CN103833812A - 吡嗪衍生物及其医药用途 - Google Patents
吡嗪衍生物及其医药用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103833812A CN103833812A CN201210479584.6A CN201210479584A CN103833812A CN 103833812 A CN103833812 A CN 103833812A CN 201210479584 A CN201210479584 A CN 201210479584A CN 103833812 A CN103833812 A CN 103833812A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- represent
- brs
- formula
- virus
- hydrate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 0 *C(N=C1C(N)=O)=CN(C([C@@]2O)O[C@@](COP(*)(*)=O)[C@@]2O)C1=O Chemical compound *C(N=C1C(N)=O)=CN(C([C@@]2O)O[C@@](COP(*)(*)=O)[C@@]2O)C1=O 0.000 description 2
- XPTPAIJDVFQPJT-UHFFFAOYSA-N CC(C)OC(OC(C)Cl)=O Chemical compound CC(C)OC(OC(C)Cl)=O XPTPAIJDVFQPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WGTKOUMIPZEYND-IBQOHJTMSA-N CC(C)OC(OC(C)OP(OC[C@H]([C@H]1O)O[C@@H](C[C@@H](CC(C(C(N)=O)=N2)=O)C=C2F)[C@@H]1O)(OC(C)OC(OC(C)C)=O)=O)=O Chemical compound CC(C)OC(OC(C)OP(OC[C@H]([C@H]1O)O[C@@H](C[C@@H](CC(C(C(N)=O)=N2)=O)C=C2F)[C@@H]1O)(OC(C)OC(OC(C)C)=O)=O)=O WGTKOUMIPZEYND-IBQOHJTMSA-N 0.000 description 1
- JQQJHJFUQNUTOP-RAKFODCLSA-N NC(C1=NC(F)=CC(C[C@@H]([C@@H]2O)O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@H]2O)CCC1=O)=O Chemical compound NC(C1=NC(F)=CC(C[C@@H]([C@@H]2O)O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@H]2O)CCC1=O)=O JQQJHJFUQNUTOP-RAKFODCLSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及具有抗RNA病毒作用的式I代表的吡嗪衍生物或其非毒性药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，其中，X代表H或卤原子；R1、R2为OR3或NHCH(R4)COOR5；R1、R2相同或不同；R3代表CH(R6)OC(O)R5、CH(R6)OC(O)OR5、芳香基或取代芳香基；R4代表H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2OH，-CH(OH)CH3、-CH2SH、-CH2CH2SCH3、-CH2COOH、-CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-(CH2)3NHC(NH)NH2、或-(CH2)4NH2；当R4非为H时，与R4相连的碳原子的绝对构型为R或S，或RS；R5代表C1-C8的烷基、环烷基、或芳香基；R6代表H或C1-C5的烷基；当R6非为H时，与R4相连的碳原子的绝对构型为R或S，或RS。
Description
技术领域
本发明涉及具有广谱抗RNA病毒的吡嗪衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，以及含有该吡嗪衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物作为活性成分以及适宜的赋型剂形成的药物组合物，以及该吡嗪衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物、含有该吡嗪衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物作为活性成分的药物组合物在制备抗RNA病毒药物的用途。
背景技术
RNA病毒感染性疾病，如流感病毒、丙型肝炎病毒、西尼罗病毒(WestNilevirus)、黄热病病毒(Yellow Fever Virus)、西方马脑炎病毒WesterEquine Virus)、沙粒病毒(Arenavirus)、口蹄疫病毒(Foot and MouthDisease Virus)、白令病毒(Phlebovirus)、布尼亚病毒(Bunyavirus)等病毒感染所致疾病，兼有有较强传染性和致命性，是威胁人类健康的重大疾病。治疗RNA病毒感染的根本途径是抗病毒治疗。但是现有抗RNA病毒药物不能满足应对RNA病毒感染急性爆发的需求，特别是对耐药性的病毒株、高致病性流感及禽流感病毒尚缺乏有效地防治手段。
吡嗪衍生物如3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(T-1105)、6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(T-705)及糖苷衍生物(T-1106)，具有广谱的抑制RNA病毒的作用；对耐药性的流感病毒株、高致病性流感及禽流感病毒也具有显著的抑制作用。
对T-705抗病毒的作用机制的研究结果(ANTIMICROBIAL AGENTSAND CHEMOTHERAPY，2005，49(3)：981-986)表明，该类药物在细胞内转化为类核苷三磷酸(T-705 RTP)，T-705 RTP具有强效抑制病毒RNA聚合酶的活性。因此，T-705是通过在细胞内转化为类核苷三磷酸T-705 RTP发挥抗RNA病毒作用的。
但是，作为吡嗪类衍生物，T-705转化为类核苷酸T-705 RMP的转化率较低；体内天然的嘌呤类碱基如腺嘌呤、鸟嘌呤及次黄嘌呤，嘌呤类核苷如腺苷、鸟苷及肌苷次黄嘌呤，对T-705向T-705 RMP的转化具有显著的抑制作用，从而抑制T-705的抗病毒活性。
发明内容
本发明的目的是提供具有更强的抗RNA病毒作用的式I代表的吡嗪衍生物或其非毒性药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，
其中，X代表H或卤原子；
R1、R2为OR3或NHCH(R4)COOR5；R1、R2相同或不同；
R3代表CH(R6)OC(O)R5、CH(R6)OC(O)OR5、芳香基或取代芳香基；
R4代表H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2OH，-CH(OH)CH3、-CH2SH、-CH2CH2SCH3、-CH2COOH、-CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-(CH2)3NHC(NH)NH2、或-(CH2)4NH2；当R4非为H时，与R4相连的碳原子的绝对构型为R或S，或RS；
R5代表C1-C8的烷基、环烷基、或芳香基；
R6代表H或C1-C5的烷基；当R6非为H时，与R4相连的碳原子的绝对构型为R或S，或RS。
更具体地，本发明提供式I代表的吡嗪衍生物或其非毒性药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，式I中X代表H或卤原子，R1、R2为OR3；R3代表CH(R6)OC(O)OR5，R5代表C1-C8的烷基、或环烷基，R6代表H或C1-C5的烷基；当R6非为H时，与R6相连的碳原子的绝对构型为R或S，或RS。
本发明还提供式I代表的吡嗪衍生物或其非毒性药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，式I中X代表H或卤原子，R1、R2为OR3；R3代表CH(R6)OC(O)R5，R5代表C1-C8的烷基、或环烷基、或芳香基，R6代表H或C1-C5的烷基；当R6非为H时，与R6相连的碳原子的绝对构型为R或S，或RS。
本发明还提供式I代表的吡嗪衍生物或其非毒性药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，式I中X代表H或卤原子，R1、R2为OR3，R3代表芳香基或取代芳香基。
本发明还提供式I代表的吡嗪衍生物或其非毒性药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，式I中X代表H或卤原子，R1为OR3，R2为NHCH(R4)COOR5；R3代表芳香基或取代芳香基，R4代表H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2OH，-CH(OH)CH3、-CH2SH、-CH2CH2SCH3、-CH2COOH、-CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-(CH2)3NHC(NH)NH2、或-(CH2)4NH2，R5代表C1-C8的烷基、或环烷基；磷原子上的绝对构型为R或S，或RS；当R4非为H时，与R4相连的碳原子的绝对构型为R或S、或RS。
本发明还提供式I代表的吡嗪衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物作为活性成分以及适宜的赋型剂形成的药物组合物；这些药物组合物可以是溶液剂、片剂、胶囊或注射剂；这些药物组合物可以通过注射途径给药或口服给药。
本发明还提供式I代表的吡嗪衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，以及含有式I代表的吡嗪衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物作为活性成分的药物组合物在制备抗RNA病毒药物的用途。
本发明还提供式I代表的吡嗪衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，以及含有式I代表的吡嗪衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物作为活性成分的药物组合物在制备抗RNA病毒药物的用途，所述的RNA病毒为流感病毒、丙型肝炎病毒、西尼罗病毒、黄热病病毒、西方马脑炎病毒、沙粒病毒、口蹄疫病毒、白令病毒、布尼亚病毒。
本发明中的术语“可药用盐”可以是与无机酸形成的药用盐，例如硫酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐；也可以是与有机酸形成药用盐，例如乙酸盐、草酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、马来酸盐等。
本发明化合物或其可药用盐可以形成溶剂化物，例如水合物、醇合物等。
本发明化合物或其可药用盐可以单独或以药物组合物的形式给药。本发明药物组合物可根据给药途径配成各种适宜的剂型。使用一种或多种生理学上可接受的载体，包含赋形剂和助剂，它们有利于将活性化合物加工成可以在药学上使用的制剂。适当的制剂形式取决于所选择的给药途径，可以按照本领域熟知的常识进行制造。
给药途径可以是口服、非肠道或局部给药，优选口服和注射形式给药。可以口服的药物制剂包括胶囊剂和片剂等。也可以采用舌下片或者其他非吞咽的方式给药。本发明化合物也可以配制用于肠胃外给药或者透皮给药或者经粘膜给药。本领域技术人员可以理解，本发明化合物可以采用合适的药物释放系统(DDS)以得到更有利的效果。
另外需要指出，本发明化合物使用剂量和使用方法取决于诸多因素，包括患者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、化合物的活性强度、服用时间、代谢速率、病症的严重程度。
当式I中R1、R2为OR3，R3代表CH(R6)OC(O)R5时，式I所示的目标化合物可通过如下合成路线来制备：
以6-位取代或未取代的3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪为原料，与六甲基二硅氮烷(HMDS)反应，得到3-三甲基硅醚-2-氨基甲酰基吡嗪中间体II，II在氯化锡(IV)作用下与β-D-呋喃核糖-1-乙酸酯-2，3，5-三苯甲酸酯反应，得到中间体III，III脱保护得到3-氧代-2-氨基甲酰基吡嗪的呋喃核糖苷衍生物IV，IV与三氯氧磷作用，然后水解得到3-氧代-2-氨基甲酰基吡嗪的呋喃核糖苷单磷酸酯衍生物V，V与烷酰氧基甲基氯反应，得到目标化合物I。
反应式中，X代表H或卤原子，R5代表C1-C8的烷基、或环烷基、或芳香基，R6代表H或C1-C5的烷基；当R6非为H时，与R6相连的碳原子的绝对构型为R或S，或RS。
当式I中R1、R2为OR3，R3代表CH(R6)OC(O)OR5时，式I所示的目标化合物可通过如下合成路线来制备：
类核苷酸中间体V与烷氧羰基氧基甲基氯反应，得到目标化合物I；反应式中，X代表H或卤原子，R5代表C1-C8的烷基、或环烷基，R6代表H或C1-C5的烷基；当R6非为H时，与R6相连的碳原子的绝对构型为R或S，或RS。
当式I中R1、R2为OR3，R3代表芳香基或取代芳香基时，式I所示的目标化合物可通过如下合成路线来制备：
类核苷中间体IV与五氯化磷作用，得到酰氯衍生物VI，VI与苯酚或取代苯酚反应，得到目标化合物I；反应式中，R7为C1-5的烷基或卤素。
当R1为OR3，R2为NHCH(R4)COOR5；R3代表芳香基或取代芳香基，R4代表H、烷基或取代烷基时，式I所示的目标化合物可通过如下合成路线来制备：
二氯化磷酸酚酯与氨基酸酯在N-甲基咪唑(NMI)催化下，反应生成磷酰胺中间体(VII)；3-氧代-2-氨基甲酰基吡嗪的呋喃核糖苷衍生物IV与VII反应，得到目标化合物。
反应式中，R1为OR3，R2为NHCH(R4)COOR5；R3代表芳香基或取代芳香基，R4代表H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2OH，-CH(OH)CH3、-CH2SH、-CH2CH2SCH3、-CH2COOH、-CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-(CH2)3NHC(NH)NH2、或-(CH2)4NH2，R5代表C1-C8的烷基、或环烷基；磷原子上的绝对构型为R或S，或RS；当R4非为H时，与R4相连的碳原子的绝对构型为R或S、或RS。
具体实施方式
下述实施例用于具体地解释本发明，然而本发明的范围并不限于下述实施例。
实施例1 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(V1)的制备
在400ml六甲基二硅氮烷(HMDS)中，加入100g 6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪，搅拌下加热回流50分钟，减压蒸去溶剂。充入N2，加入400ml二氯甲烷，搅拌，相继加入311g β-D-呋喃核糖-1-乙酸酯-2，3，5-三苯甲酸酯，50ml氯化锡(IV)，室温搅拌24小时。在反应混合物中加入2400ml乙酸乙酯和1800ml水，用NaHCO3的饱和水溶液调节pH至8，滤出沉淀，分出有机层。将有机层依次用水和氯化钠饱和水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤，将滤液减压蒸干，用硅胶柱层析分离，用含5％甲醇的乙酸乙酯洗脱，收集所需组分，减压蒸干得到43.5g 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二(苯甲酰氧基)-5-(苯甲酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(III1)。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ：8.74(s，1H)，7.3-8.4(m，17H)，6.35(d，1H)，5.7-6.3(m，3H)，4.5-5.0(m，3H)。
将43g III1用300ml甲醇溶解，冰浴冷却，通入氨气至饱和。室温搅拌20小时，减压蒸去溶剂。在剩余物中加入100ml甲醇，搅拌，冷却，过滤，收集固体，得到14.6g 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(IV1)。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.35(brs，1H)，8.28(d，1H)，7.73(brs，1H)，5.94(d，1H)，5.63(brs，1H)，5.28(t，1H)，5.09(brs，1H)，3.85-4.15(m，3H)，3.82(dd，2H)。
在密封的反应器中加入14.5g(50.0mmol)干燥至恒重的IV1，250ml亚磷酸三乙酯，通入氮气，将反应混合物搅拌冷却至-15℃至-20℃。滴加20ml含6.85g(60.0mmol)三氯氧磷的无水二氯甲烷溶液，保持反应混合物的温度-15℃至-20℃，持续搅拌至IV1反应完全。将反应混合物倒于100ml去离子水和100g冰的混合物中，冷却以保持温度15℃。加完后，将混合物温至20℃至25℃，搅拌45-60分钟。加入250ml二氯甲烷，剧烈搅拌30分钟，放置30分钟，分层，弃去二氯甲烷；再加入50ml二氯甲烷，剧烈搅拌30分钟，放置30分钟，分层，弃去二氯甲烷层。下层加入500mL无水乙醇，保持20℃至25℃，持续搅拌24小时，有固体析出，过滤，滤饼用无水乙醇洗涤，于68mmHg，40℃真空干燥，得V1 16.2克。
实施例2 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(丙酰氧基甲基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I1)的制备
在5mL无水DMF中，加入0.37g(1mmol)V1和0.2g(2mmol)三乙胺，氮气保护下于常温搅拌10分钟，加入0.46g(4mmol)丙酸氯甲酯，氮气保护下于常温搅拌反应24小时。转入分液漏斗，加入50mL水，用乙酸乙酯(3×25mL)萃取，合并有机层，用饱和盐水(3×20mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，滤去干燥剂，将滤液减压蒸干，残留物经硅胶柱层析分离，用含5％甲醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得I1 0.19g。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.30(brs，1H)，8.26(d，1H)，7.71(brs，1H)，5.92(d，1H)，5.60-5.65(m，5H)，5.09(brs，1H)，3.82-4.15(m，5H)，2.34(q，4H)，1.13(t，6H)。
实施例3 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(异丁酰氧基甲基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I2)的制备
参照实施例2的方法，用异丁酸氯甲酯代替丙酸氯甲酯与V1反应，反应产物经硅胶柱层析分离，得到I2，收率23％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.29(brs，1H)，8.25(d，1H)，7.70(brs，1H)，5.92(d，1H)，5.63-5.70(m，5H)，5.09(brs，1H)，3.85-4.15(m，3H)，3.82(dd，2H)，2.53(m，2H)，1.13(d，12H)。
实施例4 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(特戊酰氧基甲基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I3)的制备
参照实施例2的方法，用特戊酸氯甲酯代替丙酸氯甲酯与V1反应，反应产物经硅胶柱层析分离，得到I3，产率20％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.36(brs，1H)，8.27(d，1H)，7.75(brs，1H)，5.96(d，1H)，5.63-5.70(m，5H)，512(brs，1H)，3.82-4.13(m，5H)，1.24(s，9H)，1.21(s，9H)。
实施例5 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(环己甲酰氧基甲基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I4)的制备
参照实施例2的方法，用环己甲酸氯甲酯代替丙酸氯甲酯与V1反应，反应产物经硅胶柱层析分离，得到I4，产率25％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.30(brs，1H)，8.25(d，1H)，7.68(brs，1H)，5.85(d，1H)，5.65-5.70(m，4H)，5.61(brs，1H)，5.05(brs，1H)，3.82-4.15(m，5H)，2.23(m，2H)，1.90(m，4H)，1.64(m，4H)；1.33-1.45(m，12H)。
实施例6 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(乙基氧基羰基氧基甲基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I5)的制备
在5ml N-甲基吡咯烷酮中，加入0.37g(1mmol)V1、0.2g(2mmol)三乙胺，室温下搅拌30分钟，然后加入0.55g(4mmol)氯甲基乙基碳酸酯，于70℃搅拌反应2小时，冷却，加入75ml 1％的柠檬酸水溶液和125ml乙醚，搅拌，分层，水层用乙醚提取两次，合并有机层，干燥。减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用含5％乙醇的二氯甲烷溶液洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得I5 0.17克。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.35(brs，1H)，8.28(d，1H)，7.73(brs，1H)，5.94(d，1H)，5.47-5.78(m，4H)，5.63(brs，1H)，5.09(brs，1H)，3.85-4.15(m，3H)，3.82(dd，2H)，3.7-3.6(m，4H)，1.30(m，6H)。
实施例7 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(异丙基氧基羰基氧基甲基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I6)的制备
参照实施例6的方法，用氯甲基异丙基碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与V1反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I6，产率27％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.39(brs，1H)，8.31(d，1H)，7.76(brs，1H)，5.97(d，1H)，5.66(brs，1H)，5.45-5.75(m，4H)，5.04(brs，1H)，3.85-4.15(m，7H)，3.80(dd，2H)，1.24-1.26(m，12H)。
实施例8 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(戊基-3氧基羰基氧基甲基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I7)的制备
参照实施例6的方法，用氯甲基-(3-戊基)-碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与V1反应，反应产物用硅胶柱层析分离得I7，产率15％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.36(brs，1H)，8.25(d，1H)，7.70(brs，1H)，5.92(d，1H)，5.63(brs，1H)，5.46-5.77(m，4H)，5.09(brs，1H)，3.85-4.15(m，5H)，3.82(dd，2H)，1.52-1.62(m，8H)，0.92(m，12H)。
实施例9 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(环己基氧基羰基氧基甲基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I8)的制备
参照实施例6的方法，用氯甲基环己基碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与V1反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I8，产率24％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.35(brs，1H)，8.28(d，1H)，7.73(brs，1H)，5.94(d，1H)，5.63(brs，1H)，5.47-5.78(m，4H)，5.09(brs，1H)，3.85-4.15(m，5H)，3.82(dd，2H)，1.78(m，8H)，1.15-1.50(m，12H)。
实施例10 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(1-特戊酰氧基乙基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I9)的制备
参照实施例2的方法，用特戊酸1-氯乙基酯代替丙酸氯甲酯与V1反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I9，产率20％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.33(brs，1H)，8.24(d，1H)，7.71(brs，1H)，6.35-6.44(m，2H)，5.91(d，1H)，5.60(brs，1H)，5.07(brs，1H)，3.83-4.15(m，5H)，1.48(m，6H)，1.13(m，18H)。
实施例11 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(1-苯甲酰氧基乙基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I10)的制备
参照实施例2的方法，用苯甲酸1-氯-乙基代替丙酸氯甲酯与V1反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I10，产率15％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.36(brs，1H)，8.28(d，1H)，7.70(brs，1H)，7.23-7.39(m，5H)，6.32-6.41(m，2H)，5.94(d，1H)，5.63(brs，1H)，5.09(brs，1H)，3.85-4.15(m，3H)，3.82(dd，2H)，1.46-1.50(m，6H)。
实施例12 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(1-丙酰基氧基-2-甲基-丙基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I11)的制备
参照实施例2的方法，用丙酸2-甲基-1-氯-丙基酯丙酸氯甲酯与V1反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I11，产率19％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.30(brs，1H)，8.26(d，1H)，7.71(brs，1H)，6.25-6.33(m，2H)，5.93(d，1H)，5.62(brs，1H)，5.07(brs，1H)，3.84-4.15(m，5H)，2.34-2.46(m，4H)，1.92-2.09(m，2H)，1.16-1.19(m，6H)，0.97-1.02(m，12H)。
实施例13 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(1-乙基氧基羰基氧基-乙基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I12)的制备
参照实施例6的方法，用1-氯乙基乙基碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与V1反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I12，产率21％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.39(brs，1H)，8.32(d，1H)，7.76(brs，1H)，6.28-6.37(m，2H)，5.97(d，1H)，5.65(brs，1H)，5.13(brs，1H)，3.83-4.15(m，9H)，1.49-1.53(m，6H)，1.20-1.23(m，6H)。
实施例14 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(1-异丙氧基羰基氧基-乙基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I13)的制备
参照实施例6的方法，用1-氯乙基异丙基碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与V1反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I13，产率13％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.38(brs，1H)，8.29(d，1H)，7.73(brs，1H)，6.31-6.37(m，2H)，5.97(d，1H)，5.68(brs，1H)，5.14(brs，1H)，3.85-4.15(m，5H)，3.81(dd，2H)，1.43-1.47(m，6H)，1.21-1.24(m，12H)。
实施例15 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(1-环己基氧基羰基氧基-乙基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I14)的制备
参照实施例6的方法，用1-氯乙基环己基碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与V1反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I14，产率14％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.39(brs，1H)，8.30(d，1H)，7.76(brs，1H)，6.22-6.31(m，2H)，5.97(d，1H)，5.68(brs，1H)，5.13(brs，1H)，3.84-4.16(m，5H)，3.80(dd，2H)，1.75(m，8H)，1.42-1.46(m，6H)，1.16-1.47(m，12H)。
实施例16 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(苯氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I15)的制备
在50mL二氯甲烷-四氯化碳(3∶1)的混合溶剂中，加入2.9g(10mmol)干燥至恒重的IV1，加入4.16g(20.0mmol)PCl5，室温搅拌3h，减压蒸除溶剂，将残留物与50mL干燥的甲苯共蒸一次，得VI13.5g。
将0.8g(2mmol)VI1加于10mL干燥的二氯甲烷中，通N2，搅拌下加入0.75g(8mmol)苯酚，冰浴冷却。依次加入0.5g(5mmol)三乙胺和(8mmol)1-甲基咪唑，冰浴下搅拌10min，然后室温搅拌2h.过滤除去沉淀，滤饼用干燥的二氯甲烷洗2次，合并洗滤液，依次用饱和NaHCO3水溶液和水洗，有机层用无水硫酸钠干燥，滤去干燥剂，将滤液减压蒸干。残留物用硅胶柱层析分离，用含5％甲醇的二氯甲烷，收集所需组分，减压蒸干，得I150.43g。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.32(brs，1H)，8.25(d，1H)，7.71(brs，1H)，7.16-7.54(m，10H)，5.92(d，1H)，5.60(brs，1H)，5.24(t，1H)，5.05(brs，1H)，3.86-4.15(m，3H)，3.81(dd，2H)。
实施例17 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(2-乙氧基苯氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I16)的制备
参照实施例16的方法，用2-乙氧基苯酚代替苯酚与VI1反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I16，产率14％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.30(brs，1H)，8.24(d，1H)，7.71(brs，1H)，7.09-7.26(m，8H)，5.92(d，1H)，5.61(brs，1H)，5.25(t，1H)，5.04(brs，1H)，4.25-4.37(m，4H)，3.82-4.15(m，5H)，3.82(dd，2H)，1.24(m，6H)。
实施例18 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-((甲氧基羰基甲胺基-苯氧基-)-磷酰基氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I17)的制备
在25mL二氯甲烷中加入2.1克(10mol)苯氧基二氯化磷，1.3克(10mol)甘氨酸甲酯盐酸盐，搅拌，冷却至-78℃。搅拌下滴入20mL含2g三乙胺的二氯甲烷溶液，维持反应温度-78℃。滴加完毕，撤去冷浴，反应温度渐升至室温。继续搅拌1h，减压蒸干，在残留物中加入25ml无水乙醚，过滤。将滤液减压蒸干，得VII1 1.6g，直接用于下步反应。
在6ml无水四氢呋喃中加入0.29g(1mmol)IV1、0.66g(8mmol)1-甲基咪唑，搅拌下滴加5ml含1.3g(5mmol)VII1无水四氢呋喃溶液。加完后室温搅拌过夜。过滤，将滤液减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用含5％甲醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得到I17 0.26g。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.39(brs，1H)，8.33(d，1H)，7.78(brs，1H)，7.35-7.38(m，2H)，7.16-7.24(m，3H)，6.02(m，1H)，5.90(d，1H)，5.68(brs，1H)，5.29(t，1H)，5.13(brs，1H)，4.23-4.26(m，2H)，3.87-4.16(m，3H)，3.80(dd，2H)，3.64(s，3H)。
实施例19 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-((乙氧基羰基甲胺基-苯氧基-)-磷酰基氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I18)的制备
参照实施例18的方法，用甘氨酸乙酯盐酸盐代替甘氨酸甲酯盐酸盐，与苯氧基二氯化磷反应，得到VII2。
用VII2代替VII1与IV1反应，反应产物经硅胶柱层析分离，用含5％乙醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得到I18，产率18％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.38(brs，1H)，8.32(d，1H)，7.77(brs，1H)，7.34-7.37(m，2H)，7.15-7.23(m，3H)，6.01(m，1H)，5.89(d，1H)，5.67(brs，1H)，5.28(t，1H)，5.13(brs，1H)，4.22-4.25(m，2H)，3.82-4.14(m，5H)，3.65(m，2H)，1.15(m，3H)。
实施例20 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-((异丙氧基羰基甲胺基-苯氧基-)-磷酰基氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I19)的制备
参照实施例18的方法，用甘氨酸丙酯盐酸盐代替甘氨酸甲酯盐酸盐，与苯氧基二氯化磷反应，得到VII3。
用VII3代替VII1与IV1反应，反应产物经硅胶柱层析分离，用含5％异丙醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得到I19，产率15％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.36(brs，1H)，8.32(d，1H)，7.75(brs，1H)，7.35-7.38(m，2H)，7.16-7.24(m，3H)，6.01(m，1H)，5.90(d，1H)，5.68(brs，1H)，5.27(t，1H)，5.13(brs，1H)，4.20-4.23(m，3H)，3.86-4.16(m，3H)，3.80(dd，2H)，1.11(m，6H)。
实施例21 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(((S)-1-乙氧基羰基乙胺基-苯氧基-)-磷酰基氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I20)及其异构体(I20-A和I20-B)的制备
在300mL无水二氯甲烷中，加入21g(0.1mol)苯氧基二氯化磷和15.3g(0.1mol)L-丙氨酸乙酯盐酸盐，冷却至-78℃。搅拌下滴加100mL含20g三乙胺的无水二氯甲烷溶液，控制反应温度-78℃。加完后，待反应温度渐升至室温，继续搅拌1小时。减压蒸干，在残留物中加入250ml无水乙醚，过滤。将滤液减压蒸干，得VII4 15.6g。
在50ml无水四氢呋喃中，加入2.9g(10mmol)IV1、6.6克(80mmol)1-甲基咪唑，搅拌下滴加50ml含13g(50mmol)VII4的无水四氢呋喃溶液，加完后室温搅拌过夜。过滤，将滤液减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用含5％甲醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得到I20 1.7g。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.37(brs，1H)，8.29(d，1H)，7.75(brs，1H)，7.35-7.39(m，2H)，7.18-7.23(m，3H)，6.03(m，1H)，5.96(d，1H)，5.64(brs，1H)，5.29(t，1H)，5.09(brs，1H)，4.30(m，1H)，3.85-4.15(m，3H)，3.53(m，2H)，3.82(dd，2H)1.20-1.28，(m，3H)，1.13-1.16(m，3H)。
将I20 1.4g溶于含12％乙醇的乙腈，用Diacel’s Chiralpak AS手性制备色谱分离，流动相为含12％乙醇的乙腈溶液，流速10ml/min，收集第一个组分，减压蒸干，得到I20-A 0.62g；
收集第二个组分，减压蒸干，得到I20-B 0.48克。
I20-A的1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.35(brs，1H)，8.28(d，1H)，7.73(brs，1H)，7.39-7.35(m，2H)，7.19-7.13(m，3H)，6.06(m，1H)，5.92(d，1H)，5.61(brs，1H)，5.29(t，1H)，5.10(brs，1H)，4.23(m，1H)，3.82-4.15(m，3H)，3.56(m，2H)，1.21(d，3H)，1.14(t，3H)。
I20-B的1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.36(brs，1H)，8.27(d，1H)，7.73(brs，1H)，7.37-7.34(m，2H)，7.20-7.15(m，3H)，6.01(m，1H)，5.94(d，1H)，5.63(brs，1H)，5.28(t，1H)，5.09(brs，1H)，4.21(m，1H)，3.85-4.15(m，3H)，3.82(dd，2H)，3.54(m，2H)，1.24(d，3H)，1.13(t，3H)。
实施例22 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(((S)-1-异丙氧基羰基乙胺基-苯氧基-)-磷酰基氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I21)及其异构体(I21-A和I21-B)的制备
在250mL无水二氯甲烷中加入21g(0.1mol)苯氧基二氯化磷和16.7g(0.1mol)L-丙氨酸异丙酯盐酸盐，冷却至-78℃。搅拌下滴加150mL含有20g三乙胺的无水二氯甲烷溶液，控制反应温度-78℃。加完后，待反应温度渐升至室温，继续搅拌1小时。减压蒸干，在残留物中加入250ml无水乙醚，过滤。将滤液减压蒸干，得VII5 18.0g。
在50ml无水四氢呋喃中，加入2.9g(10mmol)IV1、6.6克(80mmol)1-甲基咪唑，搅拌下滴加50ml含15g(50mmol)VII5的无水四氢呋喃溶液，加完后室温搅拌过夜。过滤，将滤液减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用含5％异丙醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得到I21 1.5g。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.37(brs，1H)，8.30(d，1H)，7.75(brs，1H)，7.33-7.38(m，2H)，7.15-7.25(m，3H)，6.08(m，1H)，5.94(d，1H)，5.63(brs，1H)，5.28(t，1H)，5.09(brs，1H)，4.29(m，1H)，3.85-4.15(m，3H)，3.82(dd，2H)，3.69(m，1H)，1.22(m，3H)，1.14(m，6H)。
将I21 1.4g溶于含12％异丙醇的乙腈，用Diacel’s Chiralpak AS手性制备色谱分离，流动相为含12％异丙醇的乙腈溶液，流速10ml/min，收集第一个组分，减压蒸干，得到I21-A 0.47g。
收集第二个组分，减压蒸干，得到I21-B 0.63克。
I21-A的1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.35(brs，1H)，8.28(d，1H)，7.73(brs，1H)，7.39-7.35(m，2H)，7.22-7.17(m，3H)，6.09(m，1H)，5.94(d，1H)，5.63(brs，1H)，5.28(t，1H)，5.09(brs，1H)，4.40(m，1H)，3.82-4.15(m，5H)，3.51(m，1H)，1.19(d，3H)，1.16(d，6H)。
I21-B的1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.34(brs，1H)，8.29(d，1H)，7.75(brs，1H)，7.38-7.33(m，2H)，7.21-7.15(m，3H)，6.03(m，1H)，5.92(d，1H)，5.62(brs，1H)，5.26(t，1H)，5.03(brs，1H)，4.23(m，1H)，3.85-4.15(m，3H)，3.80(dd，2H)，3.55(m，1H)，1.21(d，3H)，1.13(d，6H)。
实施例23 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(((S)-1-环己氧基羰基乙胺基-苯氧基-)-磷酰基氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I22)的制备
在25mL无水二氯甲烷中加入2.1g(0.01mol)苯氧基二氯化磷和2.1g(0.01mol)L-丙氨酸环己酯盐酸盐，冷却至-78℃。搅拌下滴加20mL含有2g三乙胺的无水二氯甲烷溶液，控制反应温度-78℃。加完后，待反应温度渐升至室温，继续搅拌1小时。减压蒸干，在残留物中加入30ml无水乙醚，过滤。将滤液减压蒸干，得VII7 1.9g。
在50ml无水四氢呋喃中，加入0.29g(1mmol)IV1、0.66克(8mmol)1-甲基咪唑，搅拌下滴加6ml含1.73g(5mmol)VII7的无水四氢呋喃溶液，加完后室温搅拌过夜。过滤，将滤液减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用含5％甲醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得到I22 0.19g。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.35(brs，1H)，8.28(d，1H)，7.73(brs，1H)，7.32-7.36(m，2H)，7.15-7.20(m，3H)，6.03(m，1H)，5.94(d，1H)，5.63(brs，1H)，5.28(t，1H)，5.09(brs，1H)，4.22(m，1H)，3.85-4.15(m，3H)，3.82(dd，2H)，3.65(m，1H)，1.63(m，4H)，1.18-1.41(m，9H)。
实施例24 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(((R)-1-异丙氧基羰基乙胺基-苯氧基-)-磷酰基氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I23)及其异构体(I23-A和I23-B)的制备
在250mL无水二氯甲烷中加入21g(0.1mol)苯氧基二氯化磷和16.7g(0.1mol)D-丙氨酸异丙酯盐酸盐，冷却至-78℃。搅拌下滴加150mL含有20g三乙胺的无水二氯甲烷溶液，控制反应温度-78℃。加完后，待反应温度渐升至室温，继续搅拌1小时。减压蒸干，在残留物中加入250ml无水乙醚，过滤。将滤液减压蒸干，得VII8 17.2g。
在50ml无水四氢呋喃中，加入2.9g(10mmol)IV1、6.6克(80mmol)1-甲基咪唑，搅拌下滴加50ml含15g(50mmol)VII8的无水四氢呋喃溶液，加完后室温搅拌过夜。过滤，将滤液减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用含5％异丙醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得到I23 1.3g。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.32(brs，1H)，8.18(d，1H)，7.69(brs，1H)，7.30-7.35(m，2H)，7.11-7.22(m，3H)，6.04(m，1H)，5.91(d，1H)，5.60(brs，1H)，5.25(t，1H)，5.06(brs，1H)，4.25(m，1H)，3.82-4.15(m，5H)，3.66(m，1H)，1.20(m，3H)，1.11(m，6H)。
将I23 1.3g溶于含12％异丙醇的乙腈，用Diacel’s Chiralpak AS手性制备色谱分离，流动相为含12％异丙醇的乙腈溶液，流速10ml/min，收集第一个组分，减压蒸干，得到I23-A 0.41g；
收集第二个组分，减压蒸干，得到I23-B 0.40克。
I23-A的1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.33(brs，1H)，8.26(d，1H)，7.70(brs，1H)，7.29-7.35(m，2H)，7.20-7.15(m，3H)，6.05(m，1H)，5.92(d，1H)，5.61(brs，1H)，5.27(t，1H)，5.07(brs，1H)，4.34(m，1H)，3.80-4.15(m，5H)，3.59(m，1H)，1.17(d，3H)，1.14(d，6H)。
I23-B的1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.34(brs，1H)，8.19(d，1H)，7.70(brs，1H)，7.38-7.32(m，2H)，7.21-7.15(m，3H)，6.03(m，1H)，5.90(d，1H)，5.62(brs，1H)，5.26(t，1H)，5.03(brs，1H)，4.23(m，1H)，3.85-4.15(m，3H)，3.80(dd，2H)，3.55(m，1H)，1.21(d，3H)，1.13(d，6H)。
实施例25 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(V2)的制备
在200ml六甲基二硅氮烷(HMDS)中，加入45g 3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪，搅拌下加热回流50分钟，减压蒸去溶剂。充入N2，加入200ml二氯甲烷，搅拌，相继加入105g β-D-呋喃核糖-1-乙酸酯-2，3，5-三苯甲酸酯，25ml氯化锡(IV)，室温搅拌24小时。在反应混合物中加入1200ml乙酸乙酯和900ml水，用NaHCO3的饱和水溶液调节pH至8，滤出沉淀，分出有机层。将有机层依次用水和氯化钠饱和水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤，将滤液减压蒸干，用硅胶层析分离，用含10％甲醇的乙酸乙酯洗脱，收集所需组分，减压蒸干得到21.6g 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二(苯甲酰氧基)-5-(苯甲酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(III2)。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ：8.74(s，1H)，7.3-8.4(m，18H)，6.35(d，1H)，5.7-6.3(m，3H)，4.5-5.0(m，3H)。
将18g III2用150ml甲醇溶解，冰浴冷却，通入氨气至饱和。室温搅拌20小时，减压蒸去溶剂。在剩余物中加入50ml甲醇，搅拌，冷却，过滤，收集固体，得到7.4g 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(IV2)。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.43(brs，1H)，8.26(d，1H)，7.71(brs，1H)，7.56(d，1H)，5.91(d，1H)，5.63(brs，1H)，5.25(t，1H)，5.07(brs，1H)，3.86-4.14(m，3H)，3.78(dd，2H)。
在密封的反应器中加入7.3g(25.0mmol)干燥至恒重的IV2，125ml亚磷酸三乙酯，通入氮气，将反应混合物搅拌冷却至-15℃至-20℃。在氮气下滴加10ml含3.43g(30.0mmol)三氯氧磷的无水二氯甲烷溶液，保持反应混合物的温度-15℃至-20℃，持续搅拌至IV2反应完全。将反应混合物倒于50ml去离子水和50g冰的混合物中，冷却以保持温度15℃。加完后，将混合物温至20℃至25℃，搅拌45-60分钟。加入125ml二氯甲烷，剧烈搅拌30分钟，放置30分钟，分层，弃去二氯甲烷；再加入25ml二氯甲烷，剧烈搅拌30分钟，放置30分钟，分层，弃去二氯甲烷层。下层加入250mL无水乙醇，保持20℃至25℃，持续搅拌24小时，有固体析出，过滤，滤饼用无水乙醇洗涤，于68mmHg，40℃真空干燥，得V2 6.6克。
实施例26 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(特戊酰氧基甲基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I24)的制备
参照实施例2的方法，用特戊酸氯甲酯代替丙酸氯甲酯与V2反应，反应产物经硅胶柱层析分离，得到I24，产率23％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.43(brs，1H)，8.26(d，1H)，7.71(brs，1H)，7.56(d，1H)，5.91(d，1H)，5.63-5.70(m，5H)，5.25(t，1H)，5.07(brs，1H)，3.86-4.14(m，3H)，3.78(dd，2H)，1.20-1.23(m，18H)。
实施例27 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(双-(1-异丙基氧基羰基氧基-乙基氧基)-磷酰氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I25)的制备
参照实施例6的方法，用1-氯乙基异丙基碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与V2反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I25，产率21％。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.40(brs，1H)，8.27(d，1H)，7.72(brs，1H)，7.53(d，1H)，6.31-6.37(m，2H)，5.92(d，1H)，5.64(brs，1H)，5.14(brs，1H)，3.86-4.15(m，5H)，3.79(dd，2H)，1.41-1.46(m，6H)，1.20-1.24(m，12H)。
实施例28 4-[(2R，3S，4S，5R)-3，4-二羟基-5-(((S)-1-乙氧基羰基乙胺基-苯氧基-)-磷酰基氧甲基)-四氢-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-氨基甲酰基吡嗪(I26)及其异构体(I26-A和I26-B)的制备
在50ml无水四氢呋喃中，加入2.9g(10mmol)IV2、6.6克(80mmol)1-甲基咪唑，搅拌下滴加50ml含13g(50mmol)VII4的无水四氢呋喃溶液，加完后室温搅拌过夜。过滤，将滤液减压蒸干，将残留物用硅胶柱层析分离，用含5％甲醇的二氯甲烷洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得到I26 1.5g。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.41(brs，1H)，8.26(d，1H)，7.73(brs，1H)，7.33-7.37(m，2H)，7.55(d，1H)，7.16-7.22(m，3H)，6.05(m，1H)，5.92(d，1H)，5.64(brs，1H)，5.26(t，1H)，5.04(brs，1H)，4.29(m，1H)，3.85-4.15(m，3H)，3.53(m，2H)，3.82(dd，2H)1.20-1.28，(m，3H)，1.13-1.16(m，3H)。
将I26 1.0g溶于含12％乙醇的乙腈，用Diacel’s Chiralpak AS手性制备色谱分离，流动相为含12％乙醇的乙腈溶液，流速10ml/min，收集第一个组分，减压蒸干，得到I26-A 0.35g；
收集第二个组分，减压蒸干，得到I26-B 0.42克。
I26-A的1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.39(brs，1H)，8.26(d，1H)，7.72(brs，1H)，7.57(d，1H)，7.39-7.35(m，2H)，7.19-7.13(m，3H)，6.06(m，1H)，5.92(d，1H)，5.61(brs，1H)，5.26(t，1H)，5.08(brs，1H)，4.23(m，1H)，3.82-4.15(m，3H)，3.56(m，2H)，1.23(d，3H)，1.15(t，3H)。
I26-B的1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.42(brs，1H)，8.27(d，1H)，7.70(brs，1H)，7.56(d，1H)，7.37-7.34(m，2H)，7.20-7.15(m，3H)，6.01(m，1H)，5.94(d，1H)，5.63(brs，1H)，5.28(t，1H)，5.09(brs，1H)，4.21(m，1H)，3.85-4.15(m，3H)，3.82(dd，2H)，3.58(m，2H)，1.25(d，3H)，1.16(t，3H)。
实施例29目标化合物在体外肺匀浆中的转化率
采用高效液相色谱法测定目标化合物在肺匀浆中代谢生成类核苷单磷酸V的转化率。
29.1肺匀浆的制备
雄性SD大鼠，禁食16h，用0.6％戊巴比妥钠麻醉(0.65mL/100g)，解剖，取肺脏，洗净后，置匀浆器中，加入等体积0.15moL/L的KCl-PBS缓中溶液，以电动匀浆机制备匀浆，在4℃，9000g，离心30分钟，取上清备用。
29.2分析条件
分析柱：Discovery ODS，250×4.6mm I.D.，5μm，美国Supelco公司预柱：C18保护柱，4.0×3.0mm I.D.美国Phenomenex公司
柱温：24℃
流动相：甲醇-水-甲酸(20∶80∶0.5，v/v/v)
流速：0.5mL/min；进样量：20L
紫外检测波长：350nM
29.3测定方法
取肺匀浆200μL，加待测目标化合物，配制成相当于浓度为100μg/mL的样品，于37℃水浴中孵育，于不同时间点取样20μL，加入甲醇50μL，混匀，涡流3min，离心10min(9500r.p.m)，取上清液挥干，残余物用流动相溶解50μL溶解，进样20μL进行HPLC分析，记录色谱图，根据峰面积，以标准曲线法测定核苷单磷酸含量，计算释放率。
29.4测定结果
表1目标化合物在体外肺匀浆中的转化率
实施例30体外抗流感病毒活性及细胞毒性的评价
用CPE抑制试验评价目标化合物对流感病毒的抑制作用：将MDCK接种于96孔培养板中(5X105细胞/孔)，培养过夜。加入100μl/孔甲型流感病毒小鼠肺适应株A/PR/8/34的悬浮液(200TCID50)，放置60分钟。以无血清培养液洗，然后加入含有一定浓度待测化合物的EMEM培养液。于37℃，5％CO2的孵箱中培养3天。用10％福尔马林固定细胞，计量斑点的数量，与空白孔对比计算抑制率，测定IC50值。结果见表1。
用MTT法测定目标化合物的细胞毒性：将MDCK接种于96孔培养板中(5X104细胞/孔)，培养过夜。然后加入含有一定浓度待测化合物的培养液。于37℃，5％CO2的孵箱中培养3天。加入MTT至7.5mg/ml，继续培养2小时，弃去上清，加入含10％吐温X-100异丙醇，120μl/孔，再加入0.4μl/孔，用酶联仪测定540nm处的吸收，计算50％抑制浓度，即为CC50值。结果见表2。
表2目标化合物体外抗流感病毒活性及细胞毒性筛选结果
| 药物 | IC50(μM) | CC50(μM) | 药物 | IC50(μM) | CC50(μM) |
| T-705 | 1.7±0.8 | ＞100 | I15 | 12.9±3.3 | ＞100 |
| I1 | 0.08±0.09 | ＞100 | I16 | 13.4±7.4 | ＞100 |
| I2 | 0.26±0.27 | 85 | I17 | 0.05±0.05 | ＞100 |
| I3 | 0.32±0.18 | ＞100 | I18 | 0.09±0.07 | ＞100 |
| I4 | 0.67±0.44 | ＞100 | I19 | 0.10±0.06 | ＞100 |
| I5 | 0.16±0.20 | ＞100 | I20-A | 0.04±0.03 | ＞100 |
| I6 | 0.31±0.28 | ＞100 | I20-B | 0.14±0.11 | ＞100 |
| I7 | 1.2±1.6 | ＞100 | I21-A | 0.11±0.06 | ＞100 |
| I8 | 0.97±1.04 | ＞100 | I21-B | 0.09±0.07 | ＞100 |
| I9 | 0.47±0.62 | ＞100 | I22 | 0.91±0.77 | ＞100 |
| I10 | 12.9±13.3 | ＞100 | I23-A | 1.25±0.92 | ＞100 |
| I11 | 1.34±0.74 | ＞100 | I23-B | 1.34±0.74 | ＞100 |
| I12 | 0.37±0.45 | ＞100 | I24 | 1.07±0.45 | ＞100 |
| I13 | 0.49±0.59 | ＞100 | I25 | 1.90±0.95 | ＞100 |
| I14 | 0.80±0.75 | ＞100 | I26 | 1.80±0.87 | ＞100 |
实施例31嘌呤类碱基及核苷对抗病毒活性的影响
用CPE抑制试验评价目标化合物对流感病毒的抑制作用：将MDCK接种于96孔培养板中(5X105细胞/孔)，培养过夜。加入100μl/孔甲型流感病毒小鼠肺适应株A/PR/8/34的悬浮液(200TCID50)，放置60分钟。以无血清培养液洗，然后加入含有2倍IC50浓度的目标化合物或目标化合物+嘌呤或核苷(浓度为目标化合物IC50的10倍)的EMEM培养液。于37℃，5％CO2的孵箱中培养3天。用10％福尔马林固定细胞，计量斑点的数量，与空白孔对比计算抑制率。结果见表3。
表3嘌呤类碱基及核苷对抗病毒活性的影响
实施例32体内抗流感病毒活性的测定
将体重为18-22克的昆明种小鼠随机分组，每组10只。随机分为正常组、模型组和不同药物及不同剂量给药组。模型组和给药组动物以10LD50病毒量的甲型流感病毒小鼠肺适应株A/PR/8/34滴鼻感染，于感染后1小时分别灌胃给予溶剂、T-705及待测化合物，每天一次，连续给药5天。观察小鼠死亡情况，连续记录14天，考察存活率。
实验结果见表4：
表4目标化合物对流感病毒感染小鼠的保护作用
Claims (8)
1.式I代表的吡嗪衍生物或其非毒性药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，
其中，X代表H或卤原子；
R1、R2为OR3或NHCH(R4)COOR5；R1、R2相同或不同；
R3代表CH(R6)OC(O)R5、CH(R6)OC(O)OR5、芳香基或取代芳香基；
R4代表H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2OH，-CH(OH)CH3、-CH2SH、-CH2CH2SCH3、-CH2COOH、-CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-(CH2)3NHC(NH)NH2、或-(CH2)4NH2；
当R4非为H时，与R4相连的碳原子的绝对构型为R或S，或RS；
R5代表C1-C8的烷基、环烷基、或芳香基；
R6代表H或C1-C5的烷基；当R6非为H时，与R4相连的碳原子的绝对构型为R或S，或RS。
2.根据权利用要求1的式I代表的吡嗪衍生物或其非毒性药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，式I中X代表H或卤原子，R1、R2为OR3；R3代表CH(R6)OC(O)OR5，R5代表C1-C8的烷基、或环烷基，R6代表H或C1-C5的烷基；当R6非为H时，与R6相连的碳原子的绝对构型为R或S，或RS。
3.根据权利用要求1的式I代表的吡嗪衍生物或其非毒性药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，式I中X代表H或卤原子，R1、R2为OR3；R3代表CH(R6)OC(O)R5，R5代表C1-C8的烷基、或环烷基、或芳香基，R6代表H或C1-C5的烷基；当R6非为H时，与R6相连的碳原子的绝对构型为R或S，或RS。
4.根据权利用要求1的式I代表的吡嗪衍生物或其非毒性药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，式I中X代表H或卤原子，R1、R2为OR3，R3代表芳香基或取代芳香基。
5.根据权利用要求1的式I代表的吡嗪衍生物或其非毒性药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，式I中X代表H或卤原子，R1为OR3，R2为NHCH(R4)COOR5；R3代表芳香基或取代芳香基，R4代表H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2OH，-CH(OH)CH3、-CH2SH、-CH2CH2SCH3、-CH2COOH、-CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-(CH2)3NHC(NH)NH2、或-(CH2)4NH2，R5代表C1-C8的烷基、或环烷基；磷原子上的绝对构型为R或S，或RS；当R4非为H时，与R4相连的碳原子的绝对构型为R或S、或RS。
6.含有权利要求1～5所述的化合物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物作为活性成分以及适宜的赋型剂形成的药物组合物；这些药物组合物可以是溶液剂、片剂、胶囊或注射剂；这些药物组合物可以通过注射途径给药或口服给药。
7.权利要求1～5所述的化合物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，以及含有权利要求6所述的药物组合物在制备抗RNA病毒药物的用途。
8.权利要求1～5所述的化合物及其非毒性的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，以及含有权利要求6所述的药物组合物在制备抗RNA病毒药物的用途，所述的RNA病毒为流感病毒、丙型肝炎病毒、西尼罗病毒、黄热病病毒、西方马脑炎病毒、沙粒病毒、口蹄疫病毒、白令病毒、布尼亚病毒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210479584.6A CN103833812A (zh) | 2012-11-23 | 2012-11-23 | 吡嗪衍生物及其医药用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210479584.6A CN103833812A (zh) | 2012-11-23 | 2012-11-23 | 吡嗪衍生物及其医药用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103833812A true CN103833812A (zh) | 2014-06-04 |
Family
ID=50797741
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210479584.6A Pending CN103833812A (zh) | 2012-11-23 | 2012-11-23 | 吡嗪衍生物及其医药用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103833812A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112661801A (zh) * | 2020-12-18 | 2021-04-16 | 成都阿奇生物医药科技有限公司 | 一种核苷类似物及其氘代物及其制备方法和用途 |
| CN113444132A (zh) * | 2020-03-25 | 2021-09-28 | 药康众拓(江苏)医药科技有限公司 | 吡嗪甲酰胺核苷酸类似物或药学上可接受的盐、异构体、代谢产物、前药及制备方法和用途 |
| WO2023169119A1 (zh) * | 2022-03-10 | 2023-09-14 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 化合物的固体形式及其制备方法和用途 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004043371A (ja) * | 2002-07-12 | 2004-02-12 | Toyama Chem Co Ltd | 新規なピラジン誘導体またはその塩並びにそれらを含有する抗ウイルス剤 |
| CN101072570A (zh) * | 2004-09-24 | 2007-11-14 | 埃迪尼克斯(开曼)有限公司 | 用于治疗黄病毒、瘟病毒和肝炎病毒的方法和组合物 |
| CN100390153C (zh) * | 2000-02-16 | 2008-05-28 | 富山化学工业株式会社 | 用于制备吡嗪衍生物的中间体 |
| CN100434079C (zh) * | 2001-08-14 | 2008-11-19 | 富山化学工业株式会社 | 吡嗪核苷酸/吡嗪核苷类似物及其医药用途 |
-
2012
- 2012-11-23 CN CN201210479584.6A patent/CN103833812A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100390153C (zh) * | 2000-02-16 | 2008-05-28 | 富山化学工业株式会社 | 用于制备吡嗪衍生物的中间体 |
| CN100434079C (zh) * | 2001-08-14 | 2008-11-19 | 富山化学工业株式会社 | 吡嗪核苷酸/吡嗪核苷类似物及其医药用途 |
| JP2004043371A (ja) * | 2002-07-12 | 2004-02-12 | Toyama Chem Co Ltd | 新規なピラジン誘導体またはその塩並びにそれらを含有する抗ウイルス剤 |
| CN101072570A (zh) * | 2004-09-24 | 2007-11-14 | 埃迪尼克斯(开曼)有限公司 | 用于治疗黄病毒、瘟病毒和肝炎病毒的方法和组合物 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113444132A (zh) * | 2020-03-25 | 2021-09-28 | 药康众拓(江苏)医药科技有限公司 | 吡嗪甲酰胺核苷酸类似物或药学上可接受的盐、异构体、代谢产物、前药及制备方法和用途 |
| CN112661801A (zh) * | 2020-12-18 | 2021-04-16 | 成都阿奇生物医药科技有限公司 | 一种核苷类似物及其氘代物及其制备方法和用途 |
| CN112661801B (zh) * | 2020-12-18 | 2025-01-17 | 成都阿奇生物医药科技有限公司 | 一种核苷类似物及其氘代物及其制备方法和用途 |
| WO2023169119A1 (zh) * | 2022-03-10 | 2023-09-14 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 化合物的固体形式及其制备方法和用途 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7561870B2 (ja) | ヌクレオシド類似体またはヌクレオシド類似体を含有する併用製剤の抗ウイルスにおける使用 | |
| CN104151360B (zh) | 磷酸/膦酸衍生物及其医药用途 | |
| US6875751B2 (en) | 3′-prodrugs of 2′-deoxy-β-L-nucleosides | |
| EP1296995B1 (en) | 3'-prodrugs of 2'-deoxy-beta-l-nucleosides | |
| CN1066713C (zh) | 茋衍生物和含有它们的药物组合物 | |
| CN104903334A (zh) | 一种替诺福韦前药及其在医药上的应用 | |
| AU2013266393A1 (en) | D-amino acid compounds for liver disease | |
| AU2001266927A1 (en) | 3'-prodrugs of 2'-deoxy-beta-L-nucleosides | |
| ZA200400925B (en) | Novel virus proliferation inhibition/virucidal method and novel pyradine nucleotide/pyradine nucleoside analogue | |
| CN101475594A (zh) | 肝靶向抗病毒前体药物环状磷酸酯及其应用 | |
| CN103833812A (zh) | 吡嗪衍生物及其医药用途 | |
| CA2660636C (en) | Nucleosides, drugs containing these and use thereof | |
| EP3097076B1 (en) | Novel cyp-eicosanoid derivatives | |
| CN109422710B (zh) | 一种索非布韦氟内酯中间体的制备方法 | |
| CN103420980A (zh) | 达比加群衍生物 | |
| JPH02160769A (ja) | 新規な２′―ハロメチリデン、２′―エテニリデン及び２′―エチニルアデノシン誘導体類 | |
| EP3083650B1 (en) | Novel ferrocenyl compounds | |
| CN101293899B (zh) | 无环核苷膦酸酯衍生物及其医药用途 | |
| CN107820499A (zh) | 新的抗病毒化合物、其制备工艺、以及其用于治疗病毒感染的用途 | |
| CN112661801B (zh) | 一种核苷类似物及其氘代物及其制备方法和用途 | |
| CN105461773B (zh) | 索非布韦的制备方法及其中间体 | |
| CN103664951B (zh) | 一种治疗慢性粒细胞白血病药物的制备方法 | |
| CN108948084B (zh) | 替诺福韦双-l-氨基酸酯及其制备方法 | |
| CA3143495A1 (en) | 2,4,7-substituted-7-deaza-2'-deoxy-2'-fluoroarabinosyl nucleoside and nucleotide pro-drugs and uses thereof | |
| CN102757435B (zh) | 一种反式-3-吲哚基-4-吲哚并二氮杂卓环庚烷基-2,5-吡咯烷-2,5-二酮化合物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140604 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |