CN103404370B

CN103404370B - 用火山石培养食用菌菌种的方法

Info

Publication number: CN103404370B
Application number: CN201310331516.XA
Authority: CN
Inventors: 贺新生; 袁晓红; 侯大斌; 谭娟
Original assignee: Southwest University of Science and Technology
Current assignee: Sichuan Weihong Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2013-07-31
Filing date: 2013-07-31
Publication date: 2016-01-20
Anticipated expiration: 2033-07-31
Also published as: CN103404370A

Abstract

本发明用火山石培养食用菌菌种的方法，以火山石作基质，添加营养液和粉状辅料，培养食用菌菌种，如原种和栽培种，菌丝体不仅生长在颗粒状的火山石表面，其内部的空隙中也充满菌丝，菌丝体生长健壮，菌种保存时间长达1年以上，接种过程中不怕挤压和敲击，接种后成活率高，接种污染率低，子实体产量高。

Description

用火山石培养食用菌菌种的方法

技术领域

该发明属于微生物技术领域，具体而言，涉及一种用天然多孔材料火山石培养食用菌菌种的方法。

背景技术

食用菌的原种和栽培种的培养基质大多采用天然的植物材料做基质，如棉子壳、木屑/木粒、玉米芯、草粉、谷物、竹片/节等，接种过程中容易使块状的菌丝体破碎，接种后存活率不高。

天然的植物材料做菌种基质，接种块容易被压碎，容易导致接种污染，菌丝体存活率下降，菌种容易失水老化，培养基在容器内容易失水，菌丝体容易老化，储存时间很有限等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的食用菌菌种培养方法，具体而言，其包括如下步骤：

(1)制备营养液：制备培养液的原料包括天然材料，碳源，氮源以及水，制备步骤包括将天然材料加水煮沸15～30分钟，过滤后滤液加入碳源和氮源；

(2)将火山石浸泡在营养液中2～6分钟，将火山石捞出装瓶，瓶内补充营养液，封口，灭菌，接种，培养，培养过程中每2～3天震荡菌种瓶10～30秒，菌丝长满火山石表面后，获得可使用的食用菌菌种。

在本发明的另一个实施方式中，所述的方法包括如下步骤：

(1)制备固体培养基：制备培养液的原料包括天然材料，碳源，氮源，矿质元素以及水，制备步骤包括所有固体原料制成细粉，加入水混合拌匀；

(2)将火山石与固体培养基混合均匀，使得每颗火山石颗粒表面均匀布满一薄层的辅助固体培养基，将火山石捞出装瓶，瓶内补充营养液，封口，灭菌，接种，培养，培养过程中每2～3天震荡菌种瓶10～30秒，菌丝长满火山石表面后，获得可使用的食用菌菌种。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的天然材料选自麸皮，或米糠，或小麦粒，或玉米粒，或木屑，或松针，或马铃薯，或干麦芽，或鲜麦芽中的一种或者多种的组合。

在本发明的另一个优选实施方式中，所述的碳源选自葡萄糖或蔗糖中的一种或者两种的组合。

在本发明的另一个优选实施方式中，所述的氮源选自蛋白胨，或酵母粉，或玉米粉，或黄豆粉中的一种或者多种的组合。

在本发明的另一个优选实施方式中，火山石为粒径介于0.5～3.0cm之间的火山石颗粒。

在本发明的另一个优选实施方式中，菌种选自袋栽香菇，段木栽培的香菇、木耳、银耳，栽培天麻或猪苓的蜜环菌，覆土栽培的双孢蘑菇、巴西蘑菇、大球盖菇、羊肚菌、鸡腿菇等各种食用菌菌种或普通微生物菌种。

在本发明的另一个优选实施方式中，每1～2粒火山石菌种接种1个接种点。

在本发明的另一个优选实施方式中，所述的天然材料∶碳源∶氮源∶水的质量比介于70～80∶10～30∶0.5～25∶1000，本领域的技术人员也可以根据具体的碳源和氮源类型通过常规实验确定最佳的配比。

本发明利用天然的多孔材料火山石作基质，添加营养液和粉状辅料，培养食用菌菌种，如母种、原种和栽培种，菌丝体不仅生长在颗粒状的火山石表面，其内部的空隙中也充满菌丝，菌丝体生长健壮，菌种保存时间长达1年以上，接种过程中不怕挤压和敲击，接种后成活率高，接种污染率低，子实体产量高。

具体实施方式

实施例1：

根据需要选择颗粒大小为0.5～3.0cm的火山石颗粒，火山石的孔隙度、颜色、比重等不限，颗粒形状以近球体形为佳，其他形状的也可以直接使用。

此方案用于制作各种食用菌的母种、原种、栽培种。母种选择直径为0.1-0.5cm的火山石颗粒，原种选择直径0.5-1.5cm的火山石颗粒，栽培种选择直径1.0-3.0cm的火山石颗粒。长期保藏的试管母种选择0.2-0.5cm的火山石颗粒，装入试管的高度为试管长度的1/2，液体高度为1-2cm。

营养液配方：天然材料：麸皮20～80g，或米糠100～150g，或小麦粒50～100g，或玉米粒50～100g，或木屑200～300g，或松针20～100g，或马铃薯200g，或干麦芽20～50g，或鲜麦芽100～200g；碳源：葡萄糖10～30g，或蔗糖10～30g；氮源：蛋白胨0.5～2.5g，或酵母粉1～3g，或玉米粉20～50g，或黄豆粉10～25g；水1000mL，pH自然。

营养液制作方法：将20～80g麸皮加水1200mL，搅拌均匀，加热，煮沸20～30min，煮沸后继续搅拌，防止煮糊。时间到后停止加热，冷却到80℃以下，在漏斗内用双层纱布过滤，用冷水100～200mL冲洗。取滤液1000mL，加入相应的20g葡萄糖、1g蛋白胨，搅拌均匀，成为营养液，备用。其他原料的操作方法相同。

试管选择15×150mm、18×180mm、20×200mm或更大规格的玻璃或塑料试管，菌种瓶选择用250mL、500mL的玻璃输液瓶，或500mL、750mL、850mL、1200mL等的玻璃瓶或聚丙烯瓶。试管用普通棉花塞口，菌种瓶用双层聚乙烯膜或聚丙烯膜封口。

将火山石直接浸泡在营养液中，火山石与营养液的体积比为1∶0.5～1.0，浸泡时间为3～5min，捞起火山石，直接装入试管或菌种瓶，装瓶体积按照需要确定，在瓶内补充1～15cm高的营养液。用棉花、或双层聚丙烯、或聚乙烯薄膜加1根橡皮筋封口，121℃高压灭菌20～40分钟，或100℃灭菌g～12小时；自然降温到60℃以下，从灭菌锅中取出。灭菌后的试管或菌种瓶，放在接种箱内或超净工作台上，紫外灯照射30～50分钟，冷却到常温状态下，点燃酒精灯，无菌条件下进行接种。23～28℃避光恒温条件下培养，培养过程中每2～3天震荡试管或菌种瓶10～30秒。一般10-50天菌丝体长满全部培养基，继续培养3-7天，获得可使用的食用菌菌种。

实施例2：

此方案用于制作各种食用菌的原种、栽培种。

火山石：选择直径为1-3cm大小的火山石颗粒。

辅助固体培养基配方：木屑粉，或草粉，或棉子壳粉，80％～90％；麸皮20％～25％，或米糠20％～25％，或玉米粉5％～g％，或黄豆粉5％～8％；石膏粉1％；碳酸钙粉1％。上述材料需要过10～20目的细筛，取细粉做原料。

辅助固体培养基制作方法：按配方称取各种原料，将干料拌匀2～3次，加清水，料水比为1∶1.1～1.4，再拌匀2～3次，备用。

食用菌菌种制作方法：火山石与辅助固体培养基的比例为体积比的1∶0.2～0.3计，将干的火山石和加水拌匀后的辅助固体培养基混合均匀，使每颗火山石颗粒表面均匀布满一层0.5～2.0mm厚的辅助固体培养基，装瓶或装袋，装料量不限，根据实际需要确定。用双层聚丙烯、或聚乙烯薄膜加1根橡皮筋封口，121℃高压灭菌40～60分钟，或100℃灭菌8～12小时；自然降温到60℃以下，从灭菌锅中取出。灭菌后的菌种瓶或菌袋，放在接种箱内或超净工作台上，紫外灯照射30～50分钟，冷却到常温状态下，点燃酒精灯，无菌条件下进行接种。23～28℃避光恒温条件下培养菌丝体，20-40天菌丝体长满全部培养基，继续培养3-7天，获得可使用的食用菌菌种。

菌种瓶选择500mL、750mL、850mL、1200mL等的玻璃瓶或聚丙烯瓶，菌袋选择直径为10-15cm，长度为25-30cm的聚丙烯菌袋，一般使用双层菌袋，菌袋口部套上通用的口圈，再用双层薄膜封口。

实施例3：

方案2中的辅助固体培养基加方案1中的营养液拌料，料水比为1∶1.1～1.4。再与火山石拌和，火山石与辅助固体培养基体积比为1∶0.2～0.3，使每颗火山石颗粒表面均匀布满一层1～2mm厚的辅助固体培养基，装瓶或装袋，装料量不限，根据实际需要确定。封瓶口或袋口，灭菌，接种，培养，菌丝体满袋或满瓶后获得可使用的食用菌菌种。

实施例4：

采用方案1、2、3方法生产的食用菌菌种，作为母种接入原种瓶时，每瓶接入1-2粒火山石菌种；原种接入栽培种的菌种瓶或袋内时，每个待接的栽培种瓶或袋内接入1～2粒长满菌丝的火山石原种，用培养料覆盖0.5～1cm即可。火山石菌种作为栽培种接入栽培菌袋内、打孔或砍口的菌棒上、室内外床栽的菌床上，每个接种点可以接入1～2粒长满菌丝的火山石栽培种，用栽培的培养料覆盖0.5～1cm即可。

实施例5：

采用方案1、2、3方法生产的食用菌菌种，保存在常温、避光、空气相对湿度低于70％的条件下，可以存放6～12个月。长时间保存的菌种继续接入新的无菌培养料，萌发率高于95％，菌丝体生长速度和子实体生产性能与原始菌株无显著差异。

采用方案1、2、3方法生产的菌种除常见的食用菌菌种，如香菇、平菇、双孢蘑菇、巴西蘑菇、茶树菇、猴头菇、炭角菌、羊肚菌、块菌、鸡腿菇、木耳、银耳、金耳、灰树花、竹荪、灵芝、蜜环菌、金针菇、杏鲍菇、海鲜菇、大球盖菇，等等；还可以生产其他的所有的真菌菌种、细菌菌种或2类菌混合的菌种，如炭轮菌、多孔菌类、白僵菌、绿僵菌、各种霉菌、酵母菌、产酸菌群、乳酸菌、醋酸菌、双歧杆菌、芽孢杆菌、固氮菌、光合细菌、解磷细菌，等等。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。

Claims

1.一种食用菌菌种培养方法，其包括如下步骤：

制备营养液：制备营养液的原料包括天然材料，碳源，氮源以及水，所述天然材料∶碳源∶氮源∶水的质量比为70～80∶10～30∶0.5～25∶1000，制备步骤包括将天然材料加水煮沸15～30分钟，过滤后滤液加入碳源和氮源；

制备固体培养基：固体培养基包括营养液与固体原料，固体原料包括天然材料，碳源，氮源，钙源，将固体原料制成细粉，加入营养液混合拌匀；

将火山石与固体培养基混合均匀，使得每颗火山石颗粒表面均匀布满一薄层的固体培养基，将火山石捞出装瓶，瓶内补充营养液，封口，灭菌，接种，培养，培养过程中每2～3天震荡菌种瓶10～30秒，菌丝长满火山石表面后，获得可使用的食用菌菌种；

所述的天然材料选自麸皮，或米糠，或小麦粒，或玉米粒，或木屑，或松针，或马铃薯，或干麦芽，或鲜麦芽中的一种或者多种的组合；

所述的碳源选自葡萄糖或蔗糖中的一种或者两种的组合；

所述的氮源选自蛋白胨，或酵母粉，或玉米粉，或黄豆粉中的一种或者多种的组合；

所述火山石为粒径介于0.5～3.0cm之间的火山石颗粒。