CN101123971A - 治疗哮喘或慢性阻塞性肺病的脱氢表雄酮或硫酸脱氢表雄酮与pde-4抑制剂的组合 - Google Patents

Abstract

一种用于治疗哮喘、慢性阻塞性肺病或其它呼吸道疾病的药学或兽医学组合物，它包含选自脱氢表雄酮和/或硫酸脱氢表雄酮或其盐的第一活性剂，和含有磷酸二酯酶－4抑制剂的第二活性剂。该组合物可以各种剂型以及试剂盒的形式提供。本专利的产品可用于预防和治疗哮喘、慢性阻塞性肺病或其它呼吸道疾病。

Description

治疗哮喘或慢性阻塞性肺病的脱氢表雄酮或硫酸脱氢表雄酮与PDE-4抑制剂的组合

相关申请的参考

本申请是2003年10月29日提交的美国申请系列号10/698,078的部分继续申请，该申请要求2003年7月31日提交的美国临时专利申请系列号60/492,232的优先权，该申请全文纳入作为参考。

背景技术

技术领域

本发明涉及含有非糖皮质激素类固醇和磷酸二酯酶(PDE)-4抑制剂的组合物，所述非糖皮质激素类固醇包括脱氢表雄酮(DEHA)、硫酸DEHA或其盐。这些组合物可用于治疗哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)或其它呼吸道疾病。

背景描述

呼吸道疾病以及各种相关病症在普通人群中极为常见。有时病人伴有加重肺部病症的炎症。呼吸道疾病包括哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)和其它上下呼吸道疾病，例如过敏性鼻炎、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和肺纤维化。

例如，哮喘是工业化国家中最常见的疾病之一。在美国，它约占所有健康花销的1％。有报道称在过去十年中哮喘流行和死亡率均令人恐惧地增长，并且在今后的十年中哮喘预计要成为主要的职业肺病。哮喘是一种特征可变的疾病，在许多病例中气道阻塞是可逆性的。此过程与肺部炎症并且有时与肺部的过敏反应相关。许多患者具有称为“哮喘发作”的急性期，而其他人则患上慢性疾病。据信，哮喘过程有时由过敏对象吸入的抗原所触发。此疾病通常称为“外源性哮喘”。其它哮喘患者发病具有内在原因，因此称为“内源性哮喘”，包括不同来源的疾病，如腺苷受体介导的疾病、免疫IgE介导应答所介导的过敏疾病等。所有哮喘患者具有该病特征性的一些症状：发作性支气管收缩、肺部炎症和肺部表面活性物质降低。现有的支气管舒张药物和抗炎药物市售可得并处方用于治疗哮喘。最常见的抗炎药物糖皮质激素具有许多不良作用，但仍是常规的处方药。更重要的是，大多数用于治疗哮喘的药物对许多患者几乎无效。

COPD的特征通常是由慢性支气管炎、肺气肿或二者同时导致的气流阻塞。气道阻塞一般是不完全可逆的，但10-20％的患者经治疗确实在气道阻塞方面有了一些改善。在慢性支气管炎中，气道阻塞由慢性和过度分泌的异常气道粘液、炎症、支气管痉挛和感染所导致。除了慢性咳嗽的其它原因外，慢性支气管炎的特征还有至少两年连续发生慢性咳嗽、产生粘液(或二者均有)至少3个月。肺气肿破坏终末细支气管的结构性成分(弹性蛋白)导致气道壁塌陷而不能呼出“陈旧的”空气。肺气肿导致肺泡永久破坏。肺气肿的特征是远端终末细支气管的气体空间异常的永久性扩大，伴有气道壁的破坏而无明显的纤维化。COPD也可导致继发性肺高血压。继发性肺高血压本身是一种肺动脉血压异常升高的疾病。在严重的病例中，右侧心脏必须比平时更用力工作以对抗高压来泵出血液。如果此情况长期持续，右侧心脏增大、功能降低，并且体液会聚集在踝部(浮肿)和腹部。最后，左侧心脏开始衰弱。由肺病导致的心力衰竭称为肺原性心脏病。

COPD的特征是影响中老年人，是全世界发病和死亡的主要原因之一。在美国，它影响约1千4百万人并且是死亡的第四位原因、致残的第三位原因。然而，其发病率和死亡率还在上升。自从1982年以来，估计此疾病在美国流行上升了41％，在1966与1985年之间年龄调整的死亡率上升了71％。这与同期所有原因(降低了22％)和心血管疾病(降低了45％)的年龄调整的死亡率降低相反。在1998年，COPD导致美国112,584人死亡。

然而，COPD是可预防的，这是因为据信该病的主要原因是与烟气接触。长期吸烟是COPD最常见的原因。它占所有病例的80-90％。吸烟者死于COPD的可能性比不吸烟者高10倍。该疾病在终身不吸烟者中很少见，但它们与环境中的烟气接触至少可解释某些人的气道阻塞。其它提出的致病因素包括气道超反应或超敏、环境空气污染和过敏。COPD导致的气流阻塞一般在持续吸烟的人中是递增的。这导致早期残疾并缩短寿命。戒烟使得发病率降至不吸烟者的，但吸烟导致的损伤是不可逆的。其它危险因素包括：遗传、被动吸烟、与工作或环境中的污染空气相接触和儿童时期的呼吸道感染病史。COPD的症状包括：慢性咳嗽、胸闷、在休息和运动期间呼吸短促、呼吸困难、粘液产生增加和时常要清清咽喉。

当前几乎没什么方法能缓解COPD的症状、预防其恶化、维持最佳的肺功能以及提高日常活动能力和生活质量。许多患者终身都要服药，在恶化期间需要增加剂量和其它药物。当前用于COPD患者的处方药包括：快速起效的β2-激动剂、抗胆碱能支气管舒张药物、长效支气管舒张药物、抗生素和祛痰药。在当前可用的COPD治疗药物中，发现施用抗胆碱能药物、β2肾上腺素激动剂和口服类固醇对此病的进展有短期益处却无长期作用。口服类固醇是在急性恶化时推荐使用，该药物长期使用导致死亡率和发病率增加。

短效和长效吸入β2肾上腺素激动剂实现短期的支气管舒张作用而缓解COPD患者的一些症状，但对疾病的进展无有意义的持续作用。短效β2肾上腺素激动剂可改善COPD患者的症状，例如提高活动能力并产生一定程度的支气管舒张，在一些严重病例中甚至提高了肺功能。发现较新的长效吸入性β2肾上腺素激动剂的最大效力与短效β2肾上腺素激动剂相当。虽然沙美特罗对肺功能仅产生中等改变或未改变，但发现它改善了症状和生活质量。使用β2激动剂可产生心血管作用，例如导致脉率、血压和心电图的改变。使用β2激动剂很少产生超敏性反应，例如蕈麻疹、血管性水肿、皮疹和口咽水肿。在这些病例中，应停止使用β2激动剂。用支气管舒张药物异丙托溴铵或酚丙喘宁连续治疗哮喘或COPD患者并未优于按需治疗，因此这说明它们不适合于持续治疗。另外，β2肾上腺素激动剂最常见的直接不良作用是震颤，高剂量时可导致血浆钾含量降低、心律失调以及动脉氧张力降低。与单用一种药物相比，联用β2肾上腺素激动剂和抗胆碱能药物并未提供叠加的支气管舒张作用。然而，与单用一种药物相比，异丙托铵(ipratropium)加入标准剂量的吸入性β2肾上腺素激动剂约90天，在稳定的COPD患者中产生了一些改善。总之，使用β2肾上腺素激动剂的不良作用，例如震颤和心律失调比用抗胆碱能药物更频繁发生。因此，抗胆碱能药物或β2肾上腺素激动剂，或者两种药物联用不能对所有COPD患者起作用。

抗胆碱能药物在COPD患者中实现了短期的支气管舒张作用并产生一些症状的改善，但未改善长期的预后。大多数COPD患者至少具有一定程度的气道阻塞，这种阻塞可用异丙托溴铵稍加改善。《肺部健康研究》(The Lung Health Study)发现男女吸烟者早期COPD的肺活量体征并跟踪随访他们5年。在5年期间比较了3种治疗方法，结果表明异丙托溴铵对患者肺部功能性有效容积降低无显著作用，而戒烟减缓肺部功能性有效容积的降低。然而，异丙托溴铵产生不良作用，例如心脏症状、高血压、皮疹和尿滞留。

茶碱在COPD患者中产生中等的支气管舒张作用，但却经常有不良作用并且治疗范围小。15-20mg/l的血清浓度是最佳作用所需并且必须小心监测血清水平。不良作用包括在高度变化的血浓度时发生的恶心、腹泻、头痛、兴奋、癫痫和心律不齐，并且这在许多人中即使在治疗剂量范围内也会发生。茶碱的剂量必须按照个人的吸烟习惯、感染和其它治疗药物来单独调整，这是很麻烦的。虽然据称茶碱在哮喘中具有抗炎作用，特别是在较低剂量时，但在COPD患者中未见报道。茶碱的不良作用以及需要频繁监测(其血清水平)限制了其应用。

口服糖皮质激素在COPD的急性恶化患者中显示短期改善效果，但长期口服类固醇与严重的副作用相关，包括骨质疏松和诱导明显的糖尿病。发现吸入性皮质类固醇对气道的组胺超反应无实质性的短期疗效。在两项使用吸入性氟替卡松的3年期治疗的研究中，中等和严重的恶化显著降低，生活质量得到适度改善而未影响肺功能。患有更多可逆性疾病的COPD患者看上去从使用吸入性氟替卡松的治疗中更多受益。

粘液溶解药物对此病恶化的频率和持续时间有适当的有益作用，但对肺功能有不良影响。尽管有证据表明大大降低了恶化的频率，然而，无论是N-乙酰半胱氨酸还是其它粘液溶解药物对严重的COPD(功能性有效容积＜50％)患者均无显著作用。N-乙酰半胱氨酸产生胃肠道副作用。对血氧不足(hypoxaemic)的COPD和充血性心力衰竭患者给予长期氧治疗对最初500天左右的死亡率几乎无作用，但在此后男性的存活率有所增加并在接下来的5年中保持稳定。但在女性病人中，氧在整个研究期间均降低了死亡率。对血氧不足的COPD患者进行连续氧治疗19.3年降低了总的死亡风险。然而，迄今为止发现仅有改变生活习惯、戒烟和长期用氧治疗(在血氧不足患者中)改变了COPD的长期进程。

抗生素也经常在出现呼吸道感染的最初征兆时给予来预防患病肺部的进一步损伤和感染。祛痰药帮助松弛粘液分泌物和将其排出气道，并使得呼吸更为轻松。此外，其它处方药可用于治疗COPD相关的疾病。这些药物包括：利尿剂(作为避免与右心衰竭相关的水分过度滞留的疗剂给予)，洋地黄(加强心跳力量)和咳嗽抑制剂。后面的药物清单可帮助缓解COPD相关的症状，但不治疗COPD。因此，当前没什么方法能缓解COPD的症状、预防其恶化、维持最佳的肺功能以及提高日常活动能力和生活质量。

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)或硬肺、休克肺、泵肺和充血性肺膨胀不全据信是由体液在肺中积聚，进而造成肺僵硬而导致。该疾病可通过以下各种伤害肺的过程在48小时内激发，例如外伤、头部损伤、休克、败血症、多次输血、药物治疗、肺部栓塞、严重的肺炎、吸烟、辐射、高纬度、几乎溺死等。ARDS一般作为医疗急症而发生并且可由直接或间接导致血管内液体“漏”进肺的其它疾病所导致。在ARDS中，肺的舒张能力被严重削弱并对肺泡和肺衬里层或内皮产生广泛的损伤。ARDS最常见的症状是呼吸费力、急促，鼻张大，由于组织缺氧造成皮肤、嘴唇和指甲呈蓝紫色，焦虑和暂时呼吸停止。ARDS的初步诊断可经胸部X射线检查和测定动脉血气体来确定。在一些病例中，ARDS表现出与其它疾病，例如急性髓性白血病和在使用，例如胞嘧啶阿拉伯糖苷治疗后引发的急性肿瘤溶解综合征(ATLS)相关。然而，总体上ARDS与以下情况相关：外伤、严重的血液感染(例如败血症)、或其它全身性疾病、高剂量放疗和化疗以及导致多器官衰竭，在许多病例中导致死亡的炎性应答反应。在早熟婴儿(“早产儿”)中，肺组织或表面活性物质均未发育完全。早产儿发生呼吸窘迫综合征(RDS)是极为严重的问题。现今对患RDS的早产儿通过通气和施用氧与表面活性物质制剂来治疗。当早产儿从RDS中存活下来，他们经常会发生支气管肺发育不良(BDP)，这也称为早产儿的慢性肺病，经常是致命的。

过敏性鼻炎影响五分之一的美国人，在每年的卫生保健支出中估计占40-100亿，并且发生于所有年龄段。因为许多人将他们的症状误认为持续的感冒或鼻窦问题，过敏性鼻炎可能未诊断出。通常IgE与鼻中的过敏原结合而产生化学介质，诱导细胞过程，刺激神经元并导致潜在的炎症。其症状包括眼鼻充血、流鼻涕、打喷嚏和搔痒感。随着时间推移、过敏性鼻炎患者往往产生鼻窦炎、中耳炎伴溢液和鼻息肉。约60％的过敏性鼻炎患者也患有哮喘和过敏性鼻炎加重的哮喘。肥大细胞脱颗粒导致与各种细胞、血管和粘液腺相互作用的预成型介质释放从而产生典型的鼻炎症状。在接触过敏原后，鼻中发生大部分早期和晚期反应。在慢性过敏性鼻炎中观察到晚期反应和作为最主要症状的分泌过多和充血。反复接触抗原导致对一种或多种过敏原的超敏反应。患者也可能对非特异性的触发物质，例如冷空气或强烈的气味变得反应过度。非过敏性鼻炎可由感染，例如病毒所诱导，或者与鼻息肉有关，如在具有阿司匹林特异体质的患者中发生的。

诸如妊娠或甲状腺功能减退与和职业性因素或药物接触等医学状况可导致鼻炎。所谓的NARES综合征(非变应性鼻炎伴嗜酸粒细胞增多综合征)是与鼻分泌物中的嗜酸性细胞相关的非过敏性类型鼻炎，经常发生于中年人并伴有一定的嗅觉丧失。对过敏性和非过敏性鼻炎的治疗不令人满意。自我施用的盐水改善了鼻塞、打喷嚏和充血，并且一般无副作用，因此是妊娠患者的首选治疗方法。盐水喷雾剂通常用于减轻与各种鼻疾病相关的粘膜刺激或干燥，尽可能降低粘膜萎缩并排出结壳或增厚的粘膜。如果在皮质类固醇的鼻内给药前立即使用，盐水喷雾剂可帮助预防药物诱导的局部刺激。抗组胺剂，例如特非那定和阿司咪唑也用于治疗过敏性鼻炎；然而使用通常与其它药物，例如酮康唑与红霉素相互作用的抗组胺剂与已知为扭转型室性心动过速的室律不齐相关，或继发性产生潜在的心脏问题。另一种非镇静抗组胺剂氯雷他定和西替利嗪与对QT间隔的不良影响，或与严重的心血管不利作用无关。然而，西替利嗪可产生深度嗜睡并且不是广泛使用的处方药。非镇静的抗组胺剂，例如氯雷他定可在一定程度上缓解打喷嚏、流鼻水和鼻、眼、腭搔痒感，但未测试能否用于哮喘或其它更多的特异性疾病。另一方面，特非那定、氯雷他定和阿司咪唑显示极为适当的支气管舒张作用，降低对组胺的支气管过度反应性并提供保护抵御运动或抗原诱导的支气管痉挛。然而，这些疗效中的一部分需要用高于当前推荐的剂量。镇静类型的抗组胺剂有助于诱导晚间睡眠，但如果在白天服用会导致嗜睡并损害行动能力。抗组胺剂在使用时通常与减充血剂联用以帮助缓解鼻充血。拟交感神经药物可用作血管收缩药和减充血剂。三种常用的处方药全身性减充血剂伪麻黄碱、苯丙醇胺和苯福林导致高血压、心悸、心动过速、烦躁、失眠和头痛。苯丙醇胺与咖啡因(2-3杯咖啡的剂量)的相互作用可显著升高血压。此外，伪麻黄碱等药物可导致儿童过度反应。然而，局部减充血剂仅能在有限期间使用，因为它们过度使用与鼻膨胀的反跳相关。抗胆碱能药物可给予患有明显鼻溢的患者或用于通常由摄入辛辣食物导致的特定疾病，例如“味觉鼻炎”，并且对普通感冒可有一些疗效。例如，如果将色甘酸钠用作预防性的鼻喷雾剂，可缓解打喷嚏、流鼻涕和鼻搔痒，阻断早期和晚期的超敏反应，但它产生打喷嚏、暂时性头痛、甚至鼻烧灼感。局部给予皮质类固醇(例如，双丙酸倍氯米松)有效地治疗鼻炎，特别是搔痒、打喷嚏和流鼻水的症状，但对鼻塞效果差。然而，皮质类固醇鼻喷雾剂可导致刺激感、刺痛感、烧灼感或打喷嚏等，这取决于制剂。有时也会发生局部出血和隔膜穿孔，特别是如果气溶胶未合适地对准时。局部类固醇在治疗过敏性鼻炎中通常比色甘酸钠更有效。免疫疗法虽然昂贵且不方便，但往往能提供疗效，特别是对其它药物产生副作用的患者。能改变细胞组胺释放的所谓的阻断性抗体和药物最终导致IgE降低以及其它许多有益的生理变化。该作用在IgE介导的疾病(例如中耳感染复发的特应性患者的超敏反应)中有用。

肺纤维化、间质性肺病(ILD)或间质性肺纤维化包括130种以上的慢性肺病，这些肺病通过破坏肺组织、在肺泡壁中产生炎症、在间质组织(或肺泡间的组织)中结疤或纤维化以及使肺部僵硬而影响肺部。运动期间时气喘可能是这些疾病的初始症状之一，并可能出现干咳。仅由症状或X射线检查通常不足以区分肺纤维化的不同类型。一些肺纤维化患者的原因已知，而一些患者的原因未知或是特发性的。此种疾病的病因通常不可预知婴儿该疾病不可避免是致命的。其发展包括肺组织的增厚与僵硬、炎症和呼吸困难。大多数人需要给氧治疗，而唯一的治疗方法是肺移植。

肺癌是世界上最常见的癌症。2003年间，仅美国就将新增约171,900例肺癌(男性91,800例，而女性80,100例)，而欧洲约有375,000例。肺癌在男女中均是癌症死亡的首要原因。估计2003年仅在美国就有157,200例肺癌患者死亡(男性88,400例，女性68,800例)，占总癌症死亡人数的28％。死于肺癌的人比死于结肠癌、乳腺癌和前列腺癌加起来的还要多(美国癌症协会网站(American Cancer Society Website)，2003，“详细指南：肺癌：关键的统计资料是什么？”(Detailed Guide：LungCancer：What are the Key Statistics？))。吸烟已知是肺癌的主要原因，约90％的病例认为与烟草有关。肺癌的风险与每日吸烟的根数、吸入的程度和开始吸烟的年龄之间有明显的剂量-应答关系。终身吸烟者患肺癌的风险比不吸烟者高20-30倍。然而，肺癌的风险随开始戒烟的时间而降低。男性戒烟者的相对风险随开始戒烟的时间而急剧降低，但达不到不吸烟者的低风险，并且也不如女性戒烟者降得多(Tyczynski等，Lancet Oncol.4(1)：45-55(2003))。

COPD与肺癌往往是同时发病的疾病，而潜在的COPD程度可指示某位患者是否需要外科手术。就NSCLC(非小细胞肺癌)而言，仅外科手术(结合或不结合放疗或辅佐性化疗)是治愈性的。

·1998年肺癌患者的1年存活率(在诊断出癌症后至少活过一年的人数)是42％，这很大程度上是由于外科技术的提高。

·所有各期的非小细胞肺癌患者的5年存活率加在一起仅为15％。就小细胞肺癌而言，5年的相对存活率约6％。

·就诊断出NSCLC并在扩散至淋巴结或其它器官之前早期进行外科治疗的人而言，其5年的平均存活率约是50％。然而，仅有15％的患肺癌的人能在这种早期、局部阶段得到诊断。

肺癌的药物预防以及肺癌的治疗方法明显还有很多提高的余地。

脱氢表雄酮(DEHA)(3β-羟基雄-5-烯-17-酮)是肾上腺皮质分泌的具有明显化学保护性能的天然类固醇。流行病学研究表明DEHA的内源性水平低与患某些形式的癌症，例如女性绝经前乳腺癌和两种性别中均有的膀胱癌的风险增加相关。据信，DEHA和DEHA类似物，例如DEHA-S(硫酸DEHA)抑制癌形成的能力是由于其对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)活性的非竞争性抑制。G6PDH是己糖一磷酸途径的限速酶，而该途径是胞内核糖-5-磷酸和NADPH的主要来源。核糖-5-磷酸是合成核糖核酸或脱氧核糖核酸所必需的底物。NADPH也是参与核酸生物合成与羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG CoA还原酶)的辅因子。HMG CoA还原酶是一种独特的酶，每产生1摩尔产物一甲羟戊酸盐需要2摩尔的NADPH。因此，HMG CoA还原酶看上去对DHEA介导的NADPH缺乏应有超敏感性，并且经DHEA处理的细胞应该快速显示出缺乏胞内甲羟戊酸盐库。DNA合成需要甲羟戊酸盐，DHEA以极类似于直接(direct)HMG CoA的方式使人细胞停止于细胞循环的G1期。因为G6PDH是产生用于细胞加工(例如蛋白质的异戊二烯化与糖蛋白生物合成的一种前体的多萜醇合成)的甲羟戊酸所需，DHEA通过耗尽甲羟戊酸并藉此抑制蛋白质异戊二烯化和糖蛋白的合成来抑制癌形成。甲羟戊酸盐是合成胆固醇以及合成各种涉及蛋白质翻译后修饰的非甾醇化合物(例如，焦磷酸法呢酯和焦磷酸垅牛儿酯)与涉及细胞-细胞联系和细胞结构的糖蛋白合成所需的多萜醇的中心前体。以适当药学剂量接受肾上腺皮质来源类固醇激素的患者显示感染性疾病的发病率增加早已知晓。美国专利号5,527,789披露了一种通过向患者施用DHEA和泛醌来抵御癌症的方法，其中所述癌症是一种对DHEA敏感的癌症。

DHEA是一种17-酮类固醇，其在数量上是在哺乳动物中发现的一种主要的肾上腺皮质类固醇激素。虽然DHEA在生殖腺类固醇激素合成中作为中间体，DHEA的主要生理功能未完全了解。然而，已知此激素的水平在生命的第二个十年中开始降低(在老年达到初始水平的5％)。DHEA在临床上被全身性或局部使用来治疗患有银屑病、痛风、高脂血症的病人，并且施用于冠状动脉(手术)后患者。在哺乳动物中，DHEA显示具有优化体重(weight optimizing)与抗癌形成的作用，并且在欧洲临床上与雌激素联用作为药物来逆转绝经症状，也用于治疗狂躁抑郁症、精神分裂症和早老性痴呆。DHEA在临床上用于治疗晚期癌症和多发性重硬化症的剂量是40mg/kg/天。温和的雄激素作用、多毛症和增强性欲是观察到的副作用。这些副作用可通过监测剂量和/或使用类似物来克服。已知皮下或口服施用DHEA来提高宿主对感染的应答，如使用贴片来递送DHEA。DHEA也已知是最终提高哺乳动物免疫应答的更强药物的代谢途径中的前体。即，DHEA作为原药：当其转化为雄烯二醇或雄-5-烯-3β，17β-二醇(βAED)，或雄烯三醇(androstenetriol)或雄-5-烯-3β，17β-三醇(βAET)时，可起到免疫调节剂的作用。然而，DHEA在转化为βAED和βAET之前在体外对细胞增殖具有某种淋巴毒性和抑制作用。因此，据信通过施用DHEA获得的较优免疫力提高性能是由于其转化为更具活性的代谢物所致。

腺苷是一种涉及中间代谢的嘌呤，在各种肺病中可构成重要介质，包括支气管哮喘、COPD、CF、RDS、鼻炎、肺纤维化等。哮喘患者对气雾化腺苷具有显著的支气管收缩反应而正常人无此现象表明其受体具有潜在的作用。患哮喘的家兔动物模型(人哮喘的尘螨过敏家兔模型)对气雾化腺苷具有类似方式的明显支气管收缩反应，而无哮喘的家兔模型无反应。此动物模型的近来研究表明哮喘患者的腺苷诱导的支气管收缩和支气管过度反应可能主要是通过刺激腺苷受体介导的。当腺苷治疗性施用于早先未诊断出具有过度反应气道的患其它疾病的对象时，也显示腺苷可导致不良作用，包括死亡。作为细胞代谢的调节剂，腺苷在体内起着独特的作用。它能提升作为细胞能量中间体的AMP、ADP和ATP的细胞水平。腺苷可刺激或下调腺苷酸环化酶的活性从而调节cAMP的水平。cAMP进而在神经递质释放、细胞分裂和激素释放中起作用。腺苷的主要作用看来是起着保护性损伤内分泌物的作用。当局部缺血、氧张力降低或损伤发生时，腺苷起作用。据认为腺苷的合成、释放、起作用和/或降解的缺陷导致大脑刺激性氨基酸神经递质的活性过度从而导致各种病理学状态。腺苷也被认为是支气管哮喘和其它呼吸道疾病的症状发生，诱导支气管收缩和气道平滑肌收缩的主要决定因素。此外，腺苷在哮喘患者中导致支气管收缩但在无哮喘患者中无此作用。其它数据表明腺苷受体也可能通过降低中枢多巴胺能系统的过度活跃而参与过敏和炎性应答。据认为，调节炎性细胞表面的信号转导影响了急性炎症。据说腺苷通过激活中性白细胞来抑制超氧化物的产生。近来的证据表明腺苷也在中风、CNS创伤、癫痫、缺血性心脏病、冠状动脉旁路、接触辐射和炎症中起保护作用。总之，腺苷显示可通过ATP调节细胞代谢，作为甲硫氨酸的运载体，可降低细胞的氧需求和保护细胞免受缺血性损伤。腺苷是当细胞遭受缺血、缺氧、细胞应急和工作负荷增加和/或当对ATP的需求超过其供应量时释放的一种组织激素或胞内信使。腺苷是一种嘌呤并且其产生直接涉及ATP代谢。它显示可调节一系列生理过程，包括血管紧张性、激素作用、神经功能、血小板聚集和淋巴细胞分化。它也可在DNA形成、ATP生物合成和整个中间代谢中起作用。据称它能调节大脑和各种外周组织中的cAMP形成。腺苷通过两种受体A₁和A₂调节cAMP形成。腺苷通过A₁受体降低腺苷酸环化酶的活性，而通过A₂受体激活腺苷酸环化酶。腺苷A₁受体比A₂受体对腺苷更敏感。据信腺苷的CNS作用由A₁受体介导，而外周作用，例如低血压、心动过缓据说是由A₂受体介导。

许多药物已用于治疗呼吸道疾病，但总体上它们均具有局限性。这些药物有糖皮质类固醇、白三烯抑制剂、抗胆碱能药物、抗组胺剂、氧疗法、茶碱和粘液溶解药。尽管糖皮质类固醇已证明有反作用，它仍是最广泛使用的药物之一。然而，大多数可用的药物只在少数病例中有效，并且当治疗哮喘时根本没用。当前对许多其它的呼吸道疾病无可用的治疗方法。茶碱作为一种治疗哮喘的重要药物已知是腺苷受体的拮抗剂，据报道其在患哮喘的家兔中消除了腺苷介导的支气管收缩。也有报道说一种选择性A₁受体拮抗剂，8-环戊基-1，3-二丙基黄嘌呤(DPCPX)可抑制过敏家兔的腺苷介导的支气管收缩和支气管过度反应。然而，当前可用的腺苷A₁受体特异性拮抗剂的治疗性和预防性应用受限于其毒性。例如，茶碱已广泛用于治疗哮喘，但由于其狭窄的治疗性剂量范围常导致频繁、显著的毒性(胃肠、心血管、神经和生物紊乱)。DPCPX毒性更大不能用于临床。尽管经过数十年的广泛研究，但没有特异性的腺苷受体拮抗剂可用于临床的事实证明了这些药物的普遍毒性。

目前，PDE-4抑制剂开发用于治疗哮喘、COPD、风湿性关节炎、多发性硬化和克罗恩病。罗氟司特(Roflumilast)是一种口服的活性非甾体抗炎药。罗氟司特(Altana Pharma，德国)正在进行哮喘和COPD的III期临床试验。与安慰剂相比，其较高和较低的剂量分别使657位哮喘患者的恶化人数降低了48％和8％。西洛司特(Cilomilast)(Ariflo^TM，SB 207499，SmithKline Beecham)正在进行COPD症状治疗的III期临床试验。该药专门针对使用短效支气管扩张剂和/或抗胆碱能药未能控制住症状的COPD患者。

美国专利号5,660,835(和对应的PCT公开WO96/25935)披露了一种通过向受试对象施用脱氢表雄酮(DHEA)或DHEA相关化合物来治疗受试对象的哮喘或腺苷耗尽的新方法。该专利也披露了一种涉及可吸入或可呼吸制剂的新型药物组合物，该制剂含有可呼吸大小颗粒的DHEA或DHEA相关化合物。

美国专利号5,527,789披露了一种通过向受试对象施用DHEA或DHEA相关化合物来抵御受试对象的癌症，与施用泛醌来抵御DHEA或DHEA相关化合物诱导的心力衰竭的方法。

美国专利号6,087,351披露了一种通过向受试对象施用DHEA或DHEA相关化合物来降低或耗尽受试对象组织中腺苷的体内方法。

2003年6月3日提交的美国专利申请系列号10/454,061披露了一种通过向受试对象施用DHEA或DHEA相关化合物来治疗受试对象的COPD的方法。

2003年6月17日提交的美国专利申请系列号10/462,901披露了一种密封于容器中的喷雾形式的稳定DHEA干粉制剂。

2003年6月17日提交的美国专利申请系列号10/462,927披露了一种适合于治疗哮喘和COPD的DHEA-S二水合结晶形式的稳定干粉制剂。

以上专利和专利申请全文纳入作为参考。

急需新颖且有效的用于治疗呼吸道疾病、肺病和癌症的药物，所述疾病现在不能治疗或者至少现有药物无效且不能避免明显有害副作用。影响呼吸道，更具体说影响肺和肺气道的疾病包括呼吸困难、哮喘、支气管收缩、肺部炎症和过敏、表面活性物质的耗尽或分泌不足等。此外，明确需要具有预防性和治疗性应用并需要低剂量活性剂的治疗方法，这可使这些治疗方法既廉价又不易导致有害的副作用。

此外，需要确保患者愿意服用药物，并且需要有助于服用治疗或预防哮喘、COPD或其它呼吸道疾病所需的多种化合物。

发明概述

本发明提供至少包含两种活性剂的组合物。第一活性剂含有非糖皮质激素类固醇，例如表雄酮(EA)或其盐。第二活性剂含有PDE-4抑制剂。该组合物包括第一活性剂和第二活性剂的组合。当将该组合物施用于受试对象时，其中第一活性剂和第二活性剂的量足以有效地预防或治疗处于患哮喘、COPD或其它呼吸道疾病危险的受试对象。该组合物还可包括其它生物活性剂和制剂成分。该组合物是适合于施用于受试对象或患者，例如人或非人动物(例如非人哺乳动物)的药物组合物或兽用组合物。

该组合物可用于治疗因炎症及其后遗症所引起的哮喘、COPD或其它呼吸道疾病，包括与支气管收缩、表面活性物质耗尽和/或过敏相关的疾病。

本发明也提供治疗哮喘、COPD或其它呼吸道疾病的方法，所述方法包括向需要这种治疗的受试对象施用所述组合物。

本发明也提供第一活性剂和第二活性剂在生产上述预防或治疗哮喘、COPD或其它呼吸道疾病的药物中的应用。

本发明也提供一种装有所述组合物和递送装置的试剂盒。该递送装置能将所述组合物递送至受试对象。递送装置优选包括与气溶胶或喷雾产生装置一起提供的递送颗粒的吸入器。优选递送至受试对象的气道。更优选递送至受试对象的肺部。优选直接递送至所需部位。

使用该组合物的主要优点在于需要这种预防或治疗的患者的顺从性。对每位患者而言，呼吸道疾病，例如哮喘或COPD是多因素的且表现出不同的体症和症状。因此，大多数患者用多种药物治疗来缓解疾病的不同方面。第一活性剂，例如DHEA或DHEA-S与第二活性剂，例如沙美特罗或福莫特罗的固定组合为某确定的患者亚群提供了更为便利的靶向治疗方法。通过简化治疗药物和将注意力集中在每位患者的独特疾病属性应能改善患者的顺从性，从而以最有效的方式治疗其特异性症状。此外，在一次给药中同时施用第一和第二活性剂的额外优点是方便或省时。当该组合物施用至可能具有不适的受试对象身体的某区域，例如将该组合物施用至受试对象的气道时，这尤为理想。当将该组合物施用至受试对象的方法是侵入性时也尤为理想。

此外，当第一活性剂，例如DHEA或DHEA-S递送或沉积于肺泡膜和细小气道的远端外周气道而非传导气道时，它是最有效的抗炎药物。哮喘和一些COPD患者的传导气道收缩，这限制了作用于这些远端外周气道的第一活性剂，例如DHEA的递送(由于较低的颗粒速度导致更早的沉积)。因此，联用支气管舒张药物(β2激动剂，使紧张性升高逆转的抗蕈毒性药物(antimuscarinic))有助于将抗炎药物递送到远端外周气道。使用该组合提高了持久的药理作用，从而转变为对疾病控制的改善。抗白三烯药物降低极小的外周气道中的间质水肿。这也具有增加外周气道直径和促进递送第一活性剂的作用。抗组胺剂也降低外周气道水肿并有助于第一活性剂的末端气道递送，也是理想的。

伴随本专利的附图形成本发明内容的一部分，并进一步说明了本发明以下述及的一些方面。

附图简述

图1描述了作为流速函数的单剂量Acu-Breathe吸入器递送的纯微粉化DHEA-S·2H₂O的细颗粒部分。结果以DHEA-S表示。实质上无水的微粉化DHEA-S的IDL数据也示于此图，其中由于无可检测的微粒进入撞击器，30L/分钟的结果设置为零点。

图2是纯净的实质上无水的散装DHEA-S及其与乳糖的混合物保存于50℃1周后的HPLC色谱图。对照是保存于室温(RT)的纯DHEA-S。

图3是纯净的散装DHEA-S·2H₂O及其与乳糖的混合物保存于50℃1周后的HPLC色谱图。对照是保存于RT的纯DHEA-S·2H₂O。

图4描述了在两种温度氯化钠浓度与DHEA-S溶解性的函数关系。

图5描述了在24-25℃钠离子浓度的倒数与DHEA-S溶解性的函数关系。

图6描述了在7-8℃钠离子浓度的倒数与DHEA-S溶解性的函数关系。

图7在室温具有或不具有缓冲液时氯化钠浓度与DHEA-S溶解性的函数关系。

图8描述了在24-25℃，具有或不具有缓冲液时钠离子浓度的倒数与DHEA-S溶解性的函数关系。

图9描述了在两种保存条件下，DHEA-S的溶液浓度与时间的关系。

图10描述了在两种保存条件下，DHEA的溶液浓度与时间的关系。

图11是喷雾实验的示意图。

图12描述了沉积在旁路收集器中的DHEA-S量与安放于喷雾器中的初始溶液浓度的函数关系。

图13描述了DHEA-S喷雾溶液级联撞击获得的粒径。给出的数据是所有7个喷雾实验的平均值。

图14描述了DHEA对HT-29SF细胞的抑制作用。

图15描述了DHEA对HT-29SF细胞的细胞周期分布的作用。

图16a和16b描述了对HT-29细胞中DHEA诱导的生长抑制的逆转。

图17描述了对HT-29SF细胞中DHEA诱导的G₁停滞的逆转。

图18描述了EGF、IBMX和DHEA对³H-胸腺嘧啶掺入人平滑肌培养物中的作用。

图19描述了单用DHEA与联用IBMX来抑制EGF刺激的增殖的能力。

图20描述了某些合适的DHEA类似物。

图21描述了某些合适的DHEA类似物。

图22描述了某些合适的DHEA类似物。

图23描述了对DHEA的C-17酮的适当修饰。

优选实施方案的详述

定义

本文的术语“腺苷”和“表面活性物质”的耗尽包括与受试对象的原有水平相比，受试对象中此物质水平的降低或耗尽，以及与基本上与该受试对象的原有水平相同的水平，但由于一些其它原因，要改变这些物质的原有水平才能在患者中达到治疗性益处。

本文使用的术语“气道”表示接触空气的受试对象的部分或整个呼吸系统。气道包括(但不限于)喉咙、气管支气管树、鼻通道、鼻窦等。气道也包括气管、支气管、细支气管、终末细支气管、呼吸道细支气管、肺泡管和肺泡囊。

本文使用的术语“气道炎症”表示与受试对象的气道炎症相关的疾病。气道炎症可由以下疾病引起或与之相伴：过敏、哮喘、呼吸障碍、囊性纤维化(CF)、慢性阻塞性肺病(COPD)、过敏性鼻炎(AR)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、微生物或病毒感染、肺高血压、肺部炎症、支气管炎、癌症、气道阻塞和支气管收缩。

本文使用的术语“运载体”表示形式为气体、液体、固体运载体及其混合物的，适合于所需的不同施用途径生物学可接受的运载体。该运载体优选是药学或兽医学可接受的。

本文使用的“有效量”表示提供治疗性或预防性益处的量。

“其它治疗性药物”表示除所述组合物中的第一或第二活性剂以外的任何治疗性药物。

本文使用的术语“预防”表示在受试对象患上疾病之前或早先诊断出的病症恶化以前进行的预防性治疗，从而使得受试对象能避免、防止或降低所患疾病的症状或相关疾病的可能性。该受试对象可是患疾病或早先诊断出的病症恶化的风险增加的对象。

本文使用的术语“呼吸道疾病”表示与呼吸系统相关的疾病或病症。例子包括(但不限于)气道炎症、过敏、呼吸障碍、囊性纤维化(CF)、过敏性鼻炎(AR)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、癌症、肺高血压、肺部炎症、支气管炎、气道阻塞、支气管收缩、微生物和病毒感染，例如SARS。

本文使用的术语“治疗”、“治疗的”或“治疗性”表示被给予这种治疗方法的受试对象表现出疾病或其它病症的症状可能降低的治疗方法。

联合制剂

本发明提供包含有第一活性剂和第二活性剂的组合物，其中第一活性剂含有非糖皮质激素类固醇，例如表雄酮(EA)、其类似物或其盐，而第二活性剂含有PDE-4抑制剂。该组合物还可含有药学上或兽医学上可接受的运载体、稀释剂、赋形剂、生物活性剂或成分。该组合物可用于治疗哮喘、COPD或其它呼吸道疾病。该组合物也可用于治疗的其它呼吸道疾病是与支气管收缩、肺部炎症和/或过敏和肺癌相关的肺病和呼吸道疾病。

所述第一活性剂是表雄酮、其类似物或药学上或兽医学上可接受的盐。表雄酮、其类似物或药学上或兽医学上可接受的盐选自具有以下化学式的非糖皮质激素类固醇

式中，虚线表示单键或双键；R是氢或卤素；5位的H是α或β构型，或者化学式I所示的化合物包含此两种构型的外消旋混合物；R¹是氢或共价连接于该化合物的多价无机或有机二羧酸；

以下化学式所示的非糖皮质激素类固醇

或

以下化学式所示的非糖皮质激素类固醇

或它们的组合，

其中R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R12、R13、R14和R19各自为H、OR、卤素、(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基；R5和R11各自为OH、SH、H、卤素、药学上可接受的酯、药学上可接受的硫酯、药学上可接受的醚、药学上可接受的硫醚、药学上可接受的无机酯、、药学上可接受的单糖、二糖或寡糖、螺环氧乙烷(spirooxirane)、螺环硫乙烷(spirothirane)、-OSO2R20、-OPOR20R21或(C1-C10)烷基；R5和R6结合到一起是＝O；R10和R11结合到一起是＝O；R15是(1)当R16是-C(O)OR22时，为H、卤素、(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基，(2)当R16是卤素、OH或(C1-C10)烷基时，为H、卤素、OH或(C1-C10)烷基，(3)当R16是OH时，为H、卤素、(C1-C10)烷基、(C1-C10)链烯基、(C1-C10)炔基、甲酰基、(C1-C10)烷酰基或环氧基(4)当R16是H时，为OR、SH、H、卤素、药学上可接受的酯、药学上可接受的硫酯、药学上可接受的醚、药学上可接受的硫醚、药学上可接受的无机酯、药学上可接受的单糖、二糖或寡糖、螺环氧乙烷、螺环硫乙烷、-OSO2R20或-OPOR20R21；或R15和R16结合到一起是＝O；R17和R18各自为(1)当R6是H、OR、卤素、(C1-C10)烷基或-C(O)OR22时，为H、-OH、卤素、(C1-C10)烷基或-(C1-C10)烷氧基，(2)当R15和R16结合到一起是＝O时，为H、(C1-C10烷基).氨基、((C1-C10)烷基)n氨基-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、羟基-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基、(卤素)m(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷酰基、甲酰基、(C1-C10)烷酯基或(C1-C10)烷酰氧基，(3)R17和R18结合到一起是＝O；(4)R17或R18与其所连接的碳结合到一起形成含有0或1个氧原子的3-6元环；或(5)R15和R17与它们所连接的碳结合到一起形成环氧化物环；R20和R21各自为OH、药学上可接受的酯或药学上可接受的醚；R22是H、(卤素)m(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷基；n是0、1或2；m是1、2或3；或它们的药学或兽医学上可接受的盐。

就化学式(I)而言，多价有机二羧酸优选是SO₂OM、磷酸盐或碳酸盐，其中M包括平衡离子。平衡离子的例子是H、钠、钾、镁、铝、锌、钙、锂、铵、胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸、三乙胺、乙醇胺、胆碱、三乙醇胺(triethanoamine)、普鲁卡因、苄星青霉素G、丁三醇胺(tromethanine)、吡咯烷、哌嗪、二乙胺、硫苷脂

和磷脂

式中，可相同或不同的R²和R³是直链或支链(C1-C14)烷基或葡糖苷酸

化学式I的5位的H可是α或β构型或者DHEA可以这两种构型化合物的混合物提供。以上化学式I的示例性化合物包括(但不限于)含有双键的DHEA，其中R和R¹分别是氢；含有双键的16-α溴(代)表雄酮，其中R是Br，R¹是H；含有双键的16-α-氟(代)表雄酮，其中R是F，R¹是H；缺少双键的本胆烷醇酮，其中R和R¹分别是氢；缺少双键的硫酸脱氢表雄酮，其中R是H，R¹是SO₂OM，而M是上述的硫苷脂(sulphatide)基团。然而也可包括其它化合物。式I所示的化合物也优选含有双键，R是卤素，例如溴、氯或氟，而R1是氢的化合物。式I所示的化合物最优选1-α-氟(代)表雄酮。其它优选的化合物是DHEA和DHEA盐，例如硫酸盐(DHEA-S)。

非糖皮质激素甾酮，例如式(I)、(III)和(IV)所示的化合物、它们的衍生物及其盐的施用剂量一般是每千克体重约0.05、0.1、1、5、20-100、500、1000、1500、1800、2500、3000、3600毫克。然而，其它剂量也是合适的并为本专利所考虑。式(I)、(III)和(IV)所示的第一活性剂可按照已知的方法，或者本领域的技术人员明白的这些方法的变化形式制造。例如，参见美国专利号4,956,355；英国专利号2,240,472；EPO专利申请号429,187；PCT专利公开号WO 91/04030；美国专利号5,859,000；Abou-Gharbia等，J.Pharm.Sci.70：1154-1157(1981)；Merck目录专论(Merck Index Monograph)第7710号(第11版，1989)等。

在本发明的一些实施方案中，所述第一活性剂可以是表雄酮类似物或其衍生物。本发明也包括表雄酮的原药及其活性代谢物。本领域的技术人员可意识到本文所述的化合物可显示互变异构、构型异构、几何异构和/或光学异构现象。应该理解的是本发明包括具有一种或多种本文所述用途的化合物的任何互变异构、构型异构、光学异构和/或几何异构形式，以及这些各种不同形式的混合物。

例如描述于以下参考文献的表雄酮的代谢物可用作第一活性剂-特布他林治疗的哮喘儿童的尿类固醇的毛细管气相色谱(Capillary gas chromatography ofurinary steroids of terbutaline-treated asthmatic children)，Chromatographia(1998)，48(1/2)，163-165；人肺成纤维细胞中的雄烯二酮代谢(Androstenedione metabolism inhuman lung fibroblasts)，Journal of Steroid Biochemistry(1986)，24(4)，893-7；雄酮和5α-雄烷-3α，17β-二醇在培养的人肺组织和肺内皮细胞中的代谢(Metabolism ofandrosterone and 5α-androstane-3α，17β-diol in human lung tissue and in pulmonaryendothelial cells in culture)，Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism(1985)，60(2)，244-50；人肺组织的睾酮代谢(Testosterone metabolism by human lung tissue)，Journal of Steroid Biochemistry(1978)，9(1)，29-32；雄酮和5α-雄烷-3α，17β-二醇在培养的人肺组织和肺内皮细胞中的代谢(Metabolism of androsterone and 5alpha-androstane-3 alpha，17 beta-diol in human lung tissue and in pulmonaryendothelial cells in culture)，Journal of clinical endocrinology and metabolism(1985年2月)，60(2)，44-50；脱氢表雄酮和雄烯二酮在培养的人肺内皮细胞中的代谢(Metabolism of dehydroisoandrosterone and androstenedione in human pulmonaryendothelial cells in culture)，Journal of clinical endocrinology and metabolism(1983年5月)，56(5)，930-5；体外人肺对脱氢表雄酮和雄烯二酮的代谢(Metabolism ofdehydroisoandrosterone and androstenedione by the human lung in vitro)，Journal ofsteroid biochemistry(1977年4月)，8(4)，277-84；体外狗肺中的睾酮代谢(Testosterone metabolism in dog lung in vitro)，Steroids and lipids research(1973)，4(1)，17-23，这些文献均全文纳入作为参考。

其它可用作第一活性剂的合适的DHEA类似物描述于文中。图20描述了某些合适的DHEA类似物，包括式IA、IB、IC和ID所示的化合物。本文对合适的R基团的描述中，连接点用CH2基团或有星号标记的原子表示。R1和R3是直链或支链的烷基，包括苄基和任选取代的烷基，例如氨基烷基、羟基烷基、醚和羧酸，以及可任选取代的芳基和杂芳基。例如，R1和R3可是

式IA所示的化合物的例子包括

R2优选是二酸衍生或氨基酸衍生的取代基，可能包括氯乙酰基衍生物和丙烯酸盐衍生物，或者任选取代的芳基，例如苄基和杂苯甲酰基。式IB所示的化合物的例子是

式IC所示的化合物的例子包括，

R4在本质上可是芳香基，式ID所示合适的化合物的例子包括，

其它合适的类似物包括通过在C-3位置保留OH或用NH取代OH进行修饰的类似物。如图21所示，这些类似物通常从C-17乙缩醛保护的雄-4-烯3，17-二酮开始来制造。式IE所示的化合物可衍生自格氏试剂和可能的芳基-锂试剂，例如本质上是芳香族的化合物，并也可是炔基、链烯基和烷基。R5的例子是

CH2(CH2)_n，其中n＝0-4

式IE所示的化合物的例子包括

R6和R8各自为各种不同的胺并可包括具有R1基团所述官能度的胺。式IF所示合适的化合物的例子包括，

合适的R7基团可得自格氏试剂/有机锂试剂，因此可具有R5所述的官能度。式IG所示的化合物的例子包括，

式IH所示的化合物的例子包括

其它合适的类似物包括其中DHEA的C-2位被修饰的化合物。合适的修饰物描述于图22。R9可得自烷基化试剂，例如烷基、苄基、杂苄基和其它活性卤化物的衍生物。R9的例子包括，

式IJ所示的化合物的例子包括，

R10可是芳香酯，例如具有芳基或杂芳基环或可烯醇化的烷基酯。式IK所示的化合物的例子包括，

R11可是一系列芳香族和杂芳香醛，例如苯羧醛及其取代的变体，吡啶羧醛或不可烯醇化的醛，例如(CH3)3CCH＝O。式IL所示的化合物的例子包括，

R12是胺类，例如R6的一个亚组。式IN所示的化合物的包括，

DHEA的C-17酮的合适修饰物描述于图23。描述于图23的化合物也可用作第一活性剂。

其它合适的DHEA类似物描述于美国专利号6,635,629；欧洲专利934745；脱氢表雄酮及类似物抑制DNA和AP-1的结合与气道平滑肌增殖(Dehydroepiandrosterone and analogs inhibit DNA binding of AP-1 and airway smoothmuscle proliferation)，Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics(1998)，285(2)，876-883；脱氢表雄酮及相关类固醇在体外抑制线粒体呼吸作用(Dehydroepiandrosterone and related steroids inhibit mitochondrial respiration in vitro)，International Journal ofBiochemistry(1989)，21(10)，1103-7，所有这些文献均全文纳入作为参考。

第二活性剂是PDE-4抑制剂。

PDE-4抑制剂如以下化学式(V)所示：

化学式(V)所示的PDE-4抑制剂具有以下结构特征：

取代基R1和R2之一是氢、1-6C-烷氧基、3-7C-环烷氧基、3-7C-环烷基甲氧基、苄氧基或被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，而另一个是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R3是苯基、吡啶基、被R3l、R32和R33取代的苯基或被R34、R35、R36和R37取代的吡啶基，其中

R31是羟基、卤素、氰基、羧基、三氟甲基、1-4C-烷基、1-4C-烷氧基、1-4C-烷氧基羰基、1-4C-烷基羰基、1-4C-烷基羰氧基、氨基、单-或二-1-4C-烷基氨基或1-4C-烷基羰基氨基，

R32是氢、羟基、卤素、氨基、三氟甲基、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基，

R33是氢、卤素、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基，

R34是羟基、卤素、氰基、羧基、烷基、1-4C-烷氧基、1-4C-烷氧基羰基或氨基，

R35是氢、卤素、氨基或1-4C-烷基，

R36是氢或卤素，和

R37是氢或卤素，

这些化合物的盐，以及吡啶的N-氧化物及其盐。

在一个实施方案中：

化学式(V)所示的化合物优选具有以下结构特征：

取代基R1和R2之一是氢、1-6C-烷氧基、3-7C-环烷氧基、3-7C-环烷基甲氧基、苄氧基或由氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，而另一个是由氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R3是苯基、吡啶基、被R31、R32和R33取代的苯基或被R34、R35、R36和R37取代的吡啶基，其中

R31是羟基、卤素、氰基、羧基、三氟甲基、1-4C-烷基、1-4C-烷氧基、1-4C-烷氧基羰基、1-4C-烷基羰基、1-4C-烷基羰氧基、氨基、单-或二-1-4C-烷基氨基或1-4C-烷基羰基氨基，

R32是氢、羟基、卤素、氨基、三氟甲基、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基，

R33是氢、卤素、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基，

R34是羟基、卤素、氰基、羧基、1-4C-烷基、1-4C-烷氧基、1-4C-烷氧基羰基或氨基，

R35是氢、卤素、氨基或1-4C-烷基，

R36是氢或卤素，和

R37是氢或卤素，

这些化合物的盐，以及吡啶的N-氧化物及其盐，其中不包括R1是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基和R2是3-7C-环烷氧基的那些化合物。

化学式(V)所示的化合物更优选具有以下结构特征：

取代基R1和R2之一是1-4C-烷氧基、3-5C-环烷氧基、3-5C-环烷基甲氧基、苄氧基或由氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，而另一个是由氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R3是苯基、吡啶基、被R31、R32和R33取代的苯基或被R34、R35、R36和R37取代的吡啶基，其中

R31是卤素、氰基、羧基、1-4C-烷基、1-4C-烷氧基或1-4C-烷氧基羰基，

R32是氢、卤素、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基，

R33是氢、卤素、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基，

R34是卤素或1-4C-烷基，

R35是氢或卤素，

R36是氢或卤素，和

R37是氢或卤素，

这些化合物的盐，以及吡啶的N-氧化物及其盐，其中不包括R1是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基和R2是3-5C-环烷氧基的那些化合物。

化学式(V)所示的化合物再要优选具有以下结构特征：

取代基R1和R2之一是1-4C-烷氧基、3-5C-环烷氧基、3-5C-环烷基甲氧基、苄氧基或由氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，而另一个是由氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R3是2-溴苯基、2，6-二氯-4-乙氧基羰基苯基、2，6-二甲氧基苯基、4-氰基-2-氟苯基、2，4，6-三氟苯基、2-氯-6-甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2，6-二氟苯基、2，6-二氯苯基、3，5-二氯吡啶-4-基、3-甲基吡啶-2-基、2-氯吡啶-3-基、3，5-二溴吡啶-2-基、2，3，5，6-四氟吡啶-4-基、3-氯-2，5，6-三氟吡啶-4-基、3，5-二氯-2，6-二氟吡啶-4-基或2，6-二氯吡啶-3-基，

这些化合物的盐，以及吡啶的N-氧化物及其盐，其中不包括R1是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基和R2是3-5C-环烷氧基的那些化合物。

在另一个实施方案中：

化学式(V)所示的化合物优选具有以下结构特征：

R1是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R2是甲氧基，

或

R1是氢、1-6C-烷氧基、3-7C-环烷氧基、3-7C-环烷基甲氧基、苄氧基或被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R2是被氟完全或部分取代的甲氧基，

或

R1是3-7C-环烷氧基、3-7C-环烷基甲氧基或苄氧基，和

R2是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，

或

R1是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R2是3-7C-环烷基甲氧基或苄氧基，

和

R3是苯基、吡啶基、被R31、R32和R33取代的苯基或被R34、R35、R36和R37取代的吡啶基，其中

R31是羟基、卤素、氰基、羧基、三氟甲基、1-4C-烷基、1-4C-烷氧基、1-4C-烷氧基羰基、1-4C-烷基羰基、1-4C-烷基羰氧基、氨基、单-或二-1-4C-烷基氨基或1-4C-烷基羰基氨基，

R32是氢、羟基、卤素、氨基、三氟甲基、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基，

R33是氢、卤素、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基，

R34是羟基、卤素、氰基、羧基、1-4C-烷基、1-4C-烷氧基、1-4C-烷氧基羰基或氨基，

R35是氢、卤素、氨基或1-4C-烷基，

R36是氢或卤素，和

R37是氢或卤素，

这些化合物的盐，以及吡啶的N-氧化物及其盐。

化学式(V)所示的化合物更优选具有以下结构特征：

R1是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R2是甲氧基，

或

R1是1-4C-烷氧基、3-5C-环烷氧基、3-5C-环烷基甲氧基、苄氧基或被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R2是被氟完全或部分取代的甲氧基，

或

R1是3-5C-环烷氧基、3-5C-环烷基甲氧基或苄氧基，和

R2是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基

或

R1是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R2是3-5C-环烷基甲氧基或苄氧基，和

R3是苯基、吡啶基、被R31、R32和R33取代的苯基或被R34、R35、R36和R37取代的吡啶基，其中

R31是卤素、氰基、羧基、1-4C-烷基、1-4C-烷氧基或1-4C-烷氧基羰基，

R32是氢、卤素、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基，

R33是氢、卤素、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基，

R34是卤素或1-4C-烷基，

R35是氢或卤素，

R36是氢或卤素，和

R37是氢或卤素，

这些化合物的盐，以及吡啶的N-氧化物及其盐。

化学式(V)所示的化合物还优选具有以下结构特征：

要着重强调的实施方案b的式I所示的化合物中：

R1是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R2甲氧基，

或

R1是1-4C-烷氧基、3-5C-环烷氧基、3-5C-环烷基甲氧基、苄氧基或被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R2是被氟完全或部分取代的甲氧基，

或

R1是3-5C-环烷氧基、3-5C-环烷基甲氧基或苄氧基，和

R2是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，

或

R1是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R2是3-5C-环烷基甲氧基或苄氧基，和

R3是2-溴苯基、2，6-二氯-4-乙氧基羰基苯基、2，6-二甲氧基苯基、4-氰基-2-氟苯基、2，4，6-三氟苯基、2-氯-6-甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2，6-二氟苯基、2，6-二氯苯基、3，5-二氯吡啶-4-基、3-甲基吡啶-2-基、2-氯吡啶-3-基、3，5-二溴吡啶-2-基、2，3，5，6-四氟吡啶-4-基、3-氯-2，5，6-三氟吡啶-4-基、3，5-二氯-2，6-二氟吡啶-4-基或2，6-二氯吡啶-3-基，

这些化合物的盐，以及吡啶的N-氧化物及其盐。

另一方面，在优选的式(V)所示的化合物中是

R1是二氟甲氧基，

R2是甲氧基、乙氧基、异丙氧基、异丁氧基、环戊氧基、环丙基甲氧基、环丁基甲氧基、二氟甲氧基或2，2，2-三氟乙氧基，和

R3是2-溴苯基、2，6-二氯-4-乙氧基羰基苯基、2，6-二甲氧基苯基、4-氰基-2-氟苯基、2，4，6-三氟苯基、2-氯-6-甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2，6-二氟苯基、2，6-二氯苯基、3，5-二氯吡啶-4-基、3-甲基吡啶-2-基、2-氯吡啶-3-基、3，5-二溴吡啶-2-基、2，3，5，6-四氟吡啶-4-基、3-氯-2，5，6-三氟吡啶-4-基、3，5-二氯-2，6-二氟吡啶-4-基或2，6-二氯吡啶-3-基，

这些化合物的盐，以及吡啶的N-氧化物及其盐。

1-6C-烷氧基是除氧原子之外包含具有1-6个碳原子的直链或支链烷基的基团。本说明书中可能提及的具有1-6个碳原子的烷基是，例如，己基、异己基(2-甲基戊基)、新己基(2，2-二甲基丁基)、戊基、异戊基(3-甲基丁基)、新戊基(2，2-二甲基丙基)、丁基、异丁基、仲-丁基、叔-丁基、丙基、异丙基、乙基和甲基。

3-7C-环烷氧基是，例如，环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基和环庚氧基，其中优选环丙氧基、环丁氧基和环戊氧基。

3-7C-环烷基甲氧基是，例如，环丙基甲氧基、环丁基甲氧基、环戊基甲氧基、环己基甲氧基和环庚基甲氧基，其中优选环丙基甲氧基、环丁基甲氧基和环戊基甲氧基。

被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基是，例如，1，2，2-三氟乙氧基、2，2，3，3，3-五氟丙氧基、全氟乙氧基，且尤其是1，1，2，2-四氟乙氧基、三氟甲氧基、2，2，2-三氟乙氧基和二氟甲氧基。

本发明中卤素指溴、氯和氟。

1-4C-烷基是具有1-4个碳原子的直链或支链基团。其例子是丁基、异丁基、仲-丁基、叔-丁基、丙基、异丙基、乙基和甲基。

1-4C-烷氧基是除氧原子之外含有上述1-4C-烷基之一的基团。其例子是甲氧基和乙氧基。

1-4C-烷氧基羰基是与上述1-4C-烷氧基之一相结合的羰基。其例子是甲氧基羰基(CH₃O--CO--)和乙氧基羰基(CH₃CH₂O--CO--)。

1-4C-烷基羰基是与上述1-4C-烷基之一相结合的羰基。其例子是乙酰基(CH₃CO--)。

1-4C-烷基羰氧基除氧原子之外含有上述1-4C-烷基羰基之一的基团。其例子是乙酰氧基(CH₃CO--O--)。

单-或二-1-4C-烷基氨基是，例如，甲胺基、二甲胺基和二乙胺基。

1-4C-烷基羰基氨基是，例如，乙酰氨基(--NH--CO--CH₃)。

示范性的被R31、R32和R33取代的苯基是2-乙酰基苯基、2-氨基苯基、2-溴苯基、2-氯苯基、2，3-二氯苯基、2，4-二氯苯基、4-二乙胺基-2-甲基苯基、4-溴-2-三氟甲基苯基、2-羧基-5-氯苯基、3，5-二氯-2-羟基苯基、2-溴-4-羧基-5-羟基苯基、2，6-二氯苯基、2，5-二氯苯基、2，4，6-三氯苯基、2，4，6-三氟苯基、2，6-二溴苯基、2-氰基苯基、4-氰基-2-氟苯基、2-氟苯基、2，4-二氟苯基、2，6-二氟苯基、2-氯-6-氟苯基、2-羟基苯基、2-羟基-4-甲氧基苯基、2，4-二羟基苯基、2-甲氧基苯基、2，3-二甲氧基苯基、2，4-二甲氧基苯基、2，6-二甲氧基苯基、2-二甲基氨基苯基、2-甲基苯基、2-氯-6-甲基酚、2，4-二甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2，3-二甲基苯基、2-甲氧基羰基苯基、2-三氟甲基苯基、2，6-二氯-4-甲氧基苯基、2，6-二氯-4-氰基苯基、2，6-二氯-4-氨基苯基、2，6-二氯-4-甲氧基羰基苯基、4-乙酰基氨基-2，6-二氯苯基和2，6-二氯-4-乙氧基羰基苯基。

被R34、R35、R36和R37取代的示范性吡啶基是3，5-二氯吡啶-4-基、2，6-二氨基吡啶-3-基、4-氨基吡啶-3-基、3-甲基吡啶-2-基、4-甲基吡啶-2-基、5-羟基吡啶-2-基、4-氯吡啶-3-基、3-氯吡啶-2-基、3-氯吡啶-4-基、2-氯吡啶-3-基、2，3，5，6-四氟吡啶-4-基、3，5-二氯-2，6-二氟吡啶-4-基、3，5-二溴吡啶-2-基、3，5-二溴吡啶-4-基、3，5-二氯吡啶-4-基、2，6-二氯吡啶-3-基、3，5-二甲基吡啶-4-基、3-氯-2，5，6-三氟吡啶-4-基和2，3，5-三氟吡啶-4-基。

化学式(V)所示的化合物的合适的盐(取决于取代情况)均是酸加成盐，但特别值得注意的是与碱形成的盐。特别要提及的是药学上耐受的无机和有机酸与药剂学中常规使用的碱。药学上不耐受的盐可通过本领域的技术人员已知的方法转化为药学上耐受的盐，该不耐受的盐可得自，例如以工业规模制备本发明化合物期间的过程产物。一方面，合适的是等摩尔量比例或与之不同的某种比例的水溶性或水不溶性酸加成盐与酸，例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、乙酸、柠檬酸、D-葡糖酸、苯甲酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、丁酸、磺基水杨酸、马来酸、月桂酸、苹果酸、延胡索酸、琥珀酸、草酸、酒石酸、双羟萘酸、硬脂酸、甲苯磺酸、甲基磺酸或3-羟基-2-萘酸、用于制备盐的酸(取决于是否考虑一元或多元酸以及需要哪种盐)。

另一方面，与碱形成的盐也是尤其合适的。碱盐的例子是锂、钠、钾、钙、铝、镁、钛、铵、甲基葡胺或胍盐，同样，用于盐制备的碱是等摩尔量的比例或与之不同的某种比例。

优选的化学式(V)所示的化合物中，

取代基R1和R2之一是1-4C-烷氧基、3-5C-环烷氧基、3-5C-环烷基甲氧基、苄氧基或被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，而另一个是被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，和

R3是苯基、吡啶基、被R31、R32和R33取代的苯基或被R34、R35、R36和R37取代的吡啶基，其中

R31是卤素、氰基、羧基、1-4C-烷基、1-4C-烷氧基或1-4C-烷氧基羰基，

R32是氢、卤素、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基，

R33是氢、卤素、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基，

R34是卤素或1-4C-烷基，

R35是氢或卤素，

R36是氢或卤素，和

R37是氢或卤素，

这些化合物的盐，以及吡啶的N-氧化物及其盐。

更优选的化学式(V)所示的化合物中，

取代基R1和R2之一是1-4C-烷氧基、3-5C-环烷氧基、3-5C-环烷基甲氧基、苄氧基或被氟完全或部分取代的1-4C-烷氧基，而另一个是被氟完全或部分取代的甲氧基，和

R3是2-溴苯基、2，6-二氯-4-乙氧基羰基苯基、2，6-二甲氧基苯基、4-氰基-2-氟苯基、2，4，6-三氟苯基、2-氯-6-甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2，6-二氟苯基、2，6-二氯苯基、3，5-二氯吡啶-4-基、3-甲基吡啶-2-基、2-氯吡啶-3-基、3，5-二溴吡啶-2-基、2，3，5，6-四氟吡啶-4-基、3-氯-2，5，6-三氟吡啶-4-基、3，5-二氯-2，6-二氟吡啶-4-基或2，6-二氯吡啶-3-基，

这些化合物的盐，吡啶的N-氧化物及其盐。

再优选的式(V)所示的化合物中，

R1是甲氧基、正-丙氧基、正-丁氧基、环丙基甲氧基或2，2，2-三氟乙氧基，

R2是二氟甲氧基，和

R3是2-溴苯基、2，6-二氯-4-乙氧基羰基苯基、2，6-二甲氧基苯基、4-氰基-2-氟苯基、2，4，6-三氟苯基、2-氯-6-甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2，6-二氟苯基、2，6-二氯苯基、3，5-二氯吡啶-4-基、3-甲基吡啶-2-基、2-氯吡啶-3-基、3，5-二溴吡啶-2-基、2，3，5，6-四氟吡啶-4-基、3-氯-2，5，6-三氟吡啶-4-基、3，5-二氯-2，6-二氟吡啶-4-基或2，6-二氯吡啶-3-基，

这些化合物的盐，吡啶的N-氧化物及其盐。

还要优选的式(V)所示的化合物中，

R1是二氟甲氧基，

R2是甲氧基、乙氧基、异丙氧基、异丁氧基、环丙基甲氧基、环丁基甲氧基、二氟甲氧基或2，2，2-三氟乙氧基和

R3是2-溴苯基、2，6-二氯-4-乙氧基羰基苯基、2，6-二甲氧基苯基、4-氰基-2-氟苯基、2，4，6-三氟苯基、2-氯-6-甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2，6-二氟苯基、2，6-二氯苯基、3，5-二氯吡啶-4-基、3-甲基吡啶-2-基、2-氯吡啶-3-基、3，5-二溴吡啶-2-基、2，3，5，6-四氟吡啶-4-基、3-氯-2，5，6-三氟吡啶4-基、3，5-二氯-2，6-二氟吡啶-4-基或2，6-二氯吡啶-3-基，

这些化合物的盐、以及吡啶的N-氧化物及其盐。

还要优选的化学式(V)所示的化合物中，

R1是甲氧基、正-丙氧基、正-丁氧基、环丙基甲氧基或2，2，2-三氟乙氧基，

R2是二氟甲氧基，和

R3是2-溴苯基、2，6-二氯-4-乙氧基羰基苯基、2，6-二甲氧基苯基、4-氰基-2-氟苯基、2，4，6-三氟苯基、2-氯-6-甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2，6-二氟苯基、2，6-二氯苯基、3，5-二氯吡啶-4-基、3-甲基吡啶-2-基、2-氯吡啶-3-基、3，5-二溴吡啶-2-基、2，3，5，6-四氟吡啶-4-基、3-氯-2，5，6-三氟吡啶-4-基、3，5-二氯-2，6-二氟吡啶-4-基或2，6-di氯吡啶-3-基，

这些化合物的盐、以及吡啶的N-氧化物及其盐。

还要优选的化学式(V)所示的化合物是其中：

R1是二氟甲氧基，

R2是甲氧基、环丙基甲氧基、环丁基甲氧基或二氟甲氧基和

R3是2-溴苯基、2，6-二氯-4-乙氧基羰基苯基、2，6-二甲氧基苯基、4-氰基-2-氟苯基、2，4，6-三氟苯基、2-氯-6-甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2，6-二氟苯基、2，6-二氯苯基、3，5-二氯吡啶-4-基、3-甲基吡啶-2-基、2-氯吡啶-3-基、3，5-二溴吡啶-2-基、2，3，5，6-四氟吡啶-4-基、3-氯-2，5，6-三氟吡啶-4-基、3，5-二氯-2，6-二氟吡啶-4-基或2，6-二氯吡啶-3-基的化合物，

这些化合物的盐、以及吡啶的N-氧化物及其盐。

还要优选的化学式(V)所示的化合物中：

R1是甲氧基、正-丙氧基、正-丁氧基、环丙基甲氧基或2，2，2-三氟乙氧基，

R2是二氟甲氧基和

R3是2-溴苯基、2，6-二氯-4-乙氧基羰基苯基、2，6-二甲氧基苯基、4-氰基-2-氟苯基、2，4，6-三氟苯基、2-氯-6-甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2，6-二氟苯基、2，6-二氯苯基、3，5-二氯吡啶4-基、3-甲基吡啶-2-基、2-氯吡啶-3-基、3，5-二溴吡啶-2-基、2，3，5，6-四氟吡啶4-基、3-氯-2，5，6-三氟吡啶-4-基、3，5-二氯-2，6-二氟吡啶-4-基或2，6-二氯吡啶-3-基，

这些化合物的盐、和吡啶的N-氧化物及其盐。

按照国际专利申请WO 92/12961和美国专利号5,712,298(其内容因为参考)所述的方法制备与分离化学式(V)所示的化合物。

优选的化学式(V)所示的化合物是：

罗氟司特。

罗氟司特(Altana Pharma，德国)正在进行哮喘和COPD的III期临床试验。与安慰剂相比，其较高和较低剂量使657位哮喘患者的恶化人数分别降低了48％和8％。

PDE-4抑制剂也如以下化学式(VI)所示：

式中：R1是CH₂-环丙基、CH₂-C5-6环烷基、C4-6环烷基、C7-11聚环烷基、(3-或4-环戊烯基)、苯基、四氢呋喃-3-基、任选被一个或多个氟取代的苄基或C1-2烷基、--(CH₂)1-3C(O)O(CH₂)0-2CH₃、--(CH₂)1-3O(CH₂)0-2CH₃和--(CH₂)2-4OH；

X是YR2、卤素、硝基、NR4 R5或甲酰胺；

X4是

或

X5是H、R9、OR8、CN、C(O)R8、C(O)OR8、C(O)NR8 R8或NR8R8；

Y是O或S(O)m′；

m′是0、1或2；

R2是任选被一个或多个卤素取代的-CH₃或--CH₂CH₃；

R3是氢、C1-4烷基、CH₂NHC(O)C(O)NH₂、卤代C1-4烷基、CN、CH₂OR8、C(Z′)H、C(O)OR8、C(O)NR8R10或C≡CR8；

Z′是O或NOR8；

Z是C(O)R14、C(O)OR14、C(O)NR10R14、C(NR10)NR10R14、CN、C(NOR8)R14、C(O)NR8NR8C(O)R8、C(O)NR8NR10R14、C(NOR14)R8、C(NR8)NR10R14、C(NR14)NR8R8、C(NCN)NR10R14、C(NCN)SR9、(1-、4-或5-{R14}-2-咪唑基)、(1-、4-或5-{R14}-3-吡唑基)、(1-、2-或5-{R14}-4-三唑基[1，2，3])、(1-、2-、4-或5-{R14}-3-三唑基[1，2，4])、(1-或2-{R14}-5-四唑基)、(4-或5-{R14}-2-唑基)、(3-或4-{R14}-5-异唑基)、(3-{R14}-5-二唑基[1，2，4])、(5-{R14}-3-二唑基[1，2，4])、(5-{R14}-2-二唑基[1，3，4])、(5-{R14}-2-噻二唑基[1，3，4])、(4-或5-{R14}-2-噻唑基)、(4-或5-{R14}-2-唑烷基)、(4-或5-{R14}-2-噻唑烷基)、(5-{R14}-2-咪唑烷基)；

R7是--(CR4R5)qR12或C1-6烷基，其中R12或C1-6烷基任选被以下基团取代一次或多次：被1-3个氟任选取代的C1-2烷基、--F、--Br、--Cl、--NO2、--NR10R11、--C(O)R8、--C(0)OR8、--OR8、--CN、--C(O)NR10R11、--OC(O)NR10R11、--OC(O)R8、--NR10C(O)NR10R11、--NR10C(O)R11、--NR10C(O)OR9、--NR10C(O)R13、--C(NR10)NR10R11、-C(NCN)NR10R11、--C(NCN)SR9、--NR10C(NCN)SR9、--NR10C(NCN)NR10R11、-NR10S(O)2R9、--S(O)m′R9、-NR10C(O)C(O)NR10R11、--NR10C(O)C(O)R10、噻唑基、咪唑基、唑基、吡唑基、三唑基或四唑基；

q是0、1或2；

R12是C3-C7环烷基、(2-、3-或4-吡啶基)、(1-或2-咪唑基)、哌嗪基、吗啉基、(2-或3-噻吩基)、(4-或5-噻唑基)或苯基；

式(a)的虚线表示单键或双键：

R8独立选自氢或R9；

R9是任选由1-3个氟取代的C1-4烷基；

R10是OR8或R11；

R11是氢或任选由1-3个氟取代的C1-4烷基；或当R10和R11是NR10R11时，二者可与N结合到一起形成可任选含有至少一个选自O/N/或S的其它杂原子的5-7元环；

R13是唑烷基、唑基、噻唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、咪唑基、咪唑烷基、噻唑烷基、异唑基、二唑基或噻二唑基，这些杂环中的每一个通过碳原子连接并且可未被取代的或被一或两个C1-2烷基取代。

R14是氢或R7；或当R10和R14是NR10R14时，二者可与N结合到一起形成可任选含有至少一个或多个选自O/N/或S的其它杂原子的5-7元环；

前提是：

(a)当R12是N-咪唑基、N-三唑基、N-吡咯基、N-哌嗪基或N-吗啉基时，q不是1；或

(b)当R1是CF₂H或CF₃，X是F、OCF₂H或OCF₃，X5是H，Z是C(O)OR14，且R14是C1-7未取代的烷基时，R3不是H；

或其药学上可接受的盐。

按照国际专利申请WO 93/19749和美国专利号5,449,686；5,552,438；5,602,157；5,602,173；5,605,923；5,614,540；5,631,286；5,643,946和5,811,455(这些专利的内容作为参考)制备与分离化学式(VI)所示的化合物。

优选的化学式(VI)所示的化合物是：

西洛司特。

西洛司特(Ariflo^TM，SB 207499，SmithKline Beecham)正在进行用于COPD的症状治疗的III期临床试验。在这些试验中，西洛司特专门针对使用短效支气管扩张剂和/或抗胆碱能药未能控制住症状的COPD患者。

用于治疗呼吸道和肺部疾病的第一和第二活性剂以及下列其它任一药物可以其本身或以上述药学上可接受的盐形式施用，均称为“活性化合物或药物”。第一和第二活性剂也可互相组合、分开的形式或联合在药学或兽医学上可接受的制剂形式施用。这些活性剂或其盐可如下所述全身性或局部施用。

本发明的组合物还可含有的其它治疗剂是一种或多种用于人和动物的各种治疗剂。

除第一活性剂和第二活性剂以外，该组合物还可含有泛醌和/或亚叶酸。泛醌是下式所示的化合物：

或其药学上可接受的盐。

泛醌优选是以上化学式所示的化合物，其中n＝1-10(辅酶Q1-10)，更优选n＝6-10(辅酶Q6-10)，最优选n＝10(辅酶Q10)。泛醌以治疗剂量施用来治疗目标疾病或病症，该剂量依受试对象的病症、所施用的其它药物、所用制剂的类型与施用途径而变。泛醌每日施用的总量优选每千克体重约0.1、1、3、5、10、15、30-50、100、150、300、600、900、1200毫克。每日总量更优选约1-150mg/kg、约30-100mg/kg，最优选约5-50mg/kg。泛醌是天然物质并市售可得。

呼吸道疾病的治疗

本发明也提供治疗哮喘、COPD或其它呼吸道疾病的方法，所述方法包括向需要这种治疗的受试对象施用所述组合物。该方法是预防性或治疗性目的。该方法包括体内方法。该方法可有效地治疗多种疾病，而无论其病因，包括类固醇施用、腺苷或腺苷受体代谢或合成的异常或其它病因所致。该方法包括通过降低，特别是在肺、肝脏、心脏和大脑或任何其它需要这种治疗的器官中的腺苷或腺苷受体水平、降低对腺苷的过度敏感性或其它机理来治疗呼吸道疾病和肺病。本文所称的其它呼吸道疾病包括囊性纤维化(CF)、气急、肺气肿、喘鸣、肺高血压、肺纤维化、肺癌、气道过度反应性、腺苷或腺苷受体水平升高、特别是与各种感染性疾病相关的疾病、肺支气管收缩、肺部炎症、肺过敏、表面活性物质耗尽、慢性支气管炎、支气管收缩、呼吸困难、肺气道障碍或阻塞、心脏功能的腺苷测试所引起的、肺血管收缩、呼吸障碍、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、某些药物的施用所引起的，例如能升高腺苷和腺苷水平的药物和其它药物，如治疗室上性心动过速(SVT)的药物，进行腺苷应急测试的所引起的、婴儿呼吸窘迫综合征(婴儿RDS)、疼痛、过敏性鼻炎、肺表面活性物质减少、严重急性呼吸道综合征(SARS)等。

在一个实施方案中，本发明是一种预防或治疗哮喘的方法，该方法包括向需要这种治疗的受试对象施用足以预防或治疗受试对象哮喘的量的组合物。

在一个实施方案中，本发明是一种预防或治疗COPD的方法，该方法包括向需要这种治疗的受试对象施用足以预防或治疗受试对象COPD的量的组合物。

在一个实施方案中，本发明是一种预防或治疗支气管收缩、肺部炎症或肺过敏的方法，该方法包括向需要这种治疗的受试对象施用足够预防或治疗受试对象的支气管收缩、肺部炎症或肺过敏的量的组合物。

在一个实施方案中，本发明是一种减少或耗尽受试对象组织中的腺苷的方法，该方法包括向需要这种治疗的受试对象施用足以减少或耗尽该受试对象组织中腺苷的量的组合物。

本发明也提供第一活性剂和第二活性剂在生产用于治疗哮喘、COPD或其它呼吸道疾病，包括肺癌的药物中的应用。该药物包括本说明书所述的组合物。

剂量与制剂

施用于受试对象的第一活性剂和第二活性剂的每日剂量依所设计的总治疗方案、所使用的第一活性剂和第二活性剂、剂型、施用途径和患者的状况而变。实施例11-18显示了用于以呼吸道或鼻施用、或经吸入施用来递送本发明的气雾化制剂。就肺内施用而言，优选液体制剂。就其它生物活性剂而言，FDA推荐了用于补充人们每日摄入额外生物活性剂的量，例如维生素和矿物质。然而，当用于治疗特定病症或改善受试对象的免疫应答时，这些药物所用的剂量可高成百上千倍。药典推荐的剂量范围往往非常宽，医学工作者可从中吸取指导意见。本专利所述的示范性药物的量可处于现在推荐的日用量范围内，也可低于或高于那些水平。治疗一般可始于联用低剂量支气管舒张药物和非糖皮质激素类固醇或其它合适的生物活性剂，然后升高每位患者的剂量滴度。然而，较高与较低的量，包括初始量也可在本发明的范围内施用。

第一活性剂和第二活性剂或任何其它治疗性药物的优选范围依施用途径和所用剂型而变，这是(医药)工作者可理解并可按照已知方法和组分生产。活性化合物可以单次剂量(每天一次)或多次剂量(每天数次)施用。预防和治疗呼吸道、心脏和心血管疾病的组合物与方法可用于治疗罹患所述病症的成人和幼儿以及非人动物。虽然本发明主要涉及人受试对象的治疗，但也可用于兽医目的来治疗非人哺乳动物受试对象，例如犬和猫以及大型的家养和野生动物。术语“腺苷”和“腺苷受体”的“高”和“低”水平以及“腺苷耗尽”用于表示当与同一受试对象的以前腺苷水平相比，腺苷水平较高或较低(甚至耗尽)的病症；与腺苷水平在正常范围内，但由于患者的一些其它病症或改变，可通过降低或增加腺苷或腺苷受体的水平或过度敏感性获得治疗性益处的病症。因此，本治疗方法可以顾客特定设计的方式协助调节(滴定)患者。尽管施用第一活性剂可降低或甚至耗尽在治疗前具有正常或较高水平的受试对象的腺苷水平，进一步施用第二活性剂可在短期内改善受试对象的呼吸情况。再加入其它治疗性药物可有助于滴定腺苷不良的低水平(这可在使用本发明治疗药物后观察到)，特别是直至获得适当剂量的最佳滴度。

本发明的活性剂占该组合物的量的范围可很宽。例如，活性剂可以占该组合物约0.001％、1％、2％、5％、10％、20％、40％、90％、98％、99.999％。如果包含的其它药物具有本专利所述的重叠活性，每种活性剂的量要调整。然而，活性化合物的剂量可依受试对象的年龄、体重和病症而变。治疗可以较低剂量的本发明第一活性剂开始，例如低于最佳剂量。第二活性剂也可类似操作，直至获得所需水平。或反之亦然，例如就多种维生素和/或矿物质而言，可稳定给予受试对象这些产品的所需水平，再施用第一活性化合物。剂量可增加直至获得在该条件下的所需和/或最佳作用。总之，活性剂优选以提供有效作用而不导致不适当的有害或有毒副作用的浓度施用，并且可以单一剂量单位施用或者如果需要可以方便的亚单位在每日的合适时间施用。第二治疗性或诊断药物以本领域已知的有效用于所需应用的量施用。当第二药物具有与主要药物重叠的活性时，可调整另一种或两种药物的剂量来实现所需作用而不超过剂量范围从而避免不良副作用。因此，例如当将其它镇痛药或抗炎药加入该组合物时，这些药物可以本领域已知的所需应用量或略低于其本身单独施用的剂量加入。

药学上可接受的盐应是药理学和药学或兽医学上可接受的，可制备成碱金属或碱土金属盐，例如钠盐、钾盐或钙盐。有机盐和酯也合适用于本发明。活性剂优选以药学或兽医学组合物，包括全身和局部制剂施用至受试对象。在这些组合物中，优选的制剂是适合于吸入、或可经呼吸道、口颊、口腔、直肠、阴道、鼻、肺内、眼、眼部、腔内、气管内(intratraccheal)、器官内、局部(包括口颊、舌下、真皮和眼内)、胃肠外(包括皮下、真皮内、肌肉内、静脉内和关节内)和透皮等施用的制剂。

本发明也提供装包括有该组合物和递送装置的试剂盒。组合物可方便地以单次或多次单位剂量形式以及散装提供，并可通过药学领域熟知的任何方法制备。试剂盒中有已配制到一起的组合物或者第一和第二活性剂可与其它成分分开提供，及说明其配方和施用方案的使用说明书。该试剂盒也可装有其它药物，例如本专利所述的，并且当胃肠外施用时，这些药物可装在分开的容器中与可灭菌运载体一起提供。本发明组合物也可以放置于灭菌的独立容器中以冻干形式提供，在施用前加入液体运载体。参见，例如美国专利号4,956,355；英国专利号2,240,472；EPO专利申请系列号429,187；PCT专利公开WO 91/04030；Mortensen，S.A.等，Int.J.Tiss.Reac.XII(3)：155-162(1990)；Greenberg，S.等，J.Clin.Pharm.30：596-608(1990)；Folkers，K.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：8931-8934(1990)，这些文献的相关制备和化合物部分引为参考。

本发明的组合物以各种全身性和局部性制剂提供。本发明的全身性或局部制剂选自口腔、口颊内、肺内、直肠、子宫内、真皮内、局部、皮肤、胃肠外、肿瘤内、颅内、肺内、口颊、舌下、鼻、皮下、血管内、鞘内、可吸入、经呼吸道、关节内、腔内、可植入的、透皮、经离子电渗、眼内、眼部、经阴道、经眼部、静脉内、肌肉内、腺体内、器官内、淋巴内、缓释和肠包衣制剂。这些不同制剂的实际制备混合方法是本领域已知的，无需详述。该组合物可每日施用一次或数次。

优选适合经呼吸、鼻部、肺内和吸入施用的制剂，例如局部、口服和胃肠外制剂。所有的制备方法均包括将活性化合物与构成一种或多种成分的运载体相混合的步骤。总之，可通过使活性化合物均匀且紧密地与液体运载体、精细分级的固体运载体或与二者相混合来制备这种制剂，然后如果需要可将产品加工成所需制剂的形状。

适合于口服施用的组合物可以不连续的单位提供，例如各自含有预定量活性化合物的胶囊剂、扁囊剂、锭剂或片剂；粉剂或颗粒剂；水性或非水性液体的溶液或悬浮液；或水包油或油包水乳剂。

适合于胃肠外施用的组合物包括活性化合物的无菌水性或非水性注射溶液，这些制剂优选与接受者的血液等渗。这些制剂可含有抗氧化剂、缓冲液、抑杀菌剂和使得组合物与接受者的血液等渗的溶质。水性或非水性无菌悬浮液可含有悬浮剂和增稠剂。组合物可装在单剂量或多剂量容器中提供，例如密封的安瓿和小瓶，并且可以冻干形式或冷冻干燥条件下储藏，仅需在使用前加入无菌液体运载体，例如盐水或注射用水。

鼻制剂和可滴注制剂含有活性化合物与防腐剂和等渗剂的纯化的水性溶液。这种制剂优选将pH和等渗状态调节为与鼻粘膜相容。

直肠或阴道施用的制剂可用合适的运载体，例如可可油或氢化的脂肪或氢化的脂肪羧酸制成栓剂提供。

眼用制剂可以类似于鼻喷雾剂的方法制备，除了pH和等渗因子优选要调节为与眼相匹配外。耳部(otical)制剂一般用本领域已知的粘性运载体，例如油等制备，从而可容易地施用进耳朵而无泄漏。

适合于局部应用于皮肤的组合物优选采用软膏剂、油膏剂、洗剂、糊剂、喷雾剂、气溶胶或油剂形式。可使用的运载体包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、酒精、透皮增强剂及其一种或多种的组合。适合于透皮施用的组合物可以适合于和接受者的表皮维持长时间紧密接触的不连续贴片提供。

本文披露的第一和第二活性剂可通过任何合适的方法经吸入、呼吸、鼻部施用或肺内滴注(进入肺部)而施用进受试对象的呼吸系统，优选通过产生由粉末或液体的鼻部、肺内、经呼吸或可吸入颗粒组成的气溶胶或喷雾施用。含有活性化合物的经呼吸或可吸入颗粒被受试对象吸入，即经吸入或鼻部施用或经滴注入呼吸道或肺部本身。制剂可含有可呼吸或可吸入的活性化合物的液体或固体颗粒，本发明的所述颗粒包括体积足够小从而可在吸入后通过口和喉并继续进入支气管和肺泡的经呼吸或可吸入颗粒。颗粒的直径大体上约是0.05、0.1、0.5、1、2-4、6、8、10微米。特别是直径约0.5μm到小于5μm的是可经呼吸或可吸入的颗粒。气溶胶或喷雾中不可吸入大小的颗粒易沉积在喉咙处被吞咽。因此，气溶胶中不可呼吸颗粒的数量宜最少。就鼻部施用或肺内滴注而言，优选的颗粒大小范围约是8、10、20、25-35、50、100、150、250、500μm(直径)以保证能留在鼻腔内或滴注与直接沉积入肺部。液体制剂可喷进呼吸道(鼻部)和肺部，特别是施用于新生儿和婴儿。

用于产生气溶胶的活性化合物的液体药物组合物可通过将活性化合物与稳定的载体，例如无热源的无菌水结合来制备。含有微粉化活性化合物的可呼吸干颗粒的固体颗粒组合物可通过用研钵和研棒研细干的活性化合物，再使微粉化的组合物通过400目筛网来分离或分出大的聚集物来制备。含有活性化合物的固体颗粒组合物可任选含有能促进形成气溶胶的分散剂。合适的分散剂是可以任何适当的比例，例如1∶1的重量比与活性化合物混合的乳糖。美国专利申请系列号10/462,901和10/462,927分别披露了可雾化形式的DHEA稳定干粉制剂和二水合结晶形式的DHEA-S稳定干粉制剂(这些专利申请全文纳入作为参考)。

含有活性化合物的液体颗粒的气溶胶可通过任何适当的方法生产，例如喷雾器。参见，例如美国专利号4,501,729(该内容引为参考)。喷雾器是通过使压缩气体(一般是空气或氧气)经过狭窄的文丘里管喷嘴加速或通过超声波搅拌使活性成分的溶液或悬浮液转化为治疗性气溶胶雾的商业化装置。适合用于喷雾器的组合物由液体运载体配制的活性成分组成，该活性成分占组合物的40％w/w，但优选含有少于20％w/w的运载体(一般是水或稀释的酒精水溶液)，优选通过加入，例如氯化钠使之与体液等渗。任选的添加剂包括防腐剂(如果组合物不是无菌制备的)，例如羟基苯甲酸甲酯、抗氧化剂、调味剂、挥发性油、缓冲试剂和表面活性物质。含有活性化合物的固体颗粒的气溶胶可类似地用任何市售的颗粒药物气溶胶产生器来生产。如上所解释的，将固体颗粒药物施用至受试对象的气溶胶产生器以适合于人体施用的速率产生可呼吸颗粒以及大量含有预定剂量的药物的气溶胶。这种气溶胶产生器的离子包括装有确定剂量药物的吸入器和吹入器。

所述组合物可用任何能产生液体或固体颗粒气溶胶的递送装置，例如气溶胶或喷雾产生器递送。如上所解释的，这些装置以适合于人或动物施用的速率产生可呼吸的颗粒以及大量含有预定剂量的药物的气溶胶或喷雾。固体颗粒气溶胶或喷雾产生器的一种说明性类型是适合于施用精研细的粉末的吹入器。在吹入器中，粉末，例如能有效进行本文所述治疗的确定剂量的组合物，装在胶囊或药筒中。这些胶囊或药筒一般用明胶、金属箔片或塑料制成，并可在原位穿孔或打开，而粉末由吸气时流过装置的空气或手动操作的泵递送。吹入器使用的组合物可仅由第一和第二活性剂或含有第一和第二药物的粉末混合物(一般占组合物的0.01-100％w/w)构成。该组合物所含的第一和第二活性剂的量一般约是0.01％w/w、1％w/w/、5％-20％w/w、40％w/w、99.99％w/w。然而，其它成分与其它药物的量也适合包含于本发明的范围中。

在一个实施方案中，所述组合物由喷雾器递送。此装置对于依靠自身能力不能吸入组合物的患者或受试对象尤其有用。在严重的病例中，患者或受试对象依靠人工呼吸机维持生命。喷雾器可使用任何药学或兽医学可接受的运载体，例如低盐溶液。喷雾器是将粉末药物组合物递送至患者或受试对象在气道中的靶位的装置。

该组合物也可定制为不同形式提供不同施用方法和施用途径。在一个实施方案中，该组合物含有可呼吸的制剂，例如气溶胶或喷雾剂。本发明的组合物可以散装和单位剂量的形式以及本领域已知可打开或可穿孔的植入物、胶囊、泡罩包装或药筒的形式提供。本发明也提供了试剂盒，该试剂盒装有递送装置、在独立容器中装有本发明的组合物与任选的其它赋形剂和治疗性药物，以及使用试剂盒成分的使用说明书。

在一个实施方案中，使用确定剂量的悬浮液吸入(MDI)制剂递送该组合物。这种MDI制剂可使递送装置递送，而所述递送装置使用推进剂，例如氢氟烷(HFA)。HFA推进剂中每一百万份(PPM)优选含有100份或更少的水。

在一个实施方案中，该递送装置包括可递送单次或多次剂量组合物的干粉吸入器(DPI)。单次剂量吸入器可作为一次性的试剂盒提供，该试剂盒预先无菌装有足够一次应用的制剂。吸入器可作为加压吸入器提供，而制剂装在可穿孔或可打开的胶囊或药筒中。试剂盒也可任选在独立的容器中装有作为不同制剂的其它合适添加剂的试剂，例如其它治疗性化合物、赋形剂、表面活性物质(用作治疗性药物以及制剂成分)、抗氧化剂、调味与着色剂、填料、挥发性油、缓冲剂、分散剂、表面活性物质、抗氧化剂、调味剂、膨胀剂、推进剂和防腐剂。

对本发明进行了总体描述后，参考具体实施例可更好地理解本发明，除非明确指出，本文的实施例仅是出于说明的目的并非要限制本发明或其任何实施方案。

实施例

实施例1和2：亚叶酸和DHEA对腺苷水平的体内作用

年轻的成年雄性Fischer 344大鼠(120克)用管饲法每天施用羧甲基纤维素配制的脱氢表雄酮(DHEA)(300mg/kg)或甲基睾酮(40mg/kg)一次，共14天。每日腹膜内施用亚叶酸(50mg/kg)一次，共14天。在第15天，通过对颅脑进行微波脉冲(1.33千瓦，2450兆赫，6.5秒(s))处死大鼠，该微波脉冲立即使所有脑蛋白变性并防止腺苷被进一步代谢。取出大鼠心脏在液氮中速冻10秒致死。肝脏和肺一起取出速冻30秒致死。然后解剖脑组织。提取组织腺苷，衍生为1,N6-亚乙烯基腺苷并按照Clark和Dar(J.of Neuroscience Methods 25：243(1988))的方法通过高效液相色谱(HPLC)用荧光光谱检测来分析。这些实验的结果总结于下表1中。结果以平均值±SEM表示，与对照组相比，κp＜0.05；与DHEA或甲基睾酮处理组相比，ψp＜0.05。

表1：DHEA、δ-1-甲基睾酮和亚叶酸对各种大鼠组织中腺苷水平的体内作用

治疗	胞内腺苷(nmol)/mg蛋白
					心脏	肝脏	肺	大脑
	对照DHEA(300mg/kg)甲基睾酮(40mg/kg)甲基睾酮(120mg/kg)亚叶酸(50mg/kg)DHEA(300mg/kg)+亚叶酸(50mg/kg)甲基睾酮(120mg/kg)+亚叶酸(50mg/kg)	10.6±0.6(n＝12)κ6.7±0.5(n＝12)κ8.3±1.0(n＝6)κ6.0±0.4(n＝6)κ12.4±2.1(n＝5)κ11.1±0.6(n＝5)ψ9.1±0.4(n＝6)ψ	14.5±1.0(n＝12)κ16.4±1.4(n＝12)κ16.5±0.9(n＝6)κ5.1±0.5(n＝6)κ16.4±2.4(n＝5)κ18.8±1.5(n＝5)ψN.D.	3.1±0.2(n＝6)κ2.3±0.3(n＝6)κN.D.N.D.N.D.N.D.N.D.					0.5±0.04(n＝12)κ0.19±0.01(n＝12)κ0.42±0.06(n＝6)κ0.32±0.03(n＝6)κ0.72±0.09(n＝5)κ0.55±0.09(n＝5)ψ0.60±0.06(n＝6)ψ
N.D.＝未测定

这些实验的结果表明每日施用DHEA或甲基睾酮两周的大鼠显示出腺苷的多器官消耗。腺苷消耗在大脑(施用DHEA消耗了60％，而施用高剂量的甲基睾酮消耗了34％)和心脏(施用DHEA消耗了37％，而施用高剂量的甲基睾酮消耗了22％)中明显高。同时施用亚叶酸完全消除了类固醇介导的腺苷消耗。单用亚叶酸导致腺苷水平在所有研究的器官中增加。

实施例3：喷气研磨无水DHEA-S与可吸入剂量的测定

DHEA-S作为哮喘疗剂来评估。研究了硫酸脱氢表雄酮钠(NaDFEA-S)的散装和研磨物质二者的固态稳定性(Nakagawa，H.，Yoshiteru，T.和Fujimoto，Y.(1981)Chem.Pharm.Bull.29(5)1466-1469；Nakagawa，H.，Yoshiteru，T.和Sugimoto，I.(1982)Chem.Pharm.Bull.30(1)242-248)。二水合物形式是DHEA-S最稳定的结晶形式。DHEA-S无水形式结晶度低并且非常易于吸湿。只要在储藏时不吸水，DHEA-S的无水形式可维持稳定。使部分结晶物质远离水分需要专门化的生产和包装技术。就机器人产品而言，必须在生产过程中尽可能降低对水分的敏感度。

(1)DHEA-S的微粉化

使用喷气研磨机(Jet-O-Mizer Series#00，100-120 PSI氮气)使无水DHEA-S微粉化。约1g样品通过喷气研磨机一次，而约2g样品通过喷气研磨机两次。每次研磨的颗粒悬浮于不溶解DHEA-S的己烷中并加入Spa85表面活性剂以防止聚集。得到的溶液超声处理3分钟，显示为完全分散开。分散的溶液用小体积的取样器(SVS)附件在Malvern Mastersizer X上测试。一份分散物质的样品测试5次。未研磨物质的粒径或D(v，0.5)中值为52.56μm而5个测试值的RSD(相对标准偏差)％是7.61。通过喷气研磨机一次的D(v，0.5)是3.90μm而RSD％是1.27，通过喷气研磨机两次的D(v，0.5)是3.25μm而RSD％是3.10。这证实DHEA-S可经喷气研磨为大小适合于吸入的颗粒。

(2)HPLC分析

使用两小瓶的微粉化药物(A；通过一次；150mg)和(B；通过两次；600mg)来测定在喷气研磨微粉化过程中药物的降解。乙腈-水的溶液(1∶1)配制的小瓶A和B的等重DHEA-S与未研磨的DHEA-S标准溶液(10mg/ml)进行比较。未研磨药物标准溶液(10mg/ml)的HPLC分析的色谱峰面积为23,427。小瓶A和B的等重微粉化DHEA-S以乙腈-水溶液(1∶1)中制备(5mg/ml)。小瓶A和B的色谱峰面积分别为11,979和11,677。在喷气研磨微粉化的过程中明显无可检测的药物降解。

(3)喷发剂量研究

DHEA-S粉末收集在Nephele试管中并经HPLC分析。所测试的3种干粉吸入器(Rotahaler，Diskhaler和IDL的DPI装置)的每一种以每种空气流速重复进行3次实验。Nephele试管的一端装上玻璃过滤器(Gelman Sciences，A/E型，25μm)，然后与气流管道连接以收集所测试的每种干粉吸入器喷发的药物量。在Nephele试管的另一端固定具有开口的硅酮适配器，该开口与所测试的每种干粉吸入器的接口相连。通过Nephele试管获得所需的30、60或90L/分钟的气流。将干粉吸入器的接口插入硅酮橡胶适配器，连续通气约4秒，然后移去试管并在每个试管的末端拧上端盖(end-cap)。取下不带过滤器的试管的端盖并向试管中加入10ml HPLC级的水-乙腈溶液(1∶1)，盖上端盖并振荡试管1-2分钟。然后从试管上取下端盖并将溶液转移至10ml装有过滤器(Cameo 13N Syringe Filter，Nylon，0.22μm)的塑料注射器中。将等量的溶液直接过滤进HPLC小瓶用于稍后的HPLC药物分析。使用装在明胶胶囊(Rotahaler)或Ventodisk泡罩(Diskhaler和单剂DPI(IDL))中的微粉化DHEA-S(约12.5或25毫克)进行上述喷发剂量试验。当称取微粉化DHEA-S(仅用B瓶)加入明胶胶囊或泡罩中时，微粉化粉末显示有少量聚集。以30、60和87.8L/min的空气流速进行的喷发剂量测试的结果示于表2。表2总结了以3种不同流速进行的Rotahaler试验的结果，以3种不同流速进行的Diskhaler试验的结果以及以3种不同流速进行多剂量实验的结果。

表2：三种不同干粉吸入装置喷发剂量的比较

吸入装置	气流速率(L/min)	喷发剂量(％)
			Rotahaler	87.8	73.2，67.1，68.7
平均值		69.7
			Rotahaler(第二次研究)	87.8	16.0，24.5，53.9
平均值		31.5
Diskhaler	87.8	65.7，41.6，46.5
			平均值		5l.3
Diskhaler(第二次研究)	87.8	57.9，59.9，59.5
			平均值		59.1
			IDL多剂	87.8	71.3，79.0，67.4
平均值		72.6
			IDL多剂(第二次研究)	87.8	85.7，84.6，84.0
平均值		84.8
Rotahaler	60	58.1，68.2，45.7
			平均值		57.3

Diskhaler	60	63.4，38.9，58.0
			平均值		68.2
			IDL多剂	60	78.8，83.7，89.6
平均值		84.0
Rotahaler	30	34.5，21.2，48.5
			平均值		34.7
Diskhaler	30	53.8，53.4，68.7
					58.6
IDL多剂	30	78.9，88.2，89.2
			平均值		85.4

(4)可呼吸剂量的研究

使用标准的取样级联撞击器(Andersen)进行可呼吸剂量(可呼吸组分)研究，该取样器由入口锥体(撞击器预分离器在此替换)、9个平台、8个收集板和具有8个铝平台的备用过滤器组成，这些铝平台由3个弹簧夹和O-型环密封垫圈连接在一起，其中各撞击器平台具有多个精细钻孔喷嘴。当气流通过取样器时，各平台中的多束气流将气生颗粒吹向该平台的收集板表面。各平台的气流大小恒定，但每下一个平台的气流小于上一个。颗粒是否撞击到任意给定的平台上取决于其空气动力学直径。收集于各平台的颗粒大小的范围取决于平台的气流速度和上一平台的截留点。未被第一平台收集的任何颗粒都随着围绕该板边缘的气流进入下一平台，在该平台处颗粒可撞击或者通过进入下一平台，依次类推，直至气流的速率足以产生撞击。为了防止在级联撞击器测试过程中颗粒弹起，各个撞击器板都涂有己烷-油脂(高真空)溶液(100∶1)。如上所述，撞击器板上的颗粒大小截留点依不同空气流速而变。例如，平台2在60L/分钟时对应的截留值大于6.2微米颗粒，在30L/分钟时对应的截留值大于5.8微米颗粒；平台3在90L/分钟时的粒径截留值大于5.6微米。因此，在相等的气流速率时优选使用类似的截留颗粒值，即，5.6-6.2微米。美国药典建议的测试干粉吸入器的装置由连接于玻璃喉管(改进的50毫升圆底烧瓶)的喷口适配器(此例为硅酮)和上通预分离器的远端玻璃咽管(引导端口)以及Andersen取样器组成。该预分离器的样品包括从喷口适配器、玻璃喉管、远端咽管和预分离器得到的洗涤物。在进行级联撞击器实验前，将5毫升乙腈∶水(1∶1)溶剂置于该预分离器中，该实验以30、60和90L/分钟的气流速率用3种不同的干粉吸入器进行两次。用HPLC分析在级联撞击器板上收集到的药物，对各Diskhaler和多剂量级联撞击器实验进行药物质量平衡(mass balance)，包括测定残留在泡罩中的药物量、残留于装置(仅为Diskhaler)中的药物量、残留在硅酮橡胶喷口适配器、玻璃喉管、远端玻璃咽管和预分离器上的不可吸入的药物量，将所有药物合并为一份样品来测定可呼吸剂量，即空气流速为30和60L/分钟时平台2的通过过滤器撞击器板的剂量和90L/分钟的实验时平台1的通过过滤器撞击器板的剂量。

表3：级联撞击器实验(90L/分钟)

吸入装置	预分离器(％)	泡罩(％)	可呼吸剂量(％)	装置(％)	质量平衡(％)
						Diskhaler	72.7	6.6	2.9	22.1	104.3
Diskhaler	60.2	10.1	2.4	13.3	86.0
多剂量	65.8	3.9	3.8	26.5 *a	100.0
						多剂量	73.3	3.8	3.6	19.3 *a	100.0
多剂量*b	78.7	2.8	4.6	13.9 *a	100.0
						多剂量*c	55.9	5.0	1.2	37.9 *a	100.0

^*a：未洗涤多剂量装置，因为溶剂会攻击SLA组分。获得多剂量装置保留百分比不同。

^*b：烘箱干燥药物80分钟

^*c：烘箱干燥药物20小时

基于喷发剂量和级联撞击器实验的结果，由于药物颗粒聚集，在级联撞击器实验中获得的可呼吸剂量值低，聚集的药物颗粒即使在最高气流速率测试中也不能分离。药物颗粒的聚集是在用于降低颗粒大小的机械研磨过程中产生的静电所致，而接下来的颗粒水分吸收使这一情况更复杂。产生较少静电或吸湿性DHEA-S的完全水合晶体(即二水合物形式)形式的微粉化方法应能提供聚集可能性降低的流动更自由的粉末。

实施例4：无水DHEA-S的喷雾干燥和可呼吸剂量的测定

(1)药物的微粉化

1.5g无水DHEA-S溶解于100ml 50％乙醇：水中得到1.5％的溶液。该溶液用B-191 Mini喷雾干燥器(Buchi，Flawil，Switzerland)喷雾干燥，入口温度为55℃、出口温度为40℃、抽风机为100％、10％泵、氮气气流为40mbar、喷雾流速为600单位。将喷雾干燥的产品悬浮在己烷中，加入Span85表面活性剂以减少聚集。超声处理并冷却3-5分钟使分散液完全分散，分散的溶液在装有小体积采样器(SVS)附件的Malvem Mastersizer X上测试。发现两批喷雾干燥物质的平均粒径分别为5.07±0.70μm和6.66±0.91μm。用光学显微镜目测各批分散液证实喷雾干燥产生了小的可呼吸大小的颗粒。各批的平均粒径分别是2.4μm和2.0μm。这证明DHEA-S可喷雾干燥为大小适合于吸入的颗粒。

(2)可呼吸剂量的研究

如实施例3所述进行级联撞击器实验。进行四次级联撞击器实验，其中三次使用IDL多剂量装置，一次使用Diskhaler，所有实验的气流速度都是90L/分钟。级联撞击器实验的结果列在下表4中。与微粉化无水DHEA-S相比，这些实验中产生的喷雾干燥无水物质的可呼吸剂量增加了两倍。与喷气研磨相比，喷雾干燥看上去可得到较高的可呼吸剂量，然而可呼吸剂量％仍然是低的。这可能是因为无水形式吸收水分而致。

表4：使用喷雾干燥的药物产品进行的级联撞击器实验结果

装置	Diskhaler	多剂量装置	多剂量装置	多剂量装置
					泡罩数目	3	3	4	4
每枚泡罩的药物(mg)	38.2	36.7	49.4	50.7
					预分离器(％)	56.8	71.9	78.3	85.8
装置(％)	11.2	7.9	8.9	7.6
					泡罩(％)	29.0	6.4	8.2	4.8
可呼吸剂量(％)	5.6	7.8	5.3	2.6
					质量平衡回收率(％)	102.7	94.0	103.3	98.1

实施例5：DHEA-S二水合物(DHEA-S·2H₂0)的空气喷气研磨和可呼吸剂量的测定

(1)DHEA-S二水合物的重结晶

无水DHEA-S溶解在90％乙醇/水的沸腾混合液中。在干冰/甲醇浴中快速冷却此溶液使DHEA-S重结晶。滤出晶体，用冷的乙醇洗涤两次，然后于室温在真空干燥器中干燥36小时。干燥过程中，用刮刀定期搅拌以破坏大的聚集物。干燥后，该物质通过500μm筛子。

(2)微粉化和理化测试

用氮气在喷气研磨机中微粉化DHEA-S二水合物，文丘里管压力为40PSI、研磨压力为80PSI、进料设置为25、产品进料速率约为120-175g/小时。使用Micromeritics TriStar表面积分析仪以氮气为吸附气体(P/Po＝0.05到0.30)进行5点BET分析测定表面积。使用Micromeritics Satum Digisizer通过激光衍射分析粒径分布，其中颗粒悬浮在矿物油中，使用二辛基磺化琥珀酸钠作为分散剂。通过KarlFischer滴定(Schott Titroline KF)测量药物的水分含量。以纯水作为标准品，三次试验的所有相对标准偏差小于1％。粉末直接加入滴定介质中。微粉化前后DHEA-S二水合物的理化特性总结于表5。

表5：微粉化前后DHEA-S二水合物的理化特性

特性	散粉结块	微粉化
			颗粒大小(D50％)	31微米	3.7微米
表面积(m2/g)	未测量	4.9
			水(％w/w)	8.5	8.4
杂质	无明显的峰	无明显的峰

所测得的明显变化仅是粒径的变化。水分损失和杂质的增加均不明显。微粉化物质的表面积与粒径大小中值为3-4微米的不规则形状颗粒相一致。微粉化成功地将粒径降低到适合于吸入的范围，而其固态化学性质中没有可测量的变化。

(3)DHEA-S二水合物的气溶胶化

用单剂量Acu-Breathe装置评估DHEA-S二水合物。约10mg纯的DHEA-S二水合物填充密封到箔泡罩中。使这些泡罩进入流速为30-75L/分钟，装有一玻璃双撞击器喉管的Andersen的8平台级联撞击器中。一起淋洗Andersen撞击器的1-5平台得到细颗粒组分的估计值。将收集自多个平台的药物合并为一份检测样品使此方法更为灵敏。这一系列试验的结果示于图1。在所有的流速下，二水合物产生的细颗粒组分高于实际上无水物质产生的。由于使用单剂量吸入器将二水合物粉末气溶胶化，因此可以合理得出气溶胶性能明显好于实际上无水物质的结论。较高的结晶度和稳定的水分含量是最有可能导致二水合物具有如此优异的气溶胶特性的因素。DHEA-S二水合物的这种独特性质在任何已有文献中还未见报道。虽然二水合物形式的DHEA-S气溶胶性能改善很明显，但是纯的药物可能并不是最佳制剂。使用粒径较大的运载体通常能提高微粉化药物的气溶胶性质。

实施例6：加和不加乳糖时无水DHEA-S和DHEA-S二水合物的稳定性

采用高压液相色谱(HPLC)测定无水DHEA和DHEA-S二水合物的初始纯度(时间＝0)。然后将以50∶50的比例与乳糖混合的或纯粉末形式的DHEA-S放在开口玻璃小瓶中，50℃维持4周。用这些条件给制剂施加应力来预测它们的长期稳定性结果。密封仅含有DHEA-S(无水或二水合物)的对照小瓶并于25℃保持4周。如测定DHEA的形成那样，在第0、1、2和4周取样并进行HPLC分析来测定降解的量。1周后，贮存于50℃密封玻璃瓶中与乳糖混合的实际上无水的DHEA-S(50％，名义上)产生比乳糖混合物深的淡褐色。这种颜色变化伴有如图1所示色谱的显著变化。主要的降解物是DHEA。从图2的定量情况看，混合物中DHEA的量高于其他两份样品。为了定量估计样品中的DHEA％，将DHEA峰的面积除以DHEA-S和DHEA峰的总面积(见表6)。混合物的较高的降解率表明乳糖和实际上无水的DHEA-S之间有特异的相互作用。DHEA增加的同时，加速贮存(试验)粉末的褐色也随时间的推移而加深。化学分析样品的称取过程中发生的结块现象也证实加速贮存的物质随时间推移而变得更粘。基于这些结果，用乳糖配制实际上无水的DHEA-S是不可能的。由于乳糖是干粉制剂最常用的吸入赋形剂，这是非常不利的。继续用实际上无水的形式意味着制剂要限制于纯的粉末，或者要进行更全面的安全性研究来用新的赋形剂。

表6：50℃无水DHEA-S所形成的DHEA％

制剂	时间(周)	1	2	4
					对照	2.774	2.694	2.370	2.666
DHEA-S(单独)		9.817	14.954	20.171
					DHEA-S+乳糖(50∶50)		24.085	30.026	38.201

与图2相反的是，50℃贮存1周后实质上无DHEA产生(参见图3)。此外，该物质的颜色无变化。50℃贮存1周后DHEA-S二水合物的水分含量无实质上的改变。加速贮存后水分含量是8.66％，而初始值是8.8％。在此稳定性程序中测得的DHEA％示于表7。

表7：50℃DHEA-S二水合物所形成的DHEA百分比

制剂

时间(周)

1

3

4

对照	0.213			0.218
					DHEA-S(单独)		0.216	0.317	0.374
DHEA-S∶乳糖(50∶50)		0.191	0.222	0.323

比较图1和2与表6和7可以看出DHEA-S的二水合物形式是进一步研究的更稳定形式。与实际上无水物质相比，DHEA-S二水合物与乳糖的优异相容性在专利和研究文献中未见报道。下一部分将报道作为喷雾器溶液开发工作一部分的此物质的溶解性。

实施例7：DHEA-S二水合物/乳糖混合物，可呼吸剂量和稳定性的测定

(1)DHEA-S二水合物/乳糖混合物

手工混合等重量的DHEA-S二水合物和吸入级乳糖(Foremost Aero Flo 95)，然后使混合物过500μm筛子以制备预混合物。然后该预混合物和余下的乳糖置于BelArt Micro研磨机中得到10％w/w的DHEA-S混合物。将混合器与可变压电源连接来调节搅拌器速率。混合器的电压分别通过全压的30％、40％、45％和30％循环1、3、1.5和1.5分钟。通过HPLC分析来测定混合物的含量均一性。表8显示了此混合物含量均一性样品的测定结果。目标值是10％w/w的DHEA-S。混合物含量接近目标值和含量均一性，令人满意。

表8：DHEA-S二水合物与乳糖的混合物的含量均一性

样品	％DHEA-S，w/w
		1	10.2
2	9.7
		3	9.9
4	9.3
		5	9.4
平均值	9.7
		RSD	3.6％

(2)DHEA-S二水合物/乳糖混合物的气溶胶化

约25mg的该粉末填充并密封于泡罩中，然后用单剂量装置以60L/分钟进行气溶胶化。每次测试分别使用两枚泡罩，细颗粒组分(平台1-5上的物质)的测定结果示于表9。此初级粉末混合物的气溶胶测定结果对于呼吸药物递送系统而言是满意的。优化粉末混合物和泡罩/装置构型有可能获得较高的细颗粒组分。测试2的总粒径分布示于表10。此气溶胶中DHEA-S的直径中值约为2.5μm。此直径小于用激光衍射所测得的微粉化DHEA-S二水合物的直径中值。由于形状不规则的颗粒的最长尺寸可能与气流场排成一行，它们在空气动力学上的表现如同较小颗粒。因此，两种方法之间存在差异是正常的。衍射测量是输入物质的质控测试，而级联撞击是最终产品的质控测试。

表9：两种不同实验中乳糖混合物的细颗粒组分

测试	两枚泡罩的总粉末重量(mg)	平台1-5中收集到的DHEA-S(mg)	细颗粒组分，％
				1	52.78	1.60	31
2	57.09	1.62	29

表10：气溶胶化的DHEA-S二水合物/乳糖混合物的粒径分布

大小(μm)	6.18	9.98	3.23	2.27	1.44	0.76	0.48	0.27
									之下的颗粒％	100	87.55	67.79	29.87	10.70	2.57	1.82	0.90

(3)DHEA-S二水合物/乳糖混合物的稳定性

此乳糖制剂也置于50℃的加速稳定性程序。DHEA-S含量的结果示于表11。对照是储存于室温的混合物。DHEA-S含量在任一条件下都没有随时间推移而改变的趋势，所有结果都在含量均一性测试所收集的样品范围内(参见表11)。此外，颜色未变化，或者在色谱中也未观察到不规则。混合物看来是化学稳定的。

表11：DHEA-S二水合物/乳糖混合物于50℃的应力稳定性

时间(周)	对照条件下的DHEA-S％w/w	应力条件下的DHEA-S％w/w
			0	9.7	9.7

1	9.6	9.6
			1.86	9.5	9.7
3	10	9.9

实施例8：DHEA-S的喷雾器制剂

DHEA-S的溶解性.

按照“DHEA-S二水合物重结晶法(实施例5)”制备的过量DHEA-S二水合物加入溶剂介质，平衡至少14小时，同时定期摇动。然后该悬浮液经0.2微米针筒过滤器过滤，立即稀释以进行HPLC分析。为制备冷却样品，针筒和过滤器用前保存在电冰箱中至少1小时。吸入纯水可产生咳嗽刺激。因此，将卤离子(最常用的盐是氯化钠)加到喷雾器制剂中是重要的。由于DHEA-S是钠盐，故氯化钠可因共同离子作用而降低溶解性。氯化钠浓度与DHEA-S在室温(24-26℃)和冷却(7-8℃)时的溶解度的函数关系示于图4。DHEA-S的溶解度随着氯化钠浓度而降低。对于所有氯化钠浓度，降低贮存温度都会降低溶解度。高氯化钠浓度时温度的作用较弱。在三次重复实验中，在约25℃和0％氯化钠时的溶解度为16.5-17.4mg/mL，相对标准偏差为2.7％。在冷却、0.9％氯化钠时，三次重复试验的范围是1.1-1.3mg/mL，相对标准偏差为8.3％。

固体和溶液状态DHEA-S之间的平衡关系如下所示：

NaDHEA-S_固体DHEA-S^-+Na⁺

K＝[DHEA-S^-][Na⁺]/[NaDHEA-S]_固体

由于固体DHEA-S的浓度恒定(即，物理稳定的二水合物)，该平关系衡可简化为：

Ksp＝[DHEA-S^-][Na⁺]

基于此假设，DHEA-S溶解度对总的钠阳离子浓度的倒数作图是线性的并且斜率等于Ksp。室温和冷却情况下的平衡关系分别示于图5和图6。基于相关系数，该模型与室温和冷却温度时的数据都能合理吻合，而平衡常数分别为2236和665mM²。为了使溶解度最大，氯化钠的水平应尽可能低。喷雾器溶液的最小卤离子含量应为20mM或0.12％氯化钠。

为评估溶液的DHEA-S浓度，采取在使用期间使喷雾器的温度下降10℃(即15℃)。平衡常数与绝对温度倒数之间的插入值，15℃时的Ksp为约1316mM²。每摩尔的DHEA-S向该溶液提供1摩尔的钠阳离子，因此：

Ksp＝[DHEA-S][Na⁺]＝[DHEA-S^-][Na⁺+DHEA-S^-]

＝[DHEA-S^-]²+[Na⁺][DHEA-S^-]

用二次方程计算[DHEA-S-]。Ksp为1316mM²的20mM Na⁺溶液是27.5mM的DHEA-S-或10.7mg/mL。因此，选用10mg/mL DHEA-S的0.12％氯化钠溶液为优良的候选制剂以进一步测试。此式的估算值并未说明由于水从喷雾器中蒸发而导致的浓度影响。含有10mg/mL DHEA-S的0.12％氯化钠溶液的pH为4.7-5.6。虽然该值是吸入制剂可接受的pH水平，但是评估了使用20mM磷酸盐缓冲液的作用。缓冲液和非缓冲液于室温的溶解度结果示于图7。该制剂中存在缓冲液抑制了溶解度，尤其是氯化钠水平低的时候。如图8所示，缓冲溶液的溶解度数据落在非缓冲溶液的同一根平衡线上。使用缓冲液导致的溶解度下降是由额外加入的钠阳离子含量引起。尽可能增加溶解度是重要的目标，但该制剂使用缓冲液降低了溶解度。此外，Ishihora和Sugimoto((1979)，Drug.Dev.Indust.Pharm.，5(3)263-275)并未证实NaDHEA-S的稳定性在中性pH时有显著提高。

稳定性研究.

在0.12％氯化钠中配制10mg/mL的DHEA-S制剂用于短期的溶液稳定性程序研究。将等份的此溶液加入清结的玻璃小瓶并分别于室温(24-26℃)和40℃保存。每天检查样品的DHEA-S含量、DHEA含量和外观。在各时间点上，从各小瓶中取出两份样品并稀释。在此研究期间DHEA-S的含量示于图9和10。在加速条件下，溶液显示出较快的降解速率并在保存两天后出现浑浊。室温下保存的溶液较稳定，在第3天观察到少许沉淀。该研究在第3天停止。如图10所示，DHEA-S的分解伴有DHEA含量增加。由于DHEA在水中不溶，此制剂中只需少量就可产生浑浊的溶液(加速保存)或结晶沉淀(室温保存)。这就可解释为什么早先的目测评估的DHEA-S溶解度严重低估了该化合物的溶解度：少量DHEA将导致实验人员得出DHEA-S已超过溶解限度的结论。该溶液在临床试验重新配制时应易于保持稳定。以下部分描述该制剂的气溶胶特性。

喷雾器研究。

使用Pari ProNeb Ultra压缩机和LC Plus喷雾器使DHEA-S雾化。此试验装置的示意图示于图11。5毫升该溶液装入喷雾器持续喷雾直至喷出物变模糊(41/2到5分钟)。使用具有USP喉管的Califonia Instruments AS-6型6平台撞击器测试雾化的溶液。喷雾一分钟后，以30L/分钟操作该撞击器8秒钟收集样品。在该实验的所有其它时间里，以约33L/分钟将气溶胶引入旁路收集器。用流动相清洗收集装置、喷雾器和撞击器并用HPLC分析。在喷雾器中使用5ml DHEA-S的0.12％氯化钠溶液。该体积选为临床研究所用的实际上限。前5次试验结果列于下表。

表12：使用DHEA-S进行喷雾研究的结果

溶液-喷雾器#	残留在喷雾器中的量，mg	沉积在收集器中的量，mg	沉积在撞击器中的量，mg	总量，mg
					10mg/mL-1	17.9*	16.3	0.38	34.6
10mg/mL-2	31.2	17.2	0.48	49.0
					7.5mg/mL-1	19.3	16.3	0.35	36.0
7.5mg/mL-1	21.7	15.4	0.30	37.4
					5.0mg/mL-1	14.4	10.6	0.21	25.2

^*仅测试从喷雾器中倒出的液体，没有称重气溶胶化前后的重量或清洗整个单元

运行喷雾器#1约5分钟使之干燥，而使喷雾器#2运行略少于约4.5分钟。在每种情况下，残留于喷雾器的液体体积大约是2ml。从喷雾器中取出后，该液体最初是浑浊的，然后在3-5分钟内变澄清。即使过了该时间后，10mg/mL的溶液中也显示出少量粗沉积物。看起来应是该液体中细小的气泡导致最初的浑浊。DHEA-S显示有表面活性(即，能促进发泡)，这稳定了该液体中的气泡。10mg/mL溶液中的沉积物表明在喷雾器环境中药物的溶解度更高。因此，表13所示的其它喷雾实验在较低浓度下进行。表13给出了“剂量”线性对溶液浓度的其它数据。

表13：使用DHEA-S进行的其它喷雾实验结果

溶液-喷雾器#	残留在喷雾器中的量，mg	沉积在收集器中的量，mg	沉积在撞击器中的量，mg	总量，mg
					6.25mg/mL-2	17.8	12.1	0.24	30.1
7.5mg/mL-3	21.2	13.8	0.33	35.3

使喷雾器#3干燥略少于4.5分钟。旁路收集器中的质量对最初的溶液浓度作的图示于图12。从0到7.5mg/mL具有良好的线性，之后收集的量开始变平。虽然10mg/mL溶液的计算中也考虑了冷却对溶解度降低的影响，但忽略了浓度对药物和氯化钠含量的影响。因此，可能是喷雾液过饱和而形成了沉淀物。图12所示数据和喷雾后在10mg/mL溶液中观察到的一些颗粒表明作为概念性临床试验制剂证据的最高溶液浓度约是7.5mg/mL。将气溶胶样品引入级联撞击器中进行粒径分析。粒径分布与溶液浓度或喷雾器数目之间无可检测的趋势。所有喷雾实验中的平均粒径分布示于图13。气溶胶粒径测量值与该喷雾器的发表的/广告结果一致(即，直径中值约2μm)。虽然体外实验证明喷雾器制剂可递送可呼吸的DHEA-S气溶胶，但该制剂不稳定而且需要4-5分钟的连续雾化。因此，稳定的DPI制剂具有显著的优点。DHEA-S二水合物经鉴定成为用于DPI制剂的最稳定的固态。就DHEA-S的临床试验而言，最佳喷雾制剂是7.5mg/mL的DHEA-S的0.12％氯化钠溶液。无缓冲系统的该制剂的pH也可接受。通过尽可能降低钠阳离子浓度而最大程度地增加DHEA-S的水溶解度。无缓冲液的最低氯化钠水平可实现此目标。这是在雾化过程中不会产生沉淀的用20mM Cl^-获得的最高药物浓度。该制剂于室温至少可维持稳定1天。

实施例9：实验模型的制备

获得细胞培养物，HT-29 SF细胞，这是HY-29细胞(ATCC，Rockville，Md.)的一个亚系，能适应在完全合成的无血清PC-1培养基(Ventrex，Portland，Me.)内生长。原种培养在37℃维持于这种培养基(含5％CO₂的湿润空气中)。细胞铺满时，培养物用胰酶/EDTA(Gibco，Grand Island，N.Y.)解离后再次接种，每24小时加一次培养基。在这种条件下，对数生长期的HT-27 SF细胞的倍时为24小时。

流式细胞术

将细胞以10⁵/60-mm接种在培养皿中，一式两份。在细胞培养物内加入0、25、50或200μM DHEA以分析细胞周期分布。培养物与0或25μM DHEA接触来分析DHEA对细胞周期逆转的影响，培养基中添加有MVA、CH、RN、MVA加CH、或MVA加CH加RN、或不添加。培养物在0、24、48、74小时后用胰酶消化、用Bauer等，Cancer Res.，46，3173-3178(1986)所述的改进方法固定并染色。简言之，离心收集细胞，重悬于冷的磷酸盐缓冲盐水。细胞用70％的乙醇固定，洗涤，重悬于磷酸盐缓冲盐水。然后加入1ml低渗染色液(含50μg/ml碘化丙啶(SigmaChemical Co.)、20μg/ml RNA酶A(Boehringer Mannheim，Indianapolis，Ind.)、30μg/ml聚乙二醇、0.1％Triton X-100的5mM柠檬酸盐缓冲液)，室温下放置l0分钟后加入1ml等渗染色液(含碘化丙啶，聚乙二醇，Triton X-100的0.4M氯化钠溶液)，用配有脉冲宽度/脉冲区域双分辨的流式细胞仪(Becton Dickinson ImmunocytometrySystems，San Jose，CA)进行分析。荧光束校正后最少分析2×10⁴个细胞/样品的样品，数据表示为1024个荧光强度增强通道中每个通道内的细胞总数，所得的直方图用Cellfit分析程序(Becton Dickinson)分析。

DHEA对细胞生长的影响

细胞以25000个细胞/30-mm接种在培养皿中，一式四份，2天后加入0、12.5、25、50或200μM DHEA。1、24、48和72小时后用Coulter计数仪(Z型；CoulterElectronics，Inc.Hialeah，FL)测定细胞数。将DHEA(AKZO，巴塞尔，瑞士)溶于二甲基亚砜中，过滤除菌，储存于-20℃备用。

图14显示了DHEA对HT-29细胞生长的抑制。各点表示细胞数目，条杠表示SEM。每个数据点重复进行4次，试验重复三次。SEM条杠不明显的地方说明SEM小于符号。与对照组相比，接触12.5μM DHEA72小时、接触25或50μM DHEA48小时、200μM DHEA24小时后细胞数目降低，说明DHEA对生长产生了时间和剂量依赖型的抑制。

DHEA对细胞周期的作用

为了检验DHEA对细胞周期分布的影响，接种HT-29 SF细胞(10⁵个细胞/60mm培养皿)，48小时后用0、25、50或200μM DHEA处理。图15显示DHEA对HT-29SF细胞的细胞周期分布的影响。24、48和72小时后收获细胞，乙醇固定，碘化丙啶染色，用流式细胞仪分析测定DNA含量/细胞。用Cellfit细胞周期分析程序计算G₁、S和G₂M期细胞的百分数。S期用四角形标记以示区别。显示了一式两份测定所得的代表性直方图。该实验重复三次。

用25或50μM DHEA处理的细胞培养物中的细胞周期分布在最初24小时后没有变化。然而，随着接触DHEA时间增加，S期细胞比例逐渐降低，用Cellfit细胞周期分析程序计算了处于G₁、S和G₂M期的细胞百分数。S期用四角形标记以示区别。显示了一式两份测定所得的代表性直方图。该实验重复三次。

用25或50μM DHEA处理的细胞培养物中的细胞周期分布在最初24小时后没有变化。然而，随着接触DHEA时间增加，S期细胞比例逐渐降低，而G₁期细胞百分数在72小时后增加。G₂M期细胞在48小时后明显有短暂的增加。与200μMDHEA接触所得的结果类似，但24小时后G₁期细胞百分比快速增加，而S期细胞比例降低，这种情况持续发生于整个处理期间。这表明DHEA以时间和剂量依赖方式在HT-29 SF细胞中产生G₁期阻断。

实施例10：DHEA介导的对细胞生长和细胞周期作用的逆转

DHEA介导的生长抑制的逆转.

按上述方法接种细胞，2天后加入含有0或25μM DHEA的培养基，该培养基中添加甲羟戊酸(“MVA”；mM)、鲨烯(SQ；80μM)、胆固醇(CH；15μg/ml)、MVA+CH、核糖核苷(RN；终浓度各为30μM的尿苷、胞苷、腺苷和鸟苷，)、脱氧核糖核苷(DN；终浓度各为20μM的胸苷、脱氧胞苷、脱氧腺苷和脱氧鸟苷)、RN+DN、MVA+CH+RN或未添加成分的培养基。所有化合物均得自Sigma ChemicalCo.(St.Louis，Mo.)。胆固醇在用前立即溶解于乙醇。RN和DN是以最大浓度使用表明无DHEA时它们对细胞的生长没有影响。

图16显示DHEA诱导的HT-29 SF细胞生长抑制的逆转。在A中，培养基内添加了2μM MVA、80μM SQ、15μg/ml CH或MVA+CH或者未作添加(CON)。在B中，培养基添加了RN的混合物(含有30μM的尿苷、胞苷、腺苷和鸟苷)；或者DN的混合物(含有20μM的胸苷、脱氧胞苷、脱氧腺苷和脱氧鸟苷)；RN加DN(RN+DN)；或MVA加CH加RN(MVA+CH+RN)。评估了处理前后48小时的细胞数，细胞的生长计算为48小时处理期间细胞数目的增加值。条柱形代表未处理对照的细胞生长百分数；条杠代表SEM。未处理对照中的细胞数目增加了173，370″6518。每个数据点代表了四次独立试验的四个重复培养皿。使用斯氏t测试进行统计学分析，相比于对照组，κp＜0.01；ψp＜0.001。注意无DHEA时，添加物质对细胞的生长几乎无影响。

在这些条件下，DHEA诱导的生长抑制可通过加入MVA或MVA+CH部分克服。单独加入SQ或CH无此效应。这表明DHEA的细胞抑制活性部分是通过内源性甲羟戊酸的消耗以及抑制胆固醇途径中早期中间产物的生物合成所介导的。此外，加入RN以及加入RN+DN后发现生长得到部分恢复，但加入DN后无此效果，表明甲羟戊酸和核苷酸库的消耗涉及DHEA的生长抑制作用。但是没有哪种恢复条件(包括联合加入MVA、CH和RN)能完全克服DHEA的生长抑制作用，表明DHEA具有细胞毒性作用或者可能涉及其它的生化途径。

DHEA对细胞周期作用的逆转

用25FM DHEA与许多其它化合物，如MVA、CH或RN来处理HT-29 SF细胞以测试它们能否防止DHEA的细胞周期特异性作用。在处理48和72小时后通过流式细胞术分析细胞周期分布。

图17显示对DHEA诱导的HT-29 SF细胞停滞的逆转结果。接种细胞(10⁵个细胞/60mm培养皿)，48小时后用0或25μM DHEA处理。培养基添加有2FM MVA；15Fg/ml CH；含有终浓度为30μM的尿苷、胞苷、腺苷和尿苷的RN混合物；MVA加CH(MVA+CH)；或MVA加CH加RN(MVA+CH+RN)或不添加任何物质。48或72小时后收集细胞，乙醇固定，碘化丙啶染色，流式细胞仪测定每个细胞的DNA含量。用Cellfit细胞周期分析程序计算G₁、S和G₂M期细胞的百分数。S期用四角形标记以示区别。显示了一式两份测定所得的典型直方图。该实验重复2次。注意，无DHEA时添加物质对细胞周期进展几乎无影响。

随着接触时间增加，DHEA逐渐减少S期细胞的比例。加入MVA后的最初48小时可部分阻止这种作用，但是72小时后不能阻止这种作用，加入MVA+CH的72小时也能部分阻止S期耗尽，说明在增加的接触期间MVA和CH都是细胞周期进程所需的。加入MVA、CH和RN明显对恢复最有效，但是还是无法恢复到未处理对照培养物的S期细胞百分比。单独加入CH或RN在48有些许作用而在72小时无作用。从形态学上来看，细胞对DHEA的反应是变成圆形，这种变化只需向培养基中加入MVA就可阻止。图4所示的接触DHEA72小时后的某些DNA直方图也显示存在有DNA含量明显减少的细胞亚群。由于已知HT-29细胞系是含有不同数目染色体的细胞群(68-72；ATCC)，因此上述细胞代表了一个含有分离的携带较少染色体的细胞亚群。

结论

上面提供的实施例9-10证明在体外，HT-29 SF人结肠腺癌细胞与已知可消耗内源性甲羟戊酸的各种浓度的DHEA接触可导致生长抑制与G₁停滞，而在培养基中加入MVA可部分阻止这些作用。DHEA所产生的对蛋白质异戊二烯化的作用在许多方面与特异性3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A还原酶抑制剂，如洛伐他汀和康哌他汀所观察到的作用类似。然而，与甲羟戊酸生物合成的直接抑制剂不同，DHEA以多效性方式介导了其对细胞周期进展和细胞生长的作用，涉及核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸的生物合成，还可能涉及其它因素。

实施例11：定量吸入器

活性成分	每揿一次的目标
		罗氟司特DHEA稳定剂三氯氟甲烷二氯二氟甲烷	25.0μg400mg5.0μg23.70mg61.25mg

实施例12：定量吸入器

活性成分	每揿一次的目标
		罗氟司特DHEA-S稳定剂三氯氟甲烷二氯二氟甲烷	25.0μg400mg7.5μg23.67mg61.25mg

实施例13：定量吸入器

活性成分	每揿一次的目标
		西洛司特DHEA稳定剂三氯氟甲烷二氯二氟甲烷	12.0μg400.0mg15.0μg23.56mg61.25mg

实施例14：定量吸入器

活性成分	每揿一次的目标
		西洛司特DHEA-S稳定剂三氯氟甲烷二氯二氟甲烷	12.0μg400.0mg15.0μg23.56mg61.25mg

在下面的实施例15-18中，第一和第二活性剂被微粉化，并与乳糖按上述比例散装混合。此混合物填充到硬明胶胶囊或药筒中或装入特制的双箔泡罩包装中(通过吸入器，如Rotahaler吸入器(Glaxo^)来施用Rotadisks泡罩包装，Glaxo^，或用Diskhaler吸入器(Glaxo^)来施用泡罩包装)。

实施例15：定量干粉制剂

活性成分	/药筒或泡罩
		西洛司特DHEA乳糖Ph.Eur.	72.5μg1.00mg12.5或25.0mg

实施例16：定量干粉制剂

活性成分	/药筒或泡罩
		西洛司特DHEA-S乳糖Ph.Eur.	72.5μg1mg12.5或25.0mg

实施例17：定量干粉制剂

活性成分	/药筒或泡罩
		罗氟司特DHEA乳糖Ph.Eur.	72.5μg1mg12.5或25.0mg

实施例18：定量干粉制剂

活性成分	/药筒或泡罩
		罗氟司特DHEA-S乳糖Ph.Eur.	72.5μg1mg12.5或25.0mg

实施例19：cAMP对哮喘患者的人气道平滑肌细胞功能的作用

在以下研究中，评估了DHEA-S如何通过cAMP提高药物抑制人ASM细胞生长的作用。此项研究所选的促有丝分裂原(EGF)在哮喘患者或遭受过敏原侵袭的哮喘患者的支气管肺泡灌洗液(BAL)中增加了。所使用的浓度与这些研究得到的BAL液体中的浓度接近。

人ASM细胞得自遵照宾夕法尼亚大学的学会审查董事会(University ofPennsylvania′s Institutional Review Board)的移植物供者的远端气管。解剖远端气管除去结缔组织并用酶消化产生约1×10⁴个人ASM细胞。然后使这些细胞在10％胎牛血清中生长至汇合并在含有1％牛血清白蛋白的无血清培养基中静止24小时。随后，细胞与稀释液或EGF(1ng/ml)孵育24小时。初步孵育后，使细胞与[³H]-胸腺嘧啶接触并使用胸腺嘧啶掺入法测定24小时内的DNA合成。刮下细胞置于滤膜上并用β计数器计数。所有实验用人ASM细胞系至少重复三次。每次实验的所有条件重复六次。数据表示为平均值±标准误差，用Bonferroni-Dunn校验和ANOVA进行统计学分析，P＜0.05表明差异有意义。

在一些实验中，细胞与特定的生长因子和10μM DHEA-S孵育。如上所述用胸腺嘧啶掺入法测定DNA合成。计算抑制50％生长因子诱导的DNA合成的浓度作为IC₅₀。

也检测了DHEA-S调节cAMP浓度对ASM有丝分裂的作用。已知cAMP是平滑肌增殖二级信号传导通路的重要介质。通常使用的能改变cAMP浓度和/或腺苷浓度的抗哮喘药物有三类。这些类型的药物是甲基黄嘌呤、β-激动剂和磷酸二酯酶抑制剂。就每种这些药物类型而言，异丁基甲基黄嘌呤(IBMX)用作工具化合物来抑制平滑肌增殖。在这些实验中，IC₅₀浓度的DHEA-S同时加入已用IBMX处理的细胞中并检测其对生长因子诱导的DNA合成的作用。

图18描述了EGF、IBMX和DHEA-S对³H-胸腺嘧啶掺入人平滑肌培养物中的作用。这些数据显示单用IBMX或DHEA-S或联用均不能抑制平滑肌增殖。而1ng/ml浓度的EGF刺激³H胸腺嘧啶的掺入增加约10倍。

该系列实验研究了单用DHEA-S和与IBMX联用是否能抑制EGF刺激的增殖。从图19可看出，10μM浓度的DHEA-S降低ASM增殖约11％(比较第二和第三根条柱)。IBMX(0.1-100μM)对胸腺嘧啶掺入具有不同作用(条柱8-11)。然而，当有10μM DHEA-S时重复该项研究，IBMX导致IC₅₀约为10μM的浓度依赖型(条柱4-7)平滑肌增殖抑制。

这些数据表明联用DHEA-S和IBMX比单用任一药物具有更强的抑制平滑肌增殖作用。IBMX用作工具化合物来评估cAMP的作用。因此，这些实验表明能调节cAMP的药物，例如甲基黄嘌呤可与DHEA-S联用来治疗呼吸道疾病。不想受限于任一种作用机制，期望对平滑肌增殖的抑制作用可防止发生在中等到严重哮喘患者中所见到的气道重塑改型。这些结果表明联用DHEA-S与cAMP调节剂，例如甲基黄嘌呤，可降低气道平滑肌重塑改型。

除硫酸DHEA外，其它合适的非糖皮质激素类固醇也可用作第一活性剂，包括(但不限于)表雄酮及其衍生物、类似物和药学上可接受的盐。例如，本文的式I、III和IV所述的化合物。

虽然已结合所提供的优选实施方案描述了本发明，但应理解的是，在不脱离本发明构思的情况下可作出各种改进。

如同每篇单独的出版物、专利或专利申请的内容特异性或独立地全文纳入作为参考的程度一样，所有的出版物、专利和专利申请以及网站上的内容全文纳入作为参考。

Claims (19)

1.一种药物组合物，其包含药学或兽医学上可接受的运载体、可有效治疗哮喘、慢性阻塞性肺病或呼吸道疾病或肺病的第一活性剂和第二活性剂，

(a)所述第一活性剂是选自具有以下化学式的非糖皮质激素类固醇：

和以下化学式的非糖皮质激素类固醇中的至少一种；

或它们的药学或兽医学上可接受的盐；

式中，R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R12、R13、R14和R19各自为H、OR、卤素、(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基：R5和R11各自为OH、SH、H、卤素、药学上可接受的酯、药学上可接受的硫酯、药学上可接受的醚、药学上可接受的硫醚、药学上可接受的无机酯、药学上可接受的单糖、二糖或寡糖、螺环氧乙烷、螺环硫乙烷、-OSO2R20、-OPOR20R21或(C1-C10)烷基，R5和R6结合到一起为＝O；R10和R11结合到一起为＝O；R15是(1)当R16是-C(O)OR22时为H、卤素、(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基，(2)当R16是卤素、OH或(C1-C10)烷基时为H、卤素、OH或(C1-C10)烷基，(3)当R16是OH时为H、卤素、(C1-C10)烷基、(C1-C10)链烯基、(C1-C10)炔基、甲酰基、(C1-C10)烷酰基或环氧基，(4)当R16是H时为OR、SH、H、卤素、药学上可接受的酯、药学上可接受的硫酯、药学上可接受的醚、药学上可接受的硫醚、药学上可接受的无机酯、药学上可接受的单糖、二糖或寡糖、螺环氧乙烷、螺环硫乙烷、-OSO2R20或-OPOR20R21；或R15和R16结合到一起为＝O；R17和R18各自为(1)当R6是H、OR、卤素、(C1-C10)烷基或-C(O)OR22时为H、-OH、卤素、(C1-C10)烷基或-(C1-C10)烷氧基，(2)当R15和R16结合到一起为＝O时为H、(C1-C10烷基)氨基、((C1-C10)烷基)n氨基-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、羟基-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基、(卤素)m(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷酰基、甲酰基、(C1-C10)烷酯基或(C1-C10)烷酰氧基，(3)R17和R18结合到一起为＝O；(4)R17或R18与它们所连的碳结合到一起形成含有0或1个氧原子的3-6元环；或(5)R15和R17与它们所连接的碳一起形成一环氧化物环；R20和R21各自为OH、药学上可接受的酯或药学上可接受的醚；R22是H、(卤素)m(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷基；n是0、1或2；m是1、2或3；和

(b)所述第二活性剂是PDE-4抑制剂。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述第一活性剂是具有以下化学式的非糖皮质激素类固醇

式中，虚线表示单键或双键；R是氢或卤素；5位的H以α或β构型存在，或者化学式I所示的化合物包含这两种构型的外消旋混合物；R¹是氢或与该化合物共价结合的多价无机或有机二羧酸。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述第一活性剂是具有化学式(I)的非糖皮质激素类固醇，其中，所述多价有机二羧酸是SO₂OM、磷酸盐或碳酸盐，其中M包括平衡离子，所述平衡离子是H、钠、钾、镁、铝、锌、钙、锂、铵、胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸、三乙胺、乙醇胺、胆碱、三乙醇胺、普鲁卡因、苄星青霉素、丁三醇胺、吡咯烷、哌嗪、二乙胺、硫苷脂

或磷脂

其中可相同或不同的R²和R³是直链或支链(C₁-C₁₄)烷基或葡糖苷酸

4.如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述第一活性剂是脱氢表雄酮。

5.如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述第一活性剂是硫酸脱氢表雄酮。

6.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述PDE-4抑制剂是罗氟司特或西洛司特。

7.如权利要求1所述的药物组合物，还包含有泛醌或其药学或兽医学上可接受的盐，其中所述泛醌具有以下化学式

式中，n是1-12。

8.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含有大小可吸入或可呼吸的颗粒。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述颗粒大小约为0.01-10μm。

10.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述颗粒大小约为10-100μm。

11.一种装有递送装置和如权利要求1所述药物组合物的试剂盒。

12.如权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述递送装置是气溶胶发生器或喷雾发生器。

13.如权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述气溶胶发生器包括吸入器。

14.如权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述吸入器可递送单次预定剂量的制剂。

15.如权利要求14所述的试剂盒，其特征在于，所述吸入器包括喷雾器或吹入器。

16.一种降低受试对象患哮喘可能性或治疗哮喘的方法，所述方法包括向需要这种治疗的受试对象施用预防或治疗有效量的如权利要求1所述的药物组合物。

17.一种降低受试对象患慢性阻塞性肺病可能性或治疗慢性阻塞性肺病的方法，所述方法包括向需要这种治疗的受试对象施用预防或治疗有效量的如权利要求1所述的药物组合物。

18.一种治疗受试对象的呼吸道、肺或恶性疾病或病症，或降低腺苷或腺苷受体水平或对腺苷或腺苷受体敏感性的方法，所述方法包括向需要这种治疗的受试对象施用预防或治疗有效量的如权利要求1所述的药物组合物。

19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述疾病或病症包括哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、囊性纤维化(CF)、气急、肺气肿、喘鸣、肺高血压、肺纤维化、气道过度反应性、腺苷或腺苷受体水平升高、腺苷过度敏感性、感染性疾病、肺支气管收缩、呼吸道炎症或过敏、肺表面活性物质或泛醌耗尽、慢性支气管炎、支气管收缩、呼吸困难、肺气道障碍或阻塞、心脏功能的腺苷测试所引起的、肺血管收缩、呼吸障碍、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、腺苷或腺苷水平提升药物的施用、婴儿呼吸窘迫综合征(婴儿RDS)、疼痛、过敏性鼻炎、癌症或慢性支气管炎。

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