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CN115353566B - 用于检测白细胞介素1-β的抗体组合及其应用 - Google Patents

用于检测白细胞介素1-β的抗体组合及其应用 Download PDF

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CN115353566B
CN115353566B CN202211114917.5A CN202211114917A CN115353566B CN 115353566 B CN115353566 B CN 115353566B CN 202211114917 A CN202211114917 A CN 202211114917A CN 115353566 B CN115353566 B CN 115353566B
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Abstract

本发明提供了用于检测白细胞介素1‑β的抗体组合，所述抗体组合包括有第一抗体和/或第二抗体，抗体具有独特的CDR片段；同时还提供了此抗体组合的具体应用。本发明的优点在于，抗体组合对于白细胞介素1‑β抗原的亲和力强、检测灵敏度高、使用简便、检测快速稳定；正常人血液中IL‑1β的浓度约为(90.51±5.03)pg/ml，现有的常规低亲和力抗体针对此种情况难以实现有效的检测，而本发明的提供的高亲和力抗体组合和含有此抗体组合的采用双抗体夹心方法白细胞介素1‑β定量检测试剂盒，能够有效实现超低浓度白细胞介素1‑β的定量检测，经验证，试剂盒的灵敏度可达到0.3pg/mL。

Description

用于检测白细胞介素1-β的抗体组合及其应用
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及用于检测白细胞介素1-β的抗体组合及其应用。
背景技术
白细胞介素是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子(又称为淋巴细胞刺激因子)，细胞主要来源于活化的单核-巨噬细胞。白细胞介素1的存在形式主要为IL-1α和IL-1β。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。
其主要生物学功能分别为：
(1)局部低浓度－－免疫调节：协同刺激APC和T细胞活化，促进B细胞增殖和分泌抗体；
(2)大量产生－－内分泌效应：诱导肝脏急性期蛋白合成；引起发热和恶病质。
IL-1β是IL-1家族中的重要成员，由于其在炎症相关疾病中的重要作用而备受关注。IL-1β具有较强的促炎活性，可诱导多种促炎介质，如细胞因子和趋化因子。IL-1β对各种细胞有多种作用，并最终导致广泛的炎症事件。就全身而言，IL-1β信号传导可导致急性期反应、低血压、血管扩张和发热。就局部而言，IL-1信号的结果导致粘附分子的上调，从而促进淋巴细胞的募集。随后，免疫细胞被激活，炎症进一步放大。IL-1β除了在先天性免疫应答中起重要作用外，还通过影响Th17和Th1诱导的免疫应答参与适应性免疫应答。IL-1β信号转导异常可引起遗传性自身炎症性疾病，如家族性地中海热。此外，它还与常见疾病有关，如2型糖尿病、痛风、系统性红斑狼疮(SLE)和心血管疾病。退变椎间盘(IVDs)中IL-1β水平显著升高，IL-1β参与了IDD的多种病理过程。
但由于正常人血液中IL-1β的浓度约为(90.51±5.03)pg/ml，现有针对IL-1β的生物制品多为低亲和力抗体，其对IL-1β的检测准确度低、灵敏度也不高。
发明内容
针对上述存在的拘束局限性，本发明提出了一种用于检测白细胞介素1-β的抗体组合及其应用；克服了背景技术中提到的不足和缺陷。
为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
本发明的发明点是提供了一种用于检测白细胞介素1-β-(IL-1β)的抗体组合，所述抗体组合包括有第一抗体和/或第二抗体，所述第一抗体重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1的第26-34、54-63、105-116位氨基酸序列所示，轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2的第24-32、48-56、89-98位氨基酸序列所示；所述第二抗体重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ IDNo.3的第26-33、53-62、104-114位氨基酸序列所示，轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.4的第24-35、51-60、93-102位氨基酸序列所示。
第一抗体是11G10，第二抗体为7B9。
第一抗体重链可变区的CDR1为：DYKTVVAFT；
第一抗体重链可变区的CDR2为：NAVTYGGYPE；
第一抗体重链可变区的CDR3为：GIYSQVLYDYAM；
第一抗体轻链可变区的CDR1为：SFTPFGHVA；
第一抗体轻链可变区的CDR2为：PKFHJLYHS；
第一抗体轻链可变区的CDR3为：FFYPBYAHKT；
第二抗体重链可变区的CDR1为：GMASLINY；
第二抗体重链可变区的CDR2为：FGTDGTNKPE；
第二抗体重链可变区的CDR3为：DYGPPTHGDVY；
第二抗体轻链可变区的CDR1为：QGGLPQWNWLPS；
第二抗体轻链可变区的CDR2为：NHYTKLETAD；
第二抗体轻链可变区的CDR3为：LAAGVKNDTT。
在一个优选的实施方案中，用于检测白细胞介素1-β的抗体组合，所述第一抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示或为与SEQ ID No.1序列同源性大于90％的氨基酸序列，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示或为与SEQ ID No.2序列同源性大于90％的氨基酸序列；所述第二抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示或为与SEQ ID No.3序列同源性大于90％的氨基酸序列，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNo.4所示或为与SEQ ID No.4序列同源性大于90％的氨基酸序列。
第一抗体重链可变区氨基酸序列SEQ ID No.1为：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASDYKTVVAFTGMNWVRQAPGKGLEWMGWINAVTYGGYPEPIYADSVKGRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTA VYYCARGIYSQVLYDYAMWGQGTLVTVSS；
第一抗体轻链可变区氨基酸序列SEQ ID No.2为：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSFTPFGHVAWYQQKPGKAPKALIYPKFHJLYHSGVPYRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFFYPBYAHKTFGQGTKVEIKRTVA；
第二抗体重链可变区氨基酸序列SEQ ID No.3为：
DVQLVESGGGLVQPGRSLKLSCAASGMASLINYYMAWVRQAPTKGLEWVASIFGTDGTNKPETFYRDSVKGRFTVSRDNARSSLYLQMDSLRSEDTAT YYCTTDYGPPTHGDVYWGQGTLVTVSS；
第二抗体轻链可变区氨基酸序列SEQ ID No.4为：
DIQMTQSPASLPASPEEIVTITCQGGLPQWNWLPSWYQQKPGKSPQLLIYNHYTKLETADGVPSRFSASRSGTQYSLKISRLQVEDFGIFYCLAAGVKNDT TFGAGTKLELKRTDA。
在一个优选的实施方案中，用于检测白细胞介素1-β的抗体组合，所述第一抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示或为与SEQ ID No.5序列同源性大于90％的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示或为与SEQ ID No.6序列同源性大于90％的氨基酸序列；所述第二抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示或为与SEQ ID No.7序列同源性大于90％的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ IDNo.8所示或为与SEQ ID No.8序列同源性大于90％的氨基酸序列。
第一抗体重链恒定区氨基酸序列SEQ ID No.5为：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK；
第一抗体轻链恒定区氨基酸序列SEQ ID No.6为：
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSP VKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV APTECS；
第二抗体重链恒定区氨基酸序列SEQ ID No.7为：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK；
第二抗体轻链恒定区氨基酸序列SEQ ID No.8为：
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSP VKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV APTECS。
用于检测白细胞介素1-β的抗体组合，所述第一抗体和第二抗体独立的为包被抗体或检测抗体。
进一步的，上述的用于检测白细胞介素1-β的抗体组合，所述抗体组合选自以下任意一种组合形式：第一抗体做为检测抗体、第二抗体做为检测抗体、第一抗体做为包被抗体+第二抗体做为检测抗体、第二抗体做为包被抗体+第一抗体做为检测抗体；优选为第一抗体做为包被抗体+第二抗体做为检测抗体。
也即是说，第一抗体和第二抗体都可以单独的做为白细胞介素1-β的检测抗体，此时可采用常规的单抗检测方法以第一抗体或第二抗体进行白细胞介素1-β的检测，同时，也可将第一抗体做为包被抗体、第二抗体做为检测抗体，以双抗夹心的方法进行白细胞介素1-β的检测；或将第二抗体做为包被抗体、第一抗体做为检测抗体，以双抗夹心的方法进行白细胞介素1-β的检测。
本发明的第二个发明点是提供了一种编码上述的用于检测白细胞介素1-β的抗体组合的重链和轻链的多核苷酸，编码所述第一抗体的重链可变区的多核苷酸序列如SEQ IDNo.9所示或为与SEQ ID No.9序列同源性大于90％的核苷酸序列，编码所述第一抗体的轻链可变区的多核苷酸序列如SEQ ID No.10所示或为与SEQ ID No.10序列同源性大于90％的核苷酸序列；编码所述第二抗体的重链可变区的多核苷酸序列如SEQ ID No.11所示或为与SEQ ID No.11序列同源性大于90％的核苷酸序列，编码所述第二抗体的轻链可变区的多核苷酸序列如SEQ ID No.12所示或为与SEQ ID No.12序列同源性大于90％的核苷酸序列。
编码第一抗体重链可变区的多核苷酸序列SEQ ID No.9为：
gaagtgcagctggtggaaagcggcggcggcctggtgcagccgggcggcagcctgcgcctgagctgcgcggcgagcgattataaaaccgtggtggcgtttaccggcatgaactgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctggaatggatgggctggattaacgcggtgacctatggcggctatccggaaccgatttatgcggatagcgtgaaaggccgctttacctttagcctggataccagcaaaagcaccgcgtatctgcagatgaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtattattgcgcgcgcggcatttatagccaggtgctgtatgattatgcgatgtggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagc；
编码第一抗体轻链可变区的多核苷酸序列SEQ ID No.10为：
gatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccattacctgcag ctttaccccgtttggccatgtggcgtggtatcagcagaaaccgggcaaagcgccgaaagcgctgatttatccgaaatttcatctgtatcatagcggcgtgccgtatcgctttagcggcagcggcagcggcaccgattttaccctgaccattagcagcctgcagccggaagattttgcgacctattattgctttttttatccgtatgcgcataaaacctttggccagggcaccaaagtggaaattaaacgcaccgtggcg；
编码第二抗体重链可变区的多核苷酸序列SEQ ID No.11为：
gatgtgcagctggtggaaagcggcggcggcctggtgcagccgggccgcagcctgaaactgagctgcgcggcgagcggcatggcgagcctgattaactattatatggcgtgggtgcgccaggcgccgaccaaaggcctggaatgggtggcgagcatttttggcaccgatggcaccaacaaaccggaaaccttttatcgcgatagcgtgaaaggccgctttaccgtgag ccgcgataacgcgcgcagcagcctgtatctgcagatggatagcctgcgcagcgaagataccgcgacctattattgcaccaccgattatggcccgccgacccatggcgatgtgtattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagc；
编码第二抗体轻链可变区的多核苷酸序列SEQ ID No.12为：
gatattcagatgacccagagcccggcgagcctgccggcgagcccggaagaaattgtgaccattacctgcca gggcggcctgccgcagtggaactggctgccgagctggtatcagcagaaaccgggcaaaagcccgcagctgctgatttataaccattataccaaactggaaaccgcggatggcgtgccgagccgctttagcgcgagccgcagcggcacccagtatagcctgaaaattagccgcctgcaggtggaagattttggcattttttattgcctggcggcgggcgtgaaaaacgataccacctttggcgcgggcaccaaactggaactgaaacgcaccgatgcg。
在一个优选的实施方案中，用于检测白细胞介素1-β的抗体组合的重链和轻链的多核苷酸，编码所述第一抗体的重链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID No.13所示或为与SEQ ID No.13序列同源性大于90％的核苷酸序列，编码所述第一抗体的轻链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID No.14所示或为与SEQ ID No.14序列同源性大于90％的核苷酸序列；编码所述第二抗体的重链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID No.15所示或为与SEQ ID No.15序列同源性大于90％的核苷酸序列，编码所述第二抗体的轻链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID No.16所示或为与SEQ ID No.16序列同源性大于90％的核苷酸序列。
编码第一抗体重链恒定区的多核苷酸序列SEQ ID No.13为：
gcgagcaccaaaggcccgagcgtgtttccgctggcgccgagcagcaaaagcaccagcggcggcaccgcggcgctgggctgcctggtgaaagattattttccggaaccggtgaccgtgagctggaacagcggcgcgctgaccagcggcgtgcatacctttccggcggtgctgcagagcagcggcctgtatagcctgagcagcgtggtgaccgtgccgagcagcagcctgggcacccagacctatatttgcaacgtgaaccataaaccgagcaacaccaaagtggataaaaaagtggaaccgaaaagctgcgataaaacccatacctgcccgccgtgcccggcgccggaactgctgggcggcccgagcgtgtttctgtttccgccgaaaccgaaagataccctgatgattagccgcaccccggaagtgacctgcgtggtggtggatgtgagccatgaagatccggaagtgaaatttaactggtatgtggatggcgtggaagtgcataacgcgaaaaccaaaccgcgcgaagaacagtataacagcacctatcgcgtggtgagcgtgctgaccgtgctgcatcaggattggctgaacggcaaagaatataaatgcaaagtgagcaacaaagcgctgccggcgccgattgaaaaaaccattagcaaagcgaaaggccagccgcgcgaaccgcaggtgtataccctgccgccgagccgcgatgaactgaccaaaaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaaaggcttttatccgagcgatattgcggtggaatgggaaagcaacggccagccggaaaacaactataaaaccaccccgccggtgctggatagcgatggcagcttttttctgtatagcaaactgaccgtggataaaagccgctggcagcagggcaacgtgtttagctgcagcgtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccagaaaagcctgagcctgagcccgggcaaa；
编码第一抗体轻链恒定区的多核苷酸序列SEQ ID No.14为：
ggccagccgaaagcggcgccgagcgtgaccctgtttccgccgagcagcgaagaactgcaggcgaacaaagcgaccctggtgtgcctgattagcgatttttatccgggcgcggtgaccgtggcgtggaaagcggatagcagcccggtgaaagcgggcgtggaaaccaccaccccgagcaaacagagcaacaacaaatatgcggcgagcagctatctgagcctgaccccggaacagtggaaaagccatcgcagctatagctgccaggtgacccatgaaggcagcaccgtggaaaaaaccgtggcgccgaccgaatgcagc；
编码第二抗体重链恒定区的多核苷酸序列SEQ ID No.15为：
gcgagcaccaaaggcccgagcgtgtttccgctggcgccgagcagcaaaagcaccagcggcggcaccgcggcgctgggctgcctggtgaaagattattttccggaaccggtgaccgtgagctggaacagcggcgcgctgaccagcggcgtgcatacctttccggcggtgctgcagagcagcggcctgtatagcctgagcagcgtggtgaccgtgccgagcagcagcctgggcacccagacctatatttgcaacgtgaaccataaaccgagcaacaccaaagtggataaaaaagtggaaccgaaaagctgcgataaaacccatacctgcccgccgtgcccggcgccggaactgctgggcggcccgagcgtgtttctgtttccgccgaaaccgaaagataccctgatgattagccgcaccccggaagtgacctgcgtggtggtggatgtgagccatgaagatccggaagtgaaatttaactggtatgtggatggcgtggaagtgcataacgcgaaaaccaaaccgcgcgaagaacagtataacagcacctatcgcgtggtgagcgtgctgaccgtgctgcatcaggattggctgaacggcaaagaatataaatgcaaagtgagcaacaaagcgctgccggcgccgattgaaaaaaccattagcaaagcgaaaggccagccgcgcgaaccgcaggtgtataccctgccgccgagccgcgatgaactgaccaaaaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaaaggcttttatccgagcgatattgcggtggaatgggaaagcaacggccagccggaaaacaactataaaaccaccccgccggtgctggatagcgatggcagcttttttctgtatagcaaactgaccgtggataaaagccgctggcagcagggcaacgtgtttagctgcagcgtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccagaaaagcctgagcctgagcccgggcaaa；
编码第二抗体轻链恒定区的多核苷酸序列SEQ ID No.16为：
ggccagccgaaagcggcgccgagcgtgaccctgtttccgccgagcagcgaagaactgcaggcgaacaaagcgaccctggtgtgcctgattagcgatttttatccgggcgcggtgaccgtggcgtggaaagcggatagcagcccggtgaaagcgggcgtggaaaccaccaccccgagcaaacagagcaacaacaaatatgcggcgagcagctatctgagcctgaccccggaacagtggaaaagccatcgcagctatagctgccaggtgacccatgaaggcagcaccgtggaaaaaaccgtggcgccgaccgaatgcagc。
本发明的第三个发明点是提供了上述用于检测白细胞介素1-β的抗体组合的重链和轻链的多核苷酸的表达系统，所述表达系统为哺乳动物表达载体。
在一个优选的实施方案中，上述的表达系统，所述白细胞介素1-β的抗原表达系统为Expi 293表达系统。
在一个优选的实施方案中，上述的表达系统，所述抗体表达系统为CHO表达系统。
本发明的第四个发明点是提供了一种含有上述的表达系统的宿主细胞。
本发明的第五个发明点是提供了上述的抗体组合在制备用于体外定量检测白细胞介素1-β含量的生物制品中的应用。
在一个优选的实施方案中，上述的应用，所述体外定量检测是指检测血清、血浆、全血和/或末梢血中白细胞介素1-β的含量。
在一个优选的实施方案中，上述的应用，所述生物制品为试剂盒。
在一个优选的实施方案中，上述的应用，所述试剂盒为双抗体夹心法检测试剂盒。
与现有技术相对比，本发明具有以下优点：
本发明提供的用于检测白细胞介素1-β的抗体组合及其应用，抗体组合对于白细胞介素1-β抗原的亲和力强、检测灵敏度高、使用简便、检测快速稳定；正常人血液中IL-1β的浓度约为(90.51±5.03)pg/ml，现有的常规低亲和力抗体针对此种情况难以实现有效的检测，而本发明的提供的高亲和力抗体组合和含有此抗体组合的采用双抗体夹心方法的白细胞介素1-β定量检测试剂盒，能够有效实现超低浓度白细胞介素1-β的定量检测，经验证，试剂盒的灵敏度可达到0.3pg/mL。
本发明采用的双抗体夹心法测定样本中IL-1β水平，也即是酶标板上包被的抗体与检测抗体和被测样品的IL-1β形成了“包被抗体-抗原-检测抗体”的夹心复合物结构，更有利于IL-1β的检出。另外本发明有效地采用亲和素-生物素-酶复合物实现了检测的高灵敏度。
本发明的检测试剂盒不仅可以快速、准确地测定血清中IL-1β的含量，为炎症的早期诊断、早期治疗提供了可靠的临床参考价值；而且由于使用了两个特异性单克隆抗体的组合，实现了IL-1β检测灵敏度的大幅提升。
附图说明
图1为本发明一实施例所提供的含有用于检测白细胞介素1-β的抗体组合的ELISA试剂盒的标准曲线。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面对本发明进行进一步详细说明。但是应该理解，此处所描述仅仅用以解释本发明，并不用于限制本发明的范围。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术术语和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同，本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在限制本发明。本文中所使用的试剂和仪器均商购可得，所涉及的表征手段均可参阅现有技术中的相关描述，本文中不再赘述。
为了进一步了解本发明，下面结合最佳实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
用于检测白细胞介素1-β(IL-1β)的抗体组合，抗体组合包括有第一抗体和/或第二抗体，第一抗体重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1的第26-34、54-63、105-116位氨基酸序列所示，轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2的第24-32、48-56、89-98位氨基酸序列所示；第二抗体重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.3的第26-33、53-62、104-114位氨基酸序列所示，轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.4的第24-35、51-60、93-102位氨基酸序列所示。
第一抗体是11G10，第二抗体为7B9。
第一抗体重链可变区的CDR1为：DYKTVVAFT；
第一抗体重链可变区的CDR2为：NAVTYGGYPE；
第一抗体重链可变区的CDR3为：GIYSQVLYDYAM；
第一抗体轻链可变区的CDR1为：SFTPFGHVA；
第一抗体轻链可变区的CDR2为：PKFHJLYHS；
第一抗体轻链可变区的CDR3为：FFYPBYAHKT；
第二抗体重链可变区的CDR1为：GMASLINY；
第二抗体重链可变区的CDR2为：FGTDGTNKPE；
第二抗体重链可变区的CDR3为：DYGPPTHGDVY；
第二抗体轻链可变区的CDR1为：QGGLPQWNWLPS；
第二抗体轻链可变区的CDR2为：NHYTKLETAD；
第二抗体轻链可变区的CDR3为：LAAGVKNDTT。
抗体组合中，第一抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示或为与SEQID No.1序列同源性大于90％的氨基酸序列，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示或为与SEQ ID No.2序列同源性大于90％的氨基酸序列；第二抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示或为与SEQ ID No.3序列同源性大于90％的氨基酸序列，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示或为与SEQ ID No.4序列同源性大于90％的氨基酸序列。
第一抗体重链可变区氨基酸序列SEQ ID No.1为：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASDYKTVVAFTGMNWVRQAPGKGLEWMGWINAVTYGGYPEPIYADSVKGRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTA VYYCARGIYSQVLYDYAMWGQGTLVTVSS；
第一抗体轻链可变区氨基酸序列SEQ ID No.2为：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSFTPFGHVAWYQQKPGKAPKALIYPKFHJLYHSGVPYRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFFYPBYAHKTFGQGTKVEIKRTVA；
第二抗体重链可变区氨基酸序列SEQ ID No.3为：
DVQLVESGGGLVQPGRSLKLSCAASGMASLINYYMAWVRQAPTKGLEWVASIFGTDGTNKPETFYRDSVKGRFTVSRDNARSSLYLQMDSLRSEDTATYYCTTDYGPPTHGDVYWGQGTLVTVSS；
第二抗体轻链可变区氨基酸序列SEQ ID No.4为：
DIQMTQSPASLPASPEEIVTITCQGGLPQWNWLPSWYQQKPGKSPQLLIYNHYTKLETADGVPSRFSASRSGTQYSLKISRLQVEDFGIFYCLAAGVKNDT TFGAGTKLELKRTDA。
抗体组合中，第一抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示或为与SEQID No.5序列同源性大于90％的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示或为与SEQ ID No.6序列同源性大于90％的氨基酸序列；第二抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示或为与SEQ ID No.7序列同源性大于90％的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.8所示或为与SEQ ID No.8序列同源性大于90％的氨基酸序列。
第一抗体重链恒定区氨基酸序列SEQ ID No.5为：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK；
第一抗体轻链恒定区氨基酸序列SEQ ID No.6为：
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSP VKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV APTECS；
第二抗体重链恒定区氨基酸序列SEQ ID No.7为：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK；
第二抗体轻链恒定区氨基酸序列SEQ ID No.8为：
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSP VKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV APTECS。
第一抗体和第二抗体独立的为包被抗体或检测抗体。
抗体组合选自以下任意一种组合形式：第一抗体做为检测抗体、第二抗体做为检测抗体、第一抗体做为包被抗体+第二抗体做为检测抗体、第二抗体做为包被抗体+第一抗体做为检测抗体；
优选为第一抗体11G10做为包被抗体+第二抗体7B9做为检测抗体。
也即是说，第一抗体和第二抗体都可以单独的做为白细胞介素1-β的检测抗体，此时可采用常规的单抗检测方法以第一抗体或第二抗体进行白细胞介素1-β的检测，同时，也可将第一抗体做为包被抗体、第二抗体做为检测抗体，以双抗夹心的方法进行白细胞介素1-β的检测；或将第二抗体做为包被抗体、第一抗体做为检测抗体，以双抗夹心的方法进行白细胞介素1-β的检测。
本发明还提供了编码上述的用于检测白细胞介素1-β的抗体组合的重链和轻链的多核苷酸，编码第一抗体的重链可变区的多核苷酸序列如SEQ ID No.9所示或为与SEQ IDNo.9序列同源性大于90％的核苷酸序列，编码第一抗体的轻链可变区的多核苷酸序列如SEQ ID No.10所示或为与SEQ ID No.10序列同源性大于90％的核苷酸序列；编码第二抗体的重链可变区的多核苷酸序列如SEQ ID No.11所示或为与SEQ ID No.11序列同源性大于90％的核苷酸序列，编码第二抗体的轻链可变区的多核苷酸序列如SEQ ID No.12所示或为与SEQ ID No.12序列同源性大于90％的核苷酸序列。
编码第一抗体重链可变区的多核苷酸序列SEQ ID No.9为：
gaagtgcagctggtggaaagcggcggcggcctggtgcagccgggcggcagcctgcgcctgagctgcgcggcgagcgattataaaaccgtggtggcgtttaccggcatgaactgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctggaatggatgggctggattaacgcggtgacctatggcggctatccggaaccgatttatgcggatagcgtgaaaggccgctttacctttagcctggataccagcaaaagcaccgcgtatctgcagatgaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtattattgcgcgcgcggcatttatagccaggtgctgtatgattatgcgatgtggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagc；
编码第一抗体轻链可变区的多核苷酸序列SEQ ID No.10为：
gatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccattacctgcag ctttaccccgtttggccatgtggcgtggtatcagcagaaaccgggcaaagcgccgaaagcgctgatttatccgaaatttcatctgtatcatagcggcgtgccgtatcgctttagcggcagcggcagcggcaccgattttaccctgaccattagcagcctgcagccggaagattttgcgacctattattgctttttttatccgtatgcgcataaaacctttggccagggcaccaaagtggaaattaaacgcaccgtggcg；
编码第二抗体重链可变区的多核苷酸序列SEQ ID No.11为：
gatgtgcagctggtggaaagcggcggcggcctggtgcagccgggccgcagcctgaaactgagctgcgcggcgagcggcatggcgagcctgattaactattatatggcgtgggtgcgccaggcgccgaccaaaggcctggaatgggtg gcgagcatttttggcaccgatggcaccaacaaaccggaaaccttttatcgcgatagcgtgaaaggccgctttaccgtgagccgcgataacgcgcgcagcagcctgtatctgcagatggatagcctgcgcagcgaagataccgcgacctattattgcaccaccgattatggcccgccgacccatggcgatgtgtattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagc；
编码第二抗体轻链可变区的多核苷酸序列SEQ ID No.12为：
gatattcagatgacccagagcccggcgagcctgccggcgagcccggaagaaattgtgaccattacctgcca gggcggcctgccgcagtggaactggctgccgagctggtatcagcagaaaccgggcaaaagcccgcagctgctgatttataaccattataccaaactggaaaccgcggatggcgtgccgagccgctttagcgcgagccgcagcggcacccagtatagcctgaaaattagccgcctgcaggtggaagattttggcattttttattgcctggcggcgggcgtgaaaaacgataccacctttggcgcgggcaccaaactggaactgaaacgcaccgatgcg。
用于检测白细胞介素1-β的抗体组合的重链和轻链的多核苷酸，编码第一抗体的重链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID No.13所示或为与SEQ ID No.13序列同源性大于90％的核苷酸序列，编码第一抗体的轻链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID No.14所示或为与SEQ ID No.14序列同源性大于90％的核苷酸序列；编码第二抗体的重链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID No.15所示或为与SEQ ID No.15序列同源性大于90％的核苷酸序列，编码第二抗体的轻链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID No.16所示或为与SEQ ID No.16序列同源性大于90％的核苷酸序列。
编码第一抗体重链恒定区的多核苷酸序列SEQ ID No.13为：
gcgagcaccaaaggcccgagcgtgtttccgctggcgccgagcagcaaaagcaccagcggcggcaccgcggcgctgggctgcctggtgaaagattattttccggaaccggtgaccgtgagctggaacagcggcgcgctgaccagcggcgtgcatacctttccggcggtgctgcagagcagcggcctgtatagcctgagcagcgtggtgaccgtgccgagcagcagcctgggcacccagacctatatttgcaacgtgaaccataaaccgagcaacaccaaagtggataaaaaagtggaaccgaaaagctgcgataaaacccatacctgcccgccgtgcccggcgccggaactgctgggcggcccgagcgtgtttctgtttccgccgaaaccgaaagataccctgatgattagccgcaccccggaagtgacctgcgtggtggtggatgtgagccatgaagatccggaagtgaaatttaactggtatgtggatggcgtggaagtgcataacgcgaaaaccaaaccgcgcgaagaacagtataacagcacctatcgcgtggtgagcgtgctgaccgtgctgcatcaggattggctgaacggcaaagaatataaatgcaaagtgagcaacaaagcgctgccggcgccgattgaaaaaaccattagcaaagcgaaaggccagccgcgcgaaccgcaggtgtataccctgccgccgagccgcgatgaactgaccaaaaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaaaggcttttatccgagcgatattgcggtggaatgggaaagcaacggccagccggaaaacaactataaaaccaccccgccggtgctggatagcgatggcagcttttttctgtatagcaaactgaccgtggataaaagccgctggcagcagggcaacgtgtttagctgcagcgtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccagaaaagcctgagcctgagcccgggcaaa；
编码第一抗体轻链恒定区的多核苷酸序列SEQ ID No.14为：
ggccagccgaaagcggcgccgagcgtgaccctgtttccgccgagcagcgaagaactgcaggcgaacaaagcgaccctggtgtgcctgattagcgatttttatccgggcgcggtgaccgtggcgtggaaagcggatagcagcccggtgaaagcgggcgtggaaaccaccaccccgagcaaacagagcaacaacaaatatgcggcgagcagctatctgagcctgaccccggaacagtggaaaagccatcgcagctatagctgccaggtgacccatgaaggcagcaccgtggaaaaaaccgtggcgccgaccgaatgcagc；
编码第二抗体重链恒定区的多核苷酸序列SEQ ID No.15为：
gcgagcaccaaaggcccgagcgtgtttccgctggcgccgagcagcaaaagcaccagcggcggcaccgcggcgctgggctgcctggtgaaagattattttccggaaccggtgaccgtgagctggaacagcggcgcgctgaccagcggcgtgcatacctttccggcggtgctgcagagcagcggcctgtatagcctgagcagcgtggtgaccgtgccgagcagcagcctgggcacccagacctatatttgcaacgtgaaccataaaccgagcaacaccaaagtggataaaaaagtggaaccgaaaagctgcgataaaacccatacctgcccgccgtgcccggcgccggaactgctgggcggcccgagcgtgtttctgtttccgccgaaaccgaaagataccctgatgattagccgcaccccggaagtgacctgcgtggtggtggatgtgagccatgaagatccggaagtgaaatttaactggtatgtggatggcgtggaagtgcataacgcgaaaaccaaaccgcgcgaagaacagtataacagcacctatcgcgtggtgagcgtgctgaccgtgctgcatcaggattggctgaacggcaaagaatataaatgcaaagtgagcaacaaagcgctgccggcgccgattgaaaaaaccattagcaaagcgaaaggccagccgcgcgaaccgcaggtgtataccctgccgccgagccgcgatgaactgaccaaaaaccaggtgagcctgacctgcctggtgaaaggcttttatccgagcgatattgcggtggaatgggaaagcaacggccagccggaaaacaactataaaaccaccccgccggtgctggatagcgatggcagcttttttctgtatagcaaactgaccgtggataaaagccgctggcagcagggcaacgtgtttagctgcagcgtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccagaaaagcctgagcctgagcccgggcaaa；
编码第二抗体轻链恒定区的多核苷酸序列SEQ ID No.16为：
ggccagccgaaagcggcgccgagcgtgaccctgtttccgccgagcagcgaagaactgcaggcgaacaaagcgaccctggtgtgcctgattagcgatttttatccgggcgcggtgaccgtggcgtggaaagcggatagcagcccggtgaaagcgggcgtggaaaccaccaccccgagcaaacagagcaacaacaaatatgcggcgagcagctatctgagcctgaccccggaacagtggaaaagccatcgcagctatagctgccaggtgacccatgaaggcagcaccgtggaaaaaaccgtggcgccgaccgaatgcagc。
用于检测白细胞介素1-β的抗体组合的重链和轻链的多核苷酸的表达系统，表达系统为哺乳动物表达载体。
白细胞介素1-β(IL-1β)的抗原表达系统为Expi 293表达系统。
抗体表达系统为CHO表达系统。
含有上述表达系统的宿主细胞。
用于检测白细胞介素1-β的抗体组合在制备用于体外定量检测白细胞介素1-β含量的生物制品中的应用。
体外定量检测是指检测血清、血浆、全血和/或末梢血中白细胞介素1-β的含量。
生物制品为试剂盒。
试剂盒为双抗体夹心法检测试剂盒。
实施例2
第一抗体和第二抗体，均是采用噬菌体展示的方法筛选得到的，再以NHS-Biotin试剂标记纯化好的蛋白，白细胞介素1-β(IL-1β)抗原是采用Expi293表达系统表达的，其表达序列如SEQ ID No.17所示或为与SEQ ID No.17序列同源性大于90％的氨基酸序列。
SEQ ID No.17序列：
AEVPELASEMMAYYSGNEDDLFFEADGPKQMKCSFQDLDLCPLDGG IQLRISDHHYSKGFRQAASVVVAMDKLRKMLVPCPQTFQENDLSTFFPFIFEEEPIFFDTWDNEAYVHDAPVRSLNCTLRDSQQKSLVMSGPYELKALHLQGQDMEQQVVFSMSFVQGEESNDKIPVALGLKEKNLYLSCVLKDDKPTLQLESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIEINNKLEFESAQFPNWYISTSQAENMPVFLGGTKGGQDITDFTMQFVSS。
白细胞介素1-β(IL-1β)抗原的核苷酸序列如SEQ ID No.18所示或为与SEQ IDNo.18序列同源性大于90％的核苷酸序列。
SEQ ID No.18序列：
gcggaagtgccggaactggcgagcgaaatgatggcgtattatagcggcaacgaagatgatctgttttttgaag cggatggcccgaaacagatgaaatgcagctttcaggatctggatctgtgcccgctggatggcggcattcagctgcgcattagcgatcatcattatagcaaaggctttcgccaggcggcgagcgtggtggtggcgatggataaactgcgcaaaatgctggtgccgtgcccgcagacctttcaggaaaacgatctgagcaccttttttccgtttatttttgaagaagaaccgattttttttgatacctgggataacgaagcgtatgtgcatgatgcgccggtgcgcagcctgaactgcaccctgcgcgatagccagcagaaaagcctggtgatgagcggcccgtatgaactgaaagcgctgcatctgcagggccaggatatggaacagcaggtggtgtttagcatgagctttgtgcagggcgaagaaagcaacgataaaattccggtggcgctgggcctgaaagaaaaaaacctgtatctgagctgcgtgctgaaagatgataaaccgaccctgcagctggaaagcgtggatccgaaaaactatccgaaaaaaaaaatgga aaaacgctttgtgtttaacaaaattgaaattaacaacaaactggaatttgaaagcgcgcagtttccgaactggtatattagcaccagccaggcggaaaacatgccggtgtttctgggcggcaccaaaggcggccaggatattaccgattttaccatgcagtttgtgagcagc。
实施例3
含有2种抗体的试剂盒的具体组成以及各组成的具体浓度如表1所示。
表1
Figure GDA0004164772940000161
试剂如下所示：
(1)ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液)：
NaHCO3 1.59克，
NaHCO3 2.93克，
加蒸馏水至1000ml；
(2)ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M
KH2PO4 0.2克，
Na2HPO4·12H2O 2.9克，
NaCl 8.0克，
KCl 0.2克，
Tween-20 0.05％0.5ml，
加蒸馏水至1000ml；
(3)ELISA样本稀释液：
牛血清白蛋白(BSA)0.1克，
加洗涤缓冲液至100ml；
(4)ELISA实验终止液(2M H2SO4)：
蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98％)21.7ml；
(5)ELISA底物缓冲液(PH5.0磷酸氢二钠柠檬酸)：
0.2M Na2HPO4(28.4克/L)25.7ml，
0.1M柠檬酸(19.2克/L)24.3ml，
加蒸馏水50ml；
(6)ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液：
TMB(10mg/5ml无水乙醇)0.5ml，
底物缓冲液(PH5.5)10ml，
0.75％H2O2 32μl；
(7)ELISA实验封闭液：
牛血清白蛋白(BSA)5克，
加洗涤缓冲液至100ml。
实施例4
1、含有2种抗体的试剂盒用于白细胞介素1-β检测的具体操作过程如下所示。
步骤：
1)抗体预包被：用包被缓冲液稀释11G10抗体至浓度为1μg/mL，100μL每孔加入酶标板中，4℃过夜；
2)封闭：每孔加入100μL的封闭液，37℃封闭0.5-1小时，用洗涤缓冲液洗板3次，每次30s，拍干；
3)标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔和空白对照孔16孔，用样本稀释液梯度稀释hIL-1β抗原，每个浓度200μL，浓度分别为500pg/mL、125pg/mL、62.5pg/mL、31.25pg/mL、15.6pg/mL、7.8pg/mL、3.9pg/mL，每个浓度两个复孔，各孔加样量都为100μl，空白孔每孔各加100μL样本稀释液；
4)待测样本的稀释与加样：将样本稀释液240μl，然后再加待测样品60μl(样品最终稀释度为5倍)，共三个复孔，每孔100μL将样品加于酶标板孔底部；
5)温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟，小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，用洗涤缓冲液洗板3次，每次30s，拍干；
6)生物素标记抗体孵育：于各反应孔中，加入新鲜稀释的生物素标记抗体，每孔100μL，37℃，0.5-1h，用洗涤缓冲液洗板3次，每次30s，拍干；
7)显色：每孔先加入TMB显色剂各50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟；
8)终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)；
9)测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)，测定应在加终止液后15分钟以内进行。
2、样本要求：
用无菌管收集血清，室温血液自然凝固10-20分钟，2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
含有抗体组合的试剂盒，在用于体外定量检测人血清、血浆、全血、末梢血中白细胞介素1-β(IL-1β)的含量的结果判定标准如下表2所示。
表2
IL-1β(ng/ml) 临床应用建议
＜0.005 表观健康人群的95％位点的参考值
0.005-0.100 正常，或存在轻微炎症、轻微感染
0.100-0.200 提示有一般细菌感染或全身性炎症反应
＞0.200 提示可能是脓毒症
本发明试剂盒的标准曲线如图1所示。
实施例5
以两种市售的IL-1β检测试剂盒做为对比产品1-2，与本发明实施例4提供的试剂盒分别对样本进行了检测。
市售IL-1β检测试剂盒分别为以下两种：
对比产品1：
产品名称：人白介素1β(IL-1β)检测试剂盒(ELISA方法)；
英文名称：Human Interleukin-1beta ELISAKit；
产品货号：ZN2236；
产品规格：96T；
购自北京百奥莱博科技有限公司。
对比产品2：
产品名称：IL-1β(人)ELISA检测试剂盒；
英文名称：Interleukin-1β(human)EIAKit；
产品货号：583311-480；
产品规格：480次分析；
购自武汉艾美捷科技有限公司。
检测过程中，先对试剂盒的基本特征进行了对比，具体如下表3所示。
表3
实施例4 对比产品1 对比产品2
抗原 人IL-1β 人IL-1β 人IL-1β
包被抗体 11G10 IL-1β单克隆抗体 单克隆抗体
检测抗体 7B9 生物素标记的IL-1β单克隆抗体 乙酰胆碱酯酶标记的Fab
方法 ELISA ELISA ELISA
灵敏度 0.3pg/mL ＜0.15pg/ml 3.9pg/ml
检测范围 2pg/mL-500pg/mL 3.9pg/mL-250pg/mL 0-250pg/ml
从表3可以看出，各试剂盒的基本特征已经存在了差别，实施例4、对比产品1和对比产品2所针对的样本均为人血清中的白细胞介素1-β(IL-1β)；但实施例4的包被抗体和检测抗体与对比产品1和对比产品2完全不同，在此前提下，实施例4所提供试剂盒的检测灵敏度大大超过了对比产品2、略低于对比产品1(因对比文件1是采用的单克隆抗体进行包被和检测)，但其检测范围却远高于二者。且通常情况下，进行了人为重组的受体由于其重组的目的性较强，灵敏度也必然要高于普通抗原，实施例4试剂盒实际上已经达到了同类产品所能达到的最高灵敏度。
进一步的，以血液样本进行了IL-1β检测，检测方法具体为：收集炎症或者感染患者和正常人血清样本各10例，分别用本专利实施例4的试剂盒及市售的IL-1β检测试剂盒(对比产品1和对比产品2)进行了IL-1β检测，结果具体如下表4所示，表4中H组为健康机体血清，P组为炎症或感染机体血清。
表4
Figure GDA0004164772940000201
Figure GDA0004164772940000211
综合表2的判定标准，可以确定若血清IL-1β浓度>5pg/mL，表明可能存在炎症或其他感染，在上述表4的检测数据对比中，可以看出，市售试剂盒(对比产品1)在针对P1、P8、P9的检测中，均出现了由于灵敏度低从而漏检的情况，漏检率达到了30％，已属于漏检率较高水平；市售试剂盒(对比产品2)在针对P1、P8的检测中，均出现了由于灵敏度低从而漏检的情况，漏检率达到了20％，虽略低于对比产品1，但也已属于中等水平的漏检率，而相对的，本发明实施例4试剂盒检测结果则为未出现漏检，也即是漏检率为0，说明了本发明含有抗体组合的试剂盒，其灵敏度要远高于现有产品。
实施例6
本发明提供了用于检测人源血清样本中白细胞介素1-β的两种抗体，即第一抗体11G10和第二抗体7B9，并将其组合后采用双抗体夹心法进行检测，但实际上，以噬菌体展示的方法筛选得到的上述两种抗体，单独使用以及调换使用时，也同样具备检测人源血清样本中白细胞介素1-β的功能，为验证其单独使用及调换使用时的效果，申请人采用实施例1-5相似的方法进行了检测(单抗是采用了常规方法检测，双抗是采用夹心方法检测)，并将结果进行了对比，具体如下。
单独第一抗体11G10、单独第二抗体7B9、抗体组合11G10(包被)+7B9(检测)、抗体组合7B9(包被)+11G10(检测)组成试剂盒的基本特征比较结果如表5所示。
表5
11G10单独 7B9单独 7B9+11G10 11G10+7B9(实施例4)
抗原 人IL-1β 人IL-1β 人IL-1β 人IL-1β
包被抗体 — — 7B9(第二抗体) 11G10(第一抗体)
检测抗体 11G10(第一抗体) 7B9(第二抗体) 11G10(第一抗体) 7B9(第二抗体)
方法 ELISA ELISA ELISA ELISA
灵敏度 1.0pg/mL 0.9pg/mL 0.5pg/mL 0.3pg/mL
检测范围 10-100pg/mL 10-100pg/mL 5-300pg/mL 2pg/mL-500pg/mL
从表5可以看出，单独使用第一抗体11G10和单独使用第二抗体7B9均能够有效的对人源血清样本白细胞介素1-β进行检测，且二者单独使用时的检测灵敏度和检测范围也要优于现有市售产品(表3中对比产品2)，而将第一抗体第二抗体调换的抗体组合7B9(包被)+11G10(检测)，其效果要更优于第一抗体和第二抗体的单独使用，更进一步的是，采用本发明所记载的抗体组合11G10+7B9，其检测灵敏度和检测范围是所有选择里面最好的，不仅优于现有产品，也同样更优于单独使用和调换使用的方式。
为了测试实际的使用效果，申请人也进行了随机的人源血液样本进行了IL-1β检测，检测方法与得出表4结论的检测方法相似，其具体结果如表6所示。
表6
Figure GDA0004164772940000221
Figure GDA0004164772940000231
同样综合表2的判定标准，可以确定若血清IL-1β浓度>5pg/mL，表明可能存在炎症或其他感染，在上述表6的检测数据对比中，可以看出，抗体组合11G10+7B9试剂盒的检测结果未出现漏检，也即是漏检率为0，抗体组合7B9+11G10试剂盒在P8的检测中出现了漏检，也即是漏检率为10％；单独使用第二抗体7B9在针对P1的检测中，出现了漏检，漏检率为10％；单独使用第一抗体11G10在针对P8的检测中，出现了漏检，同时在针对H8的检测中出现了错检；由此对比结果可以说明，单独使用第一抗体和第二抗体，其检测灵敏度要比抗体组合使用略低。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (15)

1.用于检测白细胞介素1-β的抗体组合，其特征在于，所述抗体组合包括有第一抗体和第二抗体，所述第一抗体重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ IDNo.1的第26-34、54-63、105-116位氨基酸序列所示，轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2的第24-32、48-56、89-98位氨基酸序列所示；所述第二抗体重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.3的第26-33、53-62、104-114位氨基酸序列所示，轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.4的第24-35、51-60、93-102位氨基酸序列所示；所述抗体组合选自以下任意一种组合形式：第一抗体做为包被抗体+第二抗体做为检测抗体、第二抗体做为包被抗体+第一抗体做为检测抗体。
2.根据权利要求1所述的用于检测白细胞介素1-β的抗体组合，其特征在于，所述第一抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示或为与SEQID No.1序列同源性大于90%的氨基酸序列，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示或为与SEQ ID No.2序列同源性大于90%的氨基酸序列；所述第二抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示或为与SEQID No.3序列同源性大于90%的氨基酸序列，轻链可变区的氨基酸序列如SEQID No.4所示或为与SEQ IDNo.4序列同源性大于90%的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的用于检测白细胞介素1-β的抗体组合，其特征在于，所述第一抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示或为与SEQID No.5序列同源性大于90%的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示或为与SEQ ID No.6序列同源性大于90%的氨基酸序列；所述第二抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示或为与SEQID No.7序列同源性大于90%的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQID No.8所示或为与SEQ ID No.8序列同源性大于90%的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3任一所述的用于检测白细胞介素1-β的抗体组合，其特征在于，所述抗体组合为第一抗体做为包被抗体+第二抗体做为检测抗体。
5.一种编码权利要求1-4任一所述的用于检测白细胞介素1-β的抗体组合的重链和轻链的多核苷酸，其特征在于，编码所述第一抗体的重链可变区的多核苷酸序列如SEQ IDNo.9所示或为与SEQID No.9序列同源性大于90%的核苷酸序列，编码所述第一抗体的轻链可变区的多核苷酸序列如SEQ ID No.10所示或为与SEQ IDNo.10序列同源性大于90%的核苷酸序列；编码所述第二抗体的重链可变区的多核苷酸序列如SEQ ID No.11所示或为与SEQ IDNo.11序列同源性大于90%的核苷酸序列，编码所述第二抗体的轻链可变区的多核苷酸序列如SEQ ID No.12所示或为与SEQ IDNo.12序列同源性大于90%的核苷酸序列。
6.根据权利要求5所述的用于检测白细胞介素1-β的抗体组合的重链和轻链的多核苷酸，其特征在于，编码所述第一抗体的重链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID No.13所示或为与SEQID No.13序列同源性大于90%的核苷酸序列，编码所述第一抗体的轻链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID No.14所示或为与SEQ IDNo.14序列同源性大于90%的核苷酸序列；编码所述第二抗体的重链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID No.15所示或为与SEQ IDNo.15序列同源性大于90%的核苷酸序列，编码所述第二抗体的轻链恒定区的多核苷酸序列如SEQID No.16所示或为与SEQ IDNo.16序列同源性大于90%的核苷酸序列。
7.包含权利要求5-6任一所述用于检测白细胞介素1-β的抗体组合的重链和轻链的多核苷酸的表达系统，其特征在于，所述表达系统为哺乳动物表达载体。
8.根据权利要求7所述的表达系统，其特征在于，所述抗体表达系统为CHO表达系统。
9.一种含有权利要求7-8任一所述的表达系统的宿主细胞。
10.权利要求1-4任一所述的抗体组合在制备用于体外定量检测白细胞介素1-β含量的生物制品中的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述体外定量检测是指检测血清、血浆、全血和/或末梢血中白细胞介素1-β的含量。
12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述生物制品为试剂盒。
13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述试剂盒为双抗体夹心法检测试剂盒。
14.用于检测白细胞介素1-β的抗体，其特征在于，所述抗体重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1的第26-34、54-63、105-116位氨基酸序列所示，轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2的第24-32、48-56、89-98位氨基酸序列所示。
15.用于检测白细胞介素1-β的抗体，其特征在于，所述抗体重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.3的第26-33、53-62、104-114位氨基酸序列所示，轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.4的第24-35、51-60、93-102位氨基酸序列所示。
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