CN102526710A - 一种治疗猪病毒病蛋白质组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗猪病毒病蛋白质组合物，是将猪白细胞干扰素和重组猪干扰素诱导蛋白BST-2制备成一种治疗猪病毒病蛋白质组合物，用于猪病毒性腹泻、猪瘟、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征等猪的病毒性疾病的治疗和预防，还可作为猪瘟弱毒疫苗和猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗的免疫调节剂使用。
Description
(一)技术领域
本发明涉及一种治疗猪病毒病蛋白质组合物，属于兽药生产领域。
（二）背景技术
干扰素（interferon）是目前最有效的抗病毒药物。由病毒或其他干扰素诱生剂刺激细胞所产生的一类分泌性蛋白，是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），属于一种细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。干扰素是一种广谱抗病毒剂，有种属特异性，对病毒没有选择性。干扰素并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。
干扰素具有广谱的抗病毒作用，它能通过抑制病毒的增殖，使病毒增殖量减少、受感染细胞损伤程度降低。病毒感染细胞后导致干扰素的产生并随被感染细胞的死亡、崩解而释出，之后向附近扩散，随血液循环至全身。因干扰素是通过作用于靶细胞，激活靶细胞内的基因而发挥作用的，故其具有广谱抗病毒作用。
干扰素诱导蛋白是干扰素与宿主细胞上的受体结合后，诱导宿主细胞产生的一组蛋白质。其中一些成分如BST-2具有抗病毒功能。BST-2又叫tetherin(暂无汉语名)，是近几年发现的一种抗病毒蛋白质，主要由I型干扰素诱导宿主细胞所分泌，由180 个氨基酸组成，分子量30～36 kD，能够把新感染的囊膜病毒束缚于细胞膜表面。BST-2是一种单层二型跨膜蛋白，结构比较特殊。N端有个跨膜锚，随后是跨膜结构域，C端有个糖磷脂酰肌醇（GPI）脂质锚，两者之间靠一个胞外的卷曲螺旋的结构连接。胞外有两个N-糖基化位点，三个半胱氨酸残基，整个胞外部分组成170?长杆状结构。研究表明,人工表达对BST-2在细胞内外均有抗病毒作用。
干扰素仅能保护没有受病毒感染的细胞不受病毒感染，本专利利用干扰素和干扰素诱导蛋白制备的治疗猪病毒病蛋白质组合物，可用于治疗已被病毒感染的病猪,其效果比常用化学抗病毒药物显著。
（三）发明内容:
为了解决上述问题，本发明提供了一种治疗猪病毒病蛋白质组合物，目的是组成一种抗病毒复合物，还可以作为免疫佐剂使用，增强疫苗免疫反应。
一种治疗猪病毒病蛋白质组合物，是利用市售猪白细胞干扰素，与猪干扰素诱导蛋白BST-2按特定比例混合，构成一种治疗猪病毒病的兽药；其制备方法如下：
1）按照参考文献（Tinghong Zhang,Zhengying Dong,Lei Wang, Weishan Chang .Eukaryotic expression of Porcine BST-2 gene and identification of biological activity of BST-2.Remote Sensing, Environment and Transportation Engineering (RSETE), 2011 International Conference on ,2011,7573–7576）生产纯化重组得到重组猪干扰素诱导蛋白BST-2(该技术为国内首创)，用生理盐水将纯化的重组猪干扰素诱导蛋白BST-2配制成浓度为2～4mg/ml的溶液，作为A液。
2）将市售猪白细胞干扰素用生理盐水配制成浓度为1000～2000IU/ml的溶液，作为B液。
3）将A液与B液按1:1（V/V）混合，制备成为治疗猪病毒病蛋白质药物组合物， -20℃冷冻备用；治疗时每只猪每天的使用量为0.1～0.2ml/kg，每天一次。
利用本发明制备的治疗猪病毒病蛋白质药物组合物，可用于猪病毒性腹泻、猪瘟、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征等猪的病毒性疾病的治疗和预防。
（四）具体实施方式
实施例1 一种治疗猪病毒病蛋白质组合物的制备
1） 重组猪干扰素诱导蛋白BST-2的生产：
按照文献（Tinghong Zhang, Zhengying Dong,Lei Wang, Weishan Chang .Eukaryotic expression of Porcine BST-2 gene and identification of biological activity of BST-2.Remote Sensing,Environment and Transportation Engineering (RSETE), 2011 International Conference on,2011,7573–7576）的方法提取猪PK15细胞总RNA,通过RT-PCR扩增BST-2基因，与表达质粒重组，转染HEK293细胞，表达24～48小时后，收获细胞，利用细胞裂解液裂解HEK293细胞，10000转/min离心后，取上清液作为BST-2粗提液。利用His亲合层析柱纯化重组BST-2蛋白，将纯化的重组猪干扰素诱导蛋白BST-2用生理盐水配制成浓度为2～4mg/ml的溶液，作为A液。
2）猪白细胞干扰素的配制：
将市售猪白细胞干扰素用生理盐水配制成浓度为1000～2000IU/ml的溶液，作为B液。
3）将上述A液与B液按1:1（V/V）混合，制备成为抗病毒蛋白质药物组合物；-20℃冷冻备用；治疗时每只猪每天的使用量为0.1～0.2ml/kg。
利用本发明制备的抗病毒蛋白质药物组合物，可用于猪病毒性腹泻、猪瘟、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征等猪的病毒性疾病的治疗和预防。
实施例2 临床应用
1 治疗猪病毒性腹泻：对临床上已确诊为猪病毒性腹泻的猪群，每只猪每天按0.1～0.2ml/kg饮用抗病毒蛋白质药物组合物，每天1次，连用1～3天。治疗1次，显效率可达80%以上，治疗二次显效率可达85%以上，治疗三次治愈可达90%以上。
2 治疗猪瘟：对于临床上已确诊为猪瘟的猪群，每只猪按每天0.1～0.2ml/kg饮用抗病毒蛋白质药物组合物，每天1次，连用3～5天。治疗3次，显效率可达60%以上，治疗5次显效率可达75%以上。
3 治疗猪繁殖与呼吸综合征：对于临床上已确诊为猪繁殖与呼吸综合征的猪群，每只猪每天按0.1～0.2ml/kg饮用抗病毒蛋白质药物组合物，每天1次，连用3～5天。治疗3次，显效率可达60%以上，治疗5次显效率可达70%以上。
实施例3 作为免疫调节剂使用
1、提高猪瘟疫苗免疫效果：在接种猪瘟弱毒疫苗后两天，给被免疫猪每只猪每天按0.1～0.2ml/kg饮用抗病毒蛋白质药物组合物1次，连用1～2天，可延长猪瘟疫苗的免疫保护期2～4周。
2、提高猪繁殖与呼吸综合征疫苗：在接种猪繁殖与呼吸综合征疫苗的同时，给被免疫猪每只猪每天按0.1～0.2ml/kg饮用抗病毒蛋白质药物组合物1次，连用1～2天可延长猪瘟疫苗的免疫保护期2～4周。
Claims (2)
1.一种治疗猪病毒病蛋白质组合物，是将猪白细胞干扰素与猪干扰素诱导蛋白BST-2混合而成，其特征在于制备方法如下：
1）将猪干扰素诱导蛋白BST-2用生理盐水配制成浓度为2～4mg/ml的溶液，作为A液；
2）将市售猪白细胞干扰素用生理盐水配制成浓度为1000～2000IU/ml的溶液，作为B液；
3）将A液与B液按体积比1:1混合，制备成治疗猪病毒病蛋白质药物组合物， -20℃冷冻备用。
2. 如权利要求1所述的一种治疗猪病毒病蛋白质组合物在治疗猪病毒性腹泻、猪瘟、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征中的应用；使用时每只猪每日的使用量为0.1～0.2ml/kg，每日1次。
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