CN100538360C - 良性前列腺增生(bph)的人蛋白标记 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种诊断受试者是否患有良性前列腺增生(BPH)的方法，该方法包括从受试者获取前列腺液样品、以及分析该前列腺液样品以检测BPH蛋白标记存在与否从而确定受试者是否患有BPH。本发明进一步提供了一种诊断受试者是否患有良性前列腺增生(BPH)的方法，该方法包括从受试者获取血清样品、以及分析该血清样品以检测BPH蛋白标记存在与否从而确定受试者是否患有BPH。最后，本发明提供一种含有BPH蛋白标记与使用说明书的用于检测良性前列腺增生(BPH)标记的诊断试剂盒。
Description
本申请要求于2003年7月8日提交的美国临时申请No.60/485,653以及于2003年8月27日提交的美国临时申请No.60/498,623的优先权，它们的内容并入本申请作为参照。
在本申请中，通过在括号中标注作者及日期的方式引用了多个出版物。所述出版物的完整引述列于说明书的最后、权利要求之前。这些出版物的完整内容并入本申请作为参照，以期更完整地公开在此所描述和请求保护的申请的申请日前本领域的现有技术。
技术领域
本发明涉及用于检测良性前列腺增生(BPH)的新的蛋白标记以及检测BPH的方法。
发明背景
良性前列腺增生(BPH)是一种常见的、与日益增长的年龄相关的前列腺紊乱。很高比例的年龄超过50岁的男性(68％)具有良性前列腺增生的组织学证据，截至70岁，百分之四十三(43％)的男性具有临床上明显的前列腺增大。该疾病的特征是前列腺的尿道周围与过渡区域处的腺体及肌纤维组织逐渐增大，从而导致膀胱出口梗阻的症状。仅仅在美国，每年为BPH要进行350,000至400,000例手术，这使得它成为美国最常见的治疗，总花费达45亿美元。BPH的发病率远高于前列腺癌，但对其病因几乎没有什么了解。不过，普遍认为高龄男性中睾酮与雌激素之间平衡的细微变化可能会引发前列腺的生长，从而导致BPH。良性(或恶性)疾病引起的前列腺肿大一般导致前列腺部尿道顺应性降低并增加膀胱出口梗阻。结果经常在膀胱中发生次级变化。这些变化包括膀胱壁肥大以及小梁与憩室的形成。逼肌的次级变化主要是与前列腺梗阻、遗尿、尿频尿急相关的最为棘手的症状相关。根本的机制仍然具有争论，但可能同梗阻膀胱中逼肌发育不稳定有部分关联。
导致膀胱出口梗阻的BPH传统上通过经尿道前列腺切除术(TURP)来治疗。尽管TURP被认为是BPH外科处理中的黄金标准，但存在高频率的并发症。例如，70％的切除案例受到不同程度的逆行性射精的困扰，1-2％导致尿失禁。作为选择，BPH可以通过施用诸如α-受体阻滞剂这类药物或者通过使用非那雄胺(Proscar)阻滞睾酮对前列腺的活性来进行治疗。后一种药物是通过抑制5-α还原酶的活性阻止睾酮转变为前列腺中的活性形式DHT来发挥作用的。利用这种手段，可以阻止前列腺受到男性激素的刺激，防止其进一步生长，这样来预防临床BPH的发展。然而，在长至可检测的大小或者发展至需要进行外科手术的症状之前，尚无可靠的标记来检测BPH。而到了可检测的时候，在绝大多数情况下，膀胱逼肌已经被损害，其中相当数量即便在TURP后也无法获得改善。现有的那些众所周知的标记——前列腺酸性磷酸酶(PAP)及前列腺特异抗原(PSA)，尽管可用于检测前列腺癌，但在BPH早期检测方面并不是非常有用。PSA是当前最好的最有用处的用于检测前列腺癌的标记。不过，由于BPH与前列腺癌在PSA水平上有很大重叠，在那些两可病例中尤为如此(PSA水平范围为4-10ng/ml)，因此无法精确区分BPH与前列腺癌。已经尝试通过测量游离PSA(PSA没有与蛋白酶抑制剂结合)与总PSA(游离PSA加上与α-1-抗糜蛋白酶[ACT]结合的PSA)的比例，或者联合PSA与hK2，来改善两可区域诊断的精确度。不过，相当数量的受试者仍然被错误分类。
近来全世界几个实验室进行了一些尝试，其焦点是用于BPH的特异性标记。Mikolajczyk与其同事已报道来自BPH病人前列腺组织过渡区域的一种游离PSA修饰形式有所升高，他们称之为BPSA(BPH相关PSA)。
他们进一步报道了在精浆中存在BPSA。BPSA用作BPH标记的潜力正在积极探索中。目前对前列腺癌发生的研究证实通过皮下注射睾酮(T)及苯甲雌二醇(E2)可轻易诱发前列腺癌。这与分泌蛋白谱的并发变化、许多多肽生长因子的改变表达、间质平滑肌紊乱以及包括在动物模型的前列腺癌及人前列腺癌的发育及发展过程中Id-1基因过量表达在内的差异基因表达相关联。通过将Id-1基因转然已知的人前列腺癌细胞系LNCaP中对该基因的功能进行了广泛研究，发现它通过灭活p161NK4a/RB可在无血清培养基中刺激癌细胞增殖，其中包括激活MAPK及NF-KB途径。通过使用激素诱发的前列腺癌Noble大鼠模型，发现施用激素胶囊后2-3个月在前列腺中首先检测到发育异常。发育异常/癌的发展与一种新的分泌蛋白，与人激肽释放酶2(hK2)同源并且是前列腺特异抗原(PSA)基因家族成员的一种的激肽释放酶样蛋白的出现同时发生。尽管PSA(hK3)在前列腺癌诊断方面有用，但它并不是肿瘤特异性的。为了找到更好且更特异的用于前列腺癌的肿瘤标记进行了全球范围的广泛检索，其中hK2是候选之一，因为它的水平与前列腺癌更直接线性相关，表现出了更多的肿瘤特异性。目前的研究表明在人BPH中，分泌蛋白谱有相类似的改变，其中可能会分泌能够在前列腺分泌物和/或血清中可检测的特异蛋白。
发明概述
本发明提供了一种诊断受试者是否患有良性前列腺增生(BPH)的方法，该方法包括从受试者获取前列腺液样品、以及分析该前列腺液样品以检测BPH蛋白标记存在与否从而确定受试者是否患有BPH。
本发明进一步提供了一种诊断受试者是否患有良性前列腺增生(BPH)的方法，该方法包括从受试者获取血清样品、以及分析该血清样品以检测BPH蛋白标记存在与否从而确定受试者是否患有BPH。
最后，本发明提供一种含有BPH蛋白标记与使用说明书的用于检测良性前列腺增生(BPH)标记的诊断试剂盒，以及含有针对PSP61、lwPSA及αs1-酪蛋白的抗体与使用说明书的用于检测良性前列腺增生(BPH)标记的诊断试剂盒。
附图的简要描述
图1是BPH及非BPH对照的人前列腺液(EPS)中分泌蛋白的双向电泳分析。根据等电点(pI，pH3-10)及分子量分离200μg蛋白，凝胶用银染来处理。所示的是来自年轻组(A)、同龄对照组(B)及BPH患者(C)的具有代表性的凝胶。箭头指示仅在BPH样品中存在的(斑点1-3)、在BPH中高表达的(斑点4)以及在BPH及正常对照中均表达的(斑点或者斑痕5-8)蛋白斑。
图2所示的是经ESI-MS/MS后斑点1(PSP94的同种异型，[iPSP94]，即PSP61)的谱图。图表顶部所示的是MS/MS离子，图表底部包含MasEnt43谱图。
图3是经ESI-MS/MS后斑点1(iPSP94，[即PSP61])的片段序列，通过数据库检索后确认为PSP94，但其仅有61氨基酸，因此为PSP61。
图4所示的是经ESI-MS/MS后斑点2(血清白蛋白)的谱图。图表顶部所示的是MS/MS离子，图表底部包含MasEnt43谱图。
图5是经ESI-MS/MS后斑点2(血清白蛋白)的片段序列，图表顶部所示的是MS/MS离子，图表底部包含MasEnt43谱图。
图6是斑点3的片段序列，经ESI-MS/MS后低分子量PSA(lwPSA)。
图7是斑点3中αs1-酪蛋白的谱图。图表顶部所示的是MS/MS离子，图表底部包含MasEnt43谱图。
图8为斑点3中αs1-酪蛋白的片段序列。
图9是经MALDI-MS后斑点5中多肽的谱图。谱图是在反射模式、质量范围为600-3400Da的条件下获得的。所提取多肽的谱图经数据库检索后鉴定为锌-α-2-糖蛋白。
图10是经MALDI-MS后斑点6中多肽的谱图。谱图是在反射模式、质量范围为600-3400Da的条件下获得的。所提取多肽的谱图经数据库检索后鉴定为微精浆蛋白(microseminoprotein)(PSP94)。
图11是经MALDI-MS后斑点8中多肽的谱图。谱图是在反射模式、质量范围为600-3400Da的条件下获得的。所提取多肽的谱图经数据库检索后鉴定为前列腺酸性磷酸酶(PAP)。
图12是经MALDI-MS后斑点4(乳铁传递蛋白)的谱图。图表顶部所示的是MS/MS离子，图表底部包含MasEnt43谱图。
图13经ESI-MS/MS后斑点4(乳铁传递蛋白)的片段序列，通过数据库检索后确认为乳铁传递蛋白。
图14所示的是在人正常前列腺、BPH及前列腺癌样品中αs1-酪蛋白的免疫染色(A×100；B×200；C、D、E、F，×400)。
(A)在正常前列腺中没有观察到αs1-酪蛋白染色。
(B)在BPH样品中没有观察到β-酪蛋白染色。
(C)，(D)这两张显微照片表明BPH中αs1-酪蛋白染色，+++(C和D)表示强度。可观察到上皮细胞细胞质和前列腺分泌物中均观察到αs1-酪蛋白。
(E)这张显微照片表明充分分化的前列腺癌(Gleason grade 2-3)的典型免疫活性，强度为+。
(F)欠分化的前列腺癌(Gleason grade 4-5)表现出αs1-酪蛋白染色阴性。
图15是在人正常前列腺、BPH及前列腺癌中αs1-酪蛋白的免疫反应性。所有正常前列腺与70％的前列腺癌样品的αs1-酪蛋白反应为阴性。仅30％的前列腺癌样品分别表现出轻度至中等的αs1-酪蛋白免疫反应性。相反，91％的BPH样品表现出中等至强烈的αs1-酪蛋白免疫反应性，其中36％为++并且55％为+++水平。
发明的详细描述
定义
在本申请的用法中，其中如果没有另外特别说明，下述每个术语均为下文所阐述的意思。
在本文用法中，“受试者”可以是诸如灵长类、小鼠、大鼠、豚鼠或者兔子等任何动物。在优选实施例中，受试者是人。
在本文用法中，“蛋白标记”指所发现的蛋白其水平与模式癌症相关。“BPH蛋白标记”是其水平与BPH诊断相关的蛋白。
发明的实施例
本发明提供了一种诊断受试者是否患有良性前列腺增生(BPH)的方法，该方法包括从受试者获取前列腺液样品、以及分析该前列腺液样品以检测BPH蛋白标记存在与否从而确定受试者是否患有BPH。在优选实施例中，受试者为人类男性。通过直肠途径手指挤压病人的前列腺可获得分泌的前列腺液样品。在一个实施例中，使用双向电泳法与质谱分析来检测标记蛋白。针对这些标记蛋白的特异的抗血清增加了。可以使用针对蛋白标记的抗体来检测蛋白标记。在优选实施例中，蛋白标记包括PSP61、lwPSA或者αs1-酪蛋白。
本发明进一步提供了一种诊断受试者是否患有良性前列腺增生(BPH)的方法，该方法包括从受试者获取血清样品、以及分析该血清样品以检测BPH蛋白标记存在与否从而确定受试者是否患有BPH。在优选实施例中，受试者为人类男性，蛋白标记包括PSP61、lwPSA或者αs1-酪蛋白。在另一个实施例中，可以应用使用抗体的免疫放射分析来检测蛋白标记。这些抗体可以是针对PSP61、lwPSA或者αs1-酪蛋白的单克隆抗体。
本发明进一步提供一种用于检测良性前列腺增生(BPH)标记的诊断试剂盒。在一个实施例中，该诊断试剂盒含有BPH蛋白标记与使用说明书。在另一个实施例中，用于检测良性前列腺增生(BPH)的诊断试剂盒包括针对PSP61、lwPSA或者αs1-酪蛋白的抗体以及使用说明书。在一个实施例中，抗体是单克隆抗体。在另一个实施例中，抗体吸附在某种基质上。
下述的实验细节用以说明如何实施本发明，其不应被视为以任何形式限制了本发明。
实验细节
已经进行了广泛研究用以分析通过直肠指检(DRE)直接挤压前列腺所获得的前列腺分泌物。已知通过以上过程收集的分泌物为前列腺液(EPSs)。正常人前列腺(年轻组及同龄对照组)与BPH的EPS样品分别与蛋白酶抑制剂混合，冷冻条件下储存备用。通过双向电泳对正常前列腺及BPH的EPS进行的比较分析表明，在BPH分泌物中有多种蛋白被差异表达。特别地，仅仅在BPH样品中发现了称为斑点1、2和3的三个主要斑点，而在正常/同龄样品中则完全缺失或者以极低以至无法检测的水平表达(图1)。尽管还有其它的差异表达的斑点(即，斑点4等)，但目前关注的焦点仍然是这三个主要斑点(斑点1-3)。利用质谱检测以及mass sequencing(在悉尼Macquarie大学澳大利亚蛋白质组分析研究组[APAF]的协助下)对这些差异表达的斑点进行分析，表明斑点1为PSP94的“同种异型物”(iPSP94；MW 14kDa，pI4.5)或者是β-微精浆蛋白——即已知的类抑制素多肽(3-抑制素)。我们进一步鉴定了该蛋白，发现该蛋白实际上含有61个氨基酸(而非PSP94的94个氨基酸)(参见图2和3)，因此应该更确切的称之为PSP61。斑点2(MW为9kDa，pI5-5.5)被证实为血清白蛋白(图4、5)，而斑点3(MW 1okDa，pI8.5-9.3)含有两种蛋白：一种是低分子量的PSA(lwPSA)(图6)，另一种为αs1-酪蛋白(图7、8)。
为了检验实验的有效性和可靠性，对在正常、同龄对照及BPH样品中均存在的几个主要蛋白斑点进行了分析。例如，斑点5为锌-α-2-糖蛋白(图9)，斑点6至8分别为PSP94(图10)、PSA[数据未列出，由Western blotting证实]及前列腺酸性磷酸酶[PAP](图11)。进一步注明斑点4实际上是乳铁传递蛋白(图12、13)。已经证实这些蛋白可以同特异的抗血清作用，而且它们曾被报道为前列腺的分泌成分。
在本研究中，使用了年轻成年男性(40岁以下)的EPS样品与同龄未患有BPH的EPS。来自已确认患有前列腺癌的病人的EPSs没有包括在内，原因是因为绝大多数患有前列腺癌的病人其BPH程度总是变化的。因此，如果包括来自前列腺癌病人的EPSs只会多余地在初期搞乱BPH信号。三个前列腺癌细胞系，LNCaP(PSA+)、PC3(PSA-)及DU145(PSA-)的上清，经双向电泳分析后发现，LNCaP(连同其它两个细胞系)对于lwPSA是阴性的，在所有三个细胞系中没有或者仅仅是痕量PSP94被检出。在人体中，已报道PSP94在前列腺癌中被下调。这有助于支持我们的假设——lwPSA与PSP94及PSP61在前列腺癌细胞中不在任何重要途径中表达。
I BPH分泌物中特异性标记蛋白的鉴定及特征
A.收集前列腺分泌物
从10名年龄为40岁或以下(正常)的男性、50岁同龄对照及50名年龄在60-70岁之间并确诊患有BPH的男性中收集前列腺液(EPSs)。在着手进行任何治疗方案之前，从正常组、同龄对照组(未患有BPH)与BPH病人(已确诊)中获得EPS样品(每份约1ml)，分别与蛋白酶抑制剂混合，冷冻条件下(-80℃)储存备用。它们分别称作非BPH(正常的与同龄对照)及BPH-EPS(BPH)。
B.双向凝胶电泳
采用根据Wilkins等编辑的书所述的方案(31)总结在下面几个段落中，使用IPGphor Isoelectric Focusing System与垂直SDS-PAGE，对来自正常组、同龄对照组及BPH病人的EPS进行双向凝胶电泳。
1.第一向——等电聚焦(IEF)
使用固定pH梯度(IPG)胶条(Amersham Pharmacia Biotech)进行等电聚焦。将5μl EPS溶解或稀释在250μl再水化液(8M尿素，2％ CHAPS，0.5％ IPG缓冲液)中，含有样品的水化液加入到IPG胶条中，使其再水化14h。EPS样品在从100V(2h)、500V(1h)1000V(1h)至8000V(4h)逐渐增高的电压下进行电泳。在第一向IEF中，蛋白根据其pH值进行分离。
2.第二向——SDS-PAGE
在平衡缓冲液(50mM Tris-Cl，6M尿素，30％甘油，2％ SDS，DTT 10mg/ml或者碘乙酰胺25mg/ml，以及示踪染料)中平衡IPG胶条30分钟。随后，将IPG胶条置于垂直SDS-PAGE体系(Hoefer SE600)中，根据分子量通过电泳来分离蛋白。所获得的凝胶利用银染试剂盒(Amersham)进行银染。在ImageMaster 2D Elite凝胶分析软件(Amersham)的协助下对来自年轻组和同龄对照组及BPH组的EPS的双向凝胶进行比较，以显示差异表达蛋白概况。
C.质谱分析
Young CYF，Seay T，HigenK，Charlesworth MC，RochePC，Klee GG，Tindall D，Prostate[Suppl]7：17-24(1996)中所述的实验步骤如下。
1.衬质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)方法
为了进行质谱分析，电泳图可用银或考马斯亮蓝来染色。确定双向凝胶上差异表达的蛋白斑点，切下用于质谱分析。在质谱分析中，我们请求澳大利亚蛋白质组分析研究组(APAF)给予协助。使用的是MALDI-MS方法。所分离的蛋白斑点首先于37C进行胶内胰蛋白酶切。所获得的多肽使用10％乙腈、1％ TFA溶液从胶中提取，用ZipTip进行纯化。多肽从基质上洗脱，置于MALDI靶上并风干。然后使用一台Micromass ToF Spec 2E飞行时间质谱学进行MALDI-MS。使用氮激光器(337nm)照射样品，通过反射模式在600-3400Da的质量范围获得谱图。利用近点校正，可以给出典型的～100ppm或者更低的质量精度。然后可获得来自样品多肽的单一同位素峰列表(图10-12)。用Peptldent对SWISS-PROT和TREMBL中智人(Homo sapiens)的肽质指纹图谱进行检索。这可以基于肽指纹给出最相似的候选蛋白。
2.电喷雾离子化质谱/Mass Sequencing(ESI-MS/MS)
差异表达的蛋白斑点的性质进一步通过ESI-MS/MS来确认。经16h胰蛋白酶消化后，所获得的多肽使用ZipTip纯化以浓缩并除去盐分。利用配备纳米喷雾源(nanospray source)的Micromass Q-TOF MS通过ESI-TOF MS/MS分析样品，使用硼硅酸毛细管手动获得数据。获取m/z范围超过400-1800的数据，以选取用于MS/MS分析的多肽。选定多肽后，将机器调节到质谱/Mass Sequence模式，在多种碰撞能量设置下收集m/z范围50-2000的数据。生成多肽片段及片段离子(Y系列离子用于所关注多肽的测序)的谱图。通过这些收集的数据，可以确定所关注多肽的氨基酸序列。基于所选取多肽的氨基酸序列数据，可以确定最可能的蛋白。
II 特异标记蛋白的细胞来源
通过双向电泳和质谱对这些差异表达蛋白的性质进行了鉴定，使用免疫组织化学和原位杂交方法对三个特异蛋白的细胞来源进行检测，并评估这些蛋白标记在BPH中的特异性。
A.抗血清的生成
为了确定这些蛋白的细胞来源，生成了针对这些蛋白的抗血清。为了实现这个步骤，采用了Alpha Diagnostic International，SanAntonio，TX，USA的服务，在基于标记蛋白通过大量测序所确定的已知氨基酸序列的基础上生成特异性针对这些蛋白的抗体。
B.免疫组织化学(IHC)
抗血清的特异性首先针对相应差异表达的蛋白斑点进行确认。然后将这些抗血清用于正常人前列腺、同龄对照组、BPH组及前列腺癌样品的IHC。结果表明BPH的前列腺上皮细胞对这些标记蛋白表现出阳性反应，而基质组织则是阴性的(图14、15)。这表明特异性的标记蛋白是由BPH上皮细胞分泌的。
III.蛋白标记的检测
最后阶段就是检测PSP61、lwPSA及αs1-酪蛋白是否存在于BPH病人的血清中，以开发出一种通过检测血清中是否存在这些蛋白来诊断BPH的方法，并特别在临界情形下评估新发现的标记与PSA水平的相关性。
A.简介
由于血检是最便利的临床检测方法之一，因此本计划的最后一步就是检测这三个蛋白能否在BPH病人的血液中检出，以及它们是否是BPH病人所特有的。同时也将检验PSA水平，并研究PSA水平与这三个蛋白水平之间的关联。我们预测结果对PSA与PSP94将会是阳性的，因为已知它们是存在于血清中。预计这些分子的变体(即PSP61、lwPSA及αs1-酪蛋白)也将会进入血液，因此能够在血清中检出。一旦获得确认，这将被证明在临床症状尚未出现前的早期BPH诊断中是非常有用的。然后可以考虑生产检验试剂盒。
B.收集用于化验的血液
从新近被诊断患有BPH的100个病人中按标准方式收集静脉血(20ml)。为了进行比较，还收集了20个正常男子(年龄40岁以下)与50个同龄对照的血液。此外，为了进行比较，从50个PSA水平范围在4-10nm/ml的病人中收集血液样品。样品在室温下放置1小时，然后在3500rpm离心10分钟，使血清与其它血液组分分离。之后将样品保存在20℃备用。
C.确定PSP61、lwPSA及αs1-酪蛋白血清浓度
通过免疫反射分析(Tandem-R PSA，Hybritech，Inc.)或者Labrie等描述的方法(34)对样品进行分析，用于不含PSA的常规血清及总PSA的检验。对这些方法通过使用所生成的特异的单克隆抗体(即lwPSA、PSP61及αs1-酪蛋白)来代替原始抗体进行了调整，用来检验血清lwPSA、PSP61及αs1-酪蛋白。所获得的数据同常规PSA或PSP94的数据进行比较。一旦确立了检验方法，便可进行大规模的血清检查以确定这些蛋白作为BPH标记的特异性。
D.特异性BPH标记的水平与特别涉及PSA水平临界高度(即，4-10ng/ml)的血清PSA水平的关系
评估所有确诊为BPH的病人(100)的PSA水平，并比较这些PSA水平与本研究中确定的BPH标记。对PSA水平为临界高度的病人体内的BPH特异标记，也通过确定其特异BPH标记(即PSP61、lwPSA及αs1-酪蛋白)的血清水平来进行了评估。通过比较BPH病人中PSA水平与特异BPH标记以及血清PSA为临界高度的患者中的这些标记，可以确定后者是否患有前列腺癌。PSA(临界高度)与特异标记同时升高的病人可能仅患有BPH。在另一方面，特异BPH标记降低或者为无法检测水平的病人更可能患有前列腺癌。
下列参考文献在本说明书种引用。这些参考文献的全部内容作为背景和现有技术引入本发明。
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Claims (14)
1.良性前列腺增生蛋白标记在制备确定受试者是否患有良性前列腺增生的试剂中的用途，其中良性前列腺增生蛋白标记为αs1-酪蛋白。
2.针对良性前列腺增生蛋白标记的抗体在制备确定受试者是否患有良性前列腺增生的试剂中的用途，其中良性前列腺增生蛋白标记为αs1-酪蛋白。
3.根据权利要求2中的用途，其中，所述的抗体是单克隆抗体。
4.根据权利要求2中的的用途，其中，所述的抗体吸附在基质上。
5.一种用于检测良性前列腺增生的诊断试剂盒，其包含良性前列腺增生蛋白标记与使用说明书，其中所述的良性前列腺增生标记为αs1-酪蛋白。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其中，所述的使用说明书中给出了一种诊断受试者是否患有良性前列腺增生的方法，该方法包括：(a)从受试者获取前列腺液样品，以及(b)分析该样品以检测良性前列腺增生蛋白标记存在与否，从而确定受试者是否患有良性前列腺增生。
7.如权利要求5所述的试剂盒，其中，所述的使用说明书中给出了一种诊断受试者是否患有良性前列腺增生的方法，该方法包括：(a)从受试者获取血清样品，以及(b)分析该血清样品以检测良性前列腺增生蛋白标记存在与否，从而确定受试者是否患有良性前列腺增生。
8.根据权利要求5-7中任一项的诊断试剂盒，其中受试者为人类男性，所述样品通过挤压其前列腺获得。
9.根据权利要求5-7中任一项所述的试剂盒，其中所述的前列腺液样品通过2-D凝胶电泳和质谱分析。
10.根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其中良性前列腺增生蛋白标记使用针对良性前列腺增生蛋白标记的抗体进行检测。
11.根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其中良性前列腺增生蛋白标记使用免疫放射分析进行检测。
12.一种用于检测良性前列腺增生标记的诊断试剂盒，其含有针对αs1-酪蛋白的抗体及使用说明书。
13.根据权利要求12的诊断试剂盒，其中抗体是单克隆抗体。
14.根据权利要求12的诊断试剂盒，其中抗体吸附在基质上。
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