CN101129386A - 一种含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂 - Google Patents

Abstract

一种含环丙沙星和地塞米松的可局部给药的悬浮滴眼剂，包含有地塞米松、环丙沙星、氯化钠、羟丙基甲基纤维素、聚山梨酯80和乙酸/乙酸钠缓冲液，其中羟丙基甲基纤维素的浓度为1.0～5.0％。本发明的滴眼剂具有合适的黏度，一方面可以有效延长药物的停留时间，最大限度地提高了药物的生物利用度。另一方面有效降低了药物对眼睛的刺激性，提高了患者的耐受性。

Description

一种含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂

技术领域

本发明涉及一种可局部给药的眼用制剂，特别是涉及一种含环丙沙星和地塞米松的可局部给药的悬浮滴眼剂。具体地说，本发明是使用具有合适黏度的添加剂组合设计适用于环丙沙星和地塞米松的眼制剂组方，以提高滴眼剂的生物利用度和减低刺激性。

背景技术

EP2065846A1公开了可局部给药的眼用和耳用抗生素/甾类组合产品，其实施例1～3描述了含有某些与包括非离子聚合物和非离子表面活性剂在内的赋形剂组合的药物的眼用悬浮制剂。实施例1是氯氟美松铜和洛美沙星的制剂，含有非离子补强剂(甘油)；实施例2是氟氢缩松和诺氟沙星的制剂，含有离子性补强剂(氯化钠)；实施例3是环丙沙星和地塞米松的制剂，含有非离子补强剂(甘露糖醇)。

US5540930和US5747061公开了可局部给药的甾类悬浮制剂，其含有非离子聚合物、非离子表面活性剂和非离子补强剂。这些专利涉及“粒度≤15微米的水不溶性甾类药物的稳定悬浮液，其保持该状态以使得在需要时即使在长期沉降之后仍能直接悬浮”。US5747061认为，应该尽可能使用非离子聚合物、非离子表面活性剂和非离子补强剂配制皮质甾类含水悬浮液，以保证配制的含水悬浮液稳定而无附聚，因为现已发现离子的存在是导致水悬浮液结块的主要原因。因此，US5747061确定了非离子二醇如甘油或甘露糖醇而不是常用的氯化钠为优选的补强剂。

然而，授权公告号为CN1158994C，发明名称为“含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮制剂”的专利却惊异地发现，以离子性补强剂为基础的皮质甾类(地塞米松)含水悬浮制剂并没有产生附聚。该专利的水悬浮制剂除了皮质甾类外，还包含有抗生素(环丙沙星)作为第二活性试剂，虽然该水悬浮制剂含有离子性补强剂，但却足够稳定以在需要时可以立即和容易地再悬浮。

但CN1158994C中用于增稠的非离子聚合物如优选的羟乙基纤维素浓度为0.1～0.5％，而这个浓度是不合适的。非离子聚合物如羟乙基纤维素的作用是调整滴眼剂的黏度的。合适的黏度可以延长药物的停留时间，最大限度地改进药物的生物利用度，同时又能减低滴眼剂的刺激性，使患者有良好的耐受性。而这两方面又都能提高疗效。人民卫生出版社出版的第四版药剂学指出：滴眼剂合适的黏度是4.0～5.0cPa·s，而浓度为0.1～0.5％的羟乙基纤维素显然不能达到这个目的。

发明内容

本发明的目的是对现有含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮制剂组分进行改进，提供一种新的适用于环丙沙星和地塞米松的滴眼剂组方，该滴眼剂具有合适的黏度，可以提高药物的生物利用度，减低滴眼剂的刺激性。

同时，本发明的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂同样具有优异的物理稳定性且容易和快速再悬浮。

本发明发现，含有1.0～5.0％羟丙基甲基纤维素的滴眼剂能够很好地实现本发明的目的。

因此，本发明提供的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂中，包含有1.0～5.0％的羟丙基甲基纤维素。

具体地，本发明的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂包含有：

a)0.01～0.5％地塞米松；

b)0.1～0.4％环丙沙星；

c)0.1～0.9％氯化钠；

d)1.0～5.0％羟丙基甲基纤维素；

e)0.01～0.2％聚山梨酯80；和

f)乙酸/乙酸钠缓冲液

且该悬浮滴眼剂的pH值为4.5±0.5。

·本发明悬浮滴眼剂中的活性成分包含有皮质甾类药物地塞米松和抗生素类药物环丙沙星。地塞米松可以以任何具有不良水溶性的可眼用形式存在，以使所制得的制剂是悬浮剂，其中合适的形式为地塞米松醇。环丙沙星可以以任何可眼用的形式存在，以使环丙沙星成分在最终制剂中呈溶液形式，其优选形式为一水合盐酸环丙沙星。

地塞米松成分在本发明滴眼剂中占约0.01～0.5％，而环丙沙星成分占约0.1～0.4％。进一步地，地塞米松和环丙沙星在本发明滴眼剂中的优选量分别为0.1％和0.3％。

除了活性成分以外，本发明的悬浮滴眼剂中还含有氯化钠作为离子性补强剂。氯化钠的用量一般应足以使滴眼剂具有约250～350mOsm的重量摩尔渗透压。本发明的悬浮滴眼剂中，氯化钠的适宜用量为0.1～0.9％。

本发明选用羟丙基甲基纤维素作为调节悬浮滴眼剂黏度的非离子聚合物，其用量占滴眼剂总量的1.0～5.0％。优选的羟丙基甲基纤维素浓度为2.0％，这个浓度可以保证悬浮滴眼剂的黏度达到5.0cPa·s左右，以使悬浮滴眼剂达到更好的疗效。

悬浮滴眼剂中还应含有非离子表面活性剂，本发明的滴眼剂中具体是选用聚山梨酸酯80，其用量约为0.01～0.2％，优选0.1％。

在本发明的悬浮滴眼剂中还可以包含有防腐剂，所述的防腐剂可以是苯扎氯铵、苯扎溴铵或乙二铵四乙酸二钠、乙二铵四乙酸钙钠，或其它眼制剂用防腐剂，以及上述各种防腐剂的组合。例如，选择苯扎溴铵作为防腐剂的适宜浓度为0.005～0.3％，进一步的优选浓度为0.01％。

当滴眼剂中存在有乙二铵四乙酸钙钠或乙二铵四乙酸二钠时，其除了可以作为防腐剂外，还是悬浮制剂中的螯合剂。本发明优选乙二铵四乙酸钙钠作为制剂的螯合剂，其浓度范围应为0.001～0.1％，优选0.01％。

在大多数情况下，本发明的悬浮制剂中还含有0.1～1.5％的硼酸。

本发明制备的悬浮滴眼剂的pH值应为3～5，最佳为4.5。pH值可以通过NaOH/HCl进行调节，并以缓冲溶液进行缓冲。用于本发明悬浮滴眼剂的缓冲溶液体系优选乙酸/乙酸钠缓冲液组合。一般地，乙酸的浓度为0.02～0.08％，乙酸钠的浓度为0.015～0.06％。

地塞米松作为本发明制剂中唯一的水不溶性成分，为避免其过大的粒度可能会造成眼部的刺激或不适，应控制它的平均粒度低于10μm。可以使用已知的技术如球磨、微流化和声处理分级等技术粉碎地塞米松颗粒以使其达到要求的粒度范围。

本发明的悬浮滴眼剂中，除上述所包括含量的活性组分和辅助制剂外，剩余部分用无菌纯水补足到100％。

除非另有说明，本发明中以百分数提供的所有成分含量均是指质量百分比含量。

本发明的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂的制备过程可以按照如下常规方式进行。

1).取配比量的盐酸环丙沙星、氯化钠、乙二胺四乙酸钙钠、苯扎溴铵、乙酸、乙酸钠、硼酸，加无菌纯水适量溶解。

2).取配比量的羟丙基甲基纤维素，加无菌纯水适量，加热溶解。

3).取配比量并已灭菌(180°下2小时)的地塞米松和聚山梨酸酯80混匀，加适量无菌纯水，制成混悬液。

4).将1)、2)混匀后，100°灭菌，再与3)混匀，加无菌纯水至需要体积的90％。

5).检测悬浮液的pH值，根据需要，用无菌NaOH或HCl溶液调节悬浮液的pH值为4.5±0.5，用无菌纯水稀释至制定体积即得。

本发明是针对CN1158994C“含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮制剂”专利的改进。本发明通过对CN1158994C专利中的原有组方进行适度地改变及对使用的添加剂用量进行合理的调整，使得制备的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂在继续保持了原有药物组合物优异的物理稳定性，容易和快速再悬浮的同时，制剂的黏度更符合了滴眼剂的使用要求。因此，与CN1158994C专利药物比较，本发明的悬浮滴眼剂可以有效延长药物的停留时间，最大限度地提高了活性药物的生物利用度。同时，基于本发明黏度下的悬浮滴眼剂还有效降低了药物对眼睛的刺激性，提高了患者的耐受性。而上述两个方面的改进，都提高了本发明悬浮滴眼剂的药物疗效，使得本发明药物的效果更加优异。

盐酸环丙沙星地塞米松悬浮滴眼液已经以商品名“Ciplox-D”在国外销售，根据《药品注册管理办法》(试行)有关规定，该药物属于化学药品注册分类3类第2小类——已在国外上市销售的复方制剂。其药理学和毒理学研究资料如下：

一、药效学研究

1.盐酸环丙沙星的抗菌作用

盐酸环丙沙星具有广谱抗菌作用，尤其对需氧革兰阴性杆菌的抗菌活性高，对下列细菌在体外具有良好的抗菌作用：肠杆菌科的大部分细菌，包括枸椽酸杆菌属、阴沟、产气肠杆菌等肠杆菌属、大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、沙门菌属、志贺菌属、弧菌属、耶尔森菌等。常对多重耐药菌也具有抗菌活性。对青霉素耐药的淋病奈瑟菌、产酶流感嗜血杆菌和莫拉菌属均具有高度抗菌活性。对铜绿假单胞菌等假单胞菌属的大多数菌株具有抗菌作用。盐酸环丙沙星对甲氧西林敏感葡萄球菌具有抗菌活性，对肺炎链球菌、溶血性链球菌和粪肠球菌仅具有中等抗菌活性。对沙眼衣原体、支原体、军团菌具有良好的抗微生物作用，对结核杆菌和非典型分枝杆菌也有抗菌活性。对厌氧菌的抗菌活性差。环丙沙星为杀菌剂，通过作用于细菌DNA螺旋酶的A亚单位，抑制DNA的合成和复制而导致细菌死亡。

肖永红等作了环丙沙星药代动力学和体外抗菌活性研究，证明环丙沙星对各种受试致病菌均有强大的抗菌活性，尤以金葡菌及革兰氏阴性肠杆菌科细菌更为突出，抑菌率90～100％，且MIC₉₀≤0.03～1μg/mL，对绿脓杆菌抑菌率也达87％，详见表1。

表1环丙沙星体外抗菌活性

菌名	株数	MIC范围(μg/mL)	MIC90(μg/mL)	抑菌率(％)
					金葡菌四联球菌表葡球菌粪链球菌大肠杆菌变形杆菌肺炎杆菌痢疾杆菌伤寒杆菌枸橼酸杆菌沙雷氏菌阴沟杆菌产气杆菌不动杆菌绿脓杆菌哈夫尼亚氏菌	131118613037797610110391912461412	＜0.03～1＜0.03～0.06＜0.03～0.250.25～1＜0.03～4＜0.03～4＜0.03～＞182＜0.03～32＜0.03～＞128＜0.03＜0.03～8＜0.03～4＜0.03～4＜0.03～4＜0.03～＞128＜0.03	0.1250.060.510.06＜0.030.25＜0.0310.5242	10010093959499931009090678787

张建浩等作了环丙沙星滴眼液抗菌活性的比较研究，菌种为绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、淋病双球菌。比较了环丙沙星滴眼液、泰利必妥滴眼液(日本参天制药株式会社)、氟哌酸滴眼液(南京江甫药厂)，复方多粘菌素B滴眼液、庆大霉素滴眼液的抗菌活性。从抑菌圈大小来看，三种喹喏酮类滴眼液对绿脓杆菌、表皮葡萄球菌的作用相同，对金色葡萄球菌的作用大小为环丙沙星滴眼液＞氟哌酸滴眼液＞泰利必妥滴眼液，对淋病双球菌的作用大小为环丙沙星滴眼液＞泰利必妥滴眼液＞氟哌酸滴眼液，说明这三种喹喏酮类抗菌药物中，环丙沙星滴眼液的抗菌活性最强。

张京文等作了眼部感染分离细菌对常用滴眼液的药敏试验分析，结果显示环丙沙星作为新型广谱抗生素，对阳性菌和阴性菌都具有较强活性，优于其他品种(表2)。同时国外学者报道，环丙沙星在治疗金葡菌性角膜炎或绿脓杆菌性角膜炎的疗效明显优于万古霉素、头孢唑啉及妥布霉素。

表2六种滴眼剂对革兰阳性和阴性菌药敏结果比较

药名	革兰阳性菌			革兰阴性菌
							株数	敏感株	敏感率(％)	株数	敏感株	敏感率(％)
	氧氟沙星庆大霉素诺氟沙星利福平环丙沙星氯霉素	757575757575	334838294831	44.064.050.738.764.041.3	989898989898	625462138329							63.355.163.313.384.729.6

2.地塞米松的药效学研究

糖皮质激素对免疫系统具有广泛的作用。大剂量糖皮质激素可减少抗体生成，抑制细胞免疫。糖皮质激素还抑制巨噬细胞内的消化和杀菌功能。

1)地塞米松抑制巨噬细胞产生氧自由基和一氧化氮

王广庆等作了地塞米松抑制巨噬细胞产生氧自由基和一氧化氮的研究，腹腔巨噬细胞从小鼠腹腔获取，证明了：

a)地塞米松对巨噬细胞杀菌率的影响  用内毒素刺激巨噬细胞后其杀菌率为0.326±0.86(n＝6)，若加入地塞米松，则其杀菌率为0.136±0.108(n＝6)，P＜0.01。表明地塞米松能显著降低巨噬细胞的杀菌率。

b)地塞米松对巨噬细胞还原NBT的影响以酵母多糖直接刺激巨噬细胞，则还原性NBT的A值为0.097±0.022(n＝6)，有地塞米松存在时，还原性NBT的A值为0.067±0.011(n＝6)，二者比较P＜0.01。表明地塞米松抑制酵母多糖刺激巨噬细饱的氧化代谢能力，从而抑制还原性NBT的生成。

c)地塞米松对巨噬细胞产生一氧化氮的影响以内毒素诱导巨噬细胞产生一氧化氮，继而代谢生成稳定的亚硝基。在混合培养7h后，观察到亚硝基的存在，培养24h后亚硝基含量稳定，故选取此时观察。显示地塞米松明显抑制巨噬细胞产生亚硝基。

2)地塞米松对家兔急性肺损伤早期中性粒细胞相关功能的影响

王烁等作了地塞米松对家兔急性肺损伤早期中性粒细胞相关功能影响的研究，以大肠杆菌内毒素脂多糖复制出感染中毒性休克造成急性肺损伤的动物模型，最终结果表明，实验动物注射大肠杆菌内毒素脂多糖后，可以使PMN表面CD11B的表达被快速激活并上调，符合根据有关理论做出的设想。地塞米松作为临床常用的糖皮质激素，可以通过抑制核因子κB(NF-κB)的活性及κB抑制蛋白(IκB)的降解，从而抑制多种细胞因子的转录，使炎症细胞因子在SIRS中释放减少，对炎症反应有强列的抑制作用。本研究将动物分为E、P两组，以观察在不同时间给药对急性肺损伤的治疗效果，试图找出临床上发生急性肺损伤高危患者的最佳给药时间。结果表明，无论是预处理组还是早期干预组，糖皮质激素都表现出了较好的疗效，不但明显抑制了与急性肺损伤严重程度高度相关的PMN表面CD11B表达强度，而且显著减轻了光镜下肺脏病理损伤的严重程度。可以认为，地塞米松对急性肺损伤的治疗效果归咎于其抑制了PMN的过度激活对组织的损伤，从而导致了一系列生理指标的改善。统计结果表明，使用地塞米松后，在血压和血PMN计数两项指标上，E、P两组存在显著性差异，这说明激素的预处理对于大肠杆菌内毒素脂多糖引起中毒性休克的严重程度有一定的改善作用，对实验动物有更好的保护作用。实验和理论均指出，大肠杆菌内毒素脂多糖引起PMN的激活迅速而持久，因此，如不尽早使用有效的抑制剂，一旦发生瀑布式反应，将很难再将其逆转。

3)地塞米松对成年大鼠持续性局灶性脑缺血后凋亡和Bcl2蛋白表达的影响

冯涛等作了地塞米松对成年大鼠持续性局灶性脑缺血后凋亡和Bcl2蛋白表达的影响研究，以鼠建立持续性局灶脑缺血模型(假手术组省略这一步)。术后1h开始，生理盐水组尾静脉注射0.9％NaCl注射液(0.5mL/d)，地塞米松组尾静脉注射地塞米松(0.5mg·kg^-1·d^-1)。

梗死灶限于右侧大脑中动脉供血区的皮层和皮层下白质。假手术组未见TUNEL阳性凋亡细胞。生理盐水组在48、72、120h时点梗死灶边缘可见TUNEL阳性凋亡细胞，TUNEL阳性细胞以神经细胞为主。地塞米松组TUNEL阳性凋亡细胞出现时点为24、48、72、120h。缺血48、120h时凋亡细胞密度比生理盐水组显著增加(P＜0.01)；72h与生理盐水组无显著性差异(P＞0.05)。

Bcl2免疫组织化学染色：生理盐水组缺血3h，在缺血区边缘可见少数Bcl2免疫组织化学染色阳性细胞，细胞形态完整；6、12h阳性细胞数逐渐增加；24h阳性细胞数和信号强度达到最大值；48、72h阳性细胞数数量仍处于高水平、阳性信号中等强度；120h阳性细胞数减少到3h时水平。Bcl2免疫组化学染色阳性细胞主要位于缺血梗死灶的边缘，梗死灶中心区和远离梗死灶的区域未见阳性细胞。Bcl2阳性细胞主要是神经细胞，免疫组化学染色阳性信号主要位于胞浆。与生理盐水组比较，地塞米松组在缺血6、12、48、72、120h时，Bcl2免疫组织化学染色阳性细胞密度减少，有显著性差异(P＜0.05)；3、24h时点地塞米松组与生理盐水组阳性细胞密度相似。

4)脑外伤后局部应用地塞米松对家兔脑病理改变的影响

杨波等作了脑外伤后局部应用地塞米松对家兔脑病理改变的影响研究，将健康自家兔随机分为A、B2组，A组10只，B组5只。A组为单侧脑皮层损伤组，B组为双侧脑皮层损伤组。A1组为生理盐水对照组，A2组为局部地塞米松治疗组。B组动物麻醉成功后，按上述方法切开头皮及暴露顶骨。分别将左右两侧顶骨钻孔，如上法完成2个骨窗，成形后将家兔固定于打击器的固定台上，实施双侧额顶叶相应部位皮层打击，同样造成皮层挫裂伤的模型。设左侧为生理盐水对照侧(B1)，右侧为地塞米松治疗侧(B2)。

(1)脑电图动态变化A组家兔致伤前正常脑电图为9周/s的α波为主，偶见β快波。致伤后1min出现阵发性短程40～60μV的不规则δ波。动态观察5min脑电图仍无改变。A1组90min后EEG较前无明显变化。A2组局部用药后1minEEG无变化，但90min后背景电图则以α波为主兼有快波，左侧慢波较前明显减低，慢波为较规则的7周/s的θ节律。48h后A1组病理性EEG改善不明显，但A2组背景电图以低幅α波为主，兼有少量低幅快波，慢波完全消失，可见较小幅度呼吸差。B组家兔致伤前双侧脑皮层的正常EEG以α波为主的背景电图上兼有部分β快波，α波较规则。双侧致伤后5min，α指数明显减少且波幅较伤前为低，两侧散在多量θ波、δ波和不规则慢波。右侧(B2侧)皮层局部用药后5minEEG无变化，左、右(B1、B2)双侧可见波幅及时限大致相等的慢波。B2侧用药后40min，EEG显示双侧慢波较用药前减少，波幅减低，但B2侧慢波明显减少，波幅明显降低。48h后背景电图以α波为主，B1侧仍可见较多不规则、波幅较伤后为低的θ慢波。B2侧EEG基本接近正常。

(2)脑组织形态变化A1组和B1侧家兔致伤后脑血管扩张充血，损伤灶有点、片状出血，呈挫裂伤表现，周围水肿明显，可达白质深层，血管外和细胞外间隙扩大。局部用药后，A2组和B2侧脑皮层水肿程度减轻，损伤灶范围缩小，以皮层浅层水肿减轻更为明显，细胞形态完整，血管及细胞周围间隙较小，脑内小血管充血亦减少。

二、一般药理学研究

1.盐酸环丙沙星的一般药理学研究

1)试验动物

(1)健康昆明种小白鼠，体重18～21g，雌雄兼有。

(2)杂种狗，体重12～20Kg，雌雄兼有。

以上动物均由中国医学科学院实验动物研究所养殖场提供，在动物室观察一周后使用。

2)实验方法

(1)对神经系统的影响

A对小鼠自主活动的影响小鼠随机分组，每组10只，雌雄各半，分别口服环丙沙星25mg/kg和100mg/kg，另设对照组(生理盐水)。给药50min后，逐只放入小鼠自主活动记录仪，适应2～3分钟，记录10min内小鼠自主活动的次数，用t检验作显著性分析。

B对戊巴比妥钠阈下催眠剂量的协同作用  分组与给药方法同上，口服50min后，腹腔内注射戊巴比妥钠30mg/kg，观察15min内翻正反射消失1min以上的动物数，用X²检验测定给药组与对照组有无显著性差异。

(2)对呼吸和心血管系统的影响

取健康狗，由前肢静脉注射戊巴比妥钠(30mg/kg)进行麻醉，固定于手术台，切开左侧腹股沟皮肤，分离结扎动脉，切一小口，插入动脉套管，并与血压传感器相联，作为测定血压变化之用，同时联接四肢心电导线和呼吸传感器，以测定心电图和呼吸变化。

待血压、呼吸、心电图平稳后，记录给药前结果作为对照，然后由静脉缓慢注射环丙沙星1mg/kg和10mg/kg，记录1、5、10、30、60min的血压、心率、心电图和呼吸的变化，与给药前作为对照，分析所得结果。

3)实验结果

(1)对神经系统的影响

结果表明，口服环丙沙星25mg/kg和100mg/kg，对小鼠自主活动无明显影响，与戊巴比妥钠阈下催眠剂量也未见协同作用，提示本品对神经系统可能没有明显影响。

(2)对狗血压、心率和心电图的影响

实验结果表明，3只狗静脉注射环丙沙星1mg/kg，1～60min对血压、心率和心电图均无明显影响，与给药前相比未见显著差异。静注10mg/kg后，有短暂的血压下降伴有心率稍加快，5min逐渐恢复正常，其中1只狗导联的Q波和R-S波有增高现象，30min时心电图基本恢复正常。

(3)对狗呼吸的影响

实验结果表明，3只狗静脉注射环丙沙星1mg/kg和10mg/kg，对呼吸次数和呼吸深度无明显影响。

2.地塞米松的一般药理学研究

未发现地塞米松的一般药理试验数据。

三、急性毒性试验

1.盐酸环丙沙星的急性毒性试验

1)小鼠

环丙沙星对小鼠一次给药的毒性实验结果表明，小鼠对本品耐受性较低，尤其口服对小鼠毒性较大，其LD₅₀为2991.5mg/kg，其他途径一次给药的毒性(LD₅₀)与其他氟喹诺酮类抗菌剂相似，详见表3。

表3环丙沙星对小鼠急性毒性数据

给药途径	LD50(mg/kg)	90％置信间
			口服静脉注射肌肉注射皮下注射	2991.52223.88831.081133.42	2763.13～3249.63208.36～240.55735.21～939.46981.56～1308.74

本品注射给药的毒性出现较快，死亡动物大多数集中在10h内，尤其大剂量组静注给药动物死亡快。注射过程中，即使缓慢注射，也会引起动物阵发性抽搐后死亡，部分动物抽搐后，表现为无力，呼吸急促，10min内恢复正常活动。肌注和皮注动物死亡较慢，一般给药后10min出现与静注相似的抽搐症状。口服给药的毒性出现较晚，一般口服后20min出现抽搐症状和死亡，部分动物的出现毒性反应更晚。

本品对小鼠各途径一次给药的急性毒性，经观察表明，未见延缓毒性，各途径给药未见动物死亡，其体重均比给药前增加，动物活动和步态正常，也未见其他系统的延缓毒性症状。

未死亡动物经一周观察后，进行解剖检查，除肌注和皮注的局部有明显刺激性(肌肉和皮下组织有坏死和溃烂)外，其他检查器宫未见明显病变。

2)大鼠

环丙沙星对大鼠一次给药的各途径毒性表明，大鼠有良好的耐受性，大鼠口服LD₅₀＞6000mg/kg，其急性毒性明显比小鼠为低，其他途径给药的毒性(除静脉给药外)也比小鼠毒性为低，详见表4。

表4环丙沙星对大鼠急性毒性数据

给药途径	LD50(mg/kg)
		口服静脉注射肌肉注射皮下注射	＞5000＞200＞1000＞1200

2.地塞米松的急性毒性试验

地塞米松对动物的急性毒性试验数据见表5。

表5地塞米松对动物急性毒性数据

动物	给药方式	LD50(mg/kg)
			鼠(mouse)鼠(rat)兔	腹腔注射腹腔注射皮下注射	410547200

四、长期毒性试验

1.盐酸环丙沙星的长期毒性试验

1)实验动物

Wistar种大白鼠，体重雄性214±16g，雌性149±9g。由中国医学科学院实验动物研究所养殖场提供，在动物室观察一周后使用。

2)实验方法

取健康大鼠若干，随机分组，每组20只，雌雄各半，分别口服环丙沙星500、250、100mg/kg以及等量的0.25％羧甲基纤维素钠混悬液，每日投药一次，每周口服6日，为期2月。

给药前观察一般情况，取尾静脉血液检查血红蛋白、红细胞数、白细胞总数和分类。尿液检查包括尿pH，蛋白，糖和沉渣镜检。给药过程中观察一般情况，步态，对外界反应，行为活动，眼睛和前后肢关节的外观变化，定期测定食物和水份消耗量，观察体重增长情况。停药时除检查上述血和尿常规外，并取血检查肝功能和肾功能包括谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白、总蛋白、肌酐、尿素氮和碱性磷酸酶等。末次给药后24h，处死各剂量组和对照组的半数动物，解剖检查器官和组织有否大体改变，并取心、肺、胸腺、肝、脾、胰、肾、肾上腺、胃、小肠、大肠、盲肠、膀胱、睾丸或卵巢、淋巴结、肌肉、眼球、关节、大脑和小脑等组织块，固定于Bouin’s液中，石蜡包埋，HE染色作病理组织学观察。未处死动物停药继续观察一月后处死，进行上述解剖检查和病理组织学观察。

3)实验结果

(1)对一般情况的影响

口服环丙沙星100、250、500mg/kg，在给药早、中和后期，大鼠对外界反应、步态、行为、活动和毛色等与对照组相似，未见明显差别，眼球和四肢关节也未见明显异常。

(2)对体重增长的影响

实验过程中，给药组与对照组雄鼠和雌鼠体重增长波动均在正常范围内。500mg/kg组在给药早期体重增长速度比对照组略快，但与对照组相比无统计学意义(P＞0.05)；中期和后期各剂量组的动物体重增长与对照组相似。

(3)对食物和水份消耗的影响

在给药早期，500mg/kg和250mg/kg组的水份消耗量比对照组略有增加；给药中期的水份消耗量与对照组相似；而后期的消耗量则相对减少，但无统计学意义(P＞0.05)。

(4)对造血功能的影响

口服环丙沙星，大鼠红细胞、白细胞和血红蛋白未见明显减少或增加，与给药前和对照组相比，波动均在正常范围内、对白细胞分类也未见明显影响；各剂量组的淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核粒细胞等与给药前和对照组相比均未见明显变化。

(5)对大鼠肝功能的影响

结果表明，各剂量组的SGPT、SGOT、白蛋白和总蛋白与对照组相比，除500mg/kg组的ALP活性偏高与对照组相比有差异(P＜0.01)外，其他未见明显差异(P＞0.05)，提示本品对肝功能无明显影响。停药一个月的SGPT、SGOT、AP和AT也未见异常，ALP恢复至正常范围内。

(6)对肾功能的影响

给药早期、中期和后期的尿常观检查均未见明显异常，尿沉渣镜检未发现上皮细胞和管型，也未见本品结晶。停药时肾功能生化检查表明，500mg/kg组BUN轻度升高，但与对照组相比没有明显差异(P＞0.05)。250mg/kg和100mg/kg组的BUN值和肌酐(Cr)值与对照组相似，均在正常范内，停药观察一个月也未见功能改变，提示环丙沙星对肾功能无明显损害。

(7)对盲肠的影响

环丙沙星可使大鼠盲肠重量增加，且盲肠重量与剂量呈线性关系。其中500mg/kg和250mg/kg组重量比对照组重量有显著意义(P＜0.05)；100mg/kg组盲肠重量也比对照组重(P＜0.05)。停药一个月后，500mg/kg组雄鼠的盲肠重量仍未恢复正常(P＜0.05)，雌鼠盲肠重量则与对照组相似(P＞0.05)；100mg/kg和250mg/kg组盲肠重量恢复正常，与对照组无明显差别(P＞0.05)。

(8)对大鼠脏器系数的影响

停药时对各剂量组处死动物的心、肝、肺、肾、脾、脑和睾丸等分别称重，结果表明上述器官和组织的脏器系数(脏器g重/100g体重比)与对照组相似，经统计学处理无显著意义(P＞0.05)。

(9)病理组织学检查

停药时对照组动物的心、肺、胸腺、肝、脾、肾、膀胱、肾上腺、胃、小肠、大肠、盲肠、胰、睾丸、附睾、或卵巢、淋巴结、膝关节、肌肉、眼球、大脑、和小脑等经大体解剖检查均未见明显病理改变，组织病理切片镜检也证实上述器官或组织未见明显组织学改变。停药一个月，10只动物中5只动物有单侧或1叶肺实变，肺组织切片也证实为肺部炎症，其他5只大鼠肺均未见明显异常，其他器官未见病理改变。

给药组停药时除盲肠重量比对照组明显增加外，其它器官和组织未见明显异常，病理组织切片也未见明显病变。停药一个月处死动物的上述检查器官和组织均未见明显病理改变。

2.地塞米松的长期毒性试验

未发现地塞米松的长期毒性试验数据。

五、致突变试验

1.盐酸环丙沙星致突变试验

1)Ames试验  在盐酸环丙沙星的抑菌浓度下，选择5个不同剂量即1.2、0.6、0.3、0.24、0.12μg/皿对TA97、TA98、TA100均未见阳性结果。当剂量为0.6、0.3、0.12μg/皿时，无论加入S9mix与否，对TA102的回变菌落数均超过自然回变的2倍以上，而且有明显的剂量效应关系；当剂量再加大时，出现抑菌或杀菌作用。将西德Bayerco和上海第二制药厂的相同产品进行对照试验，其产生突变的剂量及强度均相近，可见盐酸环丙沙星在Ames试验中对TA102有致突变作用。

2)微核试验  以盐酸环丙沙星3000、1500、750mg/kg的剂量经口一次灌胃给予昆明种小鼠，给药24h后处死，样品组与空白对照组的骨髓嗜多染红细胞中微核数比较，其差别无显著意义(P＞0.05)，而阳性对照组环磷酞胺与空白对照组比较有非常显著的差异(P＜0.01)。

3)CHO细胞染色体畸变试验  将CHO细胞在5％CO₂培养箱中37℃培养，培养液为RPMI1640，并加入10～15％的小牛血清。染色体畸变试验剂量为90、45、22.5μg/mL，无论加入S9mix与否，样品组染色体畸变率均小于2％，属正常变化范围，而阳性对照物丝裂霉素C(0.2μg/mL)及环磷酞胺(60μg/mL)染色体畸变率分别为64％和30％，与溶剂对照组比较差异非常显著(P＜0.01)。

盐酸环丙沙星在Ames试验中出现阳性结果，与Bredberg等(1989)及Charlene A(1987)报道的应用于其它体外方法得到的阳性结果有一定相关性，提示盐酸环丙沙星在体外条件下对细菌DNA有明显损伤作用，甚至在抑菌浓度下也表现出明显的诱变作用。由于该药对哺乳动物的DNA酶活性，包括拓扑异构化酶影响不大，小鼠微核试验、CHO染色体畸变试验未见阳性结果，可见盐酸环丙沙星对哺乳动物的遗传毒性并不明显。

2.地塞米松致突变试验

在体外，艾姆斯氏salmonella反转分析呈阴性反应，但是地塞米松导致人工培养的淋巴细胞姐妹染色单体交换和染色体失常；在体内，老鼠微核试验呈阳性反应，并且地塞米松仍然导致老鼠骨髓细胞姐妹染色单体交换。

六、生殖毒性试验

1.盐酸环丙沙星的生殖毒性试验

老鼠每天口服给药环丙沙星100mg/kg，对生育能力没有相关的损害。母鼠口服给药100mg/kg或IV给药30mg/kg以上的环丙沙星，没有畸形形成或胎儿中毒。母兔口服给药≥30mg/kg时产生胃肠紊乱，因而发生体重降低和流产率增加，但不是致畸性。母兔IV给药20mg/kg或以下，没有观察到毒性，而且在后代中没有观察到胎儿中毒和致畸性。以上从兔子的实验中得到的现象是很多抗菌药物所普遍存在的。

2.地塞米松的生殖毒性试验

公鼠皮肤给药1.8mg/kg地塞米松26周，证明附睾、输精管、前列腺、精囊、库珀腺和附属的腺体等雄性生殖器官对生育力产生影响的变化，不大可能由短期的耳表皮使用地塞米松而引起。

一本出版物描述了关于怀孕新西兰白兔在器官生成期间由眼部每日以肾上腺皮质激素进行治疗的研究。每个治疗组有10只兔子，一半在29天的妊娠期中死去，另一半在死去之前生下了后代。研究显示地塞米松(0.1％)与畸形率升高(主要是腹腔内)有关，这些包括了肾发育不全、肠缺失和腹部内脏疝气。未治疗与生理盐水治疗对照组的胎儿畸形率低于1％，并且母亲及胎儿的平均体重高于药物治疗组；2个地塞米松治疗组的胎儿畸形率分别为32.3％(term)和15.6％(29天)。尽管这些数据已经被用于含有地塞米松的眼用产品说明中，但药理学家不能确信这些数据有足够的价值。

七、致癌试验

啮齿类动物每天口服环丙沙星750mg/kg(小鼠)和250mg/kg(大鼠)以上，进行2年的生物研究，无癌发生的迹象。

·没有关于地塞米松致癌性的研究。

具体实施方式

实施例1

一水合盐酸环丙沙星    30.0g(以环丙沙星计)

地塞米松              10.0g

氯化钠                43g

乙酸                  4g

乙酸钠                3.9g

羟丙基甲基纤维素      200g

聚山梨酯80            10g

乙二胺四乙酸钙钠      1g

硼酸                  60g

苯扎溴铵              1g

注射用水              10000mL

                                    

制成                  1000瓶

1).取配比量的一水合盐酸环丙沙星、氯化钠、乙酸、乙酸钠、乙二胺四乙酸钙钠、硼酸、苯扎溴铵混合在一起，用3500mL无菌纯水溶解。

2).取配比量的羟丙基甲基纤维素，加入4000mL无菌纯水中，加热溶解。

3).取配比量并已灭菌(180°下2小时)的地塞米松和聚山梨酸酯80昆匀，加入800mL无菌纯水制成混悬液。

4).将1)、2)混匀后，于100°灭菌，再与3)混匀后，用无菌纯水稀释至9000mL。

5).根据需要，用无菌NaOH或HCl溶液调节悬浮液的pH值为4.5±0.5后，最后用无菌纯水稀释至10000mL，分装到1000个小瓶中，得到产品。

实施例2

一水合盐酸环丙沙星    30.0g(以环丙沙星计)

地塞米松              10.0g

氯化钠                43g

乙酸                2g

乙酸钠              1.9g

羟丙基甲基纤维素    200g

聚山梨酯80          5g

乙二胺四乙酸钙钠    1g

硼酸                60g

苯扎溴铵            1g

注射用水            10000mL

                                  

制成                1000瓶

制备方法同实施例1。

比较例1

将本发明实施例的滴眼剂产品与CN1158994C产品进行对比试验，结果如下：

表6本发明实施例产品与CN1158994C产品性能比较

	黏度(cPa·s)	渗透压(mOsm)	完全再悬浮的反转次数
				实施例1	5.84	302	11
实施例2	5.56	289	12
				CN1158994C	1.91	298	12

从上表可以看出，本发明制得的滴眼剂黏度明显高于CN1158994C，达到了滴眼剂的黏度要求，可以提供更好的疗效。而其他性能指标则与CN1158994C产品相当或略高。

本发明已参照一些优选的实施方案进行了描述，但应该理解，本发明可以在不背离其要旨或基本特征的情况下以其他特定形式或其变化实施。因此，本发明的上述实施方案是说明性而非限制性的，本发明的范围由所附权利要求书而不是前述说明所显示。

Claims (10)

1.一种含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂，包含有：

a)0.01～0.5％地塞米松；

b)0.1～0.4％环丙沙星；

c)0.1～0.9％氯化钠；

d)羟丙基甲基纤维素；

e)0.01～0.2％聚山梨酯80；和

f)乙酸/乙酸钠缓冲液；

且该悬浮滴眼剂的pH值为4.5±0.5，

其特征在于，所述羟丙基甲基纤维素的浓度为1.0～5.0％。

2.根据权利要求1所述的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂，其特征在于所述的羟丙基甲基纤维素浓度为2.0％。

3.根据权利要求1所述的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂，其特征在于所述的地塞米松为地塞米松醇，环丙沙星为一水合盐酸环丙沙星。

4.根据权利要求1所述的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂，其特征在于地塞米松浓度为0.1％，环丙沙星浓度为0.3％。

5.根据权利要求1所述的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂，其特征在于聚山梨酯80的浓度为0.1％。

6.根据权利要求1所述的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂，其特征在于还包括有0.005～0.3％的苯扎溴铵。

7.根据权利要求6所述的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂，其特征在于苯扎溴铵的浓度为0.01％。

8.根据权利要求1所述的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂，其特征在于还包括有0.1～1.5％的硼酸。

9.根据权利要求1所述的含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂，其特征在于还包括有0.001～0.1％的乙二胺四乙酸钙钠。

10.一种含环丙沙星和地塞米松的局部悬浮滴眼剂，由如下成份组成：

a)0.1％地塞米松醇；

b)0.35％一水合盐酸环丙沙星；

c)0.1～0.9％氯化钠；

d)2.0％羟丙基甲基纤维素；

e)0.1％聚山梨酯80；

f)乙酸/乙酸钠缓冲液；

g)0.01％苯扎溴铵；

h)0.01％乙二铵四乙酸钙钠；和

i)0.6％硼酸；

且该组合物的pH值为4.5±0.5。