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CN102137669A - 包含γ分泌酶调节剂的药物组合物 - Google Patents

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CN102137669A
CN102137669A CN2009801316297A CN200980131629A CN102137669A CN 102137669 A CN102137669 A CN 102137669A CN 2009801316297 A CN2009801316297 A CN 2009801316297A CN 200980131629 A CN200980131629 A CN 200980131629A CN 102137669 A CN102137669 A CN 102137669A
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alkyl
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butyl
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CN2009801316297A
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O·阿西克格茨
J·阿克梅德
B·德尔肯
C·弗勒梅尔
A·戈德
F·P·D·荣特
R·孔策
R·普雷斯纳
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Fresenius Medical Care Deutschland GmbH
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Abstract

本发明涉及包含γ分泌酶调节剂的药物组合物以及γ分泌酶调节剂用于治疗肾脏疾病、癌症、神经变性疾病和有关疾病的用途。

Description

包含γ分泌酶调节剂的药物组合物
本发明涉及包含γ分泌酶调节剂的药物组合物以及γ分泌酶调节剂用于治疗肾脏疾病、癌症、神经变性疾病和有关疾病的用途。
肾小球负责血液的超滤，并确保保留必需的血浆蛋白。属于牵涉超滤过程的肾小球过滤细胞的足细胞的功能障碍在折磨越来越多患者的肾病的发展中起着重要作用。
Notch信号传导途径包括跨膜受体家族。在人中，存在四种Notch受体和五种配体(Notch配体的Jagged家族和δ家族)。配体的结合使Notch受体对金属蛋白酶介导的和γ-分泌酶介导的蛋白酶解裂解敏感。Notch途径在足细胞发育中是至关重要的。激活足细胞中的Notch途径诱导了足细胞损失和肾小球衰竭(glomerular failure)。γ分泌酶抑制剂可防止中毒性足细胞损害(toxic podocyte damage)模型中的疾病发生，并且还有益地作为确立的肾小球过滤屏障衰退中的治疗剂[T.Niranjan等人，The Noth pathway in podocytes plays a role in the development of glomerular disease(足细胞中的Notch途径在肾小球疾病的发展中起一定作用).Nature Medicine，第14卷，第3期，第290-298页，2008年3月；M.Kretzler和L.Allred，Notch inhibition reverses kidney failure(Notch抑制逆转肾衰竭)，Nature Medicine，第14卷，第3期，第246-247页]。
此外，Notch信号传导途径还在多发性骨髓瘤(MM)细胞生长中起一定作用，用γ分泌酶抑制剂抑制Notch信号传导提供了下调Notch活性和抑制MM细胞生长的工具[Shih Ie M，Wang TL.Notch signaling，gamma-secretase inhibitors，and cancer therapy(Notch信号传导、γ-分泌酶抑制剂和癌症治疗).Cancer Res.2007；67：1879-1882]。
γ分泌酶抑制剂还有用于治疗神经变性疾病，如阿尔茨海默病(Morbus Alzheimer)[US 6,756,511；US 6,683,091]。
因此，本发明的目的是提供新颖的药物组合物，其适用于改良γ分泌酶的活性，因此可以用于治疗至少部分经由γ分泌酶活性引起的疾病，例如肾脏疾病、癌症和神经变性疾病。
已通过提供根据本发明的药物组合物来实现所述目的。令人惊讶地发现，存在于本发明药物组合物中的化合物用作γ分泌酶的调节剂。尤其，这些化合物具有作为γ分泌酶抑制剂的活性。
因此，根据其一个方面，本发明涉及药物组合物，其包含一种或多种通式I的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BPA00001310630200021
其中
n、m相互独立地各自表示0或1；
Figure BPA00001310630200022
表示5、6或7元碳环，其中所述碳环是部分不饱和的或芳族的，且所述碳环含有0、1或2个氮原子作为环成员；
L1选自C1-6-亚烷基(alkylen)；C(＝O)；C(＝O)-N(H)；N(H)-C(＝O)；N(H)-S(＝O)2和S(＝O)2-N(H)；
L2选自S；O；C1-6亚烷基-C(＝O)；S-C1-6亚烷基-C(＝O)；O-C1-6亚烷基-C(＝O)；C(＝O)-C1-6-亚烷基；C(＝O)-C1-6-亚烷基-S；C(＝O)-C1-6-亚烷基-O；C1-6-亚烷基-C(＝O)-N(H)；S-C1-6-亚烷基-C(＝O)-N(H)；O-C1-6-亚烷基-C(＝O)-N(H)；C(＝O)-N(H)-C1-6-亚烷基；C(＝O)-N(H)-C1-6-亚烷基-S；C(＝O)-N(H)-C1-6-亚烷基-O；C1-6-亚烷基-N(H)-C(＝O)；S-C1-6-亚烷基-N(H)-C(＝O)；O-C1- 6-亚烷基-N(H)-C(＝O)；N(H)-C(＝O)-C1-6亚烷基；N(H)-C(＝O)-C1-6亚烷基-S；N(H)-C(＝O)-C1-6亚烷基-O；C1-6-亚烷基-N(H)-S(＝O)2；S-C1-6-亚烷基-N(H)-S(＝O)2；O-C1-6-亚烷基-N(H)-S(＝O)2；N(H)-S(＝O)2-C1-6-亚烷基；N(H)-S(＝O)2-C1-6-亚烷基-S；N(H)-S(＝O)2-C1-6-亚烷基-O；C1-6亚烷基-S(＝O)2-N(H)；S-C1-6-亚烷基-S(＝O)2-N(H)；O-C1-6-亚烷基-S(＝O)2-N(H)；S(＝O)2-N(H)-C1-6-亚烷基；S(＝O)2-N(H)-C1-6-亚烷基-S；S(＝O)2-N(H)-C1-6-亚烷基-O；
条件是，L1和L2连接于该碳环的连位(vicinal)环成员上；
R1、R2各自选自-H；卤素；C1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；-O-C1-6烷基；-S-C1-6烷基；C1-6-卤代烷基；-O-C1-6卤代烷基；-S-C1-6-卤代烷基；-OH；-SH；-CN；-NO2和-NRaRb，其中Ra和Rb独立地是H或C1-6烷基；
条件是，R1和R2中的至少一个表示H；
R3、R4各自选自-H；卤素；C1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；-O-C1-6烷基；-S-C1-6烷基；C1-6-卤代烷基；-O-C1-6卤代烷基；-S-C1-6-卤代烷基；-OH；-SH；-CN；-NO2和-NRaRb，其中Ra和Rb独立地是H或C1-6烷基；
条件是，R3和R4中的至少一个不表示H；
R5、R6相互独立地各自选自-H；＝O；卤素；C1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；-O-C1-6烷基；-S-C1-6烷基；C1-6-卤代烷基；-O-C1-6卤代烷基；-S-C1-6-卤代烷基；-OH；-SH；-CN；-NO2和-NRaRb，其中Ra和Rb独立地是H或C1-6烷基。
根据本发明，术语卤素表示-F、-Cl、-Br和-I，优选是-F、-Cl和-Br，更优选是-F和-Cl。
本文所用的表述C1-6-烷基表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链饱和碳链。此类烷基结构部分(moieties)的实例是甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；仲丁基；叔丁基；正戊基；异戊基；新戊基和己基。
本文所用的表述C2-6-烯基表示具有2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链不饱和碳链。所述烯基结构部分具有至少一个C＝C-双键。此类烯基结构部分的实例是乙烯基、丙-1-烯基和烯丙基。
本文所用的表述C2-6-炔基表示具有2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链不饱和碳链。所述炔基结构部分具有至少一个C≡C-叁键。此类炔基结构部分的实例是-C≡C-和-C≡C-CH3。
本文所用的表述C1-6-卤代烷基表示被一个或多个(例如1、2、3、4或5个)可相同或不同的卤素原子取代的具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链饱和碳链。此类卤代烷基结构部分的实例是-CF3和-CF2-CF3。
本文所用的表述C1-6-亚烷基表示连接两个结构部分的直链或支链饱和碳链。此类亚烷基结构部分的实例是-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-、-CH(CH2CH3)-、-CH2-(CH2)2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH(CH3)-CH(CH3)-、-CH(CH2CH3)-CH2-、-C(CH3)2-CH2-、-CH(CH2CH2CH3)-、-C(CH3)(CH2CH3)-、-CH2-(CH2)3-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH(CH3)-、-CH(CH3)-CH(CH3)-CH2-、-C(CH3)2-CH2-CH2-、-CH2-C(CH3)2-CH2-、-CH(CH2CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH2CH3)-CH2-、-C(CH3)2-CH(CH3)-、-CH(CH2CH3)-CH(CH3)-、-C(CH3)(CH2CH3)-CH2-、-CH(CH2CH2CH3)-CH2-、-C(CH2CH2CH3)-CH2-、-CH(CH2CH2CH2CH3)-、-C(CH3)(CH2CH2CH3)-、-C(CH2CH3)2-和-CH2-(CH2)4-CH2-。通常优选的此类亚烷基结构部分的实例是-CH2-、-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-。
在其另一个方面，本发明涉及药物组合物，其包含一种或多种通式I的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BPA00001310630200041
其中
n、m相互独立地各自表示0或1；
Figure BPA00001310630200042
表示5、6或7元碳环，其中所述碳环是部分不饱和的或芳族的，且所述碳环含有0、1或2个氮原子作为环成员；
L1选自C1-6-亚烷基；N(H)-S(＝O)2和S(＝O)2-N(H)；
L2选自S；O；C1-6亚烷基-C(＝O)；S-C1-6亚烷基-C(＝O)；O-C1-6亚烷基-C(＝O)；C(＝O)-C1-6-亚烷基；C(＝O)-C1-6-亚烷基-S；C(＝O)-C1-6-亚烷基-O；C1-6-亚烷基-C(＝O)-N(H)；S-C1-6-亚烷基-C(＝O)-N(H)；O-C1-6-亚烷基-C(＝O)-N(H)；C(＝O)-N(H)-C1-6-亚烷基；C(＝O)-N(H)-C1-6-亚烷基-S；C(＝O)-N(H)-C1-6-亚烷基-O；C1-6-亚烷基-N(H)-C(＝O)；S-C1-6-亚烷基-N(H)-C(＝O)；O-C1- 6-亚烷基-N(H)-C(＝O)；N(H)-C(＝O)-C1-6亚烷基；N(H)-C(＝O)-C1-6亚烷基-S；N(H)-C(＝O)-C1-6亚烷基-O；C1-6-亚烷基-N(H)-S(＝O)2；S-C1-6-亚烷基-N(H)-S(＝O)2；O-C1-6-亚烷基-N(H)-S(＝O)2；N(H)-S(＝O)2-C1-6-亚烷基；N(H)-S(＝O)2-C1-6-亚烷基-S；N(H)-S(＝O)2-C1-6-亚烷基-O；C1-6-亚烷基-S(＝O)2-N(H)；S-C1-6-亚烷基-S(＝O)2-N(H)；O-C1-6-亚烷基-S(＝O)2-N(H)；S(＝O)2-N(H)-C1-6-亚烷基；S(＝O)2-N(H)-C1-6-亚烷基-S；S(＝O)2-N(H)-C1-6-亚烷基-O；
条件是，L1和L2连接于该碳环的连位环成员上；
R1、R2各自选自-H；卤素；C1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；-O-C1-6烷基；-S-C1-6烷基；C1-6-卤代烷基；-O-C1-6卤代烷基；-S-C1-6-卤代烷基；-OH；-SH；-CN；-NO2和-NRaRb，其中Ra和Rb独立地是H或C1-6烷基；
条件是，R1和R2中的至少一个表示H；
R3、R4各自选自-H；卤素；C1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；-O-C1-6烷基；-S-C1-6烷基；C1-6-卤代烷基；-O-C1-6卤代烷基；-S-C1-6-卤代烷基；-OH；-SH；-CN；-NO2和-NRaRb，其中Ra和Rb独立地是H或C1-6烷基；
条件是，R3和R4中的至少一个不表示H；
R5、R6相互独立地各自选自-H；＝O；卤素；C1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；-O-C1-6烷基；-S-C1-6烷基；C1-6-卤代烷基；-O-C1-6卤代烷基；-S-C1-6-卤代烷基；-OH；-SH；-CN；-NO2和-NRaRb，其中Ra和Rb独立地是H或C1-6烷基。
在优选的实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含一种或多种通式IA的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BPA00001310630200061
其中
X、Y相互独立地各自表示碳原子或氮原子；
Figure BPA00001310630200062
表示6元碳环，其中所述碳环是部分不饱和的或芳族的；以及
m、n、L1、L2、R1、R2、R3、R4、R5、R6具有如上所述的定义。
优选地，X和Y不都表示碳原子。
在另一个优选实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含一种或多种通式IB的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BPA00001310630200063
其中L1、L2、R1、R2、R3和R4具有如上所述的含义。
在一个特别优选的实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含一种或多种通式IC的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BPA00001310630200064
其中
L2表示S或O；
R1、R2各自选自-H；-F；-Cl；-Br；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；仲丁基；异丁基；叔丁基；甲氧基；乙氧基；-CF3；-OCF3；-SCF3；-OH和-CN；
条件是，R1和R2中的至少一个表示H；以及
R3表示-F、-Cl、-Br、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、-CF3、-OCF3、-SCF3、-OH和-CN。
在前面提到的式IC化合物中，可优选R1和R2中的一个表示H，而R1和R2中的另一个选自可能的取代基的名单(the list of)。
在另一个优选实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含一种或多种通式ID的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BPA00001310630200071
其中L1、L2、R1、R2、R3和R4具有如上所述的相同含义。
在又一个特别优选的实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含一种或多种通式IE的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BPA00001310630200072
其中
R7选自H；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；仲丁基和叔丁基；
R3、R4各自选自-H；-F；-Cl；-Br；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；仲丁基；异丁基；叔丁基；甲氧基；乙氧基；-CF3；-OCF3；-SCF3；-OH和-CN；
条件是，R3和R4中的一个表示H，而R3和R4中的另一个不表示H。
在式I、IA、IB、IC和ID的化合物的任何种中，可优选一个苯环上的一个或多个取代基(例如R1、R2)可使该环具有极性特性，而另一个苯基环上的取代基(例如R3、R4)可使该环具有非极性特性，或反之亦然。用于诱导极性特性的合适取代基是例如卤素；-O-C1-6烷基；-S-C1-6烷基；C1-6-卤代烷基；-O-C1-6卤代烷基；-S-C1-6-卤代烷基；-OH；-SH；-CN；-NO2和-NRaRb，其中Ra和Rb独立地是H或C1-6烷基。尤其，此类取代基是卤素(如-F和-Cl)和C1-6-卤代烷基(例如-CF3)。用于诱导所述环具有非极性特性的合适取代基是例如C1-6烷基；C2-6烯基和C2-6炔基。
在最优选的实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含一种或多种选自以下的化合物：
[1]N-(2-(4-氯苯氧基)吡啶-3-基)-4-异丙基苯磺酰胺，
[2]N-(2-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-基)-2-(三氟甲基)苯磺酰胺，
[3]4-氯-N-(2-(对甲苯基硫基(p-tolythio))吡啶-3-基)苯磺酰胺，
[4]2-(6-氨基-4-氧代-1-苯乙基-1，4-二氢嘧啶-2-基硫基(ylthio))-N-(3-氯苯基)丙酰胺，以及
[5]2-(6-氨基-4-氧代-1-苯乙基-1，4-二氢嘧啶-2-基硫基(ylthio))-N-(4-氯苯基)乙酰胺。
当根据本发明使用的化合物具有至少一个不对称中心(例如其中R7不是氢的式IE化合物)时，则它们可以作为对映体存在。当化合物具有两个或多个不对称中心时，则它们可以另外作为非对映体存在。所有此类异构体和它们的任意比例的混合物也包括在本发明范围内。用于获得此类立体异构体和它们的混合物的方法是本领域技术人员所熟知的。根据本发明使用的化合物还可以形成溶剂合物，如水合物，它们也在本发明的范围内。
本领域技术人员理解，本发明使用的一些化合物在性质上是酸性的，例如具有酚式羟基的那些化合物。这些化合物可以形成药学上可接受的盐。此类盐的实例可以包括钠盐、钾盐、钙盐或与胺(如烷基胺)的盐。某些碱性化合物也形成药学上可接受的盐，例如酸加成盐。例如，吡啶氮(pyrido-nitrogen)原子可以与强酸形成盐，而具有碱性取代基(如氨基)的化合物也与较弱的酸形成盐。用于形成盐的合适酸的实例包括但不限于盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸和本领域技术人员熟知的其它无机酸和羧酸。用于获得盐的方法也是本领域技术人员所熟知的。
药物组合物还可以包含一种或多种治疗某种疾病时可能有用的另外活性剂。例如，当治疗癌症(尤其多发性骨髓瘤)时，其它的化疗药物可以与本发明所用的γ分泌酶抑制剂联合使用。此类化疗药物的实例包括烷化剂，如美法仑；或蛋白酶体抑制剂，例如硼替佐米(bortezomib)。
式I、IA、IB、IC、ID和IE的化合物可以商购，例如从Maybridge，Acros Organics(Geel，比利时)或Ambinter SARL(法国巴黎)商购，或者可以通过本领域技术人员熟知的方法(例如在US 2007/0037794；El-Sabbagh等人，Bollettino Chimico Farmaceutico 1995，134，80-84和WO 2005/037779中公开的方法或类似方法)来制备。
本发明的药物组合物尤其有用于治疗肾脏疾病，其中所述肾脏疾病可优选选自肾衰竭；足细胞损害；肾小球疾病，尤其局灶性肾小球硬化症或节段性肾小球硬化症；和糖尿病肾病。
另外，本发明的药物组合物尤其有用于治疗癌症，其中所述癌症可以优选选自肾癌、多发性骨髓瘤、白血病和结肠癌。
此外，根据本发明的药物组合物还有用于治疗神经变性疾病，其中所述神经变性疾病可以优选选自阿尔茨海默氏病(Morbus Alzheimer)、与β-淀粉样蛋白沉积有关的疾病、与年龄有关的痴呆症、脑淀粉样变、系统性淀粉样变、遗传性脑出血伴淀粉样变(hereditary cerebral hemorrhage with amyloidosis)、唐氏综合征和缺血性中风。
本发明的又一个方面涉及一种或多种本文所述化合物在制备药物中的用途。
在其又一个方面中，本发明涉及一种或多种本文所述化合物在制备治疗肾脏疾病的药物中的用途，其中所述肾脏疾病可优选选自肾衰竭；足细胞损害；肾小球疾病，尤其局灶性肾小球硬化症或节段性肾小球硬化症；以及糖尿病肾病。
在其又一个方面中，本发明涉及一种或多种本文所述化合物在制备治疗癌症的药物中的用途，其中所述癌症可优选选自肾癌、多发性骨髓瘤、白血病和结肠癌。
在又一个方面中，本发明涉及一种或多种本文所述化合物在制备治疗神经变性疾病的药物中的用途，阿尔茨海默氏病、与β-淀粉样蛋白沉积有关的疾病、与年龄有关的痴呆症、脑淀粉样变、系统性淀粉样变、遗传性脑出血伴淀粉样变、唐氏综合征和缺血性中风。
本发明的又一个方面涉及调节(例如抑制)需要此类治疗的患者中的γ分泌酶的方法，其包括对所述患者给予有效量的一种或多种本文所述化合物。
本发明的又一个方面涉及抑制需要此类治疗的患者中的β-淀粉样蛋白沉积的方法，其包括对所述患者给予有效量的一种或多种本文所述化合物。
本发明的又一个方面涉及治疗需要此类治疗的患者中的肾脏疾病的方法，其包括对所述患者给予有效量的一种或多种本文所述化合物。所述肾脏疾病可优选选自以上给出的组。
本发明的又一个方面涉及治疗需要此类治疗的患者中的癌症的方法，其包括对所述患者给予有效量的一种或多种本文所述化合物。所述癌症可优选选自以上给出的组。
本发明的又一个方面涉及治疗需要此类治疗的患者中的神经变性疾病的方法，其包括对所述患者给予有效量的一种或多种本文所述化合物。所述神经变性疾病可优选选自以上给出的组。
本文所用的术语患者包括人和哺乳动物。
Notch信号传导途径和γ分泌酶在许多器官和组织(例如在眼睛、肾脏、胰腺、前列腺、乳房、肝脏、胆囊和粘膜中)中起一定作用。可将本发明的药物组合物配制成特异性靶向某些组织和/或器官。
应理解，本文所用的术语药物组合物包含本文所述化合物中一种或多种作为药物。所述术语进一步包含本文所述化合物中的一种或多种与一种或多种另外活性剂和/或一种或多种药学上可接受的载体。
除了本文所述化合物中的一种或多种以外，根据本发明的药物组合物(药物)可包含一种或多种药学上可接受的载体。此类药学上可接受的载体可以是固体、半固体或者液体。
可经由局部(topical/local)或胃肠外给药来施用本发明药物组合物。
可优选将本发明药物制剂配制用于胃肠外给药，从而包括静脉内、动脉内、肌内、皮下、真皮内、鞘内、腹腔内、透皮、透粘膜(舌下、口含)和吸入给药。胃肠外给药包括经由注射和输液给药。
固体形式制剂包括散剂；多颗粒剂(multiparticulates)，如小丸(pellets)、颗粒(granules)或晶体(crystals)；片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。
散剂、多颗粒剂、丸剂和片剂可包含约1到约99％(优选5到约95％)活性化合物。合适的固体载体是本领域已知的，例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖或乳糖。片剂、丸剂、散剂、多颗粒剂、扁囊剂和胶囊剂可用作适用于口服给药的固体剂型。口服剂型还可以延迟方式释放一种或多种活性物质。
本发明药物组合物还可以为脂质体制剂的形式，优选用于口服或胃肠外给药。本发明药物组合物还可以为靶向器官和/或组织的制剂的形式，优选用于口服或胃肠外给药。例如，所述制剂可以是用于胃肠外给药的靶向器官的脂质体制剂。
药学上可接受的载体的实例和制备各种组合物的方法可以在A.Gennaro(编)，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pa中找到。
液体形式制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。作为实例，可以提到用于胃肠外注射的水或水-丙二醇溶液，或者添加甜味剂和不透明剂的口服溶液剂、混悬剂和乳剂(addition of sweeteners and opacifiers for oral solutions，suspensions and emulsions)。液体形式制剂还可以包括用于鼻内给药的溶液剂。
适用于吸入的气溶胶制剂可包括溶液和粉末形式的固体，其可以与药学上可接受的载体(例如惰性压缩气体，如氮气)组合。
还包括有意在使用前不久转化为用于口服或胃肠外给药的液体形式制剂的固体形式制剂。此类液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。还可以透皮递送本发明组合物。该透皮组合物可例如采取乳膏剂、洗剂、气溶胶和/或乳剂的形式，并且可以如本领域用于该目的的常规做法，包含在基质型或贮库型透皮贴剂中。
还可以皮下递送本发明组合物。
优选地，本发明药物组合物是例如在单位剂型(unit dosage form)中的药物。在此类剂型中，组合物被细分为含有适量(例如获得所需目的的有效量)活性化合物的合适大小的单位剂量(unit doses)。
根据特定的应用，单位剂量中的活性化合物的量可以从约0.01mg到约1000mg，优选从约0.01mg到约750mg，更优选从约0.01到约500mg变化或调节。
所采用的实际剂量可根据患者的需求和所治疗的病症的严重性而变化。用于特定情况的恰当剂量方案的确定在本领域技术人员的能力范围内。为了方便起见，可将总日剂量分割，并根据需要在一天期间分批给药。
根据主治临床医生的判断来调节根据本发明使用的化合物和/或其药学上可接受的盐的给药量和给药频率，所述判断考虑诸如患者的年龄、状况和(身材)尺寸以及所治疗的症状的严重性之类的因素。对于口服给药典型推荐的每日剂量方案可为约0.04mg/日到约4000mg/日，按一个或多个(例如1个到4个)分剂量给药。
药理学试验方法
细胞培养
使用如下的人MM细胞系：NCI-H929、OPM-2、LP-1、RPMI-8226、U266(DSMZ，Braunschweig，德国)。在补充有10％热灭活胎牛血清(FCS，Gibco，Karlsruhe，德国卡尔斯鲁厄)、1mM丙酮酸钠和100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素(Gibco)的RPMI 1640培养基(Biochrom，德国柏林)中培养细胞系。如以下参考文献中所述获得人破骨细胞：Zavrski I，Krebbel H，Wildemann B等人，Proteasome inhibitors abrogate osteoclast differentiation and osteoclast function(蛋白酶体抑制剂终止破骨细胞分化和破骨细胞功能)，Biochem Biophys Res Commun.2005；333：200-205。简言之，使用Ficoll-Hypaque密度梯度，从健康志愿者的全血中分离外周血单核细胞(PBMC)。在开始用本发明化合物进行共培养实验和处理之前，将分离的单核细胞的贴壁级分(adherent fraction)在补充有10％FCS、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、50ng/ml M-CSF和25ng/ml RANKL(破骨细胞发生培养基)的MEM培养基(Sigma-Aldrich Chemie，Taufkirchen，德国)中培养21天。按照Robey PG，Termine JD.Human bone cells in vitro(体外人骨细胞)，Calcif Tissue Int.1985；37：453-460如在Hecht M，Heider U，Kaiser M，von Metzler I，Sterz J，Sezer O，Osteoblasts promote migration and invasion of myeloma cells through upregulation of matrix metalloproteinases，urokinase plasminogen activator，hepatocyte growth factor and activation of p38(成骨细胞通过基质金属蛋白酶、尿激酶纤溶酶原激活物、肝细胞生长因子的上调和p38的活化而促进骨髓瘤细胞的迁移和侵袭)MAPK.Br J Haematol.2007；138：446-458中所述获得人成骨细胞。简言之，将来自没有经历膝或髋手术的恶性疾病的患者的松质骨样本切碎并洗涤，以除去骨髓细胞。将骨片段再悬浮于补充有10％FCS的达尔伯克氏改良伊格尔培养基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium)(DMEM)/HAM′s F12培养基(Biochrom，德国柏林)中，并在组织培养烧瓶内培养，直到获得融合的细胞单层为止。在开始共培养和处理实验之前，通过碱性磷酸酶(ALP)染色(来自Sigma，USA的试剂盒)、成骨细胞标记物(ALP，骨钙蛋白)表达的实时RT-PCR分析和von-Kossa染色来证实功能性成骨细胞的培养。
MM细胞的药物处理
将根据实施例1的化合物(下文称为GSI15)(化合物RH02015SC，Maybridge，Acros Organics，Geel，比利时)作为26mM储备溶液新鲜溶解在二甲亚砜(DMSO)中。所使用的多发性骨髓瘤治疗剂是美法仑(作为Alkeran
Figure BPA00001310630200131
销售，GlaxoSmithKIine，德国慕尼黑)和硼替佐米(作为Velcade
Figure BPA00001310630200132
销售，Janssen-Cilag，Neuss，德国)。将美法仑以10mg/ml新鲜溶解在0.9％NaCl溶液中。将硼替佐米以100ng/ml新鲜溶解在0.9％NaCl溶液中。在6孔板中进行用于通过AnnexinV/PI染色评价凋亡、细胞周期分析和共培养实验的γ分泌酶抑制剂(GSI)处理。将GSI15储备溶液直接加入到细胞悬液中。在96孔板中进行用于分析增殖的GSI处理。将10,000细胞/孔接种在50μl培养基/孔中，之后每孔加入50μl的在培养基中预稀释的GSI15的2X溶液。在6孔板中进行美法仑和硼替佐米处理以及它们与GSI15的联合(处理)，用于通过AnnexinV/PI染色来分析凋亡。将所有抑制剂直接加入到6孔板中的细胞中。
共培养实验
在破骨细胞共培养实验中，将OPM-2细胞(1x106细胞)加入到破骨细胞中，所述破骨细胞在60mm皿(4x106细胞/皿)中的补充有10％FCS、100 U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的3ml MEM培养基中。将GSI15(30μM、60μM)或作为溶剂对照的DMSO(等同于60μM)加入到每一孔中(每日处理)。在48小时之后，每孔收获0.5ml OPM-2细胞悬液，并经受AnnexinV-FITC/PI染色。收获剩余的OPM-2细胞，并裂解，用于RNA或蛋白制备。将破骨细胞单层用冰冷的PBS洗涤两次，然后裂解，用于直接在板上进行RNA或蛋白制备。
在成骨细胞共培养实验中，将OPM-2细胞(7.5x105)加入到成骨细胞(2x105细胞)中，所述成骨细胞在6孔板中的补充有10％FCS、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的2ml DMEM/HAM’s F12培养基中。将GSI15(40μM、60μM、80μM)或作为溶剂对照的DMSO(等同于80μM)加入到每一孔中(每日处理)。在72小时的共培养和GSI15处理之后，将悬浮液中的OPM-2细胞吸出，并进行蛋白裂解。剩余的成骨细胞单层用冰冷的PBS洗涤两次，并在板上直接用蛋白裂解缓冲液裂解。
免疫印迹
如以下文献中所述制备并定量全细胞提取物：Jundt F，Anagnostopoulos I，Forster R，Mathas S，Stein H，Dorken B，Activated Notch1 signaling promotes tumor cell proliferation and survival in Hodgkin and anaplastic large cell lymphoma(活化的Notch1信号传导在霍奇金淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤中促进肿瘤细胞增殖和存活)，Blood.2002；99：3398-3403。蛋白(30μg)通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)来解析，并转移到硝酸纤维素膜上。通过丽春红染色将蛋白加载量归一化(normalized)。将膜与以下抗体孵育：单克隆小鼠抗Notch1抗体(no.552466；BD Biosciences，Heidelberg，德国)、抗Jagged1抗体(sc-8303；Santa Cruz Biotechnology)、多克隆兔抗δ抗体(Santa Cruz Biotechnology)、多克隆兔抗切割PARP(rabbit anti-cleaved PARP)(Asp214)抗体(Cell Signaling Technologies，Frankfurt a.M.，德国)或单克隆小鼠抗微管蛋白抗体(Sigma，Deisenhofen，德国)。
二抗是辣根过氧化酶(HRP)缀合的山羊抗小鼠抗体(Promega，Mannheim，德国)、山羊抗大鼠抗体(Dianova，德国汉堡)和山羊抗兔抗体(Santa Cruz Biotechnology)。使用Pico化学发光试剂(Perbio Science，德国波恩)来进行检测。
定量RT-PCR分析
使用以下引物/探针组进行定量实时反转录-PCR(RT-PCR)分析：人Hes-1(正向-CCCGTCTACCTCTCTCCTTG，反向-GAGCAAGTGCTGAGGGTTTA，探针-FAM-CCTGGAACAGCGCTACTGATCACC-TAMRA)、人TRAP5(正向-AGATCCTGGGTGCAGACTTC，反向-AAGGGAGCGGTCAGAGAATA，探针FAM-CGTCCTCAAAGGTCTCCTGGAACC-TAMRA)、人β2-微球蛋白(正向-ccc cca ctg aaa aag atg ag，反向-atc caa tcc aaa tgc ggc，探针-FAM-CCT GCC GTG TGA ACC ATG TGA CTT T-TAMRA)，用作归一化物(normalizer)。使用RNeasy Mini试剂盒(Qiagen，Hilden，德国)，按照生产商的说明从MM细胞、人破骨细胞或人成骨细胞中提取总RNA。对于RT-PCR反应，使用SuperScript TM III Platinum
Figure BPA00001310630200151
One-Step QuantitativeRT-PCR System(一步定量RT-PCR系统)(Invitrogen，Karlsruhe，德国)。每一反应使用50ng总RNA，每一RNA样品按一式三份进行分析。PCR条件(40循环)如下：在50℃下逆转录30分钟，在95℃下初始变性10分钟，随后进行40个循环的在95℃下变性45秒在62℃下退火/延伸60秒。使用管家基因β2-微球蛋白的扩增将表达数据归一化。然后将标准化mRNA表达数据作为相对于各个未处理样品的值进行计算。
增殖分析
对于分析细胞的增殖/生存力，使用CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(发光法细胞生存力分析试剂盒)(Promega，Mannheim，德国)。在本分析中，通过对ATP存在量进行定量来测定给定时间点处的活细胞的数目，其用作代谢活性细胞的度量。根据生产商的规程(protocol)来进行该分析。简言之，以10,000细胞/孔将细胞平板接种(plated)至96孔板中的100μl培养基中，并用指定量的GSI15处理，用作为溶剂对照的DMSO处理或保持未处理。每一处理按四个独立的重复在不同的孔内进行。在开始处理后24小时和48小时，将30μl/孔转移到具有不透明壁的板(opaque-walled plate)中，使用CellTiter-Glo溶液裂解。记录发光，并每孔整合(integrated)两秒。计算平均值，归一化(normalized to)为各个未处理样本。
细胞周期分析和凋亡评价
对于细胞周期分析，将2x105细胞减速旋转(spun down)，吸出培养基，用PBS洗涤细胞。将细胞再悬浮于250μl PBS中。加入1ml冰冷的70％乙醇，随后在-20℃下孵育过夜。将细胞减速旋转，用PBS洗涤粒状沉淀(pellet)，然后再悬浮于含有0,15mg/ml核糖核酸酶A(RNaseA)和30μg/ml碘化丙锭(PI)的200μl PBS中。在室温下黑暗孵育10分钟之后，通过流式细胞术分析细胞。根据生产商的规程，使用人AnnexinV-FITC试剂盒(Bender Medsystems，奥地利维也纳)，通过AnnexinV/碘化丙锭染色来测定凋亡细胞的量。简言之，将2x105细胞减速旋转，用PBS洗涤，随后在含有AnnexinV-FITC缀合物的结合缓冲液中孵育10分钟。然后将细胞再次减速旋转，再悬浮于含有PI的结合缓冲液中，并通过流式细胞术进行分析。
使用人足细胞系的细胞培养实验
用5ng/ml TGFβ在存在或不存在指定浓度的γ分泌酶抑制剂的情况下刺激无限增殖化人足细胞系(Saleem等人，“A conditionally immortalized human podocyte cell line demonstrating nephrin and podocin expression(显示肾nephrin和podocin表达的条件性无限增殖化人足细胞系)”，J.Am.Soc.Nephrol.13：630-638，2002)。24小时之后使用细胞死亡检测ELISA(CellDeath Detection ELISA)(Roche Diagnostics，Mannheim，德国)按照生产商的规程来测定凋亡细胞的百分率。
体内研究(PAN模型)
关于体内研究，从Charles River购买雄性Sprague-Dawley大鼠，用嘌呤霉素氨基糖苷(PAN)处理，以诱导如先前所述的蛋白尿性肾小球疾病(Niranjan等人，“The Notch pathway in podocytes plays a role in the development of glomerular disease.(足细胞中的Notch途径在肾小球疾病的发展中起一定作用)”Nat.Med.14：290-298，2008)。对大鼠注射PAN(150mg/kg)一次。每日一次腹腔内给予试验化合物(500μg/100g大鼠)(n＝4只动物/组)。在PAN注射之后一天开始注射试验化合物。按照欧盟规范进行所有研究。作为阳性对照，一组大鼠接受γ分泌酶抑制剂DAPT。
如先前所述在指定的天数测定尿白蛋白(Sanchez-Nino等人，“The MIF receptor CD74 in diabetic podocyte injury(糖尿病性足细胞损伤中的MIF受体CD74)”，J.Am.Soc.Nephrol.20：353-362，2009)。对于测量总蛋白，将尿样本离心，并在蒸馏水中稀释粒状沉淀。加入Exton试剂(230mM磺基水杨酸、1.4M硫酸钠)，在10分钟之后，测量620nm处的吸光度。
实施例：
获得以下实施例化合物，并测试其作为γ分泌酶抑制剂的活性。
实施例1
Figure BPA00001310630200171
化合物N-(2-(4-氯苯氧基)吡啶-3-基)-4-异丙基苯磺酰胺获得自Maybridge，Acros Organics(Geel，比利时)(No.RH 02015)。还可以通过如US 2007/0037794中所述的方法来获得所述化合物。
实施例2
Figure BPA00001310630200181
化合物N-(2-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-基)-2-(三氟甲基)苯磺酰胺获得自Maybridge，Acros Organics(Geel，比利时)(No.RH02081)。还可以通过如US 2007/0037794中所述的方法来获得所述化合物。
实施例3
Figure BPA00001310630200182
化合物4-氯-N-(2-(对-甲苯基硫基)吡啶-3-基)苯磺酰胺获得自Maybridge，Acros Organics(Geel，比利时)(No.RH02105)。还可以通过如US2007/0037794和El-Sabbagh等人，Bollettino Chimico Farmaceutico 1995，134，80-84中所述的方法来获得所述化合物。
实施例4
Figure BPA00001310630200183
化合物2-(6-氨基-4-氧代-1-苯乙基-1，4-二氢嘧啶-2-基硫基)-N-(3-氯苯基)丙酰胺获得自Ambinter SARL(法国巴黎)(No.A3593/0152314)。还可以通过如WO 2005/037779中所述的方法来获得所述化合物。
实施例5
Figure BPA00001310630200191
化合物2-(6-氨基-4-氧代-1-苯乙基-1，4-二氢嘧啶-2-基硫基)-N-(4-氯苯基)乙酰胺获得自Ambinter SARL(法国巴黎)(No.A3144/0132920)。还可以通过如WO 2005/037779中所述的方法来获得所述化合物。
药理学结果：
γ-分泌酶抑制剂(GSI15)阻断Notch信号传导(signaling)并抑制MM细 胞增殖
5种MM细胞系中Notch1和两种Notch配体Jagged1和δ的蛋白表达的分析显示，Notch1在5种MM细胞系的4种中表达，但在U266细胞中不表达，如在Jundt F，Probsting KS，Anagnostopoulos I等人，Jagged1-induced Notch signaling drives proliferation of multiple myeloma cells(Jagged1诱导的Notch信号传导驱动多发性骨髓瘤细胞的增殖)，Blood.2004；103：3511-3515中所述那样。Jagged1在5种细胞系的3种中高度表达，在RPMI-8226细胞中弱表达，并在U266细胞中不表达。另一种Notch1配体(δ)在所测试的所有细胞系中表达。早先已表明，当通过与表达Jagged1的Hela细胞异型相互作用(heterotypic interaction)而激活Notch信号传导时，MM细胞增殖增加[参见Jundt F等人，Blood.2004；103：3511-3515]。Notch及其配体在四种MM细胞系中的表达暗示了由于通过同型MM细胞相互作用的激活而导致Notch途径的潜在的组成性激活。为了评价γ-分泌酶抑制对MM细胞中Notch信号传导的影响，用GSI15处理OPM-2细胞。Notch1靶基因表达的分析揭示了Hes-1的表达，该表达一经GSI15处理，呈剂量依赖性下调。该发现支持了MM细胞中存在可通过GSI15特异性下调的Notch活性的观念。为了分析GSI15的肿瘤生物学效应，用不同剂量的GSI15处理OPM-2和LP-1细胞。缺乏Notch1表达的U266细胞系用作阴性对照。Notch1阳性OPM-2和LP-1细胞显示了在48小时处理之后呈剂量依赖性减低的增殖，其中在60μM GSI15处具有最大效应。相反，U266细胞几乎不受该处理的影响。U266细胞对GSI15处理的抗性进一步暗示，OPM-2和LP-1细胞中的处理的生长抑制效应不归因于化合物的一般毒性，而是取决于特异性的Notch抑制。这些结果证实了如由早先发现所建议的MM细胞的Notch1依赖性生长特性(growth behavior)[参见Jundt F等人，Blood.2004；103：3511-3515]。GSI15可用于抑制MM细胞生长。
测定实施例化合物1-5在上述分析中观察到50％生长抑制的浓度。结果在下表中给出：
  实施例化合物   观察到50％细胞生长抑制的浓度[μM]
  1   20
  2   30
  3   30
  4   20
  5   20
γ-分泌酶抑制诱导MM细胞系的凋亡
此外，分析GSI15的生长抑制效应是否归因于细胞周期阻抑或凋亡诱导。为此，用GSI15处理MM细胞，在不同的孵育时间之后进行碘化丙锭染色。有趣的是，在48小时和72小时之后，G1期、S期和G2期的分布保持不变，而GSI15处理在72小时之后导致OPM-2细胞和LP-1细胞中亚G1级分(sub-G1 fraction)增加，这表明诱导了凋亡。在U266细胞中没有检测到变化。通过用AnnexinV-FITC/PI染色分析GSI15处理的MM细胞来证实数据。分析了表达Notch1的OPM-2细胞和缺乏Notch1表达的U266细胞系，预期U266细胞对Notch信号传导的抑制不敏感，因此用作对照。48小时处理导致对Annexin V-FITC染色和PI染色两者阴性OPM-2细胞减少。反而，早期凋亡细胞(Annexin V-FITC-阳性)和晚期凋亡细胞(Annexin V-FITC-阳性和PI-阳性)均出现在培养物中。在类似坏死而非凋亡的AnnexinV阳性但PI阴性的细胞中没有变化，因此，抑制剂的非特异性毒性较不可能。如预期的那样，U266细胞保持不受γ分泌酶抑制的影响。此外，通过蛋白质印迹来对GSI15处理的MM细胞的蛋白裂解物检查常用作凋亡标记物的聚-(ADP-核糖)聚合酶(PARP)裂解产物的出现。已经用30μM GSI15在表达Notch1的OPM-2细胞中显示了凋亡诱导，但在U266细胞系中没有显示凋亡诱导。因此，提供了GSI15特异性作用于Notch途径并经由凋亡诱导对MM细胞系发挥其生长抑制效应的证据。
GSI15与硼替佐米和美法仑协同诱导MM细胞的凋亡
烷化剂美法仑和蛋白酶体抑制剂硼替佐米在临床上单独或联合用于治疗MM患者[参见Ghobrial IM，Leleu X，Hatjiharissi E等人，Emerging drugs in multiple myeloma(多发性骨髓瘤的新兴药物)，Expert Opin Emerg Drugs.2007；12：155-163]。虽然在先前难以治疗的患者中使用硼替佐米取得了很大的成功，增加了患者的无进展生存率和总生存率，但仍然没有治愈性治疗方法。因此，新颖药物的开发可能是朝向更成功的治疗的必需步骤。调查了与硼替佐米和美法仑联合的GSI15治疗对MM细胞生长的效应。为此目的，用低剂量的硼替佐米或美法仑和GSI15培养OPM-2细胞。通过AnnexinV-FITC/PI染色来测量OPM-2细胞中的凋亡诱导。测定归一化为(normalized to)载体处理的对照细胞的在24小时或48小时处理之后的活细胞的数目。如预期的那样，美法仑和硼替佐米均剂量依赖性地触发细胞死亡。在40μM的低剂量下，单独的GSI15在OPM-2细胞中在24小时之后没有诱导凋亡，在48小时之后仅仅在OPM-2细胞中仅仅轻度诱导了凋亡(24％凋亡细胞)。然而，GSI15使24小时后的美法仑诱导的凋亡加倍(单独的50μM美法仑诱导了32％凋亡细胞，相比之下，CSI15与美法仑的联合诱导了63％凋亡细胞)。48小时处理之后，单独的40μM GSI15和2nM硼替佐米均产生约25％凋亡细胞，而它们的联合产生75％凋亡细胞。因此，GSI15显著地增加了硼替佐米或美法仑的效应，协同地诱导OPM-2细胞的凋亡。
与MM细胞共培养之后，OCL的Notch信号传导的激活和增加的活性
将MM细胞与人OCL或OBL共培养，并分析Notch信号传导，以便评价其对肿瘤-基质相互作用的影响。然而OCL和OPM-2细胞表达Notch1蛋白，仅仅OPM-2细胞还表达Notch1配体Jagged1和δ。该发现与单独的OPM-2细胞显示出可能归因于同型相互作用的Notch靶基因Hes-1的表达的观察相一致。共培养细胞中Notch靶基因Hes-1的mRNA表达的分析揭示在OPM-2细胞中没有变化，但在OCL中增加2.3倍，这表明了通过与MM细胞的相互作用的OCL中Notch信号传导的特异性激活。接着，分析与OBL的共培养物，从骨活组织检查的增生(outgrowth)培养物获得。OPM-2和OBL中的蛋白表达的分析揭示，该两种细胞类型表达Notch1及其配体Jagged1和δ。因此，如通过Hes-1 mRNA表达所测定的，在可检测的途径活性方面，OPM-2细胞和OBL中均不存在变化。这些数据表明，MM细胞可以上调OCL中的Notch信号传导活性，但不上调OBL中的Notch信号传导活性。
为了分析增加的Notch活性是否具有功能性结果，导致增强的OCL活性，在OPM-2/OCL共培养系统中利用GSI15。在48小时之后，通过AnnexinV-FITC/PI染色来分析OPM-2细胞中的凋亡。如在早先的实验中所示，单独的OPM-2细胞变得凋亡。有趣的是，通过GSI15的凋亡诱导在共培养的OPM-2细胞中甚至更显著。在60μM GSI15下，凋亡细胞的总量从单独的OPM-2中的29％增加到在与OCL共培养的OPM-2中的83％。另外，使用裂解的PARP来评价两种细胞类型中的凋亡。在单培养和共培养两者中，OPM-2细胞中出现了PARP裂解的强烈诱导，这证实了AnnexinV-FITC/PI染色结果。GSI15处理在单独的OCL中没有诱导PARP裂解，而在高剂量的GSI15下在与OPM-2细胞共培养的OCL中诱导了PARP裂解。此外，分别通过测定Hes-1和抗酒石酸酸性磷酸酶-5(TRAP5)表达来分析OCL中的Notch途径活性和OCL活性。TRAP5表达与OCL功能相关[参见Minkin C.Bone acid phosphatase：tartrate-resistant acid phosphatase as a marker of osteoclast function(骨酸性磷酸酶：作为破骨细胞功能的标记物的抗酒石酸酸性磷酸酶)，Calcif Tissue Int.1982；34：285-290，Miller SC.The rapid appearance of acid phosphatase activity at the developing ruffled border of parathyroid hormone activated meduHary bone osteoclasts(在发展甲状旁腺激素激活的髓骨破骨细胞皱褶缘时酸性磷酸酶活性的快速出现)，Calcif Tissue Int.1985；37：526-529]，并且用作OCL活性的特异性标记物。mRNA表达的调查揭示，一经与OPM-2共培养，OCL中的Hes-1上调，这证实我们早先的实验(比较单培养和共培养中DMSO处理的OCL)。GSI15减弱了Hes-1 mRNA表达，且完全阻断了OCL中Notch活性的MM细胞依赖性上调。有趣的是，共培养的OCL中的Hes-1上调伴有TRAP5 mRNA表达的增加，这指示更高的OCL活性。有趣的是，GSI15完全阻断了共培养之后的TRAP5 mRNA表达的上调。该发现表明Notch信号传导对OCL的MM细胞依赖性活化的贡献。我们的数据表明，GSI15可诱导MM细胞的凋亡和防止OCL活性的MM细胞依赖性上调。
还分析其它BMS细胞的GSI15处理结果。分析MM细胞和OBL以及成骨细胞的间充质干细胞祖细胞(MSC)的共培养物(cocultures)。根据蛋白质印迹的PARP裂解分析揭示与OBL或MSC的共培养中在MM细胞中的凋亡诱导。在单一培养物和共培养物中，即使在高剂量GSI15下，OBL和MSC中均未诱导凋亡。因此，在生存力分析中，在未处理的OBL和MSC以及GSI15处理的OBL和MSC之间没有差别，而OPM-2细胞的生存力被抑制。
生理相容性
在小鼠中测试经由胃肠外给药的根据实施例1的化合物的生理相容性。LD50(胃肠外，小鼠)是800mg/kg。因此，可认为化合物1是生理相容的。
使用人足细胞系的细胞培养实验
如上所述，在这些细胞培养实验中测试根据实施例1和2的化合物。两种化合物在这些实验中均显示了积极的效果。在用根据实施例1)的γ分泌酶抑制剂处理的细胞中，与单独的阳性对照TGFβ相比，在500nM下发现了41％的凋亡抑制。在用根据实施例2)的γ分泌酶抑制剂处理的细胞中，与单独的阳性对照TGFβ相比，在3μM和10μM下发现了27％的抑制率。在用作为阳性对照的γ分泌酶抑制剂DAPT处理的细胞中，与单独的阳性对照TGFβ相比，在1μM下发现了37％的抑制率。
PAN-模型
在如上所述的PAN模型中测试根据实施例1和2的化合物。发现化合物1)和化合物2)分别在第7天和第5天对PAN诱导的蛋白尿和白蛋白尿(albuminuria)显示了积极的效果。在第7天，接受根据实施例1)的γ分泌酶抑制剂的大鼠组中，与单独的阳性对照PAN相比，发现白蛋白尿的56％抑制率和蛋白尿的50％抑制率。在第5天，接受根据实施例2)的γ分泌酶抑制剂的大鼠组中，与单独的阳性对照PAN相比，发现白蛋白尿的42％抑制率和蛋白尿的37％抑制率。

Claims (14)

1.药物组合物，其包含一种或多种通式I的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FPA00001310630100011
其中
n、m相互独立地各自表示0或1；
Figure FPA00001310630100012
表示5、6或7元碳环，其中所述碳环是部分不饱和的或芳族的，且所述碳环含有0、1或2个氮原子作为环成员；
L1选自C1-6-亚烷基；N(H)-S(＝O)2和S(＝O)2-N(H)；
L2选自S；O；C1-6亚烷基-C(＝O)；S-C1-6亚烷基-C(＝O)；O-C1-6亚烷基-C(＝O)；C(＝O)-C1-6-亚烷基；C(＝O)-C1-6-亚烷基-S；C(＝O)-C1-6-亚烷基-O；C1-6-亚烷基-C(＝O)-N(H)；S-C1-6-亚烷基-C(＝O)-N(H)；O-C1-6-亚烷基-C(＝O)-N(H)；C(＝O)-N(H)-C1-6-亚烷基；C(＝O)-N(H)-C1-6-亚烷基-S；C(＝O)-N(H)-C1-6-亚烷基-O；C1-6-亚烷基-N(H)-C(＝O)；S-C1-6-亚烷基-N(H)-C(＝O)；O-C1- 6-亚烷基-N(H)-C(＝O)；N(H)-C(＝O)-C1-6亚烷基；N(H)-C(＝O)-C1-6亚烷基-S；N(H)-C(＝O)-C1-6亚烷基-O；C1-6-亚烷基-N(H)-S(＝O)2；S-C1-6-亚烷基-N(H)-S(＝O)2；O-C1-6-亚烷基-N(H)-S(＝O)2；N(H)-S(＝O)2-C1-6-亚烷基；N(H)-S(＝O)2-C1-6-亚烷基-S；N(H)-S(＝O)2-C1-6-亚烷基-O；C1-6-亚烷基-S(＝O)2-N(H)；S-C1-6-亚烷基-S(＝O)2-N(H)；O-C1-6-亚烷基-S(＝O)2-N(H)；S(＝O)2-N(H)-C1-6-亚烷基；S(＝O)2-N(H)-C1-6-亚烷基-S；S(＝O)2-N(H)-C1-6-亚烷基-O；
条件是，L1和L2连接于该碳环的连位环成员上；
R1、R2各自选自-H；卤素；C1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；-O-C1-6烷基；-S-C1-6烷基；C1-6-卤代烷基；-O-C1-6卤代烷基；-S-C1-6-卤代烷基；-OH；-SH；-CN；-NO2和-NRaRb，其中Ra和Rb独立地是H或C1-6烷基；
条件是，R1和R2中的至少一个表示H；
R3、R4各自选自-H；卤素；C1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；-O-C1-6烷基；-S-C1-6烷基；C1-6-卤代烷基；-O-C1-6卤代烷基；-S-C1-6-卤代烷基；-OH；-SH；-CN；-NO2和-NRaRb，其中Ra和Rb独立地是H或C1-6烷基；
条件是，R3和R4中的至少一个不表示H；
R5、R6相互独立地各自选自-H；＝O；卤素；C1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；-O-C1-6烷基；-S-C1-6烷基；C1-6-卤代烷基；-O-C1-6卤代烷基；-S-C1-6-卤代烷基；-OH；-SH；-CN；-NO2和-NRaRb，其中Ra和Rb独立地是H或C1-6烷基。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其包含一种或多种通式IA的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FPA00001310630100021
其中
X、Y相互独立地各自表示碳原子或氮原子；
Figure FPA00001310630100022
表示6元碳环，其中所述碳环是部分不饱和的或芳族的；以及
m、n、L1、L2、R1、R2、R3、R4、R5、R6具有权利要求1中所定义的相同含义。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其包含一种或多种通式IB的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FPA00001310630100031
其中L1、L2、R1、R2、R3和R4具有权利要求1中所定义的相同含义。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其包含一种或多种通式IC的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FPA00001310630100032
其中
L2表示S或O；
R1、R2各自选自-H；-F；-Cl；-Br；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；仲丁基；异丁基；叔丁基；甲氧基；乙氧基；-CF3；-OCF3；-SCF3；-OH和-CN；
条件是，R1和R2中的至少一个表示H；以及
R3表示-F；-Cl；-Br；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；仲丁基；异丁基；叔丁基；甲氧基；乙氧基；-CF3；-OCF3；-SCF3；-OH和-CN。
5.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其包含一种或多种通式ID的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FPA00001310630100041
其中L1、L2、R1、R2、R3和R4具有权利要求1中所定义的相同含义。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其包含一种或多种通式IE的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FPA00001310630100042
其中
R7选自H；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；仲丁基和叔丁基；
R3、R4各自选自-H；-F；-Cl；-Br；甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；仲丁基；异丁基；叔丁基；甲氧基；乙氧基；-CF3；-OCF3；-SCF3；-OH和-CN；
条件是，R3和R4不都表示H。
7.根据权利要求1-6中一项或多项所述的药物组合物，其包含一种或多种选自以下的化合物：
[1]N-(2-(4-氯苯氧基)吡啶-3-基)-4-异丙基苯磺酰胺，
[2]N-(2-(4-叔丁基苯氧基)吡啶-3-基)-2-(三氟甲基)苯磺酰胺，
[3]4-氯-N-(2-(对甲苯基硫基)吡啶-3-基)苯磺酰胺，
[4]2-(6-氨基-4-氧代-1-苯乙基-1，4-二氢嘧啶-2-基硫基)-N-(3-氯苯基)丙酰胺，以及
[5]2-(6-氨基-4-氧代-1-苯乙基-1，4-二氢嘧啶-2-基硫基)-N-(4-氯苯基)乙酰胺。
8.根据权利要求1-7中一项或多项所述的药物组合物，其用于治疗肾脏疾病。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述肾脏疾病选自肾衰竭；足细胞损害；肾小球疾病，尤其局灶性肾小球硬化症或节段性肾小球硬化症；和糖尿病肾病。
10.根据权利要求1-7中一项或多项所述的药物组合物，其用于治疗癌症。
11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述癌症选自肾癌、多发性骨髓瘤、白血病和结肠癌。
12.根据权利要求1-7中一项或多项所述的药物组合物，其用于治疗神经变性疾病。
13.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述神经变性疾病选自阿尔茨海默氏病、与β-淀粉样蛋白沉积有关的疾病、与年龄有关的痴呆症、脑淀粉样变、系统性淀粉样变、遗传性脑出血伴淀粉样变、唐氏综合征和缺血性中风。
14.根据权利要求1-7中一项或多项所述的药物组合物，其用于治疗与眼睛、肾脏、胰腺、前列腺、乳房、肝脏、胆囊和粘膜有关的疾病。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2606884A1 (en) 2011-12-21 2013-06-26 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Inhibitors of notch signaling pathway and use thereof in treatment of cancers
WO2015095116A1 (en) * 2013-12-17 2015-06-25 Rush University Medical Center Compositions and methods for treating diabetic nephropathy
WO2016198366A1 (en) * 2015-06-11 2016-12-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Targeted notch pathway inhibitors
CN108025001A (zh) * 2015-07-24 2018-05-11 安可初克公司 用于治疗免疫系统功能障碍的γ分泌酶调节剂
WO2018151836A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Fred Hutchinson Cancer Research Center Combination therapies for treatment of bcma-related cancers and autoimmune disorders
AU2019289917B2 (en) 2018-06-21 2025-01-09 Cellestia Biotech Ag Process for making amino diaryl ethers and amino diaryl ethers hydrochloride salts

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2086544C1 (ru) * 1991-06-13 1997-08-10 Хоффманн-Ля Рош АГ Бензолсульфонамидные производные пиримидина или их соли, фармацевтическая композиция для лечения заболеваний, связанных с активностью эндотелина
JPH06345647A (ja) * 1993-06-08 1994-12-20 Otsuka Pharmaceut Co Ltd 糖尿病治療剤
CA2285548C (en) * 1997-04-04 2006-07-11 Pfizer Products Inc. Nicotinamide derivatives
AR030911A1 (es) * 1999-07-20 2003-09-03 Smithkline Beecham Corp Uso de n-aril-2-sulfonamidobenzamidas para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de la insuficiencia renal cronica y composiciones farmaceuticas
US7119120B2 (en) * 2001-12-26 2006-10-10 Genzyme Corporation Phosphate transport inhibitors
US20040171614A1 (en) * 2002-02-06 2004-09-02 Schering-Plough Corporation Novel gamma secretase inhibitors
TW200302717A (en) * 2002-02-06 2003-08-16 Schering Corp Novel gamma secretase inhibitors
KR20040099418A (ko) * 2002-04-08 2004-11-26 다케다 야쿠힌 고교 가부시키가이샤 중증 패혈증 예방 치료제

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