疗和修复肝损伤方面具有有效的效果，特别是在酒精性肝损伤、肝炎和肝纤维化方面具有显著的修复效果；经检验，Tβ‑10以剂量依赖性的方式显著减轻了CCl4诱导的大鼠肝损伤，包括：①显著增加了肝损伤所致的体重下降；②降低了肝组织的病理病变，减少了胶原的生成和沉积、羟脯氨酸(胶原的主要成分)和丙二醛的水平；③改善了肝功能，包括降低血清ALP、ALT、AST和TBIL水平和提高TP和ALB水平；④促进了肝实质细胞的增值分裂(PCNA的表达)，降低了HSC激活因子TGFβ1和效应因子α‑SMA的表达水平。

Description

胸腺素β10在制备修复肝损伤药物中的用途

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是胸腺素β10在制备修复肝损伤药物中的用途。

背景技术

肝脏是物质代谢的重要器官，具有分泌、排泄、合成、生物转化及免疫等多种生理功能。当肠黏膜屏障被破坏、外源性毒素入侵时，肝生物转化作用减弱，肝脏受损严重。很多因素都可以引起肝脏损伤，包括外伤导致的肝损伤、化学性肝损伤，肝损伤发病率高，是一种难以治愈的疾病。

肝损伤的终末形式一般为纤维化，它是几乎所有形式的慢性肝病的常见疤痕反应，包括病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、酒精性和非酒精性脂肪肝以及胆道梗阻性疾病等。肝纤维化的基本特征是细胞外基质(ECM)过度积聚，其主要由肝星状细胞(HSC)产生。健康肝脏中的HSC保持静止，但其会被持续的肝损伤所激活转化为肌成纤维细胞，并开始表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原；肝脏中不适当的高水平转化生长因子-β1(TGF-β1)是导致HSC激活和转化为肌成纤维细胞的关键。因此，抑制TGFβ1信号的转导是靶向治疗肝纤维化的关键手段。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够用于修复肝损伤的物质，即胸腺素β10在制备修复肝损伤药物中的应用，以实现修复肝损伤的目的。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

胸腺素β10在制备修复肝损伤药物中的用途。

作为本申请的一些可实施方式，在修复大鼠肝损伤时，所述胸腺素β10的浓度为25μg/kg-50μg/kg。

作为本申请的一些可实施方式，在修复大鼠肝损伤时，所述胸腺素β10的浓度为50μg/kg。

作为本申请的一些可实施方式，所述肝损伤为酒精性肝损伤、肝炎和肝纤维化中的任意一种。

本发明的有益效果是：

本发明提供了一种物质——Tβ-10，其在治疗和修复肝损伤方面具有有效的效果，特别是在酒精性肝损伤、肝炎和肝纤维化方面具有显著的修复效果；经检验，Tβ-10以剂量依赖性的方式显著减轻了CCl4诱导的大鼠肝损伤，改善了大鼠的生存质量，具体包括：①显著增加了肝损伤所致的体重下降；②降低了肝组织的病理病变，减少了胶原的生成和沉积、羟脯氨酸(胶原的主要成分)和丙二醛的水平；③改善了肝功能，包括降低血清ALP、ALT、 AST和TBIL水平和提高TP和ALB水平；④促进了肝实质细胞的增值分裂(PCNA的表达)，降低了HSC激活因子TGFβ1和效应因子α-SMA的表达水平。

附图说明：

图1：Tβ-10对肝损伤大鼠体重和肝指数的影响；

其中，图1a为Tβ-10对肝损伤大鼠体重影响图；图1b为Tβ-10对肝损伤大鼠肝指数影响图；

图2：Tβ-10对肝损伤大鼠肝组织的形态和HYP水平及MDA水平的影响；

其中，图2a为Tβ-10对肝损伤大鼠肝组织的形态影响图；图2b为Tβ-10对肝损伤大鼠的HYP水平影响图；图2c为Tβ-10对肝损伤大鼠的MDA水平影响图；图2d为Tβ-10 对肝损伤大鼠的ALT影响图；图2e为Tβ-10对肝损伤大鼠的AST影响图；图2f为Tβ-10 对肝损伤大鼠的TBIL影响图；

图3：Tβ-10对肝损伤大鼠血清肝功指标的影响；

其中，图3a为Tβ-10对肝损伤大鼠TP的影响图；图3b为Tβ-10对肝损伤大鼠的 ALB影响图；图3c为Tβ-10对肝损伤大鼠的ALP影响图；

图4：Tβ-10对肝组织中TGF-β1、α-SMA和PCNA表达的影响；

其中，图4a为免疫组化染色图；图4b-4d为免疫组化染色结果的统计学分析。

具体实施方式

下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

肝损伤的终末形式一般为纤维化，肝纤维化的基本特征是细胞外基质(ECM)过度积聚，其主要由肝星状细胞(HSC)产生，健康肝脏中的HSC保持静止，但其会被持续的肝损伤所激活转化为肌成纤维细胞，并开始表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原；肝脏中不适当的高水平转化生长因子-β1(TGF-β1)是导致HSC激活和转化为肌成纤维细胞的关键，因此，抑制TGFβ1信号的转导是靶向治疗肝纤维化的关键手段；胸腺素β10 (Thymosinβ10，Tβ-10)是胸腺素β家族的重要一员，相对分子量约为5kD左右，由40-45 个氨基酸残基组成，参与许多细胞过程，如细胞运动、炎症、血管生成和细胞存活。经研究发现，Tβ-10能够下调TGFβ1信号的转导，因此，推测胸腺素β10可能对抑制HSC激活和转化为肌成纤维细胞中具有重要作用，从而可能对肝纤维化等肝纤维化疾病具有治疗作用。

基于此，本发明提出了胸腺素β10在制备修复肝损伤药物中的用途。

为了进一步提高所述胸腺素β10在治疗和修复大鼠肝损伤中的效果，作为本申请的一些可实施方式，对所述胸腺素β10的浓度作出了进一步限定，即在修复大鼠肝损伤时，所述胸腺素β10的浓度为25μg/kg-50μg/kg。在治疗肝损伤过程中，须严格控制胸腺素β10的用量，浓度太低难以达到治疗和修复效果，浓度太高，则对大鼠产生毒副作用，难以实现治疗肝损伤的目的，经实验证明，胸腺素β10在25μg/kg-50μg/kg时，其具有良好的治疗和修复大鼠肝损伤的效果，同时，在该浓度下不会产生毒副作用。

为了进一步提高所述胸腺素β10在治疗和修复大鼠肝损伤中的效果，作为本申请的一些可实施方式，对所述胸腺素β10的浓度作出了进一步限定，即在修复大鼠肝损伤时，所述胸腺素β10的浓度为50μg/kg。

为了进一步提高所述胸腺素β10在修复肝损伤中的效果，作为本申请的一些可实施方式，对所述肝损伤的种类作出了进一步限定，即所述肝损伤为酒精性肝损伤、肝炎和肝纤维化中的任意一种。

本发明所使用的动物模型为肝纤维化，而酒精性肝损伤和肝炎等发展到一定程度会导致肝纤维化，因此胸腺素β10对肝纤维化以及酒精性肝损伤和肝炎均具有极为有效的修复效果。

下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下。

实施例

取8周龄雌性SD大鼠，以0.5ml/kg的剂量腹腔注射CCl₄溶液(CCl₄和橄榄油1:1混合)，每周两次，共8周，建立肝损伤(纤维化)模型。8周后，建模成功的大鼠以尾静脉给药的方式，分别注射25μg/kg和50μg/kg的胸腺素β10(Thymosinβ10，Tβ-10)进行治疗；同时设置正常对照组(Control：健康大鼠，给予PBS处理)和阴性对照组(PBS：给予 PBS处理)，每组7只。

治疗4周后，安乐死大鼠，并进行如下检测：

1.检测大鼠体重和肝指数。

用Tβ-10治疗CCl₄诱导的大鼠肝损伤4周后，检测大鼠体重和肝指数(肝重/体重)。结果显示：经CCl₄诱导的大鼠体重显著下降(P＜0.01)、肝指数显著上升(P＜0.001)；而将Tβ-10治疗4周后，增加了肝损伤所致的体重下降，特别是50μg/kg剂量的Tβ-10显著增加了大鼠体重(P＜0.01；图1a)；同时50μg/kg剂量的Tβ-10治疗还降低了肝指数的上升(P＜0.01；图1b)，并且呈剂量依赖性。

2.肝功能指数检测

采血，分离血清，对肝功能指标(总蛋白，TP；白蛋白，ALB；碱性磷酸酶，ALP；丙氨酸氨基转移酶，ALT；天冬氨酸转氨酶，AST；TBIL，总胆红素)进行检测，如图2所示。

结果显示：经CCl₄诱导的大鼠肝功能明显下降，具体表现为血清中的ALP、ALT、AST和TBIL水平上升，以及TP和ALB水平下降；而经Tβ-10治疗后，ALP、ALT、 AST、TBIL、TP、ALB具有显著的逆转，并呈现出剂量依赖的方式，特别是50μg/kg剂量的Tβ-10已与对照组(Control)相近。

3.组织学检测

将肝脏分为两部分：一部分用4％多聚甲醛固定后进行组织形态检测(如图3a)；另一部分用于检测羟脯氨酸(HYP)和丙二醛(MDA)的水平(如图3b和3c)。

组织学检查结果显示：经CCl₄诱导的大鼠肝脏中心静脉壁变厚、纤维增生、炎性细胞浸润、胶原沉积和脂肪变性等(图3a)，而Tβ-10治疗以剂量依赖的方式减轻了静脉壁变厚、纤维增生、炎性细胞浸润、胶原沉积和脂肪变性等组织病变。此外，非治疗组(PBS) 中大鼠肝组织中HYP(胶原的主要成分)和MDA(导致脂肪变性的主要因素)的水平(图 3b，3c)也显著上升，Tβ-10也显著降低了二者的水平(P＜0.01；图3b，3c)。

其中，上述组织学检测中：HE主要用于总体的观察，Masson和Sirius red用于纤维增生和胶原沉积的观察，目标区域分别表现为蓝色和红色。

4.免疫组化实验

免疫组化实验检测了肝组织中转化生长因子β1(TGF-β1，诱导肝损伤及纤维化)、α- 平滑肌肌动蛋白(α-SMA，诱导肝脏收缩及纤维化)及PCNA(增殖分裂细胞标志物)的表达，如图4所示。

结果显示：Tβ-10显著降低了TGF-β1和α-SMA的表达水平(图4a，4b，4c)，同时， Tβ-10增加了肝实质细胞中PCNA的表达(图4d)。

综上：本发明通过实验1-4证明Tβ-10以剂量依赖性的方式显著减轻了CCl4诱导的大鼠肝损伤，改善了大鼠的生存质量，具体包括：①显著增加了肝损伤所致的体重下降；②降低了肝组织的病理病变，减少了胶原的生成和沉积、羟脯氨酸(胶原的主要成分)和丙二醛的水平；③改善了肝功能，包括降低血清ALP、ALT、AST和TBIL水平和提高TP和ALB 水平；④促进了肝实质细胞的增值分裂(PCNA的表达)，降低了HSC激活因子TGFβ1和效应因子α-SMA的表达水平；进而证明胸腺素β10能够显著修复肝损伤。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

Claims

1.胸腺素β10在制备修复肝损伤药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的胸腺素β10在制备修复肝损伤药物中的用途，其特征在于，在修复大鼠肝损伤时，所述胸腺素β10的浓度为25μg/kg-50μg/kg。

3.根据权利要求1所述的胸腺素β10在制备修复肝损伤药物中的用途，其特征在于，在修复大鼠肝损伤时，所述胸腺素β10的浓度为50μg/kg。

4.根据权利要求1所述的胸腺素β10在制备修复肝损伤药物中的用途，其特征在于，所述肝损伤为酒精性肝损伤、肝炎和肝纤维化中的任意一种。