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CN103703138A - 采用脂肪酶自β-内酯产生L-肉碱的方法 - Google Patents

采用脂肪酶自β-内酯产生L-肉碱的方法 Download PDF

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CN103703138A
CN103703138A CN201280036473.6A CN201280036473A CN103703138A CN 103703138 A CN103703138 A CN 103703138A CN 201280036473 A CN201280036473 A CN 201280036473A CN 103703138 A CN103703138 A CN 103703138A
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halo
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hydroxybutyrate
aforementioned
lipase
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M·阿维
E·克莱格拉夫
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Lonza AG
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Lonza AG
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Abstract

本发明的主题是产生L-肉碱的方法，其中使β-内酯转变为L-肉碱，其中方法包括使β-内酯酶促转变为(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯，所述β-内酯是4-(卤代甲基)氧杂环丁烷-2-酮。

Description

采用脂肪酶自β-内酯产生L-肉碱的方法
【技术领域】
本发明涉及产生L-肉碱的方法。
【背景技术】
肉碱（维生素Bt；3-羟基-4-三甲基铵基-丁酸盐）是自氨基酸赖氨酸及甲硫氨酸生物合成的季铵化合物。在活细胞中，需要其在脂质破裂期间将脂肪酸自胞质溶胶运输至线粒体，用于产生代谢能量。其被用作营养物补充物。肉碱以2种立体异构体存在。有生物学活性的形式是L-肉碱，而其对映异构体，D-肉碱，无生物学活性。当以工业方法产生L-肉碱时，期望以高纯度产生有生物学活性的L-型。
对于L-肉碱的工业生产描述了各种方法。已知微生物方法，其中直接由细菌产生L-肉碱。在其他方法中，由有机合成产生外消旋体，并随后分离为对映异构体。
而且，已尝试直接自手性前体合成L-肉碱。一组潜在前体是手性环状内酯。由于在原理上知道获得手性内酯的方法，L-肉碱在内酯环的水解后是可利用的。
US5,473,104公开了自(S)-3-羟基丁内酯制备L-肉碱的方法。该方法是2-步骤方法，其中在第1步骤中将(S)-3-羟基丁内酯转变为对应羟基-活化的内酯，而维持环结构。在第2步骤中，打开活化的内酯环，并用三甲基胺导入三甲基铵基团。总之，反应相对复杂，因为需要用苛刻的化学品活化中间体。
CH680 588A5公开了自β-内酯前体产生L-肉碱的方法，其中在2-步骤过程中将手性2-氧杂环丁烷酮转变为L-肉碱。在第1步骤中，使4-(氯甲基)-2-氧杂环丁烷酮经历水解步骤，其中打开环，并获得4-氯-3-羟基丁酸。在随后步骤中，用三甲基胺将酸转变为L-肉碱。但是，手性β-内酯的产生需要相对复杂的重金属催化剂，且产率常常不足。
Nelson&Spencer（J.Org.Chem.2000,65,1227-1230）公开了由酶法拆分用脂肪酶自β-内酯外消旋体获得对映体富集的β-内酯的方法。使用的底物是各种烷基-及芳基-β-内酯外消旋体。如总结于表1，产率仅对有限数量的反应是足够的。对映立体选择性强烈依赖于β-内酯的取代基，且小取代基甲基的对映体产率是非常低的（表1）。反应需要有机溶剂，诸如苄基醇，其由于环境原因，对于工业应用是不期望的。反应时间相对长（通常是72小时）。
US2006/0046286公开由酶促酯化自β-内酯获得手性β-丁内酯及3-羟基羧酸酯的方法。至于Nelson&Spencer，推荐使用脂肪酶。反应需要有机溶剂，诸如甲苯，及约16小时的相对长的反应时间。底物是β-丁内酯。在多数实验中，底物不是外消旋体，而是有光学活性的(R)-β-丁内酯。特定反应通常以增强的对映体纯度产生(R)-β-丁内酯，然而(S)-3-羟基丁酸酯，如果有，仅以相对低量获得（实施例1，6，7）。
由于对映体纯L-肉碱是重要工业产物，期望提供进一步有效的产生方法。特别是，期望提供以相对简单方式、以高总产率及对映体产率产生L-肉碱的方法。
【发明要解决的技术问题】
本发明要解决的技术问题是提供产生L-肉碱的方法，其克服上述的缺点。特别是，技术问题是提供有效及简单产生L-肉碱的方法。
总产率以及手性产率应高。方法步骤数应相对低，且方法应不需要复杂的设备。总之，方法应具有高的原子经济性，且应是成本及人力有效的。使用的化学品应是容易可利用的，且应不是太昂贵的。
本发明要解决的另一问题是提供温和的方法，其避免苛刻的条件及苛刻的化学品。应避免影响环境的化学品，诸如有机溶剂或重金属，或可影响工人健康的那些，诸如芳族溶剂。应避免虽然可作为痕量杂质存在于产物中，但必需去除的重金属催化剂。特别是，应使用不包含贵金属，诸如铂的昂贵的催化剂。总体能量输入应低。特别是，反应应在相对低温及经相对低反应时间实施。
【发明内容】
意外地，由权利要求的方法解决了本发明要解决的技术问题。贯穿说明书公开了进一步的本发明的实施方式。
本发明的主题是产生L-肉碱的方法，其中使β-内酯转变为L-肉碱，其中方法包括使β-内酯酶促转变为(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯，所述β-内酯是4-(卤代甲基)氧杂环丁烷-2-酮。
所述肉碱是L-肉碱（(R)-肉碱，左卡尼汀）。L-肉碱是肉碱的有生理学活性的立体异构体。酶促转变的反应产物是(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或其酯，依赖于是在水性介质或在醇中实施酶促转变。此中间产物可在随后反应步骤中转变为L-肉碱。如对于对应L-肉碱，酸或酯的手性碳构型是（R）。由此，可通过由三甲基铵基利用亲核取代来取代中间体的卤素原子，而手性保持未受影响来简单实施随后转变为L-肉碱。
在本发明的具体实施方式中，β-内酯是4-(氯甲基)氧杂环丁烷-2-酮，4-(溴甲基)氧杂环丁烷-2-酮或4-(碘甲基)氧杂环丁烷-2-酮。优选使用4-(氯甲基)氧杂环丁烷-2-酮。
优选地，酶对于β-内酯的(R)-异构体是立体选择性的。换言之，优选酶唯独地，或至少主要地，将(R)-内酯转变为对应(R)-酸或酸酯。由此，当底物是β-内酯外消旋体，或至少包含(S)-β-内酯及(R)-内酯时，酶选择性地将(R)-β-内酯转变为对应(R)-酸或酸酯，然而(S)-β-内酯保持未受影响或基本上未受影响。由此，在反应混合物中保持及蓄积对应(S)-β-内酯。由此，在产物中富集(R)-酸或酸酯。而且，会在产物中富集(S)-β-内酯。二种化合物可由于它们在水及有机溶剂中的不同溶解度而彼此分离。当自β-内酯外消旋体起始时，理想酶促反应会产生50%Mol-%(R)-酸或酸酯（100%ee的光学纯度）及50Mol-%的残留的(S)-β-内酯的混合物，随后会将其从混合物除去。
在本发明的优选的实施方式中，β-内酯是外消旋体。优选地，获得对映体过量的(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯。对映体过量（关于(S)-4-卤代-3-羟基丁酸或酯）优选是高于80%，更优选高于90%、95%或99%对映体过量（ee）。
酶促转变在溶剂的存在下实施。优选地，溶剂包含水。水可以1-相系统或2-相系统存在。在水存在下，获得(R)-4-卤代-3-羟基丁酸。酶促转变则是酶促水解。酶促水解的结果，获得(R)-4-氯-3-羟基丁酸，(R)-4-溴-3-羟基丁酸或(R)-4-碘-3-羟基丁酸。
优选地，溶剂仅是水。当使用水作为溶剂时，初始反应混合物是溶液或悬浮液。在此实施方式中，反应混合物优选是1-相系统，其中未观察到水相及液体有机相之间的清楚的相分离。
在本发明的另一优选的实施方式中，在2相系统中实施酶促转变，其中在水相中富集(R)-4-卤代-3-羟基丁酸。在2-相系统中，在有机相中富集相对非-极性的β-内酯底物，而在水相中富集离子酸产物。由此在结束反应之后，相可被分离，且水相已包含相对纯产物。有机相可包含任何溶剂，其中β-内酯是高度可溶性的，而酸的可溶性差。与此相比，水性介质中的1-相系统总体需要更少有机溶剂，由此由于经济及环境原因是有利的。
溶剂的实例包括烃，诸如脂肪族烃诸如戊烷，己烷，庚烷，辛烷，癸烷及环己烷，芳族烃诸如甲苯及二甲苯；卤化的烃诸如二氯甲烷，1,2-二氯乙烷，氯仿，四氯化碳及邻-二氯苯；醚诸如二乙基醚，二异丙基醚，叔-丁基甲基醚，二甲氧基乙烷，乙二醇二乙基醚，四氢呋喃，1,4-二噁烷及1,3-二氧杂环戊烷；酰胺诸如甲酰胺；亚砜诸如二甲基亚砜。
在本发明的另一实施方式中，溶剂是醇，优选包含1～5个碳原子的醇，更优选甲醇、乙醇或丙醇。当在醇中及在水缺失下实施酶促转变时，产物是线性酯。随后，当酯转变为L-肉碱时，其是被去-酯化的。
在本发明的优选的实施方式中，在酶促转变之后，从溶液除去残留的β-内酯。优选地，通过用溶剂萃取来除去残留的β-内酯。例如，当在一-相系统中实施溶液时，残留的β-内酯可用酯，诸如乙酸乙酯，或用己烷萃取。优选地，实施用相对低量的溶剂的多次萃取。
在优选的实施方式中，酶是水解酶（酶学委员会编号EC3）。水解酶自底物由水解产生2种产物。优选地，水解酶是酯酶（EC3.1）或肽酶（EC3.4）。酯酶是将酯水解为酸及醇的水解酶，诸如脂肪酶。肽酶（蛋白酶）是进行蛋白质水解（即，水解肽键）的酶。
在本发明的优选的实施方式中，酶是脂肪酶。脂肪酶对于(R)-β-内酯是选择性的。优选地，脂肪酶来自真菌、酵母或细菌。此意为所述生物是脂肪酶的来源。但是，脂肪酶可为人工的、尤其重组体脂肪酶。该脂肪酶是可商购的，例如购自公司Novozymes、Amano Enzyme或Nagase。
优选地，酶是三酰甘油脂肪酶。该3.1.1.3类酶的脂肪酶催化甘油三酯水解为脂肪酸及甘油。
来自真菌、酵母或细菌的脂肪酶常常作为无活性前体体内合成。这些前体经处理及分泌。该脂肪酶是一般细胞外脂肪酶。通过切割下N-端肽，诸如信号肽或前肽产生成熟蛋白。根据本发明，脂肪酶优选是成熟脂肪酶。换言之，其优选是有活性的形式。本发明的方法优选是体外方法。
脂肪酶可包含氨基酸Ser-His-Asp的催化性三联体。例如，该脂肪酶见于酵母，诸如假丝酵母属（Candida）。
在本发明的优选的实施方式中，脂肪酶来自假丝酵母属（Candida），假单胞菌属（Pseudomonas），曲霉属（Aspergillus），芽孢杆菌属（Bacillus）或嗜热丝孢菌属（Thermomyces）。脂肪酶可为该脂肪酶的衍生物，优选具有至少75%、优选至少90%的序列同一性的衍生物。
优选地，脂肪酶来自假丝酵母属（Candida），假单胞菌属（Pseudomonas）或曲霉属（Aspergillus）。更优选地，脂肪酶来自洋葱假单胞菌（Pseudomonas cepacia）（洋葱伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cepacia））、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）或南极假丝酵母（Candida antarctica）。脂肪酶可为该脂肪酶的衍生物，优选具有至少75%、优选至少90%的序列同一性的衍生物。
衍生物可由氨基酸取代、缺失、插入或修饰获得。优选地，衍生物由重组DNA修饰方法获得。该重组脂肪酶可相比它们的天然前体具有更高稳定性及效率。
尤其优选的是来自洋葱假单胞菌的脂肪酶和/或来自南极假丝酵母的脂肪酶B。发现这些酶以高的总产率及对映体产率提供期望的产物。
在高度优选的实施方式中，酶是SEQ ID NO:1的自洋葱假单胞菌的脂肪酶（UniProt标识号P22088[45-364];Joergensen et al.,J.Bacteriol.1991;173,p559-567）。成熟蛋白是具有320个氨基酸的蛋白质。其源于包含信号肽及前肽的364个氨基酸的前体。
在另一优选的实施方式中，酶是具有不同于SEQ ID NO:1的氨基酸序列的来自洋葱假单胞菌的脂肪酶。洋葱假单胞菌（P.cepacia）包含几种脂肪酶，其具有与SEQ ID NO:1具有高同源性的氨基酸序列。例如，酶可为洋葱假单胞菌碱性脂肪酶（NCBI Acc.No:ABX71757.1;Dalal et al.,J.Biotechnol.Appl.Biochem.2008;51,p23-31）。此碱性脂肪酶与SEQ ID NO:1的脂肪酶具有约98%序列同一性。酶也可为洋葱假单胞菌脂肪酶（Genbank:ABN09945.1;Yanget al.,J.Mol.Catal.,B Enzym.2007;45,p91-96）。此脂肪酶与SEQ IDNO:1的脂肪酶具有约92%序列同一性。
SEQ ID NO:2的自南极假丝酵母的脂肪酶B（UniProt标识符P41365[26-342]）是具有317个氨基酸的蛋白质。成熟蛋白源于包含信号肽及前肽的342个氨基酸的前体。
优选地，衍生物是SEQ ID NO:1的自洋葱假单胞菌的脂肪酶和/或SEQ ID NO:2的自南极假丝酵母的脂肪酶B的衍生物，优选与SEQID NO:1和/或SEQ ID NO:2具有至少75%、优选至少90%的序列同一性的衍生物。如本文所用，序列同一性优选由BLAST根据标准参数测定。可由氨基酸取代、缺失、插入或修饰获得的该脂肪酶的衍生物，及获得该衍生物的方法，为本领域所知。例如，具有增加的催化性活性的来自洋葱假单胞菌的脂肪酶B的衍生物及它们的产生方法公开于Puech-Guenot et al.,J.Biomol.Screen.2008;13(1),p72-79。具有增加的催化性活性的来自南极假丝酵母的脂肪酶B的衍生物及它们的产生方法公开于Qian et al.,J.Mol.Biol.2009;393;p191-201。
在本发明的优选的实施方式中，在0℃和50℃之间、优选20℃和40℃之间、特别约25℃或约30℃之间的温度实施酶促转变。考虑到使用的具体酶来调整温度。
在本发明的优选的实施方式中，在包含0.1～50重量%β-内酯，更优选0.1和10重量%之间或0.5和3重量%之间的β-内酯的水溶液中实施酶促转变。
在适当的缓冲剂中实施反应。使缓冲剂适应于使用的具体酶。通常，pH会是大致中性，例如5和9之间，或7和8之间。如果必需，可在反应期间通过添加碱或酸来使pH保持稳定。
在优选的实施方式中，反应混合物由缓冲剂，酶及β-内酯组成。可添加添加剂，例如增强酶的稳定性或更新的那些，诸如盐，金属离子或辅因子。总之，反应需要仅少量的化学品，且可以相对简单方式在温和的温度实施。
当获得期望的量的酸或酸酯时，终止反应。反应可通过去除酶，例如通过过滤终止。当使用β-内酯外消旋体作为底物及高度选择性的酶时，达50%的β-内酯可转变为对应(R)-酸或(R)-酸酯。在去除及分离之后，残留的(S)-β-内酯可用于其他反应。
反应时间可在1～50小时之间，优选2～20小时之间。发现用一些酶可在10小时之内、特别在8小时之内达到有效更新。
用于实施发明的开环反应的单-卤化的β-内酯为本领域所知。考虑到酶的立体选择性，β-内酯外消旋体可用于本发明的方法。单-卤化的β-内酯是可例如由对应环氧化物的低压羰基化获得的，如公开于US2007/0213524A1，或起始于不饱和的酸使用Lewis酸及次氯酸盐，如描述于Lopez-Lopez，Jose；Tetrahedron Letters2007，48(10)，1749-1752。
在本发明的优选的实施方式中，在催化剂存在下由［2+2］环加成反应获得手性4-(卤代甲基)氧杂环丁烷-2-酮。在本发明的特定实施方式中，使用手性β-内酯。此可增加在本发明的反应中的对映体产率。手性β-内酯可在手性催化剂的存在下由乙烯酮与醛X-CH2-CHO的［2+2］环加成获得，其中X选自Cl、Br及I。乙烯酮（ketene或ethenone，式C2H2O）是无色气体，其由于分子中的2个相邻双键而是高度反应性的。
在本发明的优选的实施方式中，使酶促转变中获得的4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯随后用三甲基胺（TMA）转变为L-肉碱。优选地，卤素原子在亲核取代反应中被三甲基胺基取代。可使TMA与β-内酯在碱存在下接触。碱可在使β-内酯与TMA接触之后添加。
在本发明的方法的优选的实施方式中，β-内酯在2-步骤方法中转变为L-肉碱。在第1步骤中，使4-(氯甲基)-2-氧杂环丁烷酮经历酶促水解，其中β-内酯环被打开，并获得4-氯-3-羟基丁酸。在随后步骤中，用三甲基胺将所述酸、酯转变为L-肉碱。
本发明的合成L-肉碱的例示方法显示于以下方案1。方法包括乙烯酮及式Cl-CH2-CHO的醛的［2+2］环加成。使得到的β-内酯外消旋体1经历酶促环切割反应而产生对应(R)-酸2a（在水作为溶剂中）或(R)-酯2b（在醇中）。然后用TMA使酸2a或酯2b转变为L-肉碱。
Figure BDA0000460536440000081
【方案1：L-肉碱的合成】
在本发明的优选的实施方式中，使TMA在过程中再循环。由于TMA是可以气体形式利用的，可使其通过反应流体，收集及再循环。在反应培养基中，溶解的TMA可在反应结束之后从混合物分离（例如通过蒸馏），并再导入过程中。优选地，在循环过程中将TMA再导入反应通路。TMA是以纯气体形式（Fluka Chemicals）或10～40wt.%水溶液形式可商购的。反应混合物中的TMA量可在1和3当量之间，优选在1和2.5当量之间。但是，TMA的量及过量相比金属氢氧化物的量是欠关键的，因为其可在反应期间再循环及再导入反应室。
本发明的另一主题是产生(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯的方法，其中所述方法包括使β-内酯，其是4-(卤代甲基)氧杂环丁烷-2-酮，酶促转变为(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯。这些反应产物是对于产生L-肉碱有价值的中间体。它们可在简单亲核取代中转变为L-肉碱，其中手性保持未受影响。此外，它们可用于其他有机化合物或L-肉碱的衍生物的合成。
在本发明的优选的实施方式中，在酶促转变中，(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯的总产率在基于β-内酯总初始量的40%及50%之间，和/或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯的对映体纯度是至少90%、更优选至少95%。
【发明效果】
本发明的方法解决了本发明要解决的问题。所述方法相对简单且经济，且需要仅少量的过程步骤。由此避免了副反应，且总产率及对映体产率高。由于酶促转变可使用酶法拆分，可自β-内酯外消旋体起始。由此，使用昂贵的手性反应物不是必需的。
反应条件是温和的，因为无需苛刻的化学品，诸如重金属催化剂，或高量的有机溶剂。方法需要相对低量的加热能量。原理上，仅酶是作为添加剂必需的，其可容易去除，且通常是非-危险的。由此，中间体尤其可应用于产生食品添加剂L-肉碱。
【实施例】
在1-相水性系统中实施酶法拆分。底物是4-(氯甲基)氧杂环丁烷-2-酮外消旋体，其转变为由以下方案2例证的(R)-4-氯-3-羟基丁酸及残留的(S)-β-内酯的混合物。
Figure BDA0000460536440000101
【方案2：根据实施例的β-内酯外消旋体的酶法拆分】
【分析学】
在Lipodex E柱上由气相层析（GC）监测反应。在Lipodex E柱上由GC分析4-(氯甲基)-2-氧杂环丁烷酮1。使用手性、荧光试剂衍生4-氯-3-羟基丁酸2。由HPLC使用ODS-柱及荧光检测分析反应混合物。
【实施例1～5】
向12.5mg酶在5.0mL磷酸钾缓冲液中的溶液或悬浮液（0.1M，pH7.5）添加50mg4-(氯甲基)-2-氧杂环丁烷酮1，将反应混合物于30℃搅拌。用0.5M KOH将pH连续调整至7.5。以规则间隔，取200μL样品，用400μL乙酸乙酯萃取，过滤及由手性GC分析。在(R)-对映异构体完全水解之后，将酶离心掉，并将反应混合物用5.0mL乙酸乙酯萃取两次。作为水溶液获得(R)-4-氯-3-羟基丁酸2。用不同脂肪酶实施反应，如总结于下表1。转变及对映体纯度显示于表1。以高对映体纯度获得(S)-1及(R)-2二者。于30℃的反应时间仅在4～8小时之间。
Figure BDA0000460536440000111
表1：实施例1～5的条件及结果的总结。
Figure IDA0000460536480000011
Figure IDA0000460536480000021

Claims (15)

1.产生L-肉碱的方法，其中使β-内酯转变为L-肉碱，所述方法包括使β-内酯酶促转变为(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯，所述β-内酯是4-(卤代甲基)氧杂环丁烷-2-酮。
2.前述权利要求之至少一项的方法，其中β-内酯是外消旋体。
3.权利要求2的方法，其中获得对映体过量的(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯。
4.前述权利要求之至少一项的方法，其中在水性介质中实施酶促转变，并获得(R)-4-卤代-3-羟基丁酸。
5.前述权利要求之至少一项的方法，其中在两相溶液中实施酶促转变，其中在水相中富集(R)-4-卤代-3-羟基丁酸。
6.前述权利要求之至少一项的方法，其中，在酶促转变之后，从溶液除去残留的β-内酯。
7.权利要求6的方法，其中通过用溶剂萃取来除去残留的β-内酯。
8.前述权利要求之至少一项的方法，其中所述酶是脂肪酶。
9.前述权利要求之至少一项的方法，其中所述脂肪酶来自假丝酵母属（Candida）、假单胞菌属（Pseudomonas）、曲霉属（Aspergillus）、芽孢杆菌属（Bacillus）或嗜热丝孢菌属（Thermomyces），或具有至少75%、优选至少90%的序列同一性的该脂肪酶的衍生物。
10.前述权利要求之至少一项的方法，其中脂肪酶来自洋葱假单胞菌（Pseudomonas cepacia）、荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）、南极假丝酵母（Candida antarctica），脂肪酶优选具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列，或具有至少75%、优选至少90%的序列同一性的该脂肪酶的衍生物。
11.前述权利要求之至少一项的方法，其中在0℃和50℃之间，优选在20℃和40℃之间的温度实施酶促转变，和/或其中在包含0.1～10重量%β-内酯的水溶液中实施酶促转变。
12.前述权利要求之至少一项的方法，其中在乙烯酮和式X-CH2-CHO的醛的［2+2］环加成中的在前步骤中合成β-内酯，其中X选自Cl、Br及I。
13.前述权利要求之至少一项的方法，其中用三甲基胺使酶促转变中获得的4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯转变为L-肉碱。
14.前述权利要求之至少一项的方法，其中酶促转变中(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯的总产率在基于β-内酯总初始量的40%及50%之间，和/或其中(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯的对映体纯度是至少90%。
15.产生(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯的方法，其中方法包括β-内酯酶促转变为(R)-4-卤代-3-羟基丁酸或(R)-4-卤代-3-羟基丁酸酯，所述β-内酯是4-(卤代甲基)氧杂环丁烷-2-酮。
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