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CN101152200B - 落新妇苷在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭及肾纤维化的药物中的应用 - Google Patents

落新妇苷在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭及肾纤维化的药物中的应用 Download PDF

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CN101152200B CN2006100692239A CN200610069223A CN101152200B CN 101152200 B CN101152200 B CN 101152200B CN 2006100692239 A CN2006100692239 A CN 2006100692239A CN 200610069223 A CN200610069223 A CN 200610069223A CN 101152200 B CN101152200 B CN 101152200B
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岳喜典
孙丽芳
孟莹
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Shandong Luye Pharmaceutical Co Ltd
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Shandong Luye Natural Drug Research and Development Co Ltd
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Abstract

本发明提供了落新妇苷在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭及肾纤维化的药物中的应用。

Description

落新妇苷在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭及肾纤维化的药物中的应用
技术领域
本发明涉及落新妇苷在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭及肾纤维化的药物中的应用。
背景技术
落新妇苷具有抗心肌缺血、免疫调节、抗炎、镇痛等药理作用[邵春红，新华，周承明，等.赤土茯苓苷对大鼠心肌缺血的保护作用.新疆医科大学学报，2000，23(3)：205-207.；高思海，潘铁成.落新妇甙的提取及对心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究.中华实用中西医杂志，2003，3：1693-1694]。本发明人通过大量的实验研究，发明了落新妇苷在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭及肾纤维化的药物中的应用。
发明内容：
本发明提供了落新妇苷在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭的药物中的应用。
本发明提供了落新妇苷在制备治疗或预防肾纤维化的药物中的应用。
本发明提供了以落新妇苷为活性成分的用于肾功能衰竭及肾纤维化的药物组合物。
本发明提供的落新妇苷在用于急慢性肾功能衰竭及肾纤维化时，其注射时使用剂量范围是25mg～1000mg；优选25～500mg，口服时使用剂量范围是50mg～2000mg；优选50～1000mg。
本发明提供的落新妇苷可以按文献公开的方法制备，优选按下述方法制备：取土茯苓药材粉碎后加浓度为80％的乙醇溶液浸泡过夜；提取2次，每次10倍量体积，将提取液合并浓缩脱醇至5倍量体积，再用水稀释至20倍量体积，放置沉淀；过滤取上清上聚酰胺层析柱，先用酸水(pH＝2)洗脱6个柱体积，再用20％浓度的醇溶液洗脱8个柱体积，收集洗脱液浓缩至有沉淀析出；过滤取沉淀，干燥得到落新妇苷粗品，再结晶即得。
本发明提供的落新妇苷药物组合物可以根据制剂需要，加入相应辅料，以注射剂、片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、糖浆等形式存在，优选为冻干粉针和胶囊。本发明提供的各种剂型均可以采用药学常规方法制备而成。
本发明人进行了下列试验来证实治疗或预防急慢性肾炎和急慢性肾功能衰竭的药物中的应用，但药理作用不仅限于此。
具体实施实例：
制备例1：落新妇苷的制备
取土茯苓药材5kg，粉碎后加浓度为80％的乙醇溶液浸泡过夜；提取2次，第一次60L，第二次40L，将提取液合并浓缩脱醇至5L，再用水稀释至20L，放置沉淀；过滤取上清上聚酰胺层析柱(CV＝5L)，先用酸水(pH＝2)洗脱6个柱体积，再用20％浓度的醇溶液洗脱8个柱体积，收集洗脱液浓缩至有沉淀析出；过滤取沉淀，干燥得到落新妇苷粗品42g，再结晶得到落新妇苷纯品34g，纯度95.8％。
制备例2：落新妇苷的制备
取土茯苓药材5kg，粉碎后用20倍浓度为95％的乙醇溶液渗漉；合并渗漉液，浓缩脱醇至3L，再用水稀释至15L，放置沉淀；过滤取上清上聚酰胺层析柱(CV＝5L)，先用酸水(pH＝2)洗脱6个柱体积，再用30％浓度的醇溶液洗脱6个柱体积，收集洗脱液浓缩至有沉淀析出；过滤取沉淀，干燥得到落新妇苷粗品38g，再结晶得到落新妇苷纯品28g。纯度97.8％。
制备例3落新妇苷片剂的制备
称取40.0g落新妇苷、85.0g糖粉、40.0g乳糖和23.0g羧甲基淀粉钠充分混合均匀后过100目筛，加入适量的3％PVPK30水溶液适量制软材，20目筛制粒，60℃干燥3小时，18目筛整粒，加入2.0g硬脂酸镁，混合均匀后压1000片，每片约200mg，即得。
制备例4落新妇苷软胶囊的制备
称取20.0g落新妇苷加200ml药用豆油充分混合均匀后制1000粒软胶囊，每粒约200mg，即得。
制备例5落新妇苷元滴丸的制备
分别取30mg聚乙二醇4000和20.0g落新妇苷，混合后置75℃恒温水浴中加热熔融，置75℃保温下搅拌1小时使分散均匀，药液转移至滴丸机75℃恒温储料罐中，在滴头口径为5.0/6.0mm，滴速60滴/分钟，冷却剂为二甲基硅油，冷却液温度10℃条件下，调节滴丸丸重为60mg，滴制成1000丸，除去滴丸表面上的冷却液分装，即得。
制备例6落新妇苷注射液制备
Figure S06169223920061030D000021
试验1落新妇苷对大鼠急性肾衰的影响
1.1药品与试剂
落新妇苷按制备例1与制备例6制备
甲强龙(比利时法玛西亚普强公司，规格：40mg/支，批号：040706)
肌酐和尿素氮试剂盒(北京中生科技公司，批号：050606)
实验动物：普通级Wistar大鼠，雄性，体重280g—350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号：鲁动质字200106005号。
1.2试验方法与结果
大鼠130只，体重150-200g，动物喂养1周，将动物分为13组，即正常组，模型组，甲强龙(12mg/kg)组，落新妇苷静脉注射小剂量(1mg/kg)组，落新妇苷静脉注射中剂量(2.5mg/kg)组，落新妇苷静脉注射大剂量(10mg/kg)组1，落新妇苷静脉注射大剂量(25mg/kg)组2，落新妇苷静脉注射大剂量(50mg/kg)组3，落新妇苷静脉注射大剂量(100mg/kg)组4，落新妇苷灌胃剂量(5mg/kg)组1，落新妇苷灌胃剂量(50mg/kg)组2，落新妇苷灌胃剂量(100mg/kg)组3，落新妇苷灌胃剂量(200mg/kg)组4。甘油配成50％(V/V)，除正常组外，给大鼠禁水，16h后一次性肌注，剂量为1mL/100g，各组连续给药3天，从眼眶取血，测定血清肌酐和尿素氮(肌酐和尿素氮试剂盒测定肌酐和尿素氮)
从表1结果可以看出，落新妇苷静脉注射中剂量(2.5mg/kg)组，落新妇苷灌胃剂量(5mg/kg)组1降低大鼠急性肾衰血清肌酐和尿素氮(与模型组比较，p<0.05)；甲强龙(12mg/kg)组，落新妇苷静脉注射大剂量(10mg/kg)组1，落新妇苷静脉注射大剂量(25mg/kg)组2，落新妇苷静脉注射大剂量(50mg/kg)组3，落新妇苷静脉注射大剂量(100mg/kg)组4，落新妇苷灌胃剂量(50mg/kg)组2，落新妇苷灌胃剂量(100mg/kg)组3，落新妇苷灌胃剂量(200mg/kg)组4明显降低大鼠急性肾衰血清肌酐和尿素氮(与模型组比较，p<0.01)；落新妇苷静脉注射大剂量(50mg/kg)组3降低大鼠急性肾衰血清肌酐和尿素氮与落新妇苷静脉注射大剂量(100mg/kg)组4比较，无显著性差异；落新妇苷灌胃剂量(100mg/kg)组3降低大鼠急性肾衰血清肌酐和尿素氮与落新妇苷灌胃剂量(200mg/kg)组4比较，无显著性差异。
表1落新妇苷对大鼠急性肾衰血清肌酐和尿素氮的影响
Figure S06169223920061030D000041
*，p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较
试验2落新妇苷对腺嘌呤导致大鼠慢性肾衰的影响
2.1药品与试剂
落新妇苷按制备例1与制备例6制备
腺嘌呤(常州华通化工公司)
甲强龙(比利时法玛西亚普强公司，规格：40mg/支，批号：040706)
肌酐和尿素氮试剂盒(北京中生科技公司，批号：050606)
实验动物：普通级Wistar大鼠，雄性，体重280g—350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号：鲁动质字200106005号。
大鼠130只，体重150-200g，动物喂养1周，将动物分为13组，即正常组，模型组，甲强龙(12mg/kg)组，落新妇苷静脉注射小剂量(1mg/kg)组，落新妇苷静脉注射中剂量(2.5mg/kg)组，落新妇苷静脉注射大剂量(10mg/kg)组1，落新妇苷静脉注射大剂量(25mg/kg)组2，落新妇苷静脉注射大剂量(50mg/kg)组3，落新妇苷静脉注射大剂量(100mg/kg)组4，落新妇苷灌胃剂量(5mg/kg)组1，落新妇苷灌胃剂量(50mg/kg)组2，落新妇苷灌胃剂量(100mg/kg)组3，落新妇苷灌胃剂量(200mg/kg)组4，除正常组外，每只大鼠ip腺嘌呤200mg/kg，7天后，大鼠眼框取血，测定血清肌酐和尿素氮，观察造模情况，从第8天开始给药，连续给药14天，从眼眶取血，测定血清肌酐和尿素氮(肌酐和尿素氮试剂盒测定肌酐和尿素氮)，处死作病理切片，观察肾功能的病理改变。
从表2结果可以看出，落新妇苷静脉注射中剂量(2.5mg/kg)组，落新妇苷灌胃剂量(5mg/kg)组1降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮(与模型组比较，p<0.05)；甲强龙(12mg/kg)组，落新妇苷静脉注射大剂量(10mg/kg)组1，落新妇苷静脉注射大剂量(25mg/kg)组2，落新妇苷静脉注射大剂量(50mg/kg)组3，落新妇苷静脉注射大剂量(100mg/kg)组4，落新妇苷灌胃剂量(50mg/kg)组2，落新妇苷灌胃剂量(100mg/kg)组3，落新妇苷灌胃剂量(200mg/kg)组4明显降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮(与模型组比较，p<0.01)；落新妇苷静脉注射大剂量(50mg/kg)组3降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮与落新妇苷静脉注射大剂量(100mg/kg)组4比较，无显著性差异；落新妇苷灌胃剂量(100mg/kg)组3降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮与落新妇苷灌胃剂量(200mg/kg)组4比较，无显著性差异。
病理检查：正常对照组肾组织结构正常，模型组有明显肾组织结晶沉淀物，肾小管破坏，萎缩，管腔变小，其中可见淋巴细胞浸润及局部纤维组织增生，肾小球肿大，肾小球上皮细胞出现空泡变性，内皮细胞下出现大量疏松物质，基底膜增厚，定量分析肾小管面积与肾小球体积，模型组与正常对照组比较有显著性差异。落新妇苷各组各剂量组随剂量增加损伤程度明显减轻，但仍未恢复至正常水平。
表2落新妇苷对大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮的影响
Figure S06169223920061030D000061
*，p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较
试验3落新妇苷对肾切除导致大鼠慢性肾衰的影响
3.1药品与试剂
落新妇苷按制备例1与制备例6制备
甲强龙(比利时法玛西亚普强公司，规格：40mg/支，批号：040706)
肌酐和尿素氮试剂盒(北京中生科技公司，批号：050606)
实验动物：普通级Wistar大鼠，雄性，体重280g—350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号：鲁动质字200106005号。
3.2试验方法与结果
大鼠195只，体重150-200g，动物喂养1周，将动物分为13组，每组15只，即正常组，模型组，甲强龙(12mg/kg)组，落新妇苷注射小剂量(1mg/kg)组，落新妇苷注射中剂量(2.5mg/kg)组，落新妇苷注射大剂量(10mg/kg)组1，落新妇苷注射大剂量(25mg/kg)组2，落新妇苷注射大剂量(50mg/kg)组3，落新妇苷注射大剂量(100mg/kg)组4，落新妇苷灌胃剂量(5mg/kg)组1，落新妇苷灌胃剂量(50mg/kg)组2，落新妇苷灌胃剂量(100mg/kg)组3，落新妇苷灌胃剂量(200mg/kg)组4，除正常组外，大鼠用5/6肾切除方法制成慢性肾衰模型，第一次手术切除左肾2/3，一周后行第二次手术切除右肾，第二次手术后一周开始给药，给药方式为灌胃给药或腹腔注射给药，给药后4周、8周分别大鼠眼框取血，测定血清肌酐和尿素氮，给药后4周处死5只，试验结束处死10只，作病理切片，观察肾功能的病理改变。
从表3、表4结果可以看出，落新妇苷静脉注射中剂量(2.5mg/kg)组，落新妇苷灌胃剂量(5mg/kg)组1降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮(与模型组比较，p<0.05)；甲强龙(12mg/kg)组，落新妇苷静脉注射大剂量(10mg/kg)组1，落新妇苷静脉注射大剂量(25mg/kg)组2，落新妇苷静脉注射大剂量(50mg/kg)组3，落新妇苷静脉注射大剂量(100mg/kg)组4，落新妇苷灌胃剂量(50mg/kg)组2，落新妇苷灌胃剂量(100mg/kg)组3，落新妇苷灌胃剂量(200mg/kg)组4明显降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮(与模型组比较，p<0.01)；落新妇苷静脉注射大剂量(50mg/kg)组3降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮与落新妇苷静脉注射大剂量(100mg/kg)组4比较，无显著性差异；落新妇苷灌胃剂量(100mg/kg)组3降低大鼠慢性肾衰血清肌酐和尿素氮与落新妇苷灌胃剂量(200mg/kg)组4比较，无显著性差异。
病理改变：给药第4周模型组光镜下见肾小球有不同程度代偿性肥大，系膜细胞增生，系膜基质增多，肾小球毛细血管襻呈分叶状，部分肾小球囊腔消失，毛细血管管壁增厚，肾小管肿胀、扩张，管腔内有蛋白沉积，部分小管萎缩，间质有炎性细胞浸润，各给药组亦见上述改变，但病变程度较轻，随剂量增大，病变程度减轻；给药第8周模型组光镜下见系膜细胞增生，基质明显增多，毛细血管管壁塌陷，毛细血管节段性硬化，硬化区多在血管壁附近硬化的肾小球内可见均质圆形PAS染色深红色的沉积物，个别肾小球有局灶球囊粘连，局灶新月体形成，间质可见炎细胞浸润，纤维组织增生，各组肾小球硬化程度不等，随剂量增大，病变程度减轻。
表3落新妇苷对大鼠肾切除慢性肾衰给药4周血清肌酐和尿素氮的影响
Figure S06169223920061030D000081
*，p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较
表4落新妇苷对大鼠肾切除慢性肾衰给药8周血清肌酐和尿素氮的影响
Figure S06169223920061030D000082
*，p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较
试验4落新妇苷对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响
4.1材料
落新妇苷按制备例1与制备例6制备
实验动物普通级Wistar大鼠，雄性，体重150-200g，SD大鼠，山东绿叶天然药物研究
开发公司实验动物中心提供，合格号：SYXK(鲁)20030020。
苯那普利，北京诺华制药有限公司生产，批号：040306；羟脯氨酸试剂盒，南京建成生物公司，批号：050906。
4.2试验方法与结果
大鼠130只，体重200-230g，动物喂养1周，各大鼠以10％水合氯醛3.0mL/kg腹腔注射麻醉后，将大鼠右侧卧位固定于手术台上，剪毛后用碘酒、75％酒精消毒手术区，行左侧腹切口，逐层切开皮肤、肌肉及腹壁各层，暴露并分离左侧输尿管，其中10只大鼠仅切开腹腔并游离左侧输尿管，但不结扎和剪断，作为假手术组，其余120大鼠用4-0丝线结扎两道，上一道结扎点位于左肾下极水平，然后在两道结扎点间剪断输尿管，逐层缝合，120只造模大鼠随机分为12组，即模型组、依那普利(10mg/kg)组、落新妇苷静脉注射1mg/kg组、落新妇苷静脉注射2.5mg/kg组、落新妇苷静脉注射25mg/kg组、落新妇苷静脉注射50mg/kg组、落新妇苷静脉注射100mg/kg组、落新妇苷灌胃2mg/kg组、落新妇苷灌胃5mg/kg组、落新妇苷灌胃50mg/kg组、落新妇苷灌胃100mg/kg组、落新妇苷灌胃200mg/kg组，各组给药21天后，10％水合氯醛麻醉后处死各组动物，生理盐水反复灌洗后留取左侧肾脏，肾组织经4％的多聚甲醛缓冲液固定。切取适量肾组织，按羟脯氨酸试剂盒测定说明测定羟脯氨酸。
从表5结果可以看出，，落新妇苷静脉注射2.5mg/kg组、落新妇苷静脉注射25mg/kg组、落新妇苷静脉注射50mg/kg组、落新妇苷静脉注射100mg/kg组、落新妇苷灌胃5mg/kg组、落新妇苷灌胃50mg/kg组、落新妇苷灌胃100mg/kg组、落新妇苷灌胃200mg/kg组明显降低大鼠羟脯氨酸水平(与模型组比较，p<0.05或0.01)，落新妇苷灌胃100mg/kg组降低羟脯氨酸水平与落新妇苷灌胃200mg/kg组比较，无显著性差异；落新妇苷静脉注射50mg/kg组降低羟脯氨酸与落新妇苷静脉注射100mg/kg组比较，无显著性差异。
常规病理学检查①肉眼检查：假手术组肾脏颜色鲜红，表面光滑，包膜光泽，无粘连。其他各组肾脏体积增大，颜色苍白，表面呈颗粒状，类似人体大白肾，少数区域肾包膜粘连。②光镜检查：假手术组肾单位结构清晰，肾小球囊无扩张或缩小，肾小管上皮细胞无明显变性及坏死，管腔内无脱落上皮细胞或管型，间质中无血管扩张或炎细胞浸润。模型对照组大片肾小管坏死，肾间质纤维细胞增生，肾小管扩张，内有大量棕黄色折光物质或坏死脱落的上皮细胞，肾小球数目减少，部分肾小球纤维化并与包曼氏囊壁粘连，囊腔消失。给药各组病变与模型对照组类似，但均有不同程度的形态学改善，尤以落新妇苷大剂量各组显著，与模型对照组比较有明显差异。
表5落新妇苷对单侧输尿管结扎大鼠肾羟脯氨酸含量的影响
Figure S06169223920061030D000101
p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较

Claims (2)

1.落新妇苷作为唯一活性成分在制备治疗慢性肾功能衰竭的药物中的应用。
2.落新妇苷作为唯一活性成分在制备治疗肾纤维化的药物中的应用。
CN2006100692239A 2006-09-27 2006-09-27 落新妇苷在制备治疗或预防急慢性肾功能衰竭及肾纤维化的药物中的应用 Expired - Fee Related CN101152200B (zh)

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