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CN115466325A - 用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液及制备、使用方法 - Google Patents

用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液及制备、使用方法 Download PDF

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CN115466325A
CN115466325A CN202211141065.9A CN202211141065A CN115466325A CN 115466325 A CN115466325 A CN 115466325A CN 202211141065 A CN202211141065 A CN 202211141065A CN 115466325 A CN115466325 A CN 115466325A
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周岩
王赛
杨羽辰
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Shanghai Jinkang Biotechnology Co ltd
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Shanghai Jinkang Biotechnology Co ltd
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Abstract

本发明公开了用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液及制备、使用方法，每升储存保护液包括如下组分：Tris‑HCL100mL、氯化钾3.728g、0.4％吐温80 4mL、丙三醇25mL、氯化钠29.22g、1％硫柳汞溶液1mL、氯化镁4.76g、甘露醇3.6g、EDTA1mL、其余为PBS缓冲液。本储存保护液用于分选细胞的水凝胶微球贮存，该保护液含有磷酸盐缓冲液，渗透压维持剂及金属离子螯合剂，可以保护水凝胶微球不会因为液体环境发生皱缩或溶胀，且同时能保护水凝胶微球表面偶联的抗体活性，且微量残留不会导致目标细胞死亡。

Description

用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液及制备、使用 方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液及制备、使用方法。
背景技术
丙烯酰胺水凝胶最初被用于蛋白电泳实验，蛋白质在电流作用下可以在丙烯酰胺水凝胶内进行迁移，依据蛋白分子量大小及其对电荷的吸附能力，其迁移速度不同，可通过该实验区分混合蛋白质溶液中不同分子量大小的蛋白。随着科技发展，该种材料也被用作药物的分散剂。由于其独特的伸缩性及吸水性，使用该材料制作特异性细胞捕获抗体的固定相，需要通过调节保存液的组份使其稳定在一定的体积并维持相对稳定的形态。单独的水凝胶保存液的研发条件相对宽松，但由于我们的产品在其表面偶联了抗体，且抗体的生物稳定性，效价将直接影响产品的质量，因此在存储保护液开发过程中还需要充分考虑抗体的保存条件，既而开发一种新的储存保护液。
发明内容
本发明的目的在于提供用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液及制备、使用方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液，每升储存保护液包括如下组分：Tris-HCL100mL、氯化钾3.728g、0.4％吐温804mL、丙三醇25mL、氯化钠29.22g、1％硫柳汞溶液1mL、氯化镁4.76g、甘露醇3.6g、EDTA1mL、其余为PBS缓冲液。
优选的，所述Tris-HCL、PBS缓冲液的酸碱度为PH7.4，所述Tris-HCL的分子量为1Mol，所述EDTA的分子量为0.5Mol。
本发明还公开了用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、制备溶液A：首先取1x 500mL PBS缓冲液，在其中加入4mL吐温80，混合均匀后再次加入25mL甘油混合均匀备用；
S2、制备溶液B：取氯化钠、氯化钾、氯化镁、甘露醇、后使用1Mol Tris-HCL溶解，充分溶解后加入1mL的EDTA继续混合均匀；
S3、将A、B两种溶液混合均匀，再次加入1mL1％硫柳汞溶液，最后使用1x 500mLPBS缓冲液定容至1L。
本发明还公开了用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液的使用方法，向偶联抗体的丙烯酰胺水凝胶胶珠溶液中加入适量体积的储存保护液，保护液的体积需要大于胶珠体积的2倍。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本储存保护液用于分选细胞的水凝胶微球贮存，该保护液含有磷酸盐缓冲液，渗透压维持剂及金属离子螯合剂，可以保护水凝胶微球不会因为液体环境发生皱缩或溶胀，且同时能保护水凝胶微球表面偶联的抗体活性，且微量残留不会导致目标细胞死亡。
附图说明
图1为胶珠的体积形态变化对照示意图；
图2为加速老化实验组1吸光度数值趋势图；
图3为加速老化实验组2吸光度数值趋势图；
图4为加速老化实验组3吸光度数值趋势图；
图5为加速老化实验组4吸光度数值趋势图；
图6为加速老化实验组5吸光度数值趋势图；
图7为加速老化实验组6吸光度数值趋势图；
图8为加速老化实验组7吸光度数值趋势图；
图9为加速老化实验组7平均吸光度数值趋势图。
图10为各老化实验组的吸光度平均值统计表。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液，每升储存保护液包括如下组分：Tris-HCL100mL、氯化钾3.728g、0.4％吐温804mL、丙三醇25mL、氯化钠29.22g、1％硫柳汞溶液1mL、氯化镁4.76g、甘露醇3.6g、EDTA1mL、其余为PBS缓冲液。
优选的，所述Tris-HCL、PBS缓冲液的酸碱度为PH7.4，所述Tris-HCL的分子量为1Mol，所述EDTA的分子量为0.5Mol。
本发明还公开了用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、制备溶液A：首先取1x 500mL PBS缓冲液，在其中加入4mL吐温80，混合均匀后再次加入25mL甘油混合均匀备用；
S2、制备溶液B：按上述表格克重称取氯化钠、氯化钾、氯化镁、甘露醇、后使用1MolTris-HCL溶解，充分溶解后加入1mL的EDTA继续混合均匀；
S3、将A、B两种溶液混合均匀，再次加入1mL1％硫柳汞溶液，最后使用1x 500mLPBS缓冲液定容至1L。
本发明还公开了用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液的使用方法，向偶联抗体的丙烯酰胺水凝胶胶珠溶液中加入适量体积的储存保护液，保护液的体积需要大于胶珠体积的2倍。
用上述实施例的储存保护液做对照试验：
比较1xPBS缓冲液；Tris-HCL缓冲液、储存保护液对用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶胶珠保护作用。
对比胶珠的体积形态变化，如图1所示。
结论：1xPBS缓冲液；1Mol Tris-HCL缓冲液两组缓冲液内的部分胶珠迅速出现了溶胀状态，本储存保护液中的胶珠粒径相对均匀。
影响：胶珠大小不一致会影响后续实验实际添加量，影响实验整体质量。
加速老化实验：
实验方法：将偶联AntiCD45单克隆抗体的丙烯酰胺水凝胶珠分成28份，每份500μL置于2mL无酶离心管内，每管中分别加入1mL的丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液。将28管样品分成7组，每组4个重复置于25℃的恒温培养箱内进行加速老化实验，组1作为对照组，加速老化0h；组2加速老化10天；组3加速老化20天；组4加速老化30天；加速老化完成后使用羊抗兔二抗-HRP检测胶珠上偶联抗体的活性。
加速老化实验使用抗体及相关试剂信息：
AntiCD45(兔单克隆抗体，克隆号：EP322Y，货号：ab40763，厂家：abcam)；
IgG H&L(HRP)二抗(货号：ab7090，厂家：abcam)；
飞克级(TMB)ELISA-HRP检测试剂盒(货号：C006110-1000厂家：生工)加速老化实验计算公式：AAF＝Q10 [(TAA-TRT)/10]
其中：AAF：加速老化因数；TAA：加速老化温度；TRT：实时老化样品的温度(抗体蛋白选择10℃)；Q10：温度增加10℃或减少10℃的一个老化因数，通常选择2。AAF＝2*1.5＝4。
组2：实际天数＝3*10＝30天
组3：实际天数＝3*20＝60天
组4：实际天数＝3*30＝90天
组5：实际天数＝3*40＝120天
组6：实际天数＝3*50＝150天
组7：实际天数＝3*60＝180天
实验对造组1～7的参数及吸光度数值趋势如附图2～8所示。
7组加速老化实验的平均吸光度数值见图9和图10。
加速老化实验结论：该款保存液可以保证胶珠在150天内，具有良好的功能，在180天内仍可以较低的工作效率进行试验。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液，其特征在于，每升储存保护液包括如下组分：Tris-HCL100mL、氯化钾3.728g、0.4％吐温80 4mL、丙三醇25mL、氯化钠29.22g、1％硫柳汞溶液1mL、氯化镁4.76g、甘露醇3.6g、EDTA1mL、其余为PBS缓冲液。
2.根据权利要求1所述的一种导光板切割工具，其特征在于：所述Tris-HCL、PBS缓冲液的酸碱度为PH7.4，所述Tris-HCL的分子量为1Mol，所述EDTA的分子量为0.5Mol。
3.一种如权利要求2所述的用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
S1、制备溶液A：首先取1x 500mL PBS缓冲液，在其中加入4mL吐温80，混合均匀后再次加入25mL甘油混合均匀备用；
S2、制备溶液B：取相应的氯化钠、氯化钾、氯化镁、甘露醇、后使用1MolTris-HCL溶解，充分溶解后加入1mL的EDTA继续混合均匀；
S3、将A、B两种溶液混合均匀，再次加入1mL1％硫柳汞溶液，最后使用1x 500mL PBS缓冲液定容至1L。
4.一种如权利要求1或2任一项所述的用于细胞捕获丙烯酰胺水凝胶珠的储存保护液的使用方法，其特征在于：向偶联抗体的丙烯酰胺水凝胶胶珠溶液中加入适量体积的储存保护液，保护液的体积需要大于胶珠体积的2倍。
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