CN101234169B

CN101234169B - 一种中药组合物在制备心肌细胞钾离子通道调节药物中的应用

Info

Publication number: CN101234169B
Application number: CN2007100030399A
Authority: CN
Inventors: 浦介麟; 李宁; 马克娟
Original assignee: Hebei Yiling Pharmaceutical Research Institute Co Ltd
Current assignee: Hebei Yiling Pharmaceutical Research Institute Co Ltd
Priority date: 2007-02-01
Filing date: 2007-02-01
Publication date: 2012-05-23
Anticipated expiration: 2027-02-01
Also published as: CN101234169A

Abstract

本发明提供了一种中药组合物在心肌细胞钾离子通道调节中的应用，该中药组合物以电压依赖的方式抑制内向整流钾电流，瞬时外向钾电流，以及延迟整流钾电流。通过降低心肌细胞的兴奋性和抑制心肌细胞动作电位(AP)的复极过程，延长动作电位时程(APD)发挥抗心律失常作用。

Description

一种中药组合物在制备心肌细胞钾离子通道调节药物中的应用

技术领域

本发明涉及到一种中药组合物在心肌细胞钾离子通道调节中的应用及在制备治疗心律失常药物中的应用。

背景技术

心血管疾病，如高血压、冠心病、心律失常等已成为危害人类健康的主要疾病，其发病率和死亡率已高居世界首位。严重的心律失常，如快速型室性心动过速(VT)，室颤(VF)以及心脏碎死(SCD)则是心血管疾病死亡的重要原因。

心脏正常的泵血功能有赖于心肌节律性的收缩和舒张的交替活动，而心肌细胞膜兴奋的形成和传导过程则是触发心脏节律性收缩和舒张的始动因素。心肌兴奋的形成和传导是以心肌细胞膜电位的变化为基础的。膜电位的变化异常将导致心律改变，称为心律失常。心律失常严重影响心脏的泵血功能，必须及时治疗。

心律失常依据心律失常发生部位可以分为窦性心律失常、房性心律失常、房室交界区性心律失常、室性心律失常及心脏传导阻滞，房性心律失常包括：房性期前收缩、房性心动过速、心房扑动、心房颤动；室性心律失常包括：室性期前收缩、室性心动过速、心室扑动、心室颤动[叶任高内科学人民卫生出版社1984年10月第2版P172-212]。

目前临床使用和开发中的抗心律失常药物根据对心肌电生理的影响和作用机制分类，可分为四大类：I类是钠通道阻滞剂，II类是β受体阻滞剂，III类是选择性延长心肌细胞动作电位时程(APD)和有效不应期(ERP)的药物，选择性阻滞心肌钾离子通道的药物，IV类是钙通道阻滞剂。I类，II类，IV类药物均有降低传导速度甚至引起传导阻滞的作用，这些作用可增加折返激动的可能性，而诱发心律失常。III类药物对自律性无明显影响[李端药理学(第四版)人民卫生出版社1999年11月第4版第14次印刷P159-171]。

专利ZL02146572.X公开了一种治疗冠心病室性早搏的药物组合物及其制备方法。该专利未公开该药物组合物对于钾离子通道的调节作用，而且应用领域仅限于冠心病室性早搏的治疗，本发明再次专利技术的基础上作了进一步研究。证实，本发明中药组合物对钾离子通道有抑制作用，可以应用于各型房性、室性及室上性心律失常。

发明内容

本发明的目的是提供一种中药组合物在心肌细胞钾离子通道调节中的应用，该中药组合物可以电压依赖的方式抑制内向整流钾电流，瞬时外向钾电流，以及延迟整流钾电流。通过降低心肌细胞的兴奋性和抑制心肌细胞动作电位(AP)的复极过程，延长动作电位时程(APD)来发挥抗心律失常作用。

本发明的另一个目的是提供该中药组合物在心肌细胞钾离子通道调节中的应用中的活性成分的制备方法。

本发明的另一个目的是提供该中药组合物在制备治疗心律失常药物中的应用。

基于上述发明目的，本发明提供了一种中药组合物在心肌细胞钾离子通道调节中的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

人参45-180份、麦冬50-200份、山茱萸125-450份、丹参125-450份、炒酸枣仁95-400份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鳖虫35-150份、甘松45-200份、黄连25-90份、南五味子35-150份、龙骨75-300份。

本发明中药组合物中原料药的重量比优选为：

人参89份、麦冬112份、山茱萸224份、丹参224份、炒酸枣仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、土鳖虫75份、甘松89份、黄连45份、南五味子67份、龙骨149份。

本发明中药组合物中原料药的重量比还优选为：

人参45份、麦冬112份、山茱萸224份、丹参225份、炒酸枣仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、甘松45份、土鳖虫35份、黄连45份、南五味子67份、龙骨149份。

本发明中药组合物中原料药的重量比还优选为：

人参90份、麦冬135份、山茱萸270份、丹参200份、炒酸枣仁150份、桑寄生150份、赤芍100份、土鳖虫100份、甘松95份、黄连60份、南五味子75份、龙骨150份。

本发明的应用中，该中药组合物的活性成分由下列步骤制成：

a)人参加70％乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，浓缩，烘干，粉碎成的细粉；

b)南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松共同加70％乙醇回流提取3次，合并提取液，滤过，浓缩的浸膏；

c)土鳖虫粉碎成的细粉；

d)麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮2次，合并提取液，浓缩的浸膏。

e)将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉，烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀即得该中药组合物活性成分。

本发明的应用中，所述中药组合物为胶囊剂、片剂、冲剂、散剂或口服液制剂中的一种，为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等，填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等，崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等，润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等，助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等，粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等，甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矫味剂包括：甜味剂及各种香精，防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等。

本发明应用中，该中药组合物可以电压依赖的方式抑制心肌细胞内向整流钾电流，瞬时外向钾电流，以及延迟整流钾电流。

本发明应用中，该中药组合物通过对心肌细胞膜钾通道的调节，降低心肌细胞的兴奋性和抑制心肌细胞AP的复极过程。

本发明应用中，该中药组合物通过对心肌细胞膜钾通道的调节，可延长心肌细胞动作电位时程。

本发明中，该中药组合物在制备治疗抗心律失常药物中的应用。

本发明应用中，所述心律失常包括：室上性心律失常或室性心动过速或心室扑动或心室颤动。

本发明应用中，所述心律失常包括：房性期前收缩或房性心动过速或心房扑动或心房颤动。

本发明中，该中药组合物对心肌细胞膜I_K1有抑制作用，减小I_K1电流密度。

本发明中，该中药组合物对心肌细胞膜瞬间外向钾电流(I_to)电流有抑制作用，可以加速电流的失活。

本发明中，该中药组合物对内向整流钾电流I_k1(I_K1)电流的内向成分有抑制作用，但不改变通道的翻转电位和整流特性，略增大电流的外向成份，有利于稳定细胞膜，消除早期后除极。

本发明中药组合物的用量，按活性组分原料药总重量计，为7-28克/日，可每日服用一次，优选分2-4次服用。

附图说明

图1离体心脏灌流系统(Langendorff灌流系统)。

图2本发明中药组合物对I_K1电流的影响A，对照；B，药物浓度0.5％时对I_K1有抑制作用；C，本发明中药组合物对I_K1电流密度-电压关系的影响。

图3I_to电流特征及本发明中药组合物对电流的作用A，在单个大鼠心室肌细胞上记录到的外向电流，Vh＝-90mV，先给予-40mV 20ms的前刺激，再以阶跃10mV去极化至+60mV，钳制时间400ms，激活的外向电流有两种成分，包括瞬时电流和维持电流。B，药物浓度0.5％时对Ito电流有抑制作用。C，Ito电流-电压关系曲线。●为总的峰值电流，▲为维持电流，■为瞬时电流(■＝●-▲)。D，瞬时电流峰值的电流密度-电压关系曲线。●为用药前，▲为用药后，药物对Ito有抑制作用，表现为电流密度降低。

图4本发明中药组合物对I_to时间依赖性失活的影响A，给药前；B，药物浓度0.5％；并对I_to电流的失活部分用单指数方程进行拟合。

图5本发明中药组合物对I_to稳态失活的影响A，给药前；B，药物浓度0.5％；C，外向电流不同成分失活的电压依赖性，●为峰值电流，▲为维持电流，■为瞬时电流(■＝●-▲)D，用药前后瞬时外向电流Ito的稳态失活曲线，●为用药前，▲为用药后，图中实线分别为用Bolziman方程拟合的曲线结果。

图6本发明中药组合物对I_to电流失活后恢复的影响A，对照；B，给予药物浓度0.5％；C，I_to失活后时间依赖性恢复曲线，●为用药前，▲为用药后，图中实线分别为用单指数方程拟合的曲线。

图7本发明中药组合物对延迟整流钾电流(I_K)电流的电压依赖性抑制作用A，V_H＝-40mV，逐步去极化到60mV，持续5s，在单个豚鼠心室肌细胞，可引出一电压依赖和时间依赖激活的外向电流I_K。B，药物浓度0.5％时，用药前后在V_T＝50mV持续5s记录的电流的改变C，用药前后，以各测试电压下记录的尾电流峰值的电流密度对电压作图得到的I-V关系曲线。

图8本发明中药组合物对时间依赖性激活的I_K电流的抑制作用A，V_H＝-40mV，V_T＝50mV，持续500ms～5s，以500ms递增，在单个豚鼠心室肌细胞可记录到随刺激时间延长而逐渐增大I_K电流和尾电流。B，药物浓度0.5％时，在同样的测试电压和时间下记录的I_K电流和尾电流。C，用药前后，以不同激活时间下记录的尾电流峰值对激活时间作图得到的时间依赖性激活曲线。

具体实施方式

下述实施例用于举例说明本发明中药组合物的制备，但其不能对本发明的范围构成任何限制。

实施例1

为了便于该中药组合物的钾离子通道调节作用的应用，将该中药组合物制备为胶囊剂

处方：

人参89g 麦冬112g 山茱萸224g 丹参224g

炒酸枣仁186g 桑寄生186g 赤芍89g 土鳖虫75g

甘松89g 黄连45g 南五味子67g 龙骨149g

制备方法：

a)上述处方中，人参用70％乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；

b)上述处方中，南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70％乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；

c)上述处方中，土鳖虫粉碎成细粉，备用；

d)上述处方中，麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；

e)将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，装入1000粒胶囊。

适应症：用于室上性心律失常，室性心动过速，心房扑动。

用法与用量：口服。一次2～4粒，一日3次。

试验例

本发明中药组合物药理活性试验。

为阐明本发明中药组合物钠通道的调节作用的活性，用按上述实施例1方法制得的胶囊内容物干粉(以下称本发明胶囊干粉)进行了下列动物试验。

1.材料和方法

1.1.材料

1)试剂本发明胶囊干粉，由石家庄以岭药业有限公司提供。II型胶原酶(collagenase II)为Gibico公司产品。链蛋白酶E为Merck公司产品。N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES)、乙二醇-双四乙酸(EGTA)、谷氨酸(L-Glutamic acid)、牛磺酸(Taurine)、天门冬氨酸、磷酸肌酸二钠、氯化胆碱(Choline-Cl)、CaCl₂、K₂ATP为Sigma公司产品。4-氨基吡啶(4-AP)为Fluka公司产品。其余试剂为国产分析纯，由北京化学试剂公司提供。

2)溶液

①无钙台氏液(mmol/L)：NaCl 136、KCl 5.4、MgCl₂ 1.0、NaH₂PO4 0.33、HEPES 10、Glucose 10，用NaOH调pH全7.4。

②KB液(mmol/L)：KCl 40、KH₂PO4 20、MgSO₄ 3.0、KOH 80、L-谷氨酸50、牛磺酸20、HEPES 10、Glucose 10、EGTA 0.5，用KOH调pH至7.4。

③记录全细胞钾电流的灌流液(mmol/L)：Choline-Cl 136、MgCl₂ 1.2、KCl 5.4、NaH₂PO4 0.33、CaCl₂ 1.8，CdCl₂ 0.15，HEPES 10、Glucose 10，用LiOH调pH至7.4。记录I_K时加1mmol/LBaCl₂以阻断I_k1电流。

④记录全细胞钾电流的电极内液(mmol/L)：天门冬氨酸钾120、KCl 20、HEPES 5、MgCl₂1.0、K₂-ATP 4、EGTA 10、磷酸肌酸二钠2，用KOH调pH至7.3。所用电极内液均经过直径0.22μm微孔滤膜过滤。

⑤本发明胶囊干粉溶液的配制：将本发明胶囊干粉，先用无KCl的细胞外灌流液配制成质量百分比浓度5％溶液，再调整K+浓度至5.4mmol/L，离心取上层溶液备用。

3)动物雄性SD大鼠，体重250-300g。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

1.2方法

1.2.1.单个心肌细胞的分离用急性酶解法制备心室肌单个细胞。取大鼠用50mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，开胸取出心脏，在4℃无钙Tyrode液中去除脂肪和心包膜，分离主动脉并插管，进行Langendorff心脏灌流(见图1)，速度为6～8ml/min。先以无钙台氏液灌流3min(灌注压为20cm水柱)，洗净冠脉内血液，再用低钙酶解液(CaCl₂为0.05mmol/L低钙台氏液，含II型胶原酶0.4mg/ml，蛋白酶E 0.04mg/ml)循环灌流，大约20分钟后，将心脏从Langendorff装置上取下，置入室温KB液中，剪去心房和基底部的组织，持眼科镊将心室组织轻轻撕拉，用粗开口的吸管缓慢吹打，使心肌细胞从心肌组织上脱离，获得单个心室肌细胞，上清液用120目的尼龙过滤网过滤，心肌细胞收藏在含KB液的试管中。整个灌流系统温度保持在37℃，所有的灌流液和KB液均通以100％的O₂饱和30分钟以上。将细胞在室温下静置半小时左右复钙至0.25mmol/L，室温保存备用。豚鼠心肌细胞的分离方法基本相同。

1.2.2全细胞膜片钳实验记录实验前吸取少许富含细胞的KB悬液于0.5ml的灌流槽中，静置5～10min，待细胞沉底附壁后，用100％O₂饱和的细胞外液进行表面灌流5～10min，流速约2ml/min。在倒置显微镜(OLYMPUS IX70)下选择边缘清楚，表面光滑，横纹清晰，无收缩的细胞。实验在22～24℃室温下进行。采用标准全细胞膜片钳记录方法，在电压钳制模式下记录通道电流。膜片钳放大器(Axopatch 700B，美国Axon公司)，通过A/D和D/A数据转换器(Digidata 1322，美国Axon公司)同计算机相连接。刺激信号及电压、电流输入信号的采集均由软件(pClampex 10.0，美国Axon公司)控制。玻璃毛胚管(中国科学院物理所提供)经微电极拉制仪(p-97，美国sutter公司)由4步拉制而成，经抛光仪(MF-830，日本NARISHIGE公司)抛光后尖端直径2～3μm。充灌电极内液后入水电阻为1.5～3MΩ，补偿液接电位后，调节三维操纵器(MHW-3，日本NARISHIGE公司)使电极尖端移向细胞表面，形成高阻封接(giga seal)，封接电阻为1GΩ以上。补偿快电容并吸破细胞膜形成全细胞记录模式。电容测定时给予-10mV阶跃的刺激，用Cm＝τ·Iss/ΔV求膜电容。调节慢电容补偿和串联电阻补偿80％～90％以减少瞬时充放电电流和钳位误差。信号经截止频率为1kHz的四阶贝塞尔低通滤波器，采样率为10kHz。

在记录时，为避免电流的衰减现象影响，电极内液中加入ATP，并控制实验在细胞破膜后25分钟内完成。根据实验设计，将配制好的药物溶液，用恒流蠕动泵以2ml/min的速度向细胞灌流槽分别灌流，同时使用整负压吸引装置将废液从灌流槽吸除。记录方法为破膜后稳定5min记录给药前的电流值，给药5min后记录药物作用下的电流值。采样后数据存贮在电脑硬盘内，供测量及分析用。为消除细胞间误差，电流值以电流密度(pA/pF)表示。

1.2.3各电流刺激方案设定及观察指标1)记录I_K1时刺激方案：维持电位(Vh)-40mV，指令电位-120mV～0mV，阶跃10mV，钳制时间400ms，刺激频率0.2Hz；以测试电压-100mV的I_K1稳态电流密度在用药前后的变化作为观察指标；2)记录I_to电流电压关系时刺激方案：维持电位(Vh)-90mV，先给予-40mV 20ms的前刺激，再给予-40mV～+60mV的去极化刺激，阶跃10mV，钳制时间400ms，刺激频率0.2Hz；以测试电压60mV的I_to峰值电流密度在用药前后的变化作为观察指标；3)记录I_to稳态失活的刺激方案：维持电压-90mV，给予400ms从-120mV至60mV阶跃10mV的前刺激，然后钳制在60mV 300ms记录I_to电流，并比较用药前后变化；4)记录I_to失活后时间依赖性恢复的刺激程序：采用双脉冲刺激，维持电压-90mV，继而先后给予两个去极化到60mV持续200ms的去极化刺激P1，P2，其时间间隔Δt依次增大分别设为1，3，5，7，10，15，20，30，40，60，90，120，150，180，210，250，300(ms)。记录P2对应的峰电流I。以I/Imax对Δt做出稳态失活后恢复曲线。5)测定Ik的电压依赖性激活：V_H＝-40mV，从-40mV逐渐去极化至+60mV，阶跃10mV，刺激波宽为5s，回到V_H持续2.5s记录尾电流。6)测定Ik尾电流的时间依赖性激活(envelope of tails test)：V_H＝-40mV，去极化至+50mV后回至V_H，连续10个脉冲，每个脉冲刺激波宽分别为500～5000ms不等，以500ms幅度逐渐递增。

1.3数据分析与统计

原始电流数据采用Clampfit 10.0(美国Axon公司)进行测量采集，使用Origin 6.0数据处理软件(美国Microcal Software公司)对采集后数据进行分析、拟合和作图。实验数据以均数±标准差(x±s)表示，给药前后采用配对t检验，P＜0.05认为有显著性差异。

2.结果

2.1本发明中药组合物对大鼠心肌细胞膜IK1的作用

维持电位(Vh)-40mV，指令电位-120mV～0mV，阶跃10mV，钳制时间400ms，刺激频率0.2Hz，在大鼠单个心室肌细胞上能记录到一个快速激活的内向电流，在400ms内无明显失活(见图2A)。该电流能被1mmol/L BaCl₂完全阻断，表明该电流为I_K1。I_K1电流内向成分随去极化而减小，反转电位约-40mV，具有内向整流特性。用钾外液溶解本发明中药组合物胶囊干粉配制成的0.5％溶液，对I_K1有抑制作用(见图2B)。-100mV时用药前平均峰值电流密度为-10.78±1.80(pA/pF)，用药后平均峰值电流密度为-7.18±2.05(pA/pF)，平均抑制率为33.1±16.85％(n＝11，P＜0.05)。以各脉冲下电流密度幅值对相应膜电位作图得I-V曲线。药物在每一指令电压水平上都减小I_K1电流密度，但基本不改变反转电位和曲线的形状(见图2C)。给药后，在不同钳制电压下均使IK1电流受抑制，表现为电流密度-电压曲线上移，但对翻转电位和整流性没有显著影响。

2.2本发明中药组合物对大鼠心肌细胞膜I_to的作用

2.2.1本发明中药组合物对I_to电流-电压(I-V)曲线的影响

使用记录细胞钾通道内外液，维持电位(Vh)-90mV，先给予-40mV20ms的前刺激，再给予-40mV～+60mV的去极化刺激，阶跃10mV，钳制时间400ms，刺激频率0.2Hz。在大鼠心室肌细胞记录到外向钾电流包括两种成分：一种是快速激活和灭活的瞬时电流(I_to)，电流呈“A”型，峰形尖锐，从0mV开始激活，电流在10ms左右达到高峰，之后迅速失活在200ms内基本达稳态。其激活和失活过程均呈电压和时间依赖性。该电流能被2mM的4-AP完全阻断，表明该电流为I_to。另一种成分为持续电流(I_maintained)，从-10mV开始激活，在-10～60mV范围内，随电压增大而增大(见图3A，C)。以各脉冲下电流密度幅值对相应膜电位作图得I-V曲线。以峰值电流幅值减去维持电流得到瞬时电流，即I_to。0.5％的本发明胶囊干粉溶液对I_to电流有抑制作用(见图3B)，在0～60mV测试电压下表现为峰值电流的下降，I-V曲线下移。在60mV的平均电流密度从-19.82±7.10(pA/pF)降至-10.02±3.93(pA/pF)，平均抑制率为50.60±10.77％(n＝6，P＜0.05)(见图3D)。对I_to电流的失活部分用单指数方程进行拟合，可得到时间依赖性失活的时间常数(τ)。本发明中药组合物可以加速电流的失活(见图4)，用药前后的τ值分别为29.06±4.66和21.44±3.12(n＝6，P＜0.05)。

2.2.2本发明中药组合物对I_to稳态失活曲线的影响

记录I_to稳态失活的刺激方案：维持电压-90mV，给予400ms从-120mV至60mV阶跃10mV的前刺激，然后钳制在60mV 300ms记录I_to电流，并比较用药前后变化(图5A，B)。从引出的电流图中可以看到外向电流的失活分为两个过程，首先是维持电流的失活，失活电压较低，继而是峰电流的失活，失活电压要高于前者。I_to的幅值由峰电流与测试脉冲末端测量的维持电流间的差值决定(图5C)。标准化各电流幅值，以相对电流对各膜电位作图得稳态失活曲线.并用Boltzmann方程I/Imax＝1/{1+exp〔(Vm-V_1/2)/k〕}拟合求出半失活电压(V_1/2)及失活曲线斜率因子(k)(图5D)。0.5％的本发明胶囊干粉溶液可使得I_to稳态失活曲线左移，斜率变大。用药前后的V1/2分别为-15.67±2.52mV和-26.45±3.88mV，k值从3.41±0.67变为6.38±2.02(n＝7，P＜0.05)(见图5)。

2.2.3本发明中药组合物对I_to失活后恢复曲线的影响

采用双脉冲刺激，维持电压-90mV，继而先后给予两个去极化到60mV持续200ms的去极化刺激P1，P2，其时间间隔Δt依次增大分别设为1，3，5，7，10，15，20，30，40，60，90，120，150，180，210，250，300(ms)。记录P2对应的峰电流幅值I。以I/Imax对Δt做出稳态失活后恢复曲线。用单指数方程拟合曲线得到恢复曲线的时间常数(τ)。当药物浓度0.5％时可以使得恢复时间从12.86±0.31延长到18.52±3.76(n＝5，P＜0.05)(见图6)。

2.2本发明中药组合物对豚鼠心室肌细胞I_k的作用

图7A是在V_H＝-40mV，阶跃10mV逐步去极化到60mV，持续5s，在单个豚鼠心室肌细胞，记录的电压依赖和时间依赖激活的外向电流I_K。本发明中药组合物对I_K电流有电压依赖性抑制作用(图7C)。以V_T＝50mV记录的I_K为观察指标，当药物浓度0.5％时可以使尾电流峰值电流密度下降30.77±1.11％(n＝5，p＜0.05)。图8A，B是用envelope刺激方案记录的随时间激活的I_K尾电流，以及药物对时间依赖性激活的I_k的抑制作用。

目前发现的I_to包含两种类型，一种为对4胺基吡啶敏感而对胞内钙不敏感的I_to1，另一种为钙依赖并能被caffeine和Co²⁺阻断的I_to2。在本研究中，电极液中含高浓度的钙络合剂EGTA(10mmol/L)，灌流液中含0.15mmol·L^-1的钙阻断剂CdCl₂，因而本研究中记录的瞬间外向钾电流不包含Ito₂成分。在试验中我们观察到本发明中药组合物对I_to有明显的抑制作用，减小I_to可以通过影响动作电位的1期复极，尤其是在犬，大鼠及人类等含I_to较大的种属，而使APD延长。此外，I_to也是导致跨心肌壁复极不均一性的主要电流，抑制该电流将减少跨壁复极不均一性，减少跨壁折返微环路的形成，避免尖端扭转型室性心动过速等心律失常的发生。目前临床应用的抗心律失常药物中还没有特异针对I_to1通道的药物。

在本研究中，我们用豚鼠单个心室肌细胞观察了药物对I_K电流的作用。豚鼠的I_K电流有快速激活和缓慢激活两种成分，我们用测试脉冲5秒后记录的尾电流作为观察指标，这主要代表了I_K中的缓慢激活的成分(I_KS)，实际上在心律加快时是I_KS在复极过程中起主要作用。我们在试验中看到药物浓度为0.5％时对I_K有抑制作用，这将引起APD延长，有利于药物在心动过速时发挥抗心律失常作用。

在本试验中还观察到药物对I_K1电流的内向成分有抑制作用，但不改变通道的翻转电位和整流特性，略增大电流的外向成份。虽然用药前后比较这一作用无显著性差异，但增大I_K1电流的外向成份可能使细胞动作电位3相加速复极，有利于稳定细胞膜，消除早期后除极，对触发机制引起的心律失常有抑制作用。

综上所述，用本发明胶囊干粉配制的5％溶液，可以电压依赖的方式抑制内向整流钾电流，瞬时外向钾电流，以及延迟整流钾电流。通过降低心肌细胞的兴奋性和抑制心肌细胞AP的复极过程，延长APD来发挥抗心律失常作用。

Claims

1.一种中药组合物在制备治疗心肌钾离子通道失调性心律失常药物中的应用，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

5.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，该中药组合物的活性成分由下列步骤制成：

c)土鳖虫粉碎成的细粉；

d)麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮2次，合并提取液，浓缩的浸膏；

6.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物为胶囊剂、片剂、冲剂、散剂或口服液制剂中的一种。

7.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，该中药组合物以电压依赖的方式抑制心肌细胞膜内向整流钾电流，瞬时外向钾电流，以及延迟整流钾电流；该中药组合物通过对心肌细胞膜钾通道的调节，降低心肌细胞的兴奋性和抑制心肌细胞膜动作电位的复极过程；延长心肌细胞动作电位时程。

8.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述心律失常为室上性心律失常或室性心动过速或心室扑动或心室颤动。