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CN101316625A - 神经肽-2受体激动剂 - Google Patents

神经肽-2受体激动剂 Download PDF

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CN101316625A
CN101316625A CNA2006800443770A CN200680044377A CN101316625A CN 101316625 A CN101316625 A CN 101316625A CN A2006800443770 A CNA2006800443770 A CN A2006800443770A CN 200680044377 A CN200680044377 A CN 200680044377A CN 101316625 A CN101316625 A CN 101316625A
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CN
China
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methyl
pqa
arg
tyr
peg
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Pending
Application number
CNA2006800443770A
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English (en)
Inventor
卡琳·康德-纳普
瓦利德·丹霍
乔治·埃利希
纳德·佛投赫
戴维·C·弗里
瓦吉哈·卡恩
阿尼希·孔卡
克里斯蒂娜·马莎·龙迪诺内
约瑟夫·斯威斯托克
丽贝卡·安妮·陶布
吉斐逊·W·蒂勒比
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
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Abstract

本文提供式(I)的神经肽－2受体激动剂及其药用盐，衍生物和片段，其中所述取代基是在说明书和权利要求书中公开的那些。这些化合物和包含它们的药物组合物用于治疗例如肥胖症和糖尿病的疾病。

Description

神经肽-2受体激动剂
本发明涉及PYY3-36的截短类似物。所述类似物是神经肽-2受体的激动剂并且用于治疗代谢疾病和病症，如例如肥胖症，2型糖尿病，代谢综合征，胰岛素抗性和异常脂肪血症。本发明的神经肽-2受体激动剂如式(I)所示：
Figure A20068004437700081
其中：
X是4-氧代-6-(1-哌嗪基)-3(4H)-喹唑啉-乙酸(Pqa)，
Y是H，酰基部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的低级烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷氧基，聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC，
Y′是H，聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC，
R1是Ile，Ala，(D)Ile，N-甲基Ile，Aib，1-1Aic，2-2 Aic，Ach或Acp，
R2是Lys，Ala，(D)Lys，NMelys，Nle或(Lys-Gly)，
R3是Arg，Ala，(D)Arg，N-甲基Arg，Phe，3，4，5-三氟Phe或2，3，4，5，6-五氟Phe，
R4是His，Ala，(D)His，N-甲基His，4-MeOApc，3-Pal或4-Pal，
R5是Tyr，Ala，(D)Tyr，N-甲基Tyr，Trp，Tic，Bip，Dip，(1)Nal，(2)Nal，3，4，5-三氟Phe或2，3，4，5，6-五氟Phe，
R6是Leu，Ala，(D)Leu或N-甲基Leu，
R7是Asn，Ala或(D)Asn，
R8是Leu或Trp，
R9是Val，Ala，(D)Val或N-甲基Val，
R10是Thr，Ala或N-甲基Thr，
R11是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg，
R12是Gln或Ala，
R13是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg，
R14是Tyr，(D)Tyr或N-甲基Tyr，修饰的-Tyr，Phe，修饰的-Phe，Cha，(1)Nal，(2)Nal，C-α-甲基Tyr或Trp，和
PEGm是1-60KDa，
或其药用盐。
特此将本文所有引用的文献明确地并入本文作为参考。
代谢疾病和病症是发达国家已经广泛认识到的严重健康问题，其在美国已经达到流行水平。例如，根据最近关于肥胖症的研究，超过50％的美国人口被认为是超重，超过25％在临床上被诊断为肥胖并且有相当大的风险发展为心脏病，2型糖尿病和某些癌症。这些流行病成为保健系统的明显的负担，因为每年只在美国就有超过700亿美元的计划肥胖症治疗费用。治疗肥胖症的策略包括减少食物摄取并且增加能量消耗。
神经肽Y(NPY)，是一种36个氨基酸肽的神经递质，是已经显示存在于外周和中枢神经系统中的神经递质/神经激素的胰腺多肽类别。NPY是已知的最有效的开胃剂之一并且显示在调节包括人的动物的食物摄取上具有重要作用。
已经克隆了6种神经肽Y受体(NPY)，Y1-，Y2-，Y3-，Y4，和Y5-和Y6-亚型，其属于视紫红质样G蛋白偶联的7-跨膜受体(GPCR)。NPY Y2受体(Y2R)是一种381个氨基酸的受体，其通过Gi抑制腺苷酸环化酶的激活，同时显示与其它已知NPY受体的低同源性。在大鼠和人Y2受体之间存在高度保守性，具有98％的氨基酸同一性。
Y2R受体广泛分布在啮齿动物和人的中枢神经系统中。在下丘脑，Y2 mRNA定位在弓状核，视前核和背内侧核中。在人脑中，Y2R是主要的Y受体亚型。在弓状核中，超过80％的NPY神经元共表达Y2R mRNA。Y2-选择性激动剂的应用显示减少了体外来自下丘脑切片的释放，而Y2非肽拮抗剂BIIE0246增加NPY释放。这些发现支持Y2R作为突触前的自身受体的作用，该自身受体调节NPY释放并且因此可以涉及进食的调节。(Kaga T等.，Peptides(肽)22：501-506(2001)和King PJ等，Eur J Pharmacol(欧洲药理学杂志)396：R1-3(2000))。
肽YY3-36(PYY3-36)是34个氨基酸的线性肽，其具有神经肽Y2(NPY2R)激动剂活性。已经显示弓形核内(IC)或腹膜内(IP)注射PYY3-36减少了大鼠中的进食，并且作为慢性治疗减少了体重增加。静脉内(IV)输注(0.8pmol/kg/min)PYY3-3690分钟在24小时内减少了肥胖症和正常人受试者的食物摄取。这些发现显示PYY系统可以是肥胖症治疗的治疗靶标(Batterham RL等，Nature(自然)418：650-654(2002)；Batterham RL等，New Engl J Med(新英格兰医药杂志)349：941-948(2003))。此外，PYY的Cys2-(D)Cys27-环化形式，其中残基5-24被5-8个碳长度的亚甲基链替代，显示小肠PYY受体的激活，如通过大鼠空肠的电压钳粘膜制备物的电流减少所证实的。(Krstenansky，等.在Peptides，Proceedings of theTwelfth American Peptide Symposium(肽，第十二届美国肽专题讨论会)中.J.Smith和J.Rivier编辑，ESCOM.莱顿，第136-137页)。
此外，关于超氧化物歧化酶(Somack，R，等，(1991)自由基研究通讯(Free Rad Res Commun)12-13：553-562；美国专利号5,283,317和5,468,478)和其它类型的蛋白质例如细胞因子(Saifer，M G P，等，(1997)PolymPreprints 38：576-577；Sherman，M R，等，(1997)在J M Harris，等，(Eds.)，Poly(ethylene  glycol)Chemistry and Biological  Applications.ACSSymposium Series 680(PEG化学和生物应用.ACS专题讨论会系列680)(第155-169页)华盛顿：American Chemical Society(美国化学协会))，用聚乙二醇或聚(氧乙烯)(都称为PEG)共价修饰蛋白质。
此外，最近的数据显示胃旁路患者具有PYY水平的早期和显著的增加，其可能部分负责为早期血糖控制和长期体重维持，说明这种肽在代谢疾病病理中的重要性。PYY的其它已知作用包括：减少的胃部排空和延迟的胃肠传递，其负责提高的饭后血糖控制。高血糖症的指示如HbA1C和果糖胺在2型糖尿病动物模型中外周施用PYY3-36后显示剂量依赖性的减少。因此，这些结果显示PYY3-36或药用相关激动剂可以提供针对血糖和重量控制的长期治疗方法(Korner等，J Clin Endocrinol Metabol(临床内分泌代谢杂志)90：359-365(2005)；Chan JL等，肥胖症(肥胖症)14：194-198(2006)；Stratis C等，Obes Surg(肥胖症外科手术)16：752-758(2006)；Borg CM等，Br J Surg 93：210-215(2006)；和Pittner RA等，Int J Obes(肥胖症国际杂志)28：963-971(2004))。
然而需要新的改造的PYY类似物，其具有低分子量，同时具有相同或更好的针对Y1，Y4和Y5受体的效力和选择性，药物代谢动力学性质和药理学性质。优选地需要具有比现有技术存在的那些更长的活性延续时间的化合物。还需要PYY的PEG化的类似物，从而例如增加蛋白质的半衰期并减少在需要这样的激动剂的受试者中的免疫原性。
图1显示包含本发明的化合物(实施例34)的反应混合物的HPLC色谱图。
图2显示本发明的纯化化合物(实施例34)的HPLC色谱图。
图3显示本发明的化合物(实施例34)的MALDI-TOF光谱。
图4显示本发明的另一种化合物(实施例35)的反应混合物的HPLC色谱图。
图5显示本发明的纯化的化合物(实施例35)的HPLC色谱图。
图6显示本发明化合物(实施例35)的MALDI-TOF光谱。
图7显示本发明化合物(实施例36)的反应混合物的HPLC色谱图。
图8显示本发明的纯化的化合物(实施例36)的HPLC色谱图。
图9显示本发明另一种化合物(实施例36)的MALDI-TOF光谱。
图10显示本发明的化合物(实施例37)的反应混合物的HPLC色谱图。
图11显示本发明的纯化的化合物(实施例37)的HPLC色谱图。
图12显示本发明的化合物(实施例37)的MALDI-TOF光谱。
图13显示本发明的另一种化合物(实施例38)的反应混合物的HPLC色谱图。
图14显示本发明的纯化的化合物(实施例38)的HPLC色谱图。
图15显示本发明的化合物(实施例38)的MALDI-TOF光谱。
图16显示本发明的化合物(实施例39)的反应混合物的HPLC色谱图。
图17显示本发明的纯化的化合物(实施例39)的HPLC色谱图。
图18显示本发明的另一种化合物(实施例39)的MALDI-TOF光谱。
图19显示在去保护前包含本发明的化合物(实施例41)的反应混合物的HPLC色谱图。
图20显示本发明的包含化合物(实施例41)的去保护的反应混合物的HPLC色谱图。
图21显示本发明的纯化的化合物(实施例41)的HPLC色谱图。
图22显示本发明的化合物(实施例41)的MALDI-TOF光谱。
图23显示在雄性饮食诱导的肥胖症(DIO)大鼠中亚慢性给药化合物(实施例41)对体重的影响。
图24显示化合物(实施例41)在雌性db/db小鼠中对口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的急性影响。
图25显示在雌性db/db小鼠中化合物(实施例41)的亚慢性给药对基础血糖(A)和口服葡萄糖耐量试验(B)的影响。
尽管与本文所述的那些相似或等价的任何方法，装置和材料可以用于本发明的实施或测试中，现在描述优选的方法，装置和材料。
根据一般约定书写本文提及的所有的肽序列，其中N端氨基酸在左边，而C端氨基酸在右边，除非另外指出。在两个氨基酸残基之间的短线指示肽键。当氨基酸具有同分异构形式时，其是氨基酸的L形式，除非另外特别指出。为了描述本发明的方便，使用各种氨基酸的常规和非常规缩写。这些缩写是本领域技术人员熟悉的，但是为了清楚在下面列出。
Asp＝D＝天冬氨酸；Ala＝A＝丙氨酸；Arg＝R＝精氨酸；Asn＝N＝天冬酰胺；Gly＝G＝甘氨酸；Glu＝E＝谷氨酸；Gln＝Q＝谷氨酰胺；His＝H＝组氨酸；Ile＝I＝异亮氨酸；Leu＝L＝亮氨酸；Lys＝K＝赖氨酸；Met＝M＝甲硫氨酸；Phe＝F＝苯丙氨酸；Pro＝P＝脯氨酸；Ser＝S＝丝氨酸；Thr＝T＝苏氨酸；Trp＝W＝色氨酸；Tyr＝Y＝酪氨酸；Cys＝C＝半胱氨酸；和Val＝V＝缬氨酸；Nle＝正亮氨酸。
为了方便，将下列缩写或符号用于表示本发明所使用的部分，试剂等。
Ac         乙酰基；
Aib        α-氨基异丁酸；
1-1-Aic    1-氨基茚满-1-羧酸；
2-2-Aic    2-氨基茚满-2-羧酸；
Ach        α-氨基环己烷-羧酸；
Acp        α-氨基环庚烷-羧酸；
Tic        α-氨基-1，2，3，4，四氢异喹啉-3-羧酸；
3-Pal                    α-氨基-3-吡啶基丙氨酸-羧酸；
4-Pal                    α-氨基-4-吡啶基丙氨酸-羧酸；
4-MeO-Apc                1-氨基-4-(4-甲氧基苯基)-环己烷-1-羧酸；
Bip                      4-苯基-苯丙氨酸-羧酸；
Dip                      3，3-二苯丙氨酸-羧酸；
Pqa                      4-氧代-6-(1-哌嗪基)-3(4H)-喹唑啉-乙酸
                         (CAS 889958-08-1)；
3，4，5，F3-Phe          3，4，5-三氟苯丙氨酸；
2，3，4，5，6，F5-Phe    2，3，4，5，6-五氟苯丙氨酸；
Cha                      环己基丙氨酸；
(1)Nal                   1-萘基丙氨酸；
(2)Nal                   2-萘基丙氨酸；
Fmoc                     9-芴基甲氧基羰基；
Mtt                      4-甲基三苯甲基；
2Pip                     2-苯基异丙基酯；
Pmc                      2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基；
CH2Cl2                   二氯甲烷；
A2O                      乙酸酐；
CH3CN                    乙腈；
DMAc                     二甲基乙酰胺；
DMF                      二甲基甲酰胺；
DIPEA                    N，N-二异丙基乙胺；
TFA                      三氟乙酸；
HOBT                     N-羟基苯并三唑；
DIC                      N，N’-二异丙基碳二亚胺；
BOP                      苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)磷鎓-
                         六氟磷酸盐；
HBTU                     2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓-
                         六氟磷酸盐；
NMP                      1-甲基2-Pyrolidenone；
SSA             琥珀酰亚胺基琥珀酰亚胺；
β-SBA          琥珀酰亚胺基β-丁酸；
SPA             琥珀酰亚胺基丙酸；
BTC             苯并三唑碳酸酯；
MALDI-TOF       基质辅助激光解吸电离飞行时间；
FAB-MS          快原子轰击质谱；
ES-MS           电雾化质谱；
PEGm-SSA        PEGm-CH2CH2NHCOCH2CH2CO-；
PEGm-β-SBA     PEGm-CH(CH3)CH2CO-；
PEGm-SPA        PEGm-CH2CH2CO-；
PEGm-BTC        PEGm-CO-；并且
PEGm            是大于约1KDa的聚乙二醇部分。
用于本文时，术语“烷基”指支链或直链，环状或非环状，饱和或不饱和的烃基，其可以被取代或不被取代。当是环状时，烷基优选地是C3-C12，更优选地是C5到C10，更优选地是C5到C7。当是非环状时，所述烷基优选地是C1到C10，更优选地是C1到C6，更优选地是甲基，乙基，丙基(正丙基或异丙基)，丁基(正丁基，异丁基或叔丁基)或戊基(包括正戊基和异戊基)，更优选地是甲基。因此，要理解术语“烷基”用于本文时包括烷基(支链或直链)，取代的烷基(支链或直链)，取代的炔基(支链或直链)，环烷基，取代的环烷基，环烯基，取代的环烯基，环炔基和取代的环炔基。优选的烷基是非环状和饱和的。
用于本文时，术语“低级烷基”指支链或直链，环状或非环状，饱和或不饱和的烃基，其中所述环状低级烷基是C5，C6或C7，并且其中所述非环状低级烷基是C1，C2，C3或C4，并且优选地选自甲基，乙基，丙基(正丙基或异丙基)或丁基(正丁基，异丁基或叔丁基)。因此，要理解的是术语“低级烷基”用于本文时，包括低级烷基(支链或直链)，低级烯基(支链或直链)，低级炔基(支链或直链)，环低级烷基和环低级烯基。优选的低级烷基是非环状的和饱和的。
用于本文时，术语“酰基”指任选地取代的烷基，环烷基，杂环基，芳基或杂芳基，其经由羰基结合，并且包括基团如乙酰基，丙酰基，苯甲酰基，3-吡啶基羰基，2-吗啉代羰基，4-羟基丁酰基，4-氟代苯甲酰基，2-萘酰基，2-苯基乙酰基，2-甲氧基乙酰基等。
用于本文时，术语“芳基”指取代或未取代的碳环芳族基团，如苯基或萘基。
术语“杂芳基”单独地或与其它基团组合，指5-12个环原子的单环或二环原子团，其具有至少一个包含选自N，O，和S的一个，两个或三个环杂原子的芳香环，并且余下的环原子是C，条件是杂芳基的连接点将在芳香环上。杂芳基的一个或两个环碳原子可以被羰基取代。
烷基，芳基和杂芳基可以是取代的或未取代的。当取代时，通常有1至3个取代基、优选1个取代基存在。取代基可以包括：含碳基团如烷基，芳基，芳基烷基(例如取代和未取代的苯基，取代和未取代的苄基)；卤素原子和含有卤素原子的基团如卤代烷基(例如，三氟甲基)；含氧基团如醇(例如羟基，羟烷基，芳基(羟基)烷基)，烷氧基，芳氧基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，酰基，酸(例如，羧基，羧基烷基)，酸衍生物如酯(例如，烷氧基羰基，烷氧基羰基烷基，烷基羰基氧基，烷基羰基氧基烷基)，酰胺(例如，氨基羰基，一-或二-烷基氨基羰基，氨基羰基烷基，一-或二-烷基氨基羰基烷基，芳基氨基羰基)，氨基甲酸酯(例如烷氧基羰基氨基，芳氧羰基氨基，氨基羰基氧基，一-或二-烷基氨基羰基氧基，芳基氨基羰基氧基)和脲(例如一-或二-烷基氨基羰基氨基或芳基氨基羰基氨基)；含氮基团如胺(例如氨基，一-或二-烷基氨基，氨基烷基，一-或二-烷基氨基烷基)，叠氮化物，腈(例如氰基，氰基烷基)，硝基；含硫基团如硫醇类，硫醚，亚砜和砜(例如烷硫基，烷基亚磺酰基，烷基磺酰基，烷硫基烷基，烷基亚磺酰基烷基，烷基磺酰基烷基，芳硫基，芳基亚磺酰基，芳基磺酰基，芳硫基烷基，芳基亚磺酰基烷基，芳基磺酰基烷基)；和含有一个或多个、优选一个杂原子的杂环基团(例如噻吩基，呋喃基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，噻唑基，异噻唑基，噁唑基，噁二唑基，噻二唑基，吖丙啶基，氮杂环丁烷基，吡咯烷基，吡咯啉基，咪唑烷基，咪唑啉基，吡唑烷基，四氢呋喃基，吡喃基，吡喃酮基，吡啶基，吡嗪基，哒嗪基，哌啶基，六氢氮杂
Figure A20068004437700151
基，哌嗪基(peperazinyl)，吗啉基，硫杂萘基(thianaphthyl)，苯并呋喃基，异苯并呋喃基，吲哚基，羟吲哚基，异氮杂茚基，吲唑基，二氢吲哚基，7-氮杂吲哚基，苯并吡喃基，香豆素基，异香豆素基，喹啉基，异喹啉基，naphthridinyl，噌啉基，喹唑啉基，吡啶并吡啶基，苯并噁嗪基，喹喔啉基，色烯基，苯并二氢吡喃基，异苯并二氢吡喃基，2，3-二氮杂萘基和咔啉基(carbolinyl))。
所述低级烷基可以是取代的或未取代的，优选未取代的。当取代时，通常存在1至3个取代基，优选1个取代基。取代基包括除了烷基、芳基和芳基烷基以外的以上列出的取代基基团。
如本文所用，术语“烷氧基”是指烷基-O-并且“烷酰基”是指烷基-CO-。烷氧基取代基或含有烷氧基的取代基基团可以被一个或多个烷基取代。
如本文所用，术语“卤素”是指氟，氯，溴或碘基团，优选氟、氯或溴基团，并且更优选为氟或氯基团。
药用盐是指保持式I化合物的生物学功效和性质的常规酸加成盐或碱加成盐并且可以由适合的非毒性有机或无机酸或有机或无机碱形成。酸加成盐的实例包括由无机酸衍生的那些和从有机酸衍生的那些，所述无机酸如盐酸，氢溴酸，氢碘酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸和硝酸，所述有机酸如乙酸，对甲苯磺酸，水杨酸，甲磺酸，草酸，琥珀酸，柠檬酸，马来酸，乳酸，富马酸等。碱加成盐的实例包括从氢氧化铵，氢氧化钾，氢氧化钠，和氢氧化季铵，如例如四甲基氢氧化铵衍生的那些。将药用化合物(即药物)化学修饰为盐是本领域公知的技术，其用于试图改善涉及化合物的物理或化学稳定性，例如吸湿性，流动性或溶解性的性质。见，例如H.Ansel等.，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(药物剂型和药物递送系统)(第6版.1995)第196和1456-1457页。
“药用酯”指具有羧基基团的式I的常规酯化化合物，所述酯可以保持式I的化合物的生物学有效性和性质并且在体内裂解(在生物体内)为相应的活性羧酸。在体内被裂解(在这种情形下被水解)为相应的羧酸的酯基的实例是其中被裂解的氢被低级烷基取代的那些，所述低级烷基被任选地取代，例如被杂环，环烷基等取代。取代的低级烷基酯的实例是其中低级烷基被吡咯烷，哌啶，吗啉，N-甲基哌嗪等取代的那些。在体内被裂解的基团可以是例如乙基，吗啉代乙基和二乙基氨基乙基。与本发明相关，-CONH2也被认为是酯，因为-NH2在体内被裂解并且被羟基替代以形成相应的羧酸。
术语“修饰的-Tyr”指以任何方式被修饰的酪氨酸，优选地被1-3个取代基，优选地1-2个取代基取代修饰，所述取代基独立地选自由低级-烷基和卤素组成的组。优选的修饰的-Tyr是甲基-酪氨酸，优选地C-α-甲基-酪氨酸(C-α-Me-Tyr)，3-碘代-酪氨酸((3-I)Y)，3，5-二氟-酪氨酸((3，5二F)Y)，2，6-二氟-酪氨酸((2，6二F)Y)和2，6-二甲基-酪氨酸((2，6二Me)Y)。另一个优选的修饰的-Tyr是间位-酪氨酸((m-)Y)。特别优选的修饰的-Tyr是在下面具体的实例中出现的那些。
术语“修饰的-Phe”指其中以任何方式被修饰的苯丙氨酸，优选地以1-4个取代基的取代进行修饰，所述取代基独立地选自由下列各项组成的组：低级-烷基，羟基-低级-烷基，氟-低级-烷基，低级-烷氧基，氨基和卤素。优选的修饰的-Phe是4-甲氧基-苯丙氨酸(F(4-O-CH3))，4-氨基-苯丙氨酸((4-NH2)Phe)，4-氟-苯丙氨酸((4-F)Phe)，4-羟基甲基-苯丙氨酸((4-CH2OH)Phe)，4-三氟甲基-苯丙氨酸((4-CF3)Phe)，3-氟-苯丙氨酸((3-F)Phe)，2，3，4，5，6-五氟-苯丙氨酸((2，3，4，5，6-五-F)Phe)和3，4-二氯苯丙氨酸((3，4二-Cl)Phe)。特别优选的修饰的-Tyr是在下面具体的实施例中出现的那些。
术语“羟基-低级-烷基”指如上定义的低级烷基，其被羟基取代，优选地被羟基甲基取代。
术语“氟-低级-烷基”指如上定义的低级-烷基，其被氟单或多取代。氟-低级-烷基的实例是例如CFH2，CF2H，CF3，CF3CH2，CF3(CH2)2，(CF3)2CH和CF2H-CF2，优选地CF3。
具体地，本发明涉及式(I)的神经肽-2受体激动剂：
其中：
X是4-氧代-6-(1-哌嗪基)-3(4H)-喹唑啉-乙酸(Pqa)，
Y是H，酰基部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的低级烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷氧基，聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC，
Y′是H，聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC，
R1是Ile，Ala，(D)Ile，N-甲基Ile，Aib，1-1 Aic，2-2 Aic，Ach或Acp，
R2是Lys，Ala，(D)Lys，NMelys，Nle或(Lys-Gly)，
R3是Arg，Ala，(D)Arg，N-甲基Arg，Phe，3，4，5-三氟Phe或2，3，4，5，6-五氟Phe，
R4是His，Ala，(D)His，N-甲基His，4-MeOApc，3-Pal或4-Pal，
R5是Tyr，Ala，(D)Tyr，N-甲基Tyr，Trp，Tic，Bip，Dip，(1)Nal，(2)Nal，3，4，5-三氟Phe或2，3，4，5，6-五氟Phe，
R6是Leu，Ala，(D)Leu或N-甲基Leu，
R7是Asn，Ala或(D)Asn，
R8是Leu或Trp，
R9是Val，Ala，(D)Val或N-甲基Val，
R10是Thr，Ala或N-甲基Thr，
R11是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg，
R12是Gln或Ala，
R13是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg，
R14是Tyr，(D)Tyr或N-甲基Tyr，修饰的-Tyr，Phe，修饰的-Phe，Cha，(1)Nal，(2)Nal，C-α-甲基Tyr或Trp，且
PEGm是1到60KDa，
或其药用盐。
式(I)的化合物是单独优选的并且其药用盐是单独优选的，其中式(I)的化合物是特别优选的。
如上所述优选的神经肽-2受体激动剂是特征在于式(Ia)的那些：
Y-R1-R2-X-R3-R4-R5-R6-R7-R8-R9-R10-R11-R12-R13-R14-NH2(Ia)
其中：
X是N-哌嗪-1-基-4(3H)-喹唑啉酮-3-乙酸(Pqa)，
Y是H，酰基部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的低级烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷氧基，聚乙二醇部分，PEG-SSA，PEG-β-SBA，PEG-SPA或PEG-BTC，
R1是Ile，Ala，(D)Ile，N-甲基Ile，Aib，1-1 Aic，2-2 Aic，Ach或Acp，
R2是Lys，Ala，(D)Lys，NMelys，Nle或(Lys-Gly)，
R3是Arg，Ala，(D)Arg，N-甲基Arg，Phe，3，4，5-三氟Phe或2，3，4，5，6-五氟Phe，
R4是His，Ala，(D)His，N-甲基His，4-MeOApc，3-Pal或4-Pal，
R5是Tyr，Ala，(D)Tyr，N-甲基Tyr，Trp，Tic，Bip，Dip，(1)Nal，(2)Nal，3，4，5-三氟Phe或2，3，4，5，6-五氟Phe，
R6是Leu，Ala，(D)Leu或N-甲基Leu，
R7是Asn，Ala或(D)Asn，
R8是Leu或Trp，
R9是Val，Ala，(D)Val或N-甲基Val，
R10是Thr，Ala或N-甲基Thr，
R11是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg，
R12是Gln或Ala，
R13是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg，且
R14是Tyr，(D)Tyr或N-甲基Tyr，修饰的-Tyr，Phe，修饰的-Phe或Trp，
或其药用盐。
本发明优选的实施方案涉及如上定义的神经肽-2受体激动剂，其中R2被Y′取代，并且Y′是H，聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC。更优选地，Y′是聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC。
本发明的另一个优选的实施方案涉及如上定义的神经肽-2受体激动剂，其中
Y是H或酰基部分，且
Y′是聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC。更优选地，Y′是PEGm-SSA或PEGm-SPA。
优选地，Y是酰基部分。在另一个优选的实施方案中，Y可以是H。此外，优选地是Y′可以是H。
在如上定义的神经肽-2受体激动剂中，优选地是PEGm是20到40KDa。优选地，PEGm是30KDa。优选地，聚乙二醇部分具有1-60KDa的分子量(weight)，更优选地20到40KDa，更优选地30KDa的分子量。
在如上定义的神经肽-2受体激动剂中，优选的是，R1是Ile。此外，优选的是R2是Lys或Nle。此外，优选的是R3是Arg。此外，优选的是R4是His。此外，优选的是R5是Tyr。此外，优选的是R6是Leu。此外，优选的是R7是Asn。此外，优选的是R8是Leu或Trp。此外，优选的是R9是Val。此外，优选的是R10是Thr。此外，优选的是R11是Arg。此外，优选的是R12 Gln。此外，优选的是R13是Arg或(N-甲基)Arg。
此外，优选的是R14是Tyr，(D)Tyr或N-甲基Tyr，修饰的-Tyr，Phe，修饰的-Phe或Trp。优选地，R14是Y，(m-)Y，(3-I)Y，(3，5二F)Y，(2，6二F)Y，(2，6二Me)Y，F(4-O-CH3)，F，(4-NH2)Phe，(4-F)Phe，(4-CH2OH)Phe，(4-CF3)Phe，(3-F)Phe，(2，3，4，5，6五F)Phe，(3，4二Cl)Phe，Cha，W，(1)Nal，(2)Nal或C-α-Me-Tyr。更优选地，R14是Tyr或(2，6二F)Tyr。
如上所述优选的神经肽-2受体激动剂是选自由下列各项组成的组的那些：
IK-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RY，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(m-)Y，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(3-I)Y，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(3，5二F)Y，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(2，6二F)Y，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(2，6二Me)Y，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RF(4-O-CH3)，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RF，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(4-NH2)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(4-F)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(4-CH2OH)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(4-CF3)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(3-F)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(2，3，4，5，6五F)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(3，4二Cl)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RCha，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RW，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(1)Nal，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(2)Nal，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQR-C-α-Me-Tyr，
IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)R(2，6二F)Y，
Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
戊基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
三甲基乙酰基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
环己基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
苯甲酰基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
金刚烷基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
(PEG 30,000 SPA)IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
(PEG40,000 BTC)-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基RY，
(PEG30,000)-SSA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
(PEG30,000)-β-SBA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SPA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，和
IK(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
或其药用盐。
其它如上所述的优选的神经肽-2受体激动剂是选自由下列各项组成的组的那些：
Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SPA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，和
IK(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
或其药用盐。
优选如上所述的化合物，其不作为药用盐形式存在。上述提及的每个个体化合物分别构成优选的实施方案。
特别优选的如上定义的神经肽-2受体激动剂是这样的一种，其中所述激动剂是Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)R(2-6二F)Y。
另一种特别优选的如上定义的神经肽-2受体激动剂是这样的一种，其中所述激动剂是Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY。
另一种特别优选的如上定义的神经肽-2受体激动剂是这样的一种，其中所述激动剂是(PEG 30,000)-SPA-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY。
另一种特别优选的如上定义的神经肽-2受体激动剂是这样的一种，其中所述激动剂是(PEG30,000)-SSA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY。
另一种特别优选的如上定义的神经肽-2受体激动剂是这样的一种，其中所述激动剂是Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY。
另一种特别优选的如上定义的神经肽-2受体激动剂是这样的一种，其中所述激动剂是H-Ile-Lys(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY。
如上所述的神经肽-2受体激动剂不是PEG化的，即其中Y和Y′都不是聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC，其也可以用作制备化合物的中间体，其中Y和Y′中的一个或两个是聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC。可以通过本领域技术人员公知的标准方法引入这样的基团Y和Y′。
优选地，如上所述的神经肽-2受体激动剂不选自由下列各项组成的组：
IK-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
Ac-IK-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
IK-Pqa-RHYLNLVTRARY，
IK-Pqa-RHYLNLVARQRY，
IK-Pqa-RHYLNLATRQRY，
IK-Pqa-RHYLALVTRQRY，
IK-Pqa-RHYANLVTRQRY，
IK-Pqa-RHALNLVTRQRY，
IK-Pqa-RAYLNLVTRQRY，
IK-Pqa-AHYLNLVTRQRY，
IA-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
Ac-IA-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
AK-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQR(D)Y，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(D)RY，
IK-Pqa-RHYLNLVT(D)RQY，
IK-Pqa-RHYLNL(D)VTRQRY，
IK-Pqa-RHYL(D)NLVTRQRY，
IK-Pqa-RHY(D)LNLVTRQRY，
IK-Pqa-RH(D)YLNLVTRQRY，
IK-Pqa-R(D)HYLNLVTRQRY，
IK-Pqa-(D)RHYLNLVTRQRY，
I(D)K-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
(D)IK-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQR(N-甲基)Y，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RY，
IK-Pqa-RHYLNLVT(N-甲基)RQRY，
IK-Pqa-RHYLNLV(N-甲基)TRQRY，
IK-Pqa-RHYLNL(N-甲基)VTRQRY，
IK-Pqa-RHY(N-甲基)LNLVTRQRY，
IK-Pqa-RH(N-甲基)YLNLVTRQRY，
IK-Pqa-R(N-甲基)HYLNLVTRQRY，
IK-Pqa-(N-甲基)RHYLNLVTRQRY，
I(N-甲基)K-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
(N-甲基)IK-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
INle-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-FHYLNLVTRQRY，
IK-Pqa-RHWLNLVTRQRY，
IK-Pqa-AHWLNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-RHYLNLVTRQR(D)Y，
Ac-INle-Pqa-RHYLNLVTRQR(N-甲基)Y，
Ac-INle-Pqa-RHTicLNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-RHBipLNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-RHDipLNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-RH(1)NalLNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-RH(2)NalLNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-RH(3.4，5三氟Phe)LNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-RH(2，3.4，5，6五氟Phe)LNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-R(4-MeOApc)YLNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-R(3-Pal)YLNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-R(4-Pal)YLNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-(3，4，5三氟Phe)HYLNLVTRQRY，
Ac-INle-Pqa-(2，3，4，5，6五氟Phe)HYLNLVTRQRY，
Ac-Aib-Nle-Pqa-RHYLNLVTRQRT，
Ac1-1-Aic-Nle-Pqa-RHYLNLVTRQRT，
Ac1-1-Aic-Nle-Pqa-RHYLNLVTRQRT，
Ac-2-2Aic-Nle-Pqa-RHYLNLVTRQRT，
Ac-Ach-Nle-Pqa-RHYLNLVTRQRT，
Ac-Acp-Nle-Pq a-RHYLNLVTRQRT，
H-INle-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
(PEG-10,000)INle-Pqa-RHYLNLVTRQRY，和
(PEG-30,000)INle-Pqa-RHYLNLVTRQRY.
本发明的化合物还是有利的，因为例如它们是PYY3-36的截短形式。例如，该较短的肽不仅促进化合物的更容易的合成和纯化，而且改善和减少了制造程序和费用。此外，本发明的化合物将优选与Y2受体相互作用，并且不与同源的受体如NPY Y1，Y4和Y5相互作用。不希望有的激动或拮抗副反应由此被最小化。
本发明的化合物优选地用于治疗代谢疾病和病症。所述代谢疾病和病症包括，例如肥胖症，糖尿病，优选地2型糖尿病，代谢综合征(也称为综合征X)，胰岛素抗性，异常脂肪血症，空腹血糖受损(impaired fastingglucose)和葡萄糖耐量异常。
因此，本发明还涉及包含如上定义的神经肽-2受体激动剂和药用载体和/或辅剂的药物组合物。
同样，本发明包括如上所述的神经肽-2受体激动剂，其用作治疗活性物质，尤其是作为用于治疗和/或预防由神经肽-2受体激动剂调节的疾病的治疗活性物质，特别是作为用于治疗和/或预防肥胖症，2型糖尿病，代谢综合征，胰岛素抗性，异常脂肪血症，空腹血糖受损和葡萄糖耐量异常的治疗活性物质。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及用于治疗和/或预防性治疗由神经肽-2受体激动剂调节的疾病，特别是用于治疗性和/或预防性治疗代谢疾病或病症，尤其是肥胖症，2型糖尿病，代谢综合征，胰岛素抗性，异常脂肪血症，空腹血糖受损和葡萄糖耐量异常的方法，所述方法包括将如上定义的神经肽-2受体激动剂施用于人或动物。在如上所述的优选的方法中，所述神经肽-2受体激动剂一日一次地施用于所述患者。优选地，所述神经肽-2受体激动剂每三天一次地施用于所述患者。更优选地，将所述神经肽-2受体激动剂一周一次地施用于所述患者。优选的是，将所述神经肽-2受体激动剂以下列方式施用于所述患者：口服，鼻内，静脉内，皮下，肠胃外，透皮，腹膜内或直肠或通过吸入。优选地，所述神经肽-2受体激动剂鼻内施用。还优选的是，所述神经肽-2受体激动剂通过皮下施用。在上述方法中，所述神经肽-2受体激动剂优选地以约0.001到约100mg的剂量进行施用。
本发明还包括将如上定义的神经肽-2受体激动剂用于治疗性和/或预防性治疗由神经肽-2受体激动剂调节的疾病，特别是用于治疗性和/或预防性治疗肥胖症，2型糖尿病，代谢综合征，胰岛素抗性，异常脂肪血症，空腹血糖受损和葡萄糖耐量异常的应用。
本发明还涉及如上所述的神经肽-2受体激动剂用于制备药物的应用，所述药物用于治疗性和/或预防性治疗由神经肽-2受体激动剂调节的疾病，特别是用于治疗性和/或预防性治疗肥胖症，2型糖尿病，代谢综合征，胰岛素抗性，异常脂肪血症，空腹血糖受损和葡萄糖耐量异常。所述药物包括如上所述的神经肽-2受体激动剂。
应当理解，本发明不限于本文所述的本发明的具体实施方案，因为可以进行具体实施方案的改变并且仍落入后附权利要求的范围内。还应当理解，所用的术语是为了描述具体实施方案而不意欲是限制性的。实际上，本发明的范围将由后附权利要求所确定。
涉及用于递送药物化合物的酯的实例和应用的另外的信息可获自Design of Prodrugs(前药设计).Bundgaard H.ed.(Elsevier，1985).还见，H.Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(药物剂型和药物递送系统)(第6版.1995)，第108-109页；Krogsgaard-Larsen，等，Textbook of Drug Design and Development(药物设计和开发的教科书)(第二版.1996)，第152-191页。
本发明的代表性化合物可以通过用于在氨基酸之间形成肽键的任何已知常规方法容易地合成。这些常规方法包括例如任何溶液相方法，该方法允许氨基酸或其残基(它的羧基和其它反应性基团被保护)的游离α-氨基基团和另一个氨基酸或其残基(它的氨基或其它反应性基团被保护)的游离的伯羧基基团之间的缩合。
这些用于合成本发明新型化合物的常规方法包括例如任何固相肽合成法。在该方法中，新化合物的合成可以如下进行：按照固相法的一般原理，顺序将所需氨基酸残基每次一个结合到生长的肽链上。这些方法公开在例如Merrifield，R.B.，美国化学协会(J.Amer.Chem.Soc.)85，2149-2154(1963)；Barany等，The Peptides，Analysis，Synthesis and Biology(肽，分析，合成和生物学)，Vol.2，Gross，E.和Meienhofer，J.，Eds.学术出版社(Academic Press)1-284(1980)中，其通过参考结合于此。
肽化学合成常见的是用适当的保护基将各种氨基酸部分的反应性侧链基团进行保护，这将防止在该位点的化学反应发生，直至保护基被最终去除。通常还常见的是在该实体在羧基上反应时，将氨基酸或其片段上的α氨基基团进行保护，接着选择性去除α氨基保护基，使得可以在该位点进行随后的反应。尽管关于固相合成法公开了特定的保护基，应当理解，在溶液相合成中每个氨基酸可以被常规用于各个氨基酸的保护基保护。
α氨基可以被选自下列各项的适当的保护基保护：芳族氨基甲酸乙酯类型的保护基，如烯丙氧羰基，苄氧羰基(Z)和取代的苄氧羰基，如对氯苄氧羰基，对硝基苄氧羰基，对溴苄氧羰基，对联苯基-异丙氧羰基，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)和对甲氧基苄氧羰基(Moz)；脂族氨基甲酸乙酯类型的保护基，如叔丁氧羰基(Boc)，二异丙基甲氧羰基，异丙氧羰基，和烯丙氧羰基。这里，Fmoc最优选用于α氨基保护。
胍基可以通过选自下列各项的适当保护基保护：硝基，对甲苯磺酰基(Tos)，(Z，)五甲基色烷磺酰基(Pmc)，4-甲氧基-2，3，6，-三甲基苯磺酰基(Mtr)，(Pmc)，并且(Mtr)最优选用于精氨酸(Arg)。
ε-氨基基团可以通过选自下列各项的适当保护基保护：2-氯苄氧羰基(2-Cl-Z)，2-溴苄氧羰基(2-Br-Z)-和叔-丁氧羰基(Boc)。对于(Lys)，Boc是最优选的。
羟基(OH)可以通过选自下列各项的适当的保护基进行保护：苄基(Bzl)，2，6二氯苄基(2，6二Cl-Bzl)，和叔丁基(t-Bu)，对于(Tyr)，(Ser)和(Thr)，(tBu)是最优选的。
β-和γ-酰胺基团可以通过选自下列各项的适当的保护基进行保护：4-甲基三苯甲基(Mtt)，2，4，6-三甲氧基苄基(Tmob)，4，4-二甲氧基dityl双-(4-甲氧基苯基)-甲基(Dod)和三苯甲基(Trt)。对于(Asn)和(Gln)，Trt是最优选的。
吲哚基团可以通过选自下列各项的适当的保护基进行保护：甲酰基(For)，2，4，6-三甲苯基-2-磺酰基(Mts)和叔丁氧羰基(Boc)。对于(Trp)，Boc是最优选的。
咪唑基可以通过选自下列各项的适当的保护基进行保护：苄基(Bzl)，-叔丁氧羰基(Boc)，和三苯甲基(Trt)。对于(His)，Trt是最优选的。
氨基酸Pqa的合成通过J.Hutchinson等(J.Med.Chem(医药化学杂志).1996，39，4583-4591)所述进行。Fmoc-Pqa衍生物购自NeoMPS，公司.(圣地亚哥CA)。
所有的溶剂，异丙醇(iPrOH)，二氯甲烷(CH2Cl2)，二甲基甲酰胺(DMF)和N-甲基吡咯啉酮(NMP)购自费雪(Fisher)或Burdick & Jackson并且在不另外蒸馏下使用。三氟乙酸商购自卤烃(Halocarbon)或Fluka并且在不进一步纯化下使用。
二异丙基碳二亚胺(DIC)和二异丙基乙胺(DIPEA)购自Fluka或阿德里奇(Aldrich)并且在不进一步纯化下使用。羟基苯并三唑(HOBT)、二甲硫(DMS)和1，2-乙二硫酚(EDT)购自希格玛化学公司(Sigma Chemical Co.)并且在不进一步纯化下使用。保护的氨基酸通常是L构型并且商购自Bachem，或Neosystem。这些试剂的纯度在使用前通过薄层色谱法、NMR和熔点证实。二苯甲基胺树脂(BHA)是获自Bachem或Advanced Chemtech的苯乙烯-1％二乙烯基苯(100-200或200-400目)的共聚物。这些树脂的总氮含量通常为0.3-1.2meq/g。
在优选实施方案中，通过Merrifield，(美国化学协会(J.Amer.Chem.Soc.)，85，2149(1963))一般描述的方法，使用固相合成制备肽，但是如先前所述，可以使用本领域已知的其它等同的化学合成。固相合成从肽的C-末端开始，将保护的α-氨基酸偶联至适当的树脂。该原材料可以通过将α-氨基-保护的氨基酸通过酯键连接到对-苄氧基苄基醇(Wang)树脂上，或通过Fmoc-接头，如对((R，S)-α-(1-(9H-芴-9-基)-甲氧基甲酰胺基)-2，4-二甲氧基苄基)-苯氧基乙酸(Rink接头)之间的酰胺键连接到二苯甲基胺(BHA)树脂来制备。羟基甲基树脂的制备是本领域公知的。Fmoc-接头-BHA树脂支持体是可商购的并且通常当被合成的所需肽在C-末端具有未取代的酰胺时使用。
典型地，使用氨基酸或模拟物的Fmoc保护形式，用2-5当量的氨基酸和适当的偶联剂，将氨基酸或模拟物偶联到Fmoc-接头-BHA树脂上。在偶联后，可以洗涤树脂并在真空下干燥。氨基酸在树脂上的负载可以通过对等分试样的Fmoc-氨基酸树脂的氨基酸分析、或通过UV分析测定Fmoc基团来确定。任何未反应的氨基可以通过将树脂与在二氯甲烷中的乙酸酐和二异丙基乙胺反应来加帽。
将树脂进行几个重复循环以将氨基酸顺序加入。在碱性条件下去除α氨基Fmoc保护基。在DMF中的哌啶，哌嗪或吗啉(20-40％v/v)可以用于该目的。优选使用DMF中的40％哌啶。
在去除α氨基保护基之后，将随后保护的氨基酸以所需顺序逐步偶联以获得中间体，保护的肽-树脂。在肽的固相合成中用于氨基酸偶联的活化试剂是本领域公知的。例如，用于该合成的适当试剂是苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP)，溴-三-吡咯烷子基-鏻六氟磷酸盐(PyBroP)，2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)，和二异丙基碳二亚胺(DIC)。这里优选HBTU和DIC。可以使用Barany和Merrifield描述的其它活化剂(在The Peptides(肽)，卷2，J.Meienhofer，ed.，学术出版社(Academic Press)，1979，第1-284页中)。可以将各种试剂如1羟基苯并三唑(HOBT)，N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)和3，4-二氢-3-羟基-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪(HOOBT)加入偶联混合物中，以便最优化合成循环。这里优选HOBT。
为了制备N端乙酰基衍生物，通过用在DMF中的20％  酸酐和5％的DIEA处理树脂结合肽进行乙酰化作用。对于其它N端酰化作用，使用用DIC/HOBT原位活化的相应的羧酸进行酰化作用30分钟。
用于典型的合成循环的方案如下：
方案1
步骤        试剂            时间
1           DMF             2×30秒
2           20％哌啶/DMF    1分钟
3           20％哌啶/DMF    15分钟
4           DMF             2×30秒
5           iPrOH           2×30秒
6           DMF             3×30秒
7           偶联            60分钟-18小时.
8           DMF             2×30秒
9           iPrOH           1×30秒
10          DMF             1×30秒
11          CH2Cl2          2×30秒
将用于所有洗涤和偶联的溶剂测量至10-20ml/g树脂的体积。贯穿合成的偶联反应通过Kaiser Ninhydrin试验监视，以确定完成的程度(Kaiser等，分析生物化学(Anal.Biochem.)34，595-598(1970))。对于Fmoc-Arg(Pmc)和对于空间位阻的酸与仲胺的偶联观察到缓慢反应动力学。任何不完全的偶联反应或者与新鲜制备的活化氨基酸重新偶联，或者如上所述通过用乙酸酐处理肽树脂来加帽。将完全装配的肽-树脂在真空中干燥数小时。
对于大多数化合物，去除封闭基团并从树脂上裂解肽。例如，每克树脂用100μL乙二硫酚，100μL二甲硫，300μL苯甲醚，和9.5mL三氟乙酸，在室温下处理肽树脂180分钟。或备选地，每克树脂用1.0mL三异丙基硅烷和9.5mL三氟乙酸，在室温下处理肽树脂180分钟。将树脂滤去，滤液在猝冷的乙醚中沉淀。将沉淀物离心并滗析乙醚层。将残余物用两个或三个体积的Et2O洗涤并再离心。将粗产物在真空下干燥。
优选地，通过在反相C-18柱(50×250mm.300 A，10-15μm)上的高效液相色谱法(HPLC)在Shimadzu LC-8A系统上进行粗制肽的纯化。将肽在最小体积的0.1AcOH/H2O或CH3CH/H2O中注射到柱中。梯度洗脱通常以2％B缓冲液开始，70分钟内2％-70％B，(缓冲液A：0.1％TFA/H2O，缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN)，流速50ml/min。在220/280nm下进行UV检测。分离含有产物的级分并在Shimadzu LC-10AT分析系统上判断它们的纯度，其中使用反相Ace C18柱(4.6×50mm)，流速为2ml/min.，10分钟内梯度(2-70％)(缓冲液A：0.1％TFA/H2O，缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN))。将判断为高纯度的级分合并和冻干。
最终产品的纯度通过在如上所述的反相柱上的分析HPLC检查。所有产品的纯度据判断为大约95-99％。所有的终产品还进行快原子轰击质谱(FAB-MS)或电雾化质谱(ES-MS)。所有产品产生了预期的在可接受范围内的母体M+H离子。
本发明的化合物可以以药用盐的形式提供。优选的盐的实例是与药用有机酸以及聚合酸形成的那些和与无机酸形成的盐，所述有机酸如乙酸、乳酸、马来酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、苯甲酸、水杨酸、甲磺酸、甲苯磺酸、三氟乙酸或双羟萘酸，所述聚合酸如鞣酸或羧甲基纤维素，所述无机酸如氢卤酸(例如，盐酸)，硫酸，或磷酸等。可以使用本领域技术人员已知的任何获得药用盐的方法。
在本发明方法的实施中，将有效量的任何本发明的肽或任何本发明的肽的组合或其药用盐经由任何常规的和本领域已知的可接受的方法、单独或者组合施用。施用可以例如进行一天一次，每三天一次或一周一次。化合物或组合物因此可以通过以下方式施用：口服(例如口腔)，舌下，肠胃外(例如，肌内，静脉内，或皮下)，直肠(例如，通过栓剂或洗剂)，透皮(例如，皮肤电穿孔)或通过吸入(例如通过气溶胶)，和以固体、液体或气体剂型的形式，包括片剂和混悬剂。给药可以以单一单位剂量形式连续治疗或随意以单一剂量治疗进行。治疗组合物还可以是油乳剂或与亲油性盐如双羟萘酸结合的分散体的形式，或者是用于皮下或肌内给药的生物可降解的缓释组合物的形式。
因此，当症状的减轻特别需要或可能危急时，实施本发明的方法。备选地，本发明的方法作为连续或预防性治疗而有效实施。
用于制备由此的组合物的有用药物载体可以是固体，液体或气体；因此，组合物可以采取片剂，丸剂，胶囊，栓剂，粉末，肠溶包衣或其它保护的制剂(例如结合在离子-交换树脂上或包装在脂-蛋白泡囊中)，缓释制剂，溶液，混悬剂，酏剂，气溶胶等形式。载体可以选自各种油类，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，例如花生油，大豆油，矿物油，芝麻油等。水、盐水、葡萄糖溶液和二元醇是优选的液体载体，特别是(当与血液等渗时)用于注射液。例如，用于静脉内给药的制剂包括活性成分的无菌水溶液，其制备如下：将固体活性成分溶解在水中，产生水溶液，并使得溶液无菌。适当的药用赋形剂包括淀粉，纤维素，滑石，葡萄糖，乳糖，滑石，明胶，麦芽，大米，面粉，白垩，硅石，硬脂酸镁，硬脂酸钠，单硬脂酸甘油酯，氯化钠，干脱脂奶粉，甘油，丙二醇，水，乙醇等。组合物可以加入常规药物添加剂，如防腐剂，稳定剂，润湿剂或乳化剂，用于调节渗透压的盐，缓冲剂等。适当的药用载体和它们的制剂在E.W.Martin的Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿制药科学)中描述。这些组合物在任何情况下将含有有效量的活性化合物以及适当的载体，以便制备用于适当给药于接受者的适当剂型。
本发明的化合物的剂量取决于许多因素，如例如，给药方式，受试者的年龄和体重，和待治疗的受试者的病症，并且最终将由主治医生或兽医所决定。这样的由主治医生或兽医确定的活性化合物的量在本文中和在权利要求中称为“有效量”。例如，用于鼻内给药的剂量典型地在约0.001至约0.1mg/kg体重的范围内。在人中，基于肽含量的优选的皮下剂量来自约0.001mg到约100mg；优选地来自约0.1mg到约15mg。对于API，其范围从约0.015mg到约100mg；优选地从约1mg到约100mg。
现在将在以下列出的实施例中进一步描述本发明，其意欲仅仅作为举例说明而不限制本发明的范围。
实施例
试剂的制备
mPEG 30k -甲磺酸酯
Figure A20068004437700321
在装备磁力搅拌器，迪安-斯达克捕获器，回流冷凝器和氩(或氮)进口鼓泡器的1L圆底烧瓶中填充100g(3.34mmol)的mPEG 30 kDa(获自日本油脂(Nippon Oil and Fat))和500mL的甲苯。通过蒸馏除去250mL甲苯来共沸干燥在甲苯中的PEG溶液并接着将所述溶液冷却到室温。向所述溶液中，加入200mL的无水二氯甲烷，并将所述溶液冷却到0-5℃并将0.67mL(4.84mmol)三乙胺和0.33mL(4.34mmol)的甲磺酰氯使用注射器通过橡胶隔片逐滴加入。将所述混合物在约4℃搅拌2小时并接着在氩气下室温搅拌过夜。
将所述混合物在旋转式蒸发仪上浓缩并通过粗糙玻璃粉进行过滤以去除盐。(注意：在过滤过程中升温玻璃粉以防止溶液固化)。通过加入约1800ml的冷异丙醇和二乙醚(30∶70，v/v)来沉淀所述产物。收集所述产物并且在室温下在真空中干燥过夜以得到90g(90％)的白色固体。
步骤2.mPEG 30k -胺
Figure A20068004437700331
将装备磁力搅拌器和氩气进口鼓泡器的2L圆底烧瓶填充以在上面制备的90g(3mmol)mPEG 30 kDa甲磺酸酯2和1600mL的氢氧化铵水溶液(30％，v/v)。向该溶液中加入160g的氯化铵。将所述溶液小心升温以溶解所有的PEG甲磺酸酯。在室温将得到的溶液搅拌48小时，同时通过鼓泡器排出过量的气体以防止在反应瓶中的压力累积。
反应结束后，加入160g(10wt％)的氯化钠并将所述混合物用3×200mL＝1200mL的二氯甲烷提取。将合并的有机提取物通过无水硫酸钠干燥约1小时，过滤并且在旋转式蒸发仪上浓缩。将所述产物通过加入1800mL的冷二乙醚沉淀，过滤并在室温在真空下干燥过夜以得到作为白色固体的85g(94％)3。
步骤3.mPEG 30k -琥珀酰亚胺酸
Figure A20068004437700332
将装配磁力搅拌器和氩气进口鼓泡器的1L圆底烧瓶填充以60g(2.00mmol)的mPEG 30 kDa胺3和500mL的无水乙腈。将所述溶液冷却到约4℃，接着将在50mL无水乙腈中的2g(20.00mmol)琥珀酐使用加入漏斗缓慢加入。在氩气流下，将反应混合物在室温搅拌过夜。
反应结束后，通过旋转式蒸发仪蒸发溶剂至干燥。接着，将所述产物溶解在400mL水中。将所述溶液的pH用1M NaOH溶液调节到7.0并搅拌1小时，同时保持pH在7.0。向该溶液中，加入40g(10wt.％)氯化钠并用6N HCl溶液调节pH到～4.2。将得到的水性混合物用200，100，50mL＝350mL的二氯甲烷进行提取。将合并的有机提取物通过无水硫酸钠干燥约1小时。过滤硫酸钠并且在旋转式蒸发仪上浓缩滤液。在1L的冷二乙醚中沉淀产物。收集产物并且在室温在真空下将其干燥过夜以得到作为白色固体的56g(93％)的4。
步骤4.mPEG 30k -琥珀酰亚胺基琥珀酰亚胺
Figure A20068004437700341
将装配磁力搅拌器和氩气进口鼓泡器的500-mL的圆底烧瓶填充以56g(1.87mmol)的mPEG 30 kDa琥珀酰亚胺酸4和500mL的无水二氯甲烷。向该溶液中，缓慢加入0.24g(2.05mmol)的N-羟基琥珀酰亚胺和0.46g(2.24mmol)的1，3-二环己基碳二亚胺。将所述反应混合物在氩气流下在室温搅拌过夜。
反应结束后，在旋转式蒸发仪上将混合物蒸发至干燥。接着，将所述产物溶解在200mL的无水甲苯中并将所述溶液通过预温热的粗糙玻璃粉过滤，所述玻璃粉置有硅藻土垫。通过加入1200mL的冷无水异丙醇和二乙醚(30∶70，v/v)来沉淀产物。收集产物并且在室温在真空下干燥过夜以得到作为白色固体的20g(80％)的5。
优选化合物的制备
实施例1
制备Fmoc-接头-BHA树脂
将二苯甲基胺共聚苯乙烯-1％二乙烯基苯交联树脂(10.0g，9.3m当量(mequiv)，100-200 ASTM目，高等化学技术(Advanced ChemTech))溶胀在100mL CH2Cl2中，过滤并连续用100ml的各个CH2Cl2，6％DIPEA/CH2Cl2(两次)，CH2Cl2(两次)洗涤。将树脂用在100mL 25％DMF/CH2Cl2中的对-((R，S)-α-(1-(9H-芴-9-基)-甲氧基甲酰胺基)-2，4-二甲氧基苄基)-苯氧基乙酸(Fmoc-接头)(7.01g，13.0mmol)、N-羟基苯并三唑(2.16g，16.0mmol)和二异丙基-碳二亚胺(2.04ml，13.0mmol)在室温下处理24小时。将树脂过滤并连续用100ml的各个CH2Cl2(两次)，异丙醇(两次)，DMF，和CH2Cl2(三次)洗涤。Kaiser Ninhydrin分析是阴性的。将树脂在真空下干燥，获得16.12g的Fmoc-接头-BHA树脂。将一部分该树脂(3.5mg)进行Fmoc脱保护和定量UV分析，其显示负载为0.56mmol/g。
实施例2
使用芴基甲基氧基羰基(Fmoc)化学方法，通过应用生物系统433A合成仪合成肽的方案
对于通过应用生物系统(Applied Biosystem)433A合成仪(Foster City，CA)的0.25mmol规模的肽合成，使用FastMoc 0.25mmol循环，使用树脂取样或非树脂取样，41mL反应容器。将Fmoc-氨基酸树脂与2.1g NMP，2g的在DMF中的0.45M HOBT/HBTU和2M DIEA溶解，然后转移到反应容器中。用“BADEIFD，”表示基本的FastMoc偶联循环，其中每个字母表示一个模块(如通过应用生物系统(Applied Biosystem)所定义)。例如：
B表示用于Fmoc脱保护的模块，使用20％哌啶/NMP和相关洗涤，并且读取30分钟(或者UV监视或电导率)；A表示用0.45 M HBTU/HOBt和2.0 M DIEA活化柱体中氨基酸并用N2鼓泡混合的模块；D表示在反应容器中NMP洗涤树脂的模块；E表示将活化氨基酸转移至用于偶联的反应容器的模块；I表示反应容器的10分钟等待时期的模块，其中断断续续地涡旋；和F表示用于清洗柱体、偶联约10分钟和排干反应容器的模块。偶联典型地通过一次或多次增加模块“I”而延展。例如，通过执行程序“BADEIIADEIFD”进行双偶联。可以提供其它模块，例如用于二氯甲烷洗涤的c和用于用乙酸酐加帽的“C”。单独的模块也是可更改的，例如通过改变各种功能的定时，如转移时间，以便改变被转移的溶剂或试剂的量。以上的循环典型地用于偶联一个氨基酸。然而对于合成四肽，重复循环并且连贯起来。例如，将BADEIIADEIFD用于偶联第一个氨基酸，接着BADEIIADEIFD偶联第二个氨基酸，接着BADEIIADEIFD偶联第三个氨基酸，接着BADEIIADEIFD偶联第四个氨基酸，接着BIDDcc用于最终脱保护和洗涤。
实施例3
H-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-Arg-Tyr-Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-The-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(PYY3-36)的制备
使用Fmoc化学，在应用生物系统(Applied Biosystem)433A合成仪上合成上述肽。使用实施例2所述的模块，对于双偶联对合成仪进行编程。合成在0.25mmol规模上进行，使用来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)。在合成结束时，将树脂转移到振荡器上的反应容器中用以裂解。在室温下使用13.5mL 97％TFA/3％H2O和1.5mL三异丙基硅烷，将肽从树脂上裂解180分钟。将脱保护溶液加入100mL冷ET2O中，用1mL TFA和30mL冷ET2O洗涤以沉淀肽。将肽在2×50mL聚丙烯管中离心。将来自单个管的沉淀合并在单一管中，并用冷ET2O洗涤3次，并在干燥器中在室内真空(house vacuum)下干燥。
将粗制物质通过在Pursuit C18-柱(250×50mm，10μm粒度)上的制备HPLC纯化，并在90分钟内用2-70％B(缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN)线性梯度洗脱，流速60mL/min，并且220/280nm检测。收集级分并通过分析HPLC检查。将含有纯产物的级分合并和冻干而获得151mg(15％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值(“calcd”)C180H279N53O54 4049.55，实测值4050.40。
实施例4
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700371
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化获得48mg(9％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C98H155N33O21 2131.53实测值2130.56。
实施例5
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成(将N-甲基Arg插入所述序列的35位)并按照实施例3中的方法纯化，获得32mg(6％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C99H155N33O212143.56实测值2143.50。
实施例6
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-m-Tyr-NH2的制备
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生38.5mg(7％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C99H155N33O21 2143.5477实测值2143.50。
实施例7
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-3-碘代-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700382
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生41mg(7％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C99H154IN33O21 2269.44实测值2269.20。
实施例8
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-3，5二F-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700391
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生28mg(5％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C99H153F2N33O21 2179.52实测值2179.46。
实施例9
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-2，6二F-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700392
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生49.3mg(9％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C99H153F2N33O21 2179.53实测值2179.50。
实施例10
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-2，6二Me-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700393
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生13.5mg(3％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C101H159N33O21 2171.60实测值2171.40。
实施例11
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-4甲氧基-Phe-NH2的制备
Figure A20068004437700401
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生72mg(13％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C100H157N33O21 2157.57实测值2157.58。
实施例12
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Phe-NH2的制备
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生85.3mg(16％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C99H155N33O20 2127.55实测值2127.53。
实施例13
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-4氨基-Phe-NH2的制备
Figure A20068004437700411
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生51.4mg(10％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C99H156N34O20 2142.56实测值2142.55。
实施例14
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-4F-Phe-NH2的制备
Figure A20068004437700412
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生35mg(7％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C99H154FN33O20 2145.54实测值2145.51。
实施例15
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-4-(CH2OH)-Phe-NH2的制备
Figure A20068004437700413
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生24mg(4％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C100H1571N33O21 2157.57实测值2157.56。
实施例16
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-4-三氟甲基-Phe-NH2的制备
Figure A20068004437700421
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生81mg(15％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C100H154F3N33O20 2195.54实测值2195.51。
实施例17
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-3氟-Phe-NH2的制备
Figure A20068004437700422
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生84mg(16％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C99H154FN33O20 2145.54实测值2145.53。
实施例18
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-2，3，4，5，，6五氟-Phe-NH2的制备
Figure A20068004437700431
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生89mg(16％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C99H150FN33O20 2217.50实测值2217.48。
实施例19
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-3，4-二氯-Phe-NH2的制备
Figure A20068004437700432
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生46mg(8％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C99H153C12N33O20 2196.44实测值2196.41。
实施例20
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Cha-NH2的制备
Figure A20068004437700433
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生49mg(9％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C106H162N34O21 2248.69实测值2248.71。
实施例21
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Trp-NH2的制备
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生57mg(10％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C108H157N35O21 2281.68实测值2281.67。
实施例22
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-1-Nal-NH2的制备
Figure A20068004437700442
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生45mg(8％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C103H157N33O20 2177.61实测值2177.59。
实施例23
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-2-Nal-NH2的制备
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生43mg(8％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C103H157N33O20 2177.60实测值2177.58。
实施例24
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-C-α-甲基Tyr--NH2的制备
Figure A20068004437700452
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生35.1mg(7％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C99H155N33O21 2143.55实测值2143.56。
实施例25
H-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700453
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生130mg(23％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C104H154N34O21 2216.60实测值2216.62。
实施例26
H-Ile-Nle-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700461
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生84mg(15％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C104H153N33O21 2201.59实测值2201.56。
实施例27
Ac-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-2，6-F2-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700462
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生24mg(4％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C106H154F2N34O22 2099.49实测值2100.3
实施例28
Ac-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700471
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生68mg(12％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C106H156N34O22 2258.64实测值2258.61
实施例29
戊酰基(Pentoyl)-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生67mg(12％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C109H162N34O22 2300.72实测值2300.69。
实施例30
三甲基乙酰基-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700473
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生6mg(1％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C109H162F2N34O22 2300.72实测值2300.68。
实施例31
环己基乙酰基-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700481
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生15mg(3％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C112H166N34O22 2340.79实测值2340.81。
实施例32
苯甲酰基-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700482
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生23mg(4％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C111H158N34O22 2320.71实测值2320.68。
实施例33
金刚烷酰基(Adamantoyl)-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700483
将来自实施例1的Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成并按照实施例3中的方法纯化以产生29mg(5％)的白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e计算值C116H170N34O22 2392.86实测值2392.89。
对于实施例34-39和41的分析方法
使用下列反相HPLC/UV方法分析测试和对照制品：
自动取样器  Alliance Waters 2690分离模块(Alliance Waters 2690
            Separation Module)
注射体积    10μL
注射温度    室温
检测器      Waters 996光电二极管阵列检测器
检测器波长  280nm
柱          安捷伦(Agilent)Eclipse XDB-C8，5微米，150mm×4.6mm
            i.d.PN：99367-906
柱温        25℃
流速        1.0mL/分钟(～1000psi)
流动相A     包含0.05％TFA的水
流动相B     包含0.05％TFA的乙腈
运行时间    约30分钟
样品分离    约0.2-0.5mg/ml
稀释剂      去离子水
流动相梯度条件1(RP-HPLC1)：
Figure A20068004437700491
流动相梯度条件2(RP-HPLC2)：
Figure A20068004437700501
实施例34
(PEG-30,000)CH2CH2CO)Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2和Ile((PEG-30,000)CH2CH2CO)(ε)Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的混合物的制备
其中n＝～675
和
Figure A20068004437700503
其中n＝～675
分析方法 结果
RP-HPLC1-rxn混合物 69.8％转化
RP-HPLC1-纯化的 10.1分钟保留时间
MALDI-TOF MS 平均质量＝33.9kDa
称出来自实施例25的25mg肽并溶解在50mM硼酸盐，pH 7.5缓冲液中。称量500mg 30kDa PEG-琥珀酰亚胺基丙酸(购自Nektar)以获得2∶1PEG∶肽摩尔比并将其加入溶解的肽。将反应混合物在室温下搅拌过夜，之后在20mM NaOAc，pH 4.5缓冲液中稀释10倍，通过在SP-琼脂糖凝胶(Sepharose)FF上的阳离子交换色谱法纯化。图1是反应混合物的HPLC色谱图。反应产生69.8％的30kDa肽。
将单-PEG化的PYY肽使用梯级NaCl梯度洗脱。典型地，所需的单-PEG化的肽用250mM NaCl洗脱。洗脱的PEG-PYY-样肽在Amicon超滤室中使用10kDa MW截止值的膜进行浓缩。然后用PBS渗滤10倍一次。
将实施例34的浓缩肽提交分析，测定和贮存在-20℃。图2是纯化的30kDa PEG-PYY肽的HPLC色谱图(RT＝10.1min)。30kDa肽的纯度被测定为＞97％。图3是图表，表示进行30kDa PEG-PYY肽的MALDI-TOF以证实分子量。
将方法的组合用于确定PEG修饰位点。这些包括MALDI TOF MS，反相HPLC，蛋白水解消化和N-端测序(埃德曼(Edman))。来自这些分析的结果显示大部分PEG通过在肽的(R2)位上的赖氨酸的ε-氨基连接。
实施例35
((PEG-40,000)CO)Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2和Ile((PEG-40,000)CO)(ε)Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2混合物的制备
其中n＝～900
和
Figure A20068004437700521
其中n＝～900
分析方法 结果
RP-HPLC1-rxn混合物 60.4％转化
RP-HPLC1-纯化的 10.1分钟保留时间
MALDI-TOF MS 平均质量＝41.9kDa
称出来自实施例25的25mg肽并溶解在50mM硼酸盐，pH 8.0缓冲液中。称量319mg 40kDa PEG-苯并三唑碳酸盐以获得0.8∶1 PEG∶肽摩尔比并将其加入溶解的肽。将反应混合物在室温下搅拌1小时，之后在20mMNaOAc，pH 4.5缓冲液中稀释10倍，通过在SP-琼脂糖凝胶FF上的阳离子交换色谱法纯化。图4是反应混合物的HPLC色谱图。反应产生60.4％的40kDa肽。
将单-PEG化的PYY肽使用梯级NaCl梯度洗脱。典型地，所需的单-PEG化的肽用250mM NaCl洗脱。洗脱的PEG-PYY-样肽在Amicon超滤室中使用10kDa MW截止值的膜进行浓缩。然后用PBS渗滤10倍一次。
将实施例35的浓缩肽提交分析，测定和贮存在-20℃。图5是纯化的40kDa PEG-PYY肽的HPLC色谱图(RT＝10.1min)。40kDa肽的纯度被测定为＞90％。图6是图表，表示进行40kDa PEG-PYY肽的MALDI-TOF以证实分子量。
实施例36
(PEG-30,000)CH2CH2NHCOCH2CH2CO)Ile-Nle-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700531
其中n＝～675
分析方法 结果
RP-HPLC1-rxn混合物 94.1％转化
RP-HPLC1-纯化的 10.4分钟保留时间
MALDI-TOF MS 平均质量＝34.2kDa
称出来自实施例26的13mg肽并溶解在50mM硼酸盐，pH 8.0缓冲液中。称量624mg 30kDa PEG-琥珀酰亚胺基琥珀酰亚胺以获得4∶1 PEG∶肽摩尔比并将其加入溶解的肽。将反应混合物在室温下搅拌2小时，之后在20mM NaOAc，pH 4.5缓冲液中稀释10倍，通过在SP-琼脂糖凝胶FF(Amersham)上的阳离子交换色谱法纯化。图7是反应混合物的HPLC色谱图。反应产生94.1％的30kDa肽。
将单-PEG化的PYY肽使用梯级NaCl梯度洗脱。典型地，所需的单-PEG化的肽用250mM NaCl洗脱。洗脱的PEG-PYY-样肽在Amicon超滤室中使用10kDa MW截止值的膜进行浓缩。然后用PBS渗滤10倍一次。将浓缩肽提交分析，测定和贮存在-20℃。图8是纯化的30kDa PEG-PYY肽的HPLC色谱图(10.4min)。30kDa肽的纯度被测定为＞90％。图9表示进行30kDa PEG-PYY肽的MALDI-TOF以证实分子量。
实施例37
(PEG-30,000)CH(CH3)CH2CO)Ile-Nle-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
其中n＝～675
分析方法 结果
RP-HPLC1-rxn混合物 93.4％转化
RP-HPLC1-纯化的 10.5分钟保留时间
MALDI-TOF MS 平均质量＝34.6kDa
称出来自实施例26的1.25mg肽并溶解在50mM硼酸盐，pH 8.0缓冲液中。称量62mg 30kDa PEG-琥珀酰亚胺基β-SBA以获得4∶1 PEG∶肽摩尔比并将其加入溶解的肽。将反应混合物在室温下搅拌2小时，之后在20mM NaOAc，pH 4.5缓冲液中稀释10倍，通过在SP-琼脂糖凝胶FF(Amersham)上的阳离子交换色谱法纯化。图10是反应混合物的HPLC色谱图。反应产生93.4％的30kDa肽。
将单-PEG化的PYY肽使用梯级NaCl梯度洗脱。典型地，所需的单-PEG化的肽用250mM NaCl洗脱。洗脱的PEG-PYY-样肽在Amicon超滤室中使用10kDa MW截止值的膜进行浓缩。然后用PBS渗滤10倍一次。将浓缩肽提交分析，测定和贮存在-20℃。图11是纯化的30kDa PEG-PYY肽的HPLC色谱图(10.5min)。30kDa肽的纯度被测定为＞90％。图12表示进行30kDa PEG-PYY肽的MALDI-TOF以证实分子量。
实施例38
Ac-Ile(PEG-30,000)CH2CH2CO(ε).Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700542
其中n＝～675
分析方法 结果
RP-HPLC1-rxn混合物 83.3％转化
RP-HPLC1-纯化的 9.5分钟保留时间
MALDI-TOF MS 平均质量＝34.6kDa
称出来自实施例28的100mg肽并溶解在50mM硼酸盐，pH 8.0缓冲液中。称量1.8g 30kDa PEG-琥珀酰亚胺丙酸(购自Nektar)以获得1.5∶1PEG∶肽摩尔比并将其加入溶解的肽。将反应混合物在室温下搅拌过夜，之后在20mM NaOAc，pH 4.5缓冲液中稀释10倍，通过在SP-琼脂糖凝胶FF上的阳离子交换色谱法纯化。图13是反应混合物的HPLC色谱图。反应产生83.3％的30kDa肽。
将单-PEG化的PYY肽使用梯级NaCl梯度洗脱。典型地，所需的单-PEG化的肽用250mM NaCl洗脱。洗脱的PEG-PYY-样肽在Amicon超滤室中使用10kDa MW截止值的膜进行浓缩。然后用PBS渗滤10倍一次。
将实施例38的浓缩肽提交分析，测定和贮存在-20℃。图14是纯化的30kDa PEG-PYY肽的HPLC色谱图(RT＝9.5min)。30kDa肽的纯度被测定为＞95％。图15表示进行30kDa PEG-PYY肽的MALDI-TOF以证实分子量。
实施例39
Ac-Ile((PEG-30,000)CH2CH2NHCOCH2CH2CO)(ε).Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
其中n＝～675
分析方法 结果
RP-HPLC1-rxn混合物 81.4％转化
RP-HPLC1-纯化的 9.5分钟保留时间
MALDI-TOF MS 平均质量＝33.6kDa
称出来自实施例28的100mg肽并溶解在50mM硼酸盐，pH 8.0缓冲液中。称量3.6g 30kDa PEG-琥珀酰亚胺基琥珀酰亚胺以获得3∶1 PEG∶肽摩尔比并将其加入溶解的肽。将反应混合物在室温下搅拌过夜，之后在20mM NaOAc，pH 4.5缓冲液中稀释10倍，通过在SP-琼脂糖凝胶FF上的阳离子交换色谱法纯化。图16是反应混合物的HPLC色谱图。反应产生81.4％的30kDa肽。
将单-PEG化的PYY肽使用梯级NaCl梯度洗脱。典型地，所需的单-PEG化的肽用250mM NaCl洗脱。洗脱的PEG-PYY-样肽在Amicon超滤室中使用10kDa MW截止值的膜进行浓缩。然后用PBS渗滤10倍一次。
将实施例39的浓缩肽提交分析，测定和贮存在-20℃。图17是纯化的30kDa PEG-PYY肽的HPLC色谱图(RT＝9.5min)。30kDa肽的纯度被测定为＞97％。图18是表示进行30kDa PEG-PYY肽的MALDI-TOF以证实分子量的图。
实施例40
Fmoc-Ile-Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700561
将55.0g Fmoc-接头BHA@0.45mm/g(购自AnaSpec Inc.目录号408/452-5055)进行固相肽合成并且通过下列方法进行纯化：将Fmoc保护的氨基酸通过25％过量的DIC/HOBt偶联(55.0gX0.45mm/gX1.25eqv＝31.0mm)。所有的去保护用在DMF中的20％哌啶以约10ml/g进行2次，每次10分钟(随肽-树脂的体积增加而调整)。去保护后，将肽树脂用DMF(20体积)洗涤4次。
所有的偶联用～40mL DIC(～6eqv)和4.5g HOBt(1.25eqv)进行。偶联后，将树脂溶液取样～.25ml，用CH2Cl2洗涤，并通过茚三酮核查完成。偶联于NMe-Arg和Pqa后，将树脂用CH2Cl2洗涤，并用3滴在DMAc中的2％Chlorinal和3滴在DMAc中的2％乙醛校验(在黄色溶液中没有变化，指示没有仲胺，从蓝到黑色珠指示不完全的偶联)。如果判断偶联是不完全的，将DIEA加入偶联溶液并且再持续1小时。当结束时，用DMF(20体积)将树脂洗涤4次。
Fmoc-Tyr(But)-OH：14.0g.Fmoc-NMeArg(Mtr)-OH：20.0g.Fmoc-Gln(Trt)-OH：18.5g.Fmoc-Arg(Pbf)-OH：20.0g.Fmoc-Thr(But)-OH：18.0g.Fmoc-Val-OH：10.5g.Fmoc-Trp-OH：13.0.Fmoc-Asn(Trt)-OH：18.0g.Fmoc-Leu-OH 11.0g，Fmoc-Tyr(But)-OH 14.0g，Fmoc-His(Trt)-OH 20.0g，Fmoc-Arg(Pbf)-OH 20.0g，Fmoc-Pqa-OH 15.4g，Fmoc-Lys(Boc)-OH 14.1g，Fmoc-Ile-OH 11.0g.
将肽树脂用DMF洗涤3次，用CH2Cl2洗涤3次，并用MeOH洗涤3次，在抽气下干燥以获得115.38g肽树脂。将树脂分成6X19.25g批次以用于TFA裂解。
将19.25g的肽树脂用8.0mL 1∶1∶1DTE；苯甲醚；茴香硫醚，8.0mLiPr3SiH，8.0mL H2O和200mL TFA/裂解6小时(6:30AM至13:30PM)，随后在2.0L冷(-20℃)Et2O进行沉淀。通过离心，在8×50mL聚丙烯离心管收集沉淀物并用冷Et2O洗涤3次。接着将沉淀物在室内真空中干燥过夜以获得6.5g的粗制肽。6次去保护后，粗制肽的总量是38.71g。
通过在反相Pursuit C-18柱(50×250mm.300A°，10μm)上的高效液相色谱法(HPLC)在Shimadzu LC-8A系统上进行粗制肽的纯化。将38.71g粗制肽在36preps中纯化。每次将约1.1g粗制肽溶解在最少量的水和乙腈中并注射在柱中。梯度洗脱通常以20％B缓冲液开始，70分钟内20％-70％B，(缓冲液A：0.1％TFA/H2O，缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN)，流速50ml/min。在220/280nm下进行UV检测。分离含有产物的级分并在ShimadzuLC-10AT分析系统上判断它们的纯度，其中使用反相Pursuit C18柱(4.6×50mm)，流速为2.5ml/min.，10分钟内梯度(20-70％)(缓冲液A：0.1％TFA/H2O，缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN))。将判断为高纯度的级分合并和冻干以产生白色无定形粉末。将来自36preps的冻干产物合并并且再次冻干以产生8.233g的纯肽(12.6％)。如上所述再次通过分析HPLC在反相柱上检验终产物的纯度并且所述纯度约为95-99％。(ES)+-LCMS m/e计算值C119H164N34O232438.85，实测值2438.84
实施例41
Ile((PEG-30,000)CH2CH2NHCOCH2CH2CO)(ε)Lys-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2的制备
Figure A20068004437700581
n＝～675
  分析方法   结果
  RP-HPLC2   93.8％转化-保护的PEG-肽89.5％总产率-去保护的PEG-肽
  RP-HPLC2-纯化的   10.1分钟保留时间
  MALDI-TOF MS   平均质量＝35kDa
称出来自实施例40的1.8g肽并溶解在50mM硼酸盐，pH7.5缓冲液中。称量37.5g 30kDa PEG-琥珀酰亚胺基琥珀酰亚胺以获得约2∶1PEG∶肽摩尔比并将其加入溶解的肽。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将PEG化的肽通过在室温加入哌啶(20％)到反应混合物中1小时进行去保护。将所述反应混合物置于冰上并且通过缓慢加入冰乙酸(20％)进行酸化。接着，将反应混合物在20mM NaOAc，pH 4.5缓冲液中稀释10倍，通过在SP-琼脂糖凝胶FF上的阳离子交换色谱法纯化。图19是反应混合物的HPLC色谱图。反应产生93.8％的保护的PEG化的肽。图20是去保护的反应混合物的HPLC色谱，其中PEG化的去保护的肽的总产量是89.5％。
将单-PEG化的PYY肽使用梯级NaCl梯度洗脱。典型地，所需的单-PEG化的肽用175mM NaCl洗脱。洗脱的PEG-PYY-样肽在Amicon超滤室中使用10kDa MW截止值的膜进行浓缩。然后用PBS渗滤10倍一次。
将浓缩肽提交分析，测定和贮存在-20℃。图21是纯化的30kDaPEG-PYY肽的HPLC色谱图(RT＝10.1min)。30kDa肽的纯度被测定为＞95％。图22是表示进行30kDa PEG-PYY肽的MALDI-TOF以证实分子量的图。
实施例42
钙流出测定
将HEK-293细胞用G蛋白嵌合体Gαqi9稳定转染，将潮霉素-B抗性基因进一步用人NPY2受体和G418抗生素选择转染。在潮霉素-B和G418两者中选择以后，测定单个克隆它们对PYY的反应。将转染的细胞(HEK293/hNPY2R)在补充有10％胎牛血清、50μg/ml潮霉素-B、2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和250μg/ml G418的DMEM培养基中培养。将细胞用胰蛋白酶-EDTA收获并使用ViaCount试剂计数。将细胞悬浮体积用完全生长培养基调节至4.8×105细胞/ml。将25μL等分试样分配到384孔聚-D赖氨酸包被的黑色/透明微量培养板(Falcon)中，将微量培养板在37℃ CO2培养箱中放置过夜。
通过将一小管的内容物(Express Kit)溶解在含有20mM HEPES和5mM的丙磺舒的1000ml Hank’s平衡盐溶液(HBSS)中来制备加样缓冲液(钙-3测定试剂盒，分子装置(Molecular Devices))。将25μL稀释染料的等分试样分配到细胞平板中，然后将平板在37℃下温育1小时。
在温育期间，在HBSS(20mM HEPES)/0.05％BSA/1％DMSO中以3.5X所需浓度制备测试化合物，并转移到384孔平板中在FLIPR
Figure A20068004437700591
(FLIPR，荧光成像平板阅读器，是分子装置公司(Molecular Devices Corp.)的注册商标)上使用。
在温育后，将细胞和化合物平板两者放至FLIPR
Figure A20068004437700601
并通过FLIPR
Figure A20068004437700602
将20μL稀释的化合物转移到细胞培养板。在测定中，每1.5秒从细胞培养板的全部384个孔自动获取荧光读数。获得5个读数以建立稳定的基线，然后将20μL样品迅速(30μL/秒)和同时加入细胞培养板的每个孔。在样品加入之前、期间和之后连续监视荧光总共100秒的消逝时间。测定在加入后每个孔中的响应(峰荧光的提高)。将在配体刺激之前来自每孔的最初荧光读数用作来自那个孔的数据的零基线值。响应表示为阳性对照的最大响应％。
实施例43
环状AMP测定
在本实施例中，使用下列材料：384-孔平板；Tropix cAMP-筛选试剂盒；(应用生物系统(Applied Biosystems)，目录号T1504)；毛喉素(Calbiochem目录号344270)；细胞：HEK293/hNPY2R细胞；接种培养基：DMEM/F12w/o酚红(Gibco目录号1133032)；10％热-灭活FBS(Gibco目录号10082-147)；1％青霉素/链霉素(Gibco目录号15140-122)；500mg/mlG418(遗传霉素，Gibco目录号11811-031)。
使用多滴分散器将HEK293/hNPY2R细胞以104细胞/孔的密度接种在384孔平板中并将所述板在37℃温育过夜。第二天，在该实验中，使用达到75-85％汇合的细胞。使得培养基和试剂升温到室温。在制备稀释液之前，使得在二甲亚砜(DMSO，希格玛，目录号D2650)中的Y2受体配体和对照的贮液升温至32℃，5-10分钟。使用温育培养基[包含0.5mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX，Calbiochem，目录号410957)和0.5mg/ml BSA(希格玛，目录号A8806)的DMEM/F12培养基]制备稀释液。温育培养基中的最终DMSO和毛喉素的浓度分别是1.1％和5μM。
通过在纸巾上轻微倒转384孔平板来去除接种培养基并用包含各种浓度的Y2-受体配体(一式四份/浓度)的温育培养基(50μl/孔)置换。将所述板在室温温育30分钟。在30分钟的处理时期后，将温育培养基丢弃并且用50μl/孔的测定裂解缓冲液(在Tropix试剂盒中提供)置换。通过在37℃温育板45分钟来裂解细胞。将裂解物(20μl)转移到在Tropix试剂盒中供应的预包被的抗体板(384-孔)中。将AP缀合物(10μl)和抗-cAMP抗体(20μl)加入每个孔中并且将所述板在摇动器上在室温温育1小时。用洗涤缓冲液(70μl/孔/洗涤)将所述板洗涤5次并且将所述板抽干。加入CSPD/蓝宝石(Saphire)-II RTU底物/增强剂溶液(30μl/孔)并且在室温温育45分钟。使用光度计(VICTOR-V)，测量每个孔的信号(1秒/孔)。
本发明的化合物显示体外选择性神经肽-2受体活性，如在钙流出测定(FLIPR
Figure A20068004437700611
；实施例42)和环状AMP测定(实施例43)中所证实。将实施例3-39和41的体外结果，EC50的总结在下面的表1中举例说明：
表1
  实施例   序列   Y2REC50(nM)FLIPR   Y2REC50(nM)cAMP  Y1REC50(nM)FLIPR Y4REC50(nM)FLIPR   Y5REC50(nM)FLIPR
  3   IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY(3-36)   0.12   0.033 63 3238   265
  4   IK-Pqa-RHYLNLVTRQRY   0.28   0.047 57 ＞5000   1887
  5   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RY   2.3   0.42 ＞5000 ＞5000   ＞5000
  6   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(m-)Y   3.32   1.5 ＞5000 ＞5000   ＞5000
  7   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(3-I)Y   1.15   0.31 173 ＞5000   ＞5000
  8   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(3-5二F)Y   0.15   0.36 ＞5000 ＞5000   ＞5000
  9   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(2-6二F)Y   0.11   0.19   303   ＞5000   ＞5000
  10   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(2-6二Me)Y   0.28   0.67   762   ＞5000   ＞5000
  11   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RF(O-CH3)   0.74   0.55   189   ＞5000   ＞5000
  12   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RF   1.54   0.69   422   ＞5000   ＞5000
  13   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(4-NH2)Phe   11.4   0.31   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  14   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(4-F)Phe   0.45   0.96   ＞5000   ＞5000   2259
  15   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(4-CH2OH)Phe   0.46   0.45   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  16   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(4-CF3)Phe   6.13   3.55   3268   ＞5000   729
  17   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(3-F)Phe   0.635   0.75   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  18   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(2，3.4，5，6-五-F)Phe   11.9   2.5   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  19   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(3.4-二Cl)Phe   4.03   1.47   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  20   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RCha   0.498   0.5   ＞5000   ＞5000   352
  21   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RW   0.454   1.06 ＞5000 ＞5000 ＞5000
  22   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(1)Nal   2.73   1.14 ＞5000 ＞5000 4772
  23   IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(2)Nal   4.11   2.4 ＞5000 ＞5000 2162
  24   IK-Pqa-RHYLNLVTRQR-C-α-Me-Tyr   5.44   1.35 3259 ＞5000
  25   IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   0.44   0.25 298 ＞5000 ＞5000
  26   INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   8.1   0.108 ＞5000 ＞5000 ＞5000
  27   Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)R(2-6二F)Y   1.44   0.07 ＞5000 ＞5000 5812
  28   Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   0.458   0.18 ＞5000 ＞5000 ＞5000
  29   戊基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   0.873   0.51 ＞5000 ＞5000 ＞5000
  30   三甲基乙酰基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   1.1   0.26 ＞5000 ＞5000 ＞5000
  31   环己基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   1.67   1.37   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  32   苯甲酰基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   0.79   0.66   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  33   金刚烷基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   2.33   2.9   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  34   (PEG 30,000SPA)IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   37.9   18   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  35   (PEG40,000BTC)-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基RY   590   14.7   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  36   (PEG30,000)-SSA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   289   7.8   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  37   (PEG30,000)-β-SBA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   239   22.4   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  38   Ac-Ile-Lys(PEG30,000SPA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   549   24.4   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  39   Ac-Ile-Lys(PEG30,000SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   1078   20.7   ＞5000   ＞5000   ＞5000
  41   IK(PEG30,000SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY   13.5   9.8   ＞5000   ＞5000   ＞5000
实施例44
慢性DIO大鼠研究
雄性Sprague Dawley大鼠(7周龄)获自查尔斯(Charles)河实验室(美国)并在具有12小时照明：12小时黑暗周期的温度和湿度控制的环境中在室内培养。在整个研究中大鼠随意取食高脂肪标准饮食(HFD；60％的膳食千卡是脂肪，研究饮食(Research Diets)D12492)和水。在HFD上7周后，使大鼠按照体重分选并且单独笼养。给药大鼠，之后在黑暗周期开始时给药赋形剂(s.c.)或实施例41的化合物(1，5和10mg/kg，s.c.)，每两天1次，进行3周(N＝6-8大鼠/组)。在图23中指出的天数记录体重。
数据分析：
显示的所有数据是平均值±标准误差(s.e.m.)。使用单向ANOVA进行数据的统计学评估，随后进行Dunnett’s检验以确定在赋形剂和药物处理组之间存在的统计学显著的差异。当P＜0.05时，认为差异是统计学上显著的。用GraphPad软件(GraphPad Prism)进行数据分析。
结果：
在3周处理时期后，与赋形剂处理的动物相比，在雄性DIO大鼠中的实施例41化合物的慢性施用(5和10mg/kg，q48hr，s.c.)诱导体重增加的显著减少(图23)。
急性db/db小鼠研究
当接受时，雌性db/db小鼠(C57BL/KsJ-Lepdb/db，Jackson实验室，美国)为6周龄。将小鼠室内培养在具有12小时光照：12小时黑暗周期的温度和湿度控制的环境中，并且任意取食食物(Purina啮齿动物标准饮食5008)和水。在研究前4天，将小鼠(12周龄)进行预采血，并且选择在窄的空腹血糖水平范围内的那些进行研究以使在赋形剂对照和药物处理组之间的可变性最小化。在口服葡萄糖耐量试验前(N＝10只小鼠/组)28小时，给小鼠施用赋形剂(s.c.)或实施例41的化合物(0.3，1和10mg/kg，s.c.)。在6小时禁食后，从尾夹收集血液样品以确定基线值(t＝0分钟)。接着给小鼠管饲口服葡萄糖丸剂(1g/kg)，并且在常规间隔(t＝30，60和120分钟)收集另外的血液样品进行葡萄糖测量。为了分析实施例41的化合物对口服葡萄糖耐受的影响，计算在每个时间点的血糖(空腹血糖)与基线的绝对差异。使用梯形方法确定曲线下的面积(AUC0-120分钟)。
数据分析：
显示的所有数据是平均值±标准误差(s.d.)。使用单向ANOVA进行数据的统计学评估，随后进行Dunnett’s检验以确定在赋形剂和药物处理组之间存在的统计学显著的差异。当P＜0.05时，认为差异足统计学上显著的。用GraphPad软件(GraphPad Prism)进行数据分析。
结果：
响应于口服葡萄糖激发，实施例41的化合物的急性施用(1和10mg/kg，s.c.)对于雌性db/db小鼠明显减少葡萄糖变化范围(图24)。
慢性db/db小鼠研究
当接受时，雌性db/db小鼠(C57BL/KsJ-Lepdb/db，Jackson实验室，美国)为6周龄。将小鼠室内培养在具有12小时光照：12小时黑暗周期的温度和湿度控制的环境中，并且随意取食食物(Purina啮齿动物标准饮食5008)和水。在药物处理前4天将小鼠(9周龄)进行预采血，并且选择在窄的空腹血糖水平范围内的那些进行研究以使在赋形剂对照和药物处理组之间的可变性最小化。每两大一次向小鼠给药赋形剂(s.c.)或实施例41的化合物(1，3和10mg/kg，s.c.)，进行3周(N＝10小鼠/组)。每周一次进行基线禁食(2-6小时)血糖测量。在研究的第20天，在6小时禁食后进行口服葡萄糖耐量试验。从尾夹收集血液样品以确定基线值(t＝0分钟)。接着，用口服葡萄糖丸剂(1g/kg)管饲小鼠，并且以常规间隔收集另外的血液样品(t＝30，60，和120分钟)进行葡萄糖测量。为了分析实施例41的化合物对口服葡萄糖耐受的作用，在每个时间点计算血糖(空腹血糖，t＝0分钟)与基线的绝对差异。使用梯形方法确定曲线下的面积(AUC0-120分钟)。
数据分析：
显示的所有数据是平均值±标准误差(s.d.)。使用单向ANOVA进行数据的统计学评估，随后进行Dunnett’s检验以确定在赋形剂和药物处理组之间存在的统计学显著的差异。当P＜0.05时，认为差异是统计学上显著的。用GraphPad软件(GraphPad Prism)进行数据分析。
结果：
在3周处理时期过程中，相对于赋形剂处理的动物，将实施例41的化合物(1，3和10mg/kg，q48hr，s.c.)慢性施用于雌性db/db小鼠减少基础血糖水平(第8，15和21天)(图25A)。如在图25B中所显示，在第20天，响应于口服葡萄糖激发，实施例41的化合物(都在3和10mg/kg，q48hr，s.c.)显著减少葡萄糖变化范围。
应当理解，本发明不局限于以上所述的本发明的具体实施方案，因为可以进行具体实施方案的改变并且仍落入后附权利要求的范围内。
实施例A
可以以常规方式制备含有下列组分的薄膜包衣片剂：
成分                                         每片
核：
式(I)的化合物                                10.0mg 200.0mg
微晶纤维素                            23.5mg   43.5mg
无水乳糖                              60.0mg   70.0mg
聚乙烯吡咯烷酮K30                     12.5mg   15.0mg
淀粉羟乙酸钠                          12.5mg   17.0mg
硬脂酸镁                              1.5mg    4.5mg
(核重)                                120.0mg  350.0mg
薄膜包衣：
羟丙基甲基纤维素                      3.5mg    7.0mg
聚乙二醇6000                          0.8mg    1.6mg
滑石                                  1.3mg    2.6mg
氧化铁(Iron oxyde)(黄)                0.8mg    1.6mg
二氧化钛                              0.8mg    1.6mg
筛分活性成分，与微晶纤维素混和，将混合物与聚乙烯吡咯烷酮的水溶液制粒。将颗粒与淀粉羟乙酸钠和硬脂酸镁混和，压制分别获得120或350mg的核心。将核心用上述薄膜包衣的水溶液/悬浮液包衣。
实施例B
可以以常规方式制备含有下列成分的胶囊：
成分                            每胶囊
式(I)化合物                     25.0mg
乳糖                            150.0mg
玉米淀粉                        20.0mg
滑石                            5.0mg
筛分各组分并混合和填充到2#胶囊中。
实施例C
注射液可以具有下列组成：
式(I)的化合物             3.0mg
聚乙二醇400               150.0mg
乙酸                      适量加至pH 5.0
注射液用水                加至1.0ml
将活性成分溶解在聚乙二醇400和注射用水(部分)混合物中。通过乙酸将pH调节至5.0。通过加入残余量的水将体积调节至1.0ml。将溶液过滤，使用适当超额装入小瓶中并灭菌。
实施例D
可以以常规方式制备含有下列成分的软明胶胶囊：
胶囊内容物
式(I)化合物                 5.0mg
黄蜡                        8.0mg
氢化大豆油                  8.0mg
部分氢化植物油              34.0mg
大豆油                      110.0mg
胶囊内容物重量              165.0mg
明胶胶囊
明胶                        75.0mg
甘油85％                    32.0mg
Karion 83                   8.0mg(干物质)
二氧化钛                    0.4mg
氧化铁黄                    1.1mg
将活性成分溶解在其它成分的温热熔融体中，将混合物填充到适当尺寸的软明胶胶囊中。按照通常方法处理填充的软明胶胶囊。
实施例E
可以以常规方式制备含有下列成分的小药囊：
式(I)化合物                            50.0mg
乳糖，细粉                             1015.0mg
微晶纤维素(AVICEL PH 102)              1400.0mg
羧甲基纤维素钠                         14.0mg
聚乙烯吡咯烷酮K30                      10.0mg
硬脂酸镁                               10.0mg
调味添加剂                             1.0mg
将活性成分与乳糖、微晶纤维素和羧甲基纤维素钠混和，与聚乙烯吡咯烷酮在水中的混合物一起制粒。将颗粒与硬脂酸镁和调味添加剂混和并装入小药囊。
序列表
<110>霍夫曼-拉罗奇有限公司
<120>神经肽-2受体激动剂
<130>23353
<140>
<141>
<150>60/748,071
<151>2005-12-07
<160>41
<170>PatentIn Ver.3.3
<210>1
<211>34
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<400>1
Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn
  1               5                  10                  15
Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln
             20                  25                  30
Arg Tyr
<210>2
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<400>2
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>3
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>3
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>4
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>m-Tyr
<400>4
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>5
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>3-碘-Tyr
<400>5
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>6
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>3，5二F-Tyr
<400>6
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>7
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>2，6二F-Tyr
<400>7
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>8
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>2，6-Me-Tyr
<400>8
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>9
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>4-甲氧基-Phe
<400>9
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe
  1               5                  10                  15
<210>10
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>10
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe
  1               5                  10                  15
<210>11
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>4-氨基-Phe
<400>11
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe
  1               5                  10                  15
<210>12
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>4 F-Phe
<400>12
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe
  1               5                  10                  15
<210>13
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>4(CH2OH)-Phe
<400>13
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe
  1               5                  10                  15
<210>14
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>4-三氟甲基-Phe
<400>14
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe
  1               5                  10                  15
<210>15
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>3F-Phe
<400>15
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe
  1               5                  10                  15
<210>16
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>2，3，4，5，6五F-Phe
<400>16
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe
  1               5                  10                  15
<210>17
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>3，4二氯-Phe
<400>17
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe
  1               5                  10                  15
<210>18
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>Cha
<400>18
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Xaa
  1               5                  10                  15
<210>19
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>19
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Trp
  1               5                  10                  15
<210>20
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>1-Nal
<400>20
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Xaa
  1               5                  10                  15
<210>21
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>2-Nal
<400>21
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Xaa
  1               5                  10                  15
<210>22
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>(C-α-甲基)-Tyr
<400>22
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>23
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>23
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>24
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(2)
<223>Nle
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>24
Ile Xaa Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>25
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)
<223>Ac-Ile
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<220>
<221>MOD_RES
<222>(15)
<223>2，6二氟-Tyr
<400>25
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>26
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)
<223>Ac-Ile
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>26
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>27
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)
<223>戊酰基-Ile
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>27
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>28
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)
<223>三甲基乙酰基-Ile
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>28
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>29
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)
<223>环己基乙酰基-Ile
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>29
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>30
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)
<223>苯甲酰基-Ile
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>30
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>31
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)
<223>金刚烷酰基-Ile
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>31
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>32
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>32
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>33
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(2)
<223>Lys(PEG-30,000SPA)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>33
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>34
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>34
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>35
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(2)
<223>Lys(PEG-40,000BTC)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>35
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>36
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(2)
<223>Nle
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>36
Ile Xaa Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>37
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(2)
<223>Nle
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>37
Ile Xaa Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>38
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)
<223>Ac-Ile
<220>
<221>MOD_RES
<222>(2)
<223>Lys(PEG-30,000SPA)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>38
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>39
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)
<223>Ac-Ile
<220>
<221>MOD_RES
<222>(2)
<223>Lys(PEG-30,000SSA)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>39
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>40
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)
<223>Fmoc-Ile
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>40
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15
<210>41
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：合成
     肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(2)
<223>Lys(PEG-30,000SSA)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)
<223>Pqa
<220>
<221>MOD_RES
<222>(14)
<223>(NMe)Arg
<400>41
Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr
  1               5                  10                  15

Claims (29)

1.式(I)的神经肽-2受体激动剂，
Figure A2006800443770002C1
其中：
X是4-氧代-6-(1-哌嗪基)-3(4H)-喹唑啉-乙酸(Pqa)，
Y是H，酰基部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的低级烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷氧基，聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC，
Y′是H，聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC，
R1是Ile，Ala，(D)Ile，N-甲基Ile，Aib，1-1Aic，2-2Aic，Ach或Acp，
R2是Lys，Ala，(D)Lys，NMelys，Nle或(Lys-Gly)，
R3是Arg，Ala，(D)Arg，N-甲基Arg，Phe，3，4，5-三氟Phe或2，3，4，5，6-五氟Phe，
R4是His，Ala，(D)His，N-甲基His，4-MeOApc，3-Pal或4-Pal，
R5是Tyr，Ala，(D)Tyr，N-甲基Tyr，Trp，Tic，Bip，Dip，(1)Nal，(2)Nal，3，4，5-三氟Phe或2，3，4，5，6-五氟Phe，
R6是Leu，Ala，(D)Leu或N-甲基Leu，
R7是Asn，Ala或(D)Asn，
R8是Leu或Trp，
R9是Val，Ala，(D)Val或N-甲基Val，
R10是Thr，Ala或N-甲基Thr，
R11是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg，
R12是Gln或Ala，
R13是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg，
R14是Tyr，(D)Tyr或N-甲基Tyr，修饰的-Tyr，Phe，修饰的-Phe，Cha，(1)Nal，(2)Nal，C-α-甲基Tyr或Trp，且
PEGm是1到60KDa，
或其药用盐。
2.根据权利要求1的神经肽-2受体激动剂，其特征在于式(Ia)
Y-R1-R2-X-R3-R4-R5-R6-R7-R8-R9-R10-R11-R12-R13-R14-NH2(Ia)
其中：
X是N-哌嗪-1-基-4(3H)-喹唑啉酮-3-乙酸(Pqa)，
Y是H，酰基部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的低级烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷氧基，聚乙二醇部分，PEG-SSA，
PEG-β-SBA，PEG-SPA或PEG-BTC，
R1是Ile，Ala，(D)Ile，N-甲基Ile，Aib，1-1Aic，2-2Aic，Ach或Acp，
R2是Lys，Ala，(D)Lys，NMelys，Nle或(Lys-Gly)，
R3是Arg，Ala，(D)Arg，N-甲基Arg，Phe，3，4，5-三氟Phe或2，3，4，5，6-五氟Phe，
R4是His，Ala，(D)His，N-甲基His，4-MeOApc，3-Pal或4-Pal，
R5是Tyr，Ala，(D)Tyr，N-甲基Tyr，Trp，Tic，Bip，Dip，(1)Nal，(2)Nal，3，4，5-三氟Phe或2，3，4，5，6-五氟Phe，
R6是Leu，Ala，(D)Leu或N-甲基Leu，
R7是Asn，Ala或(D)Asn，
R8是Leu或Trp，
R9是Val，Ala，(D)Val或N-甲基Val，
R10是Thr，Ala或N-甲基Thr，
R11是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg，
R12是Gln或Ala，
R13是Arg，(D)Arg或N-甲基Arg，且
R14是Tyr，(D)Tyr或N-甲基Tyr，修饰的-Tyr，Phe，修饰的-Phe或Trp，或其药用盐。
3.根据权利要求2的神经肽-2受体激动剂，其中R2被Y′取代，并且Y′是H，聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC。
4.根据权利要求1或3任一项的神经肽-2受体激动剂，其中Y′是聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC。
5.根据权利要求1-4任一项的神经肽-2受体激动剂，其中：
Y是H或酰基部分，且
Y′是聚乙二醇部分，PEGm-SSA，PEGm-β-SBA，PEGm-SPA或PEGm-BTC。
6.根据权利要求1-5中任一项的神经肽-2受体激动剂，其中Y是酰基部分。
7.根据权利要求1-6中任一项的神经肽-2受体激动剂，其中Y是H。
8.根据权利要求1或3到7任一项的神经肽-2受体激动剂，其中Y′是H。
9.根据权利要求1-8任一项的神经肽-2受体激动剂，其中R1是Ile，R2是Lys或Nle，R3是Arg，R4是His，R5是Tyr，R6是Leu，R7是Asn，R8是Leu或Trp，R9是Val，R10是Thr，R11是Arg，R12Gln，R13是Arg或(N-甲基)Arg，R14是Y，(m-)Y，(3-I)Y，(3，5二F)Y，(2，6二F)Y，(2，6二Me)Y，F(4-O-CH3)，F，(4-NH2)Phe，(4-F)Phe，(4-CH2OH)Phe，(4-CF3)Phe，(3-F)Phe，(2，3，4，5，6五F)Phe，(3，4二Cl)Phe，Cha，W，(1)Nal，(2)Nal或C-α-Me-Tyr。
10.根据权利要求1-9任一项的神经肽-2受体激动剂，其中，R14是Tyr或(2，6二F)Tyr。
11.根据权利要求1-10任一项的神经肽-2受体激动剂，其中PEGm是20到40KDa。
12.根据权利要求1-11任一项的神经肽-2受体激动剂，其中PEGm是30KDa。
13.根据权利要求1-12任一项的神经肽-2受体激动剂，其选自由以下组成的组：
IK-Pqa-RHYLNLVTRQRY，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RY，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(m-)Y，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(3-I)Y，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(3，5二F)Y，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(2，6二F)Y，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(2，6二Me)Y，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RF(4-O-CH3)，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RF，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(4-NH2)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(4-F)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(4-CH2OH)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(4-CF3)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(3-F)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(2，3，4，5，6五F)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(3，4二Cl)Phe，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RCha，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)RW，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(1)Nal，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-甲基)R(2)Nal，
IK-Pqa-RHYLNLVTRQR-C-α-Me-Tyr，
IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)R(2，6二F)Y，
Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
戊基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
三甲基乙酰基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
环己基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
苯甲酰基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
金刚烷基-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
(PEG 30,000SPA)IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
(PEG40,000BTC)-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)lRY，
(PEG30,000)-SSA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
(PEG30,000)-β-SBA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
Ac-Ile-Lys(PEG30,000SPA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
Ac-Ile-Lys(PEG30,000SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，和
IK(PEG30,000S SA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
或其药用盐。
14.根据权利要求1-13任一项的神经肽-2受体激动剂，选自由下列各项组成的组：
Ac-Ile-Lys(PEG30,000SPA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
Ac-Ile-Lys(PEG30,000SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，和
IK(PEG30,000SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY，
或其药用盐。
15.根据权利要求1-14任一项的神经肽-2受体激动剂，其中所述激动剂是Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)R(2-6二F)Y。
16.根据权利要求1-14任一项的神经肽-2受体激动剂，其中所述激动剂是Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY。
17.根据权利要求1-14任一项的神经肽-2受体激动剂，其中所述激动剂是(PEG 30,000)-SPA-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY。
18.根据权利要求1-14任一项的神经肽-2受体激动剂，其中所述激动剂是(PEG30,000)-SSA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY。
19.根据权利要求1-14任一项的神经肽-2受体激动剂，其中所述激动剂是Ac-Ile-Lys(PEG30,000SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY。
20.根据权利要求1-14任一项的神经肽-2受体激动剂，其中所述激动剂是H-Ile-Lys(PEG30,000SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-甲基)RY。
21.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-20任一项的神经肽-2受体激动剂和药用载体和/或辅剂。
22.根据权利要求1-20任一项的神经肽-2受体激动剂，其用作治疗性活性物质。
23.根据权利要求1-20任一项的神经肽-2受体激动剂，其用作用于治疗和/或预防由神经肽-2受体激动剂调节的疾病的治疗性活性物质。
24.一种治疗性和/或预防性治疗由神经肽-2激动剂调节的疾病、特别是治疗性和/或预防性治疗代谢疾病或病症的方法，所述方法包括将根据权利要求1-20任一项的神经肽-2受体激动剂施用于人或动物。
25.根据权利要求1-20任一项的神经肽-2受体激动剂用于治疗性和/或预防性治疗由神经肽-2受体激动剂调节的疾病的应用。
26.根据权利要求1-20任一项的神经肽-2受体激动剂用于治疗性和/或预防性治疗肥胖症，2型糖尿病，代谢综合征，胰岛素抗性，异常脂肪血症，空腹血糖受损和葡萄糖耐量异常的应用。
27.根据权利要求1-20任一项的神经肽-2受体激动剂用于制备药物的应用，所述药物用于治疗性和/或预防性治疗由神经肽-2受体激动剂调节的疾病。
28.根据权利要求1-20任一项的神经肽-2受体激动剂用于制备药物的应用，所述药物用于治疗性和/或预防性治疗肥胖症，2型糖尿病，代谢综合征，胰岛素抗性，异常脂肪血症，空腹血糖受损和葡萄糖耐量异常。
29.如上定义的本发明。
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