[go: up one dir, main page]

CN114836397B - 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用 - Google Patents

一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114836397B
CN114836397B CN202210494671.2A CN202210494671A CN114836397B CN 114836397 B CN114836397 B CN 114836397B CN 202210494671 A CN202210494671 A CN 202210494671A CN 114836397 B CN114836397 B CN 114836397B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mutant
cyclodextrin glucosyltransferase
asn
ser
thr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210494671.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114836397A (zh
Inventor
王腾飞
刘学军
蒋艺
刘洪玲
袁海波
黄迪
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Qilu University of Technology
Original Assignee
Qilu University of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Qilu University of Technology filed Critical Qilu University of Technology
Priority to CN202210494671.2A priority Critical patent/CN114836397B/zh
Publication of CN114836397A publication Critical patent/CN114836397A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114836397B publication Critical patent/CN114836397B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12N9/1074—Cyclomaltodextrin glucanotransferase (2.4.1.19)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/02—Monosaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/12—Disaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/18—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a glycosyl transferase, e.g. alpha-, beta- or gamma-cyclodextrins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/01019—Cyclomaltodextrin glucanotransferase (2.4.1.19)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供了一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用，属于基因工程和酶工程技术领域，具体为氨基酸突变位点为环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.2的第33、119、122、216、255、258、394、566位氨基酸之一或两者以上，主要突变体为N33K、N33R、Y119R、Y122E、L216Q、H255Y、E258Y、E258Q、E566H、N33K/Y122E/E258Y/P394R，本发明中突变体的歧化反应活性相较于野生型明显提高，本发明对于环糊精葡萄糖基转移酶工业化生产具有一定意义，并提高该酶在医药、食品、生物行业中的应用前景。

Description

一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用
技术领域
本发明属于基因工程和酶工程技术领域，具体涉及一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用。
背景技术
环糊精葡萄糖基转移酶(Cyclodextrin glycosyl transfer,CGTase,EC2.4.1.19)属于α-淀粉酶家族(糖苷水解酶13_2,GH13_2)，是一种胞外酶，同时也是一种多功能酶，能够以淀粉、麦芽糊精等为底物催化转糖苷反应(歧化、环化和耦合反应)和水解反应。其中，歧化反应是两个不同分子间发生的转糖苷反应，即将直链低聚糖被切断的部分转移到另一受体上。环化反应是分子内发生的转糖苷反应，其原理是将直链麦芽低聚糖上非还原端的O4或C4上的糖苷转移到同一直链还原端的C1或O1上，这是CGTase的特征反应。偶合反应是环化反应的逆反应，可以打开环糊精的环，将糖苷转移到直链麦芽低聚物上。
CGTase的应用十分广泛，常见的是利用其环化反应把淀粉转化成环糊精。另外，也常利用CGTase歧化反应生成稳定性提高的糖苷化合物，如将小分子的糖转移到蔗糖或果糖上而生产抗龋齿功能偶合糖；对甜菊苷、鼠李糖、芸香苷、L-抗坏血酸等物质进行糖基化修饰，显著改善其性能。
现有技术中，CGTase具有较优秀的转糖基性能，可被应用到多个领域之中，但其歧化反应酶活通过突变体很难明显提高。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用。
本发明所要解决的技术问题是通过对来源于Bacillus sp.G1的β-CGTase进行改造，以此来获得歧化活性效率提高的突变体。
本发明中所述来源于芽孢杆菌属(Bacillus sp.G1)的环糊精葡萄糖基转移酶的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述环糊精葡萄糖基转移酶的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。
本发明的技术方案如下：
一种环糊精葡萄糖基转移酶的突变体，氨基酸突变位点为环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.2的第33、119、122、216、255、258、394、566位氨基酸之一或两者以上。
根据本发明优选的，所述突变体为：
第33位的天冬酰胺(N)突变为赖氨酸(K)或精氨酸(R)，分别命名为N33K、N33R；
第119位的酪氨酸(Y)突变为精氨酸(R)，命名为Y119R；
第122位的酪氨酸(Y)突变为谷氨酸(E)，命名为Y122E；
第216位的亮氨酸(L)突变为谷氨酰胺(Q)，命名为L216Q；
第255位的组氨酸(H)突变为酪氨酸(Y)，命名为H255Y；
第258位的谷氨酸(E)突变为酪氨酸(Y)或谷氨酰胺(Q)，分别命名为E258Y或E258Q；
第394位的脯氨酸(P)突变为精氨酸(R)或谷氨酰胺(Q)，分别命名为P394R或P394Q；
或第566位的谷氨酸(E)突变为组氨酸(H)，命名为E566H。
根据本发明优选的，所述突变体为第33位的天冬酰胺(N)突变为赖氨酸(K)、第122位的酪氨酸(Y)突变为谷氨酸(E)、第258位的谷氨酸(E)突变为酪氨酸(Y)和第394位的脯氨酸(P)突变为精氨酸(R)，命名为N33K/Y122E/E258Y/P394R。
上述突变体的编码基因，根据氨基酸的突变位点，在环糊精葡萄糖基转移酶的编码核苷酸序列SEQ ID NO.1上，进行定点突变获得。
一种重组表达载体，包含上述突变体的编码基因。
一种重组菌株，包含上述突变体的编码基因。
上述突变体的编码基因、重组表达载体或重组菌株在制备环糊精葡萄糖基转移酶中的应用。
上述突变体在制备偶合糖中的应用。
上述突变体在制备海藻糖中的应用。
有益效果
本发明提供的环糊精葡萄糖基转移酶突变体的歧化反应活性相较于野生型明显提高，本发明对于环糊精葡萄糖基转移酶工业化生产具有一定意义，并提高该酶在医药、食品、生物行业中的应用前景。
附图说明
图1为单点突变基因电泳检测结果图；
图中：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11泳道分别代表N33K、N33R、Y119R、Y122E、L216Q、H255Y、E258Y、E258Q、P394R、P394Q和E566H位点突变PCR验证条带。
图2为多点突变基因N33K/Y122E/E258Y/P394R PCR电泳检测结果图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步阐述，但本发明所保护范围不限于此。
下述实施例中涉及的培养基和检测方法如下：
LB培养基：胰蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，氯化钠10g/L，余量水。
TB培养基：胰蛋白胨12g/L，酵母浸粉24g/L，磷酸氢二钾12.54g/L，磷酸二氢钾2.31g/L，甘油4mL/L，余量水。
环糊精葡萄糖基转移酶催化歧化反应活力的测定方法：
以50mmol/L pH 6.0的磷酸盐缓冲液为溶剂，分别配制12mM的EPS(4，6-亚乙基-对硝基苯-α-D麦芽七糖苷)和20mM麦芽糖溶液，各取300μL的12mM EPS和20mM麦芽糖溶液置于50℃水浴锅中预热，加入100μL稀释后的酶液，精确反应10min后，加入50μL3M HCl，5min后加入3M NaOH中和，然后加入100μLα-葡萄糖苷酶于37℃水浴锅静置反应60min以上，加入100μL 1M Na2CO3溶液将pH调节到8.0以上，最后于401nm测定吸光值。环糊精葡萄糖基转移酶的歧化活力酶活定义为，每分钟转化1μmol EPS所需要的的酶量。
实施例1
野生型环糊精葡萄糖基转移酶的制备及表达
来源于Bacillus sp.G1的环糊精葡萄糖基转移酶的基因来源于人工合成，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述环糊精葡萄糖基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，并构建载体导入大肠杆菌中进行表达，得到野生型环糊精葡萄糖基转移酶。于LB液体培养基中(含100mg/L卡那霉素)培养10h，按体积比5％接种量将种子液接入TB液体发酵培养基(含100mg/L卡那霉素)，37℃培养2h后加入终浓度0.2mM IPTG，转移到25℃摇床培养8h，将一定体积发酵液于4℃、12000rpm离心10min，取发酵上清，即为野生酶的粗酶液。
实施例2
环糊精葡萄糖基转移酶的单突变制备及表达
(1)根据Bacillus sp.G1环糊精葡萄糖基转移酶的核苷酸序列，如SEQ ID NO.1所示，分别设计并合成引入单突变的引物，对环糊精葡萄糖基转移酶Cgt进行定点突变，分别测序确认环糊精葡萄糖基转移酶突变体的编码基因是否正确；将携带突变体基因的载体导入大肠杆菌中进行表达，得到单突变环糊精葡萄糖基转移酶。
定点突变体编码基因的PCR扩增：利用快速PCR技术，以携带编码野生型环糊精葡萄糖基转移酶的基因的表达载体pET-28a(+)/Cgt为模板。
引入N33K突变的定点突变引物为：
核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的正向引物：
5'-GTTACAAAGAAAGTCAATTATTCTAAGGATGTGATTTACCA-3'(下划线为突变碱基)；
核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的反向引物：
5'-TGACTTTCTTTGTAACATCTGCTTCAGCTACTG-3'(下划线为突变碱基)；
引入N33R突变的定点突变引物为：
核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的正向引物：
5'-GTTACAAGGAAAGTCAATTATTCTAAGGATGTGATTTACCA-3'(下划线为突变碱基)；
核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的反向引物：
5'-GACTTTCCTTGTAACATCTGCTTCAGCTACTG-3'(下划线为突变碱基)；
引入Y119R突变的定点突变引物为：
核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的正向引物：
5'-TCACGTCATGGCTATTGGGCAAGAGA-3'(下划线为突变碱基)；
核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的反向引物：
5'-GCCATGACGTGATGTATAGCCGCTCGG-3'(下划线为突变碱基)；
引入Y122E突变的定点突变引物为：
核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的正向引物：
5'-GCGAATGGGCAAGAGATTATAAAAAAACAAATCCGT-3'(下划线为突变碱基)；
核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的反向引物：
5'-TTGCCCATTCGCCATGATATGATGTATAGCCGC-3'(下划线为突变碱基)；
引入L216Q突变的定点突变引物为：
核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的正向引物：
5'-AGAAATCAGTATGATTTGGCAGACTACGAT-3'(下划线为突变碱基)；
核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的反向引物：
5'-GCCAAATCATACTGATTTCTATAAATTGAATCTTCATATGATG-3'(下划线为突变碱基)；
引入H255Y突变的定点突变引物为：
核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的正向引物：
5'-GTTAAATACATGTCAGAAGGCTGGCAAA-3'(下划线为突变碱基)；
核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的反向引物：
5'-CTGACATGTATTTAACTGCATCAACTCTAATGCCAT-3'(下划线为突变碱基)；
引入E258Y突变的定点突变引物为：
核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示的正向引物：
5'-GTCATACGGCTGGCAAACATCACTG-3'(下划线为突变碱基)；
核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示的反向引物：
5'-CAGCCGTATGACATATGTTTAACTGCATCAACTC-3'(下划线为突变碱基)；
引入E258Q突变的定点突变引物为：
核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示的正向引物：
5'-GTCACAAGGCTGGCAAACATCACTG-3'(下划线为突变碱基)；
核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示的反向引物：
5'-CAGCCTTGTGACATATGTTTAACTGCATCAACTCT-3'(下划线为突变碱基)；
引入P394R突变的定点突变引物为：
核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示的正向引物：
5'-GATCGGGAAAATAGAAAACCGCTGAAAACA-3'(下划线为突变碱基)；
核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示的反向引物：
5'-CTATTTTCCCGATCATTGCCGCCCGTAACA-3'(下划线为突变碱基)；
引入P394Q突变的定点突变引物为：
核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示的正向引物：
5'-CAATGATCAGGAAAATAGAAAACCGCTGAAAACA-3'(下划线为突变碱基)；
核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示的反向引物：
5'-ATTTTCCTGATCATTGCCGCCCGTAAC-3'(下划线为突变碱基)；
引入E566H突变的定点突变引物为：
核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示的正向引物：
5'-CAAATACACACATTTCAGTTAAAGTTCCGAATGTTGCGG-3'(下划线为突变碱基)；
核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示的反向引物：
5'-GAAATGTGTGTATTTGACCATGAAATAATTTCTGATGATG-3'(下划线为突变碱基)。
PCR反应体系均为：10μM正向引物和反向引物各2.5μL，2×Phanta Max MasterMix 25μL，模板2.5μL，加双蒸水补齐50μL。
PCR条件为：95℃预变性5min；随后进行25个循环(95℃15s，55℃15s，72℃3min50s)72℃延伸5min；最后4℃保存。PCR产物用1％琼脂糖凝胶电泳进行检测，突变基因PCR验证结果见图1。
将上述验证正确的PCR产物进行DpnⅠ消化，转入大肠杆菌DH5α感受态细胞，转化产物涂布于含100mg/L卡那霉素的LB平板上，经37℃过夜培养，平板上挑取10个单菌落，转入含100mg/L卡那霉素的LB液体培养基，8h后提取质粒并验证，选取3个验证正确的质粒测序，将测序正确的质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)得到表达单突变体的重组大肠杆菌。
(2)突变体的表达
将本实施例步骤(1)制备得到的表达单突变体的重组大肠杆菌分别接种于含100mg/L卡那霉素的LB液体培养基，培养10h，按体积比5％接种量将种子液接入TB液体发酵培养基(含100mg/L卡那霉素)，37℃培养2h后加入终浓度0.2mM IPTG，转移到25℃摇床培养8h，将一定体积发酵液于4℃、12000rpm离心10min，取发酵上清，即为单突变体的粗酶液。
实施例3
环糊精葡萄糖基转移酶四突变体的制备及表达
(1)环糊精葡萄糖基转移酶的四突变体制备
以实施例2构建的携带编码突变体N33K的基因的质粒作为四突变体的模板，并根据实施例2设计的Y122E、E258Y、P394R定点突变的引物，使用快速PCR技术，对携带编码突变体N33K的基因的质粒进行依次定点突变，突变基因PCR验证结果见图2。得到环糊精葡萄糖基转移酶N33K/Y122E/E258Y/P394R四突变体，并依照实施例2中的方法制备表达四突变体的重组大肠杆菌。
(2)突变体的表达
将本实施例步骤(1)制备得到的表达突变体的重组大肠杆菌接种于含100mg/L卡那霉素的LB液体培养基，培养10h，按体积比5％接种量将种子液接入TB液体发酵培养基(含100mg/L卡那霉素)，37℃培养2h后加入终浓度0.2mM IPTG，转移到25℃摇床培养8h，将一定体积发酵液于4℃、12000rpm离心10min，取发酵上清，即为四突变体的粗酶液。
实施例4
环糊精葡萄糖基转移酶的歧化反应活性分析
将实施例1、实施例2和实施例3所得到的发酵上清粗酶液分别进行歧化活力测定。野生型环糊精葡萄糖基转移酶(BsCGT)和突变体摇瓶诱导发酵8h的歧化活性列于表1，结果表明，所有突变体的酶歧化活力均高于野生型。突变体N33K、N33R、Y119R、Y122E、L216Q、H255Y、E258Y、E258Q、P394R、P394Q、E566H和N33K/Y122E/E258Y/P394R的摇瓶发酵歧化活力分别为野生型的2.10倍、1.43倍、1.35倍、1.32倍、1.21倍、1.21倍、1.53倍、2.03倍、1.80倍、1.71倍、1.45倍、2.32倍。
表1
Figure BDA0003632230950000061
Figure BDA0003632230950000071
本发明构建的突变体其歧化反应催化效率与野生酶相比有所提高，尤其是N33K突变体、E258Q突变体、N33K/Y122E/E258Y/P394R突变体酶活提高明显，应用于工业化生产可降低生产成本，并由于歧化反应活性的提高，对于其在转糖苷化合物，如在生产海藻糖中的应用，在L-抗坏血酸、甜菊苷等物质改性上的应用，有效提高了其应用前景。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 齐鲁工业大学
<120> 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用
<160> 24
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 2109
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
atgaatgatc tgaatgattt tctgaaaaca atttcactgt catttatttt ttttctgctg 60
ctgtcactgc cgacagtagc tgaagcagat gttacaaata aagtcaatta ttctaaggat 120
gtgatttacc aagttgttac agatagattt tcagatggca atccgggcaa taatccgagc 180
ggcgcaattt tttcacaaaa ttgcattgat ctgcataaat attgcggcgg cgattggcaa 240
ggcattattg ataaaattaa tgatggctat ctgacagatc tgggcattac agcactgtgg 300
atttcacaac cggttgaaaa tgtttatgca ctgcatccga gcggctatac atcatatcat 360
ggctattggg caagagatta taaaaaaaca aatccgtatt atggcaattt tgatgatttt 420
gatagactga tgtcaacagc acattcaaat ggcattaaag ttattatgga ttttacaccg 480
aatcattcat caccggcact ggaaacaaat ccgaattatg ttgaaaatgg cgcaatttat 540
gataatggca cactgctggg caattattca aatgatcaac aaaatctgtt tcatcataat 600
ggcggcacag atttttcatc atatgaagat tcaatttata gaaatctgta tgatttggca 660
gactacgatc tgaataacac ggttatggat caatatttga aagaatcaat taaattttgg 720
ctggataaag gcattgatgg cattagagtt gatgcagtta aacatatgtc agaaggctgg 780
caaacatcac tgatgtcaga aatttattca cataaaccgg tttttacatt tggcgaatgg 840
tttctgggca gcggcgaagt tgatccgcaa aatcatcatt ttgcaaatga aagcggcatg 900
tcactgctgg attttcaatt tggccaaacc attagaaatg ttctgaaaga ccgcacttca 960
aattggtacg actttaacga aatgattaca tcaaccgaaa aggaatacaa tgaagttatt 1020
gaccaagtaa catttatcga taatcatgat atgtcaagat tttcagttgg ctcatcatca 1080
aatagacaaa cagatatggc actggcagtt ctgctgacat caagaggcgt tccgacaatt 1140
tattatggca cagaacaata tgttacgggc ggcaatgatc cggaaaatag aaaaccgctg 1200
aaaacatttg atagatcgac aaattcatac caaattattt caaaactggc atcactgaga 1260
caaacaaatt cagcactggg ctatggcaca acaacagaaa gatggctgaa tgaagatatt 1320
tatatttatg aaagaacatt tggcaattca attgttctga cagcagttaa ttcatcaaat 1380
tcaaatcaaa caattacaaa tctgaataca tcactgccgc aaggcaatta tacagatgaa 1440
ctgcaacaaa gactggatgg gaatacaatc acagttaatg caaatggcgc agttaactca 1500
ttccaactga gagcaaattc agttgcagtt tggcaagttt caaatccgtc aacatcaccg 1560
ctgattggcc aagttggccc gatgatgggc aagtctggca atacaattac agtatctggc 1620
gaaggctttg gcgatgaaag aggctcagtt ctgtttgatt caacatcatc agaaattatt 1680
tcatggtcaa atacagaaat ttcagttaaa gttccgaatg ttgcgggcgg ctattatgat 1740
ctgtcagttg ttacagcagc aaatctgaaa tcaccgacat ataaagaatt tgaagttctg 1800
agcggcaatc aagtttcagt tagatttggc gttaataatg caacaacatc accgggcaca 1860
aatctgtata ttgttggcaa tgtttcagaa ctgggcaatt gggatgcaga taaagcaatt 1920
ggcccgatgt ttaatcaagt tatgtatcaa tatccgacat ggtattatga tatttcagtt 1980
ccggcgggca aaaatctgga atataaatat attaaaaaag atcaaaatgg caatgttgtt 2040
tggcagtccg gcaataatcg gacatataca tcaccgacaa cgggcacaga tacagttatg 2100
attaattgg 2109
<210> 2
<211> 703
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Met Asn Asp Leu Asn Asp Phe Leu Lys Thr Ile Ser Leu Ser Phe Ile
1 5 10 15
Phe Phe Leu Leu Leu Ser Leu Pro Thr Val Ala Glu Ala Asp Val Thr
20 25 30
Asn Lys Val Asn Tyr Ser Lys Asp Val Ile Tyr Gln Val Val Thr Asp
35 40 45
Arg Phe Ser Asp Gly Asn Pro Gly Asn Asn Pro Ser Gly Ala Ile Phe
50 55 60
Ser Gln Asn Cys Ile Asp Leu His Lys Tyr Cys Gly Gly Asp Trp Gln
65 70 75 80
Gly Ile Ile Asp Lys Ile Asn Asp Gly Tyr Leu Thr Asp Leu Gly Ile
85 90 95
Thr Ala Leu Trp Ile Ser Gln Pro Val Glu Asn Val Tyr Ala Leu His
100 105 110
Pro Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr His Gly Tyr Trp Ala Arg Asp Tyr Lys
115 120 125
Lys Thr Asn Pro Tyr Tyr Gly Asn Phe Asp Asp Phe Asp Arg Leu Met
130 135 140
Ser Thr Ala His Ser Asn Gly Ile Lys Val Ile Met Asp Phe Thr Pro
145 150 155 160
Asn His Ser Ser Pro Ala Leu Glu Thr Asn Pro Asn Tyr Val Glu Asn
165 170 175
Gly Ala Ile Tyr Asp Asn Gly Thr Leu Leu Gly Asn Tyr Ser Asn Asp
180 185 190
Gln Gln Asn Leu Phe His His Asn Gly Gly Thr Asp Phe Ser Ser Tyr
195 200 205
Glu Asp Ser Ile Tyr Arg Asn Leu Tyr Asp Leu Ala Asp Tyr Asp Leu
210 215 220
Asn Asn Thr Val Met Asp Gln Tyr Leu Lys Glu Ser Ile Lys Phe Trp
225 230 235 240
Leu Asp Lys Gly Ile Asp Gly Ile Arg Val Asp Ala Val Lys His Met
245 250 255
Ser Glu Gly Trp Gln Thr Ser Leu Met Ser Glu Ile Tyr Ser His Lys
260 265 270
Pro Val Phe Thr Phe Gly Glu Trp Phe Leu Gly Ser Gly Glu Val Asp
275 280 285
Pro Gln Asn His His Phe Ala Asn Glu Ser Gly Met Ser Leu Leu Asp
290 295 300
Phe Gln Phe Gly Gln Thr Ile Arg Asn Val Leu Lys Asp Arg Thr Ser
305 310 315 320
Asn Trp Tyr Asp Phe Asn Glu Met Ile Thr Ser Thr Glu Lys Glu Tyr
325 330 335
Asn Glu Val Ile Asp Gln Val Thr Phe Ile Asp Asn His Asp Met Ser
340 345 350
Arg Phe Ser Val Gly Ser Ser Ser Asn Arg Gln Thr Asp Met Ala Leu
355 360 365
Ala Val Leu Leu Thr Ser Arg Gly Val Pro Thr Ile Tyr Tyr Gly Thr
370 375 380
Glu Gln Tyr Val Thr Gly Gly Asn Asp Pro Glu Asn Arg Lys Pro Leu
385 390 395 400
Lys Thr Phe Asp Arg Ser Thr Asn Ser Tyr Gln Ile Ile Ser Lys Leu
405 410 415
Ala Ser Leu Arg Gln Thr Asn Ser Ala Leu Gly Tyr Gly Thr Thr Thr
420 425 430
Glu Arg Trp Leu Asn Glu Asp Ile Tyr Ile Tyr Glu Arg Thr Phe Gly
435 440 445
Asn Ser Ile Val Leu Thr Ala Val Asn Ser Ser Asn Ser Asn Gln Thr
450 455 460
Ile Thr Asn Leu Asn Thr Ser Leu Pro Gln Gly Asn Tyr Thr Asp Glu
465 470 475 480
Leu Gln Gln Arg Leu Asp Gly Asn Thr Ile Thr Val Asn Ala Asn Gly
485 490 495
Ala Val Asn Ser Phe Gln Leu Arg Ala Asn Ser Val Ala Val Trp Gln
500 505 510
Val Ser Asn Pro Ser Thr Ser Pro Leu Ile Gly Gln Val Gly Pro Met
515 520 525
Met Gly Lys Ser Gly Asn Thr Ile Thr Val Ser Gly Glu Gly Phe Gly
530 535 540
Asp Glu Arg Gly Ser Val Leu Phe Asp Ser Thr Ser Ser Glu Ile Ile
545 550 555 560
Ser Trp Ser Asn Thr Glu Ile Ser Val Lys Val Pro Asn Val Ala Gly
565 570 575
Gly Tyr Tyr Asp Leu Ser Val Val Thr Ala Ala Asn Leu Lys Ser Pro
580 585 590
Thr Tyr Lys Glu Phe Glu Val Leu Ser Gly Asn Gln Val Ser Val Arg
595 600 605
Phe Gly Val Asn Asn Ala Thr Thr Ser Pro Gly Thr Asn Leu Tyr Ile
610 615 620
Val Gly Asn Val Ser Glu Leu Gly Asn Trp Asp Ala Asp Lys Ala Ile
625 630 635 640
Gly Pro Met Phe Asn Gln Val Met Tyr Gln Tyr Pro Thr Trp Tyr Tyr
645 650 655
Asp Ile Ser Val Pro Ala Gly Lys Asn Leu Glu Tyr Lys Tyr Ile Lys
660 665 670
Lys Asp Gln Asn Gly Asn Val Val Trp Gln Ser Gly Asn Asn Arg Thr
675 680 685
Tyr Thr Ser Pro Thr Thr Gly Thr Asp Thr Val Met Ile Asn Trp
690 695 700
<210> 3
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
gttacaaaga aagtcaatta ttctaaggat gtgatttacc a 41
<210> 4
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
tgactttctt tgtaacatct gcttcagcta ctg 33
<210> 5
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
gttacaagga aagtcaatta ttctaaggat gtgatttacc a 41
<210> 6
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
gactttcctt gtaacatctg cttcagctac tg 32
<210> 7
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
tcacgtcatg gctattgggc aagaga 26
<210> 8
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
gccatgacgt gatgtatagc cgctcgg 27
<210> 9
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
gcgaatgggc aagagattat aaaaaaacaa atccgt 36
<210> 10
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
ttgcccattc gccatgatat gatgtatagc cgc 33
<210> 11
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
agaaatcagt atgatttggc agactacgat 30
<210> 12
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
gccaaatcat actgatttct ataaattgaa tcttcatatg atg 43
<210> 13
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
gttaaataca tgtcagaagg ctggcaaa 28
<210> 14
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
ctgacatgta tttaactgca tcaactctaa tgccat 36
<210> 15
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
gtcatacggc tggcaaacat cactg 25
<210> 16
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
cagccgtatg acatatgttt aactgcatca actc 34
<210> 17
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
gtcacaaggc tggcaaacat cactg 25
<210> 18
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
cagccttgtg acatatgttt aactgcatca actct 35
<210> 19
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 19
gatcgggaaa atagaaaacc gctgaaaaca 30
<210> 20
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 20
ctattttccc gatcattgcc gcccgtaaca 30
<210> 21
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
caatgatcag gaaaatagaa aaccgctgaa aaca 34
<210> 22
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 22
attttcctga tcattgccgc ccgtaac 27
<210> 23
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 23
caaatacaca catttcagtt aaagttccga atgttgcgg 39
<210> 24
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 24
gaaatgtgtg tatttgacca tgaaataatt tctgatgatg 40

Claims (8)

1. 一种环糊精葡萄糖基转移酶的突变体，其特征在于，所述突变体为环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.2的第33位的天冬酰胺（N）突变为赖氨酸（K）或精氨酸（R），分别命名为N33K、N33R；
所述突变体为环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.2的第119位的酪氨酸（Y）突变为精氨酸（R），命名为Y119R；
所述突变体为环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.2的第122位的酪氨酸（Y）突变为谷氨酸（E），命名为Y122E；
所述突变体为环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.2的第216位的亮氨酸（L）突变为谷氨酰胺（Q），命名为L216Q；
所述突变体为环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.2的第255位的组氨酸（H）突变为酪氨酸（Y），命名为H255Y；
所述突变体为环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.2的第258位的谷氨酸（E）突变为酪氨酸（Y）或谷氨酰胺（Q），分别命名为E258Y或E258Q；
所述突变体为环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.2的第394位的脯氨酸（P）突变为精氨酸（R）或谷氨酰胺（Q），分别命名为P394R或P394Q；
或第566位的谷氨酸（E）突变为组氨酸（H），命名为E566H。
2. 一种环糊精葡萄糖基转移酶的突变体，其特征在于，所述突变体为环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.2的第33位的天冬酰胺（N）突变为赖氨酸（K）、第122位的酪氨酸（Y）突变为谷氨酸（E）、第258位的谷氨酸（E）突变为酪氨酸（Y）和第394位的脯氨酸（P）突变为精氨酸（R），命名为N33K/Y122E/E258Y/P394R。
3. 权利要求1或权利要求2所述突变体的编码基因，其特征在于，根据氨基酸突变位点，在环糊精葡萄糖基转移酶的编码核苷酸序列SEQ ID NO.1上进行定点突变获得。
4.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求3所述突变体的编码基因。
5.一种重组菌株，其特征在于，包含权利要求3所述突变体的编码基因。
6.权利要求3所述编码基因、权利要求4所述重组表达载体或权利要求5所述重组菌株在制备环糊精葡萄糖基转移酶中的应用。
7.权利要求1或权利要求2所述突变体在制备偶合糖中的应用。
8.权利要求1或权利要求2所述突变体在制备海藻糖中的应用。
CN202210494671.2A 2022-05-07 2022-05-07 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用 Active CN114836397B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210494671.2A CN114836397B (zh) 2022-05-07 2022-05-07 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210494671.2A CN114836397B (zh) 2022-05-07 2022-05-07 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114836397A CN114836397A (zh) 2022-08-02
CN114836397B true CN114836397B (zh) 2023-05-05

Family

ID=82568594

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210494671.2A Active CN114836397B (zh) 2022-05-07 2022-05-07 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114836397B (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115896059B (zh) * 2022-10-24 2023-10-10 三元生物工程研究(天津)有限公司 一种制备莱鲍迪苷rm的环糊精糖基转移酶突变体、编码基因及其应用
CN115820590B (zh) * 2022-12-02 2025-10-28 齐鲁工业大学(山东省科学院) 一种热稳定性提高的环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用
CN119144577B (zh) * 2023-06-14 2025-10-21 齐鲁工业大学(山东省科学院) 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及在制备海藻糖中的应用
CN119506240B (zh) * 2024-07-30 2025-09-23 烟台兆易生物科技有限公司 一种歧化活性提高的环糊精葡萄糖基转移酶突变体及其应用
CN120005848B (zh) * 2025-04-21 2025-09-26 杭州佳嘉乐生物技术有限公司 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1633503A (zh) * 2002-02-14 2005-06-29 诺维信公司 淀粉加工方法
CN109486786A (zh) * 2018-12-07 2019-03-19 江南大学 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体
CN110982865A (zh) * 2019-12-31 2020-04-10 浙江工业大学 一种碱性环糊精葡萄糖基转移酶在生产α-葡萄糖基橙皮苷中的应用
CN112301012A (zh) * 2020-10-15 2021-02-02 江南大学 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及其构建方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108034645B (zh) * 2018-01-15 2020-05-08 江南大学 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体的制备及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1633503A (zh) * 2002-02-14 2005-06-29 诺维信公司 淀粉加工方法
CN109486786A (zh) * 2018-12-07 2019-03-19 江南大学 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体
CN111394329A (zh) * 2018-12-07 2020-07-10 江南大学 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体t171a及其应用
CN110982865A (zh) * 2019-12-31 2020-04-10 浙江工业大学 一种碱性环糊精葡萄糖基转移酶在生产α-葡萄糖基橙皮苷中的应用
CN112301012A (zh) * 2020-10-15 2021-02-02 江南大学 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及其构建方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
alpha-amylase family glycosyl hydrolase [Alkalihalobacillus lehensis].NCBI Reference Sequence: WP_038484630.1.2022,1. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114836397A (zh) 2022-08-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114836397B (zh) 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用
CN111411097B (zh) 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体s90g
CN108034645B (zh) 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体的制备及其应用
CN110592060B (zh) 酶活提高的麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体
CN108018268B (zh) 一种提高aa-2g产量的环糊精葡萄糖基转移酶突变体
CN115820590B (zh) 一种热稳定性提高的环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用
CN104745562A (zh) 一种麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体的制备及其应用
CN112301012B (zh) 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及其构建方法
CN108753747B (zh) 一种热稳定性和海藻糖产量提高的MTSase突变体
CN119144577B (zh) 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及在制备海藻糖中的应用
CN109456950B (zh) 一种环糊精葡萄糖基转移酶的突变体及其应用
CN110656096B (zh) 一种降低水解副反应程度的环糊精葡萄糖基转移酶突变体
CN109576240B (zh) 一种淀粉蔗糖酶突变体及其制备方法与应用
CN108753746B (zh) 一种热稳定性提高的麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体
CN113308446B (zh) 一种海藻糖转化率提高的麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体及其应用
CN111944784B (zh) 热稳定性提高的麦芽寡糖基海藻水解酶突变体及其应用
CN114231511B (zh) 热稳定性提高的双果糖酐水解酶突变体e160f
CN111534498B (zh) 歧化比活和aa-2g产量提高的环糊精葡萄糖基转移酶突变体
CN112980762A (zh) 一种黑曲霉二糖磷酸化酶及其在黑曲霉二糖制备中的应用
CN112210544B (zh) 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及其应用
CN113817704A (zh) 一种有机溶剂耐受性提高的环糊精葡萄糖基转移酶及其制备方法
CN120485150A (zh) 一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及其在aa-2g制备中的应用
CN116855432A (zh) 一种多酶联产催化合成海藻糖的枯草芽孢杆菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CP03 Change of name, title or address
CP03 Change of name, title or address

Address after: 250300 No. 3501 University Road, Changqing District, Jinan City, Shandong Province

Patentee after: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences)

Country or region after: China

Address before: 250300 No. 3501 University Road, Changqing District, Jinan City, Shandong Province

Patentee before: Qilu University of Technology

Country or region before: China

EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract

Application publication date: 20220802

Assignee: DEZHOU BOCHENG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Assignor: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences)

Contract record no.: X2024980036047

Denomination of invention: A cyclodextrin glucosyltransferase mutant and its application

Granted publication date: 20230505

License type: Common License

Record date: 20241211

Application publication date: 20220802

Assignee: SHANDONG SIBANGDE PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Assignor: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences)

Contract record no.: X2024980035998

Denomination of invention: A cyclodextrin glucosyltransferase mutant and its application

Granted publication date: 20230505

License type: Common License

Record date: 20241211

Application publication date: 20220802

Assignee: JINAN CHENSHENG MEDICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.

Assignor: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences)

Contract record no.: X2024980035525

Denomination of invention: A cyclodextrin glucosyltransferase mutant and its application

Granted publication date: 20230505

License type: Common License

Record date: 20241211

EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract

Application publication date: 20220802

Assignee: Dezhou Yinyuan Food Co.,Ltd.

Assignor: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences)

Contract record no.: X2025980002372

Denomination of invention: A cyclodextrin glucosyltransferase mutant and its application

Granted publication date: 20230505

License type: Common License

Record date: 20250120

Application publication date: 20220802

Assignee: Dezhou Guowang Food Co.,Ltd.

Assignor: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences)

Contract record no.: X2025980002311

Denomination of invention: A cyclodextrin glucosyltransferase mutant and its application

Granted publication date: 20230505

License type: Common License

Record date: 20250117

Application publication date: 20220802

Assignee: Wucheng County Dongmin Food Co.,Ltd.

Assignor: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences)

Contract record no.: X2025980002389

Denomination of invention: A cyclodextrin glucosyltransferase mutant and its application

Granted publication date: 20230505

License type: Common License

Record date: 20250117

Application publication date: 20220802

Assignee: Wucheng County Bingyuan Frozen Food Factory

Assignor: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences)

Contract record no.: X2025980002388

Denomination of invention: A cyclodextrin glucosyltransferase mutant and its application

Granted publication date: 20230505

License type: Common License

Record date: 20250117

Application publication date: 20220802

Assignee: SHANDONG ZAOLIANGXIANSHENG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.

Assignor: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences)

Contract record no.: X2025980002387

Denomination of invention: A cyclodextrin glucosyltransferase mutant and its application

Granted publication date: 20230505

License type: Common License

Record date: 20250117

Application publication date: 20220802

Assignee: SHANDONG JINTIAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY CO.,LTD.

Assignor: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences)

Contract record no.: X2025980002378

Denomination of invention: A cyclodextrin glucosyltransferase mutant and its application

Granted publication date: 20230505

License type: Common License

Record date: 20250117

EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract

Application publication date: 20220802

Assignee: Dezhou cuiji Food Co.,Ltd.

Assignor: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences)

Contract record no.: X2025980023278

Denomination of invention: A cyclodextrin glucosyltransferase mutant and its application

Granted publication date: 20230505

License type: Common License

Record date: 20250918

Application publication date: 20220802

Assignee: Dezhou Fenghusheng Agricultural Technology Co.,Ltd.

Assignor: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences)

Contract record no.: X2025980023279

Denomination of invention: A cyclodextrin glucosyltransferase mutant and its application

Granted publication date: 20230505

License type: Common License

Record date: 20250918

EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract