[go: up one dir, main page]

CN115298203A - 包含vgll1肽的用于治疗癌症的组合物 - Google Patents

包含vgll1肽的用于治疗癌症的组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN115298203A
CN115298203A CN202180023076.4A CN202180023076A CN115298203A CN 115298203 A CN115298203 A CN 115298203A CN 202180023076 A CN202180023076 A CN 202180023076A CN 115298203 A CN115298203 A CN 115298203A
Authority
CN
China
Prior art keywords
vgll1
cancer
sequence
peptide fragment
variant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180023076.4A
Other languages
English (en)
Inventor
元美善
金俌京
任珠英
金多美
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wankzhen Co ltd
Original Assignee
Wankzhen Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wankzhen Co ltd filed Critical Wankzhen Co ltd
Publication of CN115298203A publication Critical patent/CN115298203A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)

Abstract

本发明涉及用于治疗癌症的肽片段、其变异体及其用途。本发明的VGLL1的肽片段和/或其变异体通过抑制癌细胞的增殖及癌细胞的浸润来在癌症的预防和治疗中具有优秀的效果。

Description

包含VGLL1肽的用于治疗癌症的组合物
技术领域
本发明涉及包含VGLL1肽的用于治疗癌症的组合物及利用其的治疗癌症的方法。
本发明在韩国科学技术信息通信部课题编号第1711098598的“理工领域基础研究事业”的韩国政府的支持下完成。
本发明在韩国科学技术信息通信部课题编号第1711081422的“源技术开发事业(生物医疗技术)”的韩国政府的支持下完成。
本发明在韩国科学技术信息通信部课题编号第1711100103的“主要事业(2019-2023)”的韩国政府的支持下完成。
背景技术
癌症在世界范围内表现出高死亡率，在西方社会，癌症是仅次于心血管疾病的最常见的死亡原因。尤其，由于人口的老龄化、饮食习惯西式化引起的高脂肪饮食摄取的普遍化、环境污染物质的急剧增加、饮酒量的增加等原因，大肠癌、乳腺癌、前列腺癌等呈持续增加的趋势。在这样的情况下，切实需要创造出能够通过使癌症的早期预防及治疗成为可能来增进人类的健康、提高健康的生活质量及增进人类保健的抗癌物质。
癌症最大的原因为基因发生突变。引起突变的物质称为致癌物(carcinogen)，通过该致癌物发生基因变形的阶段称为启动(initiation)。启动阶段所包含的基因中有抑癌基因(例如p53、PTEN、INK family、RB)和因突变而总具有活性的组织活性(constitutiveactive)突变(活性变异体，例如EGFRmt、RasG12V)。虽然在正常细胞中表皮生长因子(epidermal growth factor)与EGF受体(EGF receptor)结合来生成活性信号，但活性变异体即使受体不与配体(ligand)结合也一直产生信号来向信号传递系统输送。在此过程中生成的突变细胞应突破体内的免疫系统而生长为肿瘤团块，该过程成为促进(promotion)。通常促进过程需要很长时间，主要通过信号传递系统的激活来实现。
很多癌症由通过细胞因子激活多种信号传递系统的方式来调节癌症相关基因的功能。转化生长因子-β(TGF-β，Transforming growth factor-β)通过SMAD、Rho、PP2A及癌症相关基因信号传递途径调节来干预细胞生长抑制、细胞凋亡、分化及上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition；EMT)之类的多种功能。在动物模型及患者中对转化生长因子-β作为表达性因子(多效因子(pleiotropic factor))的多种机制和广泛的作用进行了很多研究。
与作为果蝇转录因子共激活剂(coactivator)的vestigial(vg)基因具有结构相似性的Vestigial-like(VGLL)基因起到结合于TEA部位的转录因子TEADs(TEA结构域转录因子(TEA domain transcription factors))的辅助因子(cofactor)的作用。一直在胃癌中研究VGLL家族蛋白的功能及基本机制。在胃癌患者中，已知VGLL3的过度表达与患者的低存活率相关。与Yes相关蛋白(YAP，Yes-associated protein)竞争性地TEAD集合的VGLL4报告为肿瘤抑制剂。VGLL1与YAP及TAZ(具有PDZ结合基序的转录共激活因子(transcriptioncoactivator with a PDZ-binding motif))在结构上同源性高而形成VGLL1-TEAD复合物。我们将在胃中表达量高且与PIK3CA或PIK3CB过度表达的患者的预后具有相关性的VGLL1报告为与胃癌的恶化相关的基因。并且，查明通过向PI3K-AKT-β-连环蛋白的信号传递机制来调节VGLL1的转录。并且，确认到VGLL1-TEAD复合物通过增加基质金属蛋白酶9(MMP9，Matrix metallopeptidase 9)的表达来干预胃癌的增殖和转移。
对于VGLL1在一连的癌细胞的增殖及转移过程中所起的具体作用尚处于未知的状态。与VGLL1相关地，在部分文献中报告有将VGLL1用作生物标记物来预测患有肺癌的患者的存活时间的方法，或对与VGLL1的表达增进相关的癌细胞增殖或癌症转移的研究。
在这样的背景下，本发明人发现VGLL1的肽片段不仅抑制基质金属蛋白酶9的表达，还抑制癌细胞的增殖来作为癌症治疗剂，从而完成本发明。
发明内容
技术问题
本发明的目的在于，提供一种包含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸(Serine)，具有35个以下的氨基酸长度的VGLL1肽片段或其变异体。
本发明的另一目的在于，提供一种癌症的治疗方法，包括向对象给予上述VGLL1肽片段或其变异体的步骤。
技术方案
本发明的一实施方式为提供包含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸，具有35个以下的氨基酸长度的VGLL1肽片段或其变异体。
根据本发明的一具体例，上述VGLL1肽片段或其变异体可以为具有6个至25个的氨基酸序列的VGLL1肽片段或其变异体。
根据本发明的一具体例，上述VGLL1肽片段或其变异体可以为包含序列1的第52位至第115位之间的氨基酸序列中的包含第84位丝氨酸序列的VGLL1肽片段或其变异体。
根据本发明的一具体例，上述VGLL1肽片段或其变异体可以为由第84位丝氨酸及与之相邻的6个至20个氨基酸组成的VGLL1肽片段或其变异体。
根据本发明的一具体例，上述VGLL1肽片段或其变异体可以为选自由序列2至序列9组成的组中的任一种的VGLL1肽片段或其变异体。
根据本发明的一具体例，可以为还包含细胞穿膜肽的VGLL1肽片段或其变异体。
根据本发明的一具体例，可以为上述细胞穿膜肽为选自由序列12至序列19组成的组中的任一种的VGLL1肽片段或其变异体。
根据本发明的一具体例，可以为包含上述VGLL1肽片段或其变异体的用于预防或治疗癌症的药物组合物。
根据本发明的一具体例，在本发明的用于预防或治疗癌症的药物组合物中，上述癌症可以为选自由胃癌、肝癌、大肠癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、头颈部鳞状细胞癌、食管癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、间皮瘤、黑色素瘤、肉瘤、骨肉瘤、脂肪肉瘤、甲状腺癌、韧带样瘤及血液癌组成的组中的一种。
根据本发明的一具体例，在本发明的用于预防或治疗癌症的药物组合物中，上述癌症可以为胃癌。
本发明的另一实施方式提供一种癌症的治疗方法，包括向对象给予上述组合物的步骤。
发明的效果
本发明的包含第84位丝氨酸VGLL1的肽片段抑制癌细胞的增殖并且抑制癌细胞的浸润，从而在癌症的预防和治疗中具有优秀的效果。
附图说明
图1为示出确认通过向癌细胞处理转化生长因子-β来增加基质金属蛋白酶9的表达的结果。
图2为示出确认在癌细胞中通过抑制基质金属蛋白酶9的表达来抑制癌细胞的增殖及浸润的结果。
图3为示出通过荧光素酶(luciferase)活性检验确认在癌细胞中通过抑制VGLL1及TEAD4来减少通过转化生长因子-β增加的基质金属蛋白酶9启动子活性的结果。
图4为示出通过实时聚合酶链式反应(RT-PCR)确认在癌细胞中通过抑制VGLL1及TEAD4来减少通过转化生长因子-β增加的基质金属蛋白酶9启动子活性的结果。
图5为示出确认VGLL1的S84与VGLL1的通过转化生长因子-β的磷酸化的关系的结果。
图6为示出确认VGLL1的丝氨酸第84部位为与TEAD4结合的重要部位的结果。
图7为示出确认VGLL1的磷酸化给通过转化生长因子-β的基质金属蛋白酶9表达增加带来的影响的结果。
图8为示出确认通过处理包含VGLL1的第84位丝氨酸部位的肽片段来减少通过处理转化生长因子-β来增加的基质金属蛋白酶9表达的结果。
图9为示出确认通过处理包含VGLL1的第84位丝氨酸部位的肽片段来抑制癌细胞的增殖的结果。
图10为示出确认通过处理包含VGLL1的第84位丝氨酸部位的肽片段来抑制癌细胞的浸润的结果。
图11为示出确认通过处理VGLL1的肽片段及其变异体来抑制癌细胞的增殖的结果。
图12为示出确认通过处理VGLL1的S84肽片段来抑制多种癌细胞的增殖的结果。
发明的最优实施形态
本发明提供包含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸，具有35个以下的氨基酸长度的VGLL1肽片段或其变异体。
具体地，包含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸且具有35个以下的氨基酸长度的VGLL1肽片段的变异体可以为包含序列1的第84位丝氨酸且在第52位至115位之间具有35个以下的任意序列或其变异体。
在本发明中，“肽”及“蛋白质”可以互换来使用，包括氨基酸残基的聚合物的含义。上述术语不仅适用于天然氨基酸聚合物，还适用于一个以上的氨基酸残基为与之对应的天然氨基酸的人造化学类似物的氨基酸聚合物。上述术语还适用于以保留蛋白质的作用性的方式含有保护性氨基酸取代的上述聚合物。在本发明中，肽可以利用基因重组和蛋白质表达系统来合成，优选地，可以通过肽合成机在实验室内合成。
在本发明中，“VGLL1肽”是指相当于全长VGLL1蛋白的多肽。并且，上述术语包括VGLL1蛋白的所有同源体、类似物、片段或衍生物。在一具体例中，分离的VGLL1肽具有氨基酸序列(序列1(SEQ ID NO：1))。“VGLL1编码核酸”是指编码VGLL1多肽或其变异体的至少一部分的脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)。
在本发明中，具有35个以下的氨基酸长度的VGLL1肽片段可以为7个至35个的氨基酸，优选地，可以为7个至25个氨基酸残基，更优选地，可以为6个至15个的氨基酸。或者，可以为5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个或35个的氨基酸长度，或这可以为包括包含其中任意可推算的范围的氨基酸链。
在一部分实施形态中，本公开内容的VGLL1肽片段可以由在序列1的VGLL1肽序列的第52位至第115位之间的氨基酸序列中的具有35个以下的连续氨基酸且包含第84位丝氨酸的任意序列来形成。
例如，在末端包含序列的第84位丝氨酸的情况下，在本发明的VGLL1肽片段可以为具有序列1的第55位至第84位的氨基酸序列的30个的氨基酸序列。并且，VGLL1肽片段可以为在末端包含序列的第80个丝氨酸的序列1的第80位至第114位的氨基酸序列的35个的氨基酸序列。
并且，可以为包含上述序列1的第52位至第115位之间的氨基酸序列中的第84位丝氨酸序列的任意35个以下的序列。即，具有以第84位丝氨酸序列为中心并与之相邻的35个以下的氨基酸序列的氨基酸为包括在本发明范畴内的VGLL1肽的片段。
例如，可以为以序列1的第84位丝氨酸序列为中心的总氨基酸序列个数为35个以下的任意的序列。例如，可以为包含VGLL1蛋白的氨基酸序列中的第84位丝氨酸及与之相邻的8个至25个氨基酸的序列，优选地，可以为还包含与之相邻的7个至20个的氨基酸的序列，更优选地，可以为还包含与之相邻的6个至15个氨基酸的序列或由此形成的序列。
更优选地，能够以序列1的第84序列为中心由20个以下、15个以下或者10个以下、9个以下、8个以下、7个以下的序列来形成。
具体地，例如，本申请的任意序列包含从选自序列1的VGLL1肽序列的第52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81位或第82位中的任意氨基酸序列开始到选自第84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114位或第115位的任意氨基酸序列的氨基酸序列，只要是其长度满足35个以下的，不论哪个序列都可以包括在本发明范畴的肽片段中。
更具体地，可以为由VGLL1的第77位至第91位序列组成的序列2的氨基酸序列。更具体地，可以为由VGLL1的第82位至第88位序列组成的序列9的氨基酸序列。
这些例示性的VGLL1肽片段序列如下述表1所示的序列2至序列9，这些序列包含VGLL1肽的第84位丝氨酸序列，仅为例示性的序列，本发明的范围不限定于这些例示性的序列。
表1
Figure BDA0003856042430000061
Figure BDA0003856042430000071
在本发明中，“在生物学上具有活性的”是指具有与个别野生型多肽相似的结构性功能和/或相似的调节功能和/或相似的生物学功能的肽片段，也是指本发明的肽。
在本发明中，“变异体”是指与野生型肽相比，具有包括等位基因变异在内的从一个(或以上)的氨基酸开始的或对序列的取代、缺失或附加(或者它们的任意组合)的任意的肽(包括由相关核算编码的肽)。在某具体例中，当本发明中使用由该结果形成的多肽时，与野生型多肽想比，保有至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或其以上的生物学活性。具体地，本发明的变异体为必需包含序列1的S84的序列，包括具有第52位至第115位之间的VGLL1肽的任意部位发生变异的35个以下的氨基酸且保有上述提及的生物学活性的序列。
序列一致性或同源性可以通过现有已知的标准技术来测定。对齐包括在对齐的序列中导入中断或缺口(gap)。并且，对于包含比再次公开的蛋白质更多或更少的氨基酸的序列，同源性比例应理解为与全部氨基酸的数量比较时以相同氨基酸的数量为根据进行测定的。作为结果，VGLL1多肽的变异体(包括由相关核算编码的多肽)可以与序列1的肽序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同源性。具体地，本发明的变异体为包含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸且具有35个以下的氨基酸长度的VGLL1肽片段的变异体，在序列1的第52位至第115位之间具有变异，在上述第52位至第115位序列之间中考虑相应的序列，可以具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同源性。
在本发明中，“缺失”定义为与野生型多核苷酸或多肽相比，分别缺少1个以上的核苷酸或氨基酸残基的核苷酸或氨基酸序列的变化。
在本发明中，“插入”或“附加”是指与野生型多核苷酸或多肽相比，有分别附加一个以上的核苷酸或氨基酸残基引起的核苷酸或氨基酸序列的变化。
在本发明中，“取代”是指与野生型多核苷酸或多肽相比，分别通过其他核苷酸或氨基酸替换一个以上的核苷酸或氨基酸。
细胞因子转化生长因子b(TGF-b)诱导细胞内信号传递蛋白的磷酸化。若在癌细胞中处理转化生长因子b，则可以诱导VGLL1的磷酸化。例如，包含VGLL1的S84的肽片段可以通过竞争性地阻碍VGLL1与TEAD4的结合来抑制基质金属蛋白酶9的表达。可以通过这样的转化生长因子b引起磷酸化的氨基酸有丝氨酸、苏氨酸(threonine)及酪氨酸(tyrosine)。据此，优选地，可以在序列1的氨基酸序列中，保持第54、59、61、62、64、66、74、76、82、83、84位及第96位不变异，但不限定于此。
另一方面，在取代位置的优选氨基酸变异可以基于残基的极性、电荷、溶解性、疏水性、亲水性和/或两亲性特性的相似性来进行。例如，带负电荷的(negatively charged)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸，带正电荷的(positively charged)氨基酸包括赖氨酸和精氨酸，而且，具有相似的亲水值的具有不带电荷的极性头基的氨基酸可以为亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸；甘氨酸及丙氨酸；天冬酰胺及谷氨酰胺；丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸及酪氨酸，但不限定于此。上述变异可以包括保护性取代。“保护性取代”是指由具有与某氨基酸相似特性的其他氨基酸取代，为本发明所属技术领域的普通技术人员可以预测的该多肽的二次结构及亲水性质(hydropathic nature，亲水或疏水的性质)实质上没有变化的取代。通常，下述氨基酸组表现出保护性变化：(1)ala、pro、gly、glu、asp、gln、asn、ser、thr；(2)cys、ser、tyr、thr；(3)val、ile、leu、met、ala、phe；(4)lys、arg、his；以及(5)phe、tyr、trp、his。
例如，“不在生物学活性中表现出变形”的例示性的氨基酸取代可以包括序列1的第85、第87位置的变异，但不限定于此。例如，在序列1中，可以为P85A、T85A变异。
在本发明中，在上述提及的取代位置中包括如下氨基酸变异：S-A、P→A、T→A或Y→A。但不限定于此。
上述变异体可以包含非保护性变更。在优选实施例中，变异体多肽可以通过5个氨基酸或更少的氨基酸的取代、缺失或附加来与天然序列不同。并且，变异体可以通过例如对多肽的二次结构及亲水(hydropathic)特性的影响最小的氨基酸的缺失或附加来变更。
根据情况，上述变异体可以通过磷酸化(phosphorylation)、硫化(sulfation)、丙烯酸化(acrylation)、糖化(glycosylation)、甲基化(methylation)、法尼基化(farnesylation)、乙酰化(acetylation)及酰胺化(amidation)等来修饰(modification)。
例示性的氨基酸取代的变异序列如表2所示。
表2
序列10 P85A PNQWR <u>YSSAWTK</u>PQP
序列11 T87A PNQWRY <u>SSPWAK</u>PQP
为了细胞内透过，包含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸，具有35个以下的氨基酸长度的VGLL1肽片段或其变异体还可以包含细胞穿膜肽序列。
细胞穿膜肽为一种信号肽，是以向细胞内传递物质为目的的肽序列。主要由7个-30个左右的氨基酸肽序列组成，只要是具有能够向细胞内传递的信号肽的序列就都可以包括在本发明中。
例如，细胞穿膜肽主要包含赖氨酸/精氨酸等基本氨基酸残基，与之融合的蛋白质起到透过细胞膜来向细胞内浸润的作用。上述细胞穿膜肽包括HIV-1Tat蛋白、果蝇触角基因的同源结构域(穿膜肽)、HSV VP22转录调节蛋白、在vFGF中衍生的MTS肽、PTD-5、转运素或Pep-1肽来源的序列等，但不限定于此。如上所述，从病毒或阳离子肽中鉴定/合成的多种细胞穿膜肽(CPPs)(例如，TAT48-60、穿膜肽(pAntp)43-58、聚精氨酸、Pep-1、转运素等)为了使生物学活性物质介导药物载体的移动而具有能够细胞内化(internalization)的活性。
在上述序列的情况下，可以与VGLL1肽片段或其变异体的N-末端连接。
例示性的序列的情况如下述序列12至序列19所示。
表3
Figure BDA0003856042430000091
Figure BDA0003856042430000101
优选地，上述序列12的序列可以为与VGLL1肽片段或其变异体连接的序列。例如，这样的序列可以为与序列27、序列29相同的序列肽片段。并且，如序列30或序列31所示，可以为肽片段的变异体与细胞透过性序列连接的序列。
即，在本发明中，可以提供包含VGLL1肽片段或其变异体的融合肽，上述VGLL1肽片段或其变异体包含细胞穿膜肽以及序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸且具有35个以下的氨基酸长度。
在本发明中，还提供编码上述VGLL1肽片段或其变异体、在其连接有细胞穿膜肽的融合肽的核酸序列。“核酸”包括脱氧核糖核酸及核糖核酸，可以为双链或单链。
编码肽的核酸可以使用表达载体及分子生物学领域中公知的方法与在适当的表达系统中生成的肽以可操作的方式连接。本说明中公开的编码肽的核酸可以混入保障肽的适当表达的任意表达载体中。可能的表达载体为适合宿主细胞的转化的载体，包括质粒或变形的病毒(例如欠缺复制功能的逆转录病毒、腺病毒及腺相关病毒)，但不限定于此。
“适合宿主细胞的转化的”的重组表达载体为本公开内容的核酸分子、与核酸分子操作性地连接的载体，包括以用于表达宿主细胞为基础来选择的调节序列。术语“操作性地连接”或“可操作性地连接”可以相互混用，是指核酸以能够使核酸表达的方式与调节序列连接的含义。
因此，本公开内容为了编码肽的核酸及插入的蛋白质-序列的转录及转译而提供包含所需调节序列的重组表达载体。适当的调节序列可以源自包含细菌、真菌或病毒基因的多种供应源。适当的调节序列的选择通常依赖所选择的宿主细胞，可以通过本发明所属技术领域的普通技术人员轻易地实现。这样的调节序列的例包括包含转译开始信号的转录启动子及增强子或核糖核酸聚合酶结合序列、核糖体结合序列。追加地，根据选择的宿主细胞及使用的载体，在表达载体中还可以混入复制起源、追加的脱氧核糖核酸限制部位、增强子及赋予诱导性的序列之类的其它序列。应该理解的是，所需的调节序列可以通过天然蛋白质和/或其侧翼区域得到供应。
可以通过向宿主细胞导入重组表达载体来生成转化宿主细胞。术语“转化宿主细胞”是指由本公开内容的重组表达载体转化或转染的原核及真核细胞。术语“由～转化的”、“由～转染的”、“转化”及“转染”包括通过本发明所属技术领域中公知的许多可能的方法中的一种来向细胞内导入核酸(例如载体)的含义。适当的宿主细胞包括许多种原核及真核细胞。例如，本公开内容的蛋白质可以在大肠杆菌之类的细菌细胞、昆虫细胞(使用杆状病毒)、酵母细胞或哺乳动物细胞中表达。
并且，本公开内容的核酸可以使用标准方法以化学方式合成。与肽的合成一样，包括在商业上可利用的脱氧核糖核酸合成机中完全自动化的固相合成在内的以化学方式合成聚脱氧核苷酸的多种方法是广为人知的。
并且，本发明提供包含VGLL1肽片段或其变异体的药物组合物，上述VGLL1肽片段或其变异体包含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸且具有35个以下的氨基酸长度。
并且，本发明提供包含VGLL1肽片段或其变异体的用于预防或治疗癌症的药物组合物，上述VGLL1肽片段或其变异体包含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸且具有35个以下的氨基酸长度。
并且，本发明提供包含VGLL1肽片段或其变异体的用于抑制癌症转移的药物组合物，上述VGLL1肽片段或其变异体包含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸且具有35个以下的氨基酸长度。
本发明的组合物通过VGLL1的肽抑制癌细胞增殖并抑制癌细胞的浸润来在癌症的预防、转移抑制及治疗中具有优秀的效果。本发明的组合物不仅具有直接治疗效果、转移抑制效果，还包括所有作为抗癌辅助剂的效果。
在本发明中，“治疗”及“治疗的”是指向获得疾病或健康相关状态的治疗益处的目标对象给予或施用治疗剂，或者至在对象中的过程或方式的进行。“预防”、“预防的”等表示用来预防或者阻止或者减少疾病或病态的发生或复发可能性的接触。并且，是指延迟疾病或病态的开始或复发，或者是指延迟疾病或病态的发生或复发。
在本发明中，“对象”及“患者”是指人类或非人类，例如灵长动物、哺乳动物、脊柱动物。在特定实施形态中，对象为人类。
在本发明中，“治疗益处”或“治疗上有效的”是指与该状态的医学治疗相关的促进或增大对象的健康的任意内容。包括疾病的症候或症状的频度或疾病严重程度的减少，但不限定于此。例如，癌症的治疗可以包括肿瘤大小的减小、肿瘤的浸润性减少或转移的防止。并且，癌症的治疗还可以表示延长患有癌症的对象的存活。
在本发明中，癌症包括胃癌、肝癌、大肠癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、头颈部鳞状细胞癌、食管癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、间皮瘤、黑色素瘤、肉瘤、骨肉瘤、脂肪肉瘤、甲状腺癌、韧带样瘤、血液癌等。
在本发明中，例如，抗癌是指通过促进癌细胞的凋亡，或者在癌细胞中诱导细胞凋亡，或者减少癌细胞的生长速度，或者减少转移的患病率或数量，或者减少肿瘤的大小，或者抑制肿瘤的生长，或者减少向肿瘤或癌细胞的血液供应，或者促进对癌细胞或肿瘤的免疫反应，或者防止或抑制癌症的进行，或者增加患有癌症的对象的寿命来给对象的癌细胞/肿瘤带来负面影响的含义。
在本发明中，“药学上或药理学上可接受的”的语句是指在适当的情况下，例如向人类给药的情况下，不引起副作用、过敏反应或其他不适当的反应的分子性物质及组合物。参照本公开内容，本发明所属技术领域的普通技术人员将认识到如何制备包含抗体或追加的活性结构要素的药物组合物。并且，应该理解的是，在向动物(例如人类)给药的情况下，制备应按照美国食品药品监督局(FDA)生物标准局的要求满足灭菌、发热性、一般安全性及纯度标准。
如前所述，本发明的肽片段或其变异体可以通过还包含细胞穿膜肽来使向人体内细胞的传递更为轻松。
可以使用一种以上的生理学上可接受的载体或赋形剂通过标准方法配制用于本发明的上述药物组合物。适当的药物载体在本发明及文献[Remington:The Science andPractice of Pharmacy,21st Ed.,University of the Sciences in Philadelphia,Lippencott Williams&Wilkins(2005)]中公开。
能够以用于任意适当的途径的方式配制本发明的肽，例如，可以通过吸入的方式，或者配制为用于通过局部、鼻、口服、胃肠外给药或直肠给药的方式。由此，上述提及的药物组合物的给药可以通过皮内、皮下、静脉内、肌肉内、鼻内、吸入、大脑内、器官内、动脉内、腹腔内、膀胱内、胸膜内、冠状动脉内、皮下或肿瘤内注射，使用注射器或其他设备来进行。并且，经皮给药可以考虑与吸入或喷剂一同给药。在片剂及胶囊剂的情况下，可以直肠或阴道内给药。
上述药物组合物可以包含可溶于通常的药学上可接收的载体的肽，优选地，包含可溶于水性载体中的肽，或者包含肽。可以使用多种水性载体，例如，可以使用缓冲的生理盐水等。这些溶液为杀菌性的，通常没有不期望的物质。这些组合物可以通过通常的广为人知的杀菌方法杀菌。为了接近生理学条件，上述组合物可以包含所需的药学上可接受的辅助物质，例如pH调节剂、缓冲剂及毒性调节剂等，例如还可以包含乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。这些剂型中的肽可以在大范围内具有多样的浓度，可以根据选择的特定给药模式及患者的需要以流体体积、粘度、体重等为根据来选择。
本发明的药物组合物适合包括静脉内给药或体腔内给药在内的胃肠外给药。
在注射本发明的肽的情况下，例如可以配制为用于临时注射或连续注射的用来胃肠外给药的剂型。注射用剂型能够以单位给药型，例如安碚瓶的方式存在，或者在多次剂量容器中与添加的保存剂一同存在。优选地，可注射的组合物制备为水性等渗溶液或悬浮液，优选地，以脂肪乳液或悬浮液的方式制备为栓剂。上述组合物可以杀菌和/或含有辅助剂，例如含有保存剂、稳定剂、湿润或润滑剂、增溶剂、浸润压调节用盐和/或缓冲剂。另一方面，上述活性成分能够以通过适当的载体，例如以通过灭菌的无发热源的水组成的粉末形态存在。并且，上述活性成分还可以包含其他治疗学上贵重的物质。上述组合物可以分别通过通常的混合、颗粒化或包衣方法制备，这些组合物含有0.1％至75％的活性成分，优选地，含有约1％至50％的活性成分。
在口服给药的情况下，药物组合物或药剂可以与药学上可接收的赋形剂一同，通过通常的手段制备为例如片剂或胶囊的形态。优选地，可以制备为包含活性成分，即，本发明的组合物与如下成分的片剂及明胶胶囊：(a)稀释剂或填充剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素(例如乙基纤维素、微晶纤维素)、甘氨酸、果胶、聚丙烯酸酯和/或磷酸氢钙、硫酸钙；(b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其镁盐或钙盐、硬脂酸金属盐、胶体二氧化硅、氢化植物油、玉米淀粉、苯甲酸钠、乙酸钠和/或聚乙二醇；(c)结合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或羟丙基甲基纤维素；(d)崩解剂，例如淀粉(例如马铃薯淀粉或淀粉钠)、乙醇酸盐、琼脂、海藻酸或其钠盐或发泡型混合物；(e)湿润剂，例如十二烷基硫酸钠；和/或(f)吸收剂、着色剂、风味剂及甜味剂。
本发明以用于预防、治疗或抑制癌症之类的疾病或其恶性状态的有效量向患者给予药物组合物。以使患者引起有效的治疗或诊断反应的充分的量向患者给予上述药物组合物。有效的治疗或诊断反应为至少部分性地组织或降低上述疾病或恶性状态的症状或并发症的反应。将用于进行上述有效的治疗或诊断反应的适当的量定义为“治疗学上有效的量”。
给予的肽的给药量根据哺乳动物的种类、体重、年龄、个体条件、治疗区域的表面积给药形态的不同而不同。并且，上述剂量在特定患者中通过给药特定化合物时伴随的任意副作用的存在、性质及程度来决定。
用于向约50kg至80kg的哺乳动物的单位给药量，优选地，用于向人类给药的单位给药量，相对于肽，可以包含1mg/kg至5mg/kg的量。
典型地，本发明化合物的给药量为实现所目标的效果的充分的给药量。最佳的给药时间表可以通过肽的定、患者身体中的积累来计算。可以在一天、一周、一个月或一年中提供一次以上。相关领域的熟练技术人员可以轻易决定最佳给药量、给药方法及重复比例。相关领域的熟练技术人员可以根据相关领域中公知且在本发明中公开的确立的方案决定用于给药肽的最佳给药。但应该理解的是，有效成分的实际给药量应参照所要治疗的疾病、疾病的严重程度、给药途径、患者的体重、年龄及性别等相关因素来决定，因此，上述给药量不在任何方面限制本发明的范围。
并且，本发明提供用于预防或治疗的VGLL1肽片段或其变异体，上述VGLL1肽片段或其变异体包含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸且具有35个以下的氨基酸长度。
并且，本发明提供将VGLL1肽片段或其变异体用在用于预防或治疗癌症的药剂的制备中的用途，上述VGLL1肽片段或其变异体含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸且具有35个以下的氨基酸长度。
并且，本发明提供癌症的治疗方法，包括向对象给予治疗学上有效的量的VGLL1肽片段或其变异体的步骤，上述VGLL1肽片段或其变异体含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸且具有35个以下的氨基酸长度。
发明的实施形态
以下，示出优选实施例以助于对本发明的理解。但下述实施例仅为易于理解本发明而提供，本发明的内容不限定于这些实施例。
在本发明中，确认到VGLL1的肽片段或其变异体通过抑制癌细胞增殖并抑制癌细胞的浸润来在癌症的预防及治疗中具有优秀的效果，从而完成本发明。以下，对此进行具体说明。
<实施例1>确认癌细胞通过由转化生长因子-β引起的基质金属蛋白酶9的表达增加的增殖及转移
实施例1-1.确认通过转化生长因子-β的基质金属蛋白酶9的表达
为了在胃癌细胞株中确认根据转化生长因子-β的处理的基质金属蛋白酶9的表达变化，在各不同时间段向人胃癌细胞株NUGC3处理转化生长因子-β后从细胞中提取信使核糖核酸(mRNA)并合成互补脱氧核糖核酸后，使用基质金属蛋白酶9(Matrixmetalloproteinase 9)引物(表4)进行实时聚合酶链式反应。
表4
引物 序列
基质金属蛋白酶9-F 5'-TCTATGGTCCTCGCCCTGAA-3'(序列20)
基质金属蛋白酶9-R 5'-CATCGTCCACCGGACTCAAA-3'(序列21)
结果如图1所示。
如图所示，确认到从6小时以后开始，通过转化生长因子-β，基质金属蛋白酶9的表达增加。
实施例1-2.确认通过基质金属蛋白酶9的癌细胞增殖及浸润
为了确认基质金属蛋白酶9的表达给胃癌细胞的增殖及转移带来的影响，通过处理小干扰基质金属蛋白酶9(siMMP9)来确认给癌细胞的增殖及浸润带来的影响。
具体地，在6孔培养板(6-well plate)中过夜(overnight)培养胃癌细胞株NUGC3后，将20nM的siSC、小干扰基质金属蛋白酶9(序列22)与Lipofectamine 2000混合后处理上述细胞株。48小时后，从细胞中提取信使核糖核并合成互补脱氧核糖核酸后，使用基质金属蛋白酶9引物进行实时聚合酶链式反应(图2的A部分)。
表5
序列
小干扰基质金属蛋白酶9 5'-CCACAACAUCACCUAUUGGAUdTdT-3'
并且，为了确认基质金属蛋白酶9的细胞增殖能力，在96孔培养板(96-wellplate)中培养胃癌细胞株NUGC3的次日，将20nM的siSC、小干扰基质金属蛋白酶9与Lipofectamine 2000混合后处理上述细胞株。48小时后，使用1％的福尔马林(formalin)溶液固定细胞。然后，使用0.4％的磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B)溶液染色上述细胞1小时后，使用乙酸(acetic acid)洗涤后干燥。然后，将上述细胞溶于10mM的Tris溶液中后使用酶联免疫吸附测定酶标仪(ELISA plate reader)在540nm的波长下测量吸光度(图2的B部分)。
接下来，为了确认基质金属蛋白酶9的细胞浸润能力，在24孔培养板(24-wellplate)中固定细胞培养小室(cell culture insert)后，将基质胶(matrigel)稀释20倍后加入100μl，在37℃的温度下反应1小时以上。向细胞培养小室下方的24孔培养板放入700μl的包含10％的血清的培养基。将使用上述小干扰核糖核酸(siRNA)敲低(knockdown)基质金属蛋白酶(MMP)的细胞以5×105的浓度放入无血清的培养基中达300μl后加入细胞培养小室中。培养48小时后，拿出细胞培养小室在10％的福尔马林溶液中固定。使用棉棒清除细胞培养小室中剩余的细胞后用水洗涤。使用0.4％的磺酰罗丹明B溶液染色细胞1小时后，使用乙酸洗涤后干燥。然后，使用光学显微镜拍照后切下细胞培养小室的膜(membrane)后，溶于10mM的Tris溶液中后使用酶联免疫吸附测定酶标仪在540nm的波长下测量吸光度(图2的C部分)。
上述各实验结果如图2的A部分至C部分所示。
图2的A部分示出随着小干扰核糖核酸(小干扰基质金属蛋白酶9)的处理使基质金属蛋白酶9的表达减少的结果。并且，图2的B部分示出随着小干扰核糖核酸(小干扰基质金属蛋白酶9)的处理使基质金属蛋白酶9的表达减少而使细胞存活率大幅减少的结果。并且，图2的C部分示出随着小干扰核糖核酸(小干扰基质金属蛋白酶9)的处理使细胞的浸润特性大幅减少的结果。
通过上述结果可以确认，通过小干扰基质金属蛋白酶9抑制基质金属蛋白酶9的表达，因此，在胃癌细胞株NUGC3中确认到增殖及浸润能力的大幅减少。
<实施例2>确认基质金属蛋白酶9的启动子活性及VGLL1和TEAD4在其信使核糖核酸表达中的作用
实施例2.1.确认通过转化生长因子-β的基质金属蛋白酶9的启动子活性及VGLL1和TEAD4的调节能力
为了在NUGC3人类胃癌细胞株中确认VGLL1和TEAD4是否与基质金属蛋白酶9的启动子活性相关，处理转化生长因子-β后确认基质金属蛋白酶9启动子的荧光素酶(luciferase)活性。
具体地，在48孔培养板(48-well plate)中以2×104细胞/孔的浓度培养胃癌细胞株NUGC3。次日，利用Lipofectamine 2000将插入基质金属蛋白酶9基因的pGL4.17-luciferase载体转染到细胞中。24小时后，将20nM的siSC(序列23：5'-CCUACGCCACCAAUUUCGUdTdT-3')、siVGLL1(序列24：5'-AGCCUAUAAAGACGGAAUGGAAUdTdT-3')、siTEAD4(序列25：5'-GACACUACUCUUACCGCAUdTdT-3')、siYAP(序列26：5'-CCACCAAGCUAGAUAAAGAAAdTdT-3')与Lipofectamine 2000混合后处理上述细胞株。次日，使用转化生长因子-β处理18小时后，使用细胞裂解缓冲液(passive lysis buffer)破碎上述细胞。接着，离心分离上述细胞后获得上清液，当使获得的上述上清液与基质(产品名：dual-luciferase assay kit)反应时，由于荧光素酶与基质的反应而发出荧光，在此情况下，使用victor X酶标仪(victor X Light)确认上述细胞的发光程度。
结果如图3所示。在图3中可以确认，与对照组(siSC)相比，使用siVGLL1和siTEAD4转染的细胞通过转化生长因子-β增加的基质金属蛋白酶9启动子的活性减少了。这样的结果示出VGLL1和TEAD4调节基质金属蛋白酶9的启动子活性。
实施例2-2.确认VGLL1和TEAD4对通过转化生长因子-β的基质金属蛋白酶9的信使核糖核酸表达的作用
为了在NUGC3人类胃癌细胞株中确认VGLL1和TEAD4是否与基质金属蛋白酶9的信使核糖核酸表达相关，处理转化生长因子-β后，通过实时聚合酶链式反应确认基质金属蛋白酶9的信使核糖核酸表达。
具体地，在6孔培养板中培养胃癌细胞株NUGC3后的次日，将20nM的siSC、siVGLL1、siTEAD4、siYAP与Lipofectamine 2000混合后处理上述细胞株。次日，使用转化生长因子-β处理18小时后，从细胞中提取信使核糖核酸并合成互补脱氧核糖核酸后，进行实时聚合酶链式反应。
结果如图4所示。如图4所示，确认到与对照组(siSC)相比，使用siVGLL1和siTEAD4转染的细胞通过转化生长因子-β增加的基质金属蛋白酶9的信使核糖核酸的表达减少了。
<实施例3>确认通过转化生长因子-β的VGLL1的丝氨酸第84位的磷酸化
为了确认VGLL1是否通过转化生长因子-β被磷酸化，使VGLL1氨基酸序列的第50位、第84位、第124位丝氨酸突变为丙氨酸(Alanine)后，确认VGLL1的磷酸化与否。
具体地，为了使VGLL1的特定氨基酸发生突变，在pcDNA3-HA-VGLL1-载体中使用定点突变(site-direct mutagenesis)制品来将第50位、第84位、第124位丝氨酸换为丙氨酸。
并且，在6孔培养板中培养胃癌细胞株NUGC3的次日，将pcDNA3-HA(EV)、pcDNA3-HA-VGLL1(WT)、pcDNA3-HA-VGLL1-S50A(S50A突变)、pcDNA3-HA-VGLL1-S84A(S84A突变)、pcDNA3-HA-VGLL1-S124A(S124A突变)与Turbofect混合后向细胞株转化。48小时后，使用转化生长因子-β处理15分钟后，利用RIPA缓冲液(RIPA buffer)从上述细胞中提取蛋白质。利用结合有HA抗体的琼脂糖使提取的蛋白质免疫共沉淀(Immunoprecipitation)后通过电泳来分离，利用抗体在移动的聚偏氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride membrane)中确认基因的蛋白质表达。
结果如图5所示。在图5中可以确认，在WT、S50A及S124A中通过丝氨酸/苏氨酸磷酸化(pSer/Thr)抗体检测到通过转化生长因子-β的VGLL1的磷酸化。相反，在使用S84A突变转化的细胞株中，未确认到VGLL1的磷酸化。该结果说明VGLL1的丝氨酸第84部位为通过转化生长因子-β的磷酸化的部位。
<实施例4>确认磷酸化的VGLL1与TEAD4的结合
为了确认VGLL1是否与转录因子TEAD4结合，进行免疫共沉淀法，为了确认VGLL1的磷酸化是否起到重要的作用，利用了实施例3中使用的载体。
具体地，将GFP-TEAD4载体、pcDNA3-HA(EV)、pcDNA3-HA-VGLL1(WT)、pcDNA3-HA-VGLL1-S50A(S50A突变)、pcDNA3-HA-VGLL1-S84A(S84A突变)、pcDNA3-HA-VGLL1-S124A(S124A突变)与Turbofect混合后向培养24小时的细胞株转化。48小时后，利用RIPA缓冲液从上述细胞中提取蛋白质后，利用结合有HA抗体的琼脂糖使提取的蛋白质免疫共沉淀后通过电泳来分离，利用抗体在移动的聚偏氟乙烯膜中确认基因的蛋白质表达。
结果如图6所示。在图6中可以确认，在WT、S50A及S124A中通过绿色荧光蛋白(GFP)抗体检测到VGLL1和TEAD4的结合。相反，在使用S84A突变转化的细胞株中未确认到TEAD4的结合。该结果说明VGLL1的丝氨酸第84部位相当于与TEAD4结合的重要部位。
<实施例5>确认VGLL1的磷酸化在通过转化生长因子-β的基质金属蛋白酶9表达增加中的作用
为了在NUGC3人类胃癌细胞株中确认VGLL1的磷酸化是否与基质金属蛋白酶9的蛋白质表达有关，使用上述实施例3中使用的VGLL1载体通过蛋白印迹法(Western blot)确认基质金属蛋白酶9的蛋白质表达。
具体地，在6孔培养板中培养胃癌细胞株NUGC3的次日，将pcDNA3-HA(EV)、pcDNA3-HA-VGLL1(WT)、pcDNA3-HA-VGLL1-S50A(S50A)、pcDNA3-HA-VGLL1-S84A(S84A)、pcDNA3-HA-VGLL1-S124A(S124A)与Turbofect混合后向细胞株转化。24小时后，使用转化生长因子-β处理18小时后，利用RIPA缓冲液从上述细胞中提取蛋白质。通过电泳分离提取得蛋白质后，在移动的聚偏氟乙烯膜中利用基质金属蛋白酶9、HA、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体确认蛋白质表达。
结果如图7所示。在图7中可以确认，在VGLL1第84位丝氨酸取代为丙氨酸的细胞株中确认到通过转化生长因子-β的基质金属蛋白酶9蛋白质的表达减少了。这表明通过转化生长因子-β的VGLL1的磷酸化对基质金属蛋白酶9的表达很重要，表明VGLL1肽的第84部位的丝氨酸为重要因子。
<实施例6>确认S84 VGLL1肽片段抑制基质金属蛋白酶9表达和抑制癌细胞增殖及浸润的效果
实施例6-1.S84 VGLL1肽片段减少通过转化生长因子-β的基质金属蛋白酶9的表达
为了在人类胃癌细胞株中处理抑制VGLL1与TEAD4结合的肽片段的情况下确认是否能够抑制基质金属蛋白酶9的表达，制备具有表6所示的序列的肽片段后确认其抑制基质金属蛋白酶9表达的效果。
表6
Figure BDA0003856042430000201
在上述表6中，肽片段序列提供包含VGLL1的S84的VGLL1的第77位至第91位的序列。具体地，序列27的序列包含荧光素部分(fluorescein moiety)(异硫氰酸荧光素(FITC))和需要向细胞内导入的作为HIV TAT转导结构域序列(transduction domainsequence)的YGRKKRRQRRR，为与其连接有VGLL1的第77位至第91位的序列。序列28表示VGLL1的S84被S84A取代的序列。序列12为对照组(Control)序列，表示HIV TAT转导结构域序列。
利用上述合成肽片段进行实验。在6孔培养板中培养胃癌细胞株NUGC3的次日，在无血清的培养基中培养24小时。分别使用转化生长因子-β、对照组肽片段(序列12)、包含VGLL1的第84位丝氨酸的肽片段(序列27)、包含VGLL1的第84位丙氨酸的突变肽片段(序列28)处理18小时。利用RIPA缓冲液从上述细胞中提取蛋白质并通过电泳分离后，在移动的聚偏氟乙烯膜中利用抗体确认基因的蛋白质表达。
结果如图8所示。在图8中可以确认，通过转化生长因子-β增加的基质金属蛋白酶9的表达通过处理包含VGLL1的第84位丝氨酸的肽片段而减少。相反，在包含VGLL1的第84位丙氨酸的突变肽片段的情况下，未因肽片段的处理受到任何影响。通过这样的结果确认到本发明的包含VGLL1的第84位丝氨酸的肽片段序列可以在癌症的治疗中表现出优秀的效果。
实施例6-2.确认通过S84 VGLL1肽片段的癌细胞增殖抑制效果由于在胃癌细胞中通过抑制VGLL1与TEAD4的结合来减少基质金属蛋白酶9表达也会给癌细胞的增殖带来影响，因此确认通过包含S84的VGLL1肽片段是否抑制细胞增殖。
具体地，在96孔培养板中培养胃癌细胞株NUGC3的次日处理肽片段后，使用实时细胞分析系统(产品名：Incucyte)分析细胞增殖。
结果如图9所示。在图9中可以确认，S84 VGLL1肽片段表现出抑制癌细胞增殖的效果。相反，不论是对照组肽片段还是S84的位置发生突变的在第84部位包含丙氨酸的突变VGLL1肽片段都未给癌细胞增殖带来任何影响。
通过上述结果确认本发明的S84 VGLL1肽片段序列在抑制癌细胞增殖中表现出优秀效果。
<实施例7>确认通过S84 VGLL1肽片段的癌细胞浸润抑制
以与实施例1-2相似的方法进行通过VGLL1肽片段的胃癌细胞浸润试验。
将胃癌细胞株NUGC3与肽片段一同放入细胞培养小室(insert)中培养48小时后，将细胞培养小室在10％的福尔马林溶液中固定后使用0.4％的磺酰罗丹明B溶液染色来确认向下移动的细胞。
结果如图10所示。在图10中可以确认，包含S84的VGLL1肽片段序列表现出抑制癌细胞浸润的效果，相反，相关部位发生突变的序列未表现出该效果。
<实施例8>确认S84 VGLL1肽片段变异体的癌细胞增殖抑制效果
为了确认通过VGLL1 S84肽序列中主要氨基酸的突变的细胞增殖抑制效果，制备如表7所示的肽。
表7
肽 序列
对照组 YGRKKRRQRRR(序列12)
VGLL1 S84-S YGRKKRRQRRR-<u>YSSPWTK(</u>序列29)
VGLL1 S84 YGRKKRRQRRR-PNQWR <u>YSSPWTK</u>PQP(序列27)
VGLL1 S84A YGRKKRRQRRR-PNQWR <u>YSAPWTK</u>PQP(序列28)
VGLL1 P85A YGRKKRRQRRR-PNQWR <u>YSSAWTK</u>PQP(序列30)
VGLL1 T87A YGRKKRRQRRR-PNQWR <u>YSSPWAK</u>PQP(序列31)
在96孔培养板中培养胃癌细胞株NUGC3的次日处理60μM的肽后，使用实时细胞分析系统(产品名：Incucyte)分析细胞增殖。
结果如图11所示。图11的A部分为实时细胞增殖曲线图，B部分为以对照组肽为100％基准的4天后的细胞增殖柱状图。
在附图中可以确认，不仅是处理S84 VGLL1肽的情况，在处理S84-S、P85A、T87A等的情况下，都在抑制癌细胞增殖中表现出优秀的效果。
基于这样的结果，确认S84序列为最重要的表现出细胞增殖抑制效果的肽序列。
通过上述结果确认，本发明的包含VGLL1的第S84位的丝氨酸的肽片段序列通过抑制癌细胞的增殖及浸润来在癌症的治疗中表现出优秀的效果。
<实施例9>S84 VGLL1肽片段抑制多种癌细胞增殖的效果
为了确认S84 VGLL1肽片段变异体的抑制多种癌细胞增殖的效果，使用序列27的VGLL1 S84肽序列处理多种癌细胞株。
具体地，在96孔培养板中培养表8所示的癌细胞的次日处理60μM的肽后，使用实时细胞分析系统(产品名：Incucyte)分析细胞增殖。
表8
Figure BDA0003856042430000231
Figure BDA0003856042430000241
结果，在图12中可以确认，不仅是在抑制胃癌细胞增殖方面，S84 VGLL1肽片段在抑制大肠癌、肺癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、宫颈癌及卵巢癌细胞的增殖方面都表现出优秀的效果。
基于这样的结果，确认S84序列为表现出抑制多种癌细胞增殖的重要的肽序列。
以上，详细说明了本发明的特定部分，本发明所属技术领域的普通技术人员应该明白的是，上述任何具体的技术仅为优选实例而已，而非本发明的范围。因此，本发明的实质性的范围应由随附的发明要求保护范围及其等同技术方案来定义。
<110> 万可真株式会社
<120> 包含VGLL1肽的用于治疗癌症的组合物
<130> SP20-0122WO-CN
<160> 31
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 258
<212> PRT
<213> 人类（Homo sapiens）
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(258)
<223> VGLL1
<400> 1
Met Glu Glu Met Lys Lys Thr Ala Ile Arg Leu Pro Lys Gly Lys Gln
1 5 10 15
Lys Pro Ile Lys Thr Glu Trp Asn Ser Arg Cys Val Leu Phe Thr Tyr
20 25 30
Phe Gln Gly Asp Ile Ser Ser Val Val Asp Glu His Phe Ser Arg Ala
35 40 45
Leu Ser Asn Ile Lys Ser Pro Gln Glu Leu Thr Pro Ser Ser Gln Ser
50 55 60
Glu Gly Val Met Leu Lys Asn Asp Asp Ser Met Ser Pro Asn Gln Trp
65 70 75 80
Arg Tyr Ser Ser Pro Trp Thr Lys Pro Gln Pro Glu Val Pro Val Thr
85 90 95
Asn Arg Ala Ala Asn Cys Asn Leu His Val Pro Gly Pro Met Ala Val
100 105 110
Asn Gln Phe Ser Pro Ser Leu Ala Arg Arg Ala Ser Val Arg Pro Gly
115 120 125
Glu Leu Trp His Phe Ser Ser Leu Ala Gly Thr Ser Ser Leu Glu Pro
130 135 140
Gly Tyr Ser His Pro Phe Pro Ala Arg His Leu Val Pro Glu Pro Gln
145 150 155 160
Pro Asp Gly Lys Arg Glu Pro Leu Leu Ser Leu Leu Gln Gln Asp Arg
165 170 175
Cys Leu Ala Arg Pro Gln Glu Ser Ala Ala Arg Glu Asn Gly Asn Pro
180 185 190
Gly Gln Ile Ala Gly Ser Thr Gly Leu Leu Phe Asn Leu Pro Pro Gly
195 200 205
Ser Val His Tyr Lys Lys Leu Tyr Val Ser Arg Gly Ser Ala Ser Thr
210 215 220
Ser Leu Pro Asn Glu Thr Leu Ser Glu Leu Glu Thr Pro Gly Lys Tyr
225 230 235 240
Ser Leu Thr Pro Pro Asn His Trp Gly His Pro His Arg Tyr Leu Gln
245 250 255
His Leu
<210> 2
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 77-91_VGLL1
<400> 2
Pro Asn Gln Trp Arg Tyr Ser Ser Pro Trp Thr Lys Pro Gln Pro
1 5 10 15
<210> 3
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 78-90_VGLL1
<400> 3
Asn Gln Trp Arg Tyr Ser Ser Pro Trp Thr Lys Pro Gln
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 79-89_VGLL1
<400> 4
Gln Trp Arg Tyr Ser Ser Pro Trp Thr Lys Pro
1 5 10
<210> 5
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 80-88_VGLL1
<400> 5
Trp Arg Tyr Ser Ser Pro Trp Thr Lys
1 5
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 80-87_VGLL1
<400> 6
Trp Arg Tyr Ser Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 7
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 80-86_VGLL1
<400> 7
Trp Arg Tyr Ser Ser Pro Trp
1 5
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 81-87_VGLL1
<400> 8
Arg Tyr Ser Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 82-88_VGLL1
<400> 9
Tyr Ser Ser Pro Trp Thr Lys
1 5
<210> 10
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P85A variant_VGLL1
<400> 10
Pro Asn Gln Trp Arg Tyr Ser Ser Ala Trp Thr Lys Pro Gln Pro
1 5 10 15
<210> 11
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T87A variant_VGLL1
<400> 11
Pro Asn Gln Trp Arg Tyr Ser Ser Pro Trp Ala Lys Pro Gln Pro
1 5 10 15
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HIV-1 Tat
<400> 12
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg
1 5 10
<210> 13
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Penetratin
<400> 13
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
<210> 14
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HSV VP22
<400> 14
Asp Ala Ala Thr Ala Thr Arg Gly Arg Ser Ala Ala Ser Arg Pro Thr
1 5 10 15
Glu Arg Pro Arg Ala Pro Ala Arg Ser Ala Ser Arg Pro Arg Arg Pro
20 25 30
Val Glu
<210> 15
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MTS
<400> 15
Ala Ala Val Ala Leu Leu Pro Ala Val Leu Leu Ala Ala Pro
1 5 10
<210> 16
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Transportan
<400> 16
Gly Trp Thr Leu Asn Ser Ala Gly Tyr Leu Leu Gly Lys Ile Asn Leu
1 5 10 15
Lys Ala Leu Ala Ala Leu Ala Lys Lys Ile Leu
20 25
<210> 17
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PEP-1
<400> 17
Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gln Pro Lys
1 5 10 15
Lys Lys Arg Lys Val
20
<210> 18
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Poly arginine
<400> 18
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg
1 5
<210> 19
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PTD-5
<400> 19
Arg Arg Gln Arg Arg Thr Ser Lys Leu Met Lys Arg
1 5 10
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MMP9 正向引物
<400> 20
tctatggtcc tcgccctgaa 20
<210> 21
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MMP9 反向引物
<400> 21
catcgtccac cggactcaaa 20
<210> 22
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siMMP9 (22,23-dTdT)
<400> 22
ccacaacauc accuauugga utt 23
<210> 23
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siSC (20,21-dTdT)
<400> 23
ccuacgccac caauuucgut t 21
<210> 24
<211> 25
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siVGLL1 (24,25-dTdT)
<400> 24
agccuauaaa gacggaaugg aautt 25
<210> 25
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siTEAD4 (20,21-dTdT)
<400> 25
gacacuacuc uuaccgcaut t 21
<210> 26
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siYAP (22,23-dTdT)
<400> 26
ccaccaagcu agauaaagaa att 23
<210> 27
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Tat-VGLL1
<400> 27
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Asn Gln Trp Arg
1 5 10 15
Tyr Ser Ser Pro Trp Thr Lys Pro Gln Pro
20 25
<210> 28
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Tat-VGLL1(S84A)
<400> 28
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Asn Gln Trp Arg
1 5 10 15
Tyr Ser Ala Pro Trp Thr Lys Pro Gln Pro
20 25
<210> 29
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Tat-VGLL1(S84-S)
<400> 29
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Tyr Ser Ser Pro Trp
1 5 10 15
Thr Lys
<210> 30
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Tat-VGLL1(P85A)
<400> 30
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Asn Gln Trp Arg
1 5 10 15
Tyr Ser Ser Ala Trp Thr Lys Pro Gln Pro
20 25
<210> 31
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Tat-VGLL1(T87A)
<400> 31
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Asn Gln Trp Arg
1 5 10 15
Tyr Ser Ser Pro Trp Ala Lys Pro Gln Pro
20 25

Claims (11)

1.一种VGLL1肽片段或其变异体，其特征在于，包含序列1的VGLL1的肽序列的第84位丝氨酸，具有35个以下的氨基酸长度。
2.根据权利要求1所述的VGLL1肽片段或其变异体，其特征在于，上述VGLL1肽片段或其变异体具有6个至25个氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的VGLL1肽片段或其变异体，其特征在于，上述VGLL1肽片段或其变异体包含序列1的第52位至第115位之间的氨基酸序列中的第84位丝氨酸序列。
4.根据权利要求1所述的VGLL1肽片段或其变异体，其特征在于，上述VGLL1肽片段或其变异体由第84位丝氨酸及与之相邻的6个至20个氨基酸组成。
5.根据权利要求1所述的VGLL1肽片段或其变异体，其特征在于，上述VGLL1肽片段或其变异体为选自由序列2至序列9组成的组中的一种。
6.根据权利要求1所述的VGLL1肽片段或其变异体，其特征在于，还包含细胞穿膜肽。
7.根据权利要求6所述的VGLL1肽片段或其变异体，其特征在于，上述细胞穿膜肽为选自由序列12至序列19组成的组中的一种。
8.一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其特征在于，包含权利要求1至7中任一项所述的VGLL1肽片段或其变异体。
9.根据权利要求8所述的用于预防或治疗癌症的药物组合物，其特征在于，上述癌症为选自由胃癌、肝癌、大肠癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、头颈部鳞状细胞癌、食管癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、间皮瘤、黑色素瘤、肉瘤、骨肉瘤、脂肪肉瘤、甲状腺癌、韧带样瘤及血液癌组成的组中的一种。
10.根据权利要求9所述的用于预防或治疗癌症的药物组合物，其特征在于，上述癌症为胃癌。
11.一种癌症的治疗方法，其特征在于，包括向对象给予权利要求1所述的组合物的步骤。
CN202180023076.4A 2020-03-27 2021-03-22 包含vgll1肽的用于治疗癌症的组合物 Pending CN115298203A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2020-0037335 2020-03-27
KR20200037335 2020-03-27
PCT/KR2021/003496 WO2021194186A1 (ko) 2020-03-27 2021-03-22 Vgll1 펩타이드를 포함하는 암 치료용 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115298203A true CN115298203A (zh) 2022-11-04

Family

ID=77892463

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180023076.4A Pending CN115298203A (zh) 2020-03-27 2021-03-22 包含vgll1肽的用于治疗癌症的组合物

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20240376165A1 (zh)
EP (1) EP4130025A4 (zh)
JP (1) JP7531931B2 (zh)
KR (2) KR20210120882A (zh)
CN (1) CN115298203A (zh)
AU (2) AU2021244056B2 (zh)
BR (1) BR112022019454A2 (zh)
WO (1) WO2021194186A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4324841A4 (en) * 2021-04-15 2025-05-07 Onecuregen Co., Ltd. Cell-penetrating peptide, anticancer peptide and pharmaceutical composition for preventing or treating cancer therewith
KR20250045548A (ko) 2023-09-25 2025-04-02 국립해양생물자원관 참깃털말 유래 신규 펩타이드 및 이의 용도

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103975078A (zh) * 2011-11-15 2014-08-06 昂科赛特公司 治疗和诊断膀胱癌的方法和组合物
KR20150050681A (ko) * 2013-10-30 2015-05-11 한국생명공학연구원 암 치료 또는 암 전이 타겟으로서 vgll1의 용도
US20190241633A1 (en) * 2016-05-04 2019-08-08 Curevac Ag Rna encoding a therapeutic protein
CN110352067A (zh) * 2016-10-07 2019-10-18 得克萨斯州大学系统董事会 Hla限制性vgll1肽及其用途

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001055173A2 (en) * 2000-01-31 2001-08-02 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
CA2343602A1 (en) * 2000-04-18 2001-10-18 Genset Est's and encoded human proteins
US20120195978A1 (en) * 2009-10-07 2012-08-02 Indiana University Research And Technology Corpora Capcna peptide therapeutics for cancer
SG11202111744UA (en) * 2019-04-30 2021-11-29 Gigagen Inc Recombinant polyclonal proteins and methods of use thereof
EP4324841A4 (en) * 2021-04-15 2025-05-07 Onecuregen Co., Ltd. Cell-penetrating peptide, anticancer peptide and pharmaceutical composition for preventing or treating cancer therewith

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103975078A (zh) * 2011-11-15 2014-08-06 昂科赛特公司 治疗和诊断膀胱癌的方法和组合物
KR20150050681A (ko) * 2013-10-30 2015-05-11 한국생명공학연구원 암 치료 또는 암 전이 타겟으로서 vgll1의 용도
US20190241633A1 (en) * 2016-05-04 2019-08-08 Curevac Ag Rna encoding a therapeutic protein
CN110352067A (zh) * 2016-10-07 2019-10-18 得克萨斯州大学系统董事会 Hla限制性vgll1肽及其用途
US20200040079A1 (en) * 2016-10-07 2020-02-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Hla-restricted vgll1 peptides and use thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JOO-YOUNG IM ET AL.: "VGLL1 phosphorylation and activation promotes gastric cancer malignancy via TGF-β/ERK/RSK2 signaling", BBA - MOLECULAR CELL RESEARCH, vol. 1868, no. 1, 16 October 2020 (2020-10-16), pages 1 - 9, XP086349123, DOI: 10.1016/j.bbamcr.2020.118892 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2021244056A1 (en) 2022-10-06
BR112022019454A2 (pt) 2022-12-13
US20240376165A1 (en) 2024-11-14
AU2024201112A1 (en) 2024-03-14
EP4130025A1 (en) 2023-02-08
KR20240124255A (ko) 2024-08-16
KR20210120882A (ko) 2021-10-07
EP4130025A4 (en) 2024-05-29
JP2023520864A (ja) 2023-05-22
AU2021244056B2 (en) 2024-04-04
JP7531931B2 (ja) 2024-08-13
KR102820907B1 (ko) 2025-06-16
WO2021194186A1 (ko) 2021-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK2040728T3 (en) FKBP-L and uses thereof such as angiogenesis inhibitors
EP1991560B1 (en) Peptide having cell membrane penetrating activity
US8343760B2 (en) p53 activator peptides
KR101741594B1 (ko) 암세포 및 종양관련 대식세포를 동시에 표적하는 융합 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 항암 및 암 전이 억제용 약학적 조성물
KR102820907B1 (ko) Vgll1 펩타이드를 포함하는 암 치료용 조성물
KR20220061282A (ko) 항염증 활성을 갖는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물
CN113845581B (zh) Atf5肽变体及其用途
US9314497B2 (en) E2F as a target of hormone refractory prostate cancer
US9683025B2 (en) Methods and compositions for treating cancer and inflammatory diseases
KR102658844B1 (ko) 펩티드 유도체 및 약학적 조성물
EP3288963B1 (en) Pink1 c-terminal domain polypeptide and methods using the same in cancer treatment
JP7726464B2 (ja) Ｂｉｇ３－ｐｈｂ２相互作用阻害ｐｈｂ２由来ペプチドを含む乳がん治療薬
KR101715263B1 (ko) 재조합 hCdc73 단백질 및 이를 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물
JPWO2006070804A1 (ja) テロメレース活性阻害方法および阻害剤
KR101497930B1 (ko) Ｈｓ2ｓｔ1 유전자 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질에 대한 억제제를 포함하는 세포 노화 유도용 조성물 및 이를 이용한 세포 노화 유도 방법
AU2013350312B2 (en) Complex-formation-modulating agents and uses therefor
CN115521360A (zh) 特异性结合Sestrin2蛋白的多肽及其在消化道癌治疗中的应用
WO2013028527A1 (en) Compositions and methods for treating cancer

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination