[go: up one dir, main page]

CN114699429A - 一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用 - Google Patents

一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114699429A
CN114699429A CN202210460810.XA CN202210460810A CN114699429A CN 114699429 A CN114699429 A CN 114699429A CN 202210460810 A CN202210460810 A CN 202210460810A CN 114699429 A CN114699429 A CN 114699429A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bile duct
group
emt
hibepic
epithelial cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210460810.XA
Other languages
English (en)
Inventor
宋飞
向盈盈
涂渝娇
季秀玲
蒋蕾
袁琳
李红阳
黄浩
车佳音
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University
Original Assignee
Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University filed Critical Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University
Priority to CN202210460810.XA priority Critical patent/CN114699429A/zh
Publication of CN114699429A publication Critical patent/CN114699429A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明公开了一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用。所述的BMSCs通过胆管上皮细胞EMT作用制备抑制胆管瘢痕的形成的药物中的应用。BMSC抑制胆管上皮细胞EMT的信号通路。

Description

一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的 应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用。
背景技术
胆管损伤后的修复和愈合是当今医学界所面临的主要问题之一，因为伤口愈合虽然能使组织的完整性得到恢复，但与此同时也常常伴随着不同程度的瘢痕形成，瘢痕增生过度即可导致管腔狭窄及组织纤维化。在医源性胆道损伤、腹部胆道外伤、胆管结石及感染、胆管肿瘤、肝移植的胆管修复、胆管胆管吻合或胆肠吻合时和复发性胆管炎等情况下，胆管修复愈合过程中瘢痕增生挛缩是胆管狭窄的主要原因，更有甚者由此引发梗阻性黄疸、多脏器功能损害甚至死亡等严重并发症，是影响患者疗效和预后的主要因素，因此对于胆管瘢痕挛缩的研究具有重大意义。
胆道瘢痕性挛缩和胆管狭窄，其形成机制与原因至今尚不清楚，胆管瘢痕狭窄的形成中胆管成纤维细胞是其中重要的原因之一。上皮-间叶样表型转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)可能是器官纤维化瘢痕形成的另外一条重要的机制，参与细胞的侵袭与转移、组织愈合和器官纤维化等生理和病理过程[1]。EMT主要表现为上皮细胞失去了极性，转变成为具有特定表型或功能的间质样细胞。上皮细胞失去其特异性的细胞标志，获得间质细胞标志，主要包括上皮细胞E-钙黏蛋白、角蛋白、Z0-1蛋白水平的下调，间质细胞的标志FSP-1/S100A4、α-SMA、波形蛋白(Vimentin)表达的上调。此外，发生EMT的细胞同样可以产生大量细胞外基质蛋白，如纤维连接蛋白、I/Ⅲ型胶原蛋白、金属基质蛋白酶。上皮细胞形态和功能的完整性是防治胆管瘢痕狭窄的重要因素。有关研究显示，上皮-间叶样细胞表型转化在器官及组织中普遍存在，在胆管病变中同样可能具有重要的作用。我们前期动物体外体内的实验结果已经证实了在胆管损伤瘢痕愈合过程中，胆管上皮细胞发生EMT，表达肌成纤维细胞特异性的标记物α-SMA，提示其可以向肌成纤维样细胞转变，参与胆管瘢痕的形成[5,6]。EMT发生的机制可能主要通过TGF-β/Smad、Wnt/β-catenin两条信号通路，除了以上两条途径，还可能通过Notch、ERKl/2、RhoA等其他信号通路参与。但是在通路中首先参与信号传导的是哪一个基因或者哪一个基因是主要的，又或者还有其他的基因，这些问题有待进一步研究。
目前对胆管瘢痕挛缩抑制方法的研究主要集中在化疗药物、改变胆汁成分、干细胞等等。其中干细胞在抑制胆管瘢痕方面显示出了潜在的优势。骨髓间充质干细胞(Bonemarrow stem cell，BMSC)具有易于分离培养、可自我更新，具有较强的向多种类型细胞分化潜能、自体移植而无免疫排斥和不涉及伦理道德问题[8-11]等优势，被认为是最具治疗潜力的供体细胞，为我们的实验提供理性的供体细胞。骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点，在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。BMSC可以分泌多种细胞因子，一类是生长因子，如肝细胞生长因子(HGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、造血生长因子(如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等)，另一类是抗纤维化因子如HGF、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、IL-10、TNF-α等，BMSC已用于肝纤维化、肝硬化临床治疗。成体干细胞的可塑性是目前临床治疗性应用的基础，在心血管、中枢神经系统、下肢缺血性疾病治疗等，已取得了良好的治疗效果。在皮肤烧创伤领域，诱导皮肤表皮干细胞以及应用表皮干细胞重建汗腺、皮脂腺以及毛囊，抑制瘢痕过度增生形成瘢痕疙瘩等方面，表现出减少瘢痕形成和实现皮肤功能性修复的目的。研究发现间充质干细胞条件培养基中含有多种与组织修复、血管生成、细胞存活及抗炎等作用相关的生物活性物质。其分泌的一氧化氮中和活性氧，肝细胞生长因子、白细胞介素10、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子A、肾上腺髓质素等具有抑制成纤维细胞增殖分化、胶原合成，促进细胞外基质重塑，提高组织再上皮化，抗炎，促进血管再生等作用以及间充质干细胞能分化为各种皮肤细胞在创伤愈合过程中发挥重要作用。骨髓间充质干细胞条件培养液可通过分泌抗纤维化的生物活性因子抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原产生。我们研究发现在新西兰兔体内，骨髓间充干细胞能够有效抑制胆管瘢痕的形成，同时在该抑制过程中，α-SMA、波形蛋白(vimentin)的表达下调，而E-钙黏蛋白水平上调，由于这三个蛋白是EMT的标志物，因此，我们前期的研究结果初步显示骨髓间充质干细胞培养液有抑制胆管上皮细胞α-SMA表达的作用，从而有抑制胆管上皮EMT的作用。(研究结果见基金的前期基础)。BMSC如何调控EMT的作用机制尚不十分清楚，是直接分化成终末细胞参与还是间接分泌细胞因子参与又或者是参与两种方式，是通过何种信号通路进行干预作用，这些问题都有待进一步研究。
发明内容
为了解决上述缺陷，本发明提供了一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用。
为了实现上述发明目的，本发明提供了如下技术方案：本发明的一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用。
进一步地，所述的BMSCs通过胆管上皮细胞EMT作用制备抑制胆管瘢痕的形成的药物中的应用。
进一步地，BMSC抑制胆管上皮细胞EMT的信号通路。
更进一步地，胆管瘢痕形成后，E-cadherin基因和蛋白表达减少，而α-SMA、N-cadherin、snai1、vimentin则明显增强，说明胆管上皮细胞发生EMT变化；骨髓间充质干细胞与胆管上皮细胞共培养后，抑制了胆管上皮细胞发生EMT。
进一步地，TGF-β/Smad是EMT重要的通路之一，骨髓间充质干细胞可以抑制EMT的通路。
有益效果为：本发明首次完整明确了BMSC通过抑制胆管上皮细胞EMT作用抑制胆管瘢痕的形成。首次探讨BMSC抑制胆管上皮细胞EMT可能的信号通路及通路中重要的传导因子。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：(1)利用前期制备壳聚糖膜的经验，制备复合骨髓间充质干细胞的壳聚糖膜，在此基础上进一步研究骨髓间充质干细胞是否能通过抑制胆管上皮发生EMT来抑制瘢痕的形成；研究骨髓间充质干细胞抑制胆管上皮发生EMT的主要的信号通路以及此通路中的主要调控蛋白。
(2)本发明紧密联系临床，具有很强的实用性。同时还可以应用于其他组织、器官的损伤瘢痕修复治疗中，具有广阔的应用前景。为此，我们申请本发明以期此次联合专项基金的资助，以便更加深入了解胆管上皮细胞发生EMT的复杂机理以及能否通过BMSC抑制胆管上皮细胞EMT来更好地防治胆管瘢痕过度增生挛缩，为胆管瘢痕狭窄提供更加有效的治疗方法。
附图说明
图1是本发明MTT法检测各组HIBEpiC的生长图，数据以平均值+标准差(SD)的形式呈现，数据差异采用单因素方差分析(One-wayANOVA)进行统计分析，*:p<0.05；**:p<0.01；***:p<0.001.图1显示HBMSCS诱导HIBEpiC增殖。
图2是本发明流式检测各组细胞凋亡情况图，数据以平均值+标准差(SD)的形式呈现，数据差异采用单因素方差分析(One-wayANOVA)进行统计分析，*:p<0.05；**:p<0.01；***:p<0.001。图2显示HBMSCS无诱导HIBEpiC凋亡的作用。
图3是本发明QPCR检测各组细胞中α-SMA基因的表达图。数据以平均值+标准差(SD)的形式呈现，数据差异采用单因素方差分析(One-wayANOVA)进行统计分析，*:p<0.05；**:p<0.01；***:p<0.001。图3显示从基因水平证实HBMSCS抑制胆管上皮细胞向肌成纤维细胞表型转变。
图4是本发明QPCR检测各组细胞中E-cadherin基因的表达图。数据以平均值+标准差(SD)的形式呈现，数据差异采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行统计分析，*:p<0.05；**:p<0.01；***:p<0.001。图4显示从基因水平证实TGF-β1引起胆管上皮细胞E-cadherin表达减少，细胞粘附连接减少，造成细胞分离，HBMSCS抑制胆管上皮细胞分离。
图5是本发明QPCR检测各组细胞中N-cadherin基因的表达图。数据以平均值+标准差(SD)的形式呈现，数据差异采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行统计分析，*:p<0.05；**:p<0.01；***:p<0.001。图5显示从基因水平证实TGF-β1引起胆管上皮细胞N-cadherin高表达，促进细胞分离，HBMSCS抑制胆管上皮细胞分离。
图6是本发明QPCR检测各组细胞中snail基因的表达图。数据以平均值+标准差(SD)的形式呈现，数据差异采用单因素方差分析(One-wayANOVA)进行统计分析，*:p<0.05；**:p<0.01；***:p<0.001。图6显示从基因水平证实TGF-β1引起胆管上皮细胞snail高表达，激活转录通道，促进EMT发生，HBMSCS抑制胆管上皮细胞EMT。
图7是本发明QPCR检测各组细胞中vimentin基因的表达图。数据以平均值+标准差(SD)的形式呈现，数据差异采用单因素方差分析(One-wayANOVA)进行统计分析，*:p<0.05；**:p<0.01；***:p<0.001。图7显示从基因水平证实TGF-β1引起胆管上皮细胞vimentin高表达，改变细胞骨架，促进细胞分离，HBMSCS抑制胆管上皮细胞分离。
图8是本发明Westernblot检测各组细胞中α-SMA蛋白的表达图。数据以平均值+标准差(SD)的形式呈现，数据差异采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行统计分析，*:p<0.05；**:p<0.01；***:p<0.001。图8显示从蛋白水平证实HBMSCS抑制胆管上皮细胞向肌成纤维细胞表型转变。
图9是本发明Westernblot检测各组细胞中E-cadherin蛋白的表达图。数据以平均值+标准差(SD)的形式呈现，数据差异采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行统计分析，*:p<0.05；**:p<0.01；***:p<0.001。图9显示从蛋白水平证实TGF-β1引起胆管上皮细胞E-cadherin表达减少，细胞粘附连接减少，造成细胞分离，HBMSCS抑制胆管上皮细胞分离。
图10是本发明Westernblot检测各组细胞中N-cadherin蛋白的表达图。数据以平均值+标准差(SD)的形式呈现，数据差异采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行统计分析，*:p<0.05；**:p<0.01；***:p<0.001。图10显示从蛋白水平证实TGF-β1引起胆管上皮细胞N-cadherin高表达，促进细胞分离，HBMSCS抑制胆管上皮细胞分离。
图11是本发明Westernblot检测各组细胞中Snail蛋白的表达图。数据以平均值+标准差(SD)的形式呈现，数据差异采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行统计分析，*:p<0.05；**:p<0.01；***:p<0.001。图6显示从蛋白水平证实TGF-β1引起胆管上皮细胞snail高表达，激活转录通道，促进EMT发生，HBMSCS抑制胆管上皮细胞EMT。
图12是本发明Westernblot检测各组细胞中Vimentin蛋白的表达图。数据以平均值+标准差(SD)的形式呈现，数据差异采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行统计分析，*:p<0.05；**:p<0.01；***:p<0.001。图12显示从蛋白水平证实TGF-β1引起胆管上皮细胞vimentin高表达，改变细胞骨架，促进细胞分离，HBMSCS抑制胆管上皮细胞分离。
图13是本发明胆管HE染色图。图13显示BMSCS能够减轻胆管上皮层细胞排列紊乱程度，细胞层数减少，抑制胆管瘢痕形成。
图14是本发明胆管Masson染色图。图14显示BMSCS能够减轻胆管胶原蛋白，抑制胆管瘢痕形成。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施方式。其中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明的一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用。
本发明的一种BMSCs通过胆管上皮细胞EMT作用制备抑制胆管瘢痕的形成的药物中的应用。
BMSC抑制胆管上皮细胞EMT的信号通路及通路中重要的调控蛋白。
胆管瘢痕形成后，E-cadherin基因和蛋白表达减少，而α-SMA、N-cadherin、snai1、vimentin则明显增强，说明胆管上皮细胞发生EMT变化；骨髓间充质干细胞与胆管上皮细胞共培养后，抑制了上皮细胞发生EMT。
TGF-β/Smad是EMT重要的通路之一，骨髓间充质干细胞可以抑制EMT的通路蛋白。
实施例1
(一)研究方法及研究指标
(1)体外细胞实验验证BMSC是否能够通过抑制胆管上皮细胞EMT来抑制胆管瘢痕的形成以及BMSC通过哪种可能的信号通路抑制胆管上皮细胞EMT：
利用TGF-β诱导胆管上皮细胞EMT的发生，实验分为4组：胆管上皮细胞组、胆管上皮细胞+TGF-β组、胆管上皮细胞+BMSC共培养组、胆管上皮细胞+BMSC共培养+TGF-β组。利用如下方法对四组细胞进行检测：
1)采用实时荧光定量聚合酶链扩增法(Real-time PCR)检测EMT相关因子α-SMA、E-Cadherin、N-cadherin、snail、Vimentin的mRNA表达水平。
2)利用western blot方法检测EMT相关因子α-SMA、E-Cadherin、N-cadherin、snail、Vimentin的蛋白表达水平。
3)采用Annexin V-FITC/PI双染法检测上皮细胞凋亡情况。
4)采用MTT法检测上皮细胞的生长情况。
(2)动物实验验证BMSC是否能够通过抑制胆管上皮细胞EMT来抑制胆管瘢痕的形成：
实验分为4组(每组3只)：壳聚糖膜组，壳聚糖膜+EMT诱导剂组，壳聚糖膜-BMSC组，壳聚糖膜-BMSC+EMT诱导剂组。各组大鼠利用手术切开胆总管前壁制作胆管损伤模型，以4-0带线针作粘膜对粘膜外翻全程吻合,术毕检查吻合口无渗漏。随后将已制备好的各组壳聚糖膜包裹胆总管吻合口处，必要时可以间断加缝包裹套1-2针固定。关腹。术后,自由进水、进食。肌注先锋V(20mg/kg)预防感染治疗3d。观察动物饮食、活动、毛色、巩膜情况。分别于术后1周、2周、1月各取5只动物,从原切口进腹。分离粘连，暴露胆总管，完整取下从肝总管分叉处到oddi氏括约肌之间的胆管组织，解除包裹套，暴露修复区域。按照之前的时间点对4组模型进行检测：
1)正常视野下观察各组胆汁淤积、结石形成以及狭窄等常规情况。
2)用光学显微镜观察胆管大体病理以及粘膜下层胶原纤维排列情况。
(二)实验结果
1.体外细胞实验验证BMSC是否能够通过抑制胆管上皮细胞EMT来抑制胆管瘢痕的形成以及BMSC通过哪种信号通路抑制胆管上皮细胞EMT
(1)MTT法检测各组HIBEpiC的生长
从表1中可知，HIBEpiC+HBMSCs组、HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组OD值较HIBEpiC组升高(P＜0.05)，其中HIBEpiC+HBMSCs组和HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组之间无统计学差异(P>0.05)。
表1
Figure BDA0003620403250000081
注：*：与HIBEpic组比较，*：＜0.05；**：＜0.01；***：＜0.001。
(2)流式检测各组细胞凋亡情况
从表2中可知，HIBEpiC+TGF-β1、HIBEpiC+HBMSCs组、HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组凋亡率较HIBEpiC组减低(P＜0.05)，其中HIBEpiC+TGF-β1、HIBEpiC+HBMSCs组和HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组之间无统计学差异(P>0.05)。
表2
Figure BDA0003620403250000082
Figure BDA0003620403250000091
注：*：与HIBEpic组比较，*：＜0.05；**：＜0.01；***：＜0.001。
(3)QPCR检测各组细胞中α-SMA基因的表达
从表3中可知，HIBEpiC+TGF-β1组α-SMA基因量较HIBEpiC组明显升高(P＜0.05)，其中HIBEpiC+HBMSCs组和HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组之间无统计学差异(P>0.05)。
表3
Figure BDA0003620403250000092
注：*：与HIBEpic组比较，*：＜0.05；**：＜0.01；***：＜0.001。
(4)QPCR检测各组细胞中E-cadherin基因的表达
从表4中可知，HIBEpiC+TGF-β1组、HIBEpiC+HBMSCs组、HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组E-cadherin基因量较HIBEpiC组减少(P＜0.05)，其中HIBEpiC+TGF-β1组、和HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组较HIBEpiC组减少更加明显(P＜0.05)。
表4
Figure BDA0003620403250000101
注：*：与HIBEpic组比较，*：＜0.05；**：＜0.01；***：＜0.001。
(5)QPCR检测各组细胞中N-cadherin基因的表达
从表5中可知，HIBEpiC+TGF-β1组、HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组N-cadherin基因量较HIBEpiC组增加(P＜0.05)，其中HIBEpiC+TGF-β1组N-cadherin基因量较HIBEpiC组增加更加明显(P＜0.05)。
表5
Figure BDA0003620403250000102
注：*：与HIBEpic组比较，*：＜0.05；**：＜0.01；***：＜0.001。
(6)QPCR检测各组细胞中snai1基因的表达
从表6中可知，HIBEpiC+TGF-β1组、HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组snai1基因量较HIBEpiC组增加(P＜0.05)。
表6
Figure BDA0003620403250000111
注：*：与HIBEpic组比较，*：＜0.05；**：＜0.01；***：＜0.001。
(7)QPCR检测各组细胞中vimentin基因的表达
从表7中可知，HIBEpiC+TGF-β1组vimentin基因量较HIBEpiC组增加(P＜0.05)，HIBEpiC+HBMSCs组、HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组vimentin基因量较HIBEpiC组无统计学差异(P>0.05)。
表7
Figure BDA0003620403250000112
注：*：与HIBEpic组比较，*：＜0.05；**：＜0.01；***：＜0.001。
(8)Western blot检测各组细胞中α-SMA蛋白的表达
从表8中可知，HIBEpiC+TGF-β1组、HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组α-SMA蛋白量较HIBEpiC组增加(P＜0.05)。
表8
Figure BDA0003620403250000121
注：*：与HIBEpic组比较，*：＜0.05；**：＜0.01；***：＜0.001。
(9)Western blot检测各组细胞中E-cadherin蛋白的表达
从表9中可知，HIBEpiC+TGF-β1组E-cadherin蛋白量较HIBEpiC组减少(P＜0.05)，HIBEpiC+HBMSCs组、HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组E-cadherin蛋白量较HIBEpiC组无统计学差异(P>0.05)。。
表9
Figure BDA0003620403250000122
注：*：与HIBEpic组比较，*：＜0.05；**：＜0.01；***：＜0.001。
(10)Western blot检测各组细胞中N-cadherin蛋白的表达
从表10中可知，HIBEpiC+TGF-β1组、HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1
组N-cadherin蛋白量较HIBEpiC组增加(P＜0.05)，HIBEpiC+HBMSCs组E-cadherin蛋白量较HIBEpiC组无统计学差异(P>0.05)。
表10
Figure BDA0003620403250000131
注：*：与HIBEpic组比较，*：＜0.05；**：＜0.01；***：＜0.001。
(11)Western blot检测各组细胞中Snai1蛋白的表达
从表11中可知，HIBEpiC+TGF-β1组Snai1蛋白量较HIBEpiC组增加(P＜0.05)，HIBEpiC+HBMSCs组、HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组Snai1蛋白量较HIBEpiC组无统计学差异(P>0.05)。
表11
Figure BDA0003620403250000132
Figure BDA0003620403250000141
注：*：与HIBEpic组比较，*：＜0.05；**：＜0.01；***：＜0.001。
(12)Western blot检测各组细胞中Vimentin蛋白的表达
从表12中可知，HIBEpiC+TGF-β1组、HIBEpiC+HBMSCs+TGF-β1组Vimentin蛋白量较HIBEpiC组增加(P＜0.05)，HIBEpiC+HBMSCs组Vimentin蛋白量较HIBEpiC组无统计学差异(P>0.05)。
表12
Figure BDA0003620403250000142
注：*：与HIBEpic组比较，*：＜0.05；**：＜0.01；***：＜0.001。
(13)胆管HE染色
对照组(瘢痕组)中，胆管上皮层细胞排列紊乱，细胞层数增加，上皮下层增厚，未见明显的炎性细胞浸润；瘢痕+BMSCS组中，胆管上皮层细胞排列紊乱程度轻，细胞层数少，接近正常上皮结构，上皮下层未见明显增厚，未见明显的炎性细胞浸润。
(14)胆管Masson染色
对照组(瘢痕组)中，胆管胶原蛋白明显增加，而瘢痕+BMSCS组中，胆管胶原蛋白减少。
(三)结论
1.胆管瘢痕形成后，E-cadherin基因和蛋白表达减少，而α-SMA、N-cadherin、snai1、vimentin则明显增强，说明胆管上皮细胞发生EMT变化；骨髓间充质干细胞与胆管上皮细胞共培养后，抑制了胆管上皮细胞发生EMT。
2.TGF-β/Smad是EMT重要的通路之一，骨髓间充质干细胞可以抑制EMT的通路蛋白。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的BMSCs通过胆管上皮细胞EMT作用制备抑制胆管瘢痕的形成的药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：BMSC抑制胆管上皮细胞EMT的信号通路。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：胆管瘢痕形成后，E-cadherin基因和蛋白表达减少，而α-SMA、N-cadherin、snai1、vimentin则明显增强，说明胆管上皮细胞发生EMT变化；骨髓间充质干细胞与胆管上皮细胞共培养后，抑制了胆管上皮细胞发生EMT。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：TGF-β/Smad是EMT重要的通路之一，骨髓间充质干细胞可以抑制EMT的通路。
CN202210460810.XA 2022-04-28 2022-04-28 一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用 Pending CN114699429A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210460810.XA CN114699429A (zh) 2022-04-28 2022-04-28 一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210460810.XA CN114699429A (zh) 2022-04-28 2022-04-28 一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114699429A true CN114699429A (zh) 2022-07-05

Family

ID=82176230

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210460810.XA Pending CN114699429A (zh) 2022-04-28 2022-04-28 一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114699429A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002083864A2 (en) * 2001-04-13 2002-10-24 Anterogen Co., Ltd. Methods and reagents for cell transplantation
WO2010081152A2 (en) * 2009-01-12 2010-07-15 University Of Southern California Keloid derived precursor cells and its applications of use thereof
US20170095511A1 (en) * 2015-08-03 2017-04-06 The Johns Hopkins University In vitro pre-conditioned bone marrow-derived mesenchymal stem cells and uses thereof
CN110892061A (zh) * 2017-06-19 2020-03-17 剑桥企业有限公司 扩增胆管细胞的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002083864A2 (en) * 2001-04-13 2002-10-24 Anterogen Co., Ltd. Methods and reagents for cell transplantation
WO2010081152A2 (en) * 2009-01-12 2010-07-15 University Of Southern California Keloid derived precursor cells and its applications of use thereof
US20170095511A1 (en) * 2015-08-03 2017-04-06 The Johns Hopkins University In vitro pre-conditioned bone marrow-derived mesenchymal stem cells and uses thereof
CN110892061A (zh) * 2017-06-19 2020-03-17 剑桥企业有限公司 扩增胆管细胞的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YING LI等: "Implantation of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Small Intestinal Submucosa Improves Bile Duct Injury in Rabbits", TISSUE ENG REGEN MED, vol. 18, no. 5, XP037563764, DOI: 10.1007/s13770-021-00351-2 *
ZHENGZHOU SHI等: "Extracellular vesicles produced by bone marrow mesenchymal stem cells attenuate renal fibrosis, in part by inhibiting the RhoA/ROCK pathway, in a UUO rat model", 《STEM CELL RES THER.》, vol. 11, no. 1, pages 11 - 12 *
宋飞;向盈盈;黄明;张小文;: "紫杉醇壳聚糖缓释膜抑制兔胆管上皮细胞EMT的实验", 昆明医科大学学报, no. 12 *
宋飞等: "紫杉醇抗良性胆管瘢痕纤维化的最佳抵抗因素研究", 《中国生化药物杂志》, vol. 34, no. 3, pages 4 *
王曙亮;王少江;李永刚;: "紫杉醇-壳聚糖缓释膜通过抑制TGFβ/Smad信号通路抵抗良性胆管瘢痕纤维化", 中国现代普通外科进展, no. 01 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Sun et al. Differentiation of adipose-derived stem cells into Schwann cell-like cells through intermittent induction: potential advantage of cellular transient memory function
Tian et al. Cell-free decellularized cartilage extracellular matrix scaffolds combined with interleukin 4 promote osteochondral repair through immunomodulatory macrophages: in vitro and in vivo preclinical study
US20250367108A1 (en) Method for reducing wrinkles and skin aging phenomena by reducing or preventing aging of cell
Rahbarghazi et al. Bone marrow mesenchymal stem cells and condition media diminish inflammatory adhesion molecules of pulmonary endothelial cells in an ovalbumin-induced asthmatic rat model
Hu et al. Bone marrow concentrate-induced mesenchymal stem cell conditioned medium facilitates wound healing and prevents hypertrophic scar formation in a rabbit ear model
Liao et al. Construction of ureteral grafts by seeding bone marrow mesenchymal stem cells and smooth muscle cells into bladder acellular matrix
Ninan et al. Wound healing in urology
Ding et al. Synergistic effect of vitamin D and low concentration of transforming growth factor beta 1, a potential role in dermal wound healing
Hu et al. Combination of mesenchymal stem cell-conditioned medium and botulinum toxin type A for treating human hypertrophic scars
CN110903348A (zh) 一种促进伤口愈合的小肽及其应用
US20140314724A1 (en) Cell preparation for erectile dysfunction or sensory disorders of the lower urinary tract containing adipose tissue derived mesenchymal stem cells
Tian et al. Repair of urethral defects by an adipose mesenchymal stem cell‑porous silk fibroin material
Hu et al. Scarless vocal fold regeneration by urine-derived stem cells and small intestinal submucosa hydrogel composites through enhancement of M2 macrophage Polarization, neovascularization and Re-epithelialization
Biniazan et al. Effects of placenta-derived human amniotic epithelial cells on the wound healing process and TGF-β induced scar formation in murine ischemic-reperfusion injury model
US11622964B2 (en) Method for destroying cellular mechanical homeostasis and promoting regeneration and repair of tissues and organs, and use thereof
KR101263760B1 (ko) 인간 배아줄기세포로부터 분화된 간세포를 배양한 조건배지를 함유하는 간질환 치료용 조성물
CN114699429A (zh) 一种BMSCs通过抑制胆管上皮细胞EMT而抑制胆管瘢痕形成的应用
CN112691186B (zh) 包含间充质干细胞和外泌体的组合物及其组织修复中的应用
Yu et al. Human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes enhance follicular regeneration in androgenetic alopecia via activation of Wnt/β-catenin pathway
EP2431046A1 (en) Use of olive leaf extracts in a pharmaceutical composition for inducing angiogenesis and vasculogenesis
CN112316114B (zh) 外泌体用于提高间充质干细胞组织修复功能的用途
CN1393222B (zh) 一种溶解在油脂中的甾醇化合物的组合物的新用途
Dewi et al. Tissue integrity and healing response in hypoestrogenic animal model treated by mesh implantation with addition of mesenchymal stem cell secretome
Li et al. LNP-encapsulated miRNA29b for corneal repair: A novel approach to combat fibrosis
Liu et al. Loureirin A activates Wnt/β-catenin pathway to promote wound with follicle stem cell-seeded tissue-engineered skin healing

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20220705