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CN101020719A - 当归复合多糖、制备工艺及用途 - Google Patents

当归复合多糖、制备工艺及用途 Download PDF

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CN101020719A
CN101020719A CN 200610007214 CN200610007214A CN101020719A CN 101020719 A CN101020719 A CN 101020719A CN 200610007214 CN200610007214 CN 200610007214 CN 200610007214 A CN200610007214 A CN 200610007214A CN 101020719 A CN101020719 A CN 101020719A
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Abstract

本发明涉及一种从中药材当归(Angelica Sinensis(Oliv)Diels)的干燥根中提取、分离、纯化得到的重均分子量在20,000－80,000道尔顿之间，主要由半乳醛酸聚糖(Polygalacturonic acids)，阿拉伯半乳聚糖蛋白(AGPs)，鼠李半乳醛酸聚糖(Rhamnogalacturonans)和α－葡聚糖(α－Polyglucans)组成的复合多糖。含量＞80％。取适量的当归复合多糖，不加入或加入一种至多种药学上可以接受的辅剂，制成注射剂。每个注射剂量单位至少含50mg本发明物质。用于治疗中性粒细胞减少症、贫血、血小板减少症、免疫力低下、病毒感染性疾病和作为抗癌的辅助剂。

Description

当归复合多糖、制备工艺及用途
本发明涉及中药制药领域。具体涉及一种从中药材当归(AngelicaSinensis(Oliv)Diels)的干燥根中提取、分离、纯化得到的重均分子量在20,000-80,000道尔顿之间的当归复合多糖。含量＞80％。其特征在于此复合多糖主要由半乳醛酸聚糖(Polygalacturonic acids)，鼠李半乳醛酸聚糖(Rhamnogalacturonans)，阿拉伯半乳聚糖蛋白(AGPs)和α-葡聚糖(α-Polyglucans)组成。其特点为：1.多糖百分含量：蛋白百分含量＝95-99％：1-5％。2.糖组成：主要由阿拉伯糖(35-45％)，半乳糖醛酸(20-28％)，半乳糖(18-25％)，葡萄糖(5-15％)，鼠李糖(3-8％)，4-甲基葡萄糖醛酸(1-5％)组成。3.糖苷键链接：阿拉伯糖主要以α-3位，α-5位，α末端和α-3，5位糖苷键相连接。半乳糖醛酸主要以α-4位糖苷键相连接。半乳糖主要以α-3位，α-6位和α-3，6位糖苷键相连接。葡萄糖主要以α-4位，α-6位和α-4，6位糖苷键相连接。鼠李糖主要以α-2位和α-2，4位糖苷键相连接。4-甲基葡萄糖醛酸主要以α-4位和末端相连接。4.氨基酸组成：由19种不同的氨基酸组成，其中，精氨酸，丝氨酸，谷氨酸，甘氨酸，丙氨酸，赖氨酸和羟脯氨酸含量较高，占氨基酸总量的65-75％。5.重均分子量：20,000-80,000道尔顿。6.其它：为白色或类白色粉末，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。水溶液pH为4-6，呈弱酸性。本发明还涉及当归复合多糖的制备工艺、制剂及其用途。
当归为伞形科(umbuiferae)当归属多年生草本植物当归(AngelicaSinensis(Oliv)Diels)的干燥根。
中医认为：当归性味甘、辛、温。功效为补血活血，调经止痛，润肠通便。主治：血虚萎黄，眩晕心悸，月经不调，虚寒腹痛，肠燥便秘，跌扑损伤等证。当归主要含挥发油和水溶性成分，早期的研究主要集中在挥发油成分、水溶性小分子成分及其药理作用方面。近年来，随着现代医学、药学和分子生物学的发展，对当归的水溶性大分子部分-当归粗多糖(AP)及其药理作用也有了比较深入的认识。杨铁虹等(中国药理学通报，2003，19(4)：448-451)发现：当归粗多糖(AP)能增强正常及免疫抑制小鼠的非特异性免疫功能。王亚平等(中华血液学杂志，1993，14(12)：650-651)发现：当归粗多糖(AP)可促进贫血鼠外周血红细胞、血红蛋白回升，刺激贫血鼠骨髓红系爆增式集落形成细胞(BFU-E)和晚期红系祖细胞(CFU-E)增殖。郑敏等(重庆医科大学学报，2002，27(4)：373-375)发现：当归粗多糖(AP)能诱导胎儿胸腺细胞和脾细胞表达GM-CSF和IL-3。因此，探讨以当归多糖作为有效部位用于生血，提高免疫功能等，很有前景。
本发明提供一种从中药材当归(Angelica Sinensis(Oliv)Diels)的干燥根中提取、分离、纯化得到的重均分子量在20,000-80,000道尔顿之间的当归复合多糖。含量＞80％。
主要工艺流程如下：当归饮片净制后，加水或用0.2-0.6M磷酸二氢钾或磷酸二氢钠在50-105℃提取(加水量为3-4倍，每次提取1-3小时，共提取2-3次)。提取液60-80℃减压浓缩至稀稠膏状，冷却后进行20-40％醇沉，2-8℃静置8-24小时。收集上清液，喷雾干燥，即得当归多糖粗品。将当归多糖粗品用水溶解，浓度为2-6％，用截留分子量为5-10K的超滤膜超滤(MWCO＝5000-10,000)，保留液上SP或CM Sepharose阳离子交换柱，洗脱液为pH5-6，20-100mM的缓冲液(取分析纯的酸及其盐，用水分别配制所需浓度的溶液，按不同比例混合即得)，缓冲液可以选自柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液等。收集流出液2-5个柱体积，用截留分子量为5-10K的超滤膜超滤(MWCO＝5,000-10,000)，保留液上Q或DEAE Sepharose阴离子交换柱，洗脱液为pH5-6，20-100mM的缓冲液(取分析纯的酸及其盐，用水分别配制所需浓度的溶液，按不同比例混合即得)，缓冲液可以选自柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液等。收集流出液2-5个柱体积，用截留分子量为5-10K的超滤膜超滤(MWCO＝5,000-10,000)，保留液经65-85％乙醇沉淀两次，离心，收集沉淀。沉淀加水反溶，浓度为20-30％，喷雾或冷冻干燥，即得含量在80％以上的当归复合多糖。
或收集20-40％醇沉后的上清液，回收乙醇后用截留分子量为5-10K的超滤膜超滤及继续以后的步骤，同样得到当归复合多糖。
本发明还提供了当归复合多糖注射剂的制备方法：取适量的当归复合多糖，不加入或加入一种至多种药学上可以接受的助溶剂、分散剂、载体或赋形剂，混合后制成适当注射剂如粉针(冻干粉针或粉末直接分装)、水针。每个注射剂量单位至少含50mg本发明物。
本发明提供的当归复合多糖用于治疗中性粒细胞减少症、贫血、血小板减少症、病毒感染性疾病、免疫力低下和作为抗癌辅助药。
本发明提供的当归复合多糖在生血和免疫功能影响的体外实验的结果表明，使用当归复合多糖，其浓度在25-400μg/ml时，可有效地刺激用植物血凝素(PHA)活化的人的外周血单核细胞产生白细胞介素6(IL-6)、粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和干扰素-γ(IFN-γ)。使用当归复合多糖，其浓度在31.25-250μg/ml时，可有效地刺激Balb/C小鼠的脾细胞增殖。
生血方面的体内实验结果表明，对接受放疗的Balb/C小鼠使用当归复合多糖，当用药量为50-200mg/kg/d，皮下注射给药，连续使用7天，与生理盐水组比较，白细胞、红细胞、血红蛋白、红细胞压积和血小板的恢复都提前了。进一步的研究表明，给药组小鼠骨髓红系祖细胞、粒、单系祖细胞和巨核造血前体细胞数目增加。对接受化疗的Balb/C小鼠使用当归复合多糖，当用药量为50-200mg/kg/d，皮下注射给药，连续使用7天时，与生理盐水组比较，白细胞、红细胞、血红蛋白、红细胞压积和血小板的恢复也都提前了。
免疫方面的体内实验结果表明：当归复合多糖的用量在25-100mg/kg/d，可有效地刺激接受化疗的Balb/C小鼠脾细胞产生干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)。当归复合多糖还能有效地刺激正常或接受化疗的Balb/C小鼠对牛血清诱导迟发性超敏(DTH)的反应性。
抗病毒的体内实验结果表明：给鸡法氏囊病毒攻毒雏鸡使用当归复合多糖，用量在口服50mg/d或肌注50mg/d时，连续使用5天，持续观察28天。与对照组动物死亡67％相比较，用药组动物100％存活。给犬细小病毒感染和犬瘟症患犬使用当归复合多糖，用量在100-200mg/d时，连续使用3-7天，持续观察28天。与目前临床上采用的常规治疗相比，治愈率明显升高，没有复发的情况。
具体实施方式
实施例1
当归复合多糖的制备
净制当归40kg，加水提取3次，每次加水160kg，提取3.0小时，提取温度为100℃。合并提取液65℃减压浓缩至稀稠膏状，调整体积至20L，静置过夜，加入95％乙醇至终浓度35％，搅拌均匀，4℃放置12小时，5000×g离心10min，收集上清液，喷雾干燥，得当归多糖粗品504g。将当归多糖粗品504g用水溶解，浓度为4％，用截留分子量为10K的超滤膜超滤，保留液体积为8.6L，上200×300mm SPSepharose阳离子交换柱，洗脱液为pH5.2 50mM的乙酸-乙酸钠缓冲液，收集流出液共30L，用截留分子量为5K的超滤膜超滤，得保留液9.0L，保留液上DEAE Sepharose阴离子交换柱，洗脱液为pH5.2，50mM的乙酸-乙酸钠缓冲液，收集流出液共28L，用截留分子量为5K的超滤膜超滤(MWCO＝5,000-8,000)，得保留液5.3L。加入95％乙醇至终浓度70％，4℃放置12小时，5000×g离心10min，收集沉淀。沉淀加水反溶至5.5L，，加入95％乙醇至终浓度70％，4℃放置12小时，5000×g离心5min，收集沉淀。沉淀加水反溶至6L，喷雾干燥，得当归复合多糖精品124g。当归复合多糖含量为97％。
检测结果如下：
1.糖组成(Mol％)
    阿拉伯糖(Ara)     鼠李糖(Rha)   葡萄糖(Glc)
    40.86     5.03   7.99
    半乳糖(Gal)     半乳糖醛酸(GalA)   4-甲基葡萄糖醛酸(4-Me-GluA)
    20.29     23.88   1.94
2.氨基酸组成(mol％)
  羟脯氨酸(Hyp)   丝氨酸(Ser)     苏氨酸(Thr)   谷氨酸(Glu)   甘氨酸(Gly) 天冬氨酸(Asp)
  8.14   6.96     5.36   8.06   8.63 5.04
  丙氨酸(Ala)   脯氨酸(Pro)     胱氨酸(Cys)   酪氨酸(Tyr)   缬氨酸(Val) 甲硫氨酸(Met)
  6.10   3.09     0.06   1.11   2.62 0.19
  亮氨酸(Leu)   苯丙氨酸(Phe)     组氨酸(His)   赖氨酸(Lys)   精氨酸(Arg) 异亮氨酸(Ile)
  1.90   1.24     2.56   7.51   27.92 1.30
  γ-氨基丁酸(γ-ABA)
  2.21
3.蛋白质含量和重均分子量
蛋白质含量：2.56％。
重均分子量：56,703道尔顿
实施例2
当归复合多糖冻干粉针剂的制备
取实施例1所得50g当归复合多糖，用含1.0％氯化钠、0.4‰的吐温-80、pH5.2，50mM的乙酸-乙酸钠缓冲液溶解，调整终体积至2000ml。0.22um滤膜除菌过滤，分装到1000个10ml西林瓶中，冻干即得。
实施例3
当归复合多糖诱导PHA活化的人的外周血单核细胞
生成G-CSF、IL-6和IFN-γ
从健康人全血中分离、洗涤得到人外周血单核细胞，用RPMI-1640培养基调整细胞数到4×106/ml。用RPMI-1640培养基配制不同浓度的实施例1、当归粗多糖(AP)(用现有实验室方法提取、纯化得到的当归粗多糖(AP))(商澎等，第四军医大学学报.2001，22(14)：1311-1314)，和阳性对照药猪苓多糖(连云港东风制药厂)溶液，药物系列为400，200，100，50，25μg/ml，每个浓度做复孔。加入PHA液，终浓度4μg/ml。加入单核细胞悬液，细胞终浓度为2×106/ml。细胞对照孔只加单核细胞悬液和PHA液，培养液对照孔只加RPMI-1640培养基。37℃，5％二氧化碳培养箱培养24小时，离心，收集上清。用相应的ELISA试剂盒分别检测粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、白细胞介素6(IL-6)和干扰素-γ(IFN-γ)的生成量，用加药组产生的细胞因子量/细胞对照组产生的细胞因子量(S/C)表示活性。
下表显示不同浓度的当归复合多糖诱导生成
G-CSF、IL-6和IFN-γ的数量
 分组     实施例1     当归粗多糖(AP)     猪苓多糖
 药物终浓度(μg/ml)     4002001005025     4002001005025     4002001005025
 GC-SF(S/C)     95.635.547.13.12.0     22.413.97.72.01.8     52.423.917.72.81.1
 IL-6(S/C)     70.543.528.63.12.5     39.725.66.02.01.1     41.328.17.72.71.3
 IFN-γ(S/C)     3.12.94.11.41.1     2.02.01.71.01.1     2.42.31.41.01.1
从以上结果可以看出：当归多糖能诱导PHA活化的人的外周血单核细胞生成G-CSF、IL-6和IFN-γ，且生成量与药物浓度呈正相关。当归复合多糖的诱导效果明显优于同等剂量的当归粗多糖(AP)。
实施例4
当归复合多糖刺激Balb/C小鼠脾细胞增殖
制备Balb/C小鼠脾细胞悬液，调整细胞数到2.5×106/ml。配制不同浓度的实施例1、当归粗多糖(AP)和阳性对照药猪苓多糖溶液，药物系列为500，250，125，62.5和31.25μg/ml，每个浓度做复孔。加入脾细胞悬液，细胞终浓度为1.25×106/ml。细胞对照孔只加脾细胞悬液。37℃，5％二氧化碳培养箱培养48小时，每孔加入50μl 0.5μCi的3HTdR，继续培养18小时。用细胞收集器收集细胞，在液闪仪上读取cpm值，用给药组cpm值/细胞对照组cpm值(S/C)表示活性。
下表显示不同浓度的当归复合多糖刺激
小鼠脾细胞增殖的情况
    组别     药物浓度(μg/ml)     cpm     S/C
    实施例1     50025012562.531.25     49405366431030072298     15.116.413.29.27.0
    当归粗多糖(AP)     50025012562.531.25     22361996136510851056     7.16.14.23.33.2
    猪苓多糖     50025012562.531.25     46623420220120221368     14.310.56.76.24.2
从以上结果可以看出：当归复合多糖能刺激Balb/C小鼠脾细胞增殖，生成量与药物浓度呈正相关。且当归复合多糖的效果明显优于等量的当归粗多糖(AP)。
实施例5
当归复合多糖促进接受辐射小鼠骨髓
造血前体细胞的恢复
将雌性Balb/c小鼠(体重18-22g)，随机分为5组，每组10只：第1组：正常对照组。第2组：照射+生理盐水组。第3组：照射+实施例1，用量100mg/kg/d。第4组：.照射+当归粗多糖(AP)，用量100mg/kg/d。第5组.：照射+猪苓多糖，用量200mg/kg/d。
0天除正常对照组外，用全身亚致死量(总量600cGy)X线照射小鼠。从0天开始，各给药组小鼠皮下注射给药，每日一次，连续给药7天。正常对照组0天、照射+生理盐水组0-6天皮下注射等体积的生理盐水。于实验的8、11、16天分批处死小鼠，无菌取股骨，制备骨髓细胞悬液，调整细胞数为1×105/ml，加入培养基，置CO2培养箱，37℃培养6天，计数骨髓粒、单系祖细胞(CFU-GM)。37℃培养7天，计数骨髓红系爆增式集落形成细胞(BFU-E)。37℃培养8天，计数骨髓巨核造血前体细胞(CFU-MEG)。
下表显示当归复合多糖促进接受辐射小鼠骨髓
造血前体细胞的恢复
分组 正常对照组  生理盐水组  猪苓多糖组  实施例1组  当归粗多糖组(AP)
CFU-GM/Femur(股骨)第8天第11天第16天 18102±1567***8982±1526***10603±890*** 13±150360±111 451±24***102±39**1570±357*** 512±76***183±24**2090±347*** 5±1095±53*334±100
BFU-E/Femur(股骨)第8天第11天第16天 16791±3426***7271±514***10592±362*** 26±158±15676±163 18±1025±16874±198 444±85***369±101***1269±121** 144±15***68±28**335±118*
CFU-MEG/Femur(股骨)第8天第11天第16天 9750±1246***3527±586***6590±1009*** 26±1811±15122±39 30±1259±48145±76 90±45*61±47522±192** 8±526±27139±65
备注：各组与生理盐水组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001。
从以上结果可以看出：当归复合多糖可促进接受辐射小鼠的骨髓粒-单系祖细胞、红系祖细胞、巨核造血前体细胞的恢复，当归粗多糖(AP)只能促进前两种骨髓细胞的恢复，且效果弱于当归复合多糖。
实施例6
当归复合多糖促进接受放疗小鼠外周血象的恢复
Balb/c雌性小鼠，体重18-22g，随机分组，每组15只。试药分为4组：第1组为实施例1，用量为50mg/kg/d。第2组为实施例1，用量为200mg/kg/d。第3组为当归粗多糖(AP)，用量为200mg/kg/d。第4组为猪苓多糖，用量为200mg/kg/d。第5组为生理盐水组。第6组为正常对照组。
1-5组小鼠在0天接受X射线照射，照射总量为550cGy。从照射当日开始皮下注射给药，每天一次，连续用药一周。第7、10、14、17、21、24日分别取尾静脉血，计数外周血白细胞(WBC)，红细胞(RBC)，血红蛋白(Hb)，红细胞压积(HCT)和血小板(PLT)。
外周血WBC(×109/L)的变化
Figure A20061000721400151
外周血RBC(×1012/L)的变化
Figure A20061000721400152
外周血Hb(g/L)的变化
Figure A20061000721400153
外周血HCT(％)的变化
Figure A20061000721400161
外周血PLT(×109/L)的变化
Figure A20061000721400162
备注：各组与生理盐水组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001。
从以上结果可以看出：当归复合多糖的用量在50-200mg/kg/d时，可以促进接受放疗小鼠外周血RBC，Hb，HCT，PLT和WBC的恢复，且恢复的情况与用药量呈正相关。当归粗多糖(AP)不能促进PLT的恢复，且效果差于同等剂量的当归复合多糖。
实施例7
当归复合多糖促进化疗小鼠外周血象的恢复
Balb/c雌性小鼠，体重18-22g，随机分组，每组15只。试药分为4组：第1组为实施例1，用量为50mg/kg/d。第2组为实施例1，用量为200mg/kg/d。第3组为当归粗多糖(AP)，用量为200mg/kg/d。第4组为猪苓多糖，用量为200mg/kg/d。第5组为生理盐水组。第6组为正常对照组。
1-5组小鼠在-1，0天接受丝裂霉素，尾静脉给药，给药剂量为3mg/kg/d。化疗当日开始皮下注射给药，每天一次，连续用药7天。第2、5、7、9、12、14、16、19、22日分别尾静脉采血1次，计数外周血白细胞(WBC)，红细胞(RBC)，血红蛋白(Hb)，红细胞压积(HCT)和血小板(PLT)。
外周血WBC(×109/L)的变化
外周血RBC(×1012/L)的变化
Figure A20061000721400172
外周血Hb(g/L)的变化
Figure A20061000721400173
外周血HCT(％)的变化
外周血PLT(×109/L)的变化
Figure A20061000721400182
备注：各组与生理盐水组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001。
从以上结果可以看出：当归复合多糖的用量在50-200mg/kg/d时，可以促进接受放疗小鼠外周血RBC，Hb，HCT，PLT和WBC的恢复，且恢复的情况与用药量呈正相关。当归粗多糖(AP)不能促进PLT的恢复的作用，且效果差于同等剂量的当归复合多糖。
实施例8
当归复合多糖刺激免疫功能低下的Balb/c
小鼠脾细胞分泌IFN-γ
Balb/c雌性小鼠，体重18-22g，随机分组，每组10只。试药分为4组：第1组为实施例1，用量为25mg/kg/d。第2组为实施例1，用量为100mg/kg/d。第3组为当归粗多糖(AP)，用量为100mg/kg/d。第4组为胸腺肽，用量为5mg/kg/d。第5组为生理盐水组。第6组为正常对照组。
从第1天起，1-5组皮下注射给药，连续给7天。第4天，除正常对照组外，各组腹腔注射环磷酰胺1次，剂量为200mg/kg。第11天处死小鼠，制备脾细胞悬液，调整细胞数为2×106/ml，每孔加入1ml，做复孔。加入ConA至终浓度2.5μg/ml，无ConA者为对照。在5％二氧化碳孵箱，37℃孵育48小时。离心，收集上清液，用ELISA法检测细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)的含量。
下表显示当归复合多糖刺激免疫功能低下
Balb/c小鼠脾细胞分泌IFN-γ
    分组     IFN-γ(pg/ml)     X±SD     P
    正常对照组     13561.5 14580   14793     14311.67±658.29    《0.001
    生理盐水组     2958    3014    3500     3157.33±298.01
    胸腺肽组(5mg/kg)     9851    8279    8038     8723±984.68     ＜0.001
    实施例1(25mg/kg)     4860    4915    5140     4971.83±148.16     ＜0.001
    实施例1(100mg/kg)     6258    6067    6017     6114.33±127.28     ＜0.001
    当归粗多糖(AP)100mg/kg     4512    4002    3912     4145±320.40     ＜0.05
备注：各组与生理盐水组比较。
从以上结果可以看出：当归复合多糖的用量在25-100mg/kg/d时，可以刺激免疫功能低下小鼠脾细胞分泌IFN-γ。且生成量与用药量呈正相关。当归粗多糖(AP)的效果弱于同等剂量的当归复合多糖。
实施例9
当归复合多糖对鸡法氏囊病毒的体内抗病毒作用
4周龄雏鸡，体重200-250g，经鸡法氏囊病毒攻毒后随机分为3组，每组25只，雌雄各半。第1组：对照组，不给药。第2组：口服给药组，实施例1加入饮水中，50mg/天。连续给药5天。第3组，肌肉注射给药组，实施例1用量为50mg/天，注射总体积为1ml。连续给药5天。连续2周观察用药组和对照组动物的死亡情况。实验期间，死亡动物需取出法氏囊，称重。第14天，处死所有存活动物，取出法氏囊，称重。
下表显示第14天用药组和对照组动物的一般状态，
死亡率和法氏囊重量
    组别   一般状态     死亡率     法氏囊重量
    对照组   消瘦，生长缓慢     67％     4.5-6.4g
    口服给药组   良好，体重增加     0     1-2g
    注射给药组   良好，体重增加     0     1-2g
从以上结果可以看出：口服或肌肉注射给予当归复合多糖，用量在50mg/天时，可以明显减轻鸡法氏囊的感染和病变，防止鸡法氏囊病毒攻毒动物的死亡。
实施例10
当归复合多糖在临床上对犬瘟热和
犬细小病毒感染的疗效
实验共分4组。第1组：临床确诊为犬细小病毒感染的小型犬41只，体重1500-4000g，静脉给实施例1。体重1000-2000g的动物100mg/d，体重＞2000g的动物200mg/d，每天1次，连续用药3-7天。第2组：临床确诊为犬细小病毒感染的小型犬20只，体重1000-4600g，按常规疗法治疗，作为对照。第3组：临床确诊为犬瘟热的小型犬47只，体重1000-5000g，静脉给实施例1，用法同上。连续用药3-7天。第4组：临床确诊为犬瘟热的小型犬28只，体重1000-5000g，按常规疗法治疗，作为对照。观察动物的治愈情况和死亡情况，随访至4周，了解有无复发。
下表显示不同时间段各组动物的死亡情况和疾病复发情况
    组别     3天死亡率/复发率     7天死亡率/复发率     28天死亡率/复发率
    1     10％/0     15％/0     15％/0
    2     30％/0     55％/0     55％/15％
    3     20％/0     26％/0     26％/0
    4     34％/0     48％/0     52％/18％
犬瘟热和犬细小病毒感染是两种严重的动物传染性疾病，不经治疗死亡率＞95％。当归复合多糖用量在100-200mg/d时，与目前临床采用的治疗方案比较，患病动物的死亡率低，治愈动物在28天内没有复发。
根据以上结果可以将当归复合多糖用于治疗中性粒细胞减少症、贫血、血小板减少症、免疫力低下、病毒感染性疾病和作为抗癌辅助药。

Claims (10)

1.一种从中药材当归(Angelica Sinensis(Oliv)Diels)的干燥根中提取、分离、纯化得到的当归复合多糖。
2.权利要求1所述的当归复合多糖的重均分子量为20,000-80,000道尔顿。
3.权利要求1和2所述的当归复合多糖，其特征在于此复合多糖主要由半乳醛酸聚糖，鼠李半乳醛酸聚糖，阿拉伯半乳聚糖蛋白和α-葡聚糖组成。其特点为：1.多糖百分含量∶蛋白百分含量＝95-99％∶1-5％。2.糖组成：主要由阿拉伯糖(35-45％)，半乳糖醛酸(20-28％)，半乳糖(18-25％)，葡萄糖(5-15％)，鼠李糖(3-8％)，4-甲基葡萄糖醛酸(1-5％)组成。3.糖苷键链接：阿拉伯糖主要以α-3位，α-5位，α末端和α-3，5位糖苷键相连接。半乳糖醛酸主要以α-4位糖苷键相连接。半乳糖主要以α-3位，α-6位和α-3，6位糖苷键相连接。葡萄糖主要以α-4位，α-6位和α-4，6位糖苷键相连接。鼠李糖主要以α-2位和α-2，4位糖苷键相连接。4-甲基葡萄糖醛酸主要以α-4位和末端相连接。4.氨基酸组成：由19种不同的氨基酸组成，其中，精氨酸，丝氨酸，谷氨酸，甘氨酸，丙氨酸，赖氨酸和羟脯氨酸含量较高，占氨基酸总量的65-75％。5.重均分子量：20,000-80,000道尔顿。6.其它：为白色或类白色粉末，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。水溶液pH为4-6，呈弱酸性。
4.权利要求1至3所述的当归复合多糖，含量＞80％。
5.权利要求1至4所述的当归复合多糖的提取、分离、纯化方法，其特征在于包括以下步骤当归干燥根水提或用0.2-0.6M磷酸二氢钾或磷酸二氢钠提取，提取温度为50-105℃。20-40％乙醇沉淀，收集上清液，用截留分子量为5-10K的超滤膜超滤，保留液经过阳离子交换柱和阴离子交换柱，用pH5-6、20-100mM的缓冲液洗脱，收集流出液2-5个柱体积，流出液经过截留分子量为5-10K的超滤膜超滤，超滤后所得保留液经65-85％的乙醇沉淀两次，所得沉淀物即为所述的当归复合多糖。
6.权利要求5所述的方法，其特征在于在制备过程中所用的离子交换树脂为SP、CM Sepharose阳离子和Q、DEAE Sepharose阴离子交换树脂。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：在经过2次65-85％醇沉过程制备得到当归复合多糖沉淀后，加水将沉淀溶解，经喷雾或冷冻干燥得到精制的当归复合多糖。
8.含有根据权利要求1-7中任一权利要求所述的当归复合多糖注射剂，包括水针，粉针(冻干粉针或粉末直接分装)。是由所述的当归复合多糖不加入或加入一种至多种药学可以接受的辅料制成，每个注射剂量单位中至少含当归复合多糖50mg。
9.根据权利要求1-7中任一权利要求所述的当归复合多糖在制备治疗中性粒细胞减少症、贫血、血小板减少症、免疫力低下、病毒感染性疾病和抗癌辅助药物中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于所述的抗癌辅助药物为放、化疗辅助用药。所述的病毒感染性疾病为鸡法氏囊病毒、犬细小病毒感染引起的疾病和犬瘟病。所述的免疫力低下包括人或动物罹患各种感染或非感染性疾病、药物治疗、环境污染、辐射、过度疲劳、饮食不当、精神紧张等诸多原因引起。
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